ES2812674T3

ES2812674T3 - Levadura para preparar bebidas alcohólicas

Info

Publication number: ES2812674T3
Application number: ES15823588T
Authority: ES
Inventors: Natalia Y Solodovnikova; Jeppe Frank Andersen; Sanchez Rosa Garcia; Zoran Gojkovic
Original assignee: Carlsberg Breweries AS
Current assignee: Carlsberg Breweries AS
Priority date: 2014-12-23
Filing date: 2015-12-22
Publication date: 2021-03-17
Anticipated expiration: 2035-12-22
Also published as: US20180163168A1; EP3237601B1; CN108064270B; AU2015371749B2; EA201791318A1; PT3237601T; JP2018500034A; RS60649B1; EP3237601A2; LT3237601T; JP6967968B2; AU2015371749A1; EA037550B1; WO2016101960A3; CN108064270A; DK3237601T3; US11034931B2; WO2016101960A2; PL3237601T3

Abstract

Una célula de levadura que tiene las características y los genotipos siguientes: característica II: capaz de utilizar panosa como única fuente de carbono; y genotipo IV: que comprende al menos 3 genes que codifican IMA1p, donde IMA1p se selecciona del grupo que consiste en IMA1p de SEQ ID NO: 12, IMA1p de SEQ ID NO: 13, IMA1p de SEQ ID NO: 14, IMA1p de SEQ ID NO: 15, IMA1p de SEQ ID NO: 21, IMA1p de SEQ ID NO: 22, IMA1p de SEQ ID NO: 23, IMA1p de SEQ ID NO: 24, IMA1p de SEQ ID NO: 25 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 % de identidad de secuencia con las mismas; y genotipo VI: que comprende al menos 2 genes que codifican AGT1 seleccionada del grupo que consiste en AGT1 de SEQ ID NO: 18, AGT1 de SEQ ID NO: 19, AGT1 de SEQ ID NO: 20, AGT1 de SEQ ID NO: 27, AGT1 de SEQ ID NO: 28, AGT1 de SEQ ID NO: 30, AGT1 de SEQ ID NO: 31, AGT1 de SEQ ID NO: 32 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 % de identidad de secuencia con las mismas; y característica VIII: capaz de utilizar melibiosa como única fuente de carbono.

Description

DESCRIPCIÓN

Levadura para preparar bebidas alcohólicas

Antecedentes de la invención

Las bebidas alcohólicas se preparan frecuentemente mediante fermentación de un líquido rico en carbohidratos con levadura. Por ejemplo, la cerveza se prepara fermentando mosto con levadura. El mosto contiene varios compuestos que pueden ser utilizados por la levadura. Por ejemplo, el mosto es rico en azúcares, en particular maltosa, así como en aminoácidos y péptidos pequeños. La levadura convencional puede utilizar maltosa y, por tanto, la levadura convencional puede fermentar maltosa para producir etanol. Sin embargo, el mosto también contiene otros carbohidratos además de la maltosa, algunos de los cuales no pueden ser utilizados por la levadura convencional, y en particular no por la levadura Lager.

La levadura Lager, en general, difiere de la levadura Ale de varias formas. La levadura Lager pertenece a la especie S. pastorianus. Frecuentemente, la levadura Lager también se denomina “levadura de fermentación inferior” porque sedimenta en el fondo durante la fermentación. Asimismo, las cepas de levadura Lager se usan mejor a temperaturas que oscilan entre 7 y 15 °C. Además, la levadura Lager es capaz de usar melibiosa como única fuente de carbono y no puede crecer a 37 °C.

Por el contrario, la levadura Ale pertenece a la especie S. cerevisiae. Frecuentemente, la levadura Ale también se denomina “levadura de fermentación superior” porque con frecuencia asciende a la superficie durante la fermentación. Asimismo, las cepas de levadura Ale se usan mejor a temperaturas que oscilan entre 10 y 25 °C, aunque algunas cepas no fermentarán activamente por debajo de 12 °C. Además, la levadura Ale no es capaz de usar melibiosa como única fuente de carbono y puede crecer a 37 °C.

También se puede emplear otra levadura en la fabricación de cerveza, p. ej., Saccharomyces diastaticus. Saccharomyces diastaticus pertenece a la variedad de especie Saccharomyces cerevisiae (var.) diastaticus y tiene la particularidad de tener actividad enzimática de glucoamilasa codificada por al menos uno de los genes siguientes STA1, STA2 o STA3, lo que permite a la levadura utilizar almidón como única fuente de carbono. Los genes STA están en general ausentes en S. cerevisiae o S. pastorianus u otras cepas de especies de Saccharomyces analizadas, pero están presentes en el subgrupo de S. cerevisiae var. diastaticus.

Deng y col., 2014, FEBS Open Bio 4, 200-212 describen similitudes y diferencias en las propiedades bioquímicas y enzimáticas de cuatro isomaltasas de Saccharomyces cerevisiae. Más específicamente, Deng y col. estudian su diversidad funcional, con una caracterización exhaustiva in vitro de sus propiedades enzimáticas y bioquímicas.

Sánchez y col., 2012, Yeast, 29:343-355 describen que el fitomejoramiento de levadura Lager con Saccharomyces cerevisiae mejora la resistencia al estrés y el rendimiento de la fermentación.

Resumen

Hay una necesidad de cepas de levadura mejoradas, que tengan características tanto de levadura Lager (p. ej., S. pastorianus) como de levadura Ale (p. ej., S. cerevisiae). Además, hay una necesidad de cepas de levadura que puedan utilizar tantas fuentes de energía diferentes como sea posible. En particular, hay una necesidad de levaduras que puedan utilizar azúcares presentes en el mosto que no sean la maltosa y de levadura que pueda utilizar aminoácidos y péptidos en un grado alto.

Interesantemente, la invención proporciona una levadura híbrida, que tiene varias características importantes de la levadura Lager, pero que al mismo tiempo puede utilizar muchas fuentes de energía diferentes presentes en el mosto.

Por consiguiente, un aspecto de la invención es proporcionar una célula de levadura que tiene las características y los genotipos siguientes:

característica II: capaz de utilizar panosa como única fuente de carbono; y

genotipo IV: que comprende al menos 3 genes que codifican IMA1p, donde IMA1p se selecciona del grupo que consiste en IMA1p de SEQ ID NO: 12, IMA1p de SEQ ID NO: 13, IMA1p de SEQ ID NO: 14, IMA1p de SEQ ID NO: 15, IMA1p de SEQ ID NO: 21, IMA1p de SEQ ID NO: 22, IMA1p de SEQ ID nO: 23, IMA1p de SEQ ID NO: 24, IMA1p de SEQ ID NO: 25 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas; y

genotipo VI: que comprende al menos 2 genes que codifican AGT1 seleccionada del grupo que consiste en AGT1 de SEQ ID NO: 18, AGT1 de SEQ ID NO: 19, AGT1 de SEQ ID NO: 20, AGT1 de SEQ ID NO: 27, AGT1 de SEQ ID NO: 28, AGT1 de SEQ ID NO: 30, AGT1 de SEQ ID NO: 31, AGT 1 de SEQ ID NO: 32 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas; y

característica VIII: capaz de utilizar melibiosa como única fuente de carbono.

Además de la característica II antes mencionada, la célula de levadura según la invención puede tener características adicionales, por ejemplo, una o más de las características siguientes:

I. capaz de utilizar isomaltosa como única fuente de carbono;

III. capaz de utilizar uno o más dipéptidos como única fuente de nitrógeno;

IV. capaz de utilizar uno o más tripéptidos como única fuente de nitrógeno;

V. capaz de reducir el nivel de uno o más aminoácidos a un máximo de 10 % de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura; VI. capaz de generar al menos 4,7 por mil de etanol por °Plato cuando dicha célula de levadura se añade a una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato y se incuba hasta que el nivel de diacetilo se encuentra dentro de las especificaciones; y/o

VII. capaz de fermentar azúcar con un grado real de fermentación de al menos 70 cuando dicha célula de levadura se añade a una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato y se incuba hasta que el nivel de diacetilo se encuentra dentro de las especificaciones.

También se describe una célula de levadura que tiene al menos una de las características siguientes:

II. capaz de utilizar panosa como única fuente de carbono;

III. capaz de utilizar uno o más dipéptidos como única fuente de nitrógeno.

También es un aspecto de la invención proporcionar una célula de levadura que tiene la característica:

II. capaz de utilizar panosa como única fuente de carbono.

I. capaz de utilizar isomaltosa como única fuente de carbono;

IV. capaz de utilizar uno o más tripéptidos como única fuente de nitrógeno;

También es un aspecto de la invención proporcionar procedimientos para producir una bebida, comprendiendo dichos procedimientos las etapas de

I. proporcionar un líquido de partida

II. proporcionar una célula de levadura según la invención

III. fermentar dicho líquido de partida con dicha célula de levadura.

Descripción de los dibujos

La figura 1 muestra el crecimiento de diversas cepas de levadura en medio definido con 2 g/L de panosa como única fuente de carbono. Los datos mostrados son representativos de réplicas biológicas. El panel A) muestra el crecimiento de levadura Ale 1, levadura híbrida 1, levadura híbrida 4 y levadura Lager 1. El panel B) muestra el crecimiento de levadura Ale 1, levadura híbrida 7 y levadura Lager 2. El panel C) muestra el crecimiento de S. diastaticus y levadura híbrida 8.

La figura 2 muestra el crecimiento de levadura en medio definido con 2 g/L de isomaltosa como única fuente de carbono. Los datos mostrados son representativos de réplicas biológicas. El panel A) muestra el crecimiento de levadura Ale 1, levadura híbrida 1, levadura híbrida 4 y levadura Lager 2. El panel B) muestra el crecimiento de levadura Ale 1, levadura híbrida 7 y levadura Lager 1. El panel C) muestra el crecimiento de S. diastaticus y levadura híbrida 8.

La figura 3 muestra el crecimiento de células de levadura en medio definido de Bioscreen C MBR con 2 g/L de melibiosa como única fuente de carbono. El panel A muestra el crecimiento de levadura híbrida 1 y levadura híbrida 4. El panel B muestra el crecimiento de levadura híbrida 7.

La figura 4 muestra un análisis de RMN de los azúcares individuales en la fabricación final de cerveza embotellada en comparación con cerveza fabricada con levadura Lager 1 y levadura híbrida 1.

La figura 5 muestra una alineación de proteínas de DAL5 de levadura Ale 1, levadura Lager 1 y levadura híbrida 1. La secuencia de DAL5 de levadura híbrida 1 se simboliza Sc_DAL5_Hybrid_1 (SEQ ID NO: 6).

La figura 6 muestra una alineación de proteínas de UBR1 codificada por alelos Sc de UBR1 que ilustra la presencia de un alelo Sc de levadura Lager 1 en la levadura híbrida 1, mientras que en la levadura Ale 1 está truncado. Solo se muestra parte de la alineación; los residuos en sombreados en negro difieren de la secuencia de la levadura híbrida 1.

La figura 7 muestra una alineación de proteínas de UBR1 codificada por alelos no Sc de UBR1 que ilustra la presencia de un alelo Sc de levadura Lager 1 en la levadura híbrida 1.

La figura 8 muestra una alineación de proteínas de IMA1p codificada por alelos cortos de IMA1. Las IMA1p codificadas por los alelos cortos de IMA1 encontrados en la levadura híbrida 1 se simbolizan IMA1_Sc_allele_short_A_Hybrid_1 y IMA1_Sc_allele_short_B_Hybrid_1, respectivamente.

La figura 9 muestra una alineación de proteínas de IMA1p codificada por alelos largos de IMA1. La figura 9A muestra una alineación de IMA1p codificada por alelos largos de levadura Ale 1, levadura Lager 1 y levadura híbrida 1. Las IMA1p codificadas por los alelos largos de IMA1 encontrados en la levadura híbrida 1 se simbolizan LONG_IMA1_A_Hyb1_pl17 y LONG_IMA1_B_Hyb1_pl18, respectivamente. La figura 9B muestra una alineación de IMA1p codificada por alelos largos de levadura Ale 1, levadura Lager 2, levadura híbrida 4 y levadura híbrida 7. La figura 10 muestra una alineación de proteínas de IMA5p codificada por genes de tipo IMA5. Las IMA5p codificadas por los genes de tipo IMA5 encontrados en la levadura híbrida 1 se simbolizan ScIMA5_Hybrid1_pl1 y non-ScIMA5_Hybrid1, respectivamente.

La figura 11 muestra una alineación de proteínas de AGT1 codificada por alelos Sc de AGT1. La figura 11A muestra una alineación de AGT1 codificada por alelos Sc de AGT1 de levadura Lager 1, levadura Ale 1 y levadura híbrida 1. Las AGT1 codificadas por los AGT1 encontrados en la levadura híbrida 1 se simbolizan Sc_AGT1_Hybrid1_pl37, Sc_AGT1_Hybrid1_pI38 y Sc_AGT1_Hybrid1_pI39, respectivamente. La figura 11B muestra una alineación de AGT1 codificada por alelos Sc de AGT1 de levadura Lager 2, levadura Ale 1, levadura híbrida 4 y levadura híbrida 7. La figura 12 muestra una alineación de proteínas de AGT1 codificada por alelos no Sc de AGT1. La figura 12A muestra una alineación de AGT1 codificada por alelos no Sc de AGT1 de levadura Lager 1 y levadura híbrida 1. La AGT1 codificada por el AGT1 encontrado en la levadura híbrida 1 se simboliza Non-Sc_AGT1_Hybrid1. La figura 12A muestra una alineación de AGT1 codificada por alelos no Sc de AGT1 de levadura Lager 1, levadura Lager 2, levadura híbrida 1, levadura híbrida 4 y levadura híbrida 7.

La figura 13 muestra el crecimiento de levadura en medio definido con 2 g/L de maltotriosa como única fuente de carbono. Los datos mostrados son representativos de réplicas biológicas.

La figura 14 muestra el crecimiento de levadura en medio definido con 2 g/L de maltulosa como única fuente de carbono. Los datos mostrados son representativos de réplicas biológicas.

La figura 15 muestra el crecimiento de levadura en medio definido con 2 g/L de coibiosa como única fuente de carbono. Los datos mostrados son representativos de réplicas biológicas.

La figura 16 muestra el extracto aparente en función del tiempo durante la fermentación de mosto con levadura Lager 2, levadura híbrida 4 y levadura híbrida 7.

Descripción detallada

Definiciones

Como se emplea en esta invención, “un/a” puede significar uno/a o más de uno/a en función del contexto en el que se usa.

El término “EA”, como se emplea en esta invención, es una abreviatura de “extracto aparente”. El “extracto aparente” es una medida de la densidad del mosto de cerveza en términos del porcentaje de extracto en peso y se expresa en la escala Plato. Es la densidad final o densidad relativa medida al final de la fermentación de la cerveza. La densidad en el contexto de las bebidas alcohólicas se refiere a la densidad relativa del líquido en comparación con el agua. Cuantos más azúcares haya disueltos en el mosto, más alta será la densidad del mosto.

Los aminoácidos se pueden nombrar en esta invención usando los códigos de una letra y tres letras de la IUPAC. El término “cerveza”, como se emplea en esta invención, se refiere a una bebida preparada mediante fermentación de mosto. preferiblemente, dicha fermentación es realizada por una levadura.

El término “fuente de carbono”, como se emplea en esta invención, se refiere a cualquier molécula orgánica que puede proporcionar energía a la levadura y proporcionar carbono para la biosíntesis celular. En particular, dicha fuente de carbono pueden ser carbohidratos, y más preferiblemente, la fuente de carbono pueden ser mono- y/o disacáridos. El término “células en suspensión” se emplea en esta invención en relación con la incubación de células en un medio líquido en un recipiente. Las “células en suspensión” son células que no han sedimentado en el fondo del recipiente después de la incubación, sino que flotan libremente en el medio líquido. Las células en suspensión se pueden determinar tomando una muestra del medio líquido de la parte superior del recipiente y contando las células en la misma.

La expresión “el diacetilo se encuentra dentro de las especificaciones” se refiere al nivel de diacetilo que está por debajo de un umbral predefinido, que se fija a un nivel por debajo del umbral considerado como sabor desagradable en la cerveza Lager. preferiblemente, se considera que el diacetilo se encuentra dentro de las especificaciones cuando el nivel de diacetilo es como máximo 30 ppb.

Por “que codifica” o “codificada”, en el contexto de un ácido nucleico especificado, se entiende que comprende la información para la traducción a la proteína especificada. Un ácido nucleico o polinucleótido que codifica una proteína puede comprender secuencias no traducidas, p. ej., intrones, dentro de regiones traducidas del ácido nucleico, o puede carecer de tales secuencias intermedias no traducidas, p. ej., en el ADNc. La información mediante la cual se codifica una proteína se especifica mediante el uso de codones.

Como se emplea en esta invención, “expresión”, en el contexto de los ácidos nucleicos, se debe entender como la transcripción y acumulación de ARNm codificante o ARN no codificante procedente de un fragmento de ácido nucleico. La “expresión” usada en el contexto de las proteínas se refiere a la traducción de ARNm en un polipéptido.

El término “gen” significa el segmento de ADN implicado en la producción de una cadena polipeptídica; incluye regiones que preceden y siguen a la región codificante (promotor y terminador). Asimismo, algunos genes de levadura también comprenden intrones, aunque solo 5 % de los genes en el genoma de S. cerevisiae comprenden intrones. Después de la transcripción a ARN, los intrones se retiran mediante corte y empalme para generar un ARN mensajero maduro (ARNm).

El término “crecimiento”, como se emplea en esta invención, en relación con la levadura, se refiere al procedimiento mediante el cual se multiplican las células de una levadura. Por tanto, cuando las células de levadura crecen, aumenta el número de células de levadura. El número de células de levadura se puede determinar mediante cualquier procedimiento útil, p. ej., determinando la DO (620 nm). El aumento de la DO (620 nm) corresponde a un aumento en el número de células de levadura. Las condiciones que permiten el crecimiento de la levadura son condiciones que permiten que aumente el número de células de levadura. Tales condiciones, en general, requieren la presencia de nutrientes adecuados, p. ej., una fuente de carbono y una fuente de nitrógeno, así como una temperatura adecuada, que habitualmente está en el intervalo de 5 a 40 °C.

El término “fuente de nitrógeno”, como se emplea en esta invención, se refiere a cualquier molécula que contiene nitrógeno orgánico y/o a moléculas que contienen amonio. En particular, dicha fuente de nitrógeno puede ser una fuente de nitrógeno orgánico, por ejemplo péptidos, aminoácidos y/u otras aminas. La fuente de nitrógeno también puede ser amonio. Por tanto, N²no se considera una “fuente de nitrógeno” en esta invención.

El término “malta” se refiere a granos de cereal que han sido malteados. El malteado es una forma especial de germinación de los granos de cereal (p. ej., granos de cebada) que tiene lugar en condiciones ambientales controladas, que incluyen, pero no se limitan a, tanques de remojo y cajones de germinación de la fábrica de malteado. En general, el malteado implica el remojo de dichos granos, seguido de germinación. El procedimiento de malteado se puede detener secando los granos de cereal (p. ej., granos de cebada), por ejemplo, en un procedimiento de secado en horno, que normalmente se realiza a temperaturas elevadas. La malta se puede procesar, por ejemplo, mediante molienda y, por tanto, se denomina “malta molida” o “harina de malta”.

La “maceración” es la incubación de malta molida en agua. La maceración se realiza preferiblemente a una temperatura específica y en un volumen específico de agua. La temperatura y el volumen de agua son importantes, ya que afectan a la velocidad de reducción de la actividad enzimática procedente de la malta y, por tanto, especialmente a la cantidad de hidrólisis del almidón que se puede producir; la acción de las proteasas también puede ser importante. La maceración se puede producir en presencia de adjuntos, que se entiende que comprenden cualquier fuente de carbohidratos distinta de la malta, tal como, pero no limitada a, cebada, almíbares de cebada, o maíz, o arroz, indistintamente como granos enteros o como productos procesados como sémola, almíbares o almidón. Todos los adjuntos antes mencionados se pueden usar principalmente como una fuente adicional de extracto (los almíbares se dosifican habitualmente durante el calentamiento del mosto). Los requisitos para procesar el adjunto en la fábrica de cerveza dependen del estado y tipo de adjunto usado, y en particular de las temperaturas de gelatinización o licuefacción del almidón. Si la temperatura de gelatinización es superior a la normal para la sacarificación de la malta, entonces el almidón se gelatiniza y licúa antes de la adición a la masa de malta.

El término “°Plato”, como emplea en esta invención, se refiere a la densidad como se mide en la escala Plato. La escala Plato es una escala de hidrómetro obtenida empíricamente para medir la densidad de la cerveza o el mosto en términos de porcentaje de extracto en peso. La escala expresa la densidad como el porcentaje de azúcar en peso. Por el término “mosto” se entiende un extracto líquido de malta, tal como malta molida, malta verde, o malta verde molida. En la fabricación de cerveza con cebada, el mosto también se puede preparar incubando un extracto de cebada sin maltear con una mezcla de enzimas que hidroliza los componentes de la cebada. Además de dichos extractos procedentes de la malta o la cebada, el extracto líquido se puede preparar a partir de malta y componentes adicionales (p. ej., adjuntos), tales como material adicional que contiene almidón convertido parcialmente en azúcares fermentables. El mosto se obtiene, en general, mediante maceración, opcionalmente seguida de “lavado de bagazo”, en un procedimiento de extracción de azúcares residuales y otros compuestos a partir del bagazo después de macerar con agua caliente. El lavado de bagazo se lleva a cabo habitualmente en una cuba de filtración, un filtro de mosto u otro aparato para permitir la separación del agua extraída del bagazo. El mosto obtenido después de la maceración se denomina generalmente “primer mosto”, mientras que el mosto obtenido después del lavado de bagazo se denomina generalmente “segundo mosto”. Si no se especifica, el término mosto puede ser primer mosto, segundo mosto o una combinación de ambos. Durante la producción convencional de cerveza, el mosto se hierve junto con el lúpulo, sin embargo, en esta invención se describen procedimientos para reducir la ebullición o evitar la ebullición del mosto. El mosto sin lúpulo también se puede denominar “mosto dulce”, mientras que el mosto hervido/calentado con lúpulo se puede denominar “mosto hervido”.

La expresión “célula de levadura capaz de utilizar XX”, como se emplea en esta invención, se refiere a una célula de levadura que puede absorber y degradar XX.

La expresión “célula de levadura capaz de utilizar XX como única fuente de carbono”, como se emplea en esta invención, se refiere a una célula de levadura que puede crecer en un medio que contiene XX como única fuente de carbono. Por tanto, dicho medio preferiblemente no contiene ningún otro carbohidrato aparte de XX.

Célula de levadura

La presente invención se refiere a una célula de levadura que tiene las características II y VIII descritas más adelante en esta invención.

En particular, se prefiere que dicha célula de levadura tenga al menos las características I y II descritas más adelante en esta invención.

También se prefiere que dicha célula de levadura tenga al menos la característica II descrita más adelante. También se prefiere que la célula de levadura tenga al menos las características II y III descritas más adelante.

La característica I puede ser cualquiera de las características I descritas más adelante en la sección “Característica I” de esta invención. En particular, la característica I puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar isomaltosa como única fuente de carbono.

La característica II puede ser cualquiera de las características V descritas más adelante en la sección “Característica II” de esta invención. En particular, la característica II puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar panosa como única fuente de carbono.

La característica III puede ser cualquiera de las características III descritas más adelante en la sección “Característica III” de esta invención. En particular, la característica III puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar dipéptidos como única fuente de nitrógeno.

La característica IV puede ser cualquiera de las características IV descritas más adelante en la sección “Característica IV” de esta invención. En particular, la característica IV puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar tripéptidos como única fuente de nitrógeno.

La característica V puede ser cualquiera de las características V descritas más adelante en la sección “Característica III” de esta invención. En particular, la característica III puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de uno o más aminoácidos a un máximo de 10 % de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura.

La característica VI puede ser cualquiera de las características VI descritas más adelante en la sección “Característica VI” de esta invención. En particular, la característica VI puede ser que la célula de levadura es capaz de generar al menos 4,7 por mil de etanol por °Plato cuando dicha célula de levadura se añade a una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato y se incuba hasta que el nivel de diacetilo se encuentra dentro de las especificaciones.

La característica VII puede ser cualquiera de las características VII descritas más adelante en la sección “Característica VII” de esta invención. En particular, la característica VII puede ser que la célula de levadura es capaz de fermentar azúcar con un grado real de fermentación de al menos 70 cuando dicha célula de levadura se añade a una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato y se incuba hasta que el nivel de diacetilo se encuentra dentro de las especificaciones.

La característica XI puede ser cualquiera de las características XI descritas más adelante en la sección “Característica XI” de esta invención. En particular, la característica XI puede ser que la célula de levadura es capaz de fermentar mosto con un tiempo de fermentación primaria de como máximo 4 días.

