CN1849391A

CN1849391A - 腈水解酶、编码腈水解酶的核酸,以及制备和使用它们的方法

Info

Publication number: CN1849391A
Application number: CNA038166828A
Authority: CN
Inventors: G·德桑蒂斯; J·M·肖特; M·伯克; K·王; R·法韦尔; K·查特曼
Original assignee: Diversa Corp
Current assignee: BASF Enzymes LLC
Priority date: 2002-05-15
Filing date: 2003-05-15
Publication date: 2006-10-18
Anticipated expiration: 2023-05-15
Also published as: CN105296512A; AU2009203078A1; AU2003231789B2; AU2003231789C1; AU2003231789B8; JP2006511195A; WO2003097810A2; CA2486062A1; EP1576108A4; CA2486062C; JP2009279005A; AU2009203078A2; US20040002147A1; DK1576108T3; CN102796750A; AU2003231789A1; CN1849391B; WO2003097810A3; EP1576108A2; EP1576108B1

Abstract

本发明涉及腈水解酶和编码腈水解酶的核酸。并且，也提供了设计新颖腈水解酶的方法和使用它们的方法。腈水解酶在增高的pH和温度下具有增加的活性和稳定性。

Description

腈水解酶、编码腈水解酶的核酸，以及制备和使用它们的方法

相关申请的交叉参考文献

【0001】本申请要求基于在2002年9月9日申请的美国专利申请序列号No.(USSN)10/241,742和在2002年5月15日申请的USSN 10/146,772的优先权权益，这两个申请要求于2002年1月22日申请的USSN 60/351,336，于2001年7月30日申请的USSN 60/309,006，和于2001年6月21日申请的USSN 60/300,189的优先权权益；并且，本申请是于2000年12月28日申请的USSN 09/751,299的延续申请，该申请要求于2000年12月7日申请的USSN 60/254,414和于1999年12月29日申请的USSN 60/173,609的每一个申请的优先权权益。此处完整引入这些申请的所有目的是作为主题申请的参考。

版权宣告

发明领域

【0003】本发明总的来说涉及分子生物学、生物化学和化学领域，尤其是涉及具有腈水解酶(nitrilase)活性的酶蛋白(enzymatic proteins)。本发明也涉及编码该酶的多核苷酸，涉及这些多核苷酸和酶的用途。

发明背景

【0004】天然存在的酶在将腈转化为大量有用的产品和中间产物的工业化学加工中具有极大应用潜力。这样的酶包括腈水解酶，该酶能将腈直接转化为羧酸。腈水解酶存在于大范围的嗜温微生物中，包括如下种类：芽孢杆菌(Bacillus)、诺卡氏菌(Norcardia)、Bacteridium、红球菌属(Rhodococcus)；以及存在于包括如下物种的微生物中：芽孢杆菌、Norcardia、Bacteridium、红球菌属(Rhodococcus)、微球菌(Micrococcus)、短杆菌属(Brevibacterium)、产碱杆菌(Alcaligenes)、不动细菌属(Acinetobacter)、棒状杆菌(Corynebacterium)、镰刀菌(Fusarium)和克雷伯氏菌(Klebsiella)。此外，还有存在于细菌中的嗜热腈水解酶(thermophilicnitrilases)。

【0005】从腈到类似酸有两种主要途径：(1)腈水解酶催化腈直接水解为羧酸，同时伴随着释放氨；或者(2)腈水合酶通过碳氮键合体系添加水分子，以产生相应的酰胺，然后该酰胺能作为酰胺酶的底物，该酶水解碳-氮键以产生羧酸产物，同时伴随着释放氨。因此，腈水解酶提供了产生酸的更直接途径。

【0006】腈基团在合成途径的设计中有很多优点，它通常更容易被引入到分子结构中，而且作为掩蔽酸或酰胺基团，能被携带通过许多过程。然而，如果腈在合成中的相应步骤能被去掉掩蔽，这是反而有用的。氰化物代表具有广泛应用价值的C₁-合成纤维(氰化物是少数几个在水中稳定的负碳离子之一)，它可以在碳骨架的合成中被使用。然而，由于使用正常化学合成程序需要苛刻的反应条件来进行腈的水解，所以如此得到的腈的进一步转化受到了阻碍。使用酶来催化腈的反应是很有吸引力的，这是因为腈水解酶能完成反应，与许多传统化学方法相比较，该反应具有更少的对环境有害的试剂和副产物。实际上，腈的化学选择性的生物催化水解代表一个有价值的选择方案，原因在于它可以在室温(ambienttemperature)和接近生理pH的条件下发生。

【0007】药物设计和发现中的不对称有机合成的重要意义推动了对新合成方法和手性前体(chiral precursors)的寻找，手性前体可以在具有生物学重要性的复杂分子开发中被使用。手性分子(chiral molecules)的一个重要种类是α-取代的羧酸，其包括α-氨基酸。这些分子长期以来已经被公认是多种复杂的具有生物活性的分子的重要的手性前体，大量研究努力已经被投入到对映体纯的α-氨基酸和手性药物的合成方法的开发上。

【0008】对于制造手性药物的合成化学家来说，尤其有用的将是一种在未消毒条件下有用的酶系统，该系统在非生物实验室里有用，它可以以便于存储和使用的形式获得；该系统具有广泛的底物特异性，可以在水溶性极差的底物上发挥作用；该系统具有可预知的产物结构；该系统可以提供对酸或酰胺产物的选择；并且该系统能够手性区分(chiral differentiation)。因此，存在对于有效的、不昂贵的、高产量的合成方法的需求，该方法用于产生对映异构体纯的α-取代的羧酸，诸如，例如α-氨基酸和α-羟基酸。

【0009】此外，通常可以通过利用一种简便的高通量筛选或选择方法来帮助发现或演变进行特定转化的酶。尽管在不能得到有效的超高通量(ultra high throughout，UHTP)筛选之时，可以使用一种替代底物，但直接筛选一种特定地进行期望转化的酶还是需要的。设计UHTP筛选的前景是显然的，例如，当发现或演变计划的目的在于揭示立体选择性转化，以产生仅仅一种立体异构体或对映异构体时。在这种情况下，可以利用的高通量筛选方法是极其缺乏的。尽管最简单的方法是使用手性液相或气相分离法来分离两种正在讨论的对映异构体，但该方法通常不能提供所要求的极高通量容量。通过使用质谱学(MS)技术，极高通量筛选是可能的。然而，当以传统方式应用时，MS不能提供有关手性或对映体选择性的信息。

【00010】另一种方法是用一种单一对映异构体化合物化学方法衍生对映异构混合物，从而产生化合物的非对映体混合物，该混合物能在非手性固定相上分离的。而且，这是一种很麻烦的方法，不能很好地参与高通量筛选。

【00011】在整个申请中，作者参考了各种公开文献并且注明了日期。此处将这些公开文献的公开内容完整地引入本申请中，以便完整地描述本技术领域的技术人员所已知的现有技术的状况，其中现有技术至所描述的和所要求的本发明的日期为止。

发明概述

【00012】本发明关于一种分离核酸或重组核酸，包括核苷酸，具有一个与如下序列至少有大约50％相同的序列，如下序列为SEQ ID NO：1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，163，165，167，169，171，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385，或其变体，其中核酸编码具有腈水解酶活性的多肽。在本发明的另一个方面，核酸包括核苷酸，具有一个与SEQ ID NO：或其变体具有至少大约50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更高，或完全同一性(100％相同)的序列。例证性的变体可能包括，例如，SEQ ID NO：195，205，207，209或237的下述变体，在如下位点具有一个或更多突变：位点163-165 AAA，AAG，GGT，GGC，GGA，GGG，CAA或CAG；位点178-180 GAA或GAG；位点331-333TCT，TCC，TCA，TCG，AGT或AGC；位点568-570 CAT，CAC，TCT，TCC，TCA，TCG，AGT，AGC，ACT，ACC，ACA，TCA，TAT，TAC，ATG或ACG；位点571-573 TTA，TTG，CTT，CTC，CTA，CTG，GTT，GTC，GTA，GTG，ATG，ACT，ACC，ACA，GAT，GAC，GGT，GGC，GGA，GGG，GAA，GAG，TAT，TAC或ACG；位点595-597 GAA，GAG，TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；位点646-666 TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；或其任意组合。在本发明的一个方面，相比于由SEQ ID NO编码的多肽，变体编码具有提高的或者降低的对映体选择性的多肽，例如，在3-羟基戊二酰基腈(3-hydroxyglutarylnitrile，HGN)到(R)-4-氰基-3-羟基丁酸酯的转化中。

【00013】在本发明的一个方面，核酸包括核苷酸，具有一个与SEQ ID NO：或其变体基本上相同的序列。在另一个方面，本发明提供了一种分离核酸或重组核酸，该核酸包括连续核苷酸，该核苷酸具有一个与SEQ ID NO：33具有至少79％同一性的序列，其中所述核酸编码具有腈水解酶活性的多肽。本发明提供了所述核酸的片段，其中所述片段编码具有腈水解酶活性的多肽。本发明也提供了与所述核酸中任何一个互补的分离核酸或重组核酸。本发明也提供了与所述核酸中任何一个在严格条件下杂交的分离核酸或重组核酸。一方面，严格条件包括至少50％甲酰胺，和大约37℃到大约42℃。

【00014】本发明提供了一个核酸探针，包括从大约15个核苷酸到大约10，15，20，25，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100，150，200，250，300，350，400，450，500个或更多个核苷酸，其中至少10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20个或更多个连续核苷酸与如下序列所描述的核酸序列内的核酸靶区域有至少50％互补性：SEQ ID NO：1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，163，165，167，169，171，173，175，177，179，181，183，185，187，1 89，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385，其变体，或它们的补体。一方面，核酸探针包括连续核苷酸，这些核苷酸与核酸靶区域具有至少55％的互补性。一方面，本发明提供了一个核酸探针，其中连续核苷酸与核酸靶区域具有至少50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更高或者100％互补性。另一方面，核酸主要包括大约20到大约50个核苷酸。在其它方面，核酸的长度可以是至少大约20，25，30，35，40，45，50，75，100，150个核苷酸。

【00015】本发明提供了一种核酸载体，该核酸载体能在宿主细胞中复制，其中所述载体包括本发明的核酸。本发明也提供了包括所述核酸的宿主细胞。本发明也提供了一种包括该宿主细胞的宿主生物体。一方面，该宿主生物体包括革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌或真核生物。另一方面，革兰氏阴性细菌包括大肠杆菌(Escherichia coli)或荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。在进一步的一方面，革兰氏阳性细菌包括戴弗萨链霉菌(Streptomyces diversa)、加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus cremoris)或枯草杆菌(Bacillus subtilis)。在进一步的一方面，真核生物包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、非洲粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyce pombe)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、Hansenula plymorpha或黑曲霉(Aspergillus niger)。

【00016】本发明提供了一种分离核酸或重组核酸，该核酸编码多肽，该多肽包括氨基酸，所述氨基酸具有一个与如下序列具有至少50％同一性的序列，SEQ ID NO：2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386或其变体，其中多肽具有腈水解酶活性。一方面，多肽包括与SEQ ID NO或其变体具有至少大约50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更高或100％同一性的氨基酸。例证性的变体可以包括，例如，SEQ ID NO：196，206，208，210或238的下述变体，具有一个或多个突变：在残基55处赖氨酸、甘氨酸或谷氨酰胺；在残基60处谷氨酸；在残基111处丝氨酸；在残基190处丝氨酸、组氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基191处亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基199处谷氨酸或亮氨酸；在残基222处亮氨酸；或其任意组合。

【00017】本发明也提供了一种分离核酸或重组核酸，该核酸编码包括至少10个连续氨基酸的多肽，所述氨基酸具有一个与如下序列的一个氨基酸序列的一部分相同的序列，SEQ ID NO：2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386或其变体。

【00018】一种分离多肽或重组多肽，该多肽包括氨基酸，所述氨基酸具有一个序列，该序列至少大约50％与如下序列相同，SEQ ID NO：2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386或其变体，其中所述多肽具有腈水解酶活性。在本发明的一方面，多肽包括氨基酸，所述氨基酸具有一个序列，该序列至少大约50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更高或100％与SEQ ID NO：或其变体相同。

【00019】本发明提供了一种分离核酸或重组核酸，该核酸包括核苷酸，所述核苷酸具有一个序列，所述序列以如下的SEQ ID NO：1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，163，165，167，169，171，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385及其变体中的任何一个所阐明(下文称作“A组核酸”)。本发明也涉及与A组核酸序列中的任意序列具有具体说明的最小百分比的序列同一性的核酸。

【00020】另一方面，本发明提供了一种分离(纯化)多肽或重组多肽，该多肽包括氨基酸残基，该残基具有一个如下述序列中的任意一个序列所示的序列，如下述序列为SEQ ID NO：2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386或其变体，(下文称作“B组氨基酸序列”)。本发明也涉及纯化的多肽，该多肽与B组氨基酸序列中的任意一个序列具有具体说明的最小百分比的序列同一性。

【00021】本发明提供了一个多肽片段，该片段的长度至少是50个氨基酸，并且其中所述片段具有腈水解酶活性。进一步，本发明提供了一种多肽或其片段的肽模拟体(peptidomimetic)，该肽模拟体具有腈水解酶活性。本发明提供了一种密码子最优化的多肽或其片段，该片段具有腈水解酶活性，其中密码子使用被最优化，以适合特定生物或细胞。Narum等人Infect.Immun.2001年12月，69(12)：7250-3描述了小鼠系统中的密码子最优化。Outchkourov等人Protein Expr.Purif.2002年2月；24(1)：18-24描述了酵母系统中的密码子最优化。Feng等人Biochemistry 2000年12月19，39(50)：15399-409描述了大肠杆菌(E.coli)中的密码子最优化。Humphreys等人Protein Expr.Purif.2000年11月，20(2)：252-64描述了密码子使用如何影响大肠杆菌中的分泌作用。

【00022】一方面，生物体或细胞包括革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌或真核生物。在本发明的另一个方面，革兰氏阴性细菌包括大肠杆菌(Escherichia coli)或荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。在本发明的另一个方面，革兰氏阳性细菌包括戴弗萨链霉菌(Streptomyces diversa)、加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus cremoris)或枯草杆菌(Bacillus subtilis)。在本发明的进一步的一方面，真核生物包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、非洲粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyce pombe)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、Hansenulaplymorpha或黑曲霉(Aspergillus niger)。

【00023】另一方面，本发明提供了一种纯化抗体，该抗体与本发明的多肽或其具有腈水解酶活性的片段特定地结合。一方面，本发明提供了一个抗体片段，该抗体片段与具有腈水解酶活性的多肽特定地结合。

【00024】本发明提供了一种酶制剂，该酶制剂包括至少一种本发明的多肽，其中所述制剂是液体或干燥的。该酶制剂包括缓冲剂、辅因子或第二或额外的蛋白质。一方面，该制剂被固定在固体载体上。在本发明的一方面，该固体载体可以是凝胶、树脂、聚合物、陶瓷制品、玻璃、微电极及其任意组合。另一方面，该制剂可以被封装在凝胶或珠子中。

【00025】本发明进一步提供了一种组合物，该组合物包括至少一种本发明的核酸，所述核酸包括至少一种本发明的多肽或其具有腈水解酶的片段，或其肽模拟体，或其任意组合。

【00026】本发明提供了一种方法，用于将腈水解为羧酸，包括将该分子在适合腈水解酶活性的条件下与至少一种本发明的多肽或其具有腈水解酶活性的片段，或其肽模拟体接触。一方面，所述条件包括含水条件。另一方面，所述条件包括pH为大约8.0，和/或温度为大约37℃到大约45℃。

【00027】本发明提供了一种方法，用于水解一个分子的羟腈部分(cyanohydrinmoiety)或氨基腈部分(aminonitrile moiety)，所述方法包括在适合腈水解酶活性的条件下将该分子与本发明的至少一种多肽，或其具有腈水解酶活性的片段，或其肽模拟体接触。

【00028】本发明提供了一种方法，用于产生手性α-羟基酸分子、手性氨基酸分子、手性β-羟基酸分子、或手性γ-羟基酸分子，所述方法包括将具有羟腈部分或氨基腈部分的分子与至少一种具有对映体选择性的腈水解酶活性的多肽混和，所述多肽具有一个氨基酸序列，该序列与B组氨基酸序列或其片段具有至少50％的同一性，或其肽模拟体。一方面，手性分子是(R)-对映异构体。另一方面，手性分子是(S)-对映异构体。在本发明的一方面，特定酶可以对特定底物具有R-特异性，并且该酶可以对不同特定底物具有S-特异性。

【00029】本发明也提供了一种方法，用于产生组合物或其中间体，该方法包括将该组合物或中间体的前体与本发明的至少一种多肽，或其具有腈水解酶活性的片段或肽模拟体混和，其中所述前体包括羟腈部分或氨基腈部分；水解前体中的羟腈部分或氨基腈部分，从而制备其组合物或中间体。一方面，该组合物或中间体包括(S)-2-氨基-4-苯基丁酸。在进一步的一方面，其组合物或中间体包括L-氨基酸。在进一步的一方面，该组合物包括一种食品添加剂或药用药物。

【00030】本发明提供了一种方法，用于产生(R)-乙基-4-氰基-3-羟基丁酸，该方法包括将羟基戊二酰基腈与至少一种多肽，或其具有腈水解酶活性的片段或肽模拟体接触，选择性地产生(R)-对映异构体，从而制备(R)-乙基-4-氰基-3-羟基丁酸，所述多肽具有一个B组氨基酸序列的氨基酸序列。一方面，效率(ee)是至少95％或至少99％。另一方面，羟基戊二酰基腈包括1，3-二-氰基-2-羟基-丙烷或3-羟基戊二酰基腈。在进一步的一方面，多肽具有B组氨基酸序列的任意一个中的一个氨基酸序列，或其具有腈水解酶活性的片段或肽模拟体。

【00031】本发明也提供了一种方法，用于产生(S)-乙基-4-氰基-3-羟基丁酸，该方法包括将羟基戊二酰基腈与至少一种多肽，或其具有腈水解酶活性的片段或肽模拟体接触，选择性地产生(S)-对映异构体，从而产生(S)-乙基-4-氰基-3-羟基丁酸，所述多肽具有B组氨基酸序列的一个氨基酸序列。

【00032】本发明提供了一种方法，用于产生(R)-扁桃酸，该方法包括将扁桃腈与至少一种多肽，或其具有适当腈水解酶活性的任意片段或肽模拟体混和，所述多肽具有B组氨基酸序列的任意一个氨基酸序列。一方面，(R)-扁桃酸包括(R)-2-氯扁桃酸。另一方面，(R)-扁桃酸包括在邻-、间-或对-位的一个芳香环取代；(R)-扁桃酸的1-萘基衍生物，(R)-扁桃酸的吡啶基衍生物，或(R)-扁桃酸的噻吩基衍生物，或其任意组合。

【00033】本发明提供了一种方法，用于产生(S)-扁桃酸，该方法包括将扁桃腈与至少一种多肽，或其具有腈水解酶活性的任意片段或肽模拟体混和，所述多肽具有B组序列的氨基酸序列。一方面，(S)-扁桃酸包括(S)-甲基苄基氰化物，扁桃腈包括(S)-甲氧基-苄基氰化物。一方面，(S)-扁桃酸包括在邻-、间-或对-位的芳香环取代；(S)-扁桃酸的1-萘基衍生物，(S)-扁桃酸的吡啶基衍生物，或(S)-扁桃酸的噻吩基衍生物，或其任意组合。

【00034】本发明也提供了一种方法，用于产生(S)-苯基乳酸衍生物或(R)-苯基乳酸衍生物，该方法包括将苯基乳腈与至少一种多肽或其任意活性片段或肽模拟体混和，选择性地产生(S)-对映异构体或(R)-对映异构体，从而产生(S)-苯基乳酸衍生物或(R)-苯基乳酸衍生物，所述多肽选自B组氨基酸序列。

【00035】本发明提供了一种方法，用于产生本发明的多肽或其片段，该方法包括(a)在允许宿主细胞产生多肽的条件下将编码多肽的核酸引入宿主细胞，和(b)回收如此所产生的多肽。

【00036】本发明提供了一种方法，用于产生编码具有腈水解酶活性的多肽的核酸变体，其中所述变体具有相对于自然发生者具有改变了的生物活性，该方法包括(a)通过如下步骤修饰核酸：(i)用一个不同的核苷酸替换一个或多个核苷酸，其中核苷酸包括天然或非天然核苷酸；(ii)缺失一个或多个核苷酸，(iii)增加一个或多个核苷酸，或(iv)其任意组合。一方面，非天然核苷酸包括肌苷。另一方面，该方法进一步包括，分析由所修饰的核酸编码的多肽的腈水解酶活性改变，从而识别编码具有改变的腈水解酶活性的多肽的修饰核酸(或者多种核酸)。一方面，步骤(a)的修饰是由如下方法实现的：PCR、易错PCR(error-prone PCR)、改组(shuffling)、寡核苷酸指导的诱变(oligonucleotide-directed mutagenesis)、装配PCR(assembly PCR)、有性PCR诱变(sexual PCR mutagenesis)、体内诱变(invivo mutagenesis)、盒式诱变(cassette mutagenesis)、递归集合诱变(recursiveensemble mutagenesis)、指数集合诱变(exponential ensemble mutagenesis)、位点特异性诱变(site-specific mutagenesis)、基因重装配(gene reassembly)、基因位点饱和诱变(gene site saturated mutagenesis)、连接酶链式反应(ligase chain reaction)、体外诱变(in vitro mutagenesis)、连接酶链式反应(ligase chain reaction)、寡核苷酸合成(oligonucleotide synthesis)、任何产生DNA的技术及其任意组合。另一方面，该方法进一步包括至少重复一次修饰步骤(a)。

