CN112218634A - 具有驱动致癌突变的癌症的治疗 - Google Patents

Abstract

描述了通过组合施用CDK4/6抑制剂与另外的激酶抑制剂来治疗具有特定致癌驱动突变的癌症的方法和组合物，其中该特定组合提供有利的或协同的抑制活性，延迟对其他激酶抑制剂的获得性抗性，和/或扩展激酶抑制剂的功效。

Description

具有驱动致癌突变的癌症的治疗

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年4月9日提交的美国临时申请62/655,135、于2018年4月13日提交的美国临时申请62/657,373、于2019年1月3日提交的美国临时申请62/788,024和于2019年2月26日提交的美国临时申请62/810,802权益。这些申请中的每一个的全部内容在此通过引用并入本文。

技术领域

本发明提供了用CDK4/6抑制剂与另外的激酶抑制剂配对治疗具有特定致癌驱动突变的癌症的方法和组合物，其中所述特定的组合提供有利的或协同的抑制活性，延迟对另外的激酶抑制剂的获得性抗性，和/或扩展激酶抑制剂的功效。

背景技术

癌症主要由个体一生中累积在基因组中的体细胞突变所驱动，另外还有表观遗传学和转录组学改变的贡献。这些体细胞突变按比例包括单核苷酸变体(SNV)，几个核苷酸到几十个核苷酸的插入和缺失(indels)，较大的拷贝数畸变(CNA)和大基因组重排(也称为结构变体(SV))。(参见Raphael et al.,Identifying driver mutations in sequencedcancer genomes:computational approaches to enable precision medicine.GenomeMed.2014；6(1):5)。致癌驱动子突变是指负责癌症的引发和维持的突变(参见Stratton etal.,The cancer genome.Nature 2009,458(7239):719-724)。通常在编码信号传导蛋白的基因中发现这些突变，这些蛋白对于维持正常的细胞增殖和存活至关重要。这些基因上突变的存在导致诱导并维持肿瘤发生的突变型信号传导蛋白的组成性激活，并赋予癌细胞生长优势，从而有利于其在肿瘤进展过程中的选择。

在过去的十年中，已经变得明显的是，可以通过在多个致癌基因中发生的复发性驱动子突变在分子水平上进一步定义癌症的子集。例如，在非小细胞肺癌(NSCLC)中，已经鉴定出许多驱动子突变，包括AKT1、间变性淋巴瘤激酶(ALK)、BRAF、表皮生长因子受体(EGFR)、ERBB2、KRAS、MEK1、MET、NRAS、PIK3CA、RET和ROS1。此外，对这些驱动子突变的病理生物学的更深入了解导致了靶向特定驱动子突变的小分子的发展。在癌症的许多子集中，驱动子突变是互斥的。例如，EGFR，KRAS和ALK驱动子突变在NSCLC患者中是互斥的，一种突变代替另一种突变的存在会显著影响对靶向治疗的反应。因此，对这些突变的测试和相应的定制疗法被广泛接受为标准实践(Kitai et al.,Epithelial-to-MesenchymalTransition Defines Feedback Activation of Receptor Tyrosine Kinase SignalingInduced by MEK Inhibition in KRAS-Mutant Lung Cancer.Cancer Discov.2016；6(7)；754-69)。

尽管如此，抑制驱动子突变蛋白或利用与突变基因的合成致死相互作用的策略已被广泛采用，但仍充满技术挑战或产生不一致的结果(参见，Ostrem JM,Peters U,Sos ML,Wells JA,Shokat KM.K-Ras(G12C)inhibitors allosterically control GTP affinityand effector interactions.Nature.2013；503:548-551；Stephen et al.,Dragging rasback in the ring.Cancer cell.2014；25:272-281；Cox et al.,Drugging theundruggable RAS:Mission possible？Nat Rev Drug Discov.2014；13:828-851)。在已经成功抑制驱动子基因突变的地方，有效的长期治疗由于与其持续抑制相关的毒性(参见，例如Lito et al.,Tumor adaptation and resistance to RAF inhibitors.Naturemedicine.2013；19:1401-1409；Samatar et al.,Targeting RAS-ERK signalling incancer:promises and challenges.Nat Rev Drug Discov.2014；13:928-942)或与信号传导路径的反馈重新激活相关的问题(其经常驱动适应性抗性)(参见Kitai et al.,Epithelial-to-Mesenchymal Transition Defines Feedback Activation of ReceptorTyrosine Kinase Signaling Induced by MEK Inhibition in KRAS-Mutant LungCancer.Cancer Discov.2016,6(7),754-69；Sun et al.,Intrinsic resistance to MEKinhibition in KRAS mutant lung and colon cancer through transcriptionalinduction of ERBB3.Cell Rep.2014；7(l):86-93；Manchado et al.,A combinatorialstrategy for treating KRAS-mutant lung cancer.Nature.2016；534(7609):647-51)受到了限制。

因此，靶向驱动子突变的、毒性有限的有效治疗策略仍然是治疗突变型癌症的主要挑战。

本发明的一个目的是提供有效地靶向驱动子突变而不产生不可接受的毒性副作用的方法和治疗。

另外，本发明的目的是用能够长期施用的治疗方案安全有效地减少或延迟针对靶向驱动子突变的激酶抑制剂的获得性抗性的发展。

发明内容

本发明提供用于治疗患有具有确定的驱动致癌突变的癌症的受试者的有利方法和组合物，其包括组合施用有效量的本文所述的选择性CDK 4/6抑制剂与另外的激酶抑制剂。选中的激酶抑制剂与本文所述的选择性CDK 4/6抑制剂的特定组合提供对肿瘤生长和进展的显著有利或协同抑制作用，这增加了治疗效果并防止或延迟了获得性抗性的获得。通过掺入本文所述的选择性CDK 4/6抑制剂，选择的组合提供了能够以有限的毒性长期施用的有效抗癌治疗。

在本发明的一个方面，选自下组的选择性CDK 4/6抑制剂：

或其药学上可接受的盐、同位素类似物或其前药，任选在药学上可接受的载体中以形成组合物，与至少一种另外的肿瘤激酶抑制剂组合或交替施用于患有具有确定的驱动子突变的癌症的受试者。化合物I-IV描述于例如WO 2012/061156。

在一些实施方案中，与至少一种另外的肿瘤激酶抑制剂组合或交替施用于患有具有确定的驱动子突变的癌症的受试者的选择性CDK4/6抑制剂是化合物I的盐酸盐，例如单-或-二盐酸盐。在一些实施方案中，化合物I的盐酸盐是具有以下结构的二盐酸盐：

或其药学上可接受的组合物或其同位素类似物。在一些实施方案中，化合物IA是分离的形态形式，在本文中称为形式B(化合物IA形式B)。化合物IA形式B先前已在G1Therapeutics,Inc.的国际专利公布WO 2019/006393中进行了描述。

在一些实施方案中，癌症具有KRAS、EGFR、BR.AF、MET、ERBB2、ALK、RET、NRAS或PIK3CA的驱动子突变。在一些实施方案中，癌症是CDK 4/6-复制依赖性癌症，即，需要CDK4/6的活性以进行复制或增殖，或者可能通过选择性CDK 4/6抑制剂的活性来抑制其生长。在一些实施方案中，癌症是不依赖CDK 4/6-复制的癌症，其不需要CDK 4/6的活性来进行复制或增殖，并且可以不单独通过例如CDK 4/6抑制剂的活性来抑制生长。在一些实施方案中，在受试者的癌症已经发展成对先前的激酶抑制剂疗法产生抗性之后，将选择性CDK 4/6抑制剂施用于该受试者。在一些实施方案中，施用的选择性CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

令人惊奇地发现，本文所述的选择性CDK 4/6抑制剂与肿瘤激酶抑制剂组合的使用即使在不依赖CDK 4/6-复制的癌症(即不需要CDK 4/6的活性用于复制或增殖，并且可能通过例如单独的选择性CDK 4/6抑制剂的活性来抑制其生长)中也可以提供有利的或协同的抗肿瘤活性，在某些实施方案中，本文提供一种使用本文所述的CDK4/6抑制剂与ALK抑制剂或ERK抑制剂的组合来治疗CDK4/6-复制非依赖性癌症的方法。在一些实施方案中，CDK4/6-复制非依赖性癌症是视网膜母细胞瘤阴性(Rb-阴性)或无Rb的非小细胞肺癌(NSCLC)。在一些实施方案中，无Rb的NSCLC具有ALK重排。在一些实施方案中，ALK重排是EML4-ALK重排。在一些实施方案中，向受试者施用选自化合物L-IV的选择性CDK 4/6抑制剂和ALK抑制剂，ALK抑制剂例如但不限于克唑替尼(crizotinib)或艾乐替尼(alectinib)。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。如实施例2(图3)所示，已经令人惊讶地表明，即使用单独的选择性CDK 4/6抑制剂处理不会显著降低细胞生长，但在具有EML4-ALK重排的无Rb的NSCLC细胞株中包括CDK 4/6抑制剂和ALK抑制剂的组合也提供有利的或协同的生长抑制。

在一些实施方案中，无Rb的NSCLC具有MET基因突变，例如但不限于外显子14缺失，并且向受试者施用选自化合物I-IV的选择性CDK 4/6抑制剂和ALK抑制剂(例如但不限于克唑替尼或艾乐替尼)。在一个替代的实施方案中，向患有具有MET基因突变的无Rb的NSCLC的受试者施用选自化合物I-IV的选择性CDK4/6抑制剂与ERK抑制剂(例如但不限于优立替尼(ulixertinib))。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。如实施例2(图3)所示，令人惊讶地表明，即使用单独的选择性CDK 4/6抑制剂处理不会显著降低细胞生长，但在具有EML4-ALK重排的无Rb的NSCLC细胞株中包括CDK 4/6抑制剂和ALK抑制剂的组合提供有利的或协同的生长抑制。

在一些实施方案中，提供一种治疗不依赖CDK4/6复制的NSCLC的方法，包括组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与选自BRAF抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂、PI3K抑制剂、EGFR抑制剂、ALK抑制剂和RET抑制剂的肿瘤激酶抑制剂。在一些实施方案中，肿瘤激酶抑制剂是BRAF抑制剂，例如但不限于达拉非尼(dabrafenib)。在一些实施方案中，肿瘤激酶抑制剂是MEK抑制剂，例如但不限于司美替尼(selumetinib)。在一些实施方案中，肿瘤激酶抑制剂是ERK抑制剂，例如但不限于优立替尼。在一些实施方案中，肿瘤激酶抑制剂是PI3K抑制剂，例如但不限于dactolisib。在一些实施方案中，肿瘤激酶抑制剂是EGFR抑制剂，例如但不限于奥希替尼(osimertinib)或拉帕替尼(lapatinib)。在一些实施方案中，肿瘤激酶抑制剂是ALK抑制剂，例如但不限于克唑替尼或艾乐替尼。在一些实施方案中，肿瘤激酶抑制剂是RET抑制剂，例如但不限于普雷西替尼(pralsetinib)或agerafenib。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。令人惊奇地发现，即使单独用CDK4/6抑制剂的抑制不显著抑制生长，但包含选择性CDK4/6抑制剂与上述肿瘤激酶抑制剂之一的组合提供有利的或协同的生长抑制作用。

在一些实施方案中，提供一种治疗具有CCDC6-RET融合的NSCLC的方法，该方法包括组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与ALK抑制剂，所述ALK抑制剂例如但不限于克唑替尼或艾乐替尼。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。如实施例2(图3)所示，已经令人惊讶地表明，在具有CCDC6-RET融合的NSCLC细胞系中包括选择性CDK4/6抑制剂和ALK抑制剂的组合提供了有利的或协同的生长抑制作用。

在一些实施方案中，提供一种治疗具有SLC34A2-ROS1融合的NSCLC的方法，该方法包括组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与ALK抑制剂，所述ALK抑制剂例如但不限于克唑替尼或艾乐替尼。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。如实施例2(图3)所示，已经令人惊讶地表明，在具有SLC34A2-ROS1融合的NSCLC细胞系中包括选择性CDK4/6抑制剂和ALK抑制剂的组合提供了有利的或协同的生长抑制作用。

在一些实施方案中，提供一种治疗具有MET扩增的NSCLC的方法，该方法包括组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与ALK抑制剂，所述ALK抑制剂例如但不限于克唑替尼。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，施用的选择性CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。如实施例2所示，已经令人惊讶地表明，在具有MET扩增的NSCLC细胞系中包括选择的CDK4/6抑制剂与ALK抑制剂的组合提供了有利的或协同的生长抑制作用。

在一些实施方案中，提供一种治疗具有NRAS突变(例如但不限于NRAS Q61K置换)的NSCLC的方法，该方法包括组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与MEK抑制剂或PI3K抑制剂。在一些实施方案中，将CDK4/6抑制剂与MEK抑制剂(例如司美替尼)组合施用。在一些实施方案中，将CDK4/6抑制剂与PI3K抑制剂(例如dactolisib)组合施用。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。如实施例2所示，已经令人惊讶地表明，在具有NRAS Q61K突变的NSCLC细胞系中包括选择性CDK4/6与MEK抑制剂或PI3K抑制剂的组合提供了有利的或协同的生长抑制作用。

在一些实施方案中，提供一种治疗具有CCDC6-RET融合的NSCLC的方法，该方法包括组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与RET抑制剂，所述RET抑制剂例如但不限于普雷西替尼或agerafenib。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。如实施例6和7所示，已经令人惊讶地表明，在具有CCDC6-RET融合的NSCLC细胞系中包括选择性CDK4/6抑制剂与RET抑制剂的组合提供了有利的或协同的生长抑制作用。

在一些实施方案中，提供一种治疗具有KRAS G12S置换的NSCLC的方法，该方法包括组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与司美替尼或优立替尼。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的选择性CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。如实施例4所示，已经令人惊讶地表明，在具有KRAS G12S置换的NSCLC细胞系中包括选择性CDK4/6抑制剂与司美替尼或优立替尼的组合提供了有利的或协同的生长抑制作用。

一方面，上述式I-IV的选择性CDK 4/6抑制剂可以与另外的激酶抑制剂组合施用，用于以可以允许每天治疗患者而无需药物假期或没有严重的胃肠道问题的方式治疗本文所述的癌症。本文所述与另外的激酶抑制剂组合使用的CDK 4/6抑制剂是短效的且半衰期短(少于约16小时)，具有非限制性副作用，从而使它们纳入无需治疗假期的长期治疗方案。此外，通过使用这些特定的CDK 4/6抑制剂，避免了与其他CDK 4/6抑制剂相关的治疗限制性副作用，例如中性粒细胞减少和胃肠道并发症，并且与组合治疗中CDK 4/6抑制剂与另外的激酶抑制剂的组合相关的可能的限制治疗副作用叠加显著降低。本文所述的CDK 4/6抑制剂特别用于需要长期治疗的治疗方案中，如治疗例如NSCLC的许多激酶抑制剂所要求的，同时将CDK 4/6抑制毒性对CDK 4/6复制依赖性的健康细胞的影响降至最低，所述健康细胞诸如造血干细胞和造血祖细胞(统称为HSPC)，并允许连续每天给药。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一个特定的方面，本发明提供通过在无毒副作用的连续治疗方案中向患者组合施用有效量的本文所述的选择性CDK 4/6抑制剂与有效量的达拉非尼、司美替尼、优立替尼、dactolisib、克唑替尼、艾乐替尼、拉帕替尼来治疗患有对达拉非尼、司美替尼、优立替尼、dactolisib、克唑替尼、艾乐替尼或拉帕替尼激酶抑制剂治疗具有内在抗性或已发展出对达拉非尼、司美替尼、优立替尼、dactolisib、克唑替尼、艾乐替尼、拉帕替尼激酶抑制剂治疗的获得性抗性的癌症的患者的方法。在替代的方面，本发明提供通过在无毒副作用的连续治疗方案中向患者施用有效量的本文所述的选择性CDK 4/6抑制剂与有效量的康奈非尼(encorafenib)、维莫非尼(vemurafenib)、艾代拉里斯(idelalisib)、库潘尼西(copanlisib)、taselisib、哌立福新(perifosine)、buparlisin、杜韦利西布(duvelisib)、阿培利司(alpelisib)、乌帕拉利司(umbralisib)、色瑞替尼(ceritinib)、布加替尼(brigatinib)、曲美替尼(trametinib)、考比替尼(cobimetinib)、比美替尼(binimetinib)、劳拉替尼(lorlatinib)、恩曲替尼(entrectinib)或SCH772984来治疗患有对康奈非尼、维莫非尼、艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司、乌帕拉利司、色瑞替尼、布加替尼、曲美替尼、考比替尼、比美替尼、劳拉替尼、恩曲替尼或SCH772984激酶抑制剂治疗具有内在抗性或已发展出对康奈非尼、维莫非尼、艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司、乌帕拉利司、色瑞替尼、布加替尼、曲美替尼、考比替尼、比美替尼、劳拉替尼、恩曲替尼或SCH772984激酶抑制剂治疗的获得性抗性的癌症的患者的方法。特别地，本文所述的短效选择性CDK 4/6抑制剂与这些激酶抑制剂的组合施用可有效地使突变型癌症对另外的激酶抑制剂的抑制作用敏感。此外，本文所述的CDK 4/6抑制剂与本文所述的另外的激酶抑制剂的组合施用可以延迟对所施用的另外的激酶抑制剂的抗性的发作。最后，通过合并本文所述的CDK 4/6抑制剂与本文所述的激酶抑制剂组合-其中突变型癌症先前已获得对另外的激酶抑制剂的抗性-可以重新建立癌症对另外的激酶抑制剂的抑制作用的敏感性。因此，通过延迟获得性抗性、使先前耐药的肿瘤重新敏感于激酶抑制剂抑制作用和由于该组合的有利的或协同的作用而提高治疗效果，本文所述的方法极大地扩大了对初始激酶抑制剂有反应的癌症患者群体，并扩展了当前激酶抑制剂治疗对突变型癌症的功效。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