La célula de levadura puede tener una o más de las características. Por tanto, la célula de levadura puede tener al menos dos, preferiblemente al menos tres, más preferiblemente al menos cuatro, aún más preferiblemente al menos cinco, tal como al menos 6, tal como todas las características I, II, III, IV, V, VI y VII. La célula de levadura también puede tener al menos dos, preferiblemente al menos tres, más preferiblemente al menos cuatro, aún más preferiblemente al menos cinco, tal como al menos 6, tal como todas las características I, II, III, IV, V, VI, VII y XI. Por tanto, la célula de levadura puede tener las características I y II. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características I y III. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características I y IV. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características I y V. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características I y VI. La célula de levadura también puede tener las características I y VII. La célula de levadura también puede tener las características I y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, II y III. La célula de levadura también puede tener las características I, II y IV. La célula de levadura también puede tener las características I, II y V. La célula de levadura también puede tener las características I, II y VI. La célula de levadura también puede tener las características I, II y VII. La célula de levadura también puede tener las características I, II y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III y IV. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III y V. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III y VI. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III y VII. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III, IV y V. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III, IV y VI. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III, IV y VII. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III, IV y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III, IV, V y VI. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III, IV, V y VII. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III, IV, V y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III, IV, V, VI y VII. La célula de levadura también puede tener las características I, II, III, IV, V, VI y XI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características I, III y IV. La célula de levadura también puede tener las características I, III y V. La célula de levadura también puede tener las características I, III y VI. La célula de levadura también puede tener las características I, III y VII. La célula de levadura también puede tener las características I, III y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, III, IV y V. La célula de levadura también puede tener las características I, III, IV y VI. La célula de levadura también puede tener las características I, III, IV y VII. La célula de levadura también puede tener las características I, III, IV y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, III, IV, V y VI. La célula de levadura también puede tener las características I, III, IV, V y VII. La célula de levadura también puede tener las características I, III, IV, V y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, III, IV, V, VI y VII. La célula de levadura también puede tener las características I, III, V y VI. La célula de levadura también puede tener las características I, III, V y VII. La célula de levadura también puede tener las características I, III, V y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, III, VI y VII. La célula de levadura también puede tener las características I, III, VI y X i. La célula de levadura también puede tener las características I, III, VII y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, IV y V. La célula de levadura también puede tener las características I, IV y VI. La célula de levadura también puede tener las características I, IV y VII. La célula de levadura también puede tener las características I, IV y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, IV, V y VI. La célula de levadura también puede tener las características I, IV, V y Vil. La célula de levadura también puede tener las características I, IV, V y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, IV, VI y Vil. La célula de levadura también puede tener las características I, IV, VI y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, IV, V, VI y Vil. La célula de levadura también puede tener las características I, IV, V, VI y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, IV, V, VI, Vil y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, V y Vi. La célula de levadura también puede tener las características I, V y Vil. La célula de levadura también puede tener las características I, V y Xl. La célula de levadura también puede tener las características I, V, VI y Vil. La célula de levadura también puede tener las características I, V, VI y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, V, VI, Vil y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, VI y Vil. La célula de levadura también puede tener las características I, VI y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, VI, Vil y XI. La célula de levadura también puede tener las características I, Vil y XI. La célula de levadura también puede tener las características II y III. La célula de levadura también puede tener las características II y IV. La célula de levadura también puede tener las características II y V. La célula de levadura también puede tener las características II y VI. La célula de levadura también puede tener las características II y Vil. La célula de levadura también puede tener las características II y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, III y IV. La célula de levadura también puede tener las características II, III y V. La célula de levadura también puede tener las características II, III y VI. La célula de levadura también puede tener las características II, III y Vil. La célula de levadura también puede tener las características II, III y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, III, IV y V. La célula de levadura también puede tener las características II, III, IV y VI. La célula de levadura también puede tener las características II, III, iV y Vil. La célula de levadura también puede tener las características II, III, IV y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, III, IV, V y VI. La célula de levadura también puede tener las características II, III, iV, V y Vil. La célula de levadura también puede tener las características II, III, IV, V y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, III, IV, V, VI y Vil. La célula de levadura también puede tener las características II, III, IV, V, VI y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, III, IV, V, VI, Vil y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, IV y V. La célula de levadura también puede tener las características II, IV y VI. La célula de levadura también puede tener las características II, IV y Vil. La célula de levadura también puede tener las características II, IV y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, IV, V y VI. La célula de levadura también puede tener las características II, iV, V y Vil. La célula de levadura también puede tener las características II, IV, V y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, IV, V, VI y Vil. La célula de levadura también puede tener las características II, IV, V, VI y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, IV, V, VI, Vil y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, V y VI. La célula de levadura también puede tener las características II, V y Vil. La célula de levadura también puede tener las características II, V y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, V, VI y Vil. La célula de levadura también puede tener las características II, V, VI y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, V, VI, Vil y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, VI y Vil. La célula de levadura también puede tener las características II, VI y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, VI, Vil y XI. La célula de levadura también puede tener las características II, Vil y XI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características III y IV. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características III y V. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características III y VI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características III y Vil. La célula de levadura también puede tener las características III y XI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características III, IV y V. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características III, IV y VI. La célula de levadura también puede tener las características III, IV y Vil. La célula de levadura también puede tener las características III, iV y XI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características III, IV, V y VI. La célula de levadura también puede tener las características III, IV, V y VII. La célula de levadura también puede tener las características III, IV, V y XI. La célula de levadura también puede tener las características III, IV, V, VI y VII. La célula de levadura también puede tener las características III, IV, V, VI y XI. La célula de levadura también puede tener las características III, IV, V, VI, VII y XI. La célula de levadura también puede tener las características III, V y VI. La célula de levadura también puede tener las características III, V y VII. La célula de levadura también puede tener las características III, V y XI. La célula de levadura también puede tener las características III, VI y VII. La célula de levadura también puede tener las características III, VI y XI. La célula de levadura también puede tener las características III, VI, VII y XI. La célula de levadura también puede tener las características III, VII y XI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características IV y V. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características IV y VI. La célula de levadura también puede tener las características IV y VII. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características IV, V y VI. La célula de levadura también puede tener las características IV, V y VII. La célula de levadura también puede tener las características IV, V, VI y VII. La célula de levadura también puede tener las características IV, VI y VII. La célula de levadura también puede tener las características IV, VI y XI. La célula de levadura también puede tener las características IV, VI, VII y XI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener las características V y VI. La célula de levadura también puede tener las características V y VII. La célula de levadura también puede tener las características V y XI. La célula de levadura también puede tener las características V, VI y VII. La célula de levadura también puede tener las características V, VII y XI. La célula de levadura también puede tener las características VI y VII. La célula de levadura también puede tener las características VI y XI. La célula de levadura también puede tener las características VI, VII y XI. La célula de levadura también puede tener las características VII y XI.

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener todas las características I, II, III, IV, V, VI y VII. La célula de levadura descrita en esta invención puede tener todas las características I, II, III, IV, V, VI, VII y XI.

Además de las características indicadas anteriormente, las células de levadura pueden tener una o más características adicionales.

Por tanto, además de una o más de las características I, II, III, IV, V, VI, VII y/u XI, la célula de levadura también puede tener la característica VIII. La característica VIII puede ser cualquiera de las características VIII descritas más adelante en la sección “Característica VIII” de esta invención. En particular, la característica VIII puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar melibiosa como única fuente de carbono.

Además de una o más de las características I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII y/u XI, la célula de levadura también puede tener la característica IX. La característica IX puede ser cualquiera de las características IX descritas más adelante en la sección “Característica IX” de esta invención. En particular, la característica IX puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar disacáridos y/o trisacáridos como única fuente de carbono.

Además de una o más de las características I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX y/u XI, la célula de levadura también puede tener la característica X. La característica X puede ser cualquiera de las características X descritas más adelante en la sección “Característica X” de esta invención. En particular, la característica X puede ser que la célula de levadura solo tiene un número bajo de células en suspensión.

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener todas las características I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X y XI.

La célula de levadura puede ser una célula de levadura de cualquier especie adecuada. En una realización preferida de la invención, la célula de levadura es un híbrido entre una célula de levadura de la especie S. pastorianus y una célula de levadura de la especie S. cerevisiae.

Característica I

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener la característica I, donde la característica I es que la célula de levadura es capaz de utilizar isomaltosa. Por tanto, tras incubación en un medio que contiene isomaltosa, dicha célula de levadura es capaz de retirar al menos parte de dicha isomaltosa.

Más preferiblemente, la característica I es que la célula de levadura es capaz de utilizar isomaltosa como única fuente de carbono. Por tanto, la célula de levadura es capaz de crecer en un medio que contiene isomaltosa como única fuente de carbono. Tal medio preferiblemente no contiene ningún mono- y/o disacárido aparte de la isomaltosa, y más preferiblemente tal medio no contiene ningún carbohidrato aparte de la isomaltosa.

Aunque una célula de levadura sea capaz de fermentar isomaltosa, esto no significa necesariamente que dicha célula de levadura es capaz de utilizar isomaltosa como única fuente de carbono. Por tanto, se prefiere que la célula de levadura sea tanto capaz de utilizar isomaltosa como de utilizar isomaltosa como única fuente de carbono.

En particular, la característica I puede ser que la célula de levadura es capaz de crecer en un medio que contiene en el intervalo de 1 a 5 g/L, por ejemplo, en el intervalo de 1 a 3 g/L, tal como 2 g/L, de isomaltosa como única fuente de carbono. Tal medio preferiblemente no contiene ningún carbohidrato aparte de dicha concentración de isomaltosa. Un procedimiento útil para determinar si una célula de levadura es capaz de utilizar isomaltosa como única fuente de carbono se describe más adelante en el Ejemplo 5 de esta invención.

Las células de levadura que tienen la característica I, preferiblemente también tienen uno o más de los genotipos IV, V y VI, más preferiblemente todos los genotipos IV, V y VI descritos más adelante.

Característica II

La célula de levadura según la invención tiene la característica II, donde la característica II es que la célula de levadura es capaz de utilizar panosa como única fuente de carbono. Por tanto, tras incubación en un medio que contiene panosa, dicha célula de levadura es capaz de retirar al menos parte de dicha panosa. preferiblemente, dicha célula de levadura es capaz de retirar (p. ej., capaz de fermentar) al menos 45 %, tal como al menos 50 %, por ejemplo, al menos 60 %, de la panosa en dicho medio. Dicho medio puede ser en particular mosto. preferiblemente, dicha célula de levadura es capaz de retirar la cantidad de panosa antes mencionada cuando se incuba en dicho mosto hasta que el diacetilo se encuentra dentro de las especificaciones, p. ej., durante 4 a 6 días, p. ej., durante 5 días. La incubación puede ser, por ejemplo, de 16 a 18 °C. Por tanto, dicha célula de levadura puede ser capaz de retirar al menos 45 %, tal como al menos 50 %, por ejemplo, al menos 60 %, de la panosa presente en el mosto cuando se determina fermentando el mosto como se describe más adelante en el Ejemplo 5 de esta invención.

La célula de levadura es capaz de crecer en un medio que contiene panosa como única fuente de carbono. Tal medio preferiblemente no contiene ningún mono-, di- y/o trisacárido aparte de la panosa, y más preferiblemente tal medio no contiene ningún carbohidrato aparte de la panosa.

Aunque una célula de levadura sea capaz de fermentar panosa, esto no significa necesariamente que dicha célula de levadura es capaz de utilizar panosa como única fuente de carbono. Una célula de levadura puede ser capaz tanto de utilizar panosa como de utilizar panosa como única fuente de carbono.

En particular, la característica II puede ser que la célula de levadura es capaz de crecer en un medio que contiene en el intervalo de 1 a 5 g/L, por ejemplo, en el intervalo de 1 a 3 g/L, tal como 2 g/L, de panosa como única fuente de carbono. Tal medio preferiblemente no contiene ningún carbohidrato aparte de dicha concentración de panosa. Un procedimiento útil para determinar si una célula de levadura es capaz de utilizar panosa como única fuente de carbono se describe más adelante en el Ejemplo 5 de esta invención.

Las células de levadura que tienen la característica II, preferiblemente también tienen uno o más de los genotipos IV, V y VI, más preferiblemente todos los genotipos IV, V y VI descritos más adelante.

Característica III

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener la característica III, donde la característica III es que la célula de levadura es capaz de utilizar dipéptidos. Por tanto, tras incubación en un medio que contiene dipéptidos, dicha célula de levadura es capaz de retirar al menos parte de dichos dipéptidos.

Más preferiblemente, la característica III es que la célula de levadura es capaz de utilizar dipéptidos como única fuente de nitrógeno. Por tanto, la célula de levadura es capaz de crecer en un medio que contiene dipéptidos como única fuente de nitrógeno. Tal medio preferiblemente no contiene ningún aminoácido o péptido aparte de los dipéptidos, y más preferiblemente tal medio no contiene ningún aminoácido, péptido o amonio aparte de los dipéptidos.

La característica III puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar cualquier dipéptido como única fuente de nitrógeno. Sin embargo, también es posible que dicha levadura sea capaz de utilizar solo uno o más dipéptidos específicos como única fuente de nitrógeno.

Se prefiere que la característica III sea que la célula de levadura es capaz de utilizar al menos uno, tal como al menos dos, por ejemplo, al menos tres, tal como al menos 4, por ejemplo, al menos 5, tal como todos los dipéptidos siguientes: Met-Tyr

Leu-Tyr

Val-Met

Phe-Tyr

Ile-Leu

Ile-Asn.

En una realización, la característica III es que la célula de levadura es capaz de utilizar al menos uno, tal como al menos 3, por ejemplo, al menos 5, tal como al menos 7, por ejemplo, al menos 9, tal como todos los dipéptidos siguientes:

Gly-Arg

Ile-Asn

Lys-Tyr

Met-Lys

Val-Ala

Val-Asn

Val-Gly

Val-Gln

Val-Met

Val-Ser

La característica III también puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar uno o más dipéptidos de la fórmula Val-Xaa, donde Xaa simboliza cualquier aminoácido. Por ejemplo, la característica III puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar al menos 3, tal como al menos 4, por ejemplo, al menos t6, dipéptidos diferentes de la fórmula Val-Xaa. En particular, Xaa puede ser un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Ala, Asn, Gly, Gin, Met y Ser.

La característica III también puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar uno o más dipéptidos de la fórmula Ala-Xaa, donde Xaa simboliza cualquier aminoácido. En particular, Xaa puede ser un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Glu, Gly, His y Thr. Frecuentemente, la capacidad de utilizar un dipéptido de la fórmula Ala-Xaa está relacionada con la capacidad de utilizar alantoato, que es un producto intermedio del catabolismo de la alantoína. Por tanto, se prefiere que la célula de levadura sea capaz además de utilizar alantoína como única fuente de nitrógeno. La característica III también puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar uno o más de los dipéptidos siguientes, por ejemplo, al menos 3 de los dipéptidos siguientes, tal como al menos 5 de los dipéptidos siguientes, tal como todos los dipéptidos siguientes:

Met-Tyr

Leu-Tyr

Val-Met

Phe-Tyr

Ile-Leu

Ile-Asn

Ala-Xaa, donde Xaa es cualquier aminoácido y preferiblemente Xaa es Glu, Gly, His o Thr.

Un procedimiento útil para determinar si una célula de levadura es capaz de utilizar dipéptidos como única fuente de nitrógeno se describe más adelante en el Ejemplo 6 de esta invención. El experto en la materia entenderá que los procedimientos descritos en el Ejemplo 6 se pueden usar para ensayar si se puede utilizar cualquier dipéptido como única fuente de nitrógeno intercambiando los dipéptidos ensayados.

Las células de levadura que tienen la característica III, preferiblemente también tienen uno o más de los genotipos I, II y III, más preferiblemente todos los genotipos I, II y II descritos más adelante.

Característica IV

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener la característica IV, donde la característica IV es que la célula de levadura es capaz de utilizar tripéptidos. Por tanto, tras incubación en un medio que contiene tripéptidos, dicha célula de levadura es capaz de retirar al menos parte de dichos tripéptidos.

Más preferiblemente, la característica IV es que la célula de levadura es capaz de utilizar tripéptidos como única fuente de nitrógeno. Por tanto, la célula de levadura es capaz de crecer en un medio que contiene tripéptidos como única fuente de nitrógeno. Tal medio preferiblemente no contiene ningún aminoácido o péptido aparte de los tripéptidos, y más preferiblemente tal medio no contiene ningún aminoácido, péptido o amonio aparte de los tripéptidos.

La característica IV puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar cualquier tripéptido como única fuente de nitrógeno. Sin embargo, también es posible que dicha levadura sea capaz de utilizar solo uno o más tripéptidos específicos como única fuente de nitrógeno.

Se prefiere que la característica IV sea que la célula de levadura es capaz de utilizar el tripéptido Gly-Gly-Gly como única fuente de nitrógeno.

Un procedimiento útil para determinar si una célula de levadura es capaz de utilizar tripéptidos como única fuente de nitrógeno se describe más adelante en el Ejemplo 6 de esta invención. El experto en la materia entenderá que los procedimientos descritos en el Ejemplo 6 se pueden usar para ensayar si se puede utilizar cualquier tripéptido como única fuente de nitrógeno intercambiando los tripéptidos ensayados.

Las células de levadura que tienen la característica IV, preferiblemente también tienen uno o más de los genotipos I, II y III, más preferiblemente al menos los genotipos II y III descritos más adelante.

Característica V

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener la característica V, donde la característica V es una utilización alta de aminoácidos.

En general, se prefiere que la célula de levadura descrita en esta invención sea capaz de utilizar los aminoácidos en un grado alto. Esto garantiza tanto que la energía almacenada en los aminoácidos se pueda utilizar, como un nivel bajo de aminoácidos después de la fermentación. Por tanto, si dicha levadura se usa para la preparación de cerveza, la cerveza final tendrá un nivel bajo de aminoácidos. Los aldehídos de Strecker son componentes importantes del sabor “añejo” de la cerveza que proceden en parte de los aminoácidos de la propia cerveza embotellada. Los aminoácidos que han demostrado estar implicados en la formación de aldehídos de Strecker con un umbral sensorial bajo incluyen valina, isoleucina, leucina, metionina y fenilalanina (Tabla 2). La formación de aldehídos de Strecker juega un papel crucial, porque un aumento en su concentración otorga una percepción sensorial creciente de "sabores añejos".

Por consiguiente, según se describe en esta invención, es una ventaja que la célula de levadura sea capaz de utilizar los aminoácidos en un grado superior a las levaduras Lager y las levaduras Ale convencionales.

Por tanto, se prefiere que las células de levadura descritas en esta invención tengan la característica V, donde la característica V es que dichas células de levadura son capaces de reducir el nivel de uno o más aminoácidos a un máximo de 10 % de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. En particular, la característica V puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de 12, tal como al menos 13, por ejemplo, de al menos 14, aminoácidos diferentes a menos de 10 % de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. Por ejemplo, la célula de levadura puede ser capaz de reducir en el intervalo de 12 a 20, tal como en el intervalo de 14 a 20, aminoácidos a un máximo de 10 % de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. La característica V también puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel total de aminoácidos menos de 30 %, tal como menos de 25 %, de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura.

La característica V también puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de uno o más aminoácidos a un máximo de 5 % de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. En particular, la característica V puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de 10, tal como al menos 11, por ejemplo, de al menos 13, aminoácidos diferentes a menos de 5 % de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura.

La característica V también puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de uno o más aminoácidos a un máximo de 1 % de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. En particular, la característica V puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de 5, tal como al menos 6, por ejemplo, de al menos 7, aminoácidos diferentes a menos de 1 % de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura.

La característica V también puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de uno o más de los aminoácidos formadores de aldehídos de Strecker. Por tanto, la característica V puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de Met a menos de 10 %, preferiblemente menos de 5 %, aún más preferiblemente a un máximo de 2 %, incluso más preferiblemente a menos de 1 %, de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. En particular, la célula de levadura puede ser capaz de retirar esencialmente toda la Met después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. La característica V también puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de Val a menos de 10 %, preferiblemente menos de 5 %, aún más preferiblemente a un máximo de 2 %, de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. La característica V también puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de Ile a menos de 10 %, preferiblemente menos de 5 %, aún más preferiblemente a un máximo de 2 %, incluso más preferiblemente a menos de 1 %, de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. En particular, la célula de levadura puede ser capaz de retirar esencialmente toda la Ile después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. La característica V también puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de Leu a menos de 10 %, preferiblemente menos de 5 %, aún más preferiblemente a un máximo de 2 %, de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. La característica V también puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de Phe a menos de 10 %, preferiblemente menos de 5 %, aún más preferiblemente a un máximo de 2 %, incluso más preferiblemente a menos de 1 %, de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. En particular, la célula de levadura puede ser capaz de retirar esencialmente toda la Phe después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura.

La expresión “retirar esencialmente toda” se emplea en esta invención para indicar que el aminoácido se retira a un nivel que está por debajo del nivel de detección, cuando la detección se realiza mediante UPLC.

También se describe en esta invención que la característica V es que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de al menos 2, preferiblemente de al menos 3, más preferiblemente de al menos 4, aún más preferiblemente de todos los aminoácidos Met, Val, Ile, Leu y Phe a menos de 10 %, preferiblemente menos de 5 %, aún más preferiblemente a un máximo de 2 %, de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura.

La característica V también puede ser que las células de levadura son capaces de utilizar al menos 80 % de al menos uno de los aminoácidos Met, Val, Ile, Leu y Phe cuando dicha célula de levadura se añade a una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato y se incuba hasta que el nivel de diacetilo se encuentra dentro de las especificaciones.

También se prefiere que las células de levadura descritas en esta invención tengan la característica V, donde dicha característica V es que las células de levadura son capaces de reducir el nivel total de los aminoácidos Met, Val, Ile, Leu y/o Phe a un máx de 400 mg/L, tal como a un máximo de 100 mg/L, tal como a un máximo de 50 mg/L, por ejemplo, un a máximo de 10 mg/L, después de la incubación durante 6 días en condiciones que permiten el crecimiento de dicha célula de levadura.

La característica V también puede ser una combinación de cualquiera de las características V antes mencionadas descritas en esta sección. Por tanto, por ejemplo, la característica V puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de al menos 12, tal como al menos 13, por ejemplo, de al menos 14, aminoácidos diferentes a menos de 10 % y es capaz de reducir el nivel total de aminoácidos a menos de 30 %, tal como menos de 25 %, de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. La característica V también puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de al menos 10 aminoácidos a menos de 5 % y es capaz de reducir el nivel total de aminoácidos a menos de 30 %, tal como menos de 25 %, de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. La característica V también puede ser que la célula de levadura es capaz de reducir el nivel de al menos 5 aminoácidos a menos de 1 % y es capaz de reducir el nivel total de aminoácidos a menos de 30 %, tal como menos de 25 %, de la concentración de partida después de la incubación durante 5 días en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura. Las condiciones que permiten el crecimiento de dichas células de levadura se describen más adelante en la sección “Procedimiento para producir una bebida” de esta invención. Dichas condiciones pueden ser cualquiera de las condiciones de fermentación descritas en esa sección. P. ej., dichas condiciones pueden ser la incubación a una temperatura en el intervalo de 10 a 20 °C en mosto. El nivel de aminoácidos se puede determinar mediante cualquier procedimiento útil, p. ej., usando HPLC o UPLC. Los procedimientos útiles para determinar si una célula de levadura tiene una utilización alta de aminoácidos se describen más adelante en los Ejemplos 4 y 9 de esta invención.

Característica VI

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener la característica VI, donde la característica VI es una producción alta de alcohol. Puesto que la cantidad de alcohol producida por una célula de levadura determinada está muy influenciada por el material de partida, se prefiere que la característica I sea que la célula de levadura es capaz de generar al menos 4,7 por mil de etanol por °Plato. El °Plato es una medida de la densidad de un líquido y, por tanto, indica el nivel de azúcares y otros nutrientes fermentables.

En particular, se prefiere que la célula de levadura sea capaz de generar al menos 4,7 por mil de etanol por °Plato cuando dicha célula de levadura se añade a una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato y se incuba hasta que el nivel de diacetilo se encuentra dentro de las especificaciones.

Preferiblemente, se considera que el diacetilo se encuentra dentro de las especificaciones cuando el nivel de diacetilo es como máximo 30 ppb.

Característica VII

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener la característica VII, donde la característica VII es un grado real de fermentación (GRF) alto.

El GRF mide el grado en que el azúcar del líquido de partida se ha fermentado a alcohol. Por tanto, si el líquido de partida es un mosto, el GRF mide el grado en que el azúcar del mosto se ha fermentado a alcohol en la cerveza resultante.

Se prefiere que la célula de levadura según la invención tenga la característica VII, donde la característica VII es que la célula de levadura es capaz de fermentar azúcar con un GRF de al menos 68 %, tal como al menos 69 %, por ejemplo, al menos 70 %, y más preferiblemente con un GRF de al menos 71 %.

En particular, se prefiere que la célula de levadura sea capaz de fermentar azúcar con un GRF superior al GRF de al menos una de las cepas precursoras. Por tanto, la célula de levadura según la invención puede ser una célula de levadura híbrida que es capaz de fermentar azúcar con un GRF que es al menos 1 % superior, por ejemplo, al menos 2 % superior, al GRF de una de las cepas precursoras. En particular, la célula de levadura según la invención puede ser un híbrido entre una cepa precursora de S. pastorianus y una cepa precursora de S. cerevisiae. En tales realizaciones, la célula de levadura puede ser capaz de fermentar azúcar con un GRF al menos 1 % superior al GRF de la cepa precursora de S. pastorianus. La célula de levadura según la invención también puede ser un híbrido entre una cepa precursora de S. diastaticus y una cepa precursora de S. cerevisiae. En tales realizaciones, la célula de levadura puede ser capaz de fermentar azúcar con un GRF al menos 1 % superior, preferiblemente al menos 2 % superior, al GRF de la cepa precursora de S. diastaticus.