【00037】本发明进一步提供了一种方法，用于从两个或更多个核酸产生多核苷酸，该方法包括：(a)识别两个或更多个核酸之间的相同区域和不同区域，其中至少一个核酸包括本发明的核酸；(b)提供一组寡核苷酸，其与所述两个或更多个核酸中的至少两个核酸在序列上相符合；和(c)用聚合酶延伸该寡核苷酸，从而产生多核苷酸。

【00038】本发明进一步提供了一种用于鉴定腈水解酶的筛选分析法，该分析方法包括：(a)提供多个核酸或多肽，包括至少一种本发明的核酸，或至少一种本发明的多肽；(b)从上述多个之中，获得将要测试腈水解酶活性的多肽候选者；(c)测试候选者的腈水解酶活性；和(d)鉴定那些是腈水解酶的多肽候选者。一方面，该方法进一步包括在测试候选者的腈水解酶活性之前，修改至少一种核酸或多肽。另一方面，步骤(c)的测试进一步包括测试包括在宿主细胞或宿主生物中的改良表达。在进一步的一方面，步骤(c)的测试进一步包括在pH值为大约3到大约12的范围内测试腈水解酶活性。在进一步的一方面，步骤(c)的测试进一步包括在pH值为大约5到大约10的范围内测试腈水解酶活性。另一方面，步骤(c)的测试进一步包括在温度为大约4℃到大约80℃的范围内测试腈水解酶活性。另一方面，步骤(c)的测试进一步包括在温度为大约4℃到大约55℃的范围内测试腈水解酶活性。另一方面，步骤(c)的测试进一步包括测试腈水解酶活性，这导致产生了对映体选择性反应产物(enantioseletive reaction product)。另一方面，步骤(c)的测试进一步包括测试腈水解酶活性，这导致产生了区域选择性反应产物(regio-selective reaction product)。

【00039】本发明提供了在如下的方法中使用本发明的核酸，或其具有腈水解酶活性的片段或肽模拟体，该方法是被设计用来优化基因的某一方面或由该基因编码的多肽的某一方面。一方面，该方法包括将修饰引入核酸的核苷酸序列。另一方面，修饰是由如下方法引入的：PCR、易错PCR、寡核苷酸指导的诱变、装配PCR、有性PCR诱变、体内诱变、盒式诱变、递归集合诱变、指数集合诱变、位点特异性诱变、基因重装配、基因位点饱和诱变、连接酶链式反应、体外诱变、连接酶链式反应、寡核苷酸合成、任何其它产生DNA的技术及其任意组合。在进一步的一方面，该方法可以被重复。

【00040】本发明提供了在工业方法中使用本发明的多肽，或其具有将水解酶活性的片段或肽模拟体。一方面，该方法用来产生药物组合物，该方法用来产生化学制品，该方法用来产生食品添加剂，该方法用来催化废物的分解，或该方法用来产生药物中间体。在进一步的一方面，该方法包括使用所述多肽来水解羟基戊二酰基腈底物。在进一步的一方面，该方法用来产生LIPITOR^TM。另一方面，所用的多肽包括一个多肽，该多肽具有序列SEQ ID NO：44，196，208，210或238或其具有腈水解酶活性的片段的连续氨基酸。另一方面，该方法用来产生洗涤剂。另一方面，该方法用来产生食物产品。

【00041】本发明提供了在制备转基因生物中使用本发明的核酸，或其编码具有腈水解酶活性的多肽的片段。

【00042】本发明提供了一个试剂盒，该试剂盒包括(a)本发明的核酸，或其编码具有腈水解酶活性的多肽的片段，或(b)本发明的多肽，或其具有腈水解酶活性的片段或肽模拟体，或其组合；盒(c)一种缓冲剂。

【00043】本发明提供了一种方法，用来修饰分子，该方法包括：(a)将本发明的多肽或其具有腈水解酶活性的片段或肽模拟体与起始分子混和，以产生一种反应混合物；(b)将起始分子与多肽反应，以产生修饰的分子。

【00044】本发明提供了一种方法，用来鉴定修饰的化合物，该方法包括：(a)将本发明的多肽或其具有腈水解酶活性的片段或肽模拟体与起始化合物混和，以产生一种反应混合物，然后产生修饰的起始化合物的文库；(b)测试该文库，以确定该文库中是否存在表现出期望活性的修饰的起始化合物；(c)鉴定表现出期望活性的修饰化合物。

【00045】本发明提供了一种筛选分析法，用来分析对映体选择性转化，该方法包括：(a)提供具有两个前手性或局部对映部分的分子；(b)标记该分子的至少一个前手性或局部对映部分；(b)通过选择性催化剂修饰两个部分中的至少一个；和(c)通过质谱分析检测结果。筛选分析法可以被用来确定或监控对映体过量百分比(ee)，或确定非对映体过量百分比(de)。在该分析方法中有用的一个例证性标记是重同位素或轻(liter)同位素。在该分析方法中有用的选择性催化剂可以是酶。可以采用两个部分予以标记来完成筛选分析。筛选分析法可以在两个方向进行，即从反应物到产物，以及从产物到反应物。

【00046】本发明提供了一种可机读的存储介质，其上已经存储了本发明的核酸，例如包括至少一个核苷酸序列的核酸，选自如下序列：SEQ ID NO：1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，163，165，167，169，171，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385及其变体，和/或至少一个选自如下序列的氨基酸序列，SEQ ID NO：2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386或其变体。

【00047】本发明提供了一种计算机系统，该系统包括一个处理器和一个数据存储设备，其中数据存储设备上已经存储了本发明的核酸，例如包括至少一个核苷酸序列的核酸，选自如下序列：SEQ ID NO：1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，163，165，167，169，171，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385，及其变体，和/或至少一个选自如下序列的氨基酸序列，SEQ ID NO：2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386或其变体。一方面，计算机系统进一步包括一个序列比较算法和一个已经存储了至少一个参考序列的数据存储设备。另一方面，序列比较算法包括识别多态性的计算机程序。

【00048】本发明提供了一种方法，用于识别序列中的特征，该方法包括：(a)将序列输入到计算机中；(b)在计算机上运行序列特征识别程序，以便在序列中识别特征；和(c)识别序列中的特征，其中所述序列包括本发明的核酸，例如包括SEQ ID NO：1-386中至少一个序列的核酸，它的变体，或其任意组合。

【00049】本发明提供了一种测定方法，用于识别多肽的功能片段，该方法包括：(a)获得本发明的至少一个多肽的片段；(b)将步骤(a)的至少一个片段与具有一个羟腈部分或氨基腈部分的底物接触，条件是适合腈水解酶活性；(c)测量由步骤(b)中至少一个片段中的每一个所产生的反应产物的量；和(d)识别能产生腈水解酶反应产物的至少一个片段；从而识别多肽的功能片段。一方面，步骤(a)的片段是通过合成片段得到的。另一方面，步骤(a)的片段是通过断裂多肽获得的。

【00050】本发明提供了一种测定方法，用于识别多肽的功能变体，该方法包括：(a)获得本发明的至少一个多肽的至少一个变体；(b)将步骤(a)的至少一个变体与具有一个羟腈部分或氨基腈部分的底物接触，条件是适合腈水解酶活性；(c)测量步骤(b)的至少一个变体中的每一个所产生的反应产物的量；和(d)识别能产生腈水解酶反应产物的至少一个变体；从而识别多肽的功能变体。

附图简述

【00051】图1显示了化学反应示意图，其中立体选择性腈水解酶水解羟腈或氨基腈，以产生手性α-羟基酸或α-氨基酸。

【00052】图2图解说明了一种基于OPA(邻苯二醛)的氰化物检测分析法，用于鉴定腈水解酶活性的存在。

【00053】图3是用于检测和量化α-羟基酸的光谱系统的图例，所述检测和量化基于立体选择性乳酸脱氢酶。

【00054】图4是用于检测和量化α-氨基酸的光谱系统的图例，所述检测和量化基于立体选择性氨基酸氧化酶。

【00055】图5是一个流程图，举例说明了腈水解酶筛选方法的步骤。

【00056】图6A-6E是用于D-苯基甘氨酸的底物和产物结合的色谱特征，显示了空白样品(图6A)，酶反应样品(图6B)；在缓冲液中包括细胞溶解产物的阴性对照组(图6C)；苯基甘氨酸的手性分析(图6D)；和具有D-对映异构体的腈峰的共洗脱(图6E)。

【00057】图7A-7E说明了色谱图，其表征(R)-2-氯扁桃酸的底物和产物结合。图7A显示了缓冲液中仅有2-氯扁桃腈；图7B显示了氯扁桃酸标准。图7C的色谱图显示出现了产物，并且底物峰值表现降低。

【00058】图8A-8B举例说明了(S)-苯基乳酸的底物和产物结合的色谱特征。

【00059】图9A-9B举例说明了L-2-甲基苯基甘氨酸的底物和产物结合的色谱特征。

【00060】图10A-10C举例说明了L-叔-亮氨酸的底物和产物结合的色谱特征。

【00061】图11A-11C举例说明了(S)-2-氨基-6-羟基己酸的底物和产物结合的色谱特征。

【00062】图12A-12D举例说明了4-甲基-D-亮氨酸和4-甲基-L-亮氨酸的底物和产物结合的色谱特征。

【00063】图13A-13B举例说明了(S)-环己基扁桃酸的底物和产物结合的色谱特征。

【00064】图14A-14B举例说明与本发明的筛选分析法有关的、用于定量的两个例证性标准曲线。

【00065】图15举例说明了所选择的化合物，所述化合物可以使用本发明的酶和/或方法从腈水解酶催化的反应产生。

【00066】图16举例说明了所选择的化合物，所述化合物可以使用本发明的酶和/或方法从腈水解酶催化的反应产生。

【00067】图17举例说明了本发明的例证性腈水解酶反应。

发明详述

【00068】本发明涉及腈水解酶、编码腈水解酶的核酸，及其用途。正如此处所用，术语“腈水解酶”包括具有任意腈水解酶活性的任意多肽，例如，能将腈催化为它们的相应羧酸和氨的能力。腈水解酶具有商业用途，如作为生物催化剂用于对映体选择性的芳族和脂族氨基酸或羟基酸的合成。

【00069】腈水解酶化学如下所述：

【00070】制备羟基酸的腈水解酶反应如下：

【00071】制备氨基酸的腈水解酶反应如下：

【00072】此外，在前述水解反应的每一个反应中，消耗了两个水分子，释放了一个氨分子。

【00073】有几种类型的分析方法，用来测试样品中腈水解酶活性的存在，或者用来测试特定多肽是否表现出腈水解酶活性。例如，这些分析方法可以检测由腈水解酶催化的化学反应中存在还是不存在产物或副产物。例如，腈水解酶活性的存在可以通过分别从羟腈部分或氨基腈部分中产生α-羟基酸或α-氨基酸来检测，腈水解酶活性水平可以通过测量所产生的反应产物的相对量来量化。图1显示了化学反应示意图，使用立体选择性腈水解酶以高产量产生手性α-羟基酸或α-氨基酸。起始材料是醛或亚胺，亚胺是醛与氨反应产生的。醛或亚胺与氰化氢的反应产生了相应的羟腈和氨基腈的对映异构体混合物。然后可以用立体选择性腈来立体选择性地将一个对映异构体转化为相应的α-羟基酸或α-氨基酸。图3示意性地说明了α-羟基酸的立体选择性腈水解酶依赖性产生和分光光度测定，基于α-羟基酸乳酸脱氢酶转化α-羟基酸为相应的α-酮酸，和伴随的可检测染料的氧化-还原作用。图4示意性地说明了α-氨基酸的立体选择性腈水解酶依赖性产生和分光光度测定，基于氨基酸脱氢酶转化α-氨基酸为相应的α-酮酸，和伴随的可检测染料的氧化-还原作用。

【00074】考虑在本发明的实践中使用的腈水解酶包括，那些将腈或羟腈立体选择性地水解为它们的相应酸和氨的腈水解酶。一方面，本发明的腈水解酶可以立体选择性地将腈或羟腈水解为它们的相应酸和氨。腈水解酶包括，例如本发明的腈水解酶，如那些在B组氨基酸序列中所示的腈水解酶。下边的表中所示为一些立体选择性地水解它们的底物的腈水解酶。

【00075】本发明的腈水解酶共有下述额外的特征：

(1)大约333个氨基酸到大约366个氨基酸的全长氨基酸序列，

(2)作为由大约2个亚单位到大约16个亚单位的同多聚体的集合和活性，

(3)连续氨基酸谷氨酸-赖氨酸-半胱氨酸(Glu-Lys-Cys)的催化性三联体(catalytic triad)的存在，

(4)从大约pH5到大约pH9的最适pH，和

(5)从大约0℃到大约100℃，或者从大约40℃到大约50℃的最适温度。

在新腈水解酶中的共有序列

【00076】此处公开的腈水解酶是使用生物信息学和序列比较程序研究的，收集到下述共有序列信息。在腈水解酶多肽中鉴别到三个区域的保守基序(conservedmotifs)。这相当于腈水解酶中存在的催化性三联体(E-K-C)。(H.Pace和C.Brenner(2001年1月15日)“The Nitrilase Superfamily：classification，structure andfunction(腈水解酶超家族：分类，结构和功能)”Genome Biology第2卷，第1期，第1-9页。)

【00077】此处所用的缩写是用于氨基酸的传统的单字母代码：A代表丙氨酸；B代表天冬酰胺或天冬氨酸；C代表半胱氨酸；D代表天冬氨酸；E代表谷氨酸盐，谷氨酸；F代表苯基丙氨酸；G代表甘氨酸；H代表组氨酸；I代表异亮氨酸；K代表赖氨酸；L代表亮氨酸；M代表蛋氨酸；N代表天冬酰胺；P代表脯氨酸；Q代表谷氨酰胺；R代表精氨酸；S代表丝氨酸；T代表苏氨酸；V代表缬氨酸；W代表色氨酸；Y代表酪氨酸；Z代表谷氨酰胺或谷氨酸。参见L.Stryer，Biochemistry(生物化学)，1988，W.H.Freeman and Company，纽约。

【00078】在本发明的腈水解酶多肽序列中所进行的计算机序列比较，导致在每一个氨基酸序列中鉴别到这些基序：

F

P

E

t

f

r

R

K

L

.

P

T

L

.

C

W

E

h

.

P

【00079】下述残基(那些带下划线的残基)在所有被鉴别的腈水解酶中是完全保守的：第一个基序或区域中的第三个氨基酸(E代表谷氨酸)；第二个基序中的第二个残基(R代表精氨酸)；第二个基序中的第三个残基(K代表赖氨酸)；第三个基序中的第三个残基(C代表半胱氨酸)；和第三个基序中的第五个残基(E代表谷氨酸)。

【00080】在这些方框中，大写字母表示本发明的腈水解酶中的90％或更高的共有性，而小写字母表示50％或更低的共有性。斜体字母表示在本发明的腈水解酶中具有30％或更高的共有性。方框中的圆点表示非保守的残基。

【00081】在Pace和Brenner文章中，腈水解酶超家族的腈水解酶分支中的腈水解酶序列被描述为具有催化性三联体(Genome Biology，2001，第二卷，第一期，第1-9页)。然而，本发明的腈水解酶的催化性三联体区域与先前那些在Pace和Brenner参考文献中所鉴别的催化性三联体在下述方面不同：

【00082】在第一个基序中的区别：第一个基序的第一个方框中的F在本发明腈水解酶中保守性为90％，而不是那些先前所鉴别的腈水解酶所具有的仅仅50％。第一个基序的第四个残基是一个“t”，在本发明的腈水解酶中的苏氨酸，它被发现具有50％或更高的共有性。然而，该残基被Pace和Brenner鉴别为“a”(丙氨酸)。第一个基序的最后一个残基被鉴别是“f”(苯基丙氨酸)，被表明以50％或更高的共有性发生。然而，本发明的腈水解酶仅显示“f”(苯基丙氨酸)，以30％的共有性发生。

【00083】在第二个基序中的区别：在本发明的腈水解酶的第二个基序的第一个方框中有一个“r”(精氨酸)。然而，Pace和Brenner共有性表明在那个位置有一个“h”(组氨酸)。第二个方框中的“R”(精氨酸)在本发明的腈水解酶中是完全保守的，然而该残基在Pace和Brenner参考文献中仅表现出90％的共有性。第二个基序的第四个方框中的“L”(亮氨酸)在90％或更高百分比的本发明的腈水解酶中是保守的。然而，Pace和Brenner腈水解酶仅仅表明该残基在50％的序列中具有保守性。同样地，第二个基序的第六个方框中的“P”(脯氨酸)在90％或更高百分比的本发明的腈水解酶中是保守的。然而，Pace和Brenner腈水解酶仅仅表明该残基在50％的序列中具有保守性。

【00084】第三个基序中的区别：第一个方框中的“L”在90％或更高百分比的本发明的腈水解酶中是保守的。然而，Pace和Brenner参考文献仅表明该残基当时显示50％。最后，本发明的腈水解酶中的第三个基序中的第六个方框当时表明组氨酸为50％。然而，Pace和Brenner参考文献表明，该位置当时表明天冬酰胺为50％。

【00085】本发明提供了一种具有腈水解酶活性的分离多肽，该多肽包括三个区域，其中第一个区域包括五个氨基酸，其中第一个区域的第一个氨基酸是F，第一个区域的第四个氨基酸是T。本发明也提供了一种具有腈水解酶活性的分离多肽，该多肽包括三个区域，其中第二个区域包括七个氨基酸，其中第二个区域的第一个氨基酸是R，其中第二个区域的第二个氨基酸是R，其中第二个区域的第六个氨基酸是P。本发明也提供了一种具有腈水解酶活性的多肽，该多肽包括三个区域，其中第三个区域包括九个氨基酸，其中第三个区域的第一个氨基酸是L，第三个区域的第六个氨基酸是H。

【00086】本发明也提供了一种具有腈水解酶活性的分离多肽，该多肽包括三个共有子序列，其中第一个共有子序列是FPETF，其中第二个共有子序列是RRKLXPT，其中第三个共有子序列是LXCWEHXXP。

【00087】本发明也提供了一种具有腈水解酶活性的分离多肽，该多肽包括三个共有子序列，其中第一个共有子序列是FPEXX，其中第二个共有子序列是XRKLXPT，其中第三个共有子序列是LXCWEXXXP。

【00088】根据本发明，提供了产生对映体纯的α-取代羧酸的方法。由本发明的方法产生的对映体纯的α-取代羧酸具有如下结构：

其中：

R₁≠R₂，另外R₁和R₂独立地是-H，取代或未取代的烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环，其中所述取代基是低级烷基、羟基、烷氧基、氨基、巯基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、芳氧基或卤素，或任意地R₁和R₂是直接或非直接共价结合，以形成一个功能环部分，E是-N(R_X)₂或-OH，其中每一个R_X独立地是-H或低级烷基。

【00089】正如此处所用，术语“烷基”指1到24个碳原子的直链或支链或环烃基，包括甲基、乙基、n-丙基、异丙基、n-丁基、异丁基、叔-丁基、n-戊基、n-己基及其类似基团。术语“低级烷基”指1个到大约6个碳原子的单价直链或支链或环基。

【00090】正如此处所用，“烯基”指具有一个或多个碳碳双键，并且具有大约2个到大约24个碳原子的直链或支链或环烃基。

【00091】正如此处所用，“炔基”指具有至少一个碳碳三键，并且具有大约2个到大约24个碳原子的直链或支链或环烃基。

【00092】正如此处所用，“环烷基”指含有大约3到大约14个碳原子的环烃基。

【00093】正如此处所用，“杂环”指具有一个或多个杂环原子(例如N，O，S，P，Se，B等等)作为环结构的一部分，并且具有大约3个到大约14个碳原子的环状基团。

【00094】正如此处所用，“芳基”指具有大约6个到大约14个碳原子的芳香基团(即具有共轭双键系统的环状基团)。

【00095】正如此处所用，关于化学基团或部分，术语“取代的”指这样的一个基团或部分进一步具有一个或多个非氢取代基。这样的取代基的实例包括，但不限于，氧(例如在酮、醛、醚或酯中)、羟基、烷氧基(低级烷基的)、氨基、硫基、巯基(低级烷基的)、环烷基、取代的环烷基、杂环、取代的杂环、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、芳氧基、取代的芳氧基、卤素、三氟甲基、氰基、硝基、硝酮基、氨基、酰氨基、-C(O)H、酰基、氧酰基、羧基、氨基甲酸酯、磺酰基、磺酰胺、硫酰基及其类似基团。

