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Cromatografía liquida
- 1. Angie Lorena Cárdenas Puerto Miguel Ángel Hernández Pérez Andrés Felipe Sabogal Osorio Estefany Tatiana Trilleras Quevedo
- 2. La cromatografía es un método de análisis rápido que permite separar los constituyentes de una mezcla utilizando las diferencias de estas sustancias entre sus constantes de equilibrio durante su distribución entre una fase móvil y una fase denominada estacionaria que ejerce sobre ellas un efecto retardador
- 3. Fase estacionaria Fase móvil Muestra La muestra interactúa con el medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria; un segundo medio (fase móvil) que no puede mezclarse con la fase estacionaria se hace fluir en esta para “lavar” a las moléculas en la muestra.
- 4. La cromatografía liquida fue la primera en aparecer cronológicamente, utilizada por primera vez en 1903-1906 por el botánico ruso Mikhail Tswett para separar los componentes coloreados de un extracto de plantas.
- 5. La cromatografía liquida es un método de análisis que permite separar mezclas en sus componentes individuales, utilizando como fase móvil un liquido (eluyente).
- 6. Un liquido (fase móvil) circula en un intimo contacto con un solido u otro liquido inmiscible (fase estacionaria), al introducir una mezcla de substancias (analito) en la corriente de fase móvil, cada analito avanzará a lo largo del sistema con una velocidad diferente que dependerá de su afinidad por una de las fases.
- 7. Después de terminado el recorrido de la muestra por la columna, cada una de las sustancias introducidas en el sistema eluirá con un tiempo diferente, es decir estarán separadas).
- 8. La cromatografía de líquidos es adecuada para el análisis de moléculas no volátiles y térmicamente sensibles, incluyendo compuestos de alto peso molecular como proteínas.
- 9. CROMATOGRAFÍA DE REPARTO/ADSORCION (FASES LIGADAS QUÍMICAMENTE) • La separación se basa en un reparto del soluto entre la fase móvil y la fase estacionaria. CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN (LIQUIDO – SOLIDO) • La fase estacionaria es un adsorbente y la separación se basa en repetidas etapas de adsorcion-desorcion
- 10. CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO •La fase estacionaria presenta en su superficie grupos ionizados capaces de retener selectivamente a iones se signo contrario que circulan en la fase móvil. CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN MOLECULAR •La fase estacionaria es un material poroso de tamaño de poro controlado, que permite la entrada de ciertas moléculas de manera selectiva, dejando fuera otras de mayor tamaño.
- 11. TIPO FASE ESTACIONARIA FASE MÓVIL INTERACCIÓN Adsorción solido Liquido-gas Fuerzas v.w. Cambio iónico resina liquido f. elect exclusión gel liquido Tamaño de partícula afinidad solido liquido Interacción biológica partición liquido Liquido-gas solubilidad
- 12. La cromatografía liquida también se divide en dos métodos atendiendo a la polaridad de la fase estacionaria: Cromatografía de fase normal Cromatografía de fase reversa(inversa)
- 14. La fase estacionaria presenta puntos activos de alta polaridad y las interacciones que se producen con el soluto son especificas del grupo activo.
- 15. La fase estacionaria pude ser un soluto adsorbente (sílice o alúmina) o un soporte al que se unen químicamente moléculas orgánicas que presentan grupos funcionales de alta polaridad ( ciano, amino, etc.)
- 18. La fase estacionaria tiene una naturaleza apolar (cadenas hidrocarbonadas, grupos fenilo) y las interacciones que se producen son inespecíficas (efecto solvófobo).
- 20. El uso del gas especial y el equipo correctos cuando realice una cromatografía de líquidos de alto rendimiento (HPLC) mejorará considerablemente la precisión de sus resultados.
- 21. La HPLC es particularmente útil para la separación de materiales con grandes pesos moleculares que presentan una volatilidad muy baja y no pueden separarse mediante cromatografía de gases. Se usa principalmente en la biotecnología, en ciencias y la industria farmacéutica.
- 22. Algunas aplicaciones incluyen sustancias tan diversas como aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, fármacos, terpenos, plaguicidas, antibióticos, esteroides, especies organometálicas y una gran variedad de sustancias inorgánicas El empleo de HPLC en sus muchas variantes se ha sido especializado.
- 23. Detección y cuantificación de sacarina, benzoatos, cafeína y aspartame en refrescos. Detección de ciclomato en jugos de fruta. Separación de ésteres de ácidos grasos por fase inversa y con argentización de columnas (Silicato de Al con Ag).
- 24. Separación de Triglicéridos por la longitud de la cadena y el grado de insaturación por fase inversa y detector de dispersión luminosa, para el estudio de aceites y grasas adulteradas. Determinación del contenido de Vitamina A y sus precursores (αyβcaroteno)en margarina y aceites de hígado por fase inversa. Determinación del contenido en Vitamina D en leche en polvo y cereales por fase normal