用于本发明的施用方案可以包括每日给药本文所述激酶抑制剂和CDK 4/6抑制剂。例如，本文所述的激酶抑制剂可以每天至少一次与CDK 4/6抑制剂一起施用。可选地，本文描述的激酶抑制剂可以每天施用一次，并且CDK 4/6抑制剂每天至少一次给药，例如每天一次，每天两次或每天三次。因为本文所述的CDK 4/6抑制剂是高度耐受的，所以治疗方案可以连续给药而不需要药物假期，从而进一步扩展了组合的有益效果。因此，本文提供通过施用本文所述的激酶抑制剂与本文所述的CDK 4/6抑制剂组合的治疗方法，其中所述组合是连续施用的，例如至少21天，至少28天，至少35天，至少45天，至少56天，至少70天，至少85天，至少102天，至少120天，至少150天，至少204天或更多，而无需预定的药物假期。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在本发明的一个方面，提供一种治疗患有具有KRAS突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与司美替尼、dactolisib或优立替尼，或者它们的组合。在一些实施方案中，向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与司美替尼和优立替尼。在另一个方面，提供一种治疗患有具有KRAS突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂和康奈非尼、维莫非尼、艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司、曲美替尼、考比替尼、比美替尼、SCH772984或乌帕拉利司，或者它们的组合。在一些实施方案中，KRAS突变编码G12D置换、G12C置换、G12S置换、Q61K置换或G12V置换，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的另外的激酶抑制剂是司美替尼。在一些实施方案中，KRAS突变编码GI2D置换、GI2C置换、G12S置换、Q61K置换或G12V置换，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的另外的激酶抑制剂是优立替尼。一些实施方案中，KRAS突变编码G12D置换、G12C置换、G12S置换、Q61 K置换或G12V置换，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的另外的激酶抑制剂是dactolisib。在一些实施方案中，癌症具有编码G12V置换的KRAS突变，并且也是视网膜目细胞瘤蛋白(Rb)-阴性。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物I。在一些实施方案中，KRAS突变型癌症是肺、胰腺、结肠、结肠直肠、子宫、胃、睾丸或子宫颈的KRAS突变型癌症。在一些实施方案中，癌症是NSCLC。在一些实施方案中，NSCLC是上皮NSCLC。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂疗法产生抗性之后，将CDK 4/6抑制剂施用于受试者。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。在另一个实施方案中，KRAS突变编码G12A置换。

在本发明的一个方面，提供一种治疗患有具有EGFR突变的癌症的受试者的方法，其中向所述受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与dactolisib或优立替尼或其组合。在一些实施方案中，向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与dactolisib或优立替尼，以及进一步的奥西替尼。在一个替代的实施方案中，提供一种治疗患有具有EGFR突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司、SCH772984或乌帕拉利司或者它们的组合。在一些实施方案中，EGFR突变是外显子19缺失、L858置换、L858/T790M置换或外显子20插入，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的另外的激酶抑制剂是优立替尼。在一些实施方案中，EGFR突变是外显子19缺失、L858置换、L858/T790M置换或外显子20插入，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的另外的激酶抑制剂是dactolisib。在一些实施方案中，EGFR突变是外显子19缺失，并且癌症还包括MRT扩增。在一些实施方案中，施用的CDK4/6抑制剂是化合物I。在一些实施方案中，EGFR突变型癌症是膀胱、胶质瘤包括胶质母细胞瘤、头颈、乳腺、子宫颈、结肠和/或结直肠、胃食管、肺、前列腺、卵巢、胰腺、肾、甲状腺或鳞状细胞的EGFR突变体癌症。在一些实施方案中，癌症是NSCLC或乳腺癌。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂疗法产生抗性之后，将CDK 4/6抑制剂施用于受试者。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在本发明的一个方面，提供一种治疗患有具有BRAF突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与达拉非尼、司美替尼或优立替尼或者它们的组合。在一些实施方案中，向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与司美替尼和优立替尼。在一些实施方案中，向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与达拉非尼和曲美替尼。在一个替代的实施方案中，提供一种治疗患有具有BRAF突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与康奈非尼、SCH772984、曲美替尼、考比替尼、比美替尼或维莫非尼，或者它们的组合。在一些实施方案中，BRAF突变编码L597V置换。在一些实施方案中，癌症还包括NRAS Q61K蛋白置换。在一些实施方案中，BRAF突变编码G466V置换，并且另外的激酶抑制剂是达拉非尼。在一些实施方案中，BRAF突变编码G469A置换，并且与CDK4/6抑制剂组合的另外的激酶抑制剂是优立替尼。在一些实施方案中，BRAF突变编码V600E置换，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的另外的激酶抑制剂是达拉非尼，进一步与曲美替尼组合。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物I。在一些实施方案中，BRAF突变体癌症是甲状腺癌、黑素瘤、结肠直肠癌、肺癌、子宫癌、胃癌、淋巴瘤或膀胱癌、卵巢癌、神经胶质瘤和胃肠道间质瘤。在一些实施方案中，BRAF突变型癌症是NSCLC或黑素瘤。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂疗法产生抗性之后，将CDK 4/6抑制剂施用于受试者。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA的形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA的形式B。

在本发明的一个方面，提供一种治疗患有具有MET扩增或突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与优立替尼、dactolisib或克唑替尼，或它们的组合。在一个替代实施方案中，提供一种治疗患有具有MET扩增或突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司、乌帕拉利司、色瑞替尼、布加替尼、SCH772984、劳拉替尼或恩曲替尼或者它们的组合。在一些实施方案中，癌症具有编码外显子14缺失突变体的MET突变。在一些实施方案中，癌症具有编码外显子14缺失突变体并且是Rb蛋白阴性的MET突变。在一些实施方案中，癌症具有MET扩增，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的另外的激酶抑制剂是dactolisib或克唑替尼。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物I。在一些实施方案中，MET突变体癌症是肾细胞癌、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、NSCLC、小细胞肺癌、胃癌、食道癌、结直肠癌、神经胶质瘤和卵巢癌。在一些实施方案中，MET突变体癌症是NSCLC或肾细胞癌。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂疗法产生抗性之后，将CDK 4/6抑制剂施用于受试者。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在本发明的一个方面，提供一种治疗患有具有ERBB2扩增或突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与优立替尼、dactolisib或拉帕替尼或它们的组合。在一些实施方案中，癌症具有ERBB2扩增，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的另外的激酶抑制剂是拉帕替尼或优立替尼。在一些实施方案中，癌症具有EKBB2扩增，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的另外的激酶抑制剂是拉帕替尼，进一步与曲妥珠单抗组合。在一个替代实施方案中，提供一种治疗患有具有ERBB2扩增或突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司、SCH772984或乌帕拉利司或者它们的组合。在一些实施方案中，ERBB2突变编码外显子20插入，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的另外的激酶抑制剂是优立替尼或dactolisib。在一些实施方案中，癌症是卵巢癌、乳腺癌或NSCLC。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂疗法产生抗性之后，将CDK 4/6抑制剂施用于受试者。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在本发明的一个方面，提供一种治疗患有具有ALK基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与优立替尼、克唑替尼或艾乐替尼。在一个替代实施方案中，提供一种治疗患有具有ALK基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与色瑞替尼、布加替尼、SCH772984、劳拉替尼或恩曲替尼或者它们的组合。在本发明的一个方面，一种治疗患有具有ALK基因突变的癌症的受试者的方法是ALK融合。在一些实施方案中，ALK融合是EML4-ALK融合。在一些实施方案中，ALK融合是KIF5B-ALK融合。在一些实施方案中，ALK融合是TFG-ALK融合。在一些实施方案中，癌症也是RB蛋白阴性的。在一些实施方案中，癌症是NSCLC。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂疗法产生抗性之后，将CDK 4/6抑制剂施用于受试者。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在本发明的一个方面，提供一种治疗患有具有ROS1基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与克唑替尼。在一个替代的实施方案中，提供一种治疗患有具有ROS1基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与色瑞替尼、布加替尼、劳拉替尼或恩曲替尼或者它们的组合。在本发明的一个方面，一种治疗患有具有ROS1基因突变的癌症的受试者的方法是ROS1基因融合。在一些实施方案中，ROS1融合是SLC34A2-ROS1。在一些实施方案中，ROS1融合是CD74-ROS1。在一些实施方案中，ROSI融合是EZR-ROS1。在一些实施方案中，ROS1融合是TPM3-ROS1。在一些实施方案中，ROSI融合是SDC4-ROS1。在一些实施方案中，癌症是NSCLC或胆管癌。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂疗法产生抗性之后，将CDK 4/6抑制剂施用于受试者。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在本发明的一个方面，提供一种治疗患有具有RET基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾乐替尼、agerafanib或普雷西替尼。在一个替代实施方案中，提供一种治疗患有具有RET基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与色瑞替尼、布加替尼、劳拉替尼或恩曲替尼或者它们的组合。在本发明的一个方面，一种治疗患有具有RET基因突变的癌症的受试者的方法是RET基因融合。在一些实施方案中，RET融合是CCDC6-RET融合。在一些实施方案中，RET融合是KIF5B-RET融合。在一些实施方案中，RET融合是TRIM33-RET融合。在一些实施方案中，RET融合癌是NSCLC。在一些实施方案中，RET融合突变体癌症是甲状腺癌。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂疗法产生抗性之后，将CDK 4/6抑制剂施用于受试者。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在本发明的一个方面，提供一种治疗患有具有NRAS基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与dactolisib。在一个替代实施方案中，提供一种治疗患有具有NRAS基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司或乌帕拉利司或者它们的组合。在一些实施方案中，NRAS突变编码Q61K置换。在一些实施方案中，NRAS突变编码Q61L、Q61R或Q61H置换。在一些实施方案中，NRAS突变编码G12C、G12R、G12S、G12A或G12D置换。在一些实施方案中，NRAS癌症是黑素瘤、肝细胞癌、骨髓性白血病、NSCLC或甲状腺癌。在一些实施方案中，NRAS突变体癌症是NSCLC。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂疗法产生抗性之后，将CDK 4/6抑制剂施用于受试者。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在本发明的一个方面，提供一种治疗患有具有PIK3CA基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与达拉非尼、司美替尼、优立替尼或dactolisib或者它们的组合。在一个替代实施方案中，提供一种治疗患有具有PIK3CA基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与康奈非尼、维莫非尼、艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司、曲美替尼、考比替尼、比美替尼、SCH772984或乌帕拉利司或者它们的组合。在一些实施方案中，PIK3CA基因突变编码E542G置换，并且与CDK4/6抑制剂组合施用的激酶抑制剂是达拉非尼、司美替尼或优立替尼或者它们的组合。在一些实施方案中，PIK3CA基因突变编码H1047R置换，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的激酶抑制剂是司美替尼或dactolisib。在一些实施方案中，PIK3CA基因突变编码G106-R108缺失，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的激酶抑制剂是dactolisib。在一些实施方案中，PIK3CA突变体癌症也是Rb蛋白阴性的。在一些实施方案中，PIK3CA基因突变编码E545Q或H1047L突变。在一些实施方案中，PIK3CA突变体癌症是结肠癌、神经胶质瘤、胃癌、乳腺癌、子宫内膜癌或肺癌。在一些实施方案中，癌症是NSCLC。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂疗法产生抗性之后，将CDK 4/6抑制剂施用于受试者。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

本文还提供了一种组合物，其包含组合剂型的本文所述的CDK4/6抑制剂与选自达布非尼、司美替尼、优立替尼、dactolisib、克唑替尼、艾乐替尼、普雷西替尼或拉帕替尼的一种或多种另外的激酶抑制剂。在一些实施方案中，CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

附图说明

图1是显示当用化合物I(100mg/kg)处理时，在具有不同遗传突变的各种NSCLCPDX模型中肿瘤生长的抑制百分比的柱状图。y轴是以百分比表示的肿瘤生长抑制。x轴是NSCLC PDX模型。虚线是用于相关性分析的响应者/非响应者临界值(58％TGI)。

图2是显示化合物I在具有不同致癌突变的各种肺癌细胞系中的IC₅₀的柱状图。y轴是以微摩尔浓度测量的化合物的IC₅₀。x轴是具体的肺癌细胞类型。

图3是显示在多种NSCLC细胞系中化合物I和靶向特异性致癌驱动子的多种抑制剂的协同作用的热图。y轴是组合中使用的激酶抑制剂。顶部的x轴是细胞系，底部的x轴是与该细胞系相关的致癌突变。

图4A是显示化合物I(0.5mM)、司美替尼(1mM)和/或优立替尼(1mM)单独或组合对A549 NSCLC细胞中的pRB1(SRB/811)、RB1、细胞周期蛋白D1、pErk1/2(T202/Y204)、pRSK(S380)、Bim和生存素(Survin)水平的作用的免疫印迹。α-微管蛋白用作上样对照。

图4B是显示化合物1(0.25mM)和/或克唑替尼(1mM)单独或组合对H3122 NSCLC细胞中的pRB1(S807/811)、RB1、细胞周期蛋白D1、pErk1/2(T202/Y204)、pRSK(S380)、Bim和生存素(Survin)水平的作用的免疫印迹。α-微管蛋白用作上样对照。

图5A、图5B和图5C是显示化合物I(100mg/kg)、司美替尼(50mg/kg)和/或每天两次剂量的优立替尼(50mg/kg)在A549人NSCLC异种移植模型中的作用的散点图。y轴是处理结束时以mm³为单位的肿瘤体积。x轴是提供的处理方法。误差线表示平均值的标准误差。使用两尾学生t检验分析数据，将目标药物与目标药物+化合物1进行比较。*p<0.05；***p<0.00l。

图6A是显示化合物I(100mg/kg)和/或克唑替尼(前12天为25mg/kg，然后为50mg/kg)单独或组合在H3122人NSCLC异种移植模型中的作用的散点图。y轴是治疗结束时以mm³为单位的肿瘤体积。x轴是提供的处理方法。误差线表示平均值的标准差。使用两尾学生t检验对数据进行分析，比较目标药物与目标药物+化合物I。*p<0.05；***p<0.001。

图6B是显示施用于携带EML4-ALK NSCLC PDX肿瘤的小鼠的媒介物、化合物I(50mg/kg)、克唑替尼(20mg/kg)或化合物I(50mg/kg)和克唑替尼(20mg/kg)的组合的作用的图。

图7是显示化合物1、普雷西替尼和化合物1(0.3mM)+普雷西替尼对表达致癌性RET融合的LC2/ad非小细胞肺癌细胞的作用的图。x轴是以摩尔/升表示的对数抑制剂浓度。y轴是细胞存活率，以相对于对照的％测量。

图8是显示化合物1、agerafanib和化合物1(0.3mM)+agerafanib对表达致癌性RET融合的LC2/ad非小细胞肺癌细胞的作用的图。x轴是以摩尔/升表示的对数抑制剂浓度。y轴是细胞存活率，以相对于对照的％测量。

图9包含孔板的图像，该孔板包含用DMSQ、300nM普雷西替尼、300nM化合物1或普雷西替尼+化合物1处理后14天的表达致癌性RET融合的LC2/ad非小细胞肺癌细胞。这些板用水晶紫染色。

图10包含孔板的图像，该孔板包含用300nM普雷西替尼或普雷西替尼+300nM化合物1处理后21天和28天的表达致癌性RET融合的LC2/ad非小细胞肺癌细胞。这些板用结晶紫染色。

图11是显示在14、21和28天之后，用媒介物(DMSO)、300nM化合物1、300nM普雷西替尼或化合物1+普雷西替尼处理的LC2/ad非小细胞肺癌细胞的可溶性结晶紫染色的吸光度的柱状图。x轴以天为单位测量时间。y轴为在562nm处测量吸光度。使用双向ANOVA分析，*p<0.05，***p＝0.0001，****p<0.0001。

图12是形式A、形式B和形式C的XRPD图的比较。这三种形式从如实施例9中所述并且如表1-4所示的结晶和泥浆实验获得。x轴是以度为单位测量的2θ，y轴是以计数为单位测量的强度。

图13是晶形D、晶形E和晶形F的XRPD图的比较。这三种晶形从如实施例9中所述并示于表1-4中的结晶和泥浆实验获得。x轴是以度为单位测量的2θ，y轴是以计数为单位测量的强度。

图14是形式G和形式H的XRPD图的比较。这两种形式是从如实施例9所述并示于表1-4的结晶和泥浆实验中获得。形式G是无水物，形式H是n-PrOH溶剂化物。x轴是以度为单位测量的2θ，y轴是以计数为单位测量的强度。

图15是纯的形式B的XRPD图。在实施例10中列出了标有条的峰。x轴是以度为单位测量的2θ，y轴是以计数为单位测量的强度。

图16是形式I和形式J的XRPD图。x轴是以度为单位测量的2θ，y轴是以计数为单位测量的强度。

具体实施方式

定义

术语“一”和“一个/种”不表示数量限制，而是表示存在至少一个所引用的项目。术语“或”是指“和/或”。除非本文另外指出，否则数值范围的列举仅旨在用作分别指代落入该范围内的每个单独的值的简写方法，并且每个单独的值都被并入说明书中，就像在本文单独地叙述一样。所有范围的端点都包含在该范围内并且可以独立地组合。除非本文另外指出或与上下文明显矛盾，否则本文描述的所有方法可以以合适的顺序执行。除非另外声明，否则使用实施例或示例性语言(例如“诸如”)仅是为了更好地说明本发明，而不是对本发明的范围构成限制。