【00096】在优选的方面，由本发明的方法所产生的对映体纯的α-取代的羧酸是α-氨基酸或α-羟基酸。在一些方面，对映体纯的α-氨基酸是D-苯基丙氨酸、D-苯基甘氨酸、L-甲基苯基甘氨酸、L-叔-亮氨酸、D-丙氨酸或D-羟基正亮氨酸((S)-2-氨基-6-羟基己酸)、R-泛内酯、2-氯扁桃酸或(S)-或(R)-扁桃酸，对映体纯的α-羟基酸是(S)-环己基扁桃酸。正如此处所用，“小分子”包括分子量为至少25道尔顿的任意分子。

【00097】此处所用的术语“大约”意思是大概、粗略地、左右或某一个范围内。当术语“大约”与数字范围联合使用时，它通过扩展所罗列的数值的上界和下界修改该范围。总的来说，此处使用术语“大约”在所标明的数值的上下修改该数值，范围是上下20％(更高或更低)。

【00098】正如此处所用，单词“或者”指特定列表中的任意一个成员，也包括该列表中的成员的任意组合。

【00099】此处所用的短语“核酸”指自然发生或合成的寡核苷酸或多核苷酸，是DNA或RNA或DNA-RNA杂交体，单链或双链，有义或反义，能通过沃森-克里克碱基配对(Watson-Crick base-pairing)杂交到一个互补核酸上。本发明的核酸也包括核苷酸类似物(例如BrdU)，非磷酸二酯核苷酸间键合(例如肽核酸(PNA)或硫二酯键合)。尤其是，核酸可以包括，但不限于，DNA，RNA，cDNA，gDNA，ssDNA或dsDNA或其任意组合。在一些方面，本发明的“核酸”包括，例如编码B组氨基酸序列中所示的多肽及其变体。此处所用的短语“核酸序列”指缩写词、字母、字符或单词的连续列表，其代表核苷酸。一方面，核酸可以是“探针”，其是相对短的核酸，其长度通常少于100个核苷酸。通常，核酸探针的长度通常是从大约50个核苷酸到大约10个核苷酸。核酸的“靶区域”是被鉴定为相关的核酸中的一部分。

【000100】核酸的“编码区”是核酸的一部分，所述核酸当被置于适当调节序列的控制之下时，以序列特异性方式被转录和翻译，以产生特定多肽或蛋白质。编码区指示编码这样的多肽或蛋白质。

【000101】术语“基因”指可操作性地连接到适当调节序列上的编码区，所述调节序列能以某种方式调节多肽的表达。基因包括DNA的非转录调节区(例如启动子、增强子、阻遏子等等)，编码区(开放式阅读框，ORF)的前面区域(上游区)和后面区域(下游区)，以及，如果适用，个体编码区(即外显子)之间的间插序列(即内含子)。

【000102】此处所用的“多肽”指如何肽、寡肽、多肽、基因产物、表达产物或蛋白质。多肽包括连续氨基酸。术语“多肽”包括自然发生分子或合成分子。

【000103】此处，正如此处所用，术语“多肽”指通过肽键或修饰的肽键互相结合的氨基酸，例如肽等排物，可以包括除了20个由基因编码的氨基酸以外的修饰氨基酸。多肽可以用天然方法来修饰，如翻译后加工，或通过本技术领域熟知的化学修饰技术进行修饰。修饰可以在多肽中的任意位置发生，包括肽骨架、氨基酸侧链和氨基或羧基末端。应该意识到，相同类型的修饰可以在给定多肽中的几个位点以相同或可变程度存在。而且，给定多肽可以有许多种类型的修饰。这些修饰包括，但不限于，乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、共价交联或环化、黄素的共价连接、血红素部分的共价连接、核苷酸或核苷酸衍生物的共价连接、脂质或脂质衍生物的共价连接、磷脂酰肌醇(phosphytidylinositol)的共价连接、二硫键形成、去甲基化、半胱氨酸或焦谷氨酸酯的形成、甲酰化、γ-羧化、糖基化、GPI锚的形成、羧基化、碘化、甲基化、十四酰基化、氧化、pergylation、蛋白酶解加工、磷酸化、异戊二烯化、外消旋作用、硒化作用(selenoylation)、硫酸盐化、转运-RNA介导的添加氨基酸到蛋白质中的作用，如精氨酰化。(参考Proteins-Structure and Molecular Properties 2^nd Ed.，T.E.Creighton，W. H.Freemanand Company，Ed.，Academic Press，New York，pp.1-12(1983))。

【000104】正如此处所用，术语“氨基酸序列”指代表氨基酸残基的缩略语、字母、字符或单词的列表。

【000105】正如此处所用，术语“分离的”指已经从其原始环境中离开的材料。例如，在活的动物体中存在的自然发生的多核苷酸或多肽就不是分离的，但从自然体系中的一些或所有共存材料中分离的相同多核苷酸或多肽就是分离的。这样的多核苷酸可以是载体的一部分，和/或这样的多核苷酸或多肽可以是组合物的一部分，多核苷酸是分离的，其原因在于这样的载体或组合物不是其原始环境的一部分。

【000106】关于核酸，正如此处所用，术语“重组的”指核酸与一个核酸是共价连接且邻接的，在其自然环境中，这两个核酸不是邻接的。此外，正如此处所用，关于核酸群体中的特定核酸，术语“富集的”指核酸代表分子群体中的核酸数量的5％或更多。典型地，富集核酸代表分子群中的15％或更多数量的核酸。更典型地，富集核酸代表分子群中的50％、90％或更多数量的核酸。

【000107】“重组的”多肽或蛋白指重组DNA技术产生的多肽或蛋白，即由编码目标多肽或蛋白的外源重组DNA构建物所转化的细胞产生的。“合成的”多肽或蛋白是用化学合成法制备的多肽或蛋白(例如固相肽合成法)。化学肽合成法在本技术领域是已知的(例如参见Merrifield(1963)，Am.Chem.Soc.85：2149-2154；Geysen等人(1984)，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA81：3998)，合成试剂盒以及自动肽合成仪可以通过商业途径获得(例如Cambridge Research Biochemicals，Cleveland，United Kingdom；来自Applied Biosystems，Inc.，Foster City，CA的Model 431 A合成仪)。该设备提供了即刻得到本发明的肽的途径，或者通过直接合成，或者通过合成一系列用其它已知技术可以连接的片段。

【000108】正如此处所用，关于核酸或氨基酸序列对，“同一性”指两个序列在序列内的能够比对的位置上不予变化的程度。两个给定序列之间的同一性百分比可以使用算法来计算，如BLAST(Altschul等人(1990)，J.Mol.Biol.215：403-410)。参见 www.ncbi.nlm.nih.gov/Education/BLASTinfo。当使用BLAST算法时，对于不超过250个核苷酸或大约80个氨基酸的序列(“短查询”)，搜索参数可以如下：过滤器为关闭，打分矩阵为PAM30，字符大小为3或2，E值为1000或更高，空位成本为11，1。对于长度超过250个核苷酸或80个氨基酸残基的序列，可以使用缺省搜索参数。BLAST网站提供了在这样的情况下遵循的用于特定情况的建议。

【000109】正如此处所用，“同源性”在核苷酸序列的上下文中与“同一性”代表相同的意思。然而，关于氨基酸序列，“同源性”包括同样的氨基酸取代和保守性氨基酸取代的百分比。同源性百分比可以根据Smith和Waterman(1981)，Adv.Appl.Math.2：482计算。

【000110】正如此处所用，在两个或更多个核酸序列的情形中，两个序列是“基本上同一的”，是在当使用上面所描述的已知的序列比较算法进行测量，进行比较和比对，以达到最大对应时，它们具有至少99.5％的核苷酸同一性之时。此外，为了确定序列是否是基本上同一的，编码区中的同义密码子可以被认为是同一的，原因在于遗传密码子的简并性。典型地，确定基本上同一性的区域必须至少跨过20个残基，在最通常情况下，这些序列越过至少大约25-200个残基时是基本上同一的。

【000111】正如此处所用，在两个或更多个氨基酸序列的情形中，两个序列是“基本上同一的”，是在当使用上面所描述的已知的序列比较算法进行测量，比较和比对，以达到最大对应时，它们具有至少99.5％的同一性之时。此外，为了确定序列是否是基本上同一的，如果多肽基本上保持其生物学功能，那么保守性氨基酸取代可以被认为是同一的。

【000112】“杂交”指一种过程，通过该过程，核酸链通过氢键在互补碱基处与互补链结合。杂交分析法可以是灵敏的和有选择性的，以便相关的特定序列可以被鉴别，即使在以低浓度存在的样品中也可以被鉴别。严格条件是通过盐或者甲酰胺在预杂交和杂交溶液中的浓度，或者通过杂交温度来定义的，这些条件在本技术领域是已知的。可以通过降低盐的浓度，增加甲酰胺的浓度，或者升高杂交温度来增加严格性。尤其是，正如此处所用，“严格的杂交条件”包括42℃，在50％甲酰胺，5X SSPE，0.3％SDS，和200ng/ml剪接和变性鲑精DNA，及其等价物中。上述范围和条件的变化在本技术领域是已知的。

【000113】术语“变体”是指在一个或多个核苷酸或氨基酸残基上被修饰的本发明的多核苷酸或多肽(分别地)，其中被编码的多肽或多肽保持了腈水解酶活性。变体可以通过任意数量的方法产生，例如易错PCR、改组、寡核苷酸指导的诱变、装配PCR、有性PCR诱变、体内诱变、盒式诱变、递归集合诱变、指数集合诱变、位点特异性诱变、基因重装配、基因位点饱和诱变或其任意组合。

【000114】对基于已知序列产生肽模拟体的方法已经有所描述，例如在美国专利号5,631,280；5,612,895；和5,579,250。肽模拟体的用途可以包括在给定位置引入一个具有非酰胺连接的非氨基酸残基。本发明的一方面是肽模拟体，其中该化合物具有一个键、一个肽骨架或一个氨基酸成分，被用一个合适的模拟型(mimic)替换。可以是合适的氨基酸模拟型的非天然氨基酸的实例包括β-丙氨酸、L-α-氨基丁酸、L-γ-氨基丁酸、L-α-氨基异丁酸、L-e-氨基己酸、7-氨基庚酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、N-ε-Boc-N-α-CBZ-L-赖氨酸、N-ε-Boc-N-α-Fmoc-L-赖氨酸、L-蛋氨酸砜、L-正亮氨酸、L-正缬氨酸、N-α-Boc-N-δCBZ-L-鸟氨酸、N-δ-Boc-N-α-CBZ-L-鸟氨酸、Boc-p-硝基-L-苯丙氨酸、Boc-羟基脯氨酸、Boc-L-硫代脯氨酸。

【000115】正如此处所用，“小分子”包括分子量在大约20道尔顿到大约1.5千道尔顿之间的分子。

【000116】分子生物学技术，如亚克隆，是使用常规方法进行的，这些方法对本技术领域的熟练技术人员是已知的。(Sambrook，J.Fritsch，EF，Maniatis，T.(1989)分子克隆：实验室手册(第二版)(Molecular Cloning：A Laboratory Mannual(2^nded.)，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Plainview NY.)。

计算机系统

【000117】在本发明的一方面，本发明的任意核酸序列和/或多肽序列可以在任何可以通过计算机阅读和访问的介质上被保存、记录和操作。正如此处所用，单词“被记录”和“被保存”指在计算机介质上保存信息的过程。本发明的另一方面是一种计算机可读的介质，其上已经存储了至少2、5、10、15或20个如SEQ IDNOS：1-386中所示的核酸序列，以及与其基本上同一的序列。在进一步的一方面，另一方面是通过计算机在本发明的核酸序列或多肽序列之中和之间进行的比较，以及在本发明的序列和其它序列之中和之间进行的比较。计算机可读的介质包括磁性可读介质、光学可读介质、电子可读介质和磁性/光学介质。例如，计算机可读介质可以是硬盘、软盘、磁带、CD-ROM、数字化视频光盘(DVD)、随机存取存储器(RAM)或只读存储区(ROM)，以及本技术领域熟练技术人员已知的其它类型的其它介质。

【000118】本发明的一些方面包括一些系统(例如基于因特网的系统)，尤其是存储和操作此处描述的序列信息的计算机系统。正如此处所用，“计算机系统”指硬件部分、软件部分和用于分析序列的数据存储部分(或者是核酸，或者是多肽)，所述序列如SEQ ID NOS：1-386中的至少任意一个序列，以及与其基本上同一的序列。计算机系统通常包括一个用于处理、访问和操作序列数据的处理器。处理器可以是任意已知类型的中央处理单元，例如英特尔公司的Pentium III，或Sun、Motorola、Compaq、AMD或国际商用机器公司(International Business Machines)的类似处理器。

【000119】通常计算机系统是一个普通目的的系统，该系统包括处理器和用于存储数据的一个或多个内部数据存储部件，和用于检索存储在数据存储部件上的数据的一个或多个数据检索设备。

【000120】在一个特定的方面，计算机系统包括一个连接到总线上的处理器，所述总线连接到主存储器上(优选地以RAM实现)，和一个或多个内部数据存储设备，如硬盘驱动器和/或其它已经存储了数据的计算机可读介质。在一些方面，计算机系统进一步包括一个或多个数据检索设备，用于读取存储在内部数据存储设备上的数据。

【000121】数据检索设备可以代表，例如软盘驱动器、高密度磁盘驱动器、磁带驱动器或能够连接到远程数据存储系统上的调制解调器(例如通过因特网)等等。在一些方面，内部数据存储设备是一个可移动的计算机可读介质，如软盘、高密度磁盘、磁带等等，包括控制逻辑和/或其上存储的数据。计算机系统可以有利地包括适当的软件或通过适当的软件被编程，所述软件用于从已经插入到数据检索设备上的数据存储部件上阅读控制逻辑和/或数据。

【000122】计算机系统包括用于向计算机用户显示输出信号的显示器。也应该注意到，计算机系统可以被连接到网络或广域网中的其它计算机系统上，以提供到计算机系统的集中式访问。在一些方面，计算机系统可以进一步包括序列比较算法。“序列比较算法”指在计算机系统上执行(本地或远程)的一个或多个程序，以便将核苷酸序列与数据存储设备上存储的其它核苷酸序列和/或化合物进行比较。

腈水解酶的用途

【000123】腈水解酶已经被鉴别为产生手性α-羟基酸的关键酶，所述α-羟基酸在精细化学工业中是有用的中间体，并且可以作为药物中间体。本发明的腈水解酶可以用于催化羟腈或氨基腈的立体选择性水解，以分别产生手性α-羟基酸和α-氨基酸。

【000124】立体选择性酶相对于化学拆分方法(chemical resolution methods)提供了一个主要优点，因为它们不需要苛刻的条件并且能更好地与环境兼容。尤其相关的腈水解酶的用途是产生手性氨基酸和α-羟基酸。使用立体选择性腈水解酶，可以构建动态拆分条件，这是由于在含水条件下底物的外消旋作用。从而可以获得100％的理论产量。

【000125】本发明涉及腈水解酶，所述腈水解酶已经被发现并且从天然存在的原料中分离出来。本发明也涉及从多种和极端环境来源中演变出新颖基因和基因途径。在开发最广泛种类的可以利用的酶的努力中，DNA是从样品中直接提取的，所述样品是从地球上的不同栖息地中收集的样品。依靠这些努力，开发了世界上最大的环境基因文库的集合。通过这些文库的广泛的高通量筛选，到目前为止已经发现了192种序列独特的新腈水解酶。在本发明之前，在文献和公开数据库中已经报道了不到20种微生物来源的腈水解酶。

【000126】生物催化剂，如腈水解酶在催化活的生物体中的代谢反应中起着重要作用。此外，已经发现生物催化剂在化学工业中有用，在这些化学工业中生物催化剂可以催化许多不同的反应。在腈水解酶用途中的优点的一些实例是：它们提供了高对映的、化学的和区域选择性；它们在温和的反应条件下起作用；它们提供对产物的直接获得途径-具有最小保护措施；它们具有高催化效率；与化学催化剂相比它们产生减少的废物；它们更容易以酶或细胞的形式被固定化；它们是可回收的、可循环的，能通过分子生物学技术被操纵；它们可以在整个细胞过程中被再生；它们可以忍受有机溶剂；重要地是，它们可以被进化或最优化。此处将这些最优化的腈水解酶展示在这里，作为本发明的工作实例。

【000127】腈水解酶催化产生相应羧酸的腈部分的水解。腈的传统化学水解需要强酸或强碱和高温。然而，本发明的一个优点是，提供了在温和条件下进行这一反应的腈水解酶。可以通过具有高对映的、化学的和区域选择性的腈水解酶转化宽范围的腈底物。

表1-本发明的腈水解酶的一些特征

以前发现的腈水解酶	新腈水解酶
以前发现的腈水解酶	新腈水解酶		局限性	新特征	优点
所报道的少于20种	新发现的多于180种	可得到更广泛的底物范围	局限性	新特征	优点
所报道的少于20种	新发现的多于180种		同源性	独特的腈水解酶，这些酶中的许多与先前已知的腈水解酶具有极小的同源性
窄底物活性谱	广底物活性谱		同源性	独特的腈水解酶，这些酶中的许多与先前已知的腈水解酶具有极小的同源性
窄底物活性谱	广底物活性谱		极少显示出对映选择性	对映选择性；两种对映异构体均可得到	具有高对映异构体过量和最小废物产生的产物
有限的稳定性曲线	在多种条件下都稳定	在大范围的处理条件中的潜在用途	极少显示出对映选择性	对映选择性；两种对映异构体均可得到	具有高对映异构体过量和最小废物产生的产物
有限的稳定性曲线	在多种条件下都稳定	在大范围的处理条件中的潜在用途	不一致的供应	一致的供应	产物的可靠来源
是不可应用的	可以最优化	良好来源材料产生较好产物	不一致的供应	一致的供应	产物的可靠来源

【000128】动态动力学拆分：腈水解酶的使用允许在两个快速平衡的对映异构体之间实现区别，以便产生单一产物，是以100％的理论产量产生。腈水解酶被用于关键的羟腈或氨基腈的动态拆分，以产生对映异构体纯的α-羧酸和α-氨基酸。此处公开的最新发现的腈水解酶产生了具有＞95％对映异构体过量(ee)和具有＞95％产量的产物。腈水解酶在含水溶液中或在存在有机溶剂的情况下，在温和的条件下，有效地进行这一转化。

【000129】上面所示的这些产物也包括相对的对映异构体，尽管它们没有被显示出来。一方面，本发明提供了一种分离的核酸，所述核酸具有一个如A组核酸序列中的任意一个序列所示的序列，具有一个与其基本上同一的序列，或具有一个与其互补的序列。

【000130】另一方面，本发明提供了一种分离的核酸，包括至少20个与如A组核酸序列中所示的核苷酸序列的一部分同一的连续核苷酸，具有一个与其基本上同一的序列，或具有一个与其互补的序列。

【000131】另一方面，本发明提供了一种分离的核酸，其编码具有一个如B组氨基酸序列中所示的序列的多肽，或具有一个与其基本上同一的序列。

【000132】另一方面，本发明提供了一种一种分离的核酸，其编码一个多肽，该多肽具有至少10个与B组氨基酸序列中所示的序列的一部分同一的连续氨基酸，具有一个与其基本上同一的序列。

【000133】仍然在另一方面，本发明提供了一个基本上纯化的多肽，所述多肽包括连续氨基酸残基，其具有一个如B组氨基酸序列中所示的序列，或具有一个与其基本上同一的序列。

【000134】另一方面，本发明提供了一种分离的抗体，该抗体与本发明的多肽特定地结合。本发明也提供了该抗体的一个片段，其保留了与多肽特定地结合的能力。

【000135】另一方面，本发明提供了一种方法，用于产生具有一个如B组氨基酸序列和与其基本上同一的序列中所示的序列的多肽。该方法包括引导编码多肽的核酸进入宿主细胞，其中该核酸可操作性地连接到启动子上，以及包括在允许核酸表达的条件下培养宿主细胞。

【000136】另一方面，本发明提供了一种方法，用于从B组氨基酸序列和与其基本上同一的序列中所示的序列，产生具有至少10个连续氨基酸的多肽。该方法包括引导编码多肽的核酸进入宿主细胞，其中核酸可操作性地连接到启动子上，以及包括在允许核酸表达的条件下培养宿主细胞，从而产生多肽。

【000137】另一方面，本发明提供了一种方法，用于产生腈水解酶的变体，包括选择如A组核酸序列中所示的核酸序列，并且将序列中的一个或多个核苷酸变化为另一个核苷酸，删除该序列中的一个或多个核苷酸，或将一个或多个核苷酸加入到该序列中。

【000138】另一方面，本发明提供了用于鉴别B组氨基酸序列的功能变体的分析方法，这些功能变体保留了B组氨基酸序列的多肽的酶功能。这些分析方法包括将包括连续氨基酸残基的多肽与底物分子在允许多肽发挥作用的条件下接触，所述残基具有一个与B组氨基酸序列或其部分的序列同一的序列，具有一个与B组氨基酸序列或其部分的序列基本上同一的序列，或具有一个是B组氨基酸序列的一个序列变体的序列，该变体保留了腈水解酶活性；检测底物水平的降低，或者多肽和底物之间反应的特定反应产物水平的增加；从而鉴别这些序列的功能变体。