Característica VIII

La célula de levadura según la invención tiene la característica VIII, donde la característica VIII es que la célula de levadura es capaz de utilizar melibiosa como única fuente de carbono. Por tanto, tras incubación en un medio que contiene melibiosa, dicha célula de levadura es capaz de retirar al menos parte de dicha melibiosa.

La célula de levadura es capaz de crecer en un medio que contiene melibiosa como única fuente de carbono. Tal medio preferiblemente no contiene ningún mono- y/o disacárido aparte de la melibiosa, y más preferiblemente tal medio no contiene ningún carbohidrato aparte de la melibiosa.

Un procedimiento útil para determinar si una célula de levadura es capaz de utilizar melibiosa como única fuente de carbono se describe más adelante en el Ejemplo 7 de esta invención.

Característica IX

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener la característica IX, donde la característica IX es que la célula de levadura es capaz de utilizar disacáridos y/o trisacáridos. Por tanto, tras incubación en un medio que contiene disacáridos y/o trisacáridos, dicha célula de levadura es capaz de retirar al menos parte de dichos disacáridos y/o trisacáridos.

Más preferiblemente, la característica IX es que la célula de levadura es capaz de utilizar disacáridos y/o trisacáridos como única fuente de carbono. Por tanto, la célula de levadura es capaz de crecer en un medio que contiene disacáridos y/o trisacáridos como única fuente de carbono. Tal medio preferiblemente no contiene ningún sacárido aparte de los disacáridos y/o trisacáridos.

La característica IX puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar cualquier disacárido y trisacárido como única fuente de carbono. Sin embargo, también es posible que dicha levadura sea capaz de utilizar solo uno o más disacáridos y/o trisacáridos específicos como única fuente de carbono. Como se describió anteriormente, se prefiere que las células de levadura sean capaces de utilizar isomaltosa (característica I), panosa (característica II) y/o melibiosa (característica VIII).

Por tanto, la característica IX es preferiblemente que la célula de levadura es capaz de utilizar uno o más disacáridos y/o trisacáridos que no sean isomaltosa, panosa o melibiosa. Por tanto, la característica IX puede ser que la célula de levadura es capaz de utilizar uno o más disacáridos y/o trisacáridos además de la isomaltosa, panosa o melibiosa. La célula de levadura puede, por tanto, ser capaz de utilizar uno o más disacáridos y/o trisacáridos que no sean isomaltosa, panosa o melibiosa como única fuente de carbono y, además, dicha célula de levadura puede tener una o más de las características I, II u VIII.

Se prefiere que la característica IX sea que la célula de levadura es capaz de utilizar al menos uno, tal como al menos dos, por ejemplo, al menos tres, tal como al menos 4, por ejemplo, al menos 5, tal como todos los disacáridos seleccionados del grupo que consiste en coibiosa, nigerosa, sucrosa, turanosa, leucrosa y palatinosa como única fuente de carbono.

También se prefiere que la característica IX sea que la célula de levadura es capaz de utilizar maltotriosa y/o isomaltotriosa como única fuente de carbono.

Por tanto, las células de levadura pueden ser capaces de utilizar maltotriosa como única fuente de carbono. Por tanto, la célula de levadura puede ser capaz de crecer en un medio que contiene maltotriosa como única fuente de carbono. Tal medio preferiblemente no contiene ningún mono- y/o di- y/o trisacárido aparte de la maltotriosa, y más preferiblemente tal medio no contiene ningún carbohidrato aparte de la maltotriosa.

En particular, la característica IX puede ser que la célula de levadura es capaz de crecer en un medio que contiene en el intervalo de 1 a 5 g/L, por ejemplo, en el intervalo de 1 a 3 g/L, tal como 2 g/L, de maltotriosa como única fuente de carbono. Tal medio preferiblemente no contiene ningún carbohidrato aparte de dicha concentración de maltotriosa. Muchas células de levadura, p. ej., muchas células de levadura Lager no son capaces de utilizar maltotriosa como única fuente de carbono, en particular muchas células de levadura Lager no son capaces de utilizar maltotriosa como única fuente de carbono cuando la maltotriosa está presente solo en niveles bajos.

Por tanto, las células de levadura pueden ser capaces de utilizar maltulosa como única fuente de carbono. Por tanto, la célula de levadura puede ser capaz de crecer en un medio que contiene maltulosa como única fuente de carbono. Tal medio preferiblemente no contiene ningún mono- y/o disacárido aparte de la maltulosa, y más preferiblemente tal medio no contiene ningún carbohidrato aparte de la maltulosa.

En particular, la característica IX puede ser que la célula de levadura es capaz de crecer en un medio que contiene en el intervalo de 1 a 5 g/L, por ejemplo, en el intervalo de 1 a 3 g/L, tal como 2 g/L, de maltulosa como única fuente de carbono. Tal medio preferiblemente no contiene ningún carbohidrato aparte de dicha concentración de maltulosa. Muchas células de levadura, p. ej., muchas células de levadura Lager no son capaces de utilizar maltulosa como única fuente de carbono.

Por tanto, las células de levadura pueden ser capaces de utilizar coibiosa como única fuente de carbono. Por tanto, la célula de levadura puede ser capaz de crecer en un medio que contiene coibiosa como única fuente de carbono. Tal medio preferiblemente no contiene ningún mono- y/o disacárido aparte de la coibiosa, y más preferiblemente tal medio no contiene ningún carbohidrato aparte de la coibiosa.

En particular, la característica IX puede ser que la célula de levadura es capaz de crecer en un medio que contiene en el intervalo de 1 a 5 g/L, por ejemplo, en el intervalo de 1 a 3 g/L, tal como 2 g/L, de coibiosa como única fuente de carbono. Tal medio preferiblemente no contiene ningún carbohidrato aparte de dicha concentración de coibiosa. Muchas células de levadura, p. ej., muchas células de levadura Lager no son capaces de utilizar coibiosa como única fuente de carbono.

Por tanto, las células de levadura descritas en esta invención pueden ser capaces de utilizar uno o más de los disacáridos y/o trisacáridos descritos en la Tabla 13.

Tabla 13

Los procedimientos útiles para determinar si una célula de levadura es capaz de utilizar disacáridos y/o trisacáridos se describen más adelante en los Ejemplos 8 y 11 de esta invención. Un procedimiento útil para determinar si una célula de levadura es capaz de utilizar disacáridos y/o trisacáridos como única fuente de carbono se describe más adelante en el Ejemplo 5 de esta invención. El experto en la materia entenderá que los procedimientos descritos en el Ejemplo 5 se pueden usar para determinar si se puede utilizar cualquier disacárido y/o trisacárido como única fuente de carbono intercambiando la panosa/isomaltosa por los disacáridos y/o trisacáridos que se van a ensayar.

Las células de levadura que tienen la característica IX, preferiblemente también tienen uno o más de los genotipos IV, V y VI, más preferiblemente todos los genotipos IV, V y VI descritos más adelante.

Característica X

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener la característica X, donde la característica X es que la célula de levadura solo tiene un número bajo de células en suspensión, en particular la célula de levadura tiene un número bajo de células en suspensión después de la incubación en un medio líquido en un recipiente. Dicha incubación es preferiblemente una incubación durante 1 a 14 días, tal como de 2 a 10 días, por ejemplo, de 4 a 8 días, por ejemplo, de 4 a 6 días.

En particular, se prefiere que la característica X sea que como máximo 12 millones, tal como un máximo de 10 millones, de células/ml están en suspensión después de la incubación durante 4 días en condiciones que permiten el crecimiento de dicha célula de levadura. Por tanto, la característica X puede ser que como máximo 12 millones, tal como un máximo de 10 millones, de células/ml están en suspensión cuando dicha célula de levadura se añade a una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato y se incuba durante 4 días. Por tanto, la característica X también puede ser que como máximo 12 millones, tal como un máximo de 10 millones, de células/ml están en suspensión cuando dicha célula de levadura se añade a una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato y se incuba durante 5 días. Por tanto, la característica X también puede ser que como máximo 12 millones, tal como un máximo de 10 millones, de células/ml están en suspensión cuando dicha célula de levadura se añade a una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato y se incuba durante 6 días. Dicha incubación puede ser, por ejemplo, a una temperatura en el intervalo de 10 a 20 °C, tal como en el intervalo de 10 a 18 °C, por ejemplo, a 16 °C o 18 °C. La concentración de partida de células de levadura puede estar, por ejemplo, en el intervalo de 10 a 20 millones de células/ml, por ejemplo, en el intervalo de 14 a 15 millones de células/ml.

También se puede preferir que la característica X sea que la célula de levadura tiene un número de células en suspensión por ml, que es como máximo 80 %, tal como un máximo de 70 %, por ejemplo, como máximo 60 %, tal como un máximo de 50 %, por ejemplo, como máximo 40 %, del número de partida de células por ml después de 4 a 6 días, tal como durante 5 días, de incubación en condiciones que permiten el crecimiento de dichas células.

Por ejemplo, la característica X puede ser que la célula de levadura tiene un número de células en suspensión por ml que es como máximo 80 %, tal como un máximo de 70 %, por ejemplo, como máximo 60 %, tal como un máximo de 50 %, por ejemplo, como máximo 40 %, del número de partida de células por ml después de 4 a 6 días, tal como durante 5 días, de incubación en una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato. La característica X puede ser que la célula de levadura tiene un número de células en suspensión por ml que es como máximo 80 %, tal como un máximo de 70 %, por ejemplo, como máximo 60 %, tal como un máximo de 50 %, por ejemplo, como máximo 40 %, del número de partida de células por ml después de 6 días de incubación en una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato. Dicha incubación puede ser, por ejemplo, a una temperatura en el intervalo de 15 a 20 °C, tal como en el intervalo de 10 a 18 °C, por ejemplo, a 16 °C o 18 °C.

En una realización, la característica X es que como máximo 25 millones, preferiblemente como máximo 20 millones, de células/ml están en suspensión después de la incubación durante 7 días en condiciones que permiten el crecimiento de dicha célula de levadura. Por tanto, la característica X puede ser que como máximo 25 millones, tal como un máximo de 20 millones, de células/ml están en suspensión cuando dicha célula de levadura se añade a una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato y se incuba durante 7 días a 18 °C. Un procedimiento útil para determinar las células en suspensión se describe más adelante en el Ejemplo 2 de esta invención.

Característica XI

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener la característica XI, donde la característica XI es que la célula de levadura es capaz de fermentar mosto con un tiempo de fermentación primaria de como máximo 4 días. La característica XI puede ser que la célula de levadura es capaz de fermentar mosto con un tiempo de fermentación primaria de como máximo 3,5 días.

La característica XI puede ser que la célula de levadura es capaz de fermentar mosto con un tiempo de fermentación primaria de como máximo 3 días.

La característica XI también puede ser que la célula de levadura es capaz de fermentar mosto con un tiempo de fermentación primaria que es al menos un día más corto que el tiempo de fermentación primaria de al menos una de las cepas precursoras en las mismas condiciones. Por tanto, la célula de levadura según la invención también puede ser una célula de levadura híbrida que es capaz de fermentar mosto con un tiempo de fermentación primaria que es al menos un día más corto que el tiempo de fermentación primaria de al menos una de las cepas precursoras en las mismas condiciones. En particular, la célula de levadura según la invención puede ser un híbrido entre una cepa precursora de S. pastorianus y una cepa precursora de S. cerevisiae. En tales realizaciones, la célula de levadura puede ser capaz de fermentar mosto con un tiempo de fermentación primaria que es al menos un día más corto que el tiempo de fermentación primaria de la cepa precursora de S. pastorianus en las mismas condiciones.

Dicho mosto puede ser cualquier mosto estándar, pero preferiblemente es un mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato. Por tanto, dicho mosto puede ser en particular un mosto que tiene un contenido de azúcares en el intervalo de 10 °Plato a 20 °Plato. En particular, dicho mosto puede ser un mosto que tiene un contenido de azúcares de 14 a 16 °Plato.

El término “tiempo de fermentación primaria” es el tiempo transcurrido desde la inoculación del mosto con levadura hasta que finaliza la fermentación primaria. La fermentación primaria se considera finalizada cuando el extracto aparente es estable y/o cuando ya no hay liberación activa de CO². El extracto aparente se considera estable cuando el extracto aparente entre dos mediciones no se altera en más de /-15 %, preferiblemente en no más de /-10 %. La levadura se puede inocular en cualquier concentración útil, por ejemplo, de 10 a 20 millones de células viables/ml, tal como 13 a 16 millones de células viables/ml, por ejemplo, 14-15 millones de células viables/ml.

El tiempo de fermentación primaria se puede determinar a una temperatura a la cual la célula de levadura es capaz de crecer. Por tanto, el tiempo de fermentación primaria se puede determinar a una temperatura en el intervalo de 10 a 25 °C, preferiblemente a una temperatura en el intervalo de 12 a 20 °C, por ejemplo, en el intervalo de 14 a 18 °C. Un procedimiento para determinar el tiempo de fermentación primaria se describe más adelante en el Ejemplo 3 de esta invención.

Contexto genético

Las células de levadura descritas en esta invención pueden tener una o más de las características I a XI descritas anteriormente en esta invención.

Además de dichas características, la célula de levadura descrita en esta invención puede tener uno o más de los genotipos I a VI descritos más adelante en esta invención. Dichos genotipos pueden estar vinculados a las características descritas anteriormente.

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener al menos el genotipo IV descrito más adelante en esta invención. Además de tener el genotipo IV, dicha levadura también puede tener uno o más de los genotipos I, II, III, V, VI y una o más de las características I a XI.

En la invención, la célula de levadura tiene al menos el genotipo IV descrito más adelante y el genotipo VI descrito más adelante. Además de tener los genotipos IV y VI, dicha levadura también puede tener uno o más de los genotipos I, II, III, IV y una o más de las características I a X ⁱ.

Por tanto, la célula de levadura descrita en esta invención puede tener los genotipos I y II. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos I y III. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos I y IV. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos I y V. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos I y VI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos I, II y III. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos I, II y IV. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos I, II y V. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos I, II y VI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos I, II, III y IV. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos I, II, III y V. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos I, II, III y VI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos I, II, III, IV y V. La célula de levadura también puede tener los genotipos I, II, III, IV y VI. La célula de levadura también puede tener los genotipos I, II, III, IV, V y VI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos II y III. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos II y IV. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos II y V. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos II y VI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos II, III y IV. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos II, III y V. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos II, III y VI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos II, III, IV y V. La célula de levadura también puede tener los genotipos II, III, IV y VI. La célula de levadura también puede tener los genotipos II, III, IV, V y VI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos III y IV. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos III y V. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos III y VI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos III, IV y V. La célula de levadura también puede tener los genotipos III, IV y VI. La célula de levadura también puede tener los genotipos III, IV, V y VI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos IV y V. La célula de levadura también puede tener los genotipos IV y VI. La célula de levadura también puede tener los genotipos IV, V y VI. La célula de levadura descrita en esta invención también puede tener los genotipos V y VI.

Las células de levadura descritas en esta invención pueden tener todos los genotipos I, II, III, IV, V y VI.

En una realización de la invención, la célula de levadura según la invención puede ser una célula de levadura que comprende la secuencia de ADN genómico disponible en DDBJ/EMBL/GenBank con el número de entrada LOQJ00000000, en particular la secuencia de ADN disponible en DDBJ/EMBL/GenBank con el número de entrada L0QJ00000000, versión n.° L0QJ01000000. Esta secuencia se proporciona como un proyecto de secuenciación del genoma completo y se proporcionan más detalles sobre esta secuencia más adelante en los Ejemplos de esta invención.

En otra realización de la invención, la célula de levadura según la invención puede ser una célula de levadura que comprende la secuencia de ADN genómico disponible en DDBJ/EMBL/GenBank con el número de entrada LOQJ00000000, en particular la secuencia de ADN disponible en DDBJ/EMBL/GenBank con el número de entrada LOQJ00000000, versión n.° L0QJ01000000. Esta secuencia se proporciona como un proyecto de secuenciación del genoma completo y se proporcionan más detalles sobre esta secuencia más adelante en los Ejemplos de esta invención.

En base a las secuencias genómicas proporcionadas en esta invención se pueden preparar cromosomas de levadura sintéticos. Esto se puede realizar, por ejemplo, como describen Callaway en Nature en 2014 (Nature DOI: doi:10.1038/nature.20l4.14941), o Annaluru y col., Science 4 de abril de 2014: vol. 344 n.° 6179 páginas 55-58 (DOI: 10.1126/science.1249252). También “Synthetic Yeast 2.0” proporciona información sobre cómo preparar cromosomas de levadura sintéticos (véase, p. ej., http://svntheticveast.org/). Las células de levadura que comprenden dichos cromosomas de levadura sintéticos se pueden preparar usando tecnología recombinante convencional.

Genotipo I

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener el genotipo I, donde el genotipo I es la presencia de un gen que codifica DAL5. En particular, se prefiere que la célula de levadura descrita en esta invención comprenda un gen que codifica DAL5 de SEQ ID NO: 6 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma. preferiblemente, el genotipo I es la presencia de un gen que codifica DAL5 de SEQ ID NO: 6.

El genotipo I puede ser la presencia de al menos un gen alélico que codifica DAL5, donde el gen alélico que codifica DAL5 codifica DAL5 seleccionada del grupo que consiste en DAL5 de SEQ IDNO: 6, DAL5 de SEQ ID NO: 39, DAL5 de SEQ ID NO: 40 y homólogos funcionales de las mismas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con cualquiera de las antes mencionadas.

En una realización, el genotipo I puede ser la presencia de los 2 genes alélicos siguientes:

1) un gen que codifica DAL5 de SEQ ID NO: 39 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

2) un gen que codifica DAL5 de SEQ ID NO: 40 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

DAL5 es una proteína transportadora de dipéptidos que transporta dipéptidos mediante una regla distinta de la regla del extremo amino. La célula de levadura puede tener, por ejemplo, el genotipo I en realizaciones de la invención en las que la célula de levadura tiene las características III, IV y/o VI, en particular cuando la célula de levadura tiene la característica III.

Genotipo II

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener el genotipo II, donde el genotipo II es la presencia de al menos 3 genes que codifican PTR2. En particular, se prefiere que la célula de levadura descrita en esta invención comprenda al menos 3 genes que codifican PTR2, donde PTR2 se puede seleccionar del grupo que consiste en PTR2 de SEQ ID NO: 7, PTR2 de SEQ ID: 8, PRT2 de SEQ ID NO: 9 y homólogos funcionales de cada una de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

Por tanto, el genotipo II puede ser que la célula de levadura comprende 3 genes seleccionados del grupo que consiste en:

1) un gen que codifica PRT2 de SEQ ID NO: 7 o un homólogo funcional de cada una de las antes mencionadas que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia;

2) un gen que codifica PRT2 de SEQ ID NO: 8 o un homólogo funcional de cada una de las antes mencionadas que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia; y

3) un gen que codifica PRT2 de SEQ ID NO: 9 o un homólogo funcional de cada una de las antes mencionadas que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia.

Por tanto, el genotipo II puede ser que la célula de levadura comprende los 3 genes siguientes:

1) un gen que codifica PRT2 de SEQ ID NO: 7 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma;

2) un gen que codifica PRT2 de SEQ ID NO: 8 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

3) un gen que codifica PRT2 de SEQ ID NO: 9 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

Por tanto, el genotipo II puede ser que la célula de levadura comprende 3 genes seleccionados del grupo que consiste en:

1) un gen que codifica PRT2 de SEQ ID NO: 7;

2) un gen que codifica PRT2 de SEQ ID NO: 8 y

3) un gen que codifica PRT2 de SEQ ID NO: 9.

En una realización, el genotipo II puede ser que la célula de levadura comprende al menos 2 genes alélicos que codifican PTR2. Por ejemplo, el genotipo II puede ser que la célula de levadura comprende al menos dos genes alélicos que codifican PTR2 seleccionados individualmente del grupo que consiste en genes que codifican PTR2 de SEQ ID NO: 7, PRT2 de SEQ ID NO: 8, PRT2 de SEQ ID NO: 9, PRT2 de SEQ ID NO: 37, PRT2 de SEQ ID NO: 38, PTR2 de SEQ ID NO: 43, PTR2 de SEQ ID NO: 44 y homólogos funcionales de cada una de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

En una realización, el genotipo II puede ser que la célula de levadura comprende los 2 genes alélicos siguientes: 1) un gen que codifica PRT2 de SEQ ID NO: 37 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma;

2) un gen que codifica PRT2 de SEQ ID NO: 38 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

En una realización, el genotipo II puede ser que la célula de levadura comprende los 2 genes alélicos siguientes: 1) un gen que codifica PRT2 de SEQ ID NO: 43 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma;

2) un gen que codifica PRT2 de SEQ ID NO: 44 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

PRT2 es una proteína transportadora de di- y tripéptidos, así como de otros péptidos a la célula de levadura.

La célula de levadura puede tener, por ejemplo, el genotipo II cuando la célula de levadura tiene las características III, IV y/o V, tal como en la realización en la que la célula de levadura tiene las características III y/o IV.

Genotipo III

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener el genotipo III, donde el genotipo III es la presencia de un gen que codifica UBR1. En particular, se prefiere que la célula de levadura descrita en esta invención comprenda un gen que codifica UBR1 que comprende la SEQ ID NO: 10 o UBR1 de SEQ ID NO: 11 o un homólogo funcional de cualquiera de las antes mencionadas que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas. preferiblemente, el genotipo III es la presencia de al menos dos genes que codifican UBR1 que comprende la SEQ ID NO: 10 o UBR1 de SEQ ID NO: 11 o un homólogo funcional de cualquiera de las antes mencionadas que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

Por ejemplo, el genotipo III puede ser la presencia de los 2 genes siguientes:

1) un gen que codifica UBR1 que comprende la SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 45 o un homólogo funcional de cualquiera de las antes mencionadas que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas; y

2) un gen que codifica UBR1 de SEQ ID NO: 11 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

En particular, el genotipo III puede ser la presencia de los 2 genes siguientes:

1) un gen que codifica UBR1 que comprende la SEQ ID NO: 10 y

²) un gen que codifica UBR1 de SEQ ID NO: 11.

La célula de levadura puede tener, por ejemplo, el genotipo III cuando la célula de levadura tiene las características III y/o IV.

El genotipo III puede ser que la célula de levadura comprende al menos un gen alélico que codifica UBR1 seleccionada del grupo que consiste en UBR1 que comprende la s Eq ID NO: 10, UBR1 de SEQ ID NO: 11, UBR1 que comprende la SEQ ID NO: 41, UBR1 de SEQ ID NO: 42, UBR1 que comprende la SEQ ID NO: 45 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

El genotipo III puede ser que la célula de levadura comprende al menos dos genes alélicos que codifican UBR1 seleccionada individualmente del grupo que consiste en UBR1 que comprende la SEQ ID NO: 10, UBR1 de SEQ ID NO: 11, UBR1 que comprende la SEQ ⁱD NO: 41, UBR1 de SEQ ID NO: 42 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

Por ejemplo, el genotipo III puede ser la presencia de los 2 genes siguientes:

1) un gen que codifica UBR1 que comprende la SEQ ID NO: 41 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma y

2) un gen que codifica UBR1 de SEQ iD NO: 42 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

La célula de levadura puede tener, por ejemplo, el genotipo III cuando la célula de levadura tiene las características III, IV y/o V, tal como en la realización en la que la célula de levadura tiene las características III y/o IV.

Genotipo IV

La célula de levadura según la invención tiene el genotipo IV, donde el genotipo IV es la presencia de al menos 3 genes alélicos, preferiblemente al menos 4 genes alélicos que codifican IMA1p. En particular, se prefiere que la célula de levadura según la invención comprenda al menos 4 genes alélicos que codifican IMA1p seleccionada individualmente del grupo que consiste en IMA1p de SEQ ID NO: 12, IMA1p de SEQ ID NO: 13, IMA1p de SEQ ID NO: 14, IMA1p de SEQ ID NO: 15 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

IMA1 p puede ser codificada por diferentes alelos, por ejemplo, por el alelo corto de IMA1 o por el alelo largo de IMA1. Una célula de levadura puede comprender alelos tanto largos como cortos de IMA1. En una realización, se puede preferir que la célula de levadura según la invención comprenda al menos 3 alelos largos que codifican IMA1p.