应用于本发明的药物组合物/组合的术语“载体”是指与本文所述的CDK 4/6抑制剂一起提供的稀释剂、赋形剂或媒介物。

“剂型”是指活性剂的施用单位。剂型的实例包括片剂、胶囊剂、注射剂、混悬剂、液体、乳剂、植入剂、颗粒、球体、乳膏、软膏剂、栓剂、可吸入形式、经皮形式、颊、舌下、局部、凝胶、粘膜等。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内适用于与受试者(例如人类受试者)接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应等，具有合理的益处/风险比，并且对于它们的预期用途有效的那些盐，以及在可能的情况下，本公开主题的化合物的两性离子形式。

因此，术语“盐”是指本公开主题的化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐。这些盐可以在化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，也可以通过将游离碱形式的纯化化合物与合适的有机或无机酸单独反应并分离由此形成的盐来制备。药学上可接受的碱加成盐可以与金属或胺(诸如碱金属和碱土金属的氢氧化物)或有机胺形成。用作阳离子的金属的实例包括但不限于钠、钾、镁、钙等。合适的胺的实例包括但不限于N,N′-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因。

可以由以下来制备盐：无机酸硫酸盐，焦硫酸盐，硫酸氢盐，亚硫酸盐，亚硫酸氢盐，硝酸盐，磷酸盐，磷酸一氢盐，磷酸二氢盐，偏磷酸盐，焦磷酸盐，氯化物，溴化物，碘化物诸如氯化氢，硝酸，磷酸，硫酸，氢溴酸，氢碘酸，亚磷酸，等。代表性的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月硅酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲磺酸萘甲酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖醛酸盐、月桂基磺酸盐和羟乙基磺酸盐等。盐也可以由有机酸制备，诸如脂族单和二元羧酸，苯基取代的链烷酸，羟基链烷酸，链烷二酸，芳族酸，脂族和芳族磺酸等。代表性的盐包括乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、异丁酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐等。药学上可接受的盐可包括基于碱金属和碱土金属的阳离子，诸如钠、锂、钾、钙、镁等，以及无毒铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。还考虑了氨基酸的盐，诸如精氨酸盐、葡糖酸盐、半乳糖醛酸盐等。参见，例如，Berge et al.,J.Pharm.Sci.,1977,66,1-19，其通过引用并入本文。

本发明的化合物可以与溶剂(包括水)形成溶剂化物。因此，在一个非限制性实施方案中，本发明包括化合物的溶剂化形式。术语“溶剂化物”是指本发明的化合物(包括其盐)与一种或多种溶剂分子的分子复合物。溶剂的非限制性实例是水、乙醇、二甲基亚砜、丙酮和其他常见的有机溶剂。术语“水合物”是指包含本发明化合物和水的分子复合物。根据本发明的药学上可接受的溶剂化物包括其中溶剂可以被同位素取代的那些，例如D₂O、d₆-丙酮、d₆-DMSO。溶剂化物可以是液体或固体形式。

“药物组合物”是包含至少一种活性剂和至少一种其他物质诸如载体的组合物。“药物组合”是至少两种活性剂的组合，其可以在单一剂型中组合或以分开的剂型一起提供，具有将活性剂一起用于治疗本文所述的任何病症的说明。

“药学上可接受的赋形剂”是指可用于制备药物组合物/组合，且通常是安全、无毒并且在生物学上或其他方面都不是不适合施用于宿主(通常是人)的赋形剂。在一些实施方案中，使用兽用可接受的赋形剂。

在一些实施方案中，化合物I-IV包括所需的原子的同位素取代，其量高于该同位素的自然丰度，即被富集。同位素是原子序数相同但质量数不同的原子，即质子数相同但中子数不同。通过一般示例而非限制，可以在所描述的结构中的任何地方使用氢的同位素，例如氘(²H)和氚(³H)。替代地或另外，可以使用碳的同位素，例如¹³C和¹⁴C。优选的同位素取代是氘取代分子上一个或多个位置上的氢，以改善药物的性能。氘可以结合在新陈代谢过程中键断裂的位置(α-氘动力学同位素效应)或紧靠键断裂的部位或其附近(β-氘动力学同位素效应)。

用同位素诸如氘的取代由于更高的代谢稳定性可以提供某些治疗优势，诸如，例如增加体内半衰期或减少剂量需求。在代谢断裂位点用氘取代氢可降低该键的代谢速率或消除该键的代谢。在化合物的可能存在氢原子的任何位置，氢原子可以是氢的任何同位素，包括氕(¹H)、氘(²H)和氚(³H)。因此，本文中提及的化合物涵盖所有潜在的同位素形式，除非上下文另外明确指出。

术语“经同位素标记的”类似物是指为“氘代类似物”、“¹³C标记的类似物”或“氘代/¹³C标记的类似物”的类似物。术语“氘代类似物”是指本文所述的化合物，其中H-同位素，即氢/氕(¹H)被H-同位素，即氘(²H)取代。氘取代可以是部分或完全的。部分氘取代是指至少一个氢被至少一个氘取代。在某些实施方案中，同位素在任何感兴趣的位置富含90％、95％或99％或更高的同位素。在一些实施方案中，氘在所需位置富集90％、95％或99％。

在下面的描述中以及通常在本文中，每当使用涉及化合物I-IV的任何术语时，应理解为包括药学上可接受的盐或组合物，除非另有说明或与本文不一致。

使用标准命名法描述化合物。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常所理解的相同含义。

所治疗的“患者”或“受试者”通常是人类患者，尽管应理解本文所述的方法对于其他动物诸如哺乳动物是有效的。更具体地，术语患者可以包括测定中使用的动物，诸如用于临床前测试的动物，包括但不限于小鼠、大鼠、猴子、狗、猪和兔子，以及家养的生猪(猪)、反刍动物、马、家禽、猫科动物、牛科动物、鼠科动物、犬科动物等。

在本文所述的化合物的上下文中使用的术语“选择性CDK 4/6抑制剂”包括在比标准磷酸化试验中抑制至相同程度的CDK2活性所需的IC50摩尔浓度低至少约500、或1000、或1500、或1800、或2000倍的IC50摩尔浓度下抑制CDK4活性、CDK6活性或CDK4和CDK6二者活性的化合物。

在一些实施方案中，术语“CDK4/6-复制依赖性癌症”是指需要CDK 4/6的活性以进行复制或增殖，或者可以通过选择性CDK4/6抑制剂的活性抑制其生长的癌症或细胞增殖性疾病。这种类型的癌症和病症的特征在于(例如，具有表现出以下的细胞)功能性视网膜母细胞瘤蛋白的存在。此类癌症和疾病归类为“Rb阳性”。Rb-阳性异常细胞增殖性疾病和本文所用的该术语的变体是指由不受控制的或异常的细胞分裂引起的病症或疾病，其特征在于存在功能性视网膜母细胞瘤蛋白，可以包括癌症。

在一些实施方案中，术语“CDK4/6-复制非依赖性癌症”是指不明显需要CDK4/6的活性以进行复制的癌症。这种类型的癌症特征通常(但不总是)在于(例如，具有表现出以下的细胞)，但不限于：细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)的活性增加；细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的活性增加；视网膜母细胞瘤抑癌蛋白(Rb)的缺失、缺乏或不存在(无Rb)；p16Ink4a表达水平高；高水平的MYC表达；细胞周期蛋白E1、细胞周期蛋白E2和细胞周期蛋白A的表达增加；及其组合。癌症的特征可能在于视网膜母细胞瘤抑癌蛋白或视网膜母细胞瘤家族成员蛋白(诸如，但不限于p107和p130)的表达降低。在某些实施方案中，CDK 4/6-复制非依赖性的肿瘤或癌症是在暴露于选择性CDK 4/6抑制剂时其细胞群体总体上没有经历实质性的G1细胞周期停滞的肿瘤或癌症。在某些实施方案中，CDK 4/6复制非依赖性的肿瘤或癌症是在暴露于选择性CDK 4/6抑制剂时，具有其中其细胞的少于25％、20％、15％、10％或5％经历G1细胞周期停滞的细胞群的肿瘤或癌症。

如本文所用，“固有抗性”，也称为原发性抗性，是指其中癌症对所施用的治疗的初始抑制作用无反应的病症。

如本文所用，“获得性抗性”是指其中对抑制剂化合物的抑制作用敏感或最初敏感的癌症随着时间的流逝对该化合物的作用变得无反应性或反应性较低的病状。不希望受任何理论的束缚，据信对抑制剂的获得性抗性是由于在抑制剂治疗开始后发展的旁路信号传导中的一种或多种其他突变或遗传改变而发生的。在某些实施方案中，已获得对抑制剂的抗性的肿瘤或癌症是具有其中少于其细胞的50％、40％、30％、20％、15％、10％或5％经历抑制剂的细胞群的肿瘤或癌症，导致疾病进展。

如本文中所预期且出于本文中所揭示范围的目的，本文中所描述的所有范围包括在所识别范围内出现的任何及所有数值。例如，如本文所预期的，范围1至10，或1至10之间，将包括数值1、2、3、4、5、6、7、8、9、10及其分数。

使用标准命名法描述化合物。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常所理解的相同含义。

CDK 4/6抑制剂

用于本发明的CDK4/6抑制剂包括化合物I-IV或其药学上可接受的盐、组合物、同位素类似物或前药。化合物I-IV描述于WO2012/061156中，该专利通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，化合物I作为二盐酸盐(化合物IA)施用。在一些实施方案中，化合物IA以如WO 2019/006393中所述的形式B形态形式(化合物IA晶形B)施用，该专利通过引用整体并入本文。

化合物IA的分离形态形式B

化合物IA形式B是固体化合物I的高度稳定、高度结晶形式，其对于治疗功效和药物制剂的制备是有益的。形式B在60℃的热应力下稳定7天。此外，在25℃和60％相对湿度下的长期稳定性研究表明，分离出的化合物IA形式B稳定至少1年。在一个实施方案中，分离的化合物IA形式B稳定至少约6、7、8、9、10、11、12、14、16、18、20、22或24个月。

通过改变温度、冷却程序和分离程序进行许多结晶和泥浆实验。从这些实验中，发现了化合物IA的11种独特形式，但仅形式A、形式B和形式D适用于评估。其他形式导致弱的结晶晶形、溶剂化物、不稳定的水合物或无水物。在这三种固体形式中，发现形式B是用于治疗剂型的出乎意料优异的高度结晶的稳定的材料。在动态蒸气吸附实验中，化合物IA在暴露于90％相对湿度后保留形式B。

形式B具有用作固体剂型中的活性药物成分的有利性质，并且在这种制剂中可以具有提高的功效。形式B可以通过重结晶从HCl和丙酮中生产，如下文更详细描述。形式B的特征在于基本上类似于图17所示的XRPD图谱。在一些实施方案中，形式B的特征在于包含选自以下中的至少三个2θ值的XRPD图谱：6.5°±0.2，9.5±0.2°，14.0±0.2°，14.4±0.2°，18.1±0.2°，19.7±0.2°和22.4±0.2°。在一些实施方案中，形式B的特征在于至少包含9.5±0.2°的2θ值的XRPD图谱。在一些实施方案中，分离的化合物IA形式B的特征在于不存在4.6±0.2°的2θ处的至少一个峰。在一些实施方案中，分离的化合物IA形式B的特征在于不存在5.0±0.2°的2θ处的峰。在一些实施方案中，分离的形式B的特征在于在热重红外(TG-IR)分析中，在31℃至120℃之间具有7.5％的重量损失。在一些实施方案中，分离的形式B的特征在于在约105±20℃，约220±20℃和约350±20℃下，例如在105℃、220℃和350℃或92℃、219℃和341℃下，具有差示扫描量热(DSC)起始吸热。

化合物IA形式B可以例如通过在浓HCl和丙酮中重结晶化合物I来制备。在一些实施方案中，将化合物I溶解在浓HCl中并加热。然后加入丙酮，并通过冷却和过滤分离产物。

在一些实施方案中，化合物IA形式B通过化合物IA形式D的重结晶而产生。在一个替代实施方案中，化合物IA形式B通过重复的重结晶来产生。在一些实施方案中，通过水：丙酮(1：2)(v/v)浆液然后真空干燥从不纯的化合物IA形式B中纯化纯的化合物IA形式B。

化合物IA形式A的稳定性低于形式B。当单溶剂结晶中使用MeOH、EtOH和1-BuOH作为溶剂时，产生形式A；也可以在二元溶剂结晶中，使用水和MeOH作为主要溶剂，产生形式A。使用正庚烷和正己烷的泥浆实验也产生形式A。

化合物IA形式D的稳定性低于形式B。在一些实施方案中，形式D通过在室温下搅拌化合物IA在乙腈中的淤浆来制备。在另一个实施方案中，形式D通过在加热之前将化合物I溶解在浓HCl中来产生。然后使溶液冷却，仅在结晶开始后才加入丙酮以驱动沉淀完成。然后通过过滤分离沉淀物。在另一个实施方案中，形式D通过在加热之前将化合物I溶解在浓HCl中来产生。然后将溶液冷却，仅在发生结晶后才添加丙酮，并通过过滤收集所有固体。

在替代的实施方案中，根据本文所述的方法施用化合物IA的两种或更多种形式的组合，诸如形式B和D；形式B和A；或形式A和D。在替代的实施方案中，提供分离的三种形式的组合，例如，形式A、B和D。

KRAS

KRAS基因(Entrez 3845)编码K-Ras，K-Ras是称为RAS/MAPK通路的信号通路的一部分。K-Ras蛋白是一种GTP酶，这意味着它将一个称为GTP的分子转换为另一个称为GDP的分子。这样，K-Ras蛋白质就像一个开关，由GTP和GDP分子打开和关闭。为了传输信号，其必须通过附着(结合)到GTP分子而被打开。当其将GTP转换为GDP时，K-Ras蛋白质被关闭(失活)。当蛋白质与GDP结合时，它不会将信号传递至细胞核。

RAS蛋白质家族的突变经常在各种癌症类型中观察到。占此类突变绝大多数的氨基酸位置是G12、G13和Q61。尽管它们具有原始相似性，但是不同的蛋白质同工型在非天然组织类型中表达时也表现出很大差异，这可能是由于C端超变区的差异。同工型表达的错误调节已被证明是癌症的驱动事件，也是先前提到的三个热点的错义突变。尽管在癌症中高度复发，但是尝试用抑制剂靶向这些RAS突变体并未成功，并且尚未成为临床上的普遍做法。KRAS突变的预后影响因癌症类型而异，但已证明与大肠癌、非小细胞肺癌等的不良预后相关。

KRAS基因属于一类称为致癌基因的基因。当突变时，致癌基因有可能引起正常细胞癌变。KRAS基因属于Ras致癌基因家族，该家族还包括另外两个基因：HRAS和NRAS。这些蛋白质在细胞分裂、细胞分化和细胞的自我毁灭(凋亡)中起重要作用。

在一些实施方案中，提供一种治疗患有具有KRAS突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与司美替尼、dactolisib或优立替尼或其组合。在一些实施方案中，向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与司美替尼和优立替尼。在一个替代的实施方案中，提供一种治疗患有具有KRAS突变的癌症的受试者的方法，其中向该受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与康奈非尼、维莫非尼、艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司、曲美替尼、考比替尼、比美替尼、SCH772984或乌帕拉利司，或其组合。在一些实施方案中，KRAS突变编码G12D置换、G12C置换或G12V置换，并且另外的激酶抑制剂是司美替尼。在一些实施方案中，KRAS突变编码G12S置换、G12C置换、Q61K置换或G12V置换，并且另外的激酶抑制剂是优立替尼。在一些实施方案中，KRAS突变编码G12D置换、G12C置换、Q61K置换或G12V置换，并且另外的激酶抑制剂是dactolisib。在一些实施方案中，癌症具有编码G12V置换的KRAS突变，并且也是视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)-阴性。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂疗法产生抗性之后，将CDK 4/6抑制剂施用于受试者。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一些实施方案中，KRAS突变型癌症选自胰腺腺癌、结肠腺癌、直肠腺癌、肺腺癌、子宫内膜癌、子宫癌肉瘤、胃腺癌、睾丸生殖细胞瘤、子宫颈鳞状细胞癌、子宫颈内腺癌、胆管癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、急性髓性白血病、膀胱尿路上皮癌、皮肤恶性黑色素瘤、肺鳞状细胞癌、肾脏肾乳头状细胞癌、肝肝细胞癌、食道癌、卵巢浆液性囊腺癌和肉瘤。在一些实施方案中，KRAS突变癌是肺癌、胰腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫癌、胃癌、睾丸癌或子宫颈癌。在一些实施方案中，癌症是NSCLC。在另一个实施方案中，具有编码G12D置换的KRAS突变的癌症是胰腺腺癌、结肠腺癌、直肠腺癌或子宫内膜癌。在一些实施方案中，具有编码G12C置换的KRAS突变的癌症是肺腺癌或直肠腺癌。在一些实施方案中，具有编码G12V置换的KRAS突变的癌症是胰腺腺癌、直肠腺癌、结肠腺癌、肺腺癌或子宫癌。在一些实施方案中，具有编码G12S置换的KRAS突变的癌症是直肠腺癌或结肠腺癌。在一些实施方案中，具有编码Q61K取代的KRAS突变的癌症是胆管癌或结肠腺癌。