本发明所述多肽的修饰

【000139】酶是高度选择性催化剂。它们的特点是催化具有精美的立体-选择性、区域-选择性和化学-选择性的反应，这一特点是传统合成化学方法所无法匹敌的。而且，这些酶是显著多用途的。它们可以被改装，以便在有机溶剂中发挥作用，在极端pH(例如酸性或碱性条件)、极端温度(例如高温和低温)、极端盐度水平(例如高盐度和低盐度)下操作，并且催化与它们的天然的、生理学底物在结构上没有关系的化合物的反应，但是在酶活性位点上无关的化合物除外。

【000140】本发明提供了一些方法，用于修饰具有腈水解酶活性的多肽，或编码这些多肽的多核苷酸，以便获得新颖多肽，所述新颖多肽保留了腈水解酶活性，但一些期望特征有所改进。这些改进可以包括：在有机溶剂中发挥作用的能力(即表现出腈水解酶活性)，在极度或非典型pH下操作，在极端或非典型温度下操作，在极端或非典型盐度水平下操作，催化与不同底物的反应，等等。

【000141】本发明涉及使用腈水解酶以便利用这些酶的独特的催化特征的方法。尽管在化学转化中使用生物催化剂(即纯化或粗酶)通常需要鉴别与特定起始化合物反应的特定生物催化剂，但本发明使用了选择的生物催化剂和反应条件，它们对于许多起始化合物中存在的官能基团是特异的。每一种生物催化剂对于一种官能基团或者与其相关的官能基团是特异的，能与含有这一官能基团的许多起始化合物反应。

【000142】酶在起始化合物内的特定位点反应，而不影响分子的其余部分，这是一个用传统化学方法很难实现的过程。这一高度特异性提供了在化合物文库内鉴别单一活性化合物的方法。该文库的特征在于用于产生该文库的生物催化反应系列，即所谓的“生物合成历史(biosynthetic history)”。筛选文库的生物学活性和跟踪生物合成历史鉴别产生活性化合物的特定反应序列。重复反应序列，并且确定合成的化合物的结构。不像其它合成和筛选方法，这种鉴别模式不需要固定化技术，并且几乎可以使用任何类型的筛选分析法，不需要溶液就可以合成和测试化合物。重要的是应该注意到，酶在官能基团反应的高度特异性允许“跟踪”形成生物催化产生的文库的特定酶反应。(关于分子的修饰的进一步教导，包括小分子，参见PCT申请号PCT/US94/09174，此处完整地引入作为参考)。

【000143】在一个例证中，本发明提供了相关腈水解酶基因家族，和它们的相关产物的编码家族的嵌合化作用(chimerization)。从而根据本发明的一方面，多个腈水解酶核酸的序列(例如A组核酸序列)作为腈水解酶“模板”，是用序列比较算法，如上面所描述的那些算法，进行比对的。然后，在比对的模板序列中，确定一个或多个分界点，这些分界点位于一个或多个同源区域。可以用这些分界点来勾画核酸结构单元(nucleic acid building blocks)的边界，这些核酸结构单元被用来产生嵌合腈水解酶。因此，在腈水解酶模板分子中确定和选择的分界点作为嵌合腈水解酶分子装配中的潜在嵌合化作用点。

【000144】通常，有用的分界点是至少两个祖先模板之间的局部同一性区域，但优选地，分界点是由至少一半的模板，至少三分之二的模板，至少四分之三的模板，或几乎所有的模板共有的同一性区域。

【000145】然后，由分界点定义的结构单元，可以被混和(或者照字面意思在溶液中，或者理论上在纸上或计算机中)，重装配以形成嵌合腈水解酶基因。一方面，基因重装配过程被彻底地进行，以便产生所有可能组合的完备文库。换句话说，在最终嵌合的核酸分子集合中，表达了核酸结构单元的所有可能的有序组合。然而，同时，设计每一组合中5’到3’方向上的每一结构单元的装配次序，以反映模板中的次序，并且降低不需要的、不可操作的产品的产生。

【000146】在一些方面，基因装配过程被系统地进行，以便产生区室化文库(compartmentalized library)，所述区室化文库具有可以被系统地筛选的区室，例如逐个地筛选。换句话说，本发明提供了，通过有选择性地和明智地使用特定核酸结构单元，与有选择性地和明智地使用有序的分段装配反应相结合，可以在几个反应容器中的每一个中产生嵌合产物的特定集合情况下实现实验设计。这允许进行系统的检查和筛选程序。因此，这允许对潜在地非常大数量的嵌合分子在较小的小组中进行系统地检查。

【000147】在一些方面，产生或重装配结构单元的步骤的合成性质允许核苷酸序列的设计和引入(例如密码子或内含子或调节序列)，随后这些核苷酸序列在体外过程(例如通过突变)或体内过程中(例如通过使用宿主生物体的基因剪接能力)能被任选地去除。引入这些核苷酸可能是有好处的，原因有很多，包括产生有用的分界点的潜在益处。

【000148】本发明的合成基因在组装方法使用了多个核酸结构单元，每一个结构单元有两个可连接末端。每一个核酸结构单元上的两个可连接末端的一些实例包括，但不限于，两个钝末端，或一个钝末端和一个粘末端，或两个粘末端。在一个进一步的非限定性实例中，粘末端可能包括一个碱基对，两个碱基对，三个碱基对，四个碱基对或更多碱基对。

【000149】双链核酸结构单元的大小是可以变化的。结构单元的优选大小范围在从大约1个碱基对(bp)(不包括任何粘末端)到大约100,000个碱基对(不包括任何粘末端)。也提供了其它优选的大小范围，其下限为大约1bp到大约10,000bp(包括其中的每一个整数数值)，上限为大约2bp到大约100,000bp(包括其中的每一个整数数值)。

【000150】根据一个方面，产生了一个双链核酸结构单元，方法是首先产生两个单链核酸，允许它们退火从而形成双链核酸结构单元。双链核酸结构单元的两个链在除形成粘末端的任何核苷酸之外的每一个核苷酸上可以是互补的；这样除任何粘末端之外不会出现错配。可以选择地，双链核酸结构单元的两个链在少于除任何粘末端之外的每一个核苷酸的少数核苷酸上可以是互补的。尤其是，这些链之间的错配可以被用来引导密码子简并，使用的方法是，如此处描述的位点饱和诱变。

【000151】核苷酸的体内改组在提供变体中也是有用的，可以使用细胞的自然特性来进行，以重组多聚体。当体内重组已经提供了达到分子多样性的主要自然途径时，基因重组保持了相对复杂的过程，提供了(1)同源性的识别；(2)链分裂、链侵入和代谢步骤，导致产生重组交叉；和最后地，(3)交叉分解为离散的重组分子。交叉的形成需要识别同源序列。

【000152】因此，本发明包括一种方法，用于从至少第一个多核苷酸和第二个多核苷酸体内产生嵌合或重组多核苷酸。本发明可以被用来产生重组多核苷酸，通过引导至少第一个多核苷酸和第二个多核苷酸进入适当的宿主细胞，其中所述第一个多核苷酸和第二个多核苷酸共有具有部分序列同源性的至少一个区域(例如A组核酸序列，及其组合)。部分序列同源性区域促进了导致产生重组多核苷酸的序列再组织的过程。这样的杂交多核苷酸可以从分子间重组事件产生，这些事件促进了DNA分子之间的序列整合。此外，这样的杂交多核苷酸可以从分子内还原重配过程产生，这些过程使用重复序列来改变DNA分子内部的核苷酸序列。

【000153】本发明提供了一种方式，用于产生编码生物活性变体多肽(例如腈水解酶变体)的重组多核苷酸。例如，多核苷酸可以编码来自某种微生物的特定酶。由来自一种生物体的第一种多核苷酸编码的酶可以，例如在特定环境条件下有效地发挥作用，例如高盐度条件下。由来自另一种生物体的第二种多核苷酸编码的酶可以在另一种环境条件下有效地发挥作用，例如极度高温条件下。含有来自第一种和第二种原始多核苷酸的序列的重组多核苷酸编码变体酶，该变体酶表现出由原始多核苷酸编码的两种酶的特征。因此，由重组多核苷酸编码的酶可以在环境条件下有效地发挥作用，所述环境条件为由第一种和第二种多核苷酸编码的每一种酶共有的条件，例如高盐度和极高温。

【000154】变体多肽可以表现出原始酶中没有显示出的特定的酶活性。例如，在编码腈水解酶活性的多核苷酸的重组和/或还原重配，可以对所产生的由重组多核苷酸编码的变体多肽进行筛选，以筛选从原始酶的每一种获得的特定腈水解酶活性，即腈水解酶发挥作用的温度或pH。原始多核苷酸的来源可以从个体生物体(“分离物”)分离，从收集的已经在已知成分培养基中生长的生物体(“富集培养物”)分离，或者从未培养的生物体(“环境样品”)分离。使用不依赖培养基的方法来获得来自环境样品的编码新颖生物活性的多核苷酸是最优选的，原因是该方法允许人们使用具有生物多样性的未利用资源。制备多核苷酸的微生物体包括原核微生物，如黄色杆菌属(Xanthobacter)、真细菌(Eubacteria)和古细菌(Archaebacteria)，和低级真核微生物，如真菌、一些藻类和原生动物。多核苷酸可以从环境样品分离，在这种情况下可以不培养生物体来回收核酸，或者从一个或多个培养的生物体中回收核酸。在一个方面，这样的微生物可以是极端条件生物(extremophiles)，如超嗜热菌(hyperthermophiles)，嗜冷微生物(psychrophiles)，冷育微生物(psychrotrophs)，喜盐植物、嗜压生物和嗜酸菌。编码从极端条件微生物分离的酶的多核苷酸是尤其优选的。这样的酶可以在如下条件下发挥作用，在温度高于100℃的陆地温泉和深海热出口，在温度低于0℃的北极水域中，在饱和盐环境的死海中，在pH值大约为0的煤沉淀物中和富硫的地热温泉中，或者在pH值大于11的污水污泥中。

【000155】可以被用来表达重组蛋白的哺乳动物表达系统的实例包括，COS-7、C127、3T3、CHO、HeLa和BHK细胞系。哺乳动物表达载体包括复制起点、适当的启动子和增强子，也包括任何必须的核糖体结合位点、聚腺苷酸位点、剪接供体和受体位点、转录终止序列和5’侧翼非转录序列。来自SV40剪接和聚腺苷酸位点的DNA序列可以被用来提供所需的非转录遗传元件。此处完整地引入美国专利号6,054,267作为参考。

【000156】含有相关多核苷酸的宿主细胞可以在传统的营养基中培养，这些传统营养培养基被修饰，以适合激活启动子、选择转化体或扩增基因。培养条件是先前选择用于表达的宿主细胞所使用的，如温度和pH等等，这些条件对于普通的熟练技术人员是显而易见的。然后，对被鉴别出具有期望的酶活性或其它特性的克隆进行测序，以识别编码具有期望活性或特性的酶的重组多核苷酸序列。

【000157】在一个方面，本发明提供了分离的腈水解酶，或者作为分离的核酸，或者作为分离的多肽，其中核酸或多肽是通过从DNA群体回收DNA，并且用回收的DNA转化宿主而制备的，从而产生用来筛选特定蛋白如腈水解酶活性的克隆文库，所述DNA群体来源于至少一种未培养的微生物。美国专利号6,280,926，Short提供了对这些方法的描述，此处将其完整地引入，其全部目的是作为参考。

【000158】因此，在一个方面，本发明涉及一种方法，用于产生生物活性的重组腈水解酶多肽，并且筛选具有期望活性或特性的这样的多肽，步骤如下：

1)引导至少第一种腈水解酶多核苷酸和第二种腈水解酶多核苷酸进入适当的宿主细胞，所述至少第一种腈水解酶多核苷酸和第二种腈水解酶多核苷酸共有至少一个序列同源性区域；

2)培养宿主细胞，条件是能促进导致重组腈水解酶多核苷酸的序列再组织；

3)表达由重组腈水解酶多核苷酸所编码的重组腈水解酶多肽；

4)筛选具有期望活性或特性的重组腈水解酶多肽；

5)分离编码重组腈水解酶多肽的重组腈水解酶多核苷酸。

【000159】可以使用的载体的实例包括病毒颗粒、杆状病毒、噬菌体、质粒、噬菌粒、粘粒、fosmid、细菌人工染色体、病毒DNA(例如牛痘病毒、腺病毒、禽痘病毒、假狂犬病和SV40的衍生物)，基于P1的人工染色体、酵母质粒、酵母人工染色体和对相关宿主特异的任何其它载体(例如杆菌属(Bacillus)、曲霉菌(Aspergillus)和酵母)。大量合适的载体对本技术领域的普通技术人员是已知的，并且可以通过商业途径获得。细菌载体的实例包括pQE载体(Qiagen，Valencia，CA)；pBluescript质粒、pNH载体和λ-ZAP载体(Stratagene，La Jolla，CA)；和pTRC99a、pKK223-3、pDR540和pRIT2T载体(Pharmacia，Peapack，NJ)。真核载体的实例包括pXTl和pSG5载体(Stratagene，La Jolla，CA)；和pSVK3、pBPV、pMSG和pSVLSV40载体(Pharmacia，Peapack，NJ)。然而，也可以使用任何其它质粒或其它载体，只要它们是可以复制的，并且可以在宿主中存活。

【000160】在本发明中使用的一种优选类型的载体含有f-因子(或致育因子)复制起点。大肠杆菌中的f-因子是质粒，该质粒能影响其本身在接合过程中的高频转移，和其本身的细菌染色体的低频转移。尤其优选的一个方面是使用被称作“fosmid”的克隆载体或细菌人工染色体(BAC)载体。这些是从大肠杆菌f-因子得到的，能稳定地整合大的基因组DNA片段。

【000161】表达载体中的DNA序列可操作性地连接到适当地表达控制序列上，包括启动子，以指导RNA合成。有用地细菌启动子包括lacI、lacZ、T3、T7、gpt、λP_R、P_L和trp。有用的真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶、早期和晚期SV40、来自逆转录酶病毒的LTR和小鼠金属硫蛋白-I。适当载体和启动子的选择在本技术领域的普通技术人员的水平内。表达载体也含有翻译起始和转录终止子的核糖体结合位点。载体也包括用于扩增表达的适当序列。可以使用CAT(氯霉素转移酶)载体或具有选择性标记物的其它载体从任何期望的基因选择启动子区域。

【000162】此外，表达载体可以含有一个或多个选择性标记基因，以提供选择转化宿主细胞的表型特性。有用的选择性标记物包括对真核细胞培养物具有抗性的二氢叶酸还原酶或新霉素，或对大肠杆菌中有抗性的四环素或氨卡青霉素。

【000163】可以使用多种技术将载体引入宿主细胞，包括转化、转染、转导、病毒感染、基因枪或Ti介导的基因转移。特定方法包括磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染、脂质转染、或电穿孔。

【000164】还原重配-在其它方面，变体腈水解酶多核苷酸可以通过还原重配过程产生。尽管重组是一个“分子间”过程，该过程在细菌中通常被看作是“recA依赖的”现象，还原重配的过程通过“分子内”不依赖recA的过程发生。在这个方面，本发明依赖于细胞介导还原过程的能力，以通过删除降低细胞中的准重复序列的复杂性。该方法包括产生含有连续重复或准重复序列(原始编码序列)的构建物，将这些序列插入到适当的载体中，随后将载体引入适当的宿主细胞中。个体分子同一性的重配通过拥有构建物的同源性区域中的连续序列之间，或准重复单元之间的组合过程产生。重配过程重组和/或降低重复序列的复杂性或程度，并且导致产生新颖的分子种类。可以使用多种处理来增加重配率，如紫外线光或DNA损伤化学药品。此外，可以使用显示出增强水平的“遗传不稳定性”的宿主细胞系。

【000165】重复序列-重复或“准重复”序列在遗传不稳定性中起着重要作用。在本发明中，“准重复”是结构上不完全相同的重复，但代表一组具有高度相似性或同一性序列的连续序列。细胞中的还原重配或删除过程通过删除准重复序列内的位置之间的序列降低了所获得的构建物的复杂性。因为删除(和潜在地插入)事件可以事实上在准重复序列内的任何地方发生，所以这些序列提供了潜在变体的大量的全部组成成分。

【000166】当准重复序列被完全以相同方向连接时，例如头-到-尾连接或相反，对于大部分而言，删除的端点在准重复序列内的任何地方等概率地发生。相反，当这些单元以头-到-头或尾-到-尾存在时，所插入的准重复序列可以形成双链体，该双链体描绘了邻接单元的端点，从而有助于删除不连续的单元。因此，在本发明中优选的是准重复序列以相同方向被连接，这是因为准重复序列的随机方向导致重配效率的损失，而序列的一致方向将提供最高的效率。但是，尽管在相同方向具有较少的邻接序列降低了效率或还原重配，仍然可以为有效回收新颖分子提供足够的变化。

【000167】可以使用多种方法中的任意一种方法将序列以头-到-尾方向装配，包括如下：

a)可以使用引物，包括聚腺苷酸头和聚胸腺嘧啶核苷酸尾，当产生单链时，聚腺苷酸头和聚胸腺嘧啶核苷酸尾可以提供方向。这是通过具有从RNA产生的引物的最初少数几个碱基实现的，因此容易通过RNAse H去除。

b)可以使用引物，包括独特的限制性切割位点。需要多个位点、一组独特的序列、重复合成和连接步骤。

c)引物的内部少数几个碱基可以被硫醇化，核酸外切酶用来适当地产生有尾分子。

【000168】重配序列的恢复依赖于鉴别具有降低的重复指数(RI)的克隆载体。然后通过扩增恢复重配编码序列。再克隆和表达产物。具有降低的RI的克隆载体的回收，可以通过如下几点来实现：

1)使用仅仅当构建物的复杂性降低时能稳定地维持的载体。

2)通过物理方法物理回收缩短的载体。在这种情况下，将使用标准质粒分离方法回收克隆载体，然后使用标准方法对克隆载体进行大小分级(例如具有低分子量截断值的琼脂糖凝胶或柱)。

3)当插入物大小降低时，可以选择含有间断基因的载体予以回收。

4)使用直接选择技术，其中使用表达载体且进行适当的选择。

【000169】来自相关生物体的编码序列可能会展示出高度同源性，但编码变化相当多的蛋白质产物。这些类型的序列在本发明中作为准重复序列尤其有用。然而，虽然下面阐明的实例证实了具有高度同一性的编码序列(准重复)的重配，该过程不限于几乎同一的重复物。

【000170】下述实例举例说明了本发明的一个方法。获得了来自三个不同种类的准重复编码序列。每一序列编码具有一组独特特性的蛋白。这些序列中的每一个在序列中的独特位置上的一个或多个碱基对上不同，被称作“A”、“B”和“C”。准重复序列被独立地或共同地扩增并连接到随机组装物中，这样可以在连接分子群体中得到全部连接分子的所有可能的排列和组合。准重复单元的数量通过装配条件来控制。构建物中准重复单元的平均数量被定义为重复指数(repetitive index，RI)。

【000171】一旦形成，构建物可以根据已出版的规程，在琼脂糖凝胶上进行大小分级，被插入到克隆载体中，转染到适当的宿主细胞中。然后这些细胞被繁殖以允许还原重配的发生。如果期望，还原重配过程的速度可以通过引入DNA损伤来刺激。RI的降低是通过“分子内”机制，通过重复序列之间的缺失形成来介导的，或者是通过“分子间”机制，通过重组事件来介导的，是无关紧要的。最终的结果是分子重配到所有可能的组合中。

【000172】在另一个方面，在重组或重配之前或过程中，本方面的多核苷酸或由此处描述的方法产生的多核苷酸可以经受能促进将突变引入原始多核苷酸中的试剂或方法。引入这样的突变将增加所得到的杂交多核苷酸和由其编码的多肽的多样性。可以促进诱变的试剂或方法包括，但不限于：(+)-CC-1065，或合成类似物如(+)-CC-1065-(N3-腺嘌呤)(Sun等人，(1992)，Biochemistry 31(10)：2822-9)；能抑制DNA合成的N-乙酰或去乙酰4’-氟-氨基联苯加合物(例如参见van de Poll等人(1992)，Carcinogenesis 13(5)：751-8)；或能抑制DNA合成的N-乙酰或去乙酰4-氨基联苯加合物(同样参见Van de Poll等人(1992)，同上)；三价铬，三价铬盐，能抑制DNA复制的多环芳烃(“PAH”)DNA加合物，如7-溴甲基-苯并蒽(“BMA”)，三(2，3-二溴丙基)磷酸盐(“Tris-BP”)，1，2-二溴-3-氯丙烷(“DBCP”)，2-溴丙烯醛(2BA)，苯并芘-7，8-，二氢二醇-9-10-环氧化物(“BPDE”)，铂(II)卤素盐，N-羟基-2-氨基-3-甲基咪唑[4，5-f]-喹啉(“N-羟基-IO”)，和N-羟基-2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑[4，5-f]-嘧啶(“N-羟基-PhIP”)。减缓或停止PCR扩增的尤其优选的方法包括UV光(+)-CC-1065-和(+)-CC-1065-(N3-腺嘌呤)。特别包括的方法是DNA加合物或含有来自多核苷酸或多核苷酸集合体的DNA加合物的多核苷酸，它们可以通过一种方法来释放或去除，该方法包括在进一步处理之前加热含有该多核苷酸的溶液。