Por ejemplo, el genotipo IV puede ser la presencia de al menos 2 alelos cortos de IMA1. Dichos dos alelos cortos de IMA1 pueden ser genes que codifican IMA1p seleccionada del grupo que consiste en IMA1p de SEQ ID NO: 12, IMA1p de SEQ ID NO: 13 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

En una realización preferida, el genotipo IV puede ser la presencia de al menos 3 alelos cortos de IMA1. Dichos 3 alelos cortos de IMA1 pueden ser genes alélicos que codifican IMA1p seleccionada del grupo que consiste en IMA1p de SEQ ID NO: 12, IMA1p de SEQ ID NO: 13, IMA1p de SEQ ID NO: 1, IMA1p de SEQ ID NO: 2, IMA1p de SEQ ID NO: 3, IMA1p de SEQ ID NO: 4, IMA1p de SEQ ID NO: 5, IMA1p de SEQ ID NO: 33 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

Por ejemplo, el genotipo IV puede ser la presencia de al menos 2 alelos largos de IMA1. Dichos dos alelos largos de IMA1 pueden ser genes que codifican IMA1 p seleccionada del grupo que consiste en IMA1p de SEQ ID NO: 14, IMA1p de SEQ ID NO: 15 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

En una realización, el genotipo IV puede ser la presencia de al menos 3 alelos largos de IMA1. Dichos 3 alelos largos de IMA1 pueden ser genes que codifican IMA1p seleccionada del grupo que consiste en IMA1p de SEQ ID NO: 21, IMA1 p de SEQ ID NO: 22, IMA1 p de SEQ ID NO: 3, IMA1 p de SEQ ID NO: 24, IMA1 p de SEQ ID NO: 25 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas. En una realización preferida, el genotipo IV puede ser la presencia de al menos 3 alelos cortos de IMA1 y al menos 2 alelos largos de IMA1, donde

a) dichos 3 alelos cortos de IMA1 son individualmente genes que codifican IMA1p seleccionada del grupo que consiste en IMA1p de SEQ ID NO: 12, IMA1p de SEQ ID NO: 13, IMA1p de SEQ ID NO: 1, IMA1p de SEQ ID NO: 2, IMA1p de SEQ ID NO: 3, IMA1p de SEQ ID NO: 4, IMA1p de SEQ ID NO: 5, IMA1p de SEQ ID NO: 33 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas; y

b) dichos 2 alelos largos de IMA1 son individualmente genes que codifican IMA1p seleccionada del grupo que consiste en IMA1p de SEQ ID NO: 14, IMA1p de SEQ ID NO: 15, IMA1p de SEQ ID NO: 21, IMA1p de SEQ ID NO: 22, IMA1p de SEQ ID NO: 23, IMA1p de SEQ ID NO: 24, IMA1p de SEQ ID NO: 25 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

En una realización, el genotipo IV puede ser que la célula de levadura comprende al menos 5 genes alélicos que codifican IMA1p, donde dichos genes alélicos se seleccionan individualmente del grupo que consiste en genes que codifican IMA1 p de SEQ IDNO: 1, IMA1 p de SEQ ID NO: 2, IMA1 p de SEQ ID NO: 3, IMA1 p de SEQ ID NO: 4, IMA1 p de SEQ ID NO: 5, IMA1p de SEQ ID NO: 12, IMA1p de SEQ ID NO: 13, IMA1p de SEQ ID NO: 14, IMA1p de SEQ ID NO: 15, IMA1p de SEQ ID NO: 21, IMA1p de SEQ ID NO: 22, IMA1p de SEQ ID NO: 23, IMA1p de SEQ ID NO: 24, IMA1p de SEQ ID NO: 25 e IMA1p de SEQ ID NO: 33.

En una realización, el genotipo IV puede ser que la célula de levadura comprende los 4 genes alélicos siguientes: 1) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 12 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

2) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 13 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

3) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 14 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

4) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 15 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

En una realización, el genotipo IV puede ser la presencia de los 4 genes alélicos siguientes:

1) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 12 y

²) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 13 y

³) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 14 y

4) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 15.

En una realización, el genotipo IV puede ser la presencia de los 3 genes alélicos siguientes:

1) dos genes que codifican IMA1 p de SEQ ID NO: 21 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

2) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 22 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

1) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 23 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

2) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 24 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

3) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 25 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

En una realización, el genotipo IV puede ser la presencia de los 5 genes alélicos siguientes:

3) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 12 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

4) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 13 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

5) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 1 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

6) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 14 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

7) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 15 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

En una realización, el genotipo IV puede ser la presencia de los 6 genes alélicos siguientes:

1) un gen que codifica IMA1 p de SEQ ID NO: 2 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

2) al menos dos genes que codifican IMA1p de SEQ ID NO: 3 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

3) al menos dos genes que codifican IMA1 p de SEQ ID NO: 21 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

4) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 22 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

1) un gen que codifica IMA1 p de SEQ ID NO: 5 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

2) al menos dos genes que codifican IMA1 p de SEQ ID NO: 33 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

3) al menos dos genes que codifican IMA1p de SEQ ID NO: 4 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

4) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 24 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

5) al menos dos genes que codifican iMA1 p de SEQ ID NO: 23 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

6) un gen que codifica IMA1p de SEQ ID NO: 25 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

La célula de levadura puede tener, por ejemplo, el genotipo IV cuando la célula de levadura tiene las características I, II, IX y/u XI.

Genotipo V

La célula de levadura descrita en esta invención puede tener el genotipo V, donde el genotipo V es la presencia de un gen que codifica IMA5p. El genotipo V también puede ser la presencia de al menos dos genes alélicos que codifican IMA5p. En particular, se prefiere que la célula de levadura descrita en esta invención comprenda al menos un gen alélico que codifica IMA5p seleccionada del grupo que consiste en IMA5p de SEQ ID NO: 16, IMA5p de SEQ ID NO: 17 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas. preferiblemente, el genotipo V es la presencia de al menos dos genes que codifican IMA5p de SEQ ID NO: 16 o IMA5p de SEQ ID NO: 17 o un homólogo funcional de cualquiera de las antes mencionadas que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

En una realización, la célula de levadura comprende al menos dos genes alélicos que codifican IMA5p seleccionados individualmente de entre genes que codifican IMA5p de SEQ ID NO: 16, IMA5p de SEQ ID NO: 17, lMA5p de SEQ ID NO: 34, IMA5p de SEQ ID NO: 35, IMA5p de SeQ ID NO: 36 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionados que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

En particular, el genotipo V puede ser que la célula de levadura comprende los 2 genes alélicos siguientes:

1) un gen que codifica IMA5p de SEQ ID NO: 16 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

2) un gen que codifica IMA5p de SEQ ID NO: 17 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

En una realización, el genotipo V puede ser que la célula de levadura comprende los 3 genes alélicos siguientes: 1) un gen que codifica IMA5p de SEQ ID NO: 16 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

2) un gen que codifica IMA5p de SEQ ID NO: 17 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

3) un gen que codifica IMA5p de SEQ ID NO: 34 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

En una realización, el genotipo V puede ser que la célula de levadura comprende los 2 genes alélicos siguientes: 1) un gen que codifica IMA5p de SEQ ID NO: 35 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

2) un gen que codifica IMA5p de SEQ ID NO: 36 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

En particular, el genotipo V puede ser la presencia de los 2 genes siguientes:

1) un gen que codifica IMA5p de SEQ ID NO: 16 y

²) un gen que codifica IMA5p de SEQ ID NO: 17.

La célula de levadura puede tener, por ejemplo, el genotipo V cuando la célula de levadura tiene las características I, II, IX y/u XI.

Genotipo VI

La célula de levadura según la invención tiene el genotipo VI, donde el genotipo VI es la presencia de al menos 2 genes alélicos que codifican AGT1. En particular, se prefiere que la célula de levadura según la invención comprenda al menos 2 genes alélicos que codifican AGT1 seleccionada del grupo que consiste en AGT1 de SEQ ID NO: 18, AGT1 de SEQ ID NO: 19, AGT1 de SEQ ID NO: 20, AGT1 de SEQ ID NO: 26, AGT1 de SEQ ID NO: 27, AGT1 de SEQ ID NO: 28, AGT1 de SEQ ID NO: 29, AGT1 de SEQ ID NO: 30, AGT1 de SEQ ID NO: 31, AGT1 de SEQ ID NO: 32 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 % de identidad de secuencia con las mismas.

En una realización, la célula de levadura puede tener el genotipo VI, donde el genotipo VI es la presencia de al menos 2 genes alélicos que codifican AGT1 de longitud completa. En particular, se prefiere que la célula de levadura según la invención comprenda al menos 2 genes alélicos que codifican AGT1 seleccionada del grupo que consiste en AGT1 de SEQ ID NO: 18, AGT1 de SEQ ID NO: 19, AGT1 de SEQ ID NO: 20, AGT1 de SEQ ID NO: 27, AGT1 de SEQ ID NO: 28, AGT1 de SEQ ID NO: 30, AGT1 de SEQ ID NO: 31, AGT1 de SEQ ID NO: 32 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 % de identidad de secuencia con las mismas.

En una realización, el genotipo VI puede ser que la célula de levadura comprende los 3 genes alélicos siguientes: 1) un gen que codifica AGT1 de SEQ ID NO: 18 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

2) un gen que codifica AGT1 de SEQ ID NO: 19 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

3) un gen que codifica AGT1 de SEQ ID NO: 20 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

En particular, el genotipo VI puede ser la presencia de los 3 genes alélicos siguientes:

1) un gen que codifica AGT1 de SEQ ID NO: 18 y

²) un gen que codifica AGT1 de SEQ ID NO: 19 y

³) un gen que codifica AGT1 de SEQ ID NO: 20.

En una realización, el genotipo VI puede ser que la célula de levadura comprende los dos genes que codifican AGT1 siguientes:

1) un gen que codifica AGT1 de SEQ ID NO: 27 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

2) un gen que codifica AGT1 de SEQ ID NO: 28 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

3.

En una realización, el genotipo VI puede ser que la célula de levadura comprende los 3 genes alélicos que codifican AGT1 siguientes:

1) un gen que codifica AGT1 de SEQ ID NO: 30 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

2) un gen que codifica AGT1 de SEQ ID NO: 31 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma; y

3) un gen que codifica AGT1 de SEQ ID NO: 32 o un homólogo funcional de la misma que comparte al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con la misma.

La célula de levadura puede tener, por ejemplo, el genotipo VI cuando la célula de levadura tiene las características I, II, IX y/u XI.

Homólogo funcional

El término “homólogo funcional”, como se emplea en esta invención denota un polipéptido que comparte al menos una función biológica con un polipéptido de referencia. En general, dicho homólogo funcional también comparte una identidad de secuencia significativa con el polipéptido de referencia.

preferiblemente, un homólogo funcional de un polipéptido de referencia es un polipéptido que tiene la misma función biológica que la proteína de referencia y comparte un grado alto de identidad de secuencia con el polipéptido de referencia.

Un grado alto de identidad de secuencia indica la probabilidad de que la primera secuencia se derive de la segunda secuencia. La identidad de la secuencia de aminoácidos requiere secuencias de aminoácidos idénticas entre dos secuencias alineadas. Por tanto, una secuencia candidata que comparte 80 % de identidad de aminoácidos con una secuencia de referencia, requiere que, después de la alineación, 80 % de los aminoácidos de la secuencia candidata sean idénticos a los aminoácidos correspondientes de la secuencia de referencia. La identidad según la presente invención se determina mediante la ayuda del análisis informático, tal como, sin limitaciones, el programa de alineación por ordenador ClustalW (Higgins D., Thompson J., Gibson T., Thompson JD, Higgins DG, Gibson TJ, 1994. CLUSTAL W: improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice. Nucleic Acids Res. 22:4673-4680), y los parámetros predeterminados sugeridos en el mismo. El software ClustalW está disponible como ClustalW WWW Service en el Instituto Europeo de Bioinformática http://www.ebi.ac.uk/clustalw. Usando este programa con sus parámetros predeterminados, se alinean la parte madura (bioactiva) de una consulta y un polipéptido de referencia. El número de residuos totalmente conservados se cuenta y se divide por la longitud del polipéptido de referencia. Por tanto, la identidad de secuencia se determina a lo largo de toda la longitud del polipéptido de referencia.

Se puede preferir que los aminoácidos conservados se conserven en el homólogo funcional. Los aminoácidos conservados se pueden identificar preparando una alineación de un polipéptido similar y usando dicha alineación que identifica residuos de aminoácidos conservados entre los polipéptidos. Los ejemplos de alineaciones útiles se presentan en las figuras 5-12 de esta invención.

Procedimiento para producir una bebida

Un aspecto de la invención es proporcionar procedimientos para producir una bebida, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de:

a) proporcionar un líquido de partida,

b) proporcionar una célula de levadura según la invención, p. ej., una célula de levadura que tiene las características II y VIII y los genotipos IV y VI descritos anteriormente,

c) fermentar dicho líquido de partida con dicha célula de levadura,

produciendo de ese modo una bebida.

El líquido de partida puede ser en particular un extracto de cereales, tal como mosto. Dicho líquido de partida se puede preparar, por ejemplo, preparando un extracto de malta mediante maceración y, opcionalmente, lavado de bagazo como se describe en esta sección de esta invención.

La malta son granos de cebada que han sido malteados. Por el término “malteado” se debe entender la germinación de granos de cebada sometidos a remojo en un procedimiento que tiene lugar en condiciones ambientales controladas, seguida de una etapa de secado. Dicha etapa de secado puede ser preferiblemente el secado en horno de los granos germinados a temperaturas elevadas.

La secuencia de acontecimientos del malteado antes mencionada es importante para la síntesis de numerosas enzimas que provocan la modificación del grano, procedimientos que principalmente despolimerizan las paredes celulares del endospermo muerto para movilizar los nutrientes del grano y activar otras despolimerasas. En el procedimiento de secado posterior, se generan el sabor y color debido a las reacciones de oscurecimiento químico. El remojo se puede realizar mediante cualquier procedimiento convencional conocido por el experto en la materia. Un ejemplo no limitante implica el remojo a una temperatura en el intervalo de 10 a 25 °C con condiciones secas y húmedas alternas. La germinación se puede realizar mediante cualquier procedimiento convencional conocido por el experto en la materia. Un ejemplo no limitante implica la germinación a una temperatura en el rango de 10 a 25 °C, opcionalmente con temperatura variable en el intervalo de 1 a 4 h.

El secado en horno se puede realizar a temperaturas convencionales, tales como al menos 75 °C, por ejemplo, en el intervalo de 80 a 90 °C, tal como en el intervalo de 80 a 85 °C. Por tanto, la malta se puede producir, por ejemplo, mediante cualquiera de los procedimientos descritos por Briggs y col. (1981) y por Hough y col. (1982). Sin embargo, también se puede usar cualquier otro procedimiento adecuado para producir malta con la presente invención, tal como procedimientos para la producción de maltas especiales, que incluyen, pero no se limitan a, procedimientos de tueste de la malta.

La malta se puede procesar adicionalmente, por ejemplo, mediante molienda. preferiblemente, la molienda se realiza en estado seco, es decir, la malta se muele mientras está seca.

La malta, p. ej., la malta molida, se puede macerar para preparar un extracto acuoso de dicha malta. El líquido de partida para preparar la bebida puede ser un extracto acuoso de malta, p. ej., un extracto acuoso de malta preparado mediante maceración.

Por tanto, el procedimiento para preparar una bebida según la invención puede comprender una etapa de producir mosto macerando malta y, opcionalmente, adjuntos adicionales. Dicha etapa de maceración también puede comprender opcionalmente lavado de bagazo y, por consiguiente, dicha etapa de maceración puede ser una etapa de maceración que incluye una etapa de lavado de bagazo o una etapa de maceración que excluye una etapa de lavado de bagazo.

En general, la producción de mosto se inicia mediante la molienda de malta y/o cebada. Si se añaden adjuntos adicionales, estos también se pueden moler en función de su naturaleza. Si el adjunto es un cereal, por ejemplo, se puede moler, mientras que los almíbares, azúcares y similares generalmente no se muelen. La molienda facilitará el acceso de agua a las partículas de grano en la fase de maceración. Durante la maceración se puede continuar la despolimerización enzimática de los sustratos iniciada durante el malteado.

En general, el mosto se prepara combinando e incubando malta molida y agua, es decir, en un proceso de maceración. Durante la maceración, la composición de malta/líquido se puede enriquecer con composiciones adicionales de adjuntos ricas en carbohidratos, por ejemplo, adjuntos de cebada, maíz o arroz molidos. Los adjuntos de cereales sin maltear normalmente contienen poca o ninguna enzima activa, lo que hace importante enriquecerlos con malta o enzimas exógenas para proporcionar las enzimas necesarias para la despolimerización de polisacáridos, etc.

Durante la maceración, la malta molida y/o cebada molida y, opcionalmente, los adjuntos adicionales, se incuban con una fracción líquida, tal como agua. La temperatura de incubación se mantiene en general constante (maceración isotérmica) o se aumenta gradualmente, por ejemplo, de forma secuencial. En cualquier caso, las sustancias solubles de la malta/cebada/adjuntos se liberan a dicha fracción líquida. Una filtración posterior permite la separación del mosto y las partículas sólidas residuales, estas últimas también denominadas “bagazo”. El mosto así obtenido también se puede denominar “primer mosto”. Se puede añadir líquido adicional, tal como agua, al bagazo durante un procedimiento también denominado lavado de bagazo. Después del lavado de bagazo y la filtración, se puede obtener un “segundo mosto”. Se pueden preparar mostos adicionales repitiendo el procedimiento. Los ejemplos no limitantes de procedimientos adecuados para la preparación de mosto son descritos por Briggs y col. (arriba) y Hough y col. (arriba).

Como se mencionó anteriormente, la composición de mosto se puede preparar macerando granos de cebada sin maltear. Los granos de cebada sin maltear carecen, o contienen solo una cantidad limitada, de enzimas beneficiosas para la producción de mosto, tales como enzimas capaces de degradar las paredes celulares o enzimas capaces de despolimerizar el almidón para proporcionar azúcares. Por tanto, en las realizaciones de la invención en las que se usa cebada sin maltear para macerar, se prefiere que se añadan una o más enzimas externas para la fabricación de cerveza adecuadas a la masa de malta. Las enzimas adecuadas pueden ser lipasas, enzimas degradadoras de almidón (p. ej., amilasas), glucanasas. [preferiblemente (1-4)- y/o (1-3,1-4)-p-glucanasa], y/o xilanasas (tales como arabinoxilanasa), y/o proteasas o mezclas de enzimas que comprenden una o más de las enzimas antes mencionadas, p. ej., Cereflo, Ultraflo u Ondea Pro (Novozymes).

La composición del mosto también se puede preparar usando una mezcla de granos de cebada malteados y sin maltear, en este caso se pueden añadir una o más enzimas adecuadas durante la preparación. Más específicamente, la cebada de la invención se puede usar junto con malta en cualquier combinación para macerar, con o sin enzimas externas para la para la fabricación de cerveza, tal como, pero no limitada a, las proporciones de cebada:malta = aproximadamente 100:0, o aproximadamente 75:25, o aproximadamente 50:50, o aproximadamente 25:75.

En otras realizaciones de la invención, se prefiere que no haya enzimas externas, en particular que no se añada proteasa externa, y/o celulasa externa y/o a-amilasa externa y/o p-amilasa externa y/o a-amilasa maltogénica externa antes o durante la maceración.

El mosto obtenido después de la maceración también se puede denominar “mosto dulce”. En los procedimientos convencionales, el mosto dulce se hierve con o sin lúpulo, después de lo cual se puede denominar mosto hervido. El término “aproximadamente”, como se emplea en esta invención, significa ±10 %, preferiblemente ±5 %, aún más preferiblemente ±2 %.

El mosto se puede calentar o hervir antes de someterlo a fermentación con la levadura de la invención. El primero, segundo y el resto mostos adicionales se pueden combinar y someter posteriormente a calentamiento o ebullición. El mosto se puede calentar o hervir durante cualquier cantidad de tiempo adecuada, p. ej., en el intervalo de 60 min a 120 min.

Por tanto, el líquido de partida puede ser mosto preparado, por ejemplo, como se describió anteriormente. La bebida se puede preparar mediante fermentación del líquido de partida, p. ej., mediante fermentación de mosto.

La bebida puede ser, en una realización preferida, bebidas de malta, aún más preferido bebidas fermentadas, tales como bebidas de malta fermentadas, preferiblemente bebidas alcohólicas, tales como cerveza.

La bebida puede ser una bebida no alcohólica, tal como cerveza sin alcohol u otra clase de bebida no alcohólica, tal como bebidas de malta sin alcohol, tales como maltina.

En una realización preferida, la bebida es cerveza, por ejemplo, la cerveza puede ser una cerveza Lager o una Ale. Por tanto, la cerveza se puede seleccionar, por ejemplo, del grupo que consiste en Altbier, Amber Ale, Barley Wine, Berliner Weisse, Biére de Garde, Bitter, Blonde Ale, Bock, Brown Ale, California Common, Cream Ale, Dortmunder Export, Doppelbock, Dunkel, Dunkelweizen, Eisbock, Fruit Lambic, Golden Ale, Gose, Gueuze, Hefeweizen, Helles, India Pale Ale, Kolsch, Lambic, Light Ale, Maibock, Malt Licor, Mild, Marzenbier, Old Ale, Oud Bruin, Pale Ale, Pilsener , Porter, Red Ale, Roggenbier, Saison, Scotch Ale, Steam Beer, Stout, Schwarzbier, Lager, Witbier, Weissbier y Weizenbock.

Por tanto, la invención también se refiere a procedimientos para producir una bebida que comprenden las etapas de: (i) proporcionar una composición de malta;

(ii) procesar dicha composición de malta para proporcionar una bebida.

En términos generales, las bebidas alcohólicas, tales como la cerveza, se pueden fabricar a partir de granos de cebada malteados y/o sin maltear. La malta, además del lúpulo y la levadura, contribuye al sabor y color de la cerveza. Asimismo, la malta actúa como una fuente de azúcar fermentable y enzimas. Se pueden encontrar descripciones no limitadas de ejemplos de procedimiento adecuados para el malteado y la fabricación de cerveza, por ejemplo, en publicaciones de Briggs y col. (1981) y Hough y col. (1982). Se dispone de numerosos procedimientos actualizados regularmente para el análisis de productos de cebada, malta y cerveza, por ejemplo, pero no limitados a, American Association of Cereal Chemists (1995), American Society of Brewing Chemists (1992), European Brewery Convention (1998) e Institute of Brewing (1997). Se reconoce que se emplean muchos procedimientos específicos para una fábrica de cerveza determinada, estando relacionadas las variaciones más significativas con las preferencias de los consumidores locales. Cualquiera de tales procedimientos para producir cerveza se puede usar con la presente invención.

La primera etapa para producir cerveza a partir de mosto implica preferiblemente calentar dicho mosto como se describió anteriormente en esta invención, seguido de una fase posterior de enfriamiento del mosto y, opcionalmente, la limpieza y clarificado del mosto hervido. Después de enfriarlo, el mosto se puede transferir a tanques de fermentación que contienen levadura según la invención, es decir, levadura que tiene una o más de las características I a X descritas anteriormente. El mosto se fermentará durante cualquier periodo de tiempo adecuado, en general, en el intervalo de 1 a 100 días. La fermentación se realiza a cualquier temperatura útil, p. ej., a una temperatura en el intervalo de 1020 °C.

Durante el procedimiento de fermentación de varios días, el azúcar se convierte en alcohol y CO²de forma simultánea al desarrollo de algunas sustancias aromatizantes.

Posteriormente, la cerveza se puede procesar adicionalmente, por ejemplo, enfriar. También se puede filtrar y/o someter a fermentación inferior: un procedimiento que desarrolla un aroma agradable y un sabor menos lupulado. También se pueden añadir aditivos. Asimismo, se puede añadir CO². Por último, la cerveza se puede ser pasteurizar y/o filtrar antes de su envasado (p. ej., embotellado o enlatado).

La cerveza producida mediante fermentación con la levadura según la invención en general tiene un sabor más agradable. El sabor puede ser analizado, por ejemplo, por un jurado de degustación de cerveza especializado. preferiblemente, dicho jurado está formado en la degustación y descripción de sabores de la cerveza, con un enfoque especial en los aldehídos, el sabor a cartón o papel, el sabor añejo, los ésteres, los alcoholes superiores, los ácidos grasos y los componentes azufrados.

En general, el jurado de degustación consistirá en el abanico de 3 a 30 miembros, por ejemplo, en el abanico de 5 a 15 miembros, preferiblemente en el abanico de 8 a 12 miembros. El jurado de degustación puede evaluar la presencia de diversos sabores, tales como sabor a papel o cartón, sabores oxidados, añejos y lupulados, así como sabores de ésteres, alcoholes superiores, componentes de azufre y el cuerpo de la cerveza.

Listado de secuencias

SEQ ID NO: 1

Secuencia de aminoácidos de SHORT_IMA1_from Hybrid yeast_1

MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTH KLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD

WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGS AWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY

ESAVGYWLDHGVDGFRI D VGSL YSK WGLP DAP WDKN STW QSSD PYT LNGP RIH EFHQ EMN QF

IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYT SASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD

WKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQP RSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY

QGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNA IKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP

NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVE EEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF

IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSD ATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW

EGRIHINE.

SEQ ID NO: 2

Secuencia de aminoácidos de SHORT_IMA1_from Hybrid Yeast_4

MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTH KLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD

WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGS AWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY

E SAV GYWL DHG VDG FRID VGS LYSK WGL PDA PWDK NS TWQS SDPYTLNGPRIHEFHQEMNQF

IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYT SASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD

WKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQP RSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY

QGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNA IKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP

NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVE EEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF

IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW

EGRIYINE

SEQ ID NO: 3

Secuencia de aminoácidos de SHORT_IMA1_from Hybrid yeast_4_

MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTH KLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD

WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGS AWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY

ESAVGYWLDHGVDGFRI D V G S L Y S KW G L P DA P W D KN S TWQS SDPYTLNGPRIHEFHQEMNQF

IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYT SASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD

WKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQP RSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY

QGQELGQINFKNWSVEKYEDVEIRNNYRL IKEECGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP

NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF

IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW

EGRIHINE.