在一个替代实施方案中，向患有KRAS突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与阿贝西利(abemaciclib)、阿比特龙(abiraterone)、阿法替尼(afatinib)、博舒替尼(bosutinib)、卡博替尼(cabozantinib)、达沙替尼(dasatinib)、恩西地平(enasidenib)、恩杂鲁胺(enzalutamide)、厄洛替尼(erlotinib)、依维莫司(everolimus)、厄达替尼(erdafitinib)、氟维司群(fulvestrant)、吉非替尼(gefitinib)、依鲁替尼(ibrutinib)、伊马替尼(imatinib)、ipatasertib、拉帕替尼(lapatinib)、尼罗替尼(nilotinib)、尼拉帕尼(niraparib)、奥拉帕尼(olaparib)、olarutumab、奥希替尼(osimertinib)、帕博西尼(palbociclib)、帕唑帕尼(pazopanib)、PF7775、帕纳替尼(Ponatinib)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、瑞格拉非尼(regorafenib)、瑞博西尼(ribociclib)、卢卡帕尼(rucaparib)、沃利替尼(savolitinib)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、他拉唑帕尼(talazoparib)、曲妥单抗(trastuzumab)、trilaciclib或vistusertib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一个替代的实施方案中，向患有KRAS突变癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂和艾乐替尼、阿培利司、比美替尼、布加替尼、色瑞替尼、考比替尼、库潘尼西、克唑替尼、达拉非尼、康奈非尼、艾代拉里斯、劳拉替尼、SCH772984、司美替尼、曲美替尼、优立替尼或维莫非尼，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一个替代实施方案中，向患有KRAS突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与RET抑制剂。在一些实施方案中，RET抑制剂是普雷西替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是agerafenib。在一些实施方案中，RET抑制剂是凡德他尼(vandentanib)。在一些实施方案中，RET抑制剂是乐伐替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是阿帕他尼(apatanib)。在一些实施方案中，RET抑制剂是sitravatinib。在一些实施方案中，RET抑制剂是LOXO-292。在一些实施方案中，所述施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

EGFR

表皮生长因子受体基因(EGFR)(Entrez 1956)编码一种属于受体酪氨酸激酶(RTK)家族的蛋白质，该家族包括EGFR/ERBB1、HER2/ERBB2/NEU、HER3/ERBB3和HER4/ERBB4。配体(诸如表皮生长因子(EGF))的结合诱导构象变化，这促进受体同型或异二聚体的形成，从而导致EGFR酪氨酸激酶活性的激活。然后，激活后的EGFR将其底物磷酸化，从而激活细胞内的多个下游途径，包括参与细胞存活的PI3K-AKT-mTOR途径以及参与细胞增殖的RAS-RAF-MEK-ERK途径。

美国约10％的NSCLC患者和东亚35％的患者具有与肿瘤相关的EGFR突变(Lynchet al.2004；Paez et al.2004；Pao et al.2004)。这些突变发生在EGFR外显子18-21内，该外显子编码EGFR激酶结构域的一部分。EGFR突变通常是杂合的，突变等位基因也显示出基因扩增(Soh et al.2009)。这些突变中约90％是外显子19缺失或外显子21L858R点突变(Ladanyi and Pao 2008)。这些突变增加了EGFR的激酶活性，导致下游生存前信号通路的过度激活(Sordella et al.2004)。

无论种族如何，EGFR突变都更经常在患有腺癌组织学的从不吸烟女性(定义为患者一生中少于100支香烟)的肿瘤中发现(Lynch et al.2004；Paez et al.2004；Pao etal.2004)。然而，EGFR突变也可在NSCLC的其他亚型中发现，包括以前和现在的吸烟者以及其他组织学中。在绝大多数情况下，EGFR突变与NSCLC中发现的其他致癌突变(例如KRAS突变、ALK重排等)不重叠。

在一些实施方案中，提供治疗患有具有EGFR突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与dactolisib或优立替尼或其组合。在一些实施方案中，向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与dactolisib或优立替尼，以及进一步的奥希替尼。在另一个实施方案中，提供一种治疗患有具有EGFR突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisib、杜韦利西布、阿培利司、SCH772984或乌帕拉利司，或其组合。在一些实施方案中，EGFR突变是外显子19缺失或外显子20插入，另外的激酶抑制剂是优立替尼。在一些实施方案中，EGFR突变是外显子19缺失、L858置换、L858/T790M置换、外显子20插入，另外的激酶抑制剂是dactolisib。在一些实施方案中，EGFR突变是外显子19缺失，癌症还包括MET扩增。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂治疗产生抗性后向该受试者施用CDK4/6抑制剂。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一些实施方案中，EGFR突变型癌症选自：多形性胶质母细胞瘤、肺腺癌、皮肤恶性黑色素瘤、子宫内膜癌、脑低级胶质瘤、结肠腺癌、胃腺癌、子宫颈鳞状细胞癌、子宫颈内膜癌、卵巢浆液性囊腺癌、肾上腺皮质癌、头颈部鳞状细胞癌、肺鳞状细胞癌、膀胱尿路上皮癌、直肠腺癌、肝脏肝细胞癌、乳腺浸润性癌、胆管癌、子宫癌肉瘤和肾嫌色细胞癌。在一些实施方案中，EGFR突变型癌症是膀胱癌、胶质瘤(包括胶质母细胞瘤)、头颈癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠和/或结直肠癌、胃食管癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、甲状腺癌或鳞状细胞癌。在一些实施方案中，癌症是NSCLC或乳腺癌。在另一个实施方案中，携带编码L858R置换的EGFR突变的癌症是肺腺癌。在一些实施方案中，携带编码T790M置换的EGFR突变的癌症是肺腺癌。

在另一个实施方案中，向患有EGFR突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与阿贝西利、阿比特龙、阿法替尼、博舒替尼、卡博替尼、达沙替尼、恩西地平、恩杂鲁胺、厄洛替尼、依维莫司、厄达替尼、氟维司群、吉非替尼、依鲁替尼、伊马替尼、ipatasertib、拉帕替尼、尼罗替尼、尼拉帕尼、奥拉帕尼、olarutumab、奥希替尼、帕博西尼、帕唑帕尼、PF7775、帕纳替尼、雷莫芦单抗、瑞格拉非尼、瑞博西尼、卢卡帕尼、沃利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、他拉唑帕尼、曲妥单抗、trilaciclib或vistusertib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有EGFR突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与艾乐替尼、阿培利司、比美替尼、布加替尼、色瑞替尼、考比替尼、库潘尼西、克唑替尼、dabrafenih、康奈非尼、艾代拉里斯、劳拉替尼、SCH772984、司美替尼、曲美替尼、优立替尼或verumarenib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有EGFR突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与RET抑制剂。在一些实施方案中，RET抑制剂是普雷西替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是agerafenib。在一些实施方案中，RET抑制剂是凡德他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是乐伐替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是阿帕他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是sitravatinib。在一些实施方案中，RET抑制剂是LOXO-292。在一些实施方案中，所述施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一些实施方案中，受试者患有具有EGFR突变和至少一种赋予对EGFR-TKI抗性的非EGFR突变的NSCLC。在一些实施方案中，非EGFR突变是MET扩增。在一些实施方案中，NSCLC具有由EGFR-TKI治疗诱导的EGFR突变。在一些实施方案中，受试者患有具有至少一种EGFR突变和MET扩增的NSCLC，并组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与奥西替尼。在一些实施方案中，CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。

BRAF

BRAF基因(Entrez 673)编码一种属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的raf/mil家族的蛋白质B-Raf。该蛋白质在调节MAP激酶/ERKs信号传导通路中起作用，影响细胞的分裂、分化和分泌。该基因的突变与各种癌症相关，包括非霍奇金淋巴瘤、结直肠癌、恶性黑色素瘤、甲状腺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、卵巢癌、胶质瘤和胃肠道基质瘤。

在一些实施方案中，提供一种治疗患有具有BRAF突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与达拉非尼、司美替尼或优立替尼，或其组合。在一些实施方案中，向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与司美替尼和优立替尼。在另一个实施方案中，提供一种治疗患有具有BRAF突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与康奈非尼、曲美替尼、考比替尼、比美替尼、SCH772984或vemurafenib，或其组合。在一些实施方案中，BRAF突变编码L597V置换。在一些实施方案中，癌症还包括NRAS Q61K蛋白质置换。在一些实施方案中，BRAF突变编码G466V置换，另外的激酶抑制剂是达拉非尼。在一些实施方案中，BRAF突变编码G469A置换，另外的激酶抑制剂是优立替尼。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂治疗产生抗性后向受试者施用CDK4/6抑制剂。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一些实施方案中，BRAF突变型癌症选自甲状腺癌、皮肤恶性黑色素瘤、结肠腺癌、子宫内膜癌、肺腺癌、胃腺癌、直肠腺癌、膀胱尿路上皮癌、肺鳞状细胞癌、淋巴肿瘤弥漫性大B细胞淋巴瘤、多形性胶质母细胞瘤、头颈部鳞状细胞癌、胆管癌、肾脏肾乳头状细胞癌、子宫癌、子宫颈鳞状细胞癌、子宫颈内膜腺癌、胰腺癌、前列腺腺癌、间皮瘤和肾上腺皮质癌。在一些实施方案中，BRAF突变型癌症是甲状腺癌、黑色素瘤、结直肠癌、肺癌、子宫癌、胃癌、淋巴瘤或膀胱癌、卵巢癌、胶质瘤和胃肠道间质瘤。在一些实施方案中，BRAF突变型癌症是NSCLC或黑色素瘤。在另一个实施方案中，携带编码L597V置换的BRAF突变的癌症是结肠腺癌。在一些实施方案中，携带编码G469A置换的BRAF突变型癌症是嗜铬细胞瘤、副神经节瘤或前列腺癌。在一些实施方案中，携带编码V600E置换的BRAF突变的癌症是甲状腺癌、皮肤恶性黑色素瘤或结肠腺癌。

在另一个实施方案中，向患有BRAF突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与阿贝西利、阿比特龙、阿法替尼、博舒替尼、卡博替尼、达沙替尼、恩西地平、恩杂鲁胺、厄洛替尼、依维莫司、厄达替尼、氟维司群、吉非替尼、依鲁替尼、伊马替尼、ipatasertib、拉帕替尼、尼罗替尼、尼拉帕尼、奥拉帕尼、olarutumab、奥希替尼、帕博西尼、帕唑帕尼、PF7775、帕纳替尼、雷莫芦单抗、瑞格拉非尼、瑞博西尼、卢卡帕尼、沃利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、他拉唑帕尼、曲妥单抗、trilaciclib或vistusertib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有BRAF突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与艾乐替尼、阿培利司、比美替尼、布加替尼、色瑞替尼、考比替尼、库潘尼西、克唑替尼、达拉非尼、康奈非尼、艾代拉里斯、劳拉替尼、SCH772984、司美替尼、曲美替尼、优立替尼或维莫非尼，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有BRAF突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与RET抑制剂。在一些实施方案中，RET抑制剂是普雷西替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是agerafenib。在一些实施方案中，RET抑制剂是凡德他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂乐伐替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是阿帕他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是sitravatinib。在一些实施方案中，RET抑制剂是LOXO-292。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

MET

位于染色体7上的MET基因(Entrez 4233)(MNNG-HOS转化基因；Cooper etal.1984)编码一种属于RTK的MET/RON家族的受体酪氨酸激酶(RTK)。其配体肝细胞生长因子(HGF；又称散射因子(SF))的结合，诱导MET受体的构象变化，促进受体的磷酸化和激活。激活后的MET再将其底物磷酸化，导致细胞内多条下游通路的激活，该通路包括参与细胞存活的PI3K-AKT-mTOR通路和参与细胞增殖的RAS-RAF-MEK-ERK通路。在恶性肿瘤的背景下，通过MET受体的异常信号传导促进了增殖作用，包括生长、存活、侵袭、迁移、血管生成和转移(Birchmeier et al.2003；Peruzzi and Bottaro 2006)。

据报道，MET受体和/或其配体HGF在许多人类癌症中被异常激活。100％的遗传性肾乳头状细胞癌中发生MET的酪氨酸激酶域的种系突变，10-15％的散发性肾乳头状细胞癌中发现MET的体性突变(Schmidt et al.1997)。已报道，MET在头颈部鳞状细胞癌(Di Renzoet al.2000)、儿童肝细胞癌(Park et al.1999)、NSCLC(Kong-Beltran et al.2006，Ma etal.2003)、和小细胞肺癌(Ma et al.2003)中突变的频率很低。已报道，MET在胃癌(Nakajima et al.1999)、食管癌(Miller et al.2006)、结直肠癌(Umeki,Shiota,andKawasaki 1999)、胶质瘤(Beroukhim et al.2007)、透明细胞卵巢癌(Yamamoto etal.2011)和NSCLC(Bean et al.2007；Cappuzzo et al.2009,Chen et al.2009；Engelmanet al.2007；Kubo et al.2009；Okuda et al 2008；Onozato et al.2009)中扩增。

在一些实施方案中，提供一种治疗患有具有MET扩增或突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与优立替尼、dactolisib或克唑替尼或其组合。在另一个实施方案中，提供一种治疗患有具有MET扩增或突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司、乌帕拉利司、色瑞替尼、布加替尼、SCH772984、劳拉替尼或恩曲替尼，或其组合。在一些实施方案中，癌症具有编码外显子14缺失突变体的MET突变。在一些实施方案中，癌症具有编码外显子14缺失突变体的MET突变，并且是Rb蛋白质阴性的。在一些实施方案中，癌症具有MET扩增，并且另外的激酶抑制剂是dactolisib或克唑替尼。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂治疗产生抗性后向受试者施用CDK4/6抑制剂。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一些实施方案中，MET突变型癌症选自子宫体子宫内膜癌、皮肤恶性黑色素瘤、肾脏肾乳头状细胞癌、膀胱尿路上皮癌、结肠腺癌、肺腺癌、子宫癌肉瘤、多形性胶质母细胞瘤、胃腺癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、肉瘤、卵巢浆液性囊腺癌、肺鳞状细胞癌、食管癌、肾脏肾透明细胞癌、急性髓细胞白血病、子宫颈鳞状细胞癌、子宫颈内膜腺癌、乳腺浸润性癌、前列腺腺癌和头颈鳞状细胞癌。在一些实施方案中，MET突变癌是肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、肝细胞癌、NSCLC、小细胞肺癌、胃癌、食管癌、结直肠癌、胶质瘤和卵巢癌。在一些实施方案中，MET突变的癌症是NSCLC或肾细胞癌。

在另一个实施方案中，向患有MET突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与阿贝西利、阿比特龙、阿法替尼、博舒替尼、卡博替尼、达沙替尼、恩西地平、恩杂鲁胺、厄洛替尼、依维莫司、厄达替尼、氟维司群、吉非替尼、依鲁替尼、伊马替尼、ipatasertib、拉帕替尼、尼罗替尼、尼拉帕尼、奥拉帕尼、olarutumab、奥希替尼、帕博西尼、帕唑帕尼、PF7775、帕纳替尼、雷莫芦单抗、瑞格拉非尼、瑞博西尼、卢卡帕尼、沃利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、他拉唑帕尼、曲妥单抗、trilaciclib或vistusertib，或其组合。在一些实施方案中，所述施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有MET突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与艾乐替尼、阿培利司、比美替尼、布加替尼、色瑞替尼、考比替尼、库潘尼西、克唑替尼、dabrafenih、康奈非尼、艾代拉里斯、劳拉替尼、SCH772984、司美替尼、曲美替尼、优立替尼或verumarenib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有EGFR突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与RET抑制剂。在一些实施方案中，RET抑制剂是普雷西替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是agerafenib。在一些实施方案中，RET抑制剂是凡德他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是乐伐替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是阿帕他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是sitravatinib。在一些实施方案中，RET抑制剂是LOXO-292。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

ERBB2

ERBB2(Entrez 2064)编码受体酪氨酸激酶的表皮生长因子(EGF)受体家族的成员。该蛋白质本身没有配体结合域，因此不能与生长因子结合。然而，它确实与其他配体结合的EGF受体家族成员紧密结合，形成异二聚体，从而稳定配体结合和增强激酶介导的下游信号传导通路的激活，诸如涉及丝裂原激活的蛋白激酶和磷脂酰肌醇-激酶的那些。已报道了异构体a的氨基酸位置654和655(异构体b的位置624和625)的等位基因变异，这里显示了最常见的等位基因Ile654/Ile655。已报道了该基因在许多癌症中的扩增和/或过度表达，所述癌症包括乳腺和卵巢肿瘤。

在一些实施方案中，提供一种治疗患有具有ERBB2扩增或突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与优立替尼、dactolisib或拉帕替尼，或其组合。在另一个实施方案中，提供一种治疗患有具有ERBB2扩增或突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司、SCH772984、或乌帕拉利司，或其组合。在一些实施方案中，癌症具有ERBB2扩增，并且所施用的另外的激酶抑制剂是拉帕替尼或优立替尼。在一些实施方案中，ERBB2突变编码外显子20插入，并且另外的激酶抑制剂是优立替尼或dactolisib。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂治疗产生抗性后向受试者施用CDK4/6抑制剂。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施例中，施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一些实施方案中，具有ERBB2扩增或突变的癌症选自膀胱尿路上皮癌、子宫内膜癌、结肠腺癌、胃腺癌、食管腺癌、子宫颈鳞状细胞癌、子宫颈内膜腺癌、直肠腺癌、皮肤恶性黑色素瘤、胆管癌、肺腺癌、乳腺浸润性癌、肺鳞状细胞癌、多形性胶质母细胞瘤、头颈部鳞状细胞癌、卵巢浆液性囊腺癌、肾脏肾乳头状细胞癌、子宫癌肉瘤、胸腺瘤、急性骨髓性白血病和肾脏肾透明细胞癌。在一些实施例中，癌症是卵巢癌、乳腺癌或NSCLC。