【000173】GSSM^TM-本发明也提供了使用含有简并N，N，G/T序列的密码子引物，将点突变引入多核苷酸，以产生一组后代多肽，其中在每一氨基酸位置表示了全部范围的单一氨基酸取代，该方法被称作基因位点饱和诱变(GSSM^TM)。所用的寡核苷邻接地包括第一个同源序列，一个简并N，N，G/T序列，和可能的第二个同源序列。从使用这样的寡核苷酸得到的后代翻译产物包括沿着多肽的每一氨基酸位点的所有可能的氨基酸变化，这是因为N，N，G/T序列的简并性包括所有20个氨基酸的密码子。

【000174】在一个方面，用一个这样的简并寡核苷酸(包括一个简并N，N，G/T盒子)使亲代多核苷酸模板中的每一个原始密码子经受全部范围的密码子取代。在另一个方面，使用至少两个简并N，N，G/T盒子-或者在相同的寡核苷酸上或者不在相同的的寡核苷酸上，使亲代多核苷酸模板中的至少两个原始密码子经受全部范围的密码子取代。因此，一个寡核苷酸中可以包括不止一个N，N，G/T序列，以便在不止一个位点引入氨基酸突变。多数N，N，G/T序列可以是直接邻接的，或者是通过一个或多个其它核苷酸序列分离的。在另一个方面，可以单独或与含有N，N，G/T序列的密码子组合使用用于引入插入和删除的寡核苷酸，以便引入氨基酸插入、删除和/或取代的任何组合或排列。

【000175】在一个特定的例证中，使用含有连续N，N，G/T三联体，即简并(N，N，G/T)n序列的寡核苷酸，同时诱变两个或多个连续氨基酸位置是可能的。

【000176】在另一个方面，本方面提供了使用简并盒子，所述简并盒子的简并性低于N，N，G/T序列。例如，在一些情况下，使用仅包括一个N的简并三联体序列可能是令人期望的，其中所述N可以是三联体的第一第二或第三个位置。可以在三联体的剩余两个位置使用任何其它碱基，包括其任意组合和排列。另外，在一些情况下使用简并N，N，N三联体序列或N，N，G/C三联体序列可能是令人期望的。

【000177】然而，应该意识到，使用本发明所公开的简并三联体(如N，N，G/T或N，N，G/C)是有利的，原因有好几个。一方面，本发明提供了一种系统地且相当容易地产生完全范围的20个可能的氨基酸取代到多肽中每一个氨基酸位置的方法。因此，对于含有100个氨基酸的多肽，本发明提供了一种系统地且相当容易地产生2000个不同种类的途径(即每一位置的20个可能的氨基酸乘以100个氨基酸位置)。应该意识到，通过使用含有简并N，N，G/T或N，N，G/C三联体序列的寡核苷酸，提供了编码20个可能的氨基酸的32个个体序列。因此，在亲代多核苷酸序列使用一个这样的寡核苷酸进行饱和诱变的反应容器中，产生了编码20个不同多肽的32个不同的子代多核苷酸。相反，在定点诱变中使用非简并寡核苷酸导致每一反应容器仅仅只有一个子代多肽产物。

【000178】本发明也提供了使用非简并寡核苷酸，它们可以任选地与所公开的简并引物组合使用。应该意识到，在一些情况下，使用非简并寡核苷酸在工作多核苷酸中产生特异性点突变是有利的。这提供了一种方式，产生特异性沉默点突变，导致相应氨基酸变化的点突变，和产生终止密码子和相应的多肽片段表达的点突变。

【000179】因此，在一个方面，每一饱和诱变反应容器含有编码至少20个后代多肽分子的多核苷酸，这样在与亲代多核苷酸中诱变的密码子位置相应的特异性氨基酸位置上表达了所有20个氨基酸。从每一饱和诱变反应容器产生的32倍简并后代多肽可以进行克隆扩增(例如，使用表达载体克隆到合适的大肠杆菌宿主中)，并且进行表达筛选。当通过筛选鉴别出个体后代多肽以显示有利的特性变化时(当与亲代多肽比较时)，可以对其进行测序以鉴别其中所包括的相对有利的氨基酸取代。

【000180】应该意识到，一旦使用此处公开的饱和诱变诱变了亲代多肽中的每个氨基酸位置，可以在不止一个氨基酸位置鉴别出有利的氨基酸变化。可以产生一个或多个新颖后代分子，它们含有全部或部分这些有利的氨基酸取代的组合。例如，如果在多肽中的三个氨基酸位置中的每一个中鉴别出两个特异性有利的氨基酸变化，包括每一位置的三种可能性(与原始氨基酸没有变化，和两个有利变化中的每一个)和三个位置的排列。因此，总共有3×3×3或27种可能性，包括先前确定的7种可能性---6个单一点突变(即在三个位置中的每一个上有2个)和在任何位置没有变化。

【000181】仍然在另一个方面，位点饱和诱变可以连同筛选一起与改组、嵌合、重组和其它诱变过程一起使用。本发明提供了以重复方式使用任何诱变过程，包括饱和诱变。在一个例证中，任何诱变过程的重复使用是与筛选组合使用的。

【000182】因此，在一个非限定性例证中，本发明的多核苷酸和多肽可以通过饱和诱变与其它诱变过程组合使用得到，如两个或多个相关多核苷酸被引入适当的宿主细胞，从而通过重组和还原重配产生杂交多核苷酸的过程。

【000183】除了沿着基因的整个序列进行诱变之外，可以使用诱变来取代多核苷酸序列中的任意数量的碱基中的每一个碱基，其中将被诱变的碱基数量可以是大约15到大约100,000之间的每一个整数。因此，代替沿着分子的每一个位置诱变，可以对每一个或非连续数量(例如总数在大约15到大约100,000之间的子集)的碱基进行诱变。在一方面，分离的核苷酸被用来诱变沿着多核苷酸序列的每一位置或位置组。将被诱变的一组3个位置可以是一个密码子。一方面，使用含有异源盒子的诱变引物引入突变，其中异源盒子也被称作诱变盒子。例如，盒子可以具有大约1到大约500个碱基。在这样的异源盒子中的每一核苷酸位置可以是N，A，C，G，T，A/C，A/G，A/T，C/G，C/T，G/T，C/G/T，A/G/T，A/C/T，A/C/G，或E，其中E是非A，C，G或T的任何碱基。

【000184】在通常意义下，饱和诱变包括诱变欲被诱变的指定多核苷酸序列(例如，将被诱变序列的长度为大约15个到大约100,000个碱基)中的诱变盒子的完整集合(例如，每一盒子长度为大约1-500个碱基)。因此，一组突变(范围为大约1个到大约100个突变)被引入到将被诱变的每一盒子中。在应用一轮饱和诱变中，将被引入一个盒子中的突变的一个编组可以与将被引入第二个盒子的第二个编组突变不同或相同。这样的编组的例证是缺失、增加，特定密码子的编组，和特定核苷酸盒子的编组(该groupings)。

【000185】将被诱变的规定序列包括完整基因、途径、cDNA、完整的开放阅读框(ORF)、启动子、增强子、抑制子/反式激活蛋白、复制起点、内含子、操纵基因或任何多核苷酸官能基团。通常，用于这一目的的“规定序列”可以是任何多核苷酸，15个碱基多核苷酸序列，和长度在大约15个碱基到大约15,000个碱基之间的多核苷酸序列(本发明明确地指定为它们之间的每一整数)。考虑选择密码子编组，包括由简并诱变盒子编码的氨基酸类型。

【000186】在可以被引入诱变盒子的突变编组的一个特别优选的例证中，本发明特别地提供了在每一位置编码2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19和20个氨基酸的简并密码子取代(使用简并寡核苷酸)，和由其编码的多肽文库。

【000187】本发明的一方面是一种分离核酸，该核酸含有A组核酸序列的一个序列，基本上与其同一的序列，与其互补的序列，或包括A组核酸序列的一个序列的至少10，15，20，25，30，35，40，50，75，100，150，200，300，400或500个连续碱基的片段。分离核酸可以包括DNA，包括cDNA、基因组DNA和合成DNA。DNA可以是双链或单链的，如果单链可以是编码链或非编码(反义)链。另外，分离核酸可以包括RNA。

【000188】正如下面更详细地所讨论的，本发明的分离核酸序列可以被用来制备B组氨基酸序列的多肽中的一个多肽，和与其基本上同一的序列，或包括B组氨基酸序列的多肽中的一个多肽的至少5，10，15，20，25，30，35，40，50，75，100或150个连续氨基酸的片段，和与其基本上同一的序列。

【000189】另外，本发明的核酸序列可以使用传统技术来诱变，如定点诱变或本技术领域普通技术人员所熟知的其它技术，以便将沉默变化引入A组核酸序列和与其基本上同一的序列的多核苷酸中。正如此处所用，“沉默变化”包括，例如，不改变由多核苷酸编码的氨基酸序列的变化。为了通过引入在宿主生物体中频繁发生的密码子或密码子对，来增加由含有编码多肽的载体的宿主细胞产生的多肽的水平，这样的变化可能是令人期望的。

【000190】本发明也涉及具有核苷酸变化的多核苷酸，所述核苷酸变化导致本发明的多肽中(例如B组氨基酸序列)的氨基酸取代、插入、缺失、融合和平截。这样的核苷酸变化可以使用如下技术来引入：定点诱变、随机化学诱变、核酸外切酶III缺失和其它重组DNA技术。可选择地，这样的核苷酸变化可以是天然存在的等位基因变异体，所述等位基因变异体是通过鉴别特定地与包括如下碱基的探针杂交的核酸序列分离的：A组核酸序列和与其基本上同一的序列(或与其互补的序列)的一个序列的至少10，15，20，25，30，35，40，50，75，100，150，200，300，400或500个连续碱基，杂交条件是如此处提供的高度严格、中度严格或低度严格条件。

固定化酶固相支持体

【000191】酶、其片段和编码这些酶和片段的核酸可以被固定到固相支持体上。在工业过程中使用这些酶通常是经济的和有效的。例如，在特定化学反应中使用的酶(或其活性片段)的聚生体或混合物，可以被附着在固相支持体上，并且浸入到工艺桶中。酶反应可以发生。然后，从桶中取出固相支持体和附着在其上的酶，用于重复使用。在本发明的一个方面，分离的核酸被固定到固相支持体上。在本发明的另一个方面，固相支持体选自凝胶、树脂、聚合物、陶瓷制品、玻璃、微电极及其任意组合。

【000192】例如，在本发明中有用的固相支持体包括凝胶。凝胶的一些实例包括琼脂糖凝胶、白明胶、戊二醛、脱乙酰壳多糖处理的戊二醛、白蛋白-戊二醛、脱乙酰壳多糖-黄原胶、toyopearl凝胶(聚合物凝胶)、藻酸盐、藻酸盐-多熔素、角叉菜胶、琼脂糖、乙醛酰琼脂糖、磁性琼脂糖、葡聚糖-琼脂糖、聚(氨甲酰磺酸盐)水凝胶、BSA-PEG水凝胶、磷酸化聚乙烯醇(PVA)、单氨基乙基-N-氨基乙基(MANA)、氨基或其任意组合。

【000193】在本发明中有用的另一个固相支持体是树脂或聚合物。树脂或聚合物的一些实例包括纤维素、丙烯酰胺、尼龙、人造丝、聚酯、离子交换树脂、AMBERLITE^TMXAD-7、AMBERLITE^TMXAD-8、AMBERLITE^TMIRA-94、AMBERLITE^TMIRC-50、聚乙烯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸酯或其任意组合。在本发明中有用的另一种类型的固相支持体是陶瓷制品。一些实例包括非多孔性陶瓷、多孔性陶瓷、SiO₂、Al₂O₃。在本发明中有用的另一种类型的固相支持体是玻璃。一些实例包括非多孔性玻璃、多孔玻璃、氨丙基玻璃或其任意组合。可以使用的另一种类型的固相支持体是微电极。一个实例是聚乙烯胺涂覆的磁铁。石墨颗粒可以被用作固相支持体。固相支持体的另一个实例是细胞，如红血球。

固定化方法

【000194】有许多用于将酶或其片段或核酸固定到固相支持体上的方法，这些方法对本技术领域的普通技术人员是已知的。这些方法的一些实例包括静电小滴产生、电化学方法、通过吸附、通过共价结合、通过交联、通过化学反应或过程、通过封装、通过截留、通过藻酸钙或通过聚(2-羟乙基甲基丙烯酸)。在如下文献中描述了类似方法：Methods in Enzymology，Immobilized Enzymes and Cells，C卷.1987.Academic Press.由S.P.Colowick和N.O.Kaplan编辑，第136卷；和Immobilization of Enzymes and Cells.1997.Human Press.由G.F.Bickerstaff编辑，Series：Methods in Biotechnology，由J.M.Walker编辑。

【000195】探针-A组核酸序列、与其基本上同一的序列、互补序列或含有前述序列中的一个序列的至少10，15，20，25，30，35，40，50，75，100，150，200，300，400或500个连续碱基的片段的分离核酸也可以被用作探针，来确定生物样品如土壤样品，是否含有包括本发明的核酸序列的生物体，或可以得到该核酸的生物体。在这些方法中，得到了潜在地具有分离核酸的生物体的生物样品，并且从这些样品得到了核酸。将核酸与探针在允许探针与其中存在的任何互补序列特定地杂交的条件下接触。

【000196】在需要的时候，允许探针与互补序列特定地杂交的条件可以如下确定，将探针与来自样品的互补序列以及不含有互补序列的控制序列接触，所述样品已知含有互补序列。可以改变杂交条件，如杂交缓冲液的盐浓度、杂交缓冲液的甲酰胺浓度或杂交温度，以确定允许探针与互补核酸特定地杂交的条件。此处叙述了严格杂交条件。

【000197】可以通过用可检测试剂探针来检测杂交，如放射性同位素标记、荧光染料或能催化可检测产物形成的酶。使用已标记的探针来检测样品中互补核酸的存在的许多方法对本技术领域的普通技术人员是熟知的。这些方法包括Southern印迹、Northern印迹、克隆杂交方法和斑点印迹。这些方法中的每一个方法的规程在如下文献中有所提供：Ausubel等人，(1997)，Current Protocols in MolecularBiology，John Wiley&Sons，Inc.，和Sambrook等人(1989)，Molecular Cloning：A Laboratory Manual第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，此处将这些文献完整地引入作为参考。

【000198】在一个实例中，探针DNA是用特定结合对的一员(即配体)“标记”的，该对的另一员被结合到固体基质中，以便从靶物质来源容易地分离靶物质。例如，配体和特定结合对可以在每个方向选自如下：(1)抗原或半抗原和抗体或其特定结合片段；(2)生物素或亚氨基生物素和抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白；(3)糖和对其特异的外源凝集素；(4)酶及其抑制剂；(5)脱辅基酶蛋白和辅因子；(6)互补同聚寡核苷酸；和(7)激素及其受体。在一个实例中，固相选自：(1)玻璃或聚合表面；(2)聚合玻珠的填充柱；和(3)磁性或顺磁性颗粒。

【000199】可以选择地，不止一个探针(其中至少一个探针能与核酸样品中存在的任何互补序列特定地杂交)可以被用于扩增反应中，以确定样品是否包括含有本发明的核酸序列的生物体(例如，从中分离核酸的生物体)。典型地，探针包括寡核苷酸。一方面，扩增反应包括PCR反应。PCR规程在Ausubel等人(1997)同上，和Sambrook等人(1989)同上中有所描述。另外，扩增可以包括连接酶链式反应，3SR，或链置换反应。(参见Barany(1991)，PCR Methods and Application1：5-16；Fahy等人(1991)，PCR Methods and Applications 1：25-33；和Walker等人(1992)，Nucleic Acid Research 20：1691-1696，将这些文献完整地引用于此作为参考)。

【000200】也可以在染色体步查方法中使用来自如下序列的末端附近的序列所衍生的探针：A组核酸序列和与其基本上同一的序列中所示的序列，以鉴别含有与上面所述的核酸序列邻接的基因组序列的克隆。这样的方法允许分离编码来自宿主生物体的其它蛋白的基因。

【000201】如如下序列中所示的分离核酸序列可以被用作探针来鉴别和分离相关核酸：A组核酸序列，与其基本上同一的序列，与其互补的序列，或含有前述序列中的一个序列的至少10，15，20，25，30，35，40，50，75，100，150，200，300，400或500个连续碱基的片段。在一些方面，相关核酸可以是来自生物体的cDNA或基因组DNA，从中分离核酸的生物体除外。例如，其它生物体可以是相关生物体。在一些方法中，核酸样品与探针在允许探针与相关序列特定地杂交的条件下接触。然后使用上面说明的任意一种方法来检测探针与来自相关生物体的核酸的杂交。

【000202】在核酸杂交反应中，用于获得特定严格水平的条件可以有所变化，这依赖于被杂交的核酸的性质。例如，在选择杂交类型时可以考虑核酸的长度、核酸之间的互补性数量、核苷酸序列组成(例如G-C富集与A-T富集程度)和核酸类型(例如RNA与DNA)。可以通过在低于探针的溶解温度的变化温度下进行杂交来改变严格性。溶解温度Tm是50％的靶序列与完全互补的探针杂交的温度(在已知离子强度和温度下)。对于特定探针，对严格条件进行选择使其等于Tm或比Tm低大约5℃。使用如下公式计算探针的溶解温度：

【000203】对于长度在14到70个核苷酸之间的探针，计算溶解温度(Tm)公式为：Tm＝81.5+16.6(log[Na⁺]+0.4(组分G+C)-(600/N)，其中N是探针的长度。

【000204】如果杂交是在含有甲酰胺的溶液中进行的，计算溶解温度的方程为：Tm＝81.5+16.6(log[Na⁺]+O.4(组分G+C)-(0.63％甲酰胺)-(600/N)，其中N是探针的长度。

【000205】表达文库-将本发明的多核苷酸与表达载体和适当的宿主细胞组合使用来产生表达文库。该文库允许由本发明的多核苷酸编码的多肽的体内表达。在这样的表达文库已经产生后，在通过细胞分选进行筛选之前，可以增加额外的步骤，即对这样的文库进行“生物淘选”的步骤。“生物淘选”方法是这样的一个过程，即通过筛选克隆文库中的序列特异性鉴别具有特定生物活性的克隆，所述克隆文库是通过如下步骤产生的：(i)选择性地分离来源于至少一种微生物体的靶DNA，通过使用至少一个探针DNA，该探针DNA包括编码具有特定生物活性(例如腈水解酶活性)的多肽的DNA序列的至少一部分；和(ii)任选地用分离的靶DNA转化宿主，以产生克隆文库，用于筛选特定生物活性。

【000206】探针DNA，是用于从来自至少一种微生物体的DNA中选择性地分离相关靶DNA的，可以是相对于已知活性的酶的DNA的全长编码区序列或部分编码区序列。使用探针的混合物来探测原始DNA文库，所述探针包括编码具有特定酶活性的酶的DNA序列的至少一部分。这些探针或探针文库是单链的，被探测的微生物DNA已经被转化为单链形式。特别合适的探针是那些来源于编码如下酶的DNA的探针，所述酶具有与被筛选的特定酶活性类似的活性或相同的活性。

【000207】已经从选择性地从生物体分离的DNA制备了克隆多重性，这样的克隆被筛选特定酶活性，以鉴别具有特定酶特性的克隆。

【000208】可以在个体表达克隆上影响酶活性的筛选，或者最初在表达文库的混合物上影响，以确定该混合物是否具有一种或多种特定酶活性。如果所述混合物具有特定酶活性，那么可以对个体克隆进行再次筛选，以筛选这样的酶活性或更特异的活性。因此，例如，如果克隆混合物具有腈水解酶活性，那么可以对个体克隆进行恢复和筛选，以确定这些克隆中的哪一个克隆具有腈水解酶活性。

【000209】正如对于上面的一个方面的描述，本发明提供了一种过程，用于含有选择的DNA的克隆的酶活性筛选，所述选择的DNA来源于微生物体，该过程包括：筛选文库，以筛选特定酶活性，所述文库包括多个克隆，所述克隆已经通过从所选择DNA的微生物体的基因组DNA中回收而产生，所述选择的DNA是通过与至少一个DNA序列杂交选择的，所述至少一个DNA序列是编码具有特定活性的酶的DNA序列的全部或一部分；和用选择的DNA转化宿主，以产生被用来筛选特定酶活性的克隆。

【000210】在一个方面，来自微生物体的DNA文库被进行一个选择程序，以从中选择DNA，该DNA与一个或多个探针DNA序列杂交，所述探针DNA序列是编码具有特定酶活性的酶的DNA序列的全部或一部分；