SEQ ID NO: 4

Secuencia de aminoácidos de SHORT_IMA1_from Hybrid yeast_7

MGY DIA NYEK VWPT YGTNEDCFALIEKTHKLGMK FITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD

WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGS AWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY

ES AVG YWLD HGVD GFRI DVG SLYS KWGL PDAP WDK NSTW QSSD PYT LNGP RIH EFHQ EMNQ F

IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYT SASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD

WKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQP RSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY

QGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNA IKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP

NE PNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVE EEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF

IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSD ATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDVSSRTLKPW

EG RIY INE.

SEQ ID NO: 5

Secuencia de aminoácidos de SHORT_IMA1_from_Hybrid_7_

MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTH KLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD

WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGS AWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY

ES AVGY WLDH GVDG FRID VGSL YSKW GLPD APVV DKNS TWQS SDPY TLNG PRIH EFHQ EMNQ F

IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYT SASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD

WKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQP RSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY

QGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNA IKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP

NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVE EEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF

IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW

EGRIYINE.

SEQ ID NO: 6

Secuencia de aminoácidos de DAL5 codificada por un alelo Sc de levadura híbrida 1

MSADASTNSNASLDEKNLNITSEAEIKNE DVTAEPVLSTVLSPNGKIVYISDKVDEAMKLAEEA

KEIEVTPEEDRKLRWKIDYCMFPLMCILY AVQFMDKISTSSAAVMGLRTDLKMHGDQYSWVTSA

FYFGYLFMNLGPVQFIFQRTSHMSKMLAV FIVIWGMLLALHAAPTVKYPSFIVLRVLLGCAESV

VTPCFTIITAQYWKTEEQFTRVSIWFGMN GLGSILINAIAYGVYIHQDSYAIKGWRTLFVITGV

ITIFIGILIFLWIPDDPSKARFLSKREKL MVVQRIRSNQQGFGNHEIKKYQIIEALKDVRTWLY

FLFTVSSNIPNGGISSFMSILLNSDFGYS SKETLLMGLPTGAVELVGCPLFGILAVYAANKKIP

FWKYKLSWAIFAAVLALIASCMLGFATNS KKARLAGAYLWYISPVSFICVLSNISANSSGYSKK

W TVSS INLV AYAA ANL AGPQ TFIA KQAP KYHG AKV AMWC YAVM IVLLSILLIVNLRENKRRDK

IAAERGFPEET EN LEFS DLTD FENP NFRY TL.

SEQ ID NO: 7

Secuencia de aminoácidos de PTR2 codificada por un alelo Sc de levadura Ale 1

MLNHPSQGSDDAQDEKQGDFPVIEEEKTQAVMLKDSYVSDDVANSTERYNLSPSPEDEDFEAPT

EEEMQTLRHVGGKIPMRCWLIAIV ELSERESYYGLSAPFQNYMEYGPNDSPKGVLSLNSQGATG

LSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNT ICCGTAIYIAGIFILFITSIPSVGNRDSAIGGFIA

AI ILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIK VLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSL

SLMATTELEYHKGF WAAYLLPFCFFWIAVVT LIFGKKQYIQRPIGDKV I AKSF KVCW ILTKNKF

DFNAAKPSVHPEKNYPWNDKFVDEIKRALAACKVFIFYPIYWTQYGTMISSFITQASMMELHGI

PNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFVYPFIR RYTPLKPITKIFXGFMFGSFAMTWAAVLQSFVYKA

GPWYNEPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLIS FSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNA

FGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVAC FISGCLFWLCFRKYNDTEEEMNAMDYEEENEFDLN

PI SAPK ANDI EILE PMDS LRST AKY.

SEQ ID NO: 8

Secuencia de aminoácidos de PTR2 codificada por un alelo Sc de levadura Lager 1

MLNHPSQGSDDAQDEKQGDFPVIEEEKTQ AVTLKDSYVSDDVANSTERYNLSPSPEDEDFEAPT

EEEMQTLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPNDSPK GVLSLNSQGATG

LSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNT ICCGTAIYIAGIFILFITSIPSVGNRDSAIGGFIA

AI ILIG IATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQ NVFMFFYFMINVGSL

SLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWIAV VTLIFGKKQYIQRPVGDKVIAKSFKVCWILTKNKF

DFNAAKP SVHPEKNY PWND KFVD EIKR ALAA CKVF IFYP IYWTQYGTMIS SF ITQAS MME LHGI

PNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFVYPFIR RYTPLKPITKIFFGFMFGSFAMTWAAVLQSFVYKA

G PWYN EPLG HNTPNHVHVCWQIPAYVLIS FSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNA

FGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVAC FISGCLFWLCFRKYNDTEEEMNAMDYEEEDEFDLN

PISAPKANDIEILEPMESLRSTTKY

SEQ ID NO: 9

Secuencia de aminoácidos de PTR2 codificada por un alelo no Sc de levadura híbrida 1

MLNHLSQGSDDIQDEKQGDFPVIEEEKNQ TVTLKDSYVSDDAANSTEHYNLSPSLEEDEFEAPT

DEELRSLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSER FSYYGLSAPFQNYMEYGPKDTPKGVLSLNSQGATG

LSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNT ICCGTAIYIAGIFILLITSIPSVGNRDSALGGFIA

SIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKP SIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSL

SLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWVAV VTLVFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFRVCWILTKNKF

DFNAAKPSVHPEKEY PWN DKFV DEIKRALAAC KVF VFYP IYWTQYGTMISSFITQAGMMELHGI

PNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFIYPFIR RYTPFKPITKIFFGFMFGSLAMTWAAVLQSFVYKA

GPWYSAPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLIS FSEIFASITGLEYA YSKA PASM KSFIM SIFLLTNA

FGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVAC FISGCLFWFCFRKYNDTEEEMNAMDYEEEDEFDLN

PISQPKGNDIEILEPMGSLKSTTKY

SEQ ID NO: 10

Secuencia de aminoácidos incompleta de UBR1 codificada por un alelo Sc de levadura híbrida 1

FKEFCKVEGGV LIW QRVQ KSNL TKSY SISFKQGLYTVETLLSKVHDPNIPLRPKEIISLLTLCK

LFNGAWKIKRKEGEHVLHEDQNFISYLEY TTSIYSIIQTAEKVSEKSKDSIDSKLFLNAIRIIS

SFLGNRSLTYKLIYDSHEVIKFSVSHERVAFMNPLQTMLSFLIEKVSLKDAYEALEDCSDFLKI

S DFSLRSVVLCSQIDVGFWVRNGMSVLHQ ASYYKNNPELGSYSRDIHLNQLAILWERDDIPRII

YNILDRWELLDWFTGEVDYQHTVYEDKIS FIIQQFIAFIYQILTERQYFKTFSSLKDRRMDQIK

NS IIYNLYMKPLSYSKLLRSVPDYLTEDTTEF DEALEEVSVFVEPKGLADNGVFKLKASLYAKV

DPLKLLNLENEFESS

SEQ ID NO: 11

Secuencia de aminoácidos de UBR1 codificada por un alelo no Sc de levadura híbrida 1

MSFTDNGLGSLKAHIRRTLRSIHNLPYFR FTRGPTERADMSRALKEFIYRYLYFIISNDGENLS

TLFTAHPKQKSSNQELAVFPESLEDALDV DKITSQGTFPFYKIDESKIGDVHKHTGRNCGRKFK

IGEPLYRCHECGCDDTCVLCIHCFNPKDHVNHHVCTDICSEFTSGICDCGDEEAWNSSLHCKAE

EQGNDTSEDPSNFDSTKQKDVWNDPECIA LVELVLSEVFDYFIDVFNQNIEPLPTIQKDITIKL

REMTQQGKMYERAQFLNDLKYENDYMFDG TTTAKTSPSNSPEASPSLAKIDPENYTVIIYNDEY

HNYSQATTALRQGVPDNVHIDLLTSRIDG EGRAMLKCSQDLSSVLGGFFAVQTNGLSATLTSWS

E YLHQ EACK YIILW ITHC LNIP NPSF QIT FRNM MGKS LCSE YLNA TESR DMTP WEKY FSTK FD

KDDPYRYIDLSVLAEGNQIPLGHHKVLPE SSTHSLSTLINDVENLTSKEYSNTRLQHILYFDNR

Y WKRL RKDI QNVII PTLA SSTL YKPI FCQQ VVEI FNHI TRSV AYM DREPQ LTA IREC WQLF TC

PTNTRNIFENQSFLDILWSIIDIFKEFCKVEAGVLIWQRVQKSWLTKSYSLSFKQGLYTVETLL

SKVNDPNITIRPKVFISLLTLGKLFNGAW KIKRKEGEHVLHEDQNFISYLEYTTSIYSIIQTAE

KVLEKSHDSLDLNLVLNAIRIVSSFLGNRSLTYKLIYDSHEIIKFSVSHERVAFMNPIQTMLSF

LIEKVSLKDAYESLENCPDFLKIADFSLR SVVLCSQIDVGFWVRNGMSVLHQASYYKNNPELGS

YSRDIHLNQLAIIWERDDLPRVIYNILDR WELLDWFMGEAEYQHTVYEDKISFMIQQFIAFIYQ

ILTERQYFKTFSLLRDRRMDMIKNSIMYNLYMKPLSYSKLLKSVPDYLTDDTTEFDEALEEVSV

FVEPKGLADNGVFKLKAALYAKIDPLKLLNLENEFESSATIIKTHLAKNKDEVSKVVLIPQVST

KLLDKGAMNLGEFTRNTVFAKVIYKLLQVCLDMEDSTFLNELLHLVHGIFKDDELINGKDSIPE

AYLAKPICNLLLSIANAKSDIFSESIVRK ADYLLEKMIMKKPDEIFESLIASFGNQYIDNYKDK

K LSQG WLQE TEKER KRRM AKKH QARL LAKF NNQQ SKFM KEHE SEF DEQDN DVD MDGE KVYE SE

DFTCALCQDSSSTDFFVIPAYHDHTPIFRPGNIFNPREFMAKWDGFYNDDDKQAYIDDEVLESL

KENGTRGSRKVFVSCNHHIHHNCFKRYVQ KKRFSSNAFICPLCQTFSNCTLPICPTSRANTGLS

L DMFL KSEL SLDIL SRL FKPF TEDN YRTI NSIF SLMV SQCQ GFDK WRKH VNFT HKDV SLVL SV

HWANTISMLEVASRLEKPHNISFFRSREQ KYKTLKNILICIMLFTFVIGKPSMEFEPYPVESDI

ICNQNQLFQYIVRKSLFSPASLRETITEALTVFCKQFLDDFVQGLSDAEQVDKLYTEAKKLGDV

YNVDESILITLMSITVVKTEGLESRSIYDLAYTSLLKSLLPTIRRCLVMVKVLHELVKDSENET

MVIDGFDVEEELEFEGLPGFVDKALKLIT DKESFVDLFKTKQAIVPSHPYLERIPYEYCGIVKL

IDLSKFLNTYVTQSKEIKLREERSQHMKNADNRLDFKICLTCGVKVHLRADRHEMTKHLNKNCF

KSFGAFLMPNSSEVCLHLTQPPSNIFVSAPYLNSHGEVGRNAMRRGDLTTLNLKRYEHLNRLWI

NNEIPGYISRVMGDEFRVTILSNGFLFAF NREPRPRRVPPTDEDDEDMEEGEEGFFTEENDDMD

VDDETGQAANLFGVGAEGIGDGGVRNFFQ FFENFRNTLQPQGNDDEDAPQNPPPILQFLGPQFD

GATIIRNTNQRNLDEDDSSENDDSDEREIW

SEQ ID NO: 12

Secuencia de aminoácidos de IMA1p codificada por un alelo Sc corto de levadura híbrida 1

MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTH KLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD

WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGS AWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY

E SAVGYWLDHGVDGFRIDVGS L Y S K W G L P D A P W D K N S TWQS SDPYTLNGPRIHEFHQEMNQF

IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD

WKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQP RSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY

QGQELGQINFKNWSVEKYEDVEIRNNYRL IKEECGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP

NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVE EEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF

IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW

EGRIHINE

SEQ ID NO: 13

MGYDIA NYE KVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITD LVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD

WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGS AWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY

E SAVG YWLD HGVD GFR IDVG SLY SKWG LPDA PWDK NST WQSS DPYT LNG PRIH EFH QEMN QF

IRNRVKGGREIMTVGEMQHASDETKRLYT SASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD

WKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQP RSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY

QGQELGQINFKNWSVEKYEDVEIRNNYRL IKEECGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP

NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVE EEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF

IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW

EGRIHINE

SEQ ID NO: 14

Secuencia de aminoácidos de IMA1p codificada por un alelo Sc largo de levadura híbrida 1

M TISS AHPE TEPKWWKEATFYQIYPASFK DSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPLYD

SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKT

NPKRDWSFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKS YFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC

RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYS KVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ

EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDET KRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP

FELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLE NHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTG

TLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTP

MPWTPNE PNAGF SGP SAKPWFYLND SFRE GINVED EIKDPNSV L NFWK EALK FRKAH KDITVYG

YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAAL NFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR

T LKPW EGRI YISE

SEQ ID NO: 15

MT ISSA HPEA EPKW WKEATFYQIYPASFK DSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGADAIWISPFYD

SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFAL IEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWLKESRSSKT

NPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKS YFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC

RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ

EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDET KKLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP

FELKDWKIALAELFRFINGTDCWSTIYLE NHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTG

T LYVYQ GQELGQINF KNWPVE KYE DVEIRNN YNAIKEEHGENSEEMKKF LEAI ALIS RDHARTP

MQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFRE GINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYG

YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAAL NFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR

TLKPWEGRIYISE

SEQ ID NO: 16

Secuencia de aminoácidos de IMA5p de levadura híbrida 1 codificada por un alelo no Sc de un gen tipo IMA5

M TIIHNPKWWKEATIYQIYPASFKDSNNDGWGDLAGITSKLDYI KELGVDAIWVCPFYDSPQED

MGY DI ANYEKVWPRYGTSEDCFQMIEESHKRGIK VIVDLVINHCSEEHEWFKESRSSKTNAKRD

WFFWKPPKGYEIDGTPIPPNNWRSFFGGS AWKYDENTEEFFLHVFAPGQPDFNWENKECRQAIY

DSSVGFWLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGL PDASITDPTVPYQDGTDFFVNGPRIHEYHKEMRQY

MYTQIPEGKEIMTVGEVGIGNEKDFKDYT SSKEEEFNMMFNFKHTSVGESPEFKYELIPFTLKD

F KLAL AESF LFIE GTDCWSTIYLENHDQP RSVSRFGSDSPEWREISSKMLATLIISLTGTVFIY

QGQELGMPNFKNRKIEQIKCVEGTGTYGA IKRDYGEDSEKMKKFYEALALISRDHGRTPFPWSG

E KPYA GFSK NAKP WIDIN ESFVEGIN AEAE LNDE NSVFFFWKR A LQVRKEH K NMLV YGDNFQFY

DLDNEKLFMFTKDSGDKKMFAVFNFCSDS TEFSVPDNKASYDMFFGNYANSDGKSYTLKPWEGR

LYYSN

SEQ ID NO: 17

Secuencia de aminoácidos de IMA5p de levadura híbrida 1 codificada por un alelo Sc de un gen de tipo IMA5

MT IIHNPKWWKEA TV YQIYPASNKD SNND GWGD LAGIT SKL DYVKE LGVDAIWVC LFYD SPQE D

MGYDIANYEKVWPRYGTNEDCFQMIEEAH KRGIKVIVDLVINHCSEEHEWFKESKSSKTNPKRD

WFFWRPPKGFDEKGNPIPPNNWRSFFGGS AWRYDEKTGEFFLHVFAPGQPDFNWENEECRKAIY

DSSVGYWLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGL PDAPITDPTVPYQKGTEFFINGSRIHEYHKEMRKY

MLSQIPEGKEIMTVGEVGVGNEEDFRDYT SAKEGELNMMFNFKHTSVGESPECKYELIPFTLKD

FK LALAESFLFIENTDCWSTIYLENHDQPRSVSRFGSDSPKWRAISSKML ATLIISLTGTVFIY

QGQELGMSNFKNRRIEQIKCVEGTGTYAA IKRDYGEDSEKMKKFFEALALISRDHGRTPFPWSA

DEPSAGFSKDAKPRIDMNESFRDGINAEA ELKDKNSVFFFWKKALQVRKEHKDILVYGHNFQFI

DLDNDKLFMFTKDTDNKKMFAVFNFSSDD TDFSVPDNEASYTMFFGNYANSNGDSRTLQPWEGR

LYLLK

SEQ ID NO: 18

Secuencia de aminoácidos de AGT1 de levadura híbrida 1 codificada por un alelo no Sc

MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTT VMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQL

SDSDEDKENVIRVAEATDDANEANNEEKSMTLRQALRKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLS

ALYALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQIGLNMCVLCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALS

LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPWGCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ

IFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNR

ILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERLRASKSGSFFSCFKGV DGRRTRLACLTWVAQNSSGA

VLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYCLGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFI

IGGMGFASGS SASNAAGGLLL AL SF FYNA GI GAWYC I VAEIP SAELRT KTIV LARI CYNLMAV

FNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFT ALTLAWVIIDLPETTGRTFSEINELFSQGVPARKF

AS TWDP FGKR GLQN RPQ VDNI IDRF SSA SQQA L

SEQ ID NO: 19

Secuencia de aminoácidos de AGT1 de levadura híbrida 1 codificada por un alelo Sc

MKNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDI VNQQEVFNTENFEEGRKDSAFELDHLEFTINSAQL

GDSDEDNENVINETNTTDDANEANSEEKS MTLKQALLIYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLN

ALYALPVFQRKFGTLNGEGSY E ITSQ WQIGL NMCVQCGEIIGLQITPYMVEFMGNRYTMITALG

LLTAYVFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPWGCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ

IFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSR

ILSGKGAEKDIQIDLTLKQIELTIEKERL LASKSGSFLDCFKGVNGRRTRLACLTWVAQNTSGA

CLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSVIQYCLGLAGTLCSWVISGRVGRWTILTYGLAFQMVCLFI

IGGMGFGSGSGASNGAGGLLLALSFFYNAGI G A W Y C I VTEIPS AELRTKT IVLARI CYNIMAV

INAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFT AVTLAWVIIDLPETSGRTFSEINELFNQGVPARKF

AS TWD PFGK GKTQ HDSL DDES ISQ SSSI KQRE LNAA DKC

SEQ ID NO: 20

MK NIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDIVNQQEVFNTENFEEGRKDSAFELDHLEFTINSAQL

GDSDEDNENVINETNTTDDANEANSEEKS MTLKQALLIYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLN

AL YALPVFQRKFGTLNGEGSYEI TSQW QIGLNMCV Q CGE11GLQITPYMVEFMGNRYTMITAL G

LLTAYVFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPW GCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ

IFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQW IWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSR

ILSGKGAEKDIQIDLTLKQIELTIEKERL LASKSGSFFDCFKGVNGRRTRLACLTWVAQNTSGA

CLLGYSAYFFERAGMATDKAFTF5VIQYCLGLAGTLCSWVISGRVGRWTILTYGLAFQMVCLFI

IGGMGFGSGSGASNGAGGLLLALSFFYNA GIGAVVYCIVTEIPSAELRTKTIVLARICYNIMAV

INAIL TP YMLNVS DWNWGAKT GL YWGGF TAVT LAWVIIDLPETSGRTFSEINELFNQ GVPARKF

ASTVVDPFGKGKTQHDSLDDESISQSSSI KQRE LNAADKC

SEQ ID NO: 21

Secuencia de aminoácidos de IMA1p codificada por un alelo largo de IMA1 de levadura híbrida 4

MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYD

SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKT

NPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKS YFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC

RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ

EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP

FELKDWKIALAELFRFINGTDCWSTIYLE NHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTG

TLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTP

MQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFRE GINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYG

YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAAL NFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR

TLKPWEGRIY I S E .

SEQ ID NO: 22

MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFK DSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYD

SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFAL IEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKT

NPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKS YFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC

RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYS KVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ

EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDET KRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP

FELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLE NHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTG

TLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIR NNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTP

MQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFRE GINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYG

YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAAL NFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR

TL KPWE GRI YISE .

SEQ ID NO: 23

Secuencia de aminoácidos de IMA1p codificada por un alelo largo de IMA1 de levadura híbrida 7

MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFK DSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYD

SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFAL IEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKT

NPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKS YFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC

RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYS KVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ

EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDET KKLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP

FELKDWKIALAELFRFINGTDCWSTIYLE NHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTG

T LYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTP

MQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFRE GINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYG

YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAAL NFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR

T LKP WEGR IYIS E.

SEQ ID NO: 24

MT ISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYD

SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFAL IEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKT

NPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC

RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVG5LYS KVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ

EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDET KRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP

FELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIY LENHD QPRS ITRFGDD SPKNRVISGKLL SVLLSALTG

TLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTP

MQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFRE GINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYG

YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAAL NFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR

TLKPWEGRIY IS E .

SEQ ID NO: 25

M TISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSN DDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYD

SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFAL IEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKT

NPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKS YFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC

RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYS KVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ

EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDET KRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP

FELKDWKIA LAELFRY I NGTD CWSTIY LEN HDQP RSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTG

TLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIR NNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTP

MQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFRE GINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYG

YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAAL NFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR

TLKP WEGR IYIS E.

SEQ ID NO: 26

Secuencia de aminoácidos de AGT1 truncada codificada por un alelo Sc de levadura híbrida 4

MKNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDI VNQQEVFNTENFEEGKKDSAFELDHLEFTTNSAQL

GDSDEDNENMINEMNATDEANEANSEEKS MTLKQALLKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLN

ALYALPVFQRKFGTLNGEGSYEITSQWQI GLNMCVQCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALG

LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPWGCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ

IFA5GIMKNSQENLGNSDLDYKLPFALQW IWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSR

ILSGKGAEKDIQVDLTLKQIELTIEKERL LASKSGSFFDCFKGVNGRRTRLACLAWVAQNTSGA

CLLGYSTYFF.

SEQ ID NO: 27

Secuencia de aminoácidos de AGT1 codificada por un alelo no Sc de levadura híbrida 4

MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTT VMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQL

SDSDEDKENVIRVAEATDDANEANNEEKS MTLRQALRKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLS

ALYALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQI GLNMCVLCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALS

LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPWGCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ

IFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQW IWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNR

ILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERL RASKSGSFFSCFKGVDGRRTRLACLTWVAQNSSGA

VLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYC LGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFI

IGGMGFASGS SASNAAGGLLLAL SFFYNAGIGAVVYCI V AEIPS AELRTKTIVLARICYNLMAV

FNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGDFT ALTLAWVIIDLPETTGRTFSEINELFSQGVPARKF

AST WDPF GKRGL QNR PQ VDN 11DRFS SASQQAL .

SEQ ID NO: 28

MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTTVMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQL

SDS DEDKENVIRVAEAT DDAN EANNEE KSMT LRQALRKYPKAALW SILVST TLVMEGYDTALL S

AL YALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQIGLNMCVLCGEMIG LQ ITTYMVEFMGNRYTMITAL S

LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPW GCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ

I FASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQW IWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNR

ILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERLRASKSGSFFSCFKGVDGRRTRLACLTWVAQNSSGA

VLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYC LGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFI

I GGMG FASG SSASN AAGG LLLA LSFF YNAG IGA WYCIV AEI PSAE LRTK TIVL ARIC YNLM AV

FNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTALTLAWVIIDLPETTGRTFSEINELFSQGVPARKF

AST WDPFGK RGLQ NRP QVDN I IDRFS SASQQAL .

SEQ ID NO: 29

Secuencia de aminoácidos de AGT1 truncada codificada por un alelo Sc de levadura híbrida 7

MKNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDI VNQQEVFNTENFEEGKKDSAFELDHLEFTTNSAQL

GDSDEDNENMINEMNATDEANEANSEEKS MTLKQALLKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLN

A LYAL PVFQRKFGTLNGEGSY E ITSQWQIGLNMCV QCGEMIG L QITTYMVEFMGNRYTMITALG

LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPW GCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ

IFASGIMKNSQENLGNSDLDYKLPFALQW IWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSR

ILSGKGAEKDIQVDLTLKQIELTIEKERL LASKSGSFFDCFKGVNGRRTRLACLAWVAQNTSGA

CLLGYSTYFF.

