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  • Cromatografia de Inter Cam Bio Ionico

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    Juno Baez Ingeniero
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    CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO

    Hay tres tipos de Fases Estacionarias (Resinas):

    I. Resinas de poliestireno entrecruzadas

    II. Resinas basadas en Carbohidratos- (Carbohidratos


    Polimricos, Agarosa, dextrano, celulosa)

    Especialmente usados en la separacin de biomoleculas.

    III. Soportes basados en la Slice

    CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO

    CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO

    CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO

    Tipos Frecuentes de Resinas

    CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO

    Resina aninica de distintos tamaos

    Mecanismo
    Los iones de las sustancias de la mezcla desplazan a los contraiones de la columna. A su vez, ellos compiten con los iones de la FM por los sitios activos n(resinaA-H+) + Bn+ (resinaA-)nBn+ + nH+

    [H ] [B ] k= [H ] [B ]
    + n + n+ n re n+ re

    [H ] k= [H ]
    +

    + n

    re

    Donde: K es la cte de distribucin y k la de equilibrio

    La fuerza del enlace de la muestra depende de:


    Magnitud de la carga Ley de Coulomb - F q1q2/r2 3+ >2+ > 1+ Tamao del in hidratado (relacionado con la ecuacin de Coulomb)

    -Efecto del Amortiguador (Salino)


    Los cationes/aniones de la fase mvil pueden desplazar a la muestra de la columna
    Todas las sales NO son iguales

    Aniones: OH- < Cl- < NO3-

    < citrate3Cationes: H+ < NH4+ < K+ < Mg2+ < Ca2+


    Los polivalentes se sujetan mas fuertemente a la columna que los monovalentes

    CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO Factores que afectan a la retencin:


    1. Fuerza Inica

    1 I = (mi zi2 ) 2

    2. pH . Solo para intercambiadores, aninicos o


    catinicos, dbiles, ya que los fuertes estn totalmente disociados. Para aquellos se cumple:

    pH (bases) = pK a 1.5 pH (cidos) = pK a + 1.5


    3. Modificadores Orgnicos.

    La elucin en gradiente se realiza: 1. mediante cambios en la fuerza inica


    2. mediante cambios en el pH

    GRADIENTE: aumentando la concentracin de la fase mvil los iones compiten cada vez mas favorablemente con la muestra por los sitios activos cargados de la fase estacionaria

    Una vez terminada la separacin es necesario regenerar la resina para volverla a su estado original y poder utilizarla en una nueva separacin

    Supresin de iones
    La gran cantidad de iones que salen de la columna haca casi imposible distinguir la corriente transportada por la FM y cual por cada componente de la mezcla, en un detector adecuado como el conductimtrico. Para evitarlo una se coloca una segunda columna, columna supresora, con una resina de signo opuesto (detrs de la aninica una catinica y al revs) con la que se suprimen los iones no deseados, de la FM.

    Supresin de iones
    Ej.:a) En una separacin de cationes, si se ha utilizado HCl como eluyente, a continuacin se pone una columna supresora aninica en forma hidroxido:

    Re sin a + OH + H + + Cl Re sin a + Cl + H 2O
    Se eliminan los aniones del medio pero no afecta a los cationes de la muestra a analizar b) En las separaciones de aniones suele utilizarse el bicarbonato sdico como eluyente, y en este caso se utiliza como columna supresora una columna en forma catinica, donde se da:

    Re sin a H + + Na + + HCO3 Re sin a Na + + H 2CO3


    El cido carbnico se disocia poco y apenas contribuye al transporte de carga Esto permite utilizar un detector conductimtrico.

    Determinacin de anticonvulsantes en el suero despus de la extraccin de la fase slida. Anlisis de antibiticos de politer Determinacin de pesticidas. Determinacin de hemoglobina Identificacin de cidos orgnicos en la fruta y en el jugo por la cromatografa de exclusin de in. Determinacin de conservante de cido srbico y benzico en el alimento por el HPLC Separacin en HPLC de 22 hidrocarbonos aromticos policclicos con deteccin a en dos longitudes de onda Determinacin de masa modelada (steres de cido ftlico) por el HPLC y GC. HPLC de miniorificio de anticonvulsante en el suero. . Determinacin de patulina en el jugo de manzana. El mtodo requiere el anlisis de patulina por el HPLC con deteccin UV despus de la preparacin apropiada de la muestra Anlisis de imazalil que se usa como fungicida para frutas ctricas y anlisis de impurezas de gabexate mesilate proveniente de la Farmacopea de Japn Anlisis de cianuro, compuestos orgnicos y formaldeidos. Inyeccin directa de plasma de sangre para determinacin de drogas usando "Co-Sense para BA" (Part 1) Inyeccin directa de plasma de sangre para determinacin de drogas usando "Co-Sense para BA" (Part 2) Determinacin de cantidad de hidrocarbonos aromticos policclicos. HPLC de aldeidos y cetonas en ambiente cerrado y abierto. Ejemplo de una aplicacin de columnas semi-micro. Aqu muestra separacin por el mtodo de derivacin quiral. Deteccin de derivacin-fluorescencia post-columna para anlisis para varios tipos de pesticidas agrcolas . Determinacin simultnea de cido vanililmandlico (VMA), cido homovanlico (HVA) y catecolaminas en orina. Determinacin de metabolitos de Triptofan en el suero umbilical.

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