(a)将来自DNA文库的的单链DNA群体与结合到配体上的DNA探针在严格杂交条件下接触，以产生探针和DNA文库的一个成员之间的双链体；

(b)将双链体与配体的固相特异性结合成员接触，以产生固相复合体；

(c)从DNA文库的非双链体成员分离固相复合体；

(d)对复合体进行变性，以释放DNA文库的成员；

(e)产生来自步骤(d)的成员的互补DNA链，以使该成员形成双链DNA；

(f)将双链DNA引入适当的宿主，以表达由成员DNA编码的多肽；和

(g)确定所表达的多肽是否表现出特定酶活性。

【000211】在其它方面，该过程包括预选择，以回收包括信号或分泌序列的DNA。用这种方式，通过如上面所描述的仅仅杂交包括信号或分泌序列的DNA，从基因组DNA群体选择是可能的。下面的段落描述了本方面的这一方面的规程，分泌信号序列通常情况下的性质和功能，这些序列应用于分析或选择过程的特定的例证性应用。

【000212】在上面的步骤(a)之后但在(b)之前，这一方面的特别方面进一步包括如下步骤：

(i)将(a)的单链DNA群体与结合到配体上的寡核苷酸探针在严格杂交条件下接触，以形成双链DNA双链体，所述结合到配体上的寡核苷酸探针与对于给定的蛋白种类独特的分泌信号序列互补；

(ii)将(i)的双链体与所述配体的固相特异性结合成员接触，以产生固相复合体；

(iii)从(a)的单链DNA群体分离固相复合体；

(iv)对复合体进行变性，以释放基因组群体的单链DNA成员；

(v)从固相结合探针分离单链DNA成员。

【000213】然后，已经被选择和分离以包括信号序列的DNA被进行上面所描述的选择程序，以从中选择和分离DNA，该DNA结合到一个或多个探针DNA序列上，所述探针DNA来源于编码具有特定酶活性的酶的DNA。该程序在美国专利号6,054,267中有所描述和例证，此处将其完整地引入作为参考。

【000214】体内生物淘选可以使用基于FACS(荧光激活细胞分选仪)的仪器进行。用含有稳定转录的RNA的元件的载体构建复合基因文库。例如，内含导致二级结构如发夹结构的序列，将有助于增强它们的稳定性，从而增加它们在细胞中的半衰期，所述二级结构被设计在RNA的转录区域的侧翼。在生物淘选过程中使用的探针分子，包括用报道分子标记的寡核苷酸，该报道分子只有在探针与靶分子结合时才发出荧光。使用几种转化方法中的一种，将这些探针引入来自文库的重组细胞。探针分子结合到转录的靶mRNA上，导致DNA/RNA异源双链体分子。探针与靶物质的结合，将产生荧光信号，该信号在筛选过程中通过FACS仪器进行检测和分类。

【000215】在一些方面，编码如下序列的多肽之一的核酸以适当的相与前导序列装配，所述前导序列能指导翻译多肽或其片段的分泌，所述如下序列包括B组氨基酸序列，与其基本上同一的序列，或包括其至少5，10，15，20，25，30，35，40，50，75，100或150个连续氨基酸的片段。任选地，核酸可以编码融合多肽，其中如下序列的多肽之一被融合到异源肽或多肽上，如期望特性例如增强的稳定性或简化的纯化过程，异源肽或多肽例如是N-端识别肽，所述如下序列包括B组氨基酸序列，与其基本上同一的序列，或包括其至少5，10，15，20，25，30，35，40，50，75，100或150个连续氨基酸的片段。

【000216】宿主细胞可以是本技术领域的普通技术人员所熟悉的任何宿主细胞，包括原核细胞、真核细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞或植物细胞。正如适当宿主的代表性实例，可能提及到：细菌细胞，如大肠杆菌(E.coli.)、链霉菌(Streptomyces)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)和如下属中的各种种类：假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)和葡萄球菌属(Staphylococcus)，真菌细胞如酵母，昆虫细胞如果蝇S2(Drosophila S2)和草地夜蛾Sf9(Spodoptera Sf9)，动物细胞如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、COS或黑色素瘤(Bowes melanoma)和腺病毒。适当宿主的选择在本技术领域的普通技术人员的能力范围内。

【000217】在适当的时候，工程宿主细胞可以在传统的培养基中培养，该培养基被修饰以适合激活启动子，选择转化体或扩增本发明的基因。在合适的宿主菌株转化和宿主菌株生长到适当的细胞密度之后，可以用适当的方法(例如变温或化学诱导)诱导所选择的启动子，细胞被再次培养一段时间以允许它们产生期望的多肽或其片段。

【000218】细胞被特别地通过离心收获，通过物理或化学方法破坏，并且保留所得到的粗提取物用于进一步纯化。用于蛋白表达的微生物细胞可以通过任何传统方法来破坏，包括冻融循环、超声处理、机械破坏或使用细胞裂解试剂。这样的方法对本技术领域的普通技术人员是已知的。所表达的多肽或其片段可以通过如下方法从重组细胞培养物中回收和纯化：硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阳离子交换色谱法、磷酸纤维素色谱法、疏水相互作用色谱法、亲和色谱法、羟磷灰石色谱法和外源凝集素色谱法。在必要时，在完成多肽的构型中，可以使用蛋白重折叠步骤。如果期望，可以将高效液相色谱(HPLC)用于最终的纯化步骤。

【000219】各种哺乳动物细胞培养系统也可以被用于表达重组蛋白。哺乳动物表达系统的实例包括猴肾纤维原细胞的COS-7系(由Gluzman描述(1981)，Cell 23：175)，和其它能表达来自相容载体的蛋白的细胞系，如C127、3T3、CHO、海拉细胞(HeLa)和BHK细胞系。

【000220】本发明也涉及如下序列的多肽的变体：B组氨基酸序列，与其基本上同一的序列，或包括其至少5，10，15，20，25，30，35，40，50，75，100或150个连续氨基酸的片段。尤其是，这些变体可以通过如下方式在氨基酸序列上与B组氨基酸序列和与其基本上同一的序列不同，即通过一个或多个替代、增加、缺失、融合和平截，这些方式也可以以其任意组合存在。

【000221】这些变体可以是天然存在的或是体外产生的。尤其是，这样的变体可以使用基因工程技术来产生，如定点诱变、随机化学诱变、核酸外切酶III缺失方法和标准克隆技术。可以选择地，这样的变体、片段、类似物或衍生物可以使用化学合成或修饰方法来产生。

【000222】产生变体的其它方法对于本技术领域的普通技术人员是已知的。这些方法包括这样的方法，即其中从天然分离物得到的核酸序列被修饰，以产生编码多肽的核酸，所述核酸具有能增强它们在工业或实验室应用的特性。在这样的方法中，产生且表征了与来自天然分离物的序列具有一个或多个核苷酸差异的大量变体序列。典型地，这些核苷酸差异导致与由来自天然分离物的核酸编码的多肽的氨基酸变化。

易错PCR(Error Prone PCR)

【000233】例如，可以使用易错PCR产生变体。在易错PCR中，PCR是在DNA聚合酶的拷贝保真度较低的条件下进行的，这样可以沿着PCR产物的整个长度获得较高的点突变率。易错PCR描述在Leung等人(1989)，Technique 1：11-15和Caldwell等人(1992)，PCR Methods Applic.2：28-33，将其公开内容完整地引用于此作为参考。简单来说，在这些方法中，将被诱变的核酸与PCR引物和试剂(例如反应缓冲液、MgCl₂、MnCl₂、Taq聚合酶和适当浓度的dNTP)混和，以沿着PCR产物的整个长度获得较高的点突变率。例如，可以使用将被诱变的20微微毫摩尔核酸，30皮摩尔每一种PCR引物，含有如下成分的反应缓冲液：50mM KCl、10mM Tris HCl(pH 8.3)和0.01％明胶、7mM MgCl₂、0.5mM MnCl₂、5单位Taq聚合酶、0.2mM GTP、0.2mM dATP、1mM dCTP和1mM dTTP。PCR可以被进行30个循环：94℃1分钟，45℃1分钟，72℃1分钟。然而，应该意识到，这些参数在适当的时候可以改变。被诱变的核酸被克隆到适当的载体中，并且评价由被诱变的核酸编码的多肽的活性。

【000224】也可以使用寡核苷酸指导的诱变来产生变体，以便在相关的任何克隆DNA中产生位点特异性突变。寡核苷酸诱变描述在Reidhaar-Olson等人(1988)，Science，241：53-57，将其公开内容完整地引用于此作为参考。简单来说，在这些方法中，合成了被引入克隆DNA的具有一个或多个突变的大量双链寡核苷酸，且被插入到将被诱变的克隆DNA中。回收含有诱变DNA的克隆，并且评价由它们所编码的多肽的活性。

装配PCR(Assembly PCR)

【000225】另一种产生变体的方法是装配PCR。装配PCR涉及从小DNA片段的混合物装配PCR产物。大量不同的PCR反应在相同的小瓶中平行发生，一个反应的产物引导另一反应的产物。装配PCR描述在美国专利号5,965,408中，将其公开内容完整地引用于此作为参考。

有性PCR诱变(Sexual PCR mutagenesis)

【000226】仍然，产生变体的另一个方法是有性PCR诱变。在有性PCR诱变中，由于基于序列同源性的DNA分子的随机断裂，随后是PCR反应中引物延伸的交换固定，强制同源重组在具有不同但高度相关的DNA序列的DNA分子之间体外发生。有性PCR诱变描述在Stemmer(1994)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：10747-10751中，将其公开内容完整地引用于此作为参考。简单来说，在这样的方法中，用DNAse消化大量将被重组的核酸，以产生平均大小为大约50-200核苷酸的片段。所需平均大小的片段被纯化，且重悬浮在PCR混合物中。PCR在有助于核酸片段之间的重组的条件下进行。例如，通过将纯化片段以10-30ng/μl的浓度重悬浮在包括如下成分的溶液中来进行：每种dNTP为0.2mM、2.2mM MgCl₂、50mM KCl、10mM Tris HCl、pH9.0、和0.1％Triton X-100。每100μl反应混合物中加入2.5单位Taq聚合酶，使用如下时间段进行PCR：94℃ 60秒、94℃ 30秒、50-55℃30秒、72℃30秒(30-45次)和72℃5分钟。然而，应该意识到，这些参数在适当的时候可以变化。在一些方面，寡核苷酸可以被包括在PCR反应中。在其它方面，在第一组PCR反应中可以使用DNA聚合酶I的克列诺(Klenow)片段，在随后的PCR反应组中可以使用Taq聚合酶。分离重组序列，评价由这些重组序列所编码的多肽的活性。

体内诱变(In vivo Mutagenesis)

【000227】也可以通过体内诱变产生变体。在一些情况下，通过在细菌菌株如大肠杆菌菌株中繁殖相关序列来产生相关序列中的随机突变，该菌株以一个或多个DNA修复途径进行突变。这样的“增变”菌株比野生型母体的菌株具有较高的随机突变率。在这些菌株中繁殖DNA，将最终在DNA中产生随机突变。适合在体内诱变中使用的增变菌株，描述在PCT出版物序列号WO 91/16427中，将其公开内容完整地引用于此作为参考。

盒式诱变(Cassette Mutagenesis)

【000228】也可以通过盒式诱变产生变体。在盒式诱变中，用与天然序列不同的合成寡核苷酸“盒子”取代双链DNA分子的一个小区域。寡核苷酸通常完全和/或部分地含有随机化的天然序列。

递归集合诱变(Recursive Ensemble Mutagenesis)

【000229】递归集合诱变也可以被用来产生变体。递归集合诱变是一种蛋白质工程(蛋白质诱变)算法，该算法是开发用来产生表型相关变体的不同群体的，所述群体的成员在氨基酸序列上不同。该方法使用回馈机制来控制组合盒式诱变的连续循环。递归集合诱变描述在Arkin等人(1992)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：7811-7815中，将其公开内容完整地引用于此作为参考。

指数集合诱变(Exponential Ensemble Mutagenesis)

【000230】在一些情况下，使用指数集合诱变来产生变体。指数集合诱变是用来产生组合文库的一种方法，所述组合文库具有高百分比的独特和功能突变体，其中残基小组被平行地随机化，以便在每一改变的位置上鉴定导致功能蛋白质的氨基酸。指数集合诱变描述在Delegrave等人(1993)，Biotechnology Research 11：1548-1552，将其公开内容完整地引用于此作为参考。

随机和定点诱变(Random and site-directed Mutagenesis)

【000231】随机和定点诱变描述在Arnold(1993)，Current Opinions inBiotechnology 4：450-455，将其公开内容完整地引用于此作为参考。

改组方法(Shuffling Procedures)

【000232】在一些方面，使用改组方法来产生变体，其中编码不同多肽的大量核酸的部分被融合在一起，以产生编码嵌合多肽的嵌合核酸序列，正如美国专利号5,965,408和5,939,250中所描述的，将其公开内容完整地引用于此作为参考。

【000233】B组氨基酸序列的多肽的变体可以是这样的变体，其中B组氨基酸序列的多肽的一个或多个氨基酸残基被一个保守或非保守氨基酸残基(例如一个保守氨基酸残基)取代，这样取代的氨基酸残基可以由或者不由遗传密码编码。

【000234】保守取代是指多肽中的一个给定氨基酸被具有类似特性的另一个氨基酸取代。通常看作保守取代的是如下取代：一个脂族氨基酸如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸被另一个脂族氨基酸取代；丝氨酸被苏氨酸取代，或苏氨酸被丝氨酸取代；一个酸性残基如天冬氨酸和谷氨酸被另一个酸性残基取代；具有一个酰胺基因的残基，如天冬酰胺和谷氨酰胺，被另一个具有酰胺基团的残基取代；碱性残基如赖氨酸和精氨酸被另一个碱性残基置换；和一个芳族残基如苯丙氨酸和酪氨酸被另一个芳族残基取代。

【000235】其它变体是其中B族氨基酸序列的多肽的一个或多个氨基酸残基包括一个取代基团的变体。

【000236】仍然，其它变体是其中多肽与另一种化合物相关的变体，如增加多肽半衰期的化合物(例如聚乙二醇)。

【000237】其它变体是其中其它氨基酸被融合到多肽上的变体，如前导序列、分泌序列、前蛋白(proprotein)序列或有助于纯化、富集、或稳定多肽的序列。

【000238】在一些方面，片段、衍生物和类似物保留了与B族氨基酸序列和与其基本上同一的序列相同的生物功能或活性。在其它方面，片段、衍生物或类似物包括前蛋白，这样片段、衍生物或类似物可以通过裂解前蛋白部分以产生活性多肽来激活。

【000239】本发明的另一个方面是多肽或其片段，它们与B组氨基酸序列，与其基本上同一的序列，或包括其至少5，10，15，20，25，30，35，40，50，75，100或150个连续氨基酸的片段具有至少大约85％、至少大约90％、至少大约95％、或高于大约95％的同源性。同一性百分比可以使用上面所描述的任意一种程序来确定，这些程序对比被比较的多肽或片段，并且确定氨基酸同源性的程度或它们之间的相似性。应该意识到，氨基酸“同源性”包括如上面所描述的那些保守氨基酸取代。在本发明的一个方面，片段可以被用来产生抗体。这些抗体可以被用来固定可用于工业过程中的腈水解酶。编码本发明的腈水解酶的多核苷酸可以以类似方式使用。

【000240】另外，同源的多肽或片段可以通过生物化学富集或纯化方法来获得。潜在同源的多肽或片段的序列通过蛋白酶消化、凝胶电泳和/或微量测序来确定。使用此处描述的任意一种程序将预期同源的多肽或片段的序列与如下序列的多肽之一进行比较：B组氨基酸序列，与其基本上同一的序列，或包括其至少5，10，15，20，25，30，35，40，50，75，100或150个连续氨基酸的片段。

【000241】本发明的另一个方面是一种分析方法，用于鉴别B组氨基酸序列或与其基本上同一的序列的变体或片段，这些变体或片段保留了与B组氨基酸序列和与其基本上同一的序列的多肽的酶功能。例如，多肽的片段或变体，可以被用来催化生物化学反应，这表明所述片段或变体保留了与B组氨基酸序列中的多肽的酶活性。

【000242】用于确定变体的片段是否保留了B组氨基酸序列和与其基本上同一的序列的多肽的酶活性的分析方法包括如下步骤：将多肽片段或变体与底物分子在允许多肽片段或变体发挥作用的条件下接触；检测，或者是底物水平有所增加，或者是多肽和底物之间反应的特定反应产物水平有所增加。

【000243】B组氨基酸序列，与其基本上同一的序列，或包括其至少5，10，15，20，25，30，35，40，50，75，100或150个连续氨基酸的片段的多肽可以在多种应用中使用。例如，多肽或其片段可以被用来催化生物化学反应。根据本发明的一个方面，提供了一种方法，用于使用B组氨基酸和与其基本上同一的序列的多肽，或编码这样的多肽的多核苷酸来水解氨基腈。在这样的方法中，将含有卤代烷烃化合物的物质与B组氨基酸序列和与其基本上同一的序列的多肽之一在有助于该化合物水解的条件下接触。

【000244】抗体-B组氨基酸序列，与其基本上同一的序列，或包括其至少5，10，15，20，25，30，35，40，50，75，100或150个连续氨基酸的片段的多肽，也可以被用来产生与酶多肽或片段特定地结合的抗体。所得到的抗体也可以被用于免疫亲和色谱法，来分离或纯化多肽或确定生物样品中是否存在多肽。在这样的方法中，将蛋白制剂，如提取物或生物样品，与能与如下序列的多肽之一特定地结合的抗体接触：B组氨基酸，与其基本上同一的序列，或前述序列的片段。

【000245】在免疫亲和方法中，抗体被结合到固相支持体上，如小珠或柱基质。将蛋白制剂在一定的条件下与抗体接触，在这样的条件下抗体与B组氨基酸序列、与其基本上同一的序列、或其片段的多肽之一特定地结合。在以去除非特定地结合的蛋白质的洗涤之后，洗脱特定地结合的多肽。

【000246】在生物样品中蛋白与抗体结合的能力可以使用本技术领域的技术人员所熟知的多种方法中的任意一种来确定。例如，可以通过用可检测的标记物标记抗体来确定结合，如荧光试剂、酶标记物、或放射性同位素。另外，抗体与样品的结合可以使用其上具有这样的可检测标记的二次抗体来检测。特定的测定方法包括ELISA测定法、夹心测定法、放射免疫测定法和蛋白质印迹测定法。

【000247】本发明的抗体可以被结合到固相支持体上，并且可以被用来固定本发明的腈水解酶。正如上面所描述的，在工业化学方法中可以使用这样固定的腈水解酶，用于将腈转化为大范围的有用的产品和中间产物。

【000248】通过将多肽直接注射到动物或通过将多肽施用给动物，可以获得针对如下序列的多肽产生的多克隆抗体：B组氨基酸序列，与其基本上同一的序列，或包括其至少5，10，15，20，25，30，35，40，50，75，100或150个连续氨基酸的片段。然后，如此获得的抗体将结合多肽本身。以这种方式，即使仅仅编码多肽片段的序列也可以被用来产生能结合到整个天然多肽上的抗体。然后，这样的抗体被用来从表达该多肽的细胞中分离多肽。

【000249】为了制备单克隆抗体，可以使用能通过连续细胞系培养物产生抗体的任何技术。实例包括杂交瘤技术(Kohler和Milstein(1975)，Nature，256：495-497，将其公开内容完整地引用于此作为参考)，三系杂交瘤(trioma)技术、人B-细胞杂交瘤技术(Kozbor等人(1983)，Immunology Today 4：72，将其公开内容完整地引用于此作为参考)，和EBV-杂交瘤技术(Cole等人(1985)，在MonoclonalAntibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.，第77-96页中，将其公开内容完整地引用于此作为参考)。

【000250】所描述的用于产生单链抗体的技术(美国专利号4,946,778，将其公开内容完整地引用于此作为参考)适合用来产生针对多肽的单链抗体，例如B组氨基酸序列或其片段的多肽。另外，转基因大鼠可以被用来表达针对这些多肽或片段的人源化抗体。

【000251】所产生的针对如下序列的多肽的抗体可以被用来从其它生物体和样品筛选类似多肽：B组氨基酸序列，与其基本上同一的序列，或包括其至少5，10，15，20，25，30，35，40，50，75，100或150个连续氨基酸的片段。在这样的技术中，将来自生物体的多肽与抗体接触，并且检测那些与抗体特定地结合的多肽。上面所描述的任何技术可以被用来检测抗体结合。一个这样的筛选方法描述在“Methods for Measuring Cellulase Activities”，Methods in Enzymology，160：87-116，将其公开内容完整地引用于此作为参考。

使用包括核酸的全细胞

【000252】本发明提供了使用已经用编码一个或多个本发明的腈水解酶的核酸(或其活性片段)转化的全细胞。本发明也提供了在底物上进行腈水解酶的反应中使用这样的全细胞。因此，本发明提供了使用包括此处公开的至少一个核酸或多肽(SEQ ID NOS：1-386)的全细胞来水解羟腈或氨基腈键合的方法。例如，用编码腈水解酶的核酸稳定地转染(本发明也包括瞬时转染或转化全细胞)的全细胞是本发明的一个方面。这样的细胞是有用的，作为反应混合物中的试剂来作用于底物，并且表现出腈水解酶活性。