SEQ ID NO: 30

Secuencia de aminoácidos de AGT1 codificada por un alelo Sc de levadura híbrida 7

M KNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDIVNQQE VFNTENFEEGRKDSA FELDHLEFTINSAQL

GDSDEDNENVINETNTTDDANEANSEEKS MTLKQALLIYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLN

ALYALPVFQRKFGTLNGEGSY E ITSQWQIGLNMCVQCGEIIG LQ ITPYMVEFMGNRYTMITALG

LLTAYVFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPW GCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ

IFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQW IWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSR

ILSGKGAEKDIQIDLTLKQIELTIEKERLLASKSGSFFDCFKGVNGRRTRLACLTWVAQNTSGA

CLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSVIQYCLGLAGTLCSWVISGRVGRWTILTYGLAFQMVCLFI

I GGMG FGSG SGAS NGAG GLLL ALSF FYNA GIGA WYCI VTEI PSAE LRTK TIVL ARI CYNI MAV

INAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTAVTLAWVIIDLPETSGRTFSEINELFNQGVPARKF

A STWD PFG KGKT QHDS LDD ESIS QSSS IKQ RELN AADK C.

SEQ ID NO: 31

Secuencia de aminoácidos de AGT1 codificada por un alelo no Sc de levadura híbrida 7

MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTT VMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQL

SDSDEDKENVIRVAEA TD DANEANNEEKSMTLRQALRKYPKAAL WSILVSTT L VMEGYDTALLS

ALYALP VFQR KFGT MNAE GSYEIT SQW QIGLNMCVLCGEMIG LQ ITTYMVEFMG NRY TMIT ALS

LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPW GCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ

I FASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQW IWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNR

ILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERL RASKSGSFFSCFKGVDGRRTRLACLTWVAQNSSGA

VLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYCLGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFI

I GGMG FASG SSAS NAAG GLLL ALSF FYNA GIGA WYCI VAEI PSAE LRTK TIVL ARIC YNLM AV

FNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFT ALTLAWVIIDLPETTGRTFSEINELFSQGVPARKF

AST WD PFGK RGL QNRP QVD NI IDRFS SASQQAL .

SEQ ID NO: 32

MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTTVMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQL

SDSDEDKENVIRVAEATDDANEANNEEKS MTLRQALRKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLS

ALYALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQI GLNMCVLCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALS

LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPW GCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ

IFA5GIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNR

ILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERLRASKSGSFFSCFKGV DGRRTRLACLTWVAQNSSGA

VLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYC LGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFI

IGGMGFASGSSASNAAGGLLLALSFFYNA GIGAVVYCIVAEIPSAELRTKTIVLARICYNLMAV

FNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTALTLAWVIIDLPETTGRTFGEINELFSQGVPARKF

AST WD P FGK RG LQN RPQ VD N11DRFS SASQQAL .

SEQ ID NO: 33

Secuencia de aminoácidos de SHORT_IMA1_from Hybrid yeast_7_

MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTH KLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD

WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGS AWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY

E SAVG YWLD HGVDG FRID VGSL YSKW GLPD APVV DKNS TWQS SDP YTLNG PRI HEFH QEMN QF

IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYT SASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD

WKIALAELFR FING TDCW STIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY

QGQELGQINFKNWSVEKYEDVEIRNNYRL IKEECGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP

NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVE EEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF

IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSD ATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW

EGRIHINE.

SEQ ID NO: 34

Secuencia de aminoácidos de IMA5_from Hybrid yeast_1

MT IIHNPKWWKEATVYQIYPASNKDSNNDGWG DLAGITSKLDYVKELGVDAIWVCLFYDSPQED

MGYDIANYEKVWPRYGTNEDCFQMIEEAH KRGIKVIVDLVINHCSEEHEWFKESKSSKTNPKRD

WFFWRPPKGFDEKGNPIPPNNWRSFFGGS AWRYDEKTGEFFLHVFAPGQPDFNWENEECRKAIY

DSSVGYWLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGL PDAPITDPTVPYQKGTEFFINGPRIHEYHKEMRKY

MLSQIPEGKEIMTVGEVGVGNEEDFRDYT SAKEGELNMMFNFKHTSVGESPECKYELIPFTLKD

FKLALAESFLFIENTDCWSTIYLENHDQPRSVSRFGSDSPKWRAISSKML ATLIISLTGTVFIY

QGQELGMSNFKNRRIEQIKCVEGTGTYAA IKRDYGEDSEKMKKFFEALALISRDHGRTPFPWSA

DEPSAGFSKDAKPWIDMNESFRDGINAEA ELKDKNSVFFFWKKALQVRKEHKDILVYGHNFQFI

DLDNDKLFMFTKDTDNKKMFAVFNFSSDN TDFSVPDNEASYTMFFGNYANSNGDSRTLQPWEGR

LYLLK

SEQ ID NO: 35

Secuencia de aminoácidos del alelo Sc_IMA5_Hybrid_7 híbrido

MTIIHNPKWWKEATVYQIYPASNKDSNND GWGDLAGITSKLDYVKELGVDAIWVCLFYDSPQED

MGYDIANYEKVWPRYGTNEDCFQMIEEAH KRGIKVIVDLVINHCSEEHEWFKESKSSKTNPKRD

WFFWRPPKGFDEKGNPIPPNNWRSFFGGS AWRYDEKTGEFFLHVFAPGQPDFNWENEKCRKAIY

DSSVGYWLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGL PDAPITDPTVPYQKGTEFFINGPRIHEYHKEMRKY

MLSQIPEGKEIMTVGEVGVGNEEDFRDYT SAKEGELNMMFNFKHTSVGESPECKYELIPFTLKD

FKLALA ESF LFIENTDCWSTIYLENHDQPRSVSR FGSDSPKWRAISSKMLATLIISLTGTVFIY

QGQELGMSNFKNRRIEQIKCVEGTGTYAA IKRDYGEDSEKMKKFFEALALISRDHGRTPFPWSA

DEPSAGFSKDAKPWIDMNESFRDGINAEAELKDKNSVFFFWKKALQVRKEHKDILVYGHNFQFI

DLDNDKLFMFTKDTDNKKMFAVFNFSSDN TDFSVPDNEASYTMFFGNYANSNGDSRTLQPWEGR

LYLLK.

SEQ ID NO:36

Secuencia de aminoácidos del alelo nonSc_IMA5_Hybrid_7; faltan los primeros 6 aminoácidos de la secuencia genómica

PKWWKEATIYQIYPASFKDSNNDGWGDLA GITSKLDYIKELGVDAIWVCPFYDSPQEDMGYDIA

NYEKVWPRYGTSEDCFQMIEESHKRGIKV IVDLVINHCSEEHEWFKESRSSKTNAKRDWFFWKP

PKGYEIDGTPIPPNNWRSFFGGSAWKYDE NTEEFFLHVFAPGQPDFNWENKECRQAIYDSSVGF

WLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGLPDASIT DPTVPYQDGTDFFVNGPRIHEYHKEMRQYMYTQIP

EGKEIMTVGEVGIGNEKDFKDYTSSKEEE FNMMFNFKHTSVGESPEFKYELIPFTLKDFKLALA

ESFLFIEGTDCWSTIYLENHDQPRSVSRF GSDSPEWREISSKMLATLIISLTGTVFIYQGQELG

MPNFKNRKIEQIKCVEGTGTYGAIKRDYG EDSEKMKKFYEALALISRDHGRTPFPWSGEKPYAG

FSKNAKPWIDINESFVEGINAEAELNDEN SVFFFWKRALQVRKEHKNMLVYGDNFQFYDLDNEK

LFMFTKDSGDKKMFAVFNFCSDSTEFSVPDNKASYDMFFGNYANSDGKSYTLKPWEGRLYYSN.

SEQ ID NO: 37

Secuencia de aminoácidos de PTR2 codificada por un alelo Sc de levadura híbrida 7 (secuencia incompleta)

NSTERYNLSPSPEDEDFEAPTEEEMQTLR HVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYM

EYGPNDSPKGVLSLNSQGATGLSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFI

L FITSIPSVGNRDSAIGGFIAAIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKS GERVIVD

S NITL QNVF MFFYF MINV GSLS LMAT TELE YHK GFWAA YLL PFCF FWIA WTLI FGKK QYIQ RP

IGDKVIAKSFKVCWILTKNKFDFNAAKPSVHPEKNYPWNDKFVDEIKRALAACKVFIFYPIYWT

QYGTMISSFITQASMMELHGIPNDFLQAF DSIALIIFIPIFEKFVYPFIRRYTPLKPITKIFFG

FMFGSFAMTWAAVLQSFVYKAGPWYNEPL GHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYA

YSKAPASMKSFIMSIFLLTNAFGSAIGCA LSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWLCFRKY

NDTEEEMNAMDYEEEDEFDLNPISAPKANDIEILEPMESLRSTTKY.

SEQ ID NO: 38

Secuencia proteica de PTR2 codificada por un alelo no Sc de levadura híbrida 7

MLNHLSQGSDDIQDEKQGDFPVIEEEKNQ TVTLKDSYVSDDAANSTEHYNLSPSLEEDEFEAPT

DEELRSLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSER FSYYGLSAPFQNYMEYGPKDTPKGVLSLNSQGATG

LSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNT ICCGTAIYIAGIFILLITSIPSVGNRDSALGGFIA

S IILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSL

SLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWVAV VTLVFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFRVCWILTKNKF

DFNAAKPSVHPEKEYPWNDKFVDEIKRALAACKVFVFYPIYWTQYGTMISSFITQAGMMELHGI

PNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFIYPFIR RYTPFKPITKIFFGFMFGSLAMTWAAVLQSFVYKA

GPWYSAPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLIS FSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNA

FGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVAC FISGCLFWFCFRKYNDTEEEMNAMDYEEEDEFDLN

PISQPKGNDIEILEPMGSLKSTTKY.

SEQ ID NO: 39

Secuencia de aminoácidos de DAL5 codificada por un alelo Sc de levadura híbrida 7

MSADASTNSNASLDEKNLNITSEAEIKNE DVTAEPVLSTVLSPNGKIVYISDKVDEAMKLAEEA

KEIEVTPEEDRKLRWKIDYCMFPLMCILY AVQFMDKISTSSAAVMGLRTDLKMHGDQYSWVTSA

FYFGYLFMNLGPVQFIFQRTSHMSKMLAV FIVIWGMLLALHAAPTVKYPSFIVLRVLLGCAESV

VTPCFTIITAQYWKTEEQFTRVSIWFGMN GLGSILINAIAYGVYIHQDSYAIKGWRTLFVITGV

ITIFIGILIFLWIPDDPSKARFLSKREKL MVVQRIRSNQQGFGNHEIKKYQIIEALKDVRTWLY

FLFTVS SNIP NGGI SSFMSILLNSDFGYSSKETLLMGLPTGAVELVGCPLFGILAVYAANKKIP

FWKYKLSWAIFAAVLALIASCMLGFATNS KKARLAGAYLWYISPVSFICVLSNISANSSGYSKK

WT VSSI NLVA YAAA NLAG PQTF IAKQ APKY HGA KVAM WCYA VMIV LLSI LLIV NLRE NKRR DK

IAAERGFPEET ENL EFSD LTDF ENPN FRYT L.

SEQ ID NO: 40

Secuencia de aminoácidos de DAL5 codificada por un alelo no Sc de levadura híbrida 7

MS GGAS TNSN ASID EKNL NITS EAEI KNED VYAE PVLS TVLS PNG KWYI SDKV DEAM KLAD EA

KEIEVTPEEDRKLRWKIDYCMFPLMCILY AVQFMDKISTSSAAVMGLRTDLKMHGDQYSWVTSA

FYFGYLFMNLGPVQLIFQKSKHMSKMLAI FIIVWGLLLALHAVPSVKYSSFIALRVLLGCAESV

VTPCF TIITAQYWKTEEQFTRISIWFGMNGLGSILIN AIAYGVYIHQESYAIKGWRALFVITGV

IT IF'VGALIFLWIPDDPSKARFL SKREKLMVVQRIRSNQQGFGNHEIK K YQIVEALKDVRTWLY

FLFTVSSNIPNGGISSFMSILLNSDFGYL SKDTLLMGLPTGAVELVGCPLFGILAVYAANKKIP

FWKYKLAWAIF AAVL AL IASCMLGFAT SSKKARLAGAYLWYISPVSFICVLSNI SANSSGYSKK

WT VSSI NLAA YAAA NLAG PQTF IAKQ APKY HGAK VAMW CYAV MIVL LSAL LLIN MRE NKRRD K

IAAERGYPEETANLEFSDLTDFENPNFRYTL.

SEQ ID NO: 41

Secuencia de aminoácidos de UBR1 codificada por un alelo Sc de levadura híbrida 7 (secuencia incompleta)

MSVADDDLGSLQGHIRRTLRSIHNLPYFR YTRGPTERADMSRALKEFIYRYLYFVISNSGENLP

TLFNAHPKQKLSNPELTVFPDSLEDAVDI DKITSQQTIPFYKIDESRIGDVHKHTGRNCGRKFK

IGEPLYRCHECGCDDTCVLCIHCFNPKDHVNHHVCTDICTEFTSGICDCGDEEAWNSPLHCKAE

EQENDISEDPATNADIKEEDVWNDSVNIA LVELVLAEVFDYFIDVFNQNIEPLPTIQKDITIKL

REMTQQGKMYERAQFLNDLKYENDYMFDG TTTAKTSPSNSPEASPSLAKIDPENYTVIIYNDEY

HNYSQATTALRQGVPDNVHIDLLTSRIDG EGRAMLKCSQDSSSVLGGFFAVQTNGLSATLTSWS

EY LHQE TCKY IILW ITHC LNIP NSSF QTTF RNMM GKTL CSEY LNAT ECRD MTP WEKY FSNK FD

KNDPYRYIDLSILADGNQIPLGHHKILPE SSTHSLSPLINDVETPTSRTYSNTRLQHILYFDNR

YWKRLRKDIQNVIIPTLASSNLYKPIFCQQVVEIFNHITRSVAYMDREPQLTAIRECVVQLFTC

PTNAKNIFENQSFLDIVWSIIDIFKEFCK VEGGVLIWQRVQKSNLTKSYSISFKQGLYTVETLL

SKVHDPNIPLRPKEIISLLTLCKLFNGAW KIKRKEGEHVLHEDQNFISYLEYTTSIYSIIQTAE

K VSEK SKDS IDSKLFLNAIRIISSFLGNRSLTYKLIYDSHEVIKFSVSHERVAFMNPLQTMLSF

LIEKVSLKDAYEALEDCSDFLKISDFSLR SVVLCSQIDVGFWVRNGMSVLHQASYYKNNP

SEQ ID NO: 42

Secuencia de aminoácidos de UBR1 codificada por un alelo no Sc de levadura híbrida 7

MS FTDN GLGS LKAH IRRTLRSIHNLPYFR FTRGPTERADMSRALKEFIYRYLYFIISNDGENLS

TLFTAHPKQKSSNQELAVFPESLEDALDV DKITSQGTFPFYKIDESKIGDVHKHTGRNCGRKFK

IGEPLYRCHECGCDDTCVLCIHCFNPKDHINHHVCTDICSEFTSGICDCGDEEAWNSSLHCKAE

EQGNDTSEDPSNFDSTKQKDVWNDPECIA LVELVLSEVFDYFIDVFNQNIEPLPTIQKDITIKL

REMTQQGKMYERAQFLNDLKYENDYMFDG TTTAKTSPSNSPEASPSLAKIDPENYTVIIYNDEY

HNYSQATTALRQGVPDNVHIDLLTSRIDGEGRAMLKCSQDLSSVLGGFFAVQTNGLSATLTSWS

EY LHQE ACKY IILW ITHC LNIP NPSF QITF RNMM GKSL CSEY LNAT ESRD MTPW EKYF STKF D

KDDPYRYIDLSVLAEGNQIPLGHHKVLPE SSTHSLSTLINDVENLTSKEYSNTRLQHILYFDNR

YW KRLR KDIQ NVIIPTLASSTLYKPIFCQQVVEIFNHITRSVAYMD REPQLTAIRECVVQLFTC

PT NTRN IFEN QSFL DILW SIIDIFKEFCKVEAGVLIWQRVQKSNLTKSYSLSFKQGLYTVETLL

SKVNDPNITIRPKVFISLLTLGKLFNGAW KIKRKEGEHVLHEDQNFISYLEYTTSIYSIIQTAE

KVLEKSHDSLDLNLVLNAIRIVSSFLGNR SLTYKLIYDSHEIIKFSVSHERVAFMNPIQTMLSF

LIEKVSLKDAYESLENCPDFLKIADFSLRSVVLCSQIDVGFWVRNGMSVLHQASYYKNNPELGS

YSRD IH LNQL AIIWERDDLPRVIYNILDRWELLDWFMGEAEYQHTVYEDKISFMIQQFIAFIYQ

ILTERQYFKTFSLLRDRRMDMIKNSIMYNLYMKPLSYSKLLKSVPDYLTDDTTEFDEALEEVSV

FVEPKGLADNGVFKLKAALYAKIDPLKLLNLENEFESSATIIKTHLAKNKDEVSKVVLIPQVST

KLLDKGAMNLGEFTRNTVFAKVIYKLLQVCLDMEDSTFLNELLHLVHGIFKDDELINGKDSIPE

AY LAKP ICNL LLSIANAKSDIFSESIVRKADYLLEKMIMKKPDEIFESLIASFG NQYIDNYKDK

KLSQGVNLQETEKERKRRMAKKHQARLLAKFNNQQSKFMKEHESEFDEQDNDVDMDGEKVYESE

DFTCALCQDSSSTDFFVIPAYHDHTPIFRPGNIFNPREFMAKWDGFYNDDDKQAYIDDEVLESL

KENGTRGSRKVFVSCNHHIHHNCFKRYVQKKRFSSNAFICPLCQTFSNCTLPICPTSRANTGLS

LDMFLKSELSLDILSRLFKPFTEDNYRTI NSIFSLMVSQCQGFDKVVRKHVNFTHKDVSLVLSV

H WANT ISMLEVASRLEKPHNISFFRSREQKYKTL KNILIC IMLFTFV I GKP SMEFEPYPVE SDI

ICNQNQLFQYIVRKSLFSPASLRETITEA LTVFCKQFLDDFVQGLSDAEQVDKLYTEAKKLGDV

YNVDESILITLMSITVVKTEGLESRSIYDLAYTSLLKSLLPTIRRCLVMVKVLHELVKDSENET

MVIDGFDVEEELEFEGLPGFVDKALKLIT DKESFVDLFKTKQAIVPSHPYLERIPYEYCGIVKL

IDLSKFLNTYVTQSKEIKLREERSQHMKN ADNRLDFKICLTCGVKVHLRADRHEMTKHLNKNCF

KSFGAFLMPNSSEVCLHLTQPPSNIFVSAPYLNSHGEVGRNAMRRGDLTTLNLKRYEHLNRLWI

NNEIPGYISRVMGDEFRVTILSNGFLFAF NREPRPRRVPPTDEDDEDMEEGEEGFFTEENDDMD

VDDETGQAANLFGVGAEGIGDGGVRNFFQ FFENFRNTLQPQGNDDEDAPQNPPPILQFLGPQFD

GATIIRNTNQRNLDEDDSSENDDSDEREIW.

SEQ ID NO: 43

Secuencia de aminoácidos de PTR2 codificada por un alelo Sc de levadura híbrida 1

MLNHPSQGSDDAQDEKQGDFPVIEEEKTQ AVMLKDSYVSDDVANSTERYNLSPSPEDEDFEAPT

EEEMQTLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPNDSPK GVLSLNSQGATG

LSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNT ICCGTAIYIAGIFILFITSIPSVGNRDSAIGGFIA

AI ILIG IATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQ NVFMFFYFMINVGSL

SLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWIAV VTLIFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFKVCWILTKNKF

DFNAAKPSVHPEKNYPWNDKFVDEIKRALAACKVFIFYPIYWTQYGTMISSFITQASMMELHGI

PNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFVYPFIR RYTPLKPITKIFVGFMFGSFAMTWAAVLQSFVYKA

GPWYNEPLGHNTPNHVHV C WQIP AYVL ISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFI M SIFLLTNA

FGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVAC FISGCLFWLCFRKYNDTEEEMNAMDYEEENEFDLN

PISAPKANDIEILEPMDSLRSTTKY.

SEQ ID NO: 44

MLNHLSQGSDDIQDEKQGDFPVIEEEKNQ TVTLKDSYVSDDAANSTEHYNLSPSLEEDEFEAPT

DEE LRS LRHVGGKIPMRCWLIAIVE LS ERF SYYGL SAFFQNYMEYGPKDTPKGVL SLNS QGAT G

LSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNT ICCGTAIYIAGIFILLITSIPSVGNRDSALGGFIA

SIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKP SIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSL

SLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWVAV VTLVFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFRVCWILTKNKF

DFNAAKPSVHPEKEYPWNDKFVDEIKRALAACKVFVFYPIYWTQYGTMISSFITQAGMMELHGI

PNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFIYPFIR RYTPFKPITKIFFGFMFGSLAMTWAAVLQSFVYKA

GPWYSAPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLIS FSEIF A SITGLEYAYSKAPASMKSFI M SIFLLTNA

FGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVAC FISGCLFWFCFRKYNDTEEEMNAMDYEEEDEFDLN

P ISQP KGND IEIL EPMG SLKS TTKY.

SEQ ID NO: 45

Secuencia parcial de aminoácidos de UBR1 codificada por un alelo Sc de levadura híbrida 1

MSVADDDLGS LQGH IRRT LRSIHNLPYFRYTRGPTERADMSRALKEFIYRYLYFVISNSGENLP

TLFNAHPKQKLSNPELTVFPDSLEDAVDI DKITSQQTIPFYKIDESRIGDVHKHTGRNCGRKFK

IGEPLYRCHECGCDDTCVLCIHCFNPKDHVNHHVCTDICTEFTSGICDCGDEEAWNSPLHCKAE

EQENDISEDPATNADIKEEDVWNDSVNIALVELVLAEVFDYFIDVFNQNIEPLPTIQKDITIKL

REMTQQGKMYERAQFLNDLKYENDYMFDGTTTAKTSPSNSPEASPSLAKIDPENYTVIIYNDEY

HNYSQATTALRQGVPDNVHIDLLTSRIDGEGRAMLKCSQDL.

Ejemplos

La invención se ilustra adicionalmente mediante los ejemplos siguientes que, sin embargo, no se deben interpretar como limitantes de la invención.

En l m l n l l v r i i n :

La secuencia genómica de la levadura híbrida 1 se proporciona como SEQ ID NO: 1 en la solicitud de patente danesa prioritaria PA 201470825. La SEQ ID NO: 1 de PA 201470825 muestra la secuencia de armazones ensamblados a partir de la secuencia genómica del híbrido 1. Las secuencias se proporcionan en formato FASTA. El término “armazón”, como se emplea a este respecto, se refiere a una porción de la secuencia del genoma reconstruida a partir de clones solapados. El término “clon solapado” se refiere a una secuencia de solapamiento contigua que procede del reensamblaje de fragmentos de ADN cortos.

La SEQ ID NO: 1 de PA 201470825 proporciona la secuencia de un total de 1629 armazones, numerados del número 0 al 1628. En la SEQ ID NO: 1 de PA 201470825, las secuencias de cada armazón se proporcionan separadas por el término “>Scaffold_X”, donde X indica el número del armazón que tiene la secuencia siguiente.

Por tanto, el genoma de la levadura híbrida 1 comprende preferiblemente todos los armazones 0 a 1628 distribuidos a lo largo de una pluralidad de cromosomas.

La secuencia genómica de la levadura híbrida 1 también está disponible en DDBJ/EMBL/GenBank con el número de entrada LOQJ00000000. Por tanto, el proyecto de secuenciación del genoma completo correspondiente a la levadura híbrida 1 se ha depositado en DDBJ/EMBL/GenBank con la entrada LOQJ00000000. La versión descrita en esta patente es la versión LOQJ01000000.

L r n i n f r n l i i n :

El proyecto de secuenciación del genoma completo muestra la secuencia de los armazones ensamblados a partir de la secuencia genómica de la levadura híbrida 1. El término “armazón”, como se emplea a este respecto, se refiere a una parte de la secuencia del genoma reconstruida a partir de clones solapados. El término “clon solapado” se refiere a una secuencia de solapamiento contigua que procede del reensamblaje de fragmentos de ADN cortos. La entrada en DDBJ/EMBL/GenBank LOQJ00000000, versión LOQJ01000000, proporciona la secuencia de un total de 8919 armazones. Por tanto, el genoma de la levadura híbrida 1 comprende preferiblemente todos los armazones 0 a 8919 distribuidos a lo largo de una pluralidad de cromosomas. Por consiguiente, una célula de levadura según la invención también puede comprender todos los armazones 0 a 8919 distribuidos a lo largo de una pluralidad de cromosomas. La secuencia genómica de la levadura híbrida 7 está disponible en DDBJ/EMBL/GenBank con el número de entrada LOQK00000000.

Por tanto, el proyecto de secuenciación del genoma completo correspondiente a la levadura híbrida 7 se ha depositado en DDBJ/EMBL/GenBank con la entrada LOQK00000000. La versión descrita en esta patente es la versión LOQK01000000.

L r n i n f r n l i i n :

El proyecto de secuenciación del genoma completo muestra la secuencia de los armazones ensamblados a partir de la secuencia genómica de la levadura híbrida 7. El término “armazón”, como se emplea a este respecto, se refiere a una porción de la secuencia del genoma reconstruida a partir de clones solapados. El término “clon solapado” se refiere a una secuencia de solapamiento contigua que procede del reensamblaje de fragmentos de ADN cortos. La entrada en DDBJ/EMBL/GenBank LOQK00000000, versión LOQK01000000, proporciona la secuencia de un total de 9492 armazones. Por tanto, el genoma de la levadura híbrida 7 comprende preferiblemente todos los armazones 0 a 9492 distribuidos a lo largo de una pluralidad de cromosomas. Por consiguiente, una célula de levadura según la invención también puede comprender todos los armazones 0 a 9492 distribuidos a lo largo de una pluralidad de cromosomas.