在另一个实施方案中，向患有ERBB2突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与阿贝西利、阿比特龙、阿法替尼、博舒替尼、卡博替尼、达沙替尼、恩西地平、恩杂鲁胺、厄洛替尼、依维莫司、厄达替尼、氟维司群、吉非替尼、依鲁替尼、伊马替尼、ipatasertib、拉帕替尼、尼罗替尼、尼拉帕尼、奥拉帕尼、olarutumab、奥希替尼、帕博西尼、帕唑帕尼、PF7775、帕纳替尼、雷莫芦单抗、瑞格拉非尼、瑞博西尼、卢卡帕尼、沃利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、他拉唑帕尼、曲妥单抗、trilaciclib或vistusertib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有ERBB2突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与艾乐替尼、阿培利司、比美替尼、布加替尼、色瑞替尼、考比替尼、库潘尼西、克唑替尼、dabrafenih、康奈非尼、艾代拉里斯、劳拉替尼、SCH772984、司美替尼、曲美替尼、优立替尼或verumarenib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有EGFR突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与RET抑制剂。在一些实施方案中，RET抑制剂是普雷西替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是agerafenib。在一些实施方案中，RET抑制剂是凡德他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是乐伐替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是阿帕他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是sitravatinib。在一些实施方案中，RET抑制剂是LOXO-292。在一些实施方案中，所述施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

ALK

大约3-7％的肺肿瘤存在ALK融合(Koivunen et al.2008；Kwak et al.2010；Shinmura et al.2008；Soda et al.2007；Takeuchi et al.2008；Wong et al.2009)。ALK融合更常见于轻度吸烟者(<10包年)和/或从不吸烟者(Inamura et al.2009；Koivunen etal.2008；Kwak et al.2010；Soda et al.2007；Wong et al.2009)。ALK融合也与年轻化(Inamura et al.2009；Kwak et al.2010；Wong et al.2009)和具有尖锐组织学(Inamuraet al.2009；Wong et al.2009)或标志环细胞(Kwak et al.2010)的腺癌有关。临床上，EML4-ALK融合的存在与EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)耐药有关(Shaw et al.2009)。

在NSCLC中已经描述了多种不同的ALK重排。这些ALK融合变体中的大多数是由棘皮动物微管相关蛋白样4(EML4)基因的部分与ALK基因组成。已经在NSCLC中识别了至少有9种不同的EML4-ALK融合变体(Choi et al.2008；Horn and Pao 2009；Koivunen etal.2008，Soda et al.2007；Takeuchi et al.2008；Takeuchi et al.2009；Wong etal.2009)。此外，还识别了非EML4融合伙伴，包括KIF5B-ALK(Takeuehi et al.2009)和TFG-ALK(Rikova et al.2007)。临床上，通过ALK断裂探针的荧光原位杂交(FISH)检测ALK重排的存在。FISH检测无法辨别临床样本中发现的是哪种特定的ALK融合。

在绝大多数情况下，ALK重排与NSCLC中发现的其他致癌突变(如EGFR突变、KRAS突变等；Inamura et al.2009，Kwak et al.2010，Shinmura et al.2008；Wong et al.2009)是非重叠的。

异常的EML4-ALK基因融合导致产生一种蛋白质(EML4-ALK)，在许多情况下，这种蛋白似乎促进和维持癌细胞的恶性行为(see Soda M,Choi YL,Enomoto M,et al.(August2007)."Identification of the transforming EML4-ALK fusion gene in non-small-cell lung cancer".Nature.448(7153):561-6)。2007年首次报道了非小细胞肺癌(NSCLC)中的转化型EML4-ALK融合基因(see Sasaki T,Rodig SJ,Chirieac LR,Janne PA(July2010)."The biology and treatment of EML4-ALK non-small cell lung cancer".Eur.J.Cancer.46(10):1773-80)。

在一些实施方案中，提供一种治疗具有ALK融合基因突变的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与优立替尼、克唑替尼或艾乐替尼。在另一个实施方案中，提供一种治疗具有ALK融合基因突变的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与色瑞替尼、布加替尼、SCH772984、劳拉替尼或恩曲替尼，或其组合。在一些实施方案中，ALK融合是EML4-ALK。在一些实施方案中，癌症也是RB-蛋白质阴性的。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂治疗产生抗性后向受试者施用CDK4/6抑制剂。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一些实施方案中，具有ALK融合基因突变的癌症选自皮肤恶性黑色素瘤、子宫内膜癌、结肠腺癌、肺腺癌、胃腺癌、卵巢浆液性囊腺癌、肺鳞状细胞癌、子宫颈鳞状细胞癌、子宫颈内膜腺癌、膀胱尿路上皮癌、食道癌、头颈部鳞状细胞癌、直肠腺癌、肾上腺皮质癌、肝脏肝细胞癌、肾脏肾透明细胞癌、多形性胶质母细胞瘤、子宫癌肉瘤、乳腺侵袭性癌、肾嗜铬细胞瘤和急性髓细胞白血病。在一些实施方案中，癌症是NSCLC。

在另一个实施方案中，向患有具有ALK融合基因突变的癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂和阿贝西利、阿比特龙、阿法替尼、博舒替尼、卡博替尼、达沙替尼、恩西地平、恩杂鲁胺、厄洛替尼、依维莫司、厄达替尼、氟维司群、吉非替尼、依鲁替尼、伊马替尼、ipatasertib、拉帕替尼、尼罗替尼、尼拉帕尼、奥拉帕尼、olarutumab、奥希替尼、帕博西尼、帕唑帕尼、PF7775、帕纳替尼、雷莫芦单抗、瑞格拉非尼、瑞博西尼、卢卡帕尼、沃利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、他拉唑帕尼、曲妥单抗、trilaciclib或vistusertib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有具有ALK融合基因突变的癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾乐替尼、阿培利司、比美替尼、布加替尼、色瑞替尼、考比替尼、库潘尼西、克唑替尼、dabrafenih、康奈非尼、艾代拉里斯、劳拉替尼、SCH772984、司美替尼、曲美替尼、优立替尼或verumarenib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有具有ALK融合基因突变的癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与RET抑制剂。在一些实施方案中，RET抑制剂是普雷西替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是agerafenib。在一些实施方案中，RET抑制剂是凡德他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是乐伐替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是阿帕他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是sitravatinib。在一些实施方案中，RET抑制剂是LOXO-292。在一些实施方案中，所述施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一些实施方案中，受试者患有具有ALK重排的NSCLC，并且组合施用有CDK4/6抑制剂与克唑替尼。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

ROS1融合

ROS1基因(Entrez 6098)编码一种胰岛素受体家族的受体酪氨酸激酶(RTK)。涉及ROS1基因的染色体重排，在6q22号染色体上，最初描述在胶质母细胞瘤中(例如FIG-ROS1；Birchmeier,Sharma,and Wigler 1987；Birchmeier et al.1990；Charest et al.2003)。最近，ROS1融合被确定为非小细胞肺癌(Rikova et al.2007)和胆管癌(Gu et al.2011)中的潜在“驱动子”突变。

ROS1融合体包含一个完整的酪氨酸激酶域。迄今为止，经过生物测试的那些拥有致癌活性(Charest et al.2003；Rikova et al.2007)。ROS1融合下游的信号传导导致已知参与细胞生长和细胞增殖的细胞通路的激活。大约2％的肺部肿瘤藏有ROS1融合(Bergethon et al.2012)。在NSCLC中已经描述了几种不同的ROS1重排。这些包括SLC34A2-ROS1、CD74-ROS1、EZR-ROS1、TPM3-ROS1和SDC4-ROS1(Davies et al.2012；Rikova etal.2007；Takeuchi et al.2012)。ROS1重排与NSCLC中发现的其它致癌突变(例如，EGFR突变、KRAS突变、ALK融合等，Bergethon et al.2012)是非重叠的。

在一些实施方案中，提供一种治疗具有ROS1融合基因突变的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与克唑替尼。在另一个实施方案中，提供一种治疗具有ROS1基因突变的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与色瑞替尼、布加替尼、劳拉替尼或恩曲替尼或其组合。在一些实施方案中，ROS1融合是SLC34A2-ROS1。在一些实施方案中，ROS1融合是CD74-ROS1。在一些实施方案中，ROS1融合是EZR-ROS1。在一些实施方案中，ROS1融合是TPM3-ROS1。在一些实施方案中，ROS1融合是SDC4-ROS1。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂治疗产生抗性后向受试者施用CDK4/6抑制剂。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一些实施方案中，具有ROSI融合的癌症选自皮肤恶性黑色素瘤、子宫内膜癌、结肠腺癌、肺鳞状细胞癌、直肠腺癌、胃腺癌、头颈部鳞状细胞癌、膀胱尿路上皮癌、子宫颈鳞状细胞癌、子宫颈内膜腺癌、肺腺癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、子宫癌、肾脏肾透明细胞癌、食管癌、多形性胶质母细胞瘤、卵巢浆液性囊腺癌、乳腺浸润性癌、肝脏肝细胞癌、肾上腺皮质癌和急性髓系白血病。在一些实施方案中，癌症是NSCLC或胆管瘤。

在另一个实施方案中，向患有具有ROS1融合的癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与阿贝西利、阿比特龙、阿法替尼、博舒替尼、卡博替尼、达沙替尼、恩西地平、恩杂鲁胺、厄洛替尼、依维莫司、厄达替尼、氟维司群、吉非替尼、依鲁替尼、伊马替尼、ipatasertib、拉帕替尼、尼罗替尼、尼拉帕尼、奥拉帕尼、olarutumab、奥希替尼、帕博西尼、帕唑帕尼、PF7775、帕纳替尼、雷莫芦单抗、瑞格拉非尼、瑞博西尼、卢卡帕尼、沃利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、他拉唑帕尼、曲妥单抗、trilaciclib或vistusertib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物LA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有具有ROS1融合的癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾乐替尼、阿培利司、比美替尼、布加替尼、色瑞替尼、考比替尼、库潘尼西、克唑替尼、dabrafenih、康奈非尼、艾代拉里斯、劳拉替尼、SCH772984、司美替尼、曲美替尼、优立替尼或verumarenib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有具有ROS1融合的癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与RET抑制剂。在一些实施方案中，RET抑制剂是普雷西替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是agerafenib。在一些实施方案中，RET抑制剂是凡德他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是乐伐替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是阿帕他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是sitravatinib。在一些实施方案中，RET抑制剂是LOXO-292。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

RET

RET基因(Entrez 5979)位于染色体10上，编码一种属于RTK的RET家族的受体酪氨酸激酶(RTK)。该基因在神经嵴发育过程中起着至关重要的作用。它的配体，胶质细胞系衍生的细胞外信号传导分子的神经营养因子(GDNF)家族(Airaksinen,Titievsky andSaarma1999)的结合，诱导受体磷酸化和激活。激活后的RET然后将其底物磷酸化，导致多种下游细胞通路的激活(Phay and Shah 2010)。

RET的基因组改变在几种不同类型的癌症中都有发现。RET的激活点突变可引起遗传性癌症综合征，即多发性内分泌肿瘤2(MEN2；Salvatore et al.2000)。RET的体性点突变也与散发性甲状腺髓样癌有关(Ciampi and Nikiforov 2007，Salvatore et al.2000)。在约l％的非小细胞肺癌中发现涉及RET基因的致癌激酶融合(Ciampi and Nikiforov2007，Salvatore et al.2000)。

大约1.3％的评估的肺肿瘤具有导致RET融合基因的染色体变化(Ju et al.2012；Kohno et al.2012；Takeuchi et al.2012；Lipson et al.2012)。这些基因重排似乎几乎完全发生在腺癌组织学肿瘤中。组织学尚未得到彻底评估，但所有报道具有RET融合的肺肿瘤都是腺癌(已检测了400多种组织学非腺癌的肺癌)。评估重叠的地方，RET融合已被证明发生在没有其他共同驱动子致癌基因(如EGFR KRAS、ALK)的肿瘤中。所报道的三个融合基因是CCDC6-RET、KIF5B-RET和TRIM33-RET。

在一些实施方案中，提供一种治疗患有具有RET基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾乐替尼。在另一个实施方案中，提供一种治疗患有具有RET基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与色瑞替尼、布加替尼、劳拉替尼或恩曲替尼，或其组合。在本发明的一个方面，一种治疗患有具有RET基因突变的癌症的受试者的方法是RET基因融合。在一些实施方案中，RET融合是CCDC6-RET融合。在一些实施方案中，RET融合是KIF5B-RET融合。在一些实施例中，RET融合是TRIM33-RET融合。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂治疗产生抗性后向受试者施用CDK4/6抑制剂。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一些实施方案中，具有RET基因突变的癌症选自子宫内膜癌、皮肤恶性黑色素瘤、结肠腺癌、肺鳞状细胞癌、直肠腺癌、胃腺癌、食管癌、肺腺癌、胆管癌、嗜铬细胞瘤、肾上腺皮质癌、卵巢浆液性囊腺癌、头颈部鳞状细胞癌、膀胱尿路上皮癌、子宫颈鳞状细胞癌、子宫颈内膜腺癌、多形性胶质母细胞瘤、脑低级胶质瘤、肉瘤、视网膜黑色素瘤和间皮瘤。在一些实施方案中，RET融合癌是NSCLC。在一些实施方案中，RET融合突变型癌症是甲状腺癌。

在另一个实施方案中，向患有具有RET基因突变的癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与阿贝西利、阿比特龙、阿法替尼、博舒替尼、卡博替尼、达沙替尼、恩西地平、恩杂鲁胺、厄洛替尼、依维莫司、厄达替尼、氟维司群、吉非替尼、依鲁替尼、伊马替尼、ipatasertib、拉帕替尼、尼罗替尼、尼拉帕尼、奥拉帕尼、olarutumab、奥希替尼、帕博西尼、帕唑帕尼、PF7775、帕纳替尼、雷莫芦单抗、瑞格拉非尼、瑞博西尼、卢卡帕尼、沃利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、他拉唑帕尼、曲妥单抗、trilaciclib或vistusertib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有具有RET基因突变的癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾乐替尼、阿培利司、比美替尼、布加替尼、色瑞替尼、考比替尼、库潘尼西、克唑替尼、dabrafenih、康奈非尼、艾代拉里斯、劳拉替尼、SCH772984、司美替尼、曲美替尼、优立替尼或verumarenib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有具有RET基因突变的癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与RET抑制剂。在一些实施方案中，RET基因突变是RET融合。在一些实施方案中，RET抑制剂是普雷西替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是agerafenib。在一些实施方案中，RET抑制剂是凡德他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是乐伐替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是阿帕他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是sitravatinib。在一些实施方案中，RET抑制剂是LOXO-292。在一些实施方案中，所述施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有具有RET基因融合的NSCLC的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与RET抑制剂。在一些实施方案中，RET抑制剂是普雷西替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是agerafenib。在一些实施方案中，RET抑制剂是凡德他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是乐伐替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是阿帕他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是sitravatinib。在一些实施方案中，RET抑制剂是LOXO-292。在一些实施方案中，所述施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

NRAS

目前已经确定了三种不同的人类RAS基因：KRAS(与Kirsten大鼠肉瘤病毒的致癌基因同源)、HRAS(与Harvey大鼠肉瘤病毒的致癌基因同源)和NRAS(首次从人类神经母细胞瘤中分离)。不同的RAS基因高度同源，但功能不同；冗余程度仍是一个研究课题(在Pylayeva-Gupta et al.2011中回顾)。RAS蛋白质是小GTP酶，在无活性的二磷酸鸟苷(GDP)结合和活性的三磷酸鸟苷(GTP)结合形式之间循环。RAS蛋白质是生长因子受体信号传导下游的核心介质，因此对细胞增殖、生存和分化至关重要。RAS可以激活多个下游效应因子，包括参与细胞存活的PBK-AKT-mTQR通路和参与细胞增殖的RAS-RAF-MEK-ERK通路。

RAS已牵涉到多种癌症的发病机制中。RAS基因内的激活性突变导致RAS GTP酶的构成性激活，即使在没有生长因子信号传导的情况下也是如此。结果是在细胞内产生持续的增殖信号。特定的RAS基因在不同的恶性肿瘤中反复地突变。NRAS突变在黑色素瘤、肝细胞癌、骨髓性白血病和甲状腺癌中特别常见(综述见Kamoub and Weinberg 2008和Schubbert,Shannon,and Bollag 2007)。

NRAS的体细胞突变已在所有NSCLC的约1％中被发现(Brose et al.2002，Ding etal.2008；Ohashi et al.2013)。NRAS突变更常见于腺癌组织学的肺癌和有吸烟史的肺癌中(Ohashi et al.2013)。在大多数情况下，这些突变是错义突变，在位置61引入一个氨基酸置换。也已描述了在位置12的突变(Ohashi et al.2013)。这些突变的结果是NRAS信号传导通路的构成性激活。