序列分析软件

【000253】两个或多个序列之间的同一性或同源性百分比通常是使用序列分析软件(例如位于University of Wisconsin Biotechnology Center，Madison，WI的遗传学计算机小组的序列分析软件包)来测量的。这样的软件通过将同一性或同源性百分比分配给各种缺失、替代和其它修饰来匹配相似序列。在两个或多个核酸或多肽序列的情形中，术语“同一性百分比”指，在指定区域或比较“窗口”，按照最大对应比对之后进行比较时，相同的核苷酸或氨基酸残基的百分比。在一些算法中，保守氨基酸取代可以被认为是“同一的”，在密码子的摆动位点上的变化可以被认为是“同一的”。

【000254】“比对”指将两个或多个序列排列起来以获得最大对应的过程，目的是为了评价同一性或同源性程度，正如相关比对算法的环境中所定义的。

【000255】对于序列比较，通常一个序列作为参考序列发挥作用，将试验序列与其进行比较。当使用序列比较算法时，试验序列和参考序列被输入到计算机中，如果必要，指定子序列坐标，并且为特定算法指定序列算法程序参数。可以使用缺省程序参数，或可以指定替换性参数。然后，基于程序参数，序列比较算法计算试验序列相对于参考序列的同一性百分比或同源性百分比。

【000256】正如此处所用，“比较窗口”是核酸或氨基酸序列中连续位置的一个片段，包括20个到600个，通常大约50个到大约200个，更通常地大约100个到大约150个核苷酸或残基，在两个序列被最优化地比对后，该片段可以与具有相同或不同数量的连续位置的参考序列进行比较。进行序列比较算法的方法在本技术领域是已知的。可以进行序列的最适比对，例如通过Smith and Waterman(1981)，Adv.Appl.Math.2：482的局部同源性算法，通过Needleman and Wunsch(1970)，J.Mol.Biol 48：443的同源性比对算法，通过Pearson and Lipman(1988)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：2444-24448的相似性搜索方法，通过这些算法的计算机化实施，或通过人工比对和视觉观察。确定同源性或同一性的其它算法包括，例如BLAST程序(基本局部比对搜索工具，National Center for Biological Information)，BESTFIT，FASTA和TFASTA(位于Madison，WI的遗传学计算机小组的威斯康星遗传学软件包(Wisconsin Genetics Software Package))，ALIGN，AMAS(多重比对序列分析，Analysis of Multiply Aligned Sequences)，AMPS(多重蛋白序列分析，Alignment of Multiple Protein Sequence)，ASSET(比对片段统计学评估工具，Aligned Segment Statistical Evaluation Tool)，BANDS，BESTSCOR，BIOSCAN(生物学序列比较分析节点，Biological Sequence Comparative Analysis Node)，BLIMPS(Blocks IMProved Searcher)，Intervals and Points(间隔和点)，BMB，CLUSTALV，CLUSTAL W，CONSENSUS，LCONSENSUS，WCONSENSUS，Smith-Waterman算法，DARWIN，Las Vegas算法，FNAT(强制核苷酸比对工具，Forced NucleotideAlignment Tool)，Framealign(框架比对)，Framesearch(框架搜索)，DYNAMIC，FILTER，FSAP(Fristensky序列分析软件包，Fristensky Sequnence AnalysisPackage)，GAP(全球比对程序，Global Alignment Program)，GENAL，GIBBS，GenQuest，ISSC(敏感序列比较，Sensitive Sequence Comparison)，LALIGN(局部序列比对，Local Sequence Alignment)，LCP(局部含量程序，Local ContentProgram)，MACAW(多重比对构造和分析工作平台，Multiple alignment Constructionand Analysis Workbench)，MAP(多重比对程序，Multiple Alignment Program)，MBLKP，MBLKN，PIMA(模式诱导多序列比对，Pattem-Induced Multi-sequenceAligmnent)，SAGA(借助遗传学算法的序列比对)Sequence Alignment by GeneticAlgorithm)和WHAT-IF。这些比对算法也可以被用来筛选基因组数据库，以鉴别具有基本上同一的序列的多核苷酸序列。许多基因组数据库是可以获得的，例如作为人类基因组测序计划(Human Genome Sequencing Project)的一部分，可以获得人基因组的重要部分(J.Roach，http：//weber.u.Washington.edu/～roach/human_genome_progress 2.html)(Gibbs，1995)。至少二十一个其它基因组已经被测序，例如包括生殖器支原体(Mgenitalium)(Fraser等人，1995)，甲烷球菌(M.jannaschii)(Bult等人，1996)，流感嗜血菌(H.influenzae)(Fleischmann等人，1995)，大肠杆菌(E.coli)(Blattner等人，1997)，和酿酒酵母(S.cerevisiae)(Mewes等人，1997)，和果蝇(D.melanogaster)(Adams等人，2000)。对生物体模型的基因组进行测序也已经取得了重大进步，如小鼠、线虫(C.elegans)和拟南芥(Arabadopsis sp)。几个包括基因组信息的数据库由不同的组织保存，其中注释了一些功能信息，这些数据库可以通过因特网得到，例如 http：//wwwtigr.org/tdb； http：//www.genetics.wisc.edu；http：//genome-www.stanford.edu/～ball； http：//hiv-web.lanl.gov；http：//www.ncbi.nlm.nih.gov； http：//www.ebi.ac.uk； http：//Pasteur.fr/other/biology；和http：//www.genome.wi.mit.edu。

【000257】有用的算法的实例是BLAST和BLAST2.0算法，分别描述在Altschul等人(1997)，Nuc.Acids Res.25：3389-3402，和Altschul等人(1990)，J.Mol.Biol.215：403-410中。进行BLAST分析的软件可以通过National Center forBiotechnology Information(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)公开获得。该算法包括首先通过识别查询序列中短字符的长度W来识别高得分序列对(HSPs)，当与数据库序列中相同长度的字符比对时，这或者匹配或者满足一些正值阈值得分T。T指相邻字符得分阈值(Altschul等人，同上)。这些初始相邻字符命中作为寻找含有它们的较长HSPs的初始搜索的种子。字符命中沿着每一序列在两个方向延伸，一直延伸到累积比对得分能被增加。使用参数M(一对匹配残基的奖赏得分；通常大于零)计算累积得分。对于氨基酸序列，用得分矩阵来计算累积得分。当出现如下情况时，中断字符命中在每一方向的延伸：累积比对得分从其所得到的最大值下降了数量X；由于一个或多个负得分残基比对的累积，累积得分等于或低于零；或者已经到达任一序列的末端。BLAST算法参数W、T和X确定比对的灵敏度和速度。对于核苷酸序列，BLASTN程序使用缺省值，字符长度(W)为11，期望值(E)为10，M＝5，N＝-4，并且比较双链。对于氨基酸序列，LASTP程序使用的缺省值为：字符长度(W)为3，期望值(E)为10和BLOSUM62得分矩阵(参见Henikoff和Henikoff(1989)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915)。

【000258】BLAST算法也可以进行两个序列之间相似性的统计分析(例如参见，Karlin和Altschul(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：5873)。由BLAST算法提供的一个相似性测量是最小总和概率(P(N))，这提供了两个核苷酸或氨基酸序列之间的匹配偶然发生的概率指示。例如，如果在试验核酸与参考核酸的比较中，最小总和概率低于大约0.2，低于大约0.01，或低于大约0.001，核酸被认为与参考序列是相似的。

【000259】在一个方面，使用基本局部比对搜索工具(“BLAST”)来评价蛋白和核酸序列同源性。尤其是，五个特定的BLAST程序被用来完成如下任务：

(1)BLASTP和BLAST3将氨基酸查询序列与蛋白质序列数据库进行比较；

(2)BLASTN将核苷酸查询序列与核苷酸序列数据库进行比较；

(3)BLASTX将查询核苷酸序列(两个链)的六框架概念翻译产物与蛋白质序列数据库进行比较；

(4)TBLASTN将查询蛋白序列与在所有六个阅读框(两个链)中翻译的核苷酸序列数据库进行比较；

(5)TBLASTX将核苷酸查询序列的六框翻译与核苷酸序列数据库的六框翻译进行比较。

【000260】BLAST程序通过识别相似片段来识别同源序列，此处被称作查询氨基酸或核酸序列和试验序列之间对“高得分片段对”，所述试验序列可以从蛋白质或核酸序列数据库得到。高打分片段对通过打分矩阵方式来鉴别(即比对)，许多这样的方式在本技术领域是已知的。在一个实例中，所用的打分矩阵是BLOSUM62矩阵(Gonnet等人(1992)，Science 256：1443-1445；Henikoff和Henikoff(1993)，Proteins 17：49-61)。在另一个实例中，也可以使用PAM或PAM250矩阵(例如参见，Schwartz和Dayhoff(1978)，Matrices for Detecting Distance Relationships：Atlasof Protein Sequence and Structure，Washington：National Biomedical ResearchFoundaion)。BLAST程序可以通过美国国家医药图书馆(U.S.Naional Library ofMedicine)获得，例如通过 www.ncbi.nlm.nih.gov。

【000261】可以对上述算法所用的参数进行调整，依赖于序列长度和所考虑的同源性程度。在一些方面，在没有用户说明书的情况下，这些参数可以是算法所用的缺省参数。

【000262】在一个特定的方面，本发明提供了一种方法，用于修饰小分子，包括将此处描述的多核苷酸编码的多肽或其酶活性片段与小分子接触，以产生修饰的小分子。对修饰的小分子的文库进行测试，以确定表现出期望活性的文库中是否存在修饰的小分子。产生具有期望活性的修饰小分子的特定生物催化反应是通过如下步骤来鉴别的：系统地除去用于产生文库的一部分的每一生物催化反应；然后测试文库部分中产生的小分子中存在还是不存在具有期望活性的修饰小分子。任选地重复产生具有期望活性的修饰小分子的特定生物催化反应。用一组生物催化剂完成生物催化反应，所述一组生物催化剂与小分子结构中发现的不同结构部分发生反应，每一生物催化剂对于一个结构部分或一组相关结构部分是特异的；和每一生物催化剂与含有不同结构部分的许多不同的小分子发生反应。

【000263】腈水解酶用途的一些方面是：

α-羟基酸-腈水解酶通过水解羟腈产生α-羟基酸。这种情况的一个实例是产生扁桃酸及其衍生物。这种类型的一个重要应用包括从扁桃腈以高产量和高对映选择性商业化地产生(R)-扁桃酸。已经发现扁桃酸及其衍生物作为产生许多手性药物和农用产品的中间产物和拆解试剂具有广泛的应用。先前将鲜为人知的腈水解酶应用于使用类似底物的方法中的尝试，已经为非常低的活性、生产率和选择性所困扰。

苯基乳酸衍生物

【000264】另一个应用是以高产量和高对映体选择性产生(S)-苯基乳酸衍生物。已经发现苯基乳酸在产生许多手性药物和农用产品中具有广泛应用。

β-羟基酸

【000265】出于重要的商业考虑，提供腈水解酶，产生4-氰基-3-羟基丁酸的任一对映异构体，其(R)-对映异构体是合成药物LIPITOR^TM(立普妥，斯达汀或阿伐他汀)中的一个关键性中间产物。

【000266】下述腈水解酶是用于将羟基戊二酰基腈转化为(R)-3-羟基-4-氰基-丁酸中有用的腈水解酶的多个实例：SEQ ID NOS：205，206，SEQ ID NOS：207，208，SEQ ID NOS：195，196，SEQ ID NOS：43，44，SEQ ID NOS：321，322，和SEQ IDNOS：237，238。上述示意性实例表明“选择的腈水解酶”可以被用来将羟基戊二酰基腈转化为(S)-3-羟基-4-氰基-丁酸：SEQ ID NOS：107，108，SEQ ID NOS：109，110，SEQ ID NOS：111，112，SEQ ID NOS：127，128，SEQ ID NOS：129，130，SEQ ID NOS：133，134，SEQ ID NOS：113，114，SEQ ID NOS：145，146，SEQ IDNOS：101，102，SEQ ID NOS：179，180，SEQ ID NOS：201，202，SEQ ID NOS：159，160，SEQ ID NOS：177，178，SEQ ID NOS：181，182，SEQ ID NOS：183，184，SEQ ID NOS：185，186，SEQ ID NOS：57，58，SEQ ID NOS：197，198，SEQ ID NOS：59，60，SEQ ID NOS：67，68和SEQ ID NOS：359，360。

【000267】参考下面实施例将对本发明做进一步的描述；然而，应该理解的是，本发明不限于这些实施例。由于本发明的公开内容描述了实施本发明的当前的最好方式，许多修改和变化将展现给本技术领域的普通技术人员，而不背离本发明的范围和精神。所有在与权利要求的等同之下的意思和范围内出现的变化、修改和变更被认为在权利要求的范围内。

实施例

实施例1：噬菌粒感染

【000268】对于被用来筛选腈水解酶的每一文库，感染物是按照如下所述准备的：

将5ml SEL700细胞的OD₆₀₀nm＝1重悬浮液和1ml将被筛选的噬菌粒文库混和。将该组合物在37℃的水浴中温育45分钟。

【000269】使用该感染物，在10mM MgSO₄中进行连续稀释，使用10μl等分试样的感染物。

文库滴度进行稀释

～10⁵cfu/ml 10^-1稀释

～10⁶cfu/ml 10^-1，10^-2稀释

～10⁷cfu/ml 10^-1，10^-2，10^-3稀释

【000270】将60μl每一下述稀释物放置到一个小的LB-Kan⁵⁰平板上：

文库滴度进行稀释

～10⁵cfu/ml 未稀释的感染物，10^-1稀释

～10⁶cfu/ml 10^-1，10^-2稀释

～10⁷cfu/ml 10^-2，10^-3稀释

【000271】在台式离心机中，在4℃下，4.6k rpm将感染物中的细胞离心10分钟，以形成沉淀。从所得到的沉淀中轻轻倒出上清液。将细胞重悬浮在剩余液体中。将所有重悬浮的细胞放置到一个单个的大LB-Kan⁵⁰平板上。将所有平板在30℃培养过夜。

实施例2：选择性筛选

【000272】用～4毫升10mM MgSO₄重悬浮每一感染平板上的细胞。将重悬浮液放置到试管中。用～3毫升10mM MgSO₄重悬浮每一平板上剩余的细胞，并且与来自同一平板上的第一重悬浮液组合。用10mM MgSO₄使每一试管的体积达到12ml，将试管进行剧烈涡流摇动。在台式离心机上，在4℃下，4.6k将试管离心10分钟，以形成沉淀。从每一重悬浮液中，轻轻倒出上清液。用10ml 10mM MgSO₄重悬浮每一试管中经过洗涤的细胞。将每一文库的重悬浮液在4℃保存，直到准备建立选择性培养物。

【000273】对于每一重悬浮液，使用如下过程建立选择性培养物：

1)制备腈水解酶选择性培养基，使用包括0.2％葡萄糖、不含氮和50μg/ml卡那霉素(仅仅对于pBK噬菌粒文库而言；对于pBS文库，使用氨苄青霉素)的1XM9培养基。

2)将5ml培养基等分到50ml螺旋口圆锥形试管中。

3)将25μl所保存的重悬浮液加入到试管中。

4)加入5μ1脂肪腈，以使终浓度到达8.8mM。可以使用其它腈底物来代替脂肪腈。

5)将所得到的组合物在30℃培养。

对于每一腈底物重复步骤1-5。

实施例3：来自选择性培养物的阳性腈水解酶克隆的分离

【000274】将正在生长的十(10)μl选择性培养物，划线接种到一个小的LB-Kan⁵⁰平板上，并且允许在30℃生长两个晚上。挑取五个分离的菌落形成单位(cfu)，并使其中的每一个在30℃下、在2ml腈水解酶选择性培养基中生长。监控每一培养物(其中，生长表明阳性菌落形成单位被挑取)，当监控表明它处于生长的稳定期时将其拿开。用一(1)ml培养物制备噬菌粒制剂，并且用40μl洗脱缓冲液洗脱。用Pst I/Xho I或Sac I/Kpn I限制酶剪接五到八(5-80)μl DNA，以便从载体中去除插入物。完成限制性片段长度多态性(RFLP)测定，以鉴别插入物的大小。对插入物进行测序。

实施例4：腈水解酶的筛选和表征

【000275】筛选针对靶底物的本发明的腈水解酶。在初次筛选中显示出水解活性的那些酶中，选择其对映体选择性高于20％对映体过量(ee)的酶，用于进一步表征。对那些酶的选择基于：1)具有针对相关底物之一的活性和2)表现出大于35％ee(对映体过量)。这一筛选过程的结果如上面表1所示。用于筛选的产物是：D-苯基甘氨酸，L-苯基乳酸，(R)2-氯扁桃酸，(S)-环己基扁桃酸，L-2-甲基苯基甘氨酸，(S)-2-氨基-6-羟基己酸，和4-甲基-L-亮氨酸。

针对靶底物D-苯基甘氨酸的腈水解酶的筛选

苯基甘氨酸腈 D-苯基甘氨酸

【000276】进行苯基甘氨酸腈的水解。这些酶中的一些酶显示出高于20％的ee值，它们被选择用于初步表征。

【000277】基于初步表征实验，鉴别关于苯基甘氨酸腈的许多推断命中，对这些酶积累了大量数据。该数据显示出许多一般的特性：大部分酶的活性最适pH为7，通常情况下，在较低pH值下，对映选择性有所提高。这些酶被发现在较高温度下更活跃，尤其是38℃，尽管这一温度通常导致较低的对映体选择性。在反应中，使用水混溶共溶剂显示出是一个实用的选择。在酶反应中，含有10-25％甲醇(v/v)基本上不影响酶活性，而且在许多情况下，导致对映选择性的增加。使用两相系统也已经显示出一些成功的征兆，通过加入高达70％(v/v)的己烷维持酶的活性水平，在一些情况下加入甲苯。然而，在两相系统中使用乙酸乙酯导致较低的活性。

【000278】对于已经鉴别出对于苯基甘氨酸腈有活性的酶，好几种酶的对映选择性显示出维持了高于35％ee的成功标准。初步表征数据表明一些酶对D-苯基甘氨酸显示出高对映选择性，相应地至产物的转化率为40-60％。进一步的研究提示，这些酶中的一些酶的活性速率比底物的外消旋速率更快。降低酶的浓度导致改进的对映选择性；因此，可以发现，通过控制化学外消旋作用和酶活性的相对速率来获得一些益处。

针对靶底物(R)-2-氯扁桃酸的腈水解酶的筛选

2-氯扁桃腈 (R)-2-氯扁桃酸

【000279】已经鉴别出这些酶对于2-氯扁桃腈显示出活性。对于2-氯扁桃腈和苯基甘氨酸腈具有活性的酶之间，存在高度重叠。这些酶中的许多酶也形成一个不同的序列家族。

【000280】对于活性酶，较高的温度和中性pH显示出导致最高活性。对于绝大多数的腈水解酶，在较高的温度下，对映选择性也有所增加，尤其是在38℃。这些酶在存在高达25％甲醇或10％异丙醇的情况下保持了它们的活性；在这些情况中的许多情况下，对映选择性也有所提高。在两相系统中的活性，在很大程度上，是可以与含水条件相比较的，尤其是将己烷作为非水相时；在不同腈水解酶之间，观察到了对于甲苯的耐受性的变化。

表2.从2-氯扁桃腈的对映选择性水解的表征实验确定的最适条件的总结

SEQ ID NOS：	最适pH	最适温度℃	溶剂耐受性
SEQ ID NOS：	最适pH	最适温度℃	溶剂耐受性	385，386	7	38	25％MeOH
169，170	5	38	25％MeOH，10％IPA	385，386	7	38	25％MeOH
169，170	5	38	25％MeOH，10％IPA	185，186	7	38	25％MeOH，10％IPA
47，48	7	38	10％IPA	185，186	7	38	25％MeOH，10％IPA
47，48	7	38	10％IPA	197，198	6	55	25％MeOH，10％IPA
187，188	7	38	10％MeOH，40％IPA	197，198	6	55	25％MeOH，10％IPA
187，188	7	38	10％MeOH，40％IPA	217，218	7	38	25％MeOH，10％IPA，

			70％己烷，40％甲苯
			70％己烷，40％甲苯	55，56	7	38	10％MeOH，IPA，70％己烷
167，168	9	38	10％MeOH，IPA，70％己烷	55，56	7	38	10％MeOH，IPA，70％己烷
167，168	9	38	10％MeOH，IPA，70％己烷	15，16	7	38	25％MeOH，10％IPA，70％己烷，40％甲苯

针对靶底物(S)-苯基乳酸的腈水解酶的筛选：

苯乙醛羟腈 (S)-苯基乳酸

【000281】所实验的许多腈水解酶对于苯乙醛羟腈表现出活性。这些酶中的许多酶是两个相关序列家族的一部分，与对于苯基甘氨酸腈和氯扁桃腈表现出活性的那些酶不同。

【000282】酶的最适pH通常高于7(即pH8或9)，具有在这些水平将表现出的较高的对映选择性。许多酶在较高温度显示出较好的活性，尤其在38℃。温度对于酶的对映选择性的影响可以变化；在许多情况下，这一特性在较高温度下稍微低一些。当酶对于加入共溶剂具有耐受力时，尤其是10％(v/v)甲醇，加入这些共溶剂没有得到活性或对映选择性的改善。使用两相系统再次显示出是可行的。