Ejemplo 1

Se prepararon 10 hl de cerveza inoculando 10 millones de células viables/ml de levadura a un mosto a base de malta comercial (16 °Plato) suministrado por Soufflet, seguido de fermentación a 17 °C hasta que el diacetilo se encontraba por debajo de un umbral predefinido, que se estableció a un nivel por debajo del umbral considerado como sabor desagradable en la cerveza Lager. En el presente ejemplo, el umbral de diacetilo se estableció en 30 ppb.

En las cervezas Lager, las dicetonas vecinales, tales como diacetilo y 2,3-pentanodiona, confieren un sabor desagradable no deseado si están presentes por encima de una concentración umbral. Tanto el diacetilo como la 2,3 pentanodiona tienen un aroma acaramelado, pero el umbral para el diacetilo es 10 veces inferior. Parte del control de la fermentación es garantizar que la cerveza acabada contenga las dicetonas vecinales, especialmente el diacetilo, por debajo de sus umbrales.

Las células de levadura se propagaron en un tanque (escala de 9 hL) que se usó para conseguir el inóculo celular de la generación 1 de la cerveza que a continuación fue seguida por la generación 2 de la cerveza (escala de 10 hL cada una). El propósito de la propagación es producir un cultivo puro de levadura sano en cantidades suficientes para inocular la levadura para la fermentación real de la cerveza. La fermentación de la cerveza se realiza en fermentaciones sucesivas y la levadura se sustituye habitualmente después de 5 a 10 fermentaciones sucesivas; sin embargo, la frecuencia de introducción de levadura recién propagada en la fábrica de cerveza es una decisión individual. Las fermentaciones sucesivas actúan como inóculo celular para la siguiente fermentación de cerveza y, a menudo, solo el tanque de propagación proporciona el inóculo celular de levadura para la primera fermentación de la cerveza, denominada generación 1 de la cerveza. La fermentación de la cerveza realizada después de la generación 1 se denomina generación 2 y así sucesivamente. La mayoría de las fermentaciones de cerveza se realizan con levadura extraída de la fermentación anterior de cerveza y no del tanque de propagación. El inóculo celular para la fermentación de cerveza es habitualmente 107 células de levadura/ml.

Se usaron 3 cepas de levadura diferentes en este ejemplo. Se empleó el mismo mosto y las mismas condiciones de fermentación.

Levadura Ale 1

Levadura Lager 1

Levadura híbrida 1

La levadura Ale 1 es una levadura de la especie S. cerevisiae. La levadura Lager 1 es una levadura de la especie S. pastorianus. La levadura Ale 1 y la levadura Lager 1 se hibridaron y se seleccionó una de las cepas híbridas denominada levadura híbrida 1.

La Tabla 1 muestra los valores finales de Plato, la Tabla 2 muestra el % de etanol (% v/v) y la Tabla 3 muestra el GFR final de la cerveza, los días necesarios para que el diacetilo se encuentre por debajo del umbral predefinido y los días necesarios para la fermentación primaria de cerveza de la generación 1 y 2 para producir cerveza preparada usando las 3 cepas de levadura al final del tanque de propagación (9 hL) y/o en las generaciones 1 y 2 de cerveza.

La cepa híbrida 1 tiene la capacidad de crecer a 37 °C (datos no mostrados) y también fermenta bien a temperaturas inferiores, tales como 16 °C (véanse las Tablas 1 a 3).

Tabla 1 Valores de Plato

Tabla 2 % de etanol % v/v

Tabla 3

La tasa de inoculación es la cantidad de levadura viable/mL añadida como inóculo celular para comenzar la fermentación. La levadura híbrida 1 había mejorado el GFR en 2 % en comparación con las dos cepas precursoras (levadura Lager 1 y levadura Ale 1) (véase la Tabla 3). La levadura híbrida 1 también presentó niveles inferiores de Plato finales.

La levadura híbrida 1 presenta un rendimiento de etanol mejorado en 0,2 % de etanol o más en comparación con las dos cepas precursoras. La levadura híbrida 1 presenta un rendimiento de fermentación mejorado tanto a 16 °C como a 18 °C de temperatura. El híbrido 1 había mejorado en términos de necesitar un tiempo más corto para alcanzar niveles de diacetilo por debajo del umbral (Días para DA en espec.) en comparación con la levadura Ale 1.

La levadura híbrida 1 fermenta prácticamente a la misma velocidad que la levadura Lager 1 (véase Días para ferm. primaria en la Tabla 3) pero necesitó un tiempo algo más largo para conseguir que el diacetilo se encontrara por debajo del umbral (véase Días para DA en espec.).

Ejemplo 2

Las células de levadura de las soluciones madre congeladas se sembraron en estría en placas de YPD. Estas se usaron para inocular 20 ml de mosto de malta convencional pasteurizado en botellas de 50 ml y se hicieron crecer a 22 °C de temperatura. Los cultivos celulares del cultivo de 20 ml se usaron para volver a inocular las células en un volumen de mosto de 200 ml en botellas de 500 ml y se hicieron crecer a 22 °C. Del volumen de 200 ml de mosto, se inoculó un tanque de propagación de 1,8 L con el objetivo de inocular 14-15 millones de células viables/ml y hacerlas crecer a una temperatura de 16 o 18 °C (la misma que la temperatura de fermentación). La malta usada para preparar el mosto se compró a DMG en Dinamarca.

El número de células totales y viables se midió con NucleoCounter. También se midió el número de células viables del tanque de propagación. Se utilizaron 14-15 millones de células viables para inocular 2 L de mosto con un contenido de azúcares de 15 °Plato, que se dejaron fermentar durante 6 días a indistintamente 16 °C (levaduras híbridas 2, 3 y 4 y sus controles correspondientes) o 18 °C (levadura híbrida 1 y sus controles correspondientes) para obtener la denominada generación 1 de cerveza. Al final de la generación 1, se usaron 14-15 millones de células viables para inocular la generación 2 de cerveza. En el día 4 de incubación se determinó el número de células en suspensión. Los números de células resultantes de la cerveza de la generación 2 se presentan en la Tabla 4. El número de células en suspensión no refleja el crecimiento total de las células, sino más bien la floculación y/o sedimentación. Generalmente se prefiere que el número mínimo de células en suspensión sea lo más bajo posible en las etapas posteriores de la fermentación, lo que indica un aumento de la floculación y/o sedimentación. Si la floculación aumenta demasiado pronto en el tiempo del procedimiento, esto puede conducir a floculación prematura, que da como resultado una fermentación lenta al final del procedimiento.

Tabla 4a Generación 2 de cerveza fabricada a escala de 2 L Los resultados mostrados son de duplicados biológicos del mismo ex erimento.

La levadura híbrida 1 produjo más biomasa (medida en gramos de levadura recogida) que la levadura Lager 1, pero el híbrido 1 siguió presentando menos células en suspensión.

Tabla 4b

Como se comentó anteriormente, las levaduras híbridas 2, 3 y 4 tienen menos células en suspensión que las levaduras Lager, aunque produjeron algo más de biomasa (en gramos de células recogidas al final de la fermentación).

En un estudio diferente, se encontró que la levadura híbrida 2 tenía 7 mill/ml de células en suspensión después de 6 días de fermentación, mientras que la levadura Ale 1 tenía solo 4 mill/ml de células en suspensión y la levadura Lager 2 tenía 39 mill/ml de células en suspensión después de 6 días de fermentación. Por tanto, también en este estudio, la levadura híbrida tenía un nivel muy inferior de células en suspensión en comparación con la levadura Lager.

Los híbridos fabricados a partir de levadura Ale 1 y levadura Lager 1 (levadura híbrida 1) o levadura Lager 2 (levaduras híbridas 2, 3, 4 y 7) tenían menos células en suspensión que las dos cepas precursoras: levadura Ale 1 y cualquiera de las cepas de Lager (levadura Lager 1 o 2). Por tanto, los híbridos presentaban una sedimentación celular mejorada. Eso es interesante en la fabricación de cerveza para evitar el procesamiento aguas abajo de la pasta de células de levadura que se debe recoger y usar para la reinoculación de células de las próximas generaciones del procesamiento de cerveza.

Los resultados de otro estudio más se presentan en la Tabla 4c. Los parámetros experimentales fueron como se describió anteriormente en esta invención, con la excepción de que se ensayaron las células de levadura indicadas.

Tabla 4c

Ejemplo 3

Se prepararon 50 L de cerveza inoculando mosto a base de malta convencional (18 °Plato) con 10 millones de células viables/ml de levadura, seguido de fermentación a 18 °C. La malta usada para preparar el mosto se compró a DMG en Dinamarca.

Se usaron 2 cepas de levadura diferentes. Se empleó el mismo mosto y las mismas condiciones de fermentación. Levadura Lager 1

Levadura híbrida 1

La Tabla 5a muestra los valores finales del EA de la cerveza para las 2 cepas comparadas en el tanque a escala de 50 L de cerveza fabricada con las generaciones 1 y 2.

EA, como se emplea en esta invención, es el “extracto aparente”, que es una medida de la densidad del mosto de cerveza en términos del porcentaje de extracto en peso y se expresa en la escala Plato.

Tabla 5a

La levadura híbrida 1 había mejorado el EA de 0,5 % en 0,5 % en comparación con la levadura Lager 1.

Se realizó un ensayo similar con levadura Lager 2, levadura híbrida 4, levadura híbrida 7, levadura híbrida 8 y S. diastaticus. El EA y el GFR en el día 7 después de la inoculación se presentan en la Tabla 5b. Los parámetros experimentales fueron como se describió en el Experimento 2 anterior de esta invención, con las células de levadura indicadas ensayadas.

Tabla 5b

También se determinó la velocidad de fermentación para la levadura Lager 2, la levadura híbrida 4 y la 7. Los parámetros experimentales fueron como se describió en el Experimento 2 de esta invención, con la excepción de que el extracto aparente se determinó en varios momentos diferentes durante el curso de la fermentación y la incubación fue a 18 °C. La Figura 16 muestra el extracto aparente en °Plato a lo largo del tiempo después de inocular el mosto. El mosto usado tenía un contenido de azúcares de partida de 15 °Plato. Como se muestra, el tiempo de fermentación primaria para las levaduras híbridas 4 y 7 es de aproximadamente 3 días, mientras que el tiempo de fermentación primaria para la levadura Lager 2 es de aproximadamente 4 días.

Ejemplo 4

El contenido de aminoácidos del mosto de partida y la cerveza producida como se describió en el Ejemplo 1 se determinó mediante HPLC con detector de fluorescencia.

La Tabla 6a presenta la concentración de aminoácidos en la cerveza final.

Tabla 6a

La levadura híbrida 1 tiene muchos menos aminoácidos restantes en la cerveza final, lo que es beneficioso en términos de envejecimiento de la cerveza y estabilidad de la cerveza. La cerveza fermentada con el híbrido 1 generará cantidades inferiores de aldehídos de Strecker, que se forman a partir de esos aminoácidos.

Los aldehídos de Strecker son componentes importantes del sabor “añejo” de la cerveza que proceden en parte de los aminoácidos de la propia cerveza embotellada. Los aminoácidos que han demostrado estar implicados en la formación de aldehídos de Strecker con un umbral sensorial bajo incluyen valina, isoleucina, leucina, metionina y fenilalanina (Tabla 2). La formación de aldehídos de Strecker juega un papel crucial, porque un aumento en su concentración otorga una percepción sensorial creciente de "sabores añejos". La cerveza fermentada con levadura híbrida 1 tendrá menos sabores añejos debido al consumo superior de aminoácidos.

Tabla 2. Aminoácidos que actúan como precursores en la formación de aldehídos de Strecker con sabor desa radable.

Se preparó otra fermentación con levadura Lager 2, levadura híbrida 4 o levadura híbrida 7 y se determinó la concentración de aminoácidos en la “cerveza nueva” en el Día 7 de fermentación. Los resultados se presentan en la Tabla 6b. Los parámetros experimentales fueron como se describió en el Ejemplo 2 y el análisis de los aminoácidos se realizó como se describe en el Ejemplo 9. Los híbridos, especialmente la levadura híbrida 7, tienen menos aminoácidos restantes en la “cerveza nueva” que la levadura Lager 2; esto significa que hay menos precursores para la formación de los compuestos responsables del envejecimiento en la cerveza.

Tabla 6b

Bibliografía

Baert, J. J., J. De Clippeleer, P. S. Hughes, L. De Cooman and G. Aerts (2012). “On the Origin of Free and Bound Staling Aldehydes in Beer.” Journal of Agricultural and Food Chemistry 60(46): 11449-11472.

Clapperton, J. F. and I. C. MacWilliam (1971). “Fermentation of minor wort carbohydrates by brewing yeasts.” Journal of the Institute of Brewing 77(6): 519-522.

Deng, X., M. Petitjean, MA Teste, W. Kooli, S. Tranier, JM Francois y JL Parrou (2014). “Similarities and differences in the biochemical and enzymological properties of the four isomaltases from Saccharomyces cerevisiae.” FEBS Open Bio 4: 200-212.

Teste, M. A., J. M. Francois and J. L. Parrou (2010). “Characterization of a new multigene family encoding isomaltases in the yeast Saccharomyces cerevisiae, the IMA family.” J Biol Chem 285(35): 26815-26824.

Ejemplo 5

Se prepararon 50 L de cerveza como se especificó en el Ejemplo 3 inoculando mosto a base de malta convencional (16 °Plato) preparado a partir de dos clases diferentes de malta.

El mosto a base de malta convencional se inoculó con 10 millones de células viables/ml de levadura, seguido de fermentación a 16 °C hasta que el diacetilo se encontraba por debajo del umbral de la cerveza especificada en el Ejemplo 1.

Se inoculó otra malta con 15 millones de células viables/ml de levadura, seguido de fermentación a 16 °C para la levadura Lager 1 y 18 °C para la levadura híbrida 1, hasta que el diacetilo se encontraba por debajo del umbral de la cerveza especificada en el Ejemplo 1.

Se usaron 2 cepas de levadura diferentes dos mostos diferentes fabricados con 2 maltas diferentes. Se emplearon el mismo mosto y condiciones de fermentación para comparar las 2 cepas en paralelo.

Levadura Lager 1

Levadura híbrida 1

El nivel de isomaltosa y panosa en la cerveza se determinó mediante HPLC. Los resultados se presentan en la Tabla 7.

Tabla 7

La concentración de partida de panosa e isomaltosa depende del mosto, pero se ha publicado que está en el intervalo de 0,5 a 1 g/L de isomaltosa y 0,4 a 0,8 g/L de panosa (Clapperton y col.. 1971). Por tanto, se cree que la levadura híbrida 1 utiliza en el intervalo de 60 % a 93 % de la panosa.

Los datos cuantitativos de la utilización de panosa e isomaltosa se obtuvieron midiendo el crecimiento de las diferentes levaduras en medio definido con 2 g/L de panosa o 2 g/L de isomaltosa como únicas fuentes de carbono.

Las células de levadura de las soluciones madre congeladas se sembraron en estría en placas de YPD (1 % de extracto de levadura, 2 % de peptona, 2 % de glucosa y 2 % de agar-agar) y las células en crecimiento se inocularon en YPD líquido (1 % de extracto de levadura, 2 % de peptona, 2 % de glucosa).

Se inocularon 3 pl del cultivo de YPD líquido nocturno a 100 pl de cultivo de YNB (6,7 g/L) sin aminoácidos, pero con sulfato de amonio tamponado con hidrogenoftalato de potasio a pH 5,5 (Hahn-Hagerdal B. y col. 2005) y con 2 g/L de panosa o 2 g/L de isomaltosa como únicas fuentes de carbono. El crecimiento celular se siguió midiendo la densidad óptica a 600 nm con agitación continua e incubando a 20 °C de temperatura usando Bioscreen C MBR (Oy Growth Curves Ab Ltd, Finlandia). Las cepas de levadura híbridas seleccionadas de Lager y Ale con un rendimiento de fermentación mejorado habían adquirido la capacidad de utilizar panosa (Figura 1A) e isomaltosa (Figura 2).

Esta mejora en la utilización de azúcares se ejemplifica con dos híbridos en las Figuras 1A y 2A.

Se realizaron experimentos similares con levadura Ale 1, levadura Lager 2 y levadura híbrida 7, así como con S. diastaticus y levadura híbrida 8 usando medio definido con 2 g/L de panosa como única fuente de carbono. Los resultados se presentan en las figuras 1B y 1C, respectivamente, y son representativos de réplicas biológicas. Como se puede observar, ni la levadura Lager 1, ni la levadura Lager 2, ni S. diastaticus son capaces de utilizar panosa como única fuente de carbono.

También se realizaron experimentos similares con levadura Ale 1, levadura Lager 2 y levadura híbrida 7 usando medio definido con 2 g/L de isomaltosa como única fuente de carbono. Los resultados se presentan en la figura 2B y son representativos de réplicas biológicas. Como se puede observar, ni la levadura Lager 1, ni la levadura Lager 2, ni S. diastaticus son capaces de utilizar isomaltosa como única fuente de carbono.

Bibliografía

Clapperton J F, MacWilliam I C (1971) Fermentation of minor wort carbohydrates by brewing yeasts. Journal of the Institute of Brewing 77, 6: 519-522.

Hahn-Hagerdal B, Karhumaa K, Larsson CU, Gorwa-Grauslund M, Gorgens J, van Zyl WH. (2005). Role of cultivation media in the development of yeast strains for large scale industrial use. Microbial Cell Factories 10: 4 31.

Ejemplo 6

Las células de levadura de las soluciones madre congeladas se sembraron en estría en placas de YPD. Se usaron para inocular 3 ml de YPD líquido y se hicieron crecer durante la noche con agitación a 22 °C en tubos de 15 ml. El cultivo crecido de 3 ml se centrifugó, el sobrenadante se desechó y las células se disolvieron en agua. Los tubos se volvieron a centrifugar, el sobrenadante se desechó y se disolvió en 3 ml de agua.

La densidad óptica (DO620 nm) se midió y ajustó para comenzar a DO = 0,2 para todas las cepas y soluciones de los pocillos de las placas de 96 pocillos suministradas por Biolog Inc. technology (Hayward cA, e E. UU.). Todas las soluciones de las placas de Biolog estaban especificadas para procedimientos para S. cerevisiae y otras levaduras. Las placas de 96 pocillos se incubaron durante 4,5 días a 22 °C.

El sistema de Biolog permite ensayar cuantitativamente el nivel de miles de fenotipos celulares en un único experimento. Cada pocillo del ensayo está diseñado para ensayar un fenotipo individual. Biolog usa la química de oxidorreducción como sistema indicador general para analizar la respiración celular. Tiene un colorante de tetrazolio que se reduce, lo que genera color, cuando la célula puede respirar el compuesto presente en el pocillo o en presencia del compuesto en ese pocillo específico.

Se compararon tres cepas de levadura, las 2 cepas precursoras (levadura Lager 1 y levadura Ale 1) y el híbrido resultante (levadura híbrida 1). Los detalles sobre las cepas de levadura se proporcionan en el Ejemplo 1. En algunas de las condiciones, las 3 cepas presentaron diferencias en el fenotipo. La cepa híbrida 1 fue capaz de obtener nuevas características fenotípicas, por ejemplo, la capacidad de utilizar varios dipéptidos y algunos tripéptidos (véase la Tabla 8a).

Tabla 8a

En un experimento similar, se compararon 6 cepas de levadura, a saber, las cepas de levadura Lager 1, levadura Lager 2, levadura Ale 1, levadura híbrida 1, levadura híbrida 4 y levadura híbrida 7. Los resultados se presentan a continuación en la Tabla 8b de esta invención. Como se observa, los híbridos tienen propiedades nuevas que no se observan en las cepas precursoras. La levadura Lager 1 presentó un crecimiento escaso en Ile-Asn en este experimento, aunque no se observó crecimiento en el experimento anterior. Sin embargo, el crecimiento de la levadura Lager 1 siguió siendo significativamente inferior al crecimiento de la levadura híbrida 1.

Tabla 8b

Las levaduras híbridas 4 y 7 no presentaron un crecimiento significativo en Met-Tyr, Leu-Tyr, Phe-Tyr, Ile-Leu o GLy-Gly-Gly como única fuente de nitrógeno.

La levadura híbrida 1 también ha adquirido varios fenotipos no encontrados en la levadura Lager 1, por ejemplo, la capacidad de crecer en varios dipéptidos que tienen la fórmula Ala-Xaa, donde Xaa puede ser cualquier aminoácido. Esta capacidad está a menudo vinculada a la capacidad de utilizar alantoína, que la levadura híbrida también es capaz de utilizar (véase la Tabla 9a).

Tabla 9a

También las levaduras híbridas 4 y 7 son capaces de utilizar dipéptidos Ala-Xaa como única fuente de nitrógeno, como se muestra en la Tabla 9b.

Tabla 9b

Los dipéptidos y tripéptidos son parte del FAN. FAN es el nitrógeno amino libre, y es una medida del contenido de nitrógeno del mosto o la cerveza. El FAN está compuesto por aminoácidos, iones de amonio y péptidos pequeños que están en el mosto y garantizan un rendimiento de fermentación deseable para la levadura (Lekkas C y col. 2009). Se pueden encontrar muchas combinaciones de dipéptidos diferentes en el mosto.

La levadura híbrida 1 puede utilizar varios dipéptidos/tripéptidos ensayados diferentes que podrían estar presentes en el mosto y, por lo tanto, tiene un abanico más amplio de sustratos de FAN que podrían ser precursores de la biomasa celular, fuente de carbono o precursores de los sabores.

Bibliografía

Lekkas C, Hill AE, Taidi B, Hodgson J, Stewart GG (2009). The role of small wort peptides in brewing fermentations. J. Inst. Brew. 115 (2), 134-139.

Ejemplo 7

Los se obtuvieron sembrando réplicas de cultivos líquidos de YPD de levaduras que se habían crecido en placas de 96 pocillos en placas de YPGalactosa (1 % de extracto de levadura, 2 % de peptona, 2 % de galactosa y 2 % de agaragar) con 50 pg/ml de x-alfa-gal (Clontech, Mountain View, EE. UU.) e incubando las placas durante 5 días a 22 °C. X-alfa gal es un análogo cromogénico de la melibiosa y, si la levadura puede utilizar melibiosa, la colonia de levadura se tornará azul y, si la levadura no es capaz de utilizar melibiosa, entonces la colonia de levadura será blanca. Los resultados indican (Tabla 9) que todas las levaduras Lager ensayadas fueron positivas para la utilización de melibiosa (color azul de la colonia), todas las levaduras Ale ensayadas fueron negativas para la utilización de melibiosa (color blanco de la colonia) y los híbridos fueron positivos o negativos para la utilización de melibiosa (color azul o blanco de la colonia) en función de lo que habían heredado.

Tabla 9

Los datos cuantitativos de la melibiosa se obtuvieron midiendo el crecimiento de levadura en medio definido con 2 g/L de melibiosa como única fuente de carbono.

Las células de levadura de las soluciones madre congeladas se sembraron en estría en placas de YPD y las células en crecimiento se inocularon a YPD líquido.

Se inocularon 3 pL del cultivo de YPD líquido nocturno a 100 pL de cultivo de YNB (6,7 g/L) sin aminoácidos, pero con sulfato de amonio tamponado con hidrogenoftalato de potasio a pH 5,5 (Hahn-Hagerdal B. y col. 2005) y con 2 g/L de melibiosa como fuente de carbono. El crecimiento celular se siguió midiendo la densidad óptica a 600 nm con agitación continua e incubando a 20 °C de temperatura usando Bioscreen C MBR (Oy Growth Curves Ab Ltd, Finlandia). Los híbridos de Lager y Ale habían adquirido la capacidad de utilizar melibiosa, pero no todos los híbridos (esto se ejemplifica con tres híbridos en la Figura 3).

Bibliografía:

Hahn-Hagerdal B, Karhumaa K, Larsson CU, Gorwa-Grauslund M, Gorgens J, van Zyl WH. (2005). Role of cultivation media in the development of yeast strains for large scale industrial use. Microbial Cell Factories 10: 4-31.

Ejemplo 8

Utilización mejorada de disacáridos y trisacáridos

Se prepararon 50 L de cerveza como se especificó en el Ejemplo 3 inoculando mosto a base de malta con 15 millones de células viables/ml, seguido de fermentación hasta que el diacetilo se encontraba por debajo de 30 ppb. La malta se preparó a partir de cebada para cerveza convencional, o a partir de cebada exenta de lipoxigenasa.

Se usaron 2 cepas de levadura diferentes: levadura Lager 1 y levadura híbrida 1. Se emplearon el mismo mosto y condiciones de fermentación para comparar las 2 cepas en paralelo, con la excepción de que la fermentación con levadura Lager 1 se realizó a 18 °C, mientras que la fermentación con levadura híbrida 1 se realizó a 16 °C. Hubo tres cervezas independientes preparadas con las mismas cepas y el nivel de los diferentes azúcares se determinó mediante RMN. Los resultados representativos se presentan en la Figura 4 para los niveles de azúcares específicos que fueron diferentes en la cerveza embotellada final.