在本发明的一个方面，提供一种治疗患有具有NRAS基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与dactolisib。在另一个实施方案中，提供一种治疗患有具有NRAS基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司或乌帕拉利司，或其组合。在一些实施方案中，NRAS突变编码为Q61K置换。在一些实施方案中，NRAS突变编码为Q61L、Q61R或Q61H置换。在一些实施方案中，NRAS突变编码为G12C、G12R、G12S、G12A或G12D置换。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂治疗产生抗性后向受试者施用CDK4/6抑制剂。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK 4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一些实施方案中，具有NRAS基因突变的癌症选自皮肤恶性黑色素瘤、直肠腺癌、甲状腺癌、子宫内膜癌、急性骨髓性白血病、结肠腺癌、睾丸生殖细胞瘤、胸腺瘤、胆管癌、膀胱尿路上皮癌、子宫癌、肾嗜铬细胞癌、子宫颈鳞状细胞癌、子宫颈内膜腺癌、肝脏肝细胞癌、多形性胶质母细胞瘤、肺鳞状细胞癌、卵巢浆液性囊腺癌、肾上腺皮质癌、胃腺癌和肺腺癌。在一些实施方案中，NRAS癌是黑色素瘤、肝细胞癌、骨髓性白血病、NSCLC或甲状腺癌。在一些实施方案中，NRAS突变癌是NSCLC。在一些实施方案中，具有编码Q61K置换的NILAS突变的癌症是皮肤恶性黑色素瘤或直肠腺癌。在一些实施方案中，具有编码Q61L置换的NRAS突变的癌症是皮肤恶性黑色素瘤或多形性胶质母细胞瘤。在一些实施方案中，具有编码Q61R置换的NRAS突变的癌症是皮肤恶性黑色素瘤、甲状腺癌或胆管癌。在一些实施方案中，具有编码Q61H置换的NRAS突变的癌症是直肠腺癌或皮肤恶性黑色素瘤。在一些实施方案中，具有编码G12C置换的NRAS突变的癌症是直肠腺癌或结肠腺癌。在一些实施方案中，具有编码G12R置换的NRAS突变的癌症是皮肤恶性黑色素瘤。在一些实施方案中，具有编码G12A置换的NRAS突变的癌症是结肠腺癌或皮肤皮肤黑色素瘤。在一些实施方案中，具有编码G12S置换的NRAS突变的癌症是睾丸生殖细胞肿瘤或皮肤恶性黑色素瘤。在一些实施方案中，具有编码G12D置换的NRAS突变的癌症是直肠腺癌或急性髓细胞白血病。

在另一个实施方案中，向患有NRAS突变癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与阿贝西利、阿比特龙、阿法替尼、博舒替尼、卡博替尼、达沙替尼、恩西地平、恩杂鲁胺、厄洛替尼、依维莫司、厄达替尼、氟维司群、吉非替尼、依鲁替尼、伊马替尼、ipatasertib、拉帕替尼、尼罗替尼、尼拉帕尼、奥拉帕尼、olarutumab、奥希替尼、帕博西尼、帕唑帕尼、PF7775、帕纳替尼、雷莫芦单抗、瑞格拉非尼、瑞博西尼、卢卡帕尼、沃利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、他拉唑帕尼、曲妥单抗、trilaciclib或vistusertib，或其组合。在一些实施方案中，所述施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有NRAS突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与艾乐替尼、阿培利司、比美替尼、布加替尼、色瑞替尼、考比替尼、库潘尼西、克唑替尼、dabrafenih、康奈非尼、艾代拉里斯、劳拉替尼、SCH772984、司美替尼、曲美替尼、优立替尼或verumarenib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有NRAS突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与RET抑制剂。在一些实施方案中，RET抑制剂是普雷西替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是agerafenib。在一些实施方案中，RET抑制剂是凡德他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是乐伐替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是阿帕他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是sitravatinib。在一些实施方案中，RET抑制剂是LOXO-292。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

PIK3CA

磷脂酰3-激酶(PI3K)是参与许多细胞过程，包括细胞生长、增殖、分化、运动和生存的脂质激酶家族。PI3K是由2个亚单位--85kDa的调节亚单位(p85)和110kDa的催化亚单位组成的异二聚体。PIK3CA基因编码p110α，其是催化亚单位之一。

PI3K在细胞膜的内叶上将PI(4,5)P2[磷脂酰肌醇4,5-二磷酸]转化为PI(3,4,5)P3[磷脂酰肌醇(3,4,5)-三磷酸]。PI(3,4,5)P3将重要的下游信号传导蛋白，诸如AKT，招募到细胞膜上，导致这些蛋白的活性增加。

突变的PIK3CA已涉及到几种癌症的发病机制中，包括结肠癌、胶质瘤、胃癌、乳腺癌、子宫内膜癌和肺癌(Samuels et al.2004)。

已在1-3％的所有NSCLC中发现了PIK3CA的体细胞突变(COSMIC，Kawano etal.2006；Samuels et al.2004)。这些突变通常发生在外显子9(螺旋域)和外显子20(激酶域)的两个“热点”区域内。与腺癌相比，PIK3CA突变似乎在鳞状细胞组织学中更为常见(Kawano et al.2006)，并且在从不吸烟者和曾经吸烟者中均有发生。PIK3CA突变可以与EGFR突变共存(Kawano et al.2006；Sun et al.2010)。此外，在EGFR突变的肺癌中，已经检测到小比例(约5％)的PIK3CA突变，并对EGFR TKI治疗产生获得性抗性(Sequist etal.2011)。

在一些实施方案中，提供一种治疗患有具有PIK3CA基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与达拉非尼、司美替尼、优立替尼或dactolisib，或其组合。在另一个实施方案中。提供一种治疗患有具有PIK3CA基因突变的癌症的受试者的方法，其中向受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与康奈非尼、维莫非尼、艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司、SCH772984、曲美替尼、考比替尼、比美替尼、或umbralisib，或其组合。在一些实施方案中，PIK3CA基因突变编码为E542K置换，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的激酶抑制剂是达拉非尼、司美替尼或优立替尼，或其组合。在一些实施方案中，PIK3CA基因突变编码为H1047R置换，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的激酶抑制剂是司美替尼或dactolisib。在一些实施方案中，PIK3CA基因突变编码为G106-R108缺失，并且与CDK 4/6抑制剂组合施用的激酶抑制剂是dactolisib。在一些实施方案中，PIK3CA突变癌也是Rb蛋白质阴性的。在一些实施方案中，PIK3CA基因突变编码为E545Q或H1047L突变。在一些实施方案中，在受试者的癌症对先前的激酶抑制剂治疗产生抗性后向受试者施用CDK 4/6抑制剂。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在一些实施方案中，PIK3CA突变型癌症选自子宫内膜癌、子宫癌、乳腺浸润性癌、结肠腺癌、子宫颈鳞状细胞癌、子宫颈内膜腺癌、膀胱尿路上皮癌、头颈部鳞状细胞癌、胃腺癌、直肠腺癌、肺鳞状细胞癌、多形性胶质母细胞瘤、食管癌、脑低级胶质瘤、胆管癌、肺腺癌、卵巢浆液性囊腺癌、肝脏肝细胞癌、肉瘤、皮肤恶性黑色素瘤、胰腺腺癌、前列腺腺癌和睾丸生殖细胞肿瘤。在一些实施方案中，PIK3CA突变癌是结肠癌、胶质瘤、胃癌、乳腺癌、子宫内膜癌或肺癌。在一些实施方案中，癌症是NSCLC。在一些实施方案中，携带编码E542G置换的PI3KCA突变的癌症是结肠腺癌或乳腺浸润性癌。在一些实施方案中，携带编码H1047R置换的PI3KCA突变型癌症是乳腺侵袭性癌、子宫癌、或子宫内膜癌。在一些实施方案中，携带编码E545Q置换的PI3KCA突变型癌症是膀胱尿道癌或肺鳞状细胞癌。在一些实施方案中，携带编码H1047L置换的PI3KCA突变型癌症是胆管癌、食管癌或子宫内膜癌。

在另一个实施方案中，向患有具有PI3KCA突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与阿贝西利、阿比特龙、阿法替尼、博舒替尼、卡博替尼、达沙替尼、恩西地平、恩杂鲁胺、厄洛替尼、依维莫司、厄达替尼、氟维司群、吉非替尼、依鲁替尼、伊马替尼、ipatasertib、拉帕替尼、尼罗替尼、尼拉帕尼、奥拉帕尼、olarutumab、奥希替尼、帕博西尼、帕唑帕尼、PF7775、帕纳替尼、雷莫芦单抗、瑞格拉非尼、瑞博西尼、卢卡帕尼、沃利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、他拉唑帕尼、曲妥单抗、trilaciclib或vistusertib，或其组合。在一些实施方案中，所述施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向具有PI3KCA突变型癌症的受试者组合施用本文所述的CDK 4/6抑制剂与艾乐替尼、阿培利司、比美替尼、布加替尼、色瑞替尼、考比替尼、库潘尼西、克唑替尼、dabrafenih、康奈非尼、艾代拉里斯、劳拉替尼、SCH772984、司美替尼、曲美替尼、优立替尼或verumarenib，或其组合。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，向患有PI3KCA突变型癌的受试者组合施用本文所述的CDK4/6抑制剂与RET抑制剂。在一些实施方案中，RET抑制剂是普雷西替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是agerafenib。在一些实施方案中，RET抑制剂是凡德他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是乐伐替尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是阿帕他尼。在一些实施方案中，RET抑制剂是sitravatinib。在一些实施方案中，RET抑制剂是LOXO-292。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂选自化合物I、化合物IA和化合物IA形式B。在一些实施方案中，所施用的CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

在另一个实施方案中，受试者患有携带PIK3R1突变的癌症。

激酶抑制剂

如本文所设想的，本发明提供通过组合或交替施用本文所述的选择性CDK4/6抑制剂与激酶抑制剂来治疗患有具有已确定的驱动子突变的癌症患者的方法。用于本发明的激酶抑制剂包括但不限于达拉非尼、司美替尼、优立替尼、dactolisib、克唑替尼、艾乐替尼、拉帕替尼和曲美替尼，这些将在下文进一步描述。在另一个实施方案中，用于本发明的激酶抑制剂包括但不限于康奈非尼、维莫非尼、艾代拉里斯、库潘尼西、taselisib、哌立福新、buparlisin、杜韦利西布、阿培利司、乌帕拉利司、色瑞替尼、布加替尼和恩曲替尼，这些将在下文进一步描述。在另一个实施方案中，用于本发明的激酶抑制剂包括RET抑制剂，包括但不限于agerafenib、普雷西替尼、凡德他尼、乐伐替尼、阿帕他尼、LOXO-292和sitravatinib。

达拉非尼(Tafmlar，GSK2118436)是一种可逆的ATP竞争性BRAF抑制剂，用于治疗BRAF V600突变的癌症，其化学结构为：

司美替尼(AZD6244)是一种在研的MEK1/MEK2抑制剂，用于治疗含有BRAF突变的癌症，其化学结构为：

优立替尼(BVD-523)是一种可逆的、ATP竞争性的ERK1/2抑制剂，具有高效力和ERK1/2选择性。优立替尼的化学结构为：

Dactolisib(NVP-BEZ235)是一种PI3K/mTOR抑制剂，其化学结构为：

克唑替尼(Xalkori)是一种EML4-ALK融合蛋白的激酶活性的选择性抑制剂，该蛋白可驱动NSCLC的恶性表型。克唑替尼的化学结构为：

艾乐替尼(Alecensa)是一种EML4-ALK融合蛋白的激酶活性的选择性抑制剂，其化学结构为：

拉帕替尼(Tykerb或Tyverb)是一种HER2/neu和EGFR抑制剂，可与细胞内磷酸化域结合以防止配体结合后受体自磷酸化。拉帕替尼的化学结构为

曲美替尼是一种MEK1/MEK2抑制剂，用于治疗携带BRAF V600E突变的肿瘤，其化学结构为：

康奈非尼(LGX818)是BRAF抑制剂，目前正在研究用于治疗V600E突变癌症，其化学结构为：

维莫非尼(Zelboraf)是一种BRAF抑制剂，用于治疗V600E突变型癌症，其化学结构为：

艾代拉里斯(Zydelig)是PI3K抑制剂，用于治疗某些血液学恶性肿瘤，其化学结构为：

库潘尼西(Aliqopa)是一种PI3K抑制剂，被批准用于治疗复发性滤泡性淋巴瘤，其化学结构为：

Taselisih(GDC-0032)是一种正在研发中的实验性PI3K抑制剂，用于治疗转移性乳腺癌和NSCLC，其化学结构为：

哌立福新(KRX-0401)是一种正在研发的烷基磷脂，作为PI3K抑制剂，其化学结构为：

Buparlisib(BKM120)是一种正在进行临床试验研究的PI3K抑制剂，用于治疗晚期HR+/HER2内分泌抗性乳腺癌，其化学结构为：

杜韦利西布(IPI-145)是一种正在临床研发的PI3K抑制剂，用于治疗血液恶性肿瘤，其化学结构为：

阿培利司(BYL719)是一种正在研发中的PI3K抑制剂，用于治疗多种癌症，其化学结构为：

乌帕拉利司(TGR-1202)是一种正在研发的PI3K抑制剂，用于治疗血液学恶性肿瘤，其化学结构为：

色瑞替尼是一种ALK阳性抑制剂，被批准用于治疗NSCLC，具有化学结构：

布加替尼(Alunbrig)是一种正在研究的ALK和EGFR双重抑制剂，其化学结构为：

恩曲替尼(RXD-101和MvlS-E628)是一种正在研究的Trk、ROSE和ALK抑制剂，其化学结构为：

曲美替尼(Mekinist)是一种MEK抑制剂，用于治疗携带BRAF V600E突变的转移性黑色素瘤，其化学结构为：

考比替尼(Coteilie)是一种MEK抑制剂，用于治疗携带BRAF V600E突变的黑色素瘤，其化学结构为：

比美替尼(MEK162或ARRY-162)是一种MEK抑制剂，目前正在研发用于治疗BRAE突变型黑色素瘤，其化学结构为：

劳拉替尼(PF-6463922)是一种实验性的ROS1和ALK抑制剂，正在临床研发中，用于治疗NSCLC，其化学结构为：

SCH772984是一种正在研发中的ERK1/2抑制剂，用于治疗RAS或BRAF突变的癌细胞，其化学结构为：

Agerafenib(RXDX-105)是一种口服的RET抑制剂，其化学结构为：

普雷西替尼(BLU-667)是一种高效力、高选择性的RET抑制剂，其化学结构为：

凡德他尼是一种具有抑制RET活性的多激酶抑制剂，其化学结构为：

乐伐替尼是一种具有针对RET的抑制活性的多激酶抑制剂，其化学结构为：

阿帕他尼是一种VEGFR2抑制剂，对RET也有抑制活性，其化学结构为：

LOXO-292是一种选择性RET抑制剂，化学结构为：

Sitravatinib是一种针对RET具有抑制活性的多激酶抑制剂，其化学结构为：

药物组合物和剂型

在其它方面，本发明是一种药物组合物，其包含治疗有效量的选自本文所述的化合物I、化合物IA、化合物IA形式B、化合物II、化合物III和化合物IV的选择性CDK4/6抑制剂和另外的激酶抑制剂，以及一种或多种药学上可接受的稀释剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、佐剂、赋形剂或载体。这种赋形剂包括液体，诸如水、生理盐水、甘油、聚乙二醇、透明质酸、乙醇等。

术语“药学上可接受的载体”是指本公开的化合物与其施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体。术语“有效量”或“药学有效量”指无毒但足够量的药剂以提供所需的生物结果。该结果可以是减少和/或减轻疾病的征兆、症状或原因，或生物系统的任何其它期望的改变。在任何个别情况下，适当的“有效”量可以由本领域普通技术人员使用常规实验确定。治疗用的“药学上可接受的载体”在药物领域中是众所周知的，并且例如在Remington'sPharmaceutical Sciences，第18版(Easton,Pennsylvania:Mack Publishing Company,1990)中描述。例如，可以使用无菌盐水和生理pH值的磷酸盐缓冲盐水。在药物组合物中可以提供防腐剂、稳定剂、染料甚至调味剂。例如，可以添加苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸的酯类作为防腐剂。同上，在1449。此外，可以使用抗氧化剂和悬浮剂。同上。

对于本领域的技术人员来说，合适的非液体制剂的赋形剂也是已知的。关于药学上可接受的赋形剂和盐的彻底的讨论可在Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版(Easton,Pennsylvania:Mack Publishing Company,1990)中获得。

此外，辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、生物缓冲物质、表面活性剂等，可以存在于这种媒介物中。生物缓冲剂可以是任何药理学上可接受的溶液，并能为制剂提供所需的pH值，即在生理学上可接受范围内的pH值。缓冲溶液的实例包括生理盐水、磷酸盐缓冲盐水、Tris缓冲盐水、Hank缓冲盐水等。

根据预期的施用方式，药物组合物可以是固体、半固体或液体剂型的形式，诸如，例如，片剂、栓剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、液体、悬浮剂、乳膏剂、软膏剂、洗剂等，优选适合于单次施用精确剂量的单位剂型。该组合物将包括有效量的所选药物与药学上可接受的载体组合，此外，还可以包括其它药剂、佐剂、稀释剂、缓冲剂等。

一般来说，本公开的组合物将以任何一种公认的施用方式以治疗有效量施用。合适的剂量范围取决于许多因素，诸如要治疗的疾病的严重程度、患者的年龄和相对健康状况、所使用的化合物的效力、施用途径和形式、施用所针对的适应症，以及有关医务人员的偏好和经验。治疗这类疾病的本领域普通技术人员将能够在不进行过度的实验的情况下，依靠个人知识和本申请的公开，确定针对给定疾病的本申请公开的组合物的治疗有效量。

因此，本申请公开的组合物可以作为药物制剂施用，包括适合口服(包括颊和舌下)、直肠、鼻腔、局部、肺部、阴道或肠外(包括肌肉内、动脉内、鞘内、皮下和静脉内)施用或适合通过吸入或灌注施用的形式。优选的施用方式是静脉注射或口服，使用方便的每日剂量方案，该方案可根据患处的程度进行调整。

对于固体组合物，常规的无毒固体载体包括例如医药级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。液体药物施用组合物例如可以通过将本文所述的活性化合物和任选的药物佐剂溶解、分散等在赋形剂中，诸如例如，水、生理盐水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇等从而形成溶液或悬浮液来制备。如果需要，待施用的药物组合物还可以含有少量的无毒辅助物质，诸如湿润剂或乳化剂、pH缓冲剂等，例如乙酸钠、山梨醇酐单月桂酸酯、三乙醇胺乙酸钠、三乙醇胺油酸酯等。制备这种剂型的实际方法是已知的，或者对于本领域的技术人员来说将是显而易见的；例如，参见上面提到的Remington's Pharmaceutical Sciences。

