ESPECTROFOTOMETRÍA

Es una de las técnicas más usadas en Bioquímica; consiste fundamentalmente en la medición de una sustancia en base a su absorción de la luz. En otras palabras, sirve para determinar la concentración de una molécula o grupo de moléculas presentes en una mezcla. La ventaja más relevante es que no necesita aislar el compuesto para determinar su presencia necesita aislar el compuesto para determinar su presencia.


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Esto se debe a la capacidad de las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones del espectro y las UV- visibles. Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la eficacia con la que se absorben, dependen de la estructura anatómica y las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por lo que dicha técnica constituye un valioso instrumento para la determinación y caracterización de biomoléculas.



ESPECTOFOTÓMETRO


Un espectrofotómetro es un instrumento usado en la física óptica que sirve para medir transmitancia o absorbancia, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones. También es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismos. Hay varios tipos de espectrofotómetros, puede ser de absorción atómica o espectrofotómetro de masa.

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Un espectrofotómetro consta básicamente de los siguientes componentes:

1. Una fuente que genera una banda ancha de radiación electromagnética. Puede ser una lámpara halógena o de volframio que suministra luz de la zona visible del espectro (400- 700 nm), o de neón, argón o de hidrógeno, para la zona ultravioleta (200- 400nm).

2. Un dispositivo de dispersión que selecciona una longitud de onda particular de la radiación de la fuente. Comunmente, se utiliza prismas y redes halográficas de difracción, que junto a una rendija de entrada y otra de salida configuran el monocromador.

3. Un área de muestra: célula transparente a la radiación incidente monocromática que contiene el material bajo estudio, disuelto en un solvente adecuado. Suele ser de 1 cm de espesor.

4. Uno o más detectores para medir la intensidad de la radiación: normalmente, es un tubo fotomultiplicador o un tubo fotodiódo.



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