Los resultados de RMN demuestran que la levadura híbrida 1 presentaba una utilización mejorada de isomaltosa, panosa, nigerosa, coibiosa y otros carbohidratos no identificados (Figura 4). Sin embargo, la levadura Lager 1 no es capaz de utilizar esos azúcares.

Los disacáridos isomaltosa y maltulosa y los trisacáridos panosa y maltotriulosa son azúcares secundarios en los medios de mosto usados para fabricar cerveza (Clapperton y MacWilliam 1971). Nuestros resultados demuestran que también hay otros disasacáridos como la nigerosa, coibiosa y trehalosa que estaban presentes en la cerveza fabricada con levadura Lager 1 (Figura 4). La mejora de la utilización de azúcares de esos azúcares presentes en cantidades bajas puede explicar la mejor utilización total de los azúcares y una mejora del rendimiento de producción de etanol con la levadura híbrida 1.

Ejemplo 9

Se prepararon 50 L de cerveza de la generación 1 inoculando mosto a base de malta convencional (13,6 °Plato) preparado a partir de cualquier malta con 15 millones de células viables de levadura/ml como inóculo, seguido de fermentación a 18 °C durante 5 días y a 14 °C durante 2 días. El inóculo celular se obtuvo de un tanque de propagación anterior. La malta usada para preparar el mosto se compró a DMG en Dinamarca. En el día 6, se tomaron muestras de mosto fermentado, correspondientes a las muestras de “cerveza nueva”, se centrifugaron y el sobrenadante se congeló a -20 °C hasta que fue analizado (Tabla 10). La concentración de aminoácidos libres se determinó mediante UPLC con detección de matriz de fotodiodos usando el kit de derivatización AccQ-Tag Ultra de Waters, esencialmente como describe el proveedor. Las separaciones se realizaron en una columna de análisis de aminoácidos AccQ-Tag de Waters usando eluyente premezclado A y B según las instrucciones del fabricante (Waters). También se comparó una muestra del mosto original usado para fermentar con las muestras fermentadas. La concentración de aminoácidos se comparó entre todas las muestras de cerveza nueva frente a una muestra del mosto original (Tabla 10).

El nivel de aminoácidos residuales en la cerveza nueva fermentada con levaduras híbridas es muy inferior en comparación con la cerveza nueva fermentada con levadura Lager 1, lo que es beneficioso en términos de envejecimiento de la cerveza y estabilidad de la cerveza. Se cree que en la cerveza fabricada con levaduras híbridas se formarán menos aldehídos de Strecker a partir de esos aminoácidos durante el almacenamiento. Los aldehídos de Strecker son componentes importantes del sabor “añejo” de la cerveza que proceden en parte de los aminoácidos de la propia cerveza embotellada. Los aminoácidos que han demostrado formar aldehídos de Strecker con un umbral sensorial bajo son valina, isoleucina, leucina, metionina y fenilalanina (Baert, De Clippeleer y col. 2012). La formación de aldehídos de Strecker juega un papel crucial, porque un aumento en su concentración otorga una percepción sensorial creciente de "sabores añejos". La cerveza fabricada con las levaduras híbridas 1 y 4 tendrá menos sabores añejos debido al consumo superior de aminoácidos y este efecto será más pronunciado en fermentaciones de alta densidad o maltas de mosto con concentraciones superiores de fuentes de FAN.

El aminoácido prolina también fue utilizado por las levaduras híbridas 1 y 4, pero no por la levadura Lager en la cerveza nueva. El aminoácido prolina es el componente aminoacídico principal del mosto, aunque es el más difícil de asimilar, por lo que las levaduras híbridas con una utilización mejorada de la prolina tendrán esta capacidad adicional de utilizar esta fuente de nitrógeno que la levadura Lager no puede utilizar.

Tabla 10. Análisis de aminoácidos m /L de cerveza nueva del día

Ejemplo 10

La secuencia genómica de la levadura híbrida 1 descrita en el Ejemplo 1 se determinó como se indica a continuación.

La extracción del ADN genómico y secuenciación del genoma completo y el ensamblaje del genoma fueron realizados por LGC Genomics GmbH (Berlín, Alemania). Para la secuenciación individual de genes adicional, se realizó la extracción de ADN genómico de las cepas mediante el kit de purificación de ADN de levadura MasterPure TM (Epicenter, Ilumina Denmark ApS, Copenhague, Dinamarca). La amplificación por PCR del ADN genómico se realizó con mezcla de enzimas para PCR de alta fidelidad o polimerasa Dream Taq con un número bajo de ciclos de PCR, ambas de Thermo Fisher Scientific Baltics UAB (Vilnius, Lituania). Los productos de la PCR se purificaron mediante NucleoSpin y PCR Clean-up (Macherey-Nagel, Düren, Alemania). La clonación de los productos de la PCR se llevó a cabo con el kit TOPO® TA Cloning® para secuenciación y se seleccionaron en placas de ampicilina LB enriquecidas con beta-X-galactosa. Los plásmidos se purificaron con el kit GeneJET Plasmid Miniprep de Thermo Fisher Scientific Baltics UAB (Vilnius, Lituania). La secuenciación de plásmidos se realizó en Eurofins Genomics (Ebersberg, Alemania). La levadura híbrida 1, levadura Lager 1 y levadura Ale 1 se analizaron para identificar diversos genes seleccionados usando indistintamente la secuencia del genoma ensamblada y/o la secuencia de los productos de la PCR. La secuencia proteica se dedujo a partir de la secuencia genética o a partir de la secuencia de los productos de la PCR usando el código genético.

La levadura híbrida 4, levadura híbrida 7 y levadura Lager 2 se analizaron para identificar diversos genes seleccionados usando la secuencia de los productos de la PCR. Las secuencias se obtuvieron mediante amplificación por PCR con enzima para PCR de alta fidelidad, seguido de clonación y secuenciación de los clones de PCR individuales, si procede. Los genes alélicos de la levadura híbrida 4 y la levadura híbrida 7 se identificaron por PCR, clonación y secuenciación. Los genes alélicos de la levadura Lager 2 se identificaron por PCR y secuenciación (IMA1) o se ensamblaron a partir de la secuencia genómica (AGT1). La secuencia proteica se dedujo a partir de la secuencia de los productos de la PCR usando el código genético.

Los alelos LONG_IMA1 presentados aquí están definidos por una combinación de 3 aminoácidos: I (isoleucina) o T (treonina) en la posición 165, R (arginina) o K (lisina) en la posición 287 e Y (tirosina) o F (fenilalanina) en la posición 336. Los motivos distintivos de los aminoácidos para los alelos LONG_IMA1 de Ale 1 son I-R-Fy I-K-F. La levadura Lager 1 y la levadura Lager 2 tienen el motivo T-R-Y. La levadura híbrida 1 contiene un alelo I-K-F y un alelo T-R-Y. La levadura híbrida 4 contiene un motivo I-R-F. La levadura híbrida 4 también contiene un alelo híbrido nuevo con motivo distintivo de I-R-Y. La levadura híbrida 7 contiene un alelo I-K-F y un alelo T-R-Y. La levadura híbrida 7 también contiene un alelo híbrido nuevo con motivo I-R-Y que es idéntico a la proteína codificada por la levadura híbrida 4. La Tabla 11a resume el estado de diversos genes implicados en la utilización de dipéptidos en la levadura Lager 1, la levadura Ale 1 y la levadura híbrida 1.

Tabla 11a

Las secuencias genómicas de la levadura híbrida 1 y la levadura híbrida 7 se estudiaron adicionalmente y los resultados se resumen en la Tabla 11b. Estos análisis están basados en las secuencias genómicas disponibles en DDBJ/EMBL/GenBank con el número de entrada LOQJ00000000, versión LOQJ01000000 y en DDBJ/EMBL/GenBank con la entrada LOQK00000000, versión LOQK01000000TPTR2, respectivamente.

El análisis de lavariación alélica de PTR2 se realizó en base a las secuencias genómicas (véanse los números de entrada anteriores). La levadura híbrida 1y lalevadura híbrida 7 retuvieron ambas lacopia de no Sc de PTR2. En la tabla 11a se presenta una copia de Sc fragmentada de lalevadura híbrida 1.La Tabla 11b muestra lacopia intactade Sc de PTR2 de lalevadura híbrida 1en lasecuencia genómica. Es posibleque lalevadura híbrida 1contenga 3 alelos que codifican PTR2 como se indica en laTabla 11a. La levadura híbrida 7 también tiene Sc de PTR2. En ambos híbridos,lasecuencia proteica de Sc de PTR2 muestra lahibridación entre copias de Sc de PTR2 de levaduraAle 1 y Sc de PTR2 de levadura Lager 1y2.

El análisis de lavariación alélica de DAL5 se realizó en base a las secuencias genómicas (véanse los números de entrada anteriores). La levadura híbrida 1 y lalevadura híbrida 7 han retenido Sc de DAL5 de la levadura Ale 1. La levadura híbrida 7también ha retenido no Sc de DAL5.

El análisis de lavariación alélica de UBR1 se realizó en base a lassecuencias genómicas (véanse los números de entrada anteriores). Ambas levaduras Lager precursoras tienen una copia de Sc que está truncada de manera diferente. Anteriormente, labúsqueda de datos genómicos de laLager 1 arrojaba solosecuencias fragmentadas que no permitían determinarelcodón de terminación prematuro. Ambas levaduras híbridas retuvieron no Sc de UBR1 de lacepa Lager precursora. La copia de Sc detectada en ambos híbridosfue heredada de lacepa Ale 1 precursora.

Tabla 11b

La Tabla 12a resume elestado de diversos genes implicados en lautilizaciónde azúcares en lalevadura Lager 1, la levadura Ale 1y lalevadura híbrida 1.

La Tabla 12b resume el estado de diversos genes implicados en la utilización de azúcares en la levadura Lager 2, la levadura híbrida 4 la levadura híbrida 7.

Varios genes pueden estar implicados en la utilización de isomaltosa. Esto incluye a Agt1p, que es un transportador de azúcares que puede transportar isomaltosa. Asimismo, hay 5 enzimas de isomaltasa diferentes que son alfa-1,6-glucosidasas, pero que también tienen otras actividades de glucosidasa.

En base a la información de la secuencia genómica, no se identificó ningún gen IMA1 con una secuencia codificadora completa en la levadura Lager 1, y otras cepas de S. pastorianus encontradas en la base de datos del NCBI tampoco tenían una copia del gen IMA1 de S. cerevisiae. Interesantemente, la levadura híbrida 1 contiene 4 alelos diferentes del gen IMA1 de dos longitudes diferentes.

La secuencia de gen tipo IMA5 está presente en el genoma de la levadura Lager 1. En la levadura híbrida 1 había 2 alelos, una copia que no era de S. cerevisiae idéntica a la levadura Lager 1 y una copia de S. cerevisiae muy similar a la secuencia encontrada en la levadura Ale 1, pero con cambios de 3 aminoácidos.

Se ha demostrado que el transporte de maltotriosa e isomaltosa es facilitado por el transportador de alfa-glucósidos de alta afinidad codificado por el gen AGT1. Este transportador tiene una especificidad de sustrato amplia.

En la levadura Lager 1 solo encontramos una copia completa del transportador AGT1 que no procedía de S. cerevisiae, la copia de S. cerevisiae estaba truncada. Por el contrario, la levadura híbrida 1 tenía 3 copias completas del gen AGT1, una idéntica a la copia que no era de S. cerevisiae encontrada en la levadura Lager 1 y dos alelos de S. cerevisiae muy similares a los genes AGT1 encontrados en la levadura Ale 1, pero con un cambio de aminoácido cada uno.

En la levadura híbrida 4, se identificaron 2 copias de longitud completa de AGT1 que no era de S. cerevisiae, llevando una copia un cambio de 1 aminoácido. En la levadura híbrida 7, se identificaron 3 copias de longitud completa: una totalmente idéntica al AGT1 de la levadura Ale 1 y 2 alelos de AGT1 que no era de S. cerevisiae con una copia que llevaba un cambio de 1 aminoácido.

Además del estudio de la secuencia genómica como se describió anteriormente, se obtuvo información adicional sobre IMA1_short en la levadura Lager 1 y la levadura Lager 2, así como en la levadura híbrida 1, la levadura híbrida 4 y la levadura híbrida 7 mediante clonación y secuenciación usando cebadores específicos para el locus de IMA1_short de la levadura Ale 1 como se describió anteriormente. En base a la información de la secuencia genómica, no se encontró ningún gen IMA1_short en las secuencias genómicas de las levaduras Lager 1 y Lager 2. Sin embargo, la clonación y secuenciación del IMA1 corto de ambas acepas parentales de levadura Lager demostró que está presente un gen, pero este codifica una proteína con una diferencia de 6 aminoácidos con respecto a la proteína de IMA1_short de la levadura Ale 1. Los datos se resumen en la Tabla 12c que se presenta más adelante.

En la clonación y secuenciación de la levadura híbrida 1 se identificaron 3 alelos cortos de IMA1: los dos alelos descritos anteriormente en esta invención y un alelo adicional con naturaleza híbrida en cuanto a la secuencia de nucleótidos y también a nivel de proteína (secuencia proteica proporcionada como SEQ ID NO:1). Las levaduras híbridas 4 y 7 retuvieron el alelo corto de IMA1 de ambas cepas parentales, pero la clonación también identificó alelos adicionales con un cambio exclusivo de aminoácidos en ambos híbridos. Por tanto, las tres cepas híbridas contenían 3 alelos cortos de IMA1.

El análisis de la variación alélica de IMA5 se realizó en base a las secuencias disponibles en las secuencias genómicas. Además de los alelos descritos anteriormente en la Tabla 12a, la levadura híbrida 1 contenía un alelo adicional. Por tanto, la levadura híbrida 1 y la levadura híbrida 7 retuvieron ambas las copias Sc de IMA5 y no Sc de IMA5. La levadura híbrida 7 tiene un alelo Sc de IMA5 híbrido exclusivo resultante de la recombinación entre la levadura Ale 1 y la levadura Lager 2 en el locus de Sc de IMA5. La hibridación resulta evidente a partir de las secuencias de nucleótidos y es visible en la secuencia proteica.

Tabla 12c

Ejemplo 11

Los datos de la utilización de maltulosa, maltotriosa y coibiosa se obtuvieron midiendo el crecimiento de las diferentes levaduras en medio definido con 2 g/L de maltulosa o 2 g/L de maltotriosa o 2 g/L de coibiosa como únicas fuentes de carbono.

Las células de levadura de las soluciones madre congeladas se sembraron en estría en placas de YPD (1 % de extracto de levadura, 2 % de peptona, 2 % de glucosa y 2 % de agar-agar) y las células en crecimiento se inocularon a YPD líquido (1 % de extracto de levadura, 2 % de peptona, 2 % de glucosa).

Se inocularon 3 pL del cultivo de YPD líquido nocturno a 100 pL de cultivo de YNB (6,7 g/L) sin aminoácidos, pero con sulfato de amonio y tamponado con hidrogenoftalato de potasio a pH 5,5 (Hahn-Hagerdal B. y col. 2005) y con 2 g/L de maltulosa o 2 g/L de maltotriosa o 2 g/L de coibiosa como únicas fuentes de carbono.

El crecimiento celular se siguió midiendo la densidad óptica a 600 nm con agitación continua e incubando a 20 °C de temperatura usando Bioscreen C MBR (Oy Growth Curves Ab Ltd, Finlandia).

Se ensayó si la levadura Ale 1, la levadura híbrida 1, la levadura híbrida 4 y la levadura híbrida 7 son capaces de utilizar maltotriosa como única fuente de carbono. Los resultados se presentan en la figura 13.

También se ensayó si la levadura Ale 1, la levadura híbrida 1, la levadura híbrida 4, la levadura híbrida 7, S. diastaticus y la levadura híbrida 8 son capaces de utilizar maltulosa como única fuente de carbono. Los resultados se presentan en la figura 14.

También se ensayó si la levadura Ale 1, la levadura Lager 1, la levadura Lager 2, S. diastaticus, la levadura híbrida 1, la levadura híbrida 4, la levadura híbrida 7 y la levadura híbrida 8 son capaces de utilizar coibiosa como única fuente de carbono. Los resultados se presentan en la figura 15. Como se puede observar, ni la levadura Lager 1 ni la levadura Lager 2 pueden utilizar coibiosa como única fuente de carbono, mientras que S. diastaticus solo puede utilizar coibiosa como única fuente única de carbono de manera muy deficiente.

Ejemplo 12

Para investigar adicionalmente el grado real de fermentación obtenido al fermentar usando levadura híbrida 7, se realizaron estudios a gran escala. El mosto preparado a gran escala a partir de diferentes mezclas se fermentó en diferentes ubicaciones con indistintamente levadura Lager 2 o levadura híbrida 7 hasta que el diacetilo se encontraba dentro de las especificaciones. Se determinó el grado real de fermentación (GRF). La Tabla 13 muestra el aumento absoluto en el % de GRF obtenido después de la fermentación con levadura híbrida 7 en comparación con el GRF obtenido después de la fermentación con levadura Lager 2.

El mosto se preparó macerando diferentes proporciones de malta, cebada (es decir, granos de cebada sin maltear) y arroz. Además, se añadieron cantidades variables de jarabe de glucosa. La proporción de malta:cebada:jarabe de glucosa usada para preparar los diferentes mostos también se indica en la tabla 13.

Tabla 13

Abreviaturas

GRF grado real de fermentación

YPD (1 % de extracto de levadura, 2 % de peptona, 2 % de glucosa)

Placas de YPD (1 % de extracto de levadura, 2 % de peptona, 2 % de glucosa y 2 % de agar-agar) YNB (base nitrogenada de levadura)

DO densidad óptica

HPLC cromatografía líquida de alta resolución

Placas de YPGalactosa (1 % de extracto de levadura, 2 % de peptona, 2 % de glucosa y 2 % de agar-agar)

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una célula de levadura que tiene las características y los genotipos siguientes:

característica II: capaz de utilizar panosa como única fuente de carbono; y

genotipo IV: que comprende al menos 3 genes que codifican IMA1p, donde IMA1p se selecciona del grupo que consiste en IMA1p de SEQ ID NO: 12, IMA1p de SEQ ID NO: 13, IMA1p de SEQ ID NO: 14, IMA1p de SEQ ID NO: 15, IMA1p de SEQ ID NO: 21, IMA1p de SEQ ID NO: 22, IMA1p de SEQ ID NO: 23, IMA1p de SEQ ID NO: 24, IMA1p de SEQ ID NO: 25 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 % de identidad de secuencia con las mismas; y

genotipo VI: que comprende al menos 2 genes que codifican AGT1 seleccionada del grupo que consiste en AGT1 de SEQ ID NO: 18, AGT1 de SEQ ID NO: 19, AGT1 de SEQ ID NO: 20, AGT1 de SEQ ID NO: 27, AGT1 de SEQ ID NO: 28, AGT1 de SEQ ID NO: 30, AGT1 de SEQ ID NO: 31, AGT1 de SEQ ID NO: 32 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 % de identidad de secuencia con las mismas; y característica VIII: capaz de utilizar melibiosa como única fuente de carbono.

2. La célula de levadura según la reivindicación 1, donde la célula de levadura tiene además la característica:

I. capaz de utilizar isomaltosa como única fuente de carbono.

3. La célula de levadura según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la célula de levadura tiene además la(s) característica(s):

III. capaz de utilizar uno o más dipéptidos como única fuente de nitrógeno y/o

IV. capaz de utilizar uno o más tripéptidos como única fuente de nitrógeno.

4. La célula de levadura según la reivindicación 3, donde los dipéptidos se seleccionan del grupo que consiste en Met-Tyr, Leu-Tyr, Val-Met, Phe-Tyr, Ile-Leu, Ile-Asn, Gly-Arg, Lys-Tyr, Met-Lys, Val-Ala, Val-Asn, Val-Gly, Val-Gln, Val-Ser o Ala-Xaa, donde Xaa es cualquier aminoácido.

5. La célula de levadura según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la célula de levadura tiene además la(s) característica(s):

VI. capaz de generar al menos 4,7 por mil de etanol por °Plato cuando dicha célula de levadura se añade a una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato y se incuba hasta que el nivel de diacetilo se encuentra dentro de las especificaciones; y/o

VII. capaz de fermentar azúcar con un grado real de fermentación de al menos 68, tal como al menos 70, cuando dicha célula de levadura se añade a una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 °Plato y se incuba hasta que el nivel de diacetilo se encuentra dentro de las especificaciones.

6. La célula de levadura según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde la célula de levadura es capaz además de fermentar azúcar con un GRF que es al menos 1 %, tal como al menos 2 %, superior al GRF de una de sus cepas precursoras.

7. La célula de levadura según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la célula de levadura tiene además la característica:

X. capaz de sedimentación de manera que, como máximo 12 millones, tal como un máximo de 10 millones, de células/ml están en suspensión cuando dicha célula de levadura se añade a una composición de mosto que tiene un contenido de azúcares de al menos 10 Plato y se incuba durante 4 días.

8. La célula de levadura según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la célula de levadura tiene además la característica:

IX. capaz de utilizar uno o más disacáridos y/o trisacáridos además de isomaltosa, panosa y/o melibiosa 9. La célula de levadura según la reivindicación 8, donde el disacárido se selecciona del grupo que consiste en maltulosa, coibiosa, nigerosa, sucrosa, turanosa, leucrosa y palatinosa.

10. La célula de levadura según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la célula de levadura tiene además la característica

XI: capaz de fermentar mosto con un tiempo de fermentación primaria de como máximo 4 días, por ejemplo, como máximo 3 días.

11. La célula de levadura según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la célula de levadura tiene el genotipo:

I. que comprende un gen que codifica DAL5, donde el gen alélico que codifica DAL5 codifica DAL5 que se selecciona del grupo que consiste en DAL5 de SEQ IDNO: 6, DAL5 de SEQ ID NO: 39, DAL5 de SEQ ID No : 40 y homólogos funcionales de las mismas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con cualquiera de las antes mencionadas.

12. La célula de levadura de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la célula de levadura tiene el genotipo:

II. que comprende al menos 2 genes alélicos que codifican PTR2, donde dichos al menos dos genes alélicos que codifican PTR2 se seleccionan individualmente del grupo que consiste en genes que codifican PTR2 de SEQ ID NO: 7, PRT2 de SEQ ID NO: 8, PRT2 de SEQ ID NO: 9, PRT2 de SEQ ID NO: 37, PRT2 de SEQ ID NO: 38, PTR2 de SEQ ID NO: 43, PTR2 de SEQ ID NO: 44 y homólogos funcionales de cada una de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

13. La célula de levadura según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la célula de levadura tiene el genotipo:

III. que comprende un gen que codifica UBR1, donde UBR1 se selecciona, por ejemplo, del grupo que consiste en UBR1 que comprende la SEQ ID NO: 10, UBR1 de SEQ ID NO: 11, UBR1 que comprende la SEQ ID NO: 41, UBR1 de SEQ ID NO: 42, UBR1 que comprende la SEQ ID NO: 45 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

14. La célula de levadura según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la célula de levadura tiene el genotipo:

IV. que comprende al menos 4 genes que codifican IMA1p, donde IMA1p se selecciona del grupo que consiste en IMA1p de SEQ ID NO: 12, IMA1p de SEQ ID NO: 13, IMA1p de SEQ ID NO: 14, IMA1p de SEQ ID NO: 15, IMA1p de SEQ ID NO: 21, IMA1p de SEQ ID NO: 22, IMA1p de SEQ ID NO: 23, IMA1p de SEQ ID NO: 24, IMA1p de SEQ ID NO: 25 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 % de identidad de secuencia con las mismas.

15. La célula de levadura según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la célula de levadura tiene el genotipo

V. que comprende al menos un gen que codifica IMA5p, preferiblemente al menos dos genes alélicos que codifican IMA5p, donde IMA5p se selecciona, por ejemplo, del grupo que consiste en IMA5p de SEQ ID NO: 16, IMA5p de SEQ ID NO: 17, IMA5p de SEQ ID NO: 34, IMA5p de SEQ ID NO: 35, IMA5p de SEQ ID NO: 36 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 %, de identidad de secuencia con las mismas.

16. La célula de levadura según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la célula de levadura tiene el genotipo:

VI. que comprende al menos 3 genes que codifican AGT1 seleccionada del grupo que consiste en AGT1 de SEQ ID NO: 18, AGT1 de SEQ ID NO: 19, AGT1 de SEQ ID NO: 20, AGT1 de SEQ ID NO: 26, AGT1 de SEQ ID NO: 27, AGT1 de SEQ ID NO: 28, AGT1 de SEQ ID NO: 29, AGT1 de SEQ ID NO: 30, AGT1 de SEQ ID NO: 31, AGT1 de SEQ ID NO: 32 y homólogos funcionales de cualquiera de las antes mencionadas que comparten al menos 80 %, preferiblemente al menos 90 %, aún más preferiblemente al menos 95 %, tal como al menos 98 % de identidad de secuencia con las mismas.

17. Un procedimiento para producir una bebida, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de a. proporcionar un líquido de partida

b. proporcionar una célula de levadura según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 c. fermentar dicho líquido de partida con dicha célula de levadura,

produciendo de ese modo una bebida.