在另一个实施方案中，使用渗透增强剂赋形剂，包括聚合物，诸如：多阳离子(壳聚糖及其季铵衍生物、聚L-精氨酸、氨基明胶)；聚阴离子(N-羧甲基壳聚糖、聚丙烯酸)；以及，硫醇化聚合物(羧甲基纤维素-半胱氨酸、聚卡波非-半胱氨酸、壳聚糖-巯基丁基脒、壳聚糖-巯基乙酸、壳聚糖-谷胱甘肽共轭物)。

对于口服施用，该组合物一般将采取片剂、胶囊、软胶囊的形式，或者可以是水溶液或非水溶液、悬浮液或糖浆。片剂和胶囊是优选的口服施用形式。口服用的片剂和胶囊可以包括一种或多种常用的载体，诸如乳糖和玉米淀粉。还通常加入润滑剂，诸如硬脂酸镁。通常，本公开的组合物可以与口服的、无毒的、药学上可接受的惰性载体诸如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、甘露醇、山梨醇等结合。此外，当需要或必要时，合适的粘结剂、润滑剂、崩解剂和着色剂也可以加入到混合物中。合适的粘结剂包括淀粉、明胶、天然糖类如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成胶类诸如槐花胶、三七胶或海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。

当使用液体悬浮液时，活性剂可与任何口服的、无毒的、药学上可接受的惰性载体诸如乙醇、甘油、水等结合，并与乳化剂和悬浮剂结合。如果需要，还可以加入调味剂、着色剂和/或甜味剂。用于加入到本文的口服制剂中的其它可选成分包括但不限于防腐剂、悬浮剂、增稠剂等。

肠胃外制剂可以以常规形式制备，液体溶液或悬浮液，适合于注射前在液体中溶解或悬浮的固体形式，或乳剂。优选地，无菌可注射悬浮液根据本技术领域已知的技术使用合适的载体、分散剂或湿润剂和悬浮剂配制。无菌可注射制剂也可以是在可接受的无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液。可以采用的可接受的媒介物和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，传统上采用无菌的固定油、脂肪酯或多元醇作为溶剂或悬浮介质。此外，肠胃外施用可涉及使用缓释或持续释放系统，以便维持恒定的剂量水平。

肠胃外施用包括关节内、静脉内、肌肉内、皮内、腹膜内和皮下途径，并包括水性的和非水性的等渗无菌注射液，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、杀菌剂和使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质，以及可包含悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂的水性的和非水性的无菌悬浮液。通过某些肠胃外途径施用可涉及通过针或导管，在无菌注射器或诸如连续输液系统的一些其它机械装置的推动下，将本公开的制剂引入患者体内。可以使用针筒、注射器、泵或本领域公认的任何其他肠胃外施用装置来施用本公开的制剂。

优选地，无菌可注射悬浮液根据本领域已知的技术使用合适的载体、分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂也可以是无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液。可采用的可接受的媒介物和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的固定油、脂肪酯或多元醇通常被用作溶剂或悬浮介质。此外，肠胃外施用可以涉及使用缓释或持续释放系统，从而保持恒定的剂量水平。

根据本公开的用于肠胃外施用的制剂包括无菌的水溶液或非水溶液、悬浮液或乳剂。非水溶剂或媒介物的实例是丙二醇，聚乙二醇，植物油诸如橄榄油和玉米油，明胶和可注射的有机酯诸如油酸乙酯。这样的剂型还可以含有佐剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。它们可以通过例如通过抑菌过滤器过滤，通过将灭菌剂加入到组合物中，通过辐照组合物或通过加热组合物来灭菌。它们也可以在使用前立即使用无菌水或其它一些无菌可注射介质制备。

无菌可注射溶液通过将一种或多种本公开的化合物以所需量与上述列举的各种其它成分按要求加入到适当的溶剂中，然后过滤灭菌来制备。一般来说，通过将各种已灭菌的活性成分加入到无菌媒介物中来制备分散体，该媒介物含有基本的分散介质和上述列举的所需的其它成分。在制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，这些技术从先前无菌过滤的其溶液中产生活性成分加上任何附加的所需成分的粉末。因此，例如，通过将1.5重量％的活性成分在10体积％的丙二醇和水中搅拌，制备适合注射施用的肠胃外组合物。该溶液用氯化钠等渗，并进行灭菌。

可选择地，本公开的药物组合物可以以直肠施用的栓剂形式施用。这些可以通过将药剂与合适的无刺激性赋形剂混合来制备，该赋形剂在室温下为固体，但在直肠温度下为液体，因此将在直肠中融化以释放药物。这种材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。

本公开的药物组合物也可以通过鼻腔气雾剂或吸入施用。这样的组合物根据药物制剂技术领域公知的技术制备，并且可以制备成在生理盐水中的溶液，采用苯甲醇或其它合适的防腐剂、提高生物利用度的吸收促进剂、推进剂诸如氟碳化合物或氮气，和/或其它常规增溶或分散剂。

用于局部药物递送的优选制剂是软膏和乳膏。软膏是半固体制剂，其通常基于凡士林或其它石油衍生物。含有所选活性剂的乳膏，如本领域中已知的那样，是粘稠的液体或半固体乳剂，是水包油或油包水。乳膏基质是可水洗的，并含有油相、乳化剂和水相。油相有时也称为“内”相，通常由凡士林和脂肪醇，诸如鲸蜡醇或硬脂醇，组成。水相的体积通常(虽然并不一定)超过油相，一般含有保湿剂。乳膏制剂中的乳化剂一般为非离子、阴离子、阳离子或两性表面活性剂。要使用的特定软膏或乳膏基质，正如本领域的熟练人员将理解的那样，是一种将提供最佳药物递送的基质。与其它载体或媒介物一样，软膏基质应是惰性的、稳定的、无刺激性和无致敏性的。

用于颊部施用的制剂包括片剂、锭剂、凝胶等。可选择地，可以使用本领域技术人员所熟知的经粘膜递送系统进行颊部施用。本公开的化合物也可以使用常规的经皮递送系统，即经皮“贴片”，通过皮肤或粘膜组织递送，其中药剂通常包含在层状结构内，该层状结构可作为贴在体表的药物递送装置。在这样的结构中，药物成分通常包含在上背衬层下面的一层或“储器”中。层状装置可以包含一个储器，也可以包含多个储器。在一些实施方案中，储器包含药学上可接受的接触粘合剂材料的聚合物基质，该基质在药物递送过程中用于将系统贴到皮肤上。合适的皮肤接触粘合剂材料的实例包括但不限于聚乙烯、聚硅氧烷、聚异丁烯、聚丙烯酸酯、聚氨酯等。可选择地，含药储器和皮肤接触胶粘剂是作为单独的和不同的层存在的，胶粘剂是储器的下层，在这种情况下，储器可以是如上所述的聚合物基质，也可以是液体或凝胶储器，或者可以采取其他形式。这些层中的背衬层作为装置的上表面，起着层压结构的主要结构元件的作用，并为装置提供了大部分的柔性。选择用于背衬层的材料应基本上不渗透活性剂和任何其它存在的材料。

本公开的组合物可配制成用于气雾剂施用，特别是用于呼吸道施用，包括鼻内施用。该化合物可以，例如一般具有小粒径，例如5微米或更小的级别。这样的粒径可以通过本技术领域已知的手段获得，例如通过微粉化。活性成分在加压包中与合适的推进剂诸如氯氟烃(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体一起提供。气雾剂也可以方便地含有表面活性剂，诸如卵磷脂。药物的剂量可以由计量阀控制。可选择地，活性成分可以以干粉的形式提供，例如化合物在合适的粉末基质中的粉末混合物，粉末基质诸如乳糖，淀粉，淀粉衍生物诸如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷(PVP)。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉剂组合物可以以单位剂量形式呈现，例如以胶囊或例如明胶或泡罩包装的盒呈现，其中粉末可以通过吸入器从其施用。

药用或治疗有效量的组合物将被递送至患者。精确的有效量将因患者而异，并取决于患者的种类、年龄、患者的体型和健康状况、正在治疗的病症的性质和程度、治疗医生的建议以及选择用于施用的治疗剂或治疗剂组合，给定情况的有效量可通过常规实验确定。为了本公开的目的，至少一次给药的治疗量可以为约0.01mg/kg至约250mg/kg体重，更优选约0.1mg/kg至约10mg/kg。在较大的哺乳动物中，指示的日剂量可以为约1mg至1500mg，每天一次或多次，更优选为约10mg至600mg。可以按照减少和/或减轻所讨论的疾病的体征、症状或原因或使生物系统发生任何其他所需的改变所需的剂量施用于患者。当需要时，可以用适于持续或控制释放活性成分的肠溶衣制备制剂。

本文所述的任何活性化合物的治疗有效剂量将由保健医师根据患者的病情、体型和年龄以及递送途径来确定。在一个非限制性的实施方案中，约0.1至约200mg/kg的剂量具有治疗效果，所有重量均基于活性化合物的重量计算，包括采用盐的情况。在一些实施方案中，剂量可以是提供活性化合物的血清浓度所需的化合物的量，该血清浓度可至多为约10nM、50nM、100nM、200nM、300nM、400nM、500nM、600nM、700nM、800nM、900nM、1μM、5μM、10μM、20μM、30μM或40μM。

在某些实施方案中，药物组合物的剂型是包含约0.1mg至约2000mg、约10mg至约1000mg、约100mg至约800mg或约200mg至约600mg的活性化合物和/或任选约0.1mg至约2000mg、约10mg至约1000mg、约100mg至约800mg或约200mg至约600mg的其他活性剂的单位剂型。剂型的实例具有至少5、10、15、20、25、50、100、200、250、300、400、500、600、700或750mg的活性化合物或其盐。药物组合物还可以以达到期望结果的比例包括一定摩尔比的活性化合物和另外的活性剂。

药物制剂优选为单位剂型。以这种形式，将制剂细分为包含适当量的活性成分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，该包装包含离散量的制剂，诸如包装的片剂、胶囊和小瓶或安瓿中的粉末。同样，单位剂型本身可以是胶囊剂、片剂、扁囊剂或锭剂，或者可以是包装形式的适当数量的任何这些。

实施例

实施例1.NSCLC PDX模型组证明了对化合物1治疗的不同敏感性。

NSCLC PDX模型(n＝60)每天口服媒介物或化合物1(100mg/kg)治疗长达28天。肿瘤生长抑制(TGI)在肿瘤达到预设定的肿瘤负担时或在第28天计算。使用FoundationOne评估来自预处理样品的基因改变。58％的TGI用作相关性分析的响应者/非响应者的截止值。如图1所示，在NSCLC PDX模型的组中，有一系列与化合物1相关的疗效。某些基因改变，诸如KRAS和EGFR，表现出更高的敏感性，而其他基因改变，如RB1，则表现出抗性。腺癌的中值TGI为73％，鳞状细胞癌的中值TGI为66％。

实施例2.化合物1在体外增强靶向特异性致癌驱动子的抑制剂的抗增殖作用

筛选携带已知致癌突变的肺癌细胞系(n＝40)对单独的化合物1或化合物1与相关靶向激酶抑制剂(Crown Bioscience，Taicang，China)组合的敏感性。如图2所示，化合物1单药处理的绝对IC₅₀值使用2x倍增时间细胞增殖试验(最小3天)进行计算，并用于指导组合处理试验的设计。使用Loewe Additivity模型，生长抑制剂值用于计算化合物1与达拉非尼、司美替尼、优立替尼、dactolisib、奥希替尼、克唑替尼、艾乐替尼或拉帕替尼的协同分数。对于NSCLC细胞系的药物协同筛选，建立了名义上以单药IC₅₀值为中心的9x9组合矩阵，在两次群体翻倍后，测量每个条件的细胞增殖，并与媒介物对照进行比较。基于这些数据，使用排除标准计算每个药物组合的平均Loewe协同分数，该标准从计算中省略了那些在组合中产生<25％抑制作用的条件或任一相关单药浓度产生>90％抑制作用的条件。Loewe协同分数>5表示协同作用，分数<-5表示拮抗作用。

如图3所示，在化合物1和携带EGFR突变、ALK融合、HER2扩增和MET外显子14缺失的激酶抑制剂之间观察到显著的协同作用。具体来说，化合物1经常与奥希替尼(EGFR抑制剂)或dactolisib(PI3K/mTOR抑制剂)在EGFR突变的NSCLC中协同作用，甚至在MET扩增的情况下(NSCLC中对EGFR抑制剂抗性的常见机制)。在HER2扩增的NSLC细胞中，化合物1和拉帕替尼(HER2抑制剂)的协同作用程度最高，Loewe协同作用分数>10。在对拉帕替尼抑制抗性的HER2-突变的NSCLC细胞系(HI 781)中，化合物1与优立替尼(ERK抑制剂)具有协同作用。具有ALK重排的NSCLC细胞也表现出化合物1与艾乐替尼(ALK抑制剂)或克唑替尼(ALK/MET/RQS1抑制剂)之间的高度协同作用，这种协同作用甚至可见于RB1阴性细胞系(H2228)。在携带MET外显子14缺失的NSCLC细胞中，化合物1与克唑替尼(ALK/MET/ROS1抑制剂)和优立替尼(ERK抑制剂)有协同作用。上皮KRAS突变细胞系(H2122)产生了化合物1和dactolisib(PBK/mTOR抑制剂)组合的高度协同作用，Loewe协同作用分数为11.1。

实施例3.与化合物1的组合治疗增强抗增殖和凋亡信号传导途径

将A549(KRAS^G12S和CDKN2A空)NSCLC细胞用化合物1(0.5μM)、司美替尼(1μM)和/或优立替尼(1μM)处理48小时。另外，将H3122(EML4-ALK融合)NSCLC细胞用化合物1(0.5μM)和/或克唑替尼(1μM)处理48小时。将所有细胞用α-微管蛋白作为上样对照进行免疫印迹。如图4A和4B中的免疫印迹所示，当与任一单药治疗相比时，与化合物1的治疗组合的增强的功效可能是由于RB磷酸化的显著抑制以及促凋亡表型的增强。

实施例4.在KRAS^G12S NSCLC小鼠模型中，化合物1增强司美替尼和优立替尼治疗的功效

A549，一种KRAS^G12S人NSCLC移植瘤模型，在体内用化合物1和/或ERKi/MEKi治疗(Charles River Laboratories，esearch Triangle Park，NC)。给予小鼠每日一次剂量的媒介物、化合物1(100mg/kg)、司美替尼(50mg/kg)，或每日两次剂量的单独或组合的优立替尼(50mg/kg)，口服30天(n＝7至10)。如图5A、5B和5C所示，化合物1与司美替尼的组合以及与司美替尼和优立替尼二者的组合观察到肿瘤体积显著减小。

实施例5.在EML4-ALK NSCLC小鼠模型中，化合物1增强克唑替尼治疗的效果

在体内将H3122(一种EML4-ALK融合人NSCLC移植瘤模型)用化合物1和/或ALK治疗进行处理(MI Bioresearch，Ann Arbor，MI)。给予小鼠每天一次剂量的媒介物、化合物1(100mg/kg)，或单独或组合的克唑替尼(前12天为25mg/kg，然后为50mg/kg)，经口灌胃28天(n＝13)。如图6A所示，观察到化合物1与克唑替尼组合显著减少肿瘤体积。

每天一次经口服用化合物I(50mg/kg)、克唑替尼(20mg/kg)或组合来治疗带有EML4-ALK NSCLC PDX肿瘤的小鼠(Champions PDX模型CTG-0852)60天。作为单一药物，化合物I和克唑替尼在60天后分别提高TGI 87％和63％。如图6B中所示，用化合物I+克唑替尼的组合治疗导致抗肿瘤功效显著增强(60天后肿瘤从基线消退了50％)。在延长的给药期间(60天)内，组合治疗耐受性良好。

实施例6.在RET-重排的非小细胞肺癌细胞中化合物1增强RET抑制剂的功效

向表达致癌性CCDC6-RET融合的LC2/ad非小细胞肺癌细胞给药增加浓度的化合物1、选自普雷西替尼(BLU-667)或agerafenib(RXDX-105)的RET抑制剂，或RET抑制剂+300nM化合物1。六天后，通过CellTiter-Glo测量细胞增殖。如图7所示的普雷西替尼和图8所示的agerafenib，与单独的RET抑制剂相比，化合物1+RET抑制剂的组合显著增强了抗增殖作用。

实施例7.RET重排的非小细胞肺癌细胞中化合物1延迟了对RET抑制剂的抗性

将表达致癌性CCDC6-RET融合蛋白的LC2/ad非小细胞肺癌细胞以低密度接种在6孔板中，并用DMSO、300nM RET抑制剂普雷西替尼(比细胞增殖的IC₅₀高10倍以上)、300nM化合物1或普雷西替尼和化合物1的组合处理。每个条件在每个6孔板中重复三次。每七天刷新一次含抑制剂的培养基。14天后，DMSO板达到汇合，并且在那一天和此后每7天，收获6孔板，用结晶紫染色，并对细胞汇合成像(见图9和10)。然后将污渍溶解并通过在吸光度板读数器上测量562nm处的吸光强度来量化(见图11)。与单独的普雷西替尼相比，发现用化合物1和普雷西替尼的组合治疗显著延迟了抗性细胞集落的生长。

实施例8.化合物1向其HCl对应物化合物2的转化

方案1提供了化合物IA的代表性合成。

方案1

将化合物I(0.9kg，1.9mol，1eq)加入22L烧瓶中，并溶解在2M盐酸水溶液(3.78L)中。将该溶液加热至50±5℃，搅拌30分钟，并且将得到的混合物通过硅藻土过滤(或者，该溶液可以通过0.45微米的串联过滤器过滤)，以提供化合物IA。用0.1M盐酸溶液冲洗烧瓶，以收集任何另外的化合物IA。然后将化合物IA加热至50±5℃，同时缓慢加入丙酮(6.44L)。将溶液在50±5℃下搅拌30分钟，将温度降至20±5℃，并继续搅拌2小时。过滤收集固体，用丙酮洗涤，干燥，得到820.90g化合物IA(82.1％产率)。在一个实施方案中，使用乙醇代替丙酮。

实施例9.化合物1A的形态学形式

从使用各种溶剂的结晶和泥浆实验获得化合物IA的11种独特的XRPD图(形式A-形式K)。这些结晶实验的条件和XRPD结果在表1-4中给出。单溶剂结晶(表1)产生弱晶型或形式A。使用水(表2)和MeOH(表3)为主溶剂的二元溶剂结晶产生弱晶型和形式A、形式B、形式F、形式G和形式H。在通过XRPD分析一天和七天的平衡后(表4)从泥浆实验中回收的固体，以确定其晶型；七天后，观察到形式A、形式B、形式C、形式D和形式E。图12示出了形式A、形式B和形式C的XRPD图。图13示出了形式D、形式E和形式F的XRPD图。图14显示了形式G和形式H的XRPD模式。

表1.单溶剂结晶条件和结果

表2.以水为主溶剂的二元溶剂结晶

表3.使用MeOH作为主溶剂的二元溶剂结晶

表4.化合物2的泥浆实验

表5中给出了化合物IA的所有分离形式的表征数据的总结。将形式A、B和D作为固态形式评估。

表5.化合物IA的形态形式的表征数据

在一个实施方案中，形式A的特征在于在2θ为7.4±0.2°、9.0±0.2°或12.3±0.2°处的至少一个XRPD峰。在一个实施方案中，形式B的特征在于在2θ为6.4±0.2°或9.5±0.2°处的至少一个XRPD峰。在一个实施方案中，形式C的特征在于在2θ为5.3±0.2°或7.2±0.2°处的至少一个XRPD峰。在一个实施方案中，形式D的特征在于在2θ为5.6±0.2°或8.2±0.2°处的至少一个XRPD峰。在一个实施方案中，形式E的特征在于在2θ为5.5±0.2°或6.7±0.2°处的至少一个XRPD峰。在一个实施方案中，形式E的特征在于在2θ为5.5±0.2°或6.7±0.2°处的至少一个XRPD峰。在一个实施方案中，形式F的特征在于在2θ为7.2±0.2°处的XRPD峰。在一个实施方案中，形式G的特征在于在2θ为6.7±0.2°处的XRPD峰。在一个实施方案中，形式H的特征在于在2θ为6.6±0.2°处的XRPD峰。

实施例13.从化合物2产生形式B的重结晶程序

进行重结晶研究，以定义提高色谱纯度的程序。表6中的所有重结晶程序都涉及将化合物IA溶解于浓HCl中。然后加入反溶剂丙酮。过程的差异是微小的，但就其结果而言很重要。

重结晶过程1：将化合物I装入适当大小的烧瓶或反应器中，溶解于盐酸水溶液中，并加热到至少55±10℃。将该溶液搅拌约45分钟，并将所得混合物通过串联过滤器过滤。在一个小时的过程中，在55±10℃下加入丙酮，并将溶液再搅拌约一小时。将温度降低至约25±5℃，并将溶液搅拌至少2小时。通过过滤收集固体，用丙酮洗涤，干燥后得到化合物IA形式B。

重结晶过程2：将化合物I装入适当大小的烧瓶或反应器中，溶解于盐酸水溶液中，并加热到至少55±10℃。将该溶液搅拌约45分钟，并将所得混合物通过串联过滤器过滤。将温度降低至约25±5℃，并将溶液搅拌至少2小时。在一个小时的过程中，在25±5℃下加入丙酮，并将溶液搅拌另外两个小时。通过过滤收集固体，用丙酮洗涤，干燥后得到化合物IA形式D。

重结晶过程3：将化合物I装入适当大小的烧瓶或反应器中，溶解于盐酸水溶液中，并加热到至少55±10℃。将该溶液搅拌约45分钟，并将所得混合物通过串联过滤器过滤。将温度降低至约25±5℃，并将溶液搅拌至少2小时。通过过滤收集固体，用丙酮洗涤，干燥，得到化合物IA形式D。

表6.结晶程序对从化合物1吹扫色谱杂质的影响

		重结晶过程1	重结晶过程2	重结晶过程3
					RRT	％面积	％面积	％面积	％面积
1.11	1.13	1.11	0.87	0.27
					1.37	0.14	0.15	0.13	ND
1.62	0.14	ND	0.13	ND

在进行表6所示的实验时，发现并非所有的重结晶过程都产生优选的固态形式，形式B。具体而言，重结晶过程2和3导致不同的固态形式(假定的形式D)，而重结晶1再现地提供形式B。在一些实施方案中，化合物IA通过重结晶过程2和3转化为形式D，形式D通过重结晶过程1转化为形式B。

实施例14.化合物IA，形态学形式B的XRPD分析

用PANaiytical X′Pert PRO MPD衍射仪，使用Optix长细聚焦源产生的Cu辐射的入射束，收集形式B的XRPD图。使用椭圆渐变的多层反射镜将Cu Kα X射线聚焦通过样本并到达检测器。在分析之前，对硅样品(NIST SRM 640e)进行分析，以验证观察到的Si 111峰的位置与NIST认证的位置一致。将样品夹在3μm厚的薄膜之间，并进行透射几何学分析。使用了束流挡块、短的防散射扩展区和防散射刀刃，以最大程度地减少空气产生的背景。入射光束和衍射光束的Soller狭缝用于最大程度地减小轴向发散引起的展宽。使用距样品240mm的扫描位置敏感检测器(X′Celerator)和Data Collector软件v.2.2b收集衍射图。每个图的数据采集参数显示在该报告的数据部分的图像上方，包括反射镜前的发散狭缝(DS)。

纯形式B与标引溶液的XRPD图显示在图15中。纯形式B的XRPD图显示出尖锐的峰，表明样品由晶体材料组成。XRPD索引溶液的允许的峰位置为°2θ6.5、8.1、9.4、9.6、10.2、10.6、11.2、12.2、12.9、13.0、13.3、13.4、14.0、14.4、14.6、15.0、15.9、16.2、16.4、16.5、16.8、18.1、18.4、18.5、18.6、18.6、18.9、19.1、19.2、19.3、194、19.5、19.6、19.7、19.8、19.9、20.4、20.6、21.3、21.4、21.8、22.0、22.2、22.3、22.4、22.5、22.8、23.0、23.1、23.4、23.8、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、25.4、25.6、25.7、25.9、26.0、26.1、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.2、27.3、27.5、27.6、27.7、27.9、28.3、28.4、28.5、28.7、28.9、29.0、29.1、29.3、29.4、29.5、29.6、29.7、29.8、29.9、30.0、30.3、30.4、30.5、30.6、30.7、30.9、31.2、315、31.6、31.7、31.8、31.9、32.0、32.2、32.3、32.4、32.5、32.6、32.7、32.8、33.1、33.2、33.3、33.6、33.7、33.8、34.0、34.1、34.2、34.3、34.6、34.7、34.8、35.0、35.2、35.3、35.5、35.6、35.9、36.0、36.2、36.5、36.6、36.7、36.8、36.9、37.1、37.2、37.3、37.4、37.5、37.6、37.7、37.8、37.9、38.2、38.3、38.4、38.5、38.6、38.7、38.8、38.9、39.0、39.1、39.2、39.3、39.4、39.5、39.6、39.7、39.8、39.9和40.0。

例如，形式B的XRPD可以按以下索引：°2θ6.47、80.8、9.42、9.59、10.18、10.62、11.22、12.17、12.91、12.97、13.27、13.37、14.03、14.37、14.63、15.02、15.93、16.20、16.35、16.43、16.47、16.81、18.10、18.35、18.41、18.50、18.55、18.60、18.91、19.11、19.15、19.24、19.34、19.43、19.51、19.61、19.65、19.76、19.85、19.90、20.44、20.61、21.34、21.43、21.84、21.95、22.17、22.28、22.30、22.33、22.44、22.54、22.76、22.81、22.97、23.00、23.11、23.42、23.80、24.11、24.22、24.34、24.38、24.40、24.48、24.56、24.57、25.40、25.56、25.57、25.59、25.72、25.74、25.94、25.99、26.11、26.28、26.29、26.37、26.51、26.58、26.61、26.73、26.81、26.92、27.15、27.19、27.23、27.31、27.49、27.57、27.61、27.71、27.88、27.94、28.27、28.41、28.53、28.71、28.74、28.86、28.94、28.98、29.03、29.06、29.08、29.25、29.30、29.38、29.51、29.57、29.61、29.70、29.73、29.75、29.90、29.95、30.31、30.38、30.42、30.54、30.55、30.66、3073、30.85、30.87、30.89、31.23、31.51、31.55、31.61、31.70、31.76、31.77、31.80、31.81、31.82、31.82、31.90、31.91、31.95、32.17、32.21、32.23、32.25、32.36、32.37、32.43、32.53、32.54、32.56、32.61、32.73、32.80、32.82、33.05、33.13、33.17、33.22、33.28、33.30、33.60、33.65、33.71、33.76、33.77、33.99、34.01、34.01、34.05、34.10、34.17、34.29、34.55、34.60、34.62、34.63、34.68、34.75、34.76、35.03、35.16、35.19、35.21、35.25、35.31、35.46、35.61、35.63、35.85、35.86、35.90、35.97、36.19、36.45、36.56、36.58、36.67、36.68、36.70、36.71、36.77、36.85、36.87、36.90、37.09、37.19、37.27、37.28、37.29、37.32、37.33、37.37、37.38、37.48、37.48、37.50、37.51、37.54、37.61、37.64、37.65、37.68、37.69、37.71、37.74、37.74、37.76、37.81、37.83、37.93、37.94、38.15、38.19、38.32、38.36、38.39、38.46、38.59、38.63、38.69、38.76、38.79、38.85、38.87、38.88、38.96、38.98、39.02、39.05、39.19、39.27、39.33、39.36、39.39、39.43、39.44、39.53、39.53、39.6、39.61、39.70、39.71、39.72、39.82、39.87、39.9和39.98。

形式B的观察到的峰包括°2θ为9.5±0.2、18.1±0.2、19.3±0.2、22.4±0.2、26.6±0.2和27.7±02。

以条形标记的允许峰位置与观察到的峰之间的一致性表明单位晶格测定一致。图的成功标引表明样品主要由单晶相组成。表7给出了与分配的消光符号、单位晶胞参数和导出数量一致的空间群。

表7.化合物IA形式B的XRPD参数

在一些实施方案中，形式B的特征在于包括选自6.5±0.2°、9.5±0.2°、14.0±0.2°、14.4±0.2°、18.1±0.2°、19.9±0.2°和22.4±0.2°的至少两个2θ值的XRPD图。在一些实施方案中，形式B的特征在于包括选自6.5±0.2°、9.5±0.2°、14.0±0.2°、14.4±0.2°、18.1±0.2°、19.9±0.2°和22.4±0.2°的至少三个2θ值的XRPD图。在一些实施方案中，形式B的特征在于包括选自6.5±0.2°、9.5±0.2°、14.0±0.2°、14.4±0.2°、18.1±0.2°、19.9±0.2°和22.4±0.2°的至少四个2θ值的XRPD图。在一些实施方案中，形式B的特征在于包括选自6.5±0.2°、9.5±0.2°、14.0±0.2°、14.4±0.2°、18.1±0.2°、19.9±0.2°和22.4±0.2°的至少五个2θ值的XRPD图。在一些实施方案中，形式B的特征在于包括选自6.5±0.2°、9.5±0.2°、14.0±0.2°、14.4±0.2°、18.1±0.2°、19.9±0.2°和22.4±0.2°的至少六个2θ值的XRPD图。在一些实施方案中，形式B的特征在于包括选自6.5±0.2°、9.5±0.2°、14.0±0.2°、14.4±0.2°、18.1±0.2°、19.9±0.2°和22.4±0.2°的2θ值的XRPD图。在一些实施方案中，形式B的特征在于包括至少2θ值为9.5±0.4°的XRPD图。

已经参考本发明的实施方案描述了本说明书。然而，本领域的普通技术人员将理解，在不脱离如所附权利要求所阐述的本发明的范围的情况下，可以进行各种修改和改变。因此，本说明书应被视为说明性的而非限制性的意义，并且所有这样的修改意在包括在本发明的范围内。

Claims (45)

1.一种治疗患有CDK4/6复制非依赖性非小细胞肺癌(NSCLC)的受试者的方法，包括向所述受试者组合施用选自下组的CDK4/6抑制剂：

或其药学上可接受的盐与选自BRAF抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂、PI3K抑制剂、EGFR抑制剂、ALK抑制剂和RET抑制剂的肿瘤激酶抑制剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤激酶抑制剂是BRAF抑制剂。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述BRAF抑制剂是达拉非尼。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤激酶抑制剂是MEK抑制剂。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述MEK抑制剂是司美替尼。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤激酶抑制剂是ERK抑制剂。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述ERK抑制剂是优立替尼。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤激酶抑制剂是PI3K抑制剂。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述PI3K抑制剂是dactolisib。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤激酶抑制剂是EGFR抑制剂。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述EGFR抑制剂是奥希替尼。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述EGFR抑制剂是拉帕替尼。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤激酶抑制剂是ALK抑制剂。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述ALK抑制剂是克唑替尼。

15.根据权利要求13所述的方法，其中所述ALK抑制剂是艾乐替尼。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤激酶抑制剂是RET抑制剂。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述RET抑制剂是普雷西替尼。

18.根据权利要求16所述的方法，其中所述RET抑制剂是agerafenib。

19.一种治疗患有具有EML4-ALK重排的CDK4/6复制非依赖性非小细胞肺癌(NSCLC)的受试者的方法，包括向所述受试者组合施用选自下组的CDK4/6抑制剂：

或其可药用盐与ALK抑制剂或ERK抑制剂。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述ALK抑制剂是克唑替尼。

21.根据权利要求19所述的方法，其中所述ALK抑制剂是艾乐替尼。

22.根据权利要求19所述的方法，其中所述ERK抑制剂是优立替尼。

23.一种治疗患有具有MET外显子14缺失的CDK4/6复制非依赖性非小细胞肺癌(NSCLC)的受试者的方法，包括向所述受试者组合施用选自下组的CDK4/6抑制剂：

或其药学上可接受的盐与ALK抑制剂或ERK抑制剂。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述ALK抑制剂是克唑替尼。

25.根据权利要求23所述的方法，其中所述ALK抑制剂是艾乐替尼。

26.根据权利要求23所述的方法，其中所述ERK抑制剂是优立替尼。

27.一种治疗患有具有CCDC6-RET融合的非小细胞肺癌(NSCLC)的受试者的方法，包括向所述受试者组合施用选自下组的CDK4/6抑制剂：

或其药学上可接受的盐与ALK抑制剂。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述ALK抑制剂是克唑替尼。

29.根据权利要求27所述的方法，其中所述ALK抑制剂是艾乐替尼。

30.一种治疗患有具有SLC34A2-ROS1融合的非小细胞肺癌(NSCLC)的受试者的方法，包括向所述受试者组合施用选自下组的CDK4/6抑制剂：

或其药学上可接受的盐与ALK抑制剂。

31.根据权利要求30所述的方法，其中所述ALK抑制剂是克唑替尼。

32.根据权利要求30所述的方法，其中所述ALK抑制剂是艾乐替尼。

33.一种治疗患有具有MET扩增的非小细胞肺癌(NSCLC)的受试者的方法，包括向所述受试者组合施用选自下组的CDK4/6抑制剂：

或其药学上可接受的盐与ALK抑制剂。

34.根据权利要求33所述的方法，其中所述ALK抑制剂是克唑替尼。

35.一种治疗患有具有NRAS Q61K置换的非小细胞肺癌(NSCLC)的受试者的方法，包括向所述受试者组合施用选自下组的CDK4/6抑制剂：

或其药学上可接受的盐与MEK抑制剂或PI3K抑制剂。

36.根据权利要求35所述的方法，其中所述MEK抑制剂是司美替尼。

37.根据权利要求35所述的方法，其中所述PI3K抑制剂是dactolisib。

38.一种治疗患有具有CCDC6-RET融合的非小细胞肺癌(NSCLC)的受试者的方法，包括向所述受试者组合施用选自下组的CDK4/6抑制剂：

或其药学上可接受的盐与RET抑制剂。

39.根据权利要求38所述的方法，其中所述RET抑制剂是普雷西替尼。

40.根据权利要求38所述的方法，其中所述RET抑制剂是agerafenib。

41.一种治疗患有具有KRAS G12S置换的非小细胞肺癌(NSCLC)的受试者的方法，包括向所述受试者组合施用选自以下的CDK4/6抑制剂：

或其药学上可接受的盐与司美替尼和优立替尼。

42.根据权利要求1-41中任一项所述的方法，其中所述CDK4/6抑制剂是化合物I或其药学上可接受的盐。

43.根据权利要求1-42中任一项所述的方法，其中所述CDK4/6抑制剂是

44.根据权利要求1-43中任一项所述的方法，其中所述CDK4/6抑制剂是化合物IA形式B。

45.根据权利要求1-44中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。

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