【000283】表3.从苯乙醛羟腈的对映选择性水解的表征实验确定的最适条件的总结

SEQ ID NOS：	最适pH	最适温度℃	溶剂耐受性
SEQ ID NOS：	最适pH	最适温度℃	溶剂耐受性	103，104	7	55	10％MeOH，IPA
99，100	8	38	10％MeOH，70％己烷，甲苯	103，104	7	55	10％MeOH，IPA
99，100	8	38	10％MeOH，70％己烷，甲苯	183，184	9	38	10％MeOH，IPA，70％甲苯，己烷
173，174	5	38-55	25％MeOH，IPA，70％己烷，甲苯	183，184	9	38	10％MeOH，IPA，70％甲苯，己烷
173，174	5	38-55	25％MeOH，IPA，70％己烷，甲苯	213，214	7	38	10％MeOH，25％IPA，

			70％己烷，甲苯
			70％己烷，甲苯	61，62	7	38	10％MeOH，70％己烷，甲苯
205，206	8	38-55	10％MeOH，IPA，40％己烷，甲苯	61，62	7	38	10％MeOH，70％己烷，甲苯
205，206	8	38-55	10％MeOH，IPA，40％己烷，甲苯	207，208	8	38	10％MeOH，70％己烷
309，210	8	38	10％MeOH，40％己烷，甲苯	207，208	8	38	10％MeOH，70％己烷
309，210	8	38	10％MeOH，40％己烷，甲苯	195，196	8	38	10％MeOH，40％己烷，甲苯
43，44	9	38	10％MeOH，40％己烷	195，196	8	38	10％MeOH，40％己烷，甲苯
43，44	9	38	10％MeOH，40％己烷	161，162	9	38	25％MeOH，IPA，10％己烷，甲苯
175，176	6	38-55	10％MeOH，IPA，40％己烷	161，162	9	38	25％MeOH，IPA，10％己烷，甲苯
175，176	6	38-55	10％MeOH，IPA，40％己烷	293，294	6	38	10％MeOH，IPA，40％己烷

针对靶底物L-2-甲基苯基甘氨酸的腈水解酶的筛选

2-甲基苯基甘氨酸腈 L-2-甲基苯基甘氨酸

【000284】腈水解酶已经显示出对该底物的活性，优先产生了D-2-甲基苯基甘氨酸，而不是所需的L-2-甲基苯基甘氨酸。

相对于靶底物L-羟基正亮氨酸((S)-2-氨基-6-羟基己酸)的腈水解酶的筛选

5-羟基戊醛氨基腈 L-羟基正亮氨酸

【000285】已经分离了许多对2-氨基-6-羟基己烷腈显示出活性的腈水解酶。所有这些酶对于产物的L-异构体显示出对映选择性。

【000286】这些酶在较高的pH都显示出较高的对映选择性，并且与所实验的其它腈水解酶相比，对加入溶剂似乎更敏感。尽管活性是在存在有机溶剂的情况下检测的，但通常低于含水对照组的活性。再一次地，酶的活性受到酸性产物和醛起始物质的负面影响。

表4.从2-氨基-6-羟基己烷腈的对映选择性水解的表征实验所确定的最适条件的总结

SEQ ID NOS：	最适pH	最适温度℃	溶剂耐受性
SEQ ID NOS：	最适pH	最适温度℃	溶剂耐受性	217，218	9	38	10％MeOH
55，56	9	38	无	217，218	9	38	10％MeOH
55，56	9	38	无	187，188	9	38	10％MeOH
167，168	9	38	无	187，188	9	38	10％MeOH
167，168	9	38	无	221，222	9	38

【000287】在所确认的命中酶中，观察到的对于2-氨基-6-羟基己烷腈的水解活性范围

相对于靶底物4-甲基-D-亮氨酸和4-甲基-L-亮氨酸的腈水解酶的筛选

3，3-二甲基正丁醛氨基腈 4-甲基-L-亮氨酸

4-methyl-D-leucine

4-甲基-D-亮氨酸

【000288】用好几种腈水解酶进行2-氨基-4，4-二甲基戊烷腈的水解。在这些腈水解酶中，一些显示出将腈水解为相应酸的L-异构体，选择这些腈水解酶用于进一步表征。

表5.从2-氨基-4，4-二甲基戊烷腈的对映选择性水解的表征实验确定的最适条件的总结

SEQ ID NOS：	最适pH	最适温度℃	溶剂耐受性
SEQ ID NOS：	最适pH	最适温度℃	溶剂耐受性	103，104	7	23	25％MeOH，10％IPA
59，60	8	23	25％MeOH	103，104	7	23	25％MeOH，10％IPA
59，60	8	23	25％MeOH	221，222	6	38	25％MeOH，10％IPA

相对于靶底物(S)-环己基扁桃酸的腈水解酶的筛选

环己基扁桃腈 (S)-环己基扁桃酸

相对于靶底物扁桃腈的腈水解酶的筛选

扁桃腈 (R)-扁桃腈

【000289】在扁桃腈上也筛选腈水解酶收集物。腈水解酶活跃地水解苯基甘氨酸腈和氯扁桃腈。

确定对映选择性的酶促测定法

【000290】在确定手性α-羟基酸和α-氨基酸的光谱系统的设计中，开发并且使用了允许检测产物形成和对映选择性的基于酶的测定方法。

【000291】图6和7描述了基于乳酸脱氢酶(L-LDH和D-LDH)和氨基酸氧化酶(L-AA氧化酶(L-AA Oxid)和D-AA氧化酶(D-AA Oxid))检测α-羟基酸和α-氨基酸的光谱系统。选择这些酶的原因是，据报道它们具有相当广泛的底物范围，仍然保留了接近绝对对映特异性。

【000292】该系统的全部可行性已经被建立(表12)。既不是亲本羟基腈，也不是氨基腈被次生或检测酶代谢，因此起始材料没有受到干扰。未经过热处理的细胞裂解产物导致LDH系统的背景活性；然而，加热灭活消除了背景活性。细胞裂解产物似乎不干扰AA氧化酶测定。一个考虑因素是AA氧化酶的灭活，所述AA氧化酶通过残余的氰化物使用了FMN辅因子。然而，对照组研究表明，在2mM PGN(其能释放高达2mM HCN)灭活不是一个问题。该测定法适合于384孔(或可能更大密度)微量滴定平板。

表6.针对酸性产物的手性检测的次生酶鉴别总结

底物	从商业途径获得的具有底物活性的酶
底物	从商业途径获得的具有底物活性的酶	羟基酸产物：
L-乳酸	是	羟基酸产物：
L-乳酸	是	D-乳酸	是
L-苯基乳酸	是	D-乳酸	是
L-苯基乳酸	是	D-苯基乳酸	是
S-环己基扁桃酸¹	不适用	D-苯基乳酸	是
S-环己基扁桃酸¹	不适用	R-环己基扁桃酸¹	不适用
氨基酸产物：		R-环己基扁桃酸¹	不适用
氨基酸产物：		4-甲基-L-亮氨酸	是
4-甲基-L/D-亮氨酸	是(D-未知)	4-甲基-L-亮氨酸	是
4-甲基-L/D-亮氨酸	是(D-未知)	D-苯基丙氨酸	是
R-苯基甘氨酸	是	D-苯基丙氨酸	是
R-苯基甘氨酸	是	L-高苯基乳酸	是
D-高苯基乳酸	是	L-高苯基乳酸	是
D-高苯基乳酸	是	L-高苯基丙氨酸	是
D-高苯基丙氨酸	是	L-高苯基丙氨酸	是
D-高苯基丙氨酸	是	(S)-2-氨基-6-羟基己酸	是
(R/S)-2-氨基-6-羟基己酸	是(D-未知)	(S)-2-氨基-6-羟基己酸	是
(R/S)-2-氨基-6-羟基己酸	是(D-未知)	L-甲基苯基甘氨酸	1.不适用
D-甲基苯基甘氨酸	不适用	L-甲基苯基甘氨酸	1.不适用

该测定法不适用于环己基扁桃酸和2-甲基苯基甘氨酸，原因在于叔醇不受这一特定氧化作用的影响。

实施例5：标准测定条件

【000293】制备下述溶液：

●底物储备溶液：溶解在0.1M磷酸盐缓冲液(pH7)中的50mM的氨基腈底物，或溶解在0.1M醋酸钠缓冲液(pH5)中的50mM的羟腈底物

●酶储备溶液：将3.33ml的0.1M磷酸盐缓冲液(pH7)加到每一小瓶中，其中含有20mg的冻干细胞裂解产物(终浓度为6mg蛋白质/ml)

【000294】程序：

●将100μl的50mM底物溶液加到96孔平板的适当数量的孔中

●将80μl缓冲液加到每一孔中

●将20μl酶溶液加到每一孔中

●通过用20μl缓冲液代替酶溶液建立空白对照组

●在许多实验中也包括阴性对照组，该对照组由在180μl缓冲液中的20μl酶溶液组成。该对照组一旦已经建立，细胞裂解产物不干扰产物的检测，就不包括这些对照组。

【000295】反应取样：

●通过从每一孔中取出等分试样(15-50μl)，并且如下稀释样品，从而对反应进行取样：

●用于非手性HPLC分析的样品：

●苯基甘氨酸，2-氯扁桃酸和苯基乳酸：最初，用水稀释样品2倍，进一步用甲醇或乙腈稀释二倍(最终稀释：4倍)。发现对这些样品的8倍稀释导致改进的色谱分离

●(S)-2-氨基-6-羟基己酸，4-甲基亮氨酸，t-亮氨酸，2-甲基苯基甘氨酸和环己基扁桃酸：用甲醇或乙腈1∶1稀释样品。溶剂的选择基于HPLC分析方法中所用的溶剂。

【000296】·手性HPLC分析的样品：

●苯基甘氨酸，2-氯扁桃酸和苯基乳酸：对于非手性分析，正如上面所描述的那样；手性分析的样品最初稀释两倍，在该项目的随后阶段，以4倍稀释。

●(S)-2-氨基-6-羟基己酸，4-甲基亮氨酸，t-亮氨酸，2-甲基苯基甘氨酸：用甲醇或乙腈以1∶1稀释样品。

【000297】·对于每一实验，HPLC运行中包括产物的标准曲线。该曲线被描绘在X-Y轴上，根据这些曲线的斜率计算样品中产物的浓度。

【000298】·对于初步表征实验，如此取出样品，以致酶的活性处于线性相位；如此进行的目的是，可以确定参数对于反应速率影响的差异，而不是完全转化。取样时间表示在本文所包括的表中。

【000299】·使用表20和21中叙述的方法，通过HPLC分析样品。

实施例6：确定pH对于酶活性和对映选择性的影响

【000300】通过在不同的缓冲液范围内进行标准测定，研究pH对于酶活性和对映选择性的影响：

0.1M 柠檬酸磷酸pH5

0.1M 柠檬酸磷酸pH6

0.1M 磷酸钠pH7

0.1M Tris-HCl pH8

M Tris-HCl pH9

【000301】通过非手性和手性HPLC方法分析样品，其结果的实例表示在此处的表5，8和11中。

实施例7：确定温度对于酶活性和对映选择性的影响

【000302】温度对于活性和对映选择性的影响是通过在室温，38℃和55℃进行标准测定法来研究的。样品是通过非手性和手性HPLC方法来分析的，所得结果的实例表示在此处的表5，8和11中。

实施例8：确定溶剂对于酶活性和对映选择性的影响

【000303】作为两相系统，为了研究水混溶性和非水混溶性溶剂对于酶的影响，酶反应是在存在共溶剂的情况下进行的。在存在共溶剂的情况下，反应在标准条件下进行，用甲醇或异丙醇代替缓冲液。反应中的溶剂终浓度为0，10，25和40％(v/v)。

【000304】两相反应也在标准条件下进行，使用形成非水相的非水混溶性有机溶剂层。溶剂以如下水平被加入：水相的0％，10％，40％和70％(v/v)。来自这些反应的样品在真空下通过离心蒸发，并且再次溶解在甲醇或乙腈和水的50∶50混合物中。样品通过非手性和手性HPLC方法来分析。

实施例9：确定工艺成分对酶活性和对映选择性的影响

活性

【000305】通过在酶反应中加入单一成分，来建立工艺成分对于酶活性的影响。这些成分包括腈合成的起始材料、醛、氰化物和氨，以及三乙胺，三乙胺以催化量被加入到腈合成反应中。反应物的浓度用能够想到的可能的工艺条件进行选择，并且要适合酶测定法中所用的反应物水平。在一些情况下，醛和产物的溶解性相对较低；在这些情况下，将最高水平的溶解性加入到反应中，作为最高水平，该水平的10％作为较低值。

【000306】在标准条件下进行酶反应，加入一种或多种如下成分：苯甲醛、苯基甘氨酸、苯基乙醛、苯基乳酸、2-氯苯甲醛、2-氯扁桃酸、5-羟基戊醛、(S)-2-氨基-6-羟基己酸、4-甲基亮氨酸、KCN、三乙胺、NH₄Cl。在标准条件下进行对照组反应，不加入添加剂。通过非手性HPLC分析样品。

稳定性

【000307】酶对工艺条件的稳定性，是通过在存在单一反应成分的情况下将酶温育预定时间期间来监控，这在标准条件下测定酶活性之前进行。在这些实验中，将酶以1.2mg蛋白质/ml的浓度，在存在下述反应成分的每一种的情况下进行温育，所述下述反应成分：甲醇、苯甲醛、苯基甘氨酸、苯乙醛、苯基乳酸、2-氯苯甲醛、2-氯扁桃酸、5-羟基戊醛、(S)-2-氨基-6-羟基己酸、KCN、NH₄Cl。

测定条件：

【000308】在特定添加剂中温育0、2、6和24小时，取出50μl酶溶液，加入50μl的50mM底物储备溶液，在标准条件下测定酶活性。在加入底物后，在下述时间对反应进行取样：苯基甘氨酸腈：10分钟；苯乙醛羟腈：1小时；2-氯扁桃腈：2小时。通过仅仅在缓冲液中温育酶，进行对照组反应。使用非手性HPLC方法分析酶。

实施例10：推断命中酶的确认

当获得较高的转化时，在初步表征实验之后，在所确定的最适条件下，测定已经鉴别为推断命中的酶，以便评价它们的性能，尤其是对映选择性。用25mM底物对酶进行测定，pH和温度条件如本文中所包括的表中所记录的。除非另外说明，对于每一种酶所用的标准浓度为0.6mg/ml蛋白质。

实施例11：酶反应层析谱的选择实例

在这一部分中，所示为每一底物和产物组合的层析谱代表性实例，同时讨论了这些方法所遇到的一些挑战，以及如何解决这些挑战。

D-苯基甘氨酸

【000311】参见图8A-8E，非手性分析显示了在2.6分钟和3.2分钟洗脱的底物峰。这两个峰出现在所有含有较高浓度腈的样品中；第二个峰被认为是与腈相关的一个产物；该峰随着时间而降低，一旦已经发生了到产物的完全转化，该峰将不再出现。在图8A中所示的层析谱为空白对照组，仅仅含有腈和缓冲液；正如上面第1部分所解释的，用水和溶剂稀释所有样品。对于下面所讨论的所有样品，重复这一步骤。图8B中的层析谱中所示为酶反应样品，产物是在0.4分钟之时洗脱的。

【000312】在这些层析谱中，要注意的是在0.3分钟洗脱的小溶剂前峰。该峰进一步的表示在图8C所示的层析谱中给出，其中进行的是包括在缓冲液中的细胞裂解产物的阴性对照组。在0.4分钟，一个极小峰与产物进行共洗脱。在该方案的初始阶段，该峰被认为是有问题的，尽管对每一实验进行了适当的对照组，以便维持精确性。在这些实验中，将从细胞裂解产物得到的峰值面积从酶反应中的产物峰值面积中减去，尽管细胞裂解产物得到的峰值面积相对较小。通过进一步稀释样品以及在HPLC中使用较小注射体积，可以进一步改进该分析。在完成这些实验之后，该峰的干扰显示出达到了最小限度，正如图6C中举例说明的层析谱所示。

【000313】苯基甘氨酸的手性分析表示在图6D中的层析谱中，L-对映异构体在6分钟洗脱，D-对映异构体在11分钟洗脱。获得了这两个异构体之间的良好拆分。然而，所用的柱是非常敏感的，该柱的特征显示出随着时间有所变化，从而导致酸的洗脱时间的变化。尽管这通过使用适当的对照组和标准很容易检测，但在用D-对映异构体共洗脱腈峰中存在更大的问题(层析谱显示在图6E中)。该共洗脱的原因尚不清楚了；然而，通过使用适当的标准可以容易地检测出；此外，酸的UV光谱非常有特色，这使得使用该工具可以有效地检测共洗脱。该问题也可以通过调节流动相中的甲醇含量很容易地予以解决。

(R)-2-氯扁桃酸

【000314】氯扁桃酸和氯扁桃腈的HPLC分析，提供了许多与苯基甘氨酸样品相关的挑战。从图7A中所示的层析谱，该图仅在缓冲液中含有氯扁桃腈，显然在相同时间洗脱的峰作为图7B中所示层析谱中的产物，该峰表示扁桃酸标准。发现细胞溶解产物对该峰的贡献很小；对该峰的最大贡献似乎来自氯扁桃腈，或者来自分解产物或者来自腈制剂中的污染物。使用适当的对照组，峰值面积在整个实验过程中保持不变，发现将峰值面积从产物的峰值面积中减去得到了足够的精确度。已经进行了许多尝试来改变HPLC条件，以便在随后的时间洗脱产物峰；然而，这些尝试没有成功。图7C所示的层析谱，举例说明了产物的出现和底物峰的降低。

【000315】氯扁桃酸的手性分析几乎是没有问题的。在与(S)-对映异构体相同的时间洗脱小峰，表现出一些影响(在图7D所示的层析谱中，在2.4分钟处的峰)。然而，一旦已经建立，该峰在所有样品中以相同水平出现，包括空白对照组，并且该峰具有的UV光谱不同于氯扁桃酸峰的UV光谱，这被认为不是一个问题。因此，在每一样品中，从2.4分钟洗脱的峰值中减去该峰值。(R)-对映异构体在3分钟洗脱。

(S)-苯基乳酸

【000316】对苯基乳酸的分析，最初也为如关于苯基甘氨酸和2-氯扁桃酸的讨论中所述的相同问题所困扰。然而，在这种情况下，调节非手性HPLC方法中的溶剂浓度导致酸的保留时间有所改变，这样它不再与细胞溶解产物峰共洗脱。在这之后，或者非手性或者手性方法没有遇到问题。产物(1.9分钟)和羟腈底物(3.7分钟)的代表性非手性层析谱表示在图8A中，而酸的手性分析表示在图8B中，L-对映异构体在2分钟洗脱，相对的对映异构体在6分钟洗脱。

L-2-甲基苯基甘氨酸

【000317】甲基苯基甘氨酸的分析是不成问题的，尽管非手性方法不提供细胞溶解物峰和产物峰之间的基线分离，正如图9A中举例说明的层析谱中所示。在该项目的最后阶段，提供了该方法的氨基酸标准，从而缩短了该方法开发的时间。在图9A所示的层析谱中，氨基酸在0.7分钟洗脱，氨基腈在5.0分钟洗脱。达到了这两个初始峰之间的充分分离，以允许计算到产物的大约转化。

【000318】该化合物的手性分析提供了这两个对映异构体之间的良好分离，正如图9B中举例说明的层析谱中所示。L-对映异构体在5分钟洗脱，D-对映异构体在8分钟洗脱。

L-叔-亮氨酸

【000319】对于叔-亮氨酸的非手性分析，细胞溶解产物出现了该项目的产物组中最严重的问题。这是由于该氨基酸的低光谱特性所增加的问题，从而导致从细胞溶解产物中区分产物峰出现困难。通过图10A中所示的手性分析获得了单一产物对映异构体的良好分离。在初步筛选过程中，在某种样品中，在与L-氨基酸标准相同的时间洗脱小峰(参见图10B)，并且该小峰被认为是氨基酸。然而，对该方法进一步的开发以及使用适当的对照组确认该峰实际上是细胞溶解产物峰。

【000320】两个t-亮氨酸峰值之间洗脱的氨基腈，正如图10C中所示，该层析谱也在4.8分钟显示了细胞溶解产物峰。腈的UV光谱与氨基酸的UV光谱不同，这样可以更容易地从酸峰中区分出腈。

L-羟基正亮氨酸((S)-2-氨基-6-羟基己酸)

【000321】(S)-2-氨基-6-羟基己酸的手性分析是一致且可靠的。相反，非手性方法出现了许多问题，主要是腈和酸峰之间没有分离。越接近该项目的后半部分，开发了一种方法，并且成功地用于确认活性。在此之前，使用手性方法进行了许多分析；绘制了产物的标准曲线，以便量化该反应。图11A所示为(S)-2-氨基-6-羟基己酸的代表性层析谱，(S)-2-氨基-6-羟基己酸在6分钟洗脱。该方法没有对氨基腈进行检测。

【000322】单一(S)-2-氨基-6-羟基己酸对映异构体的分离如图11B所示。首先在2分钟洗脱L-对映异构体，随后在3分钟洗脱D-对映异构体。在图11C中，表示了酶样品；需要轻微关注的唯一区域是洗脱L-对映异构体之前的阴性峰。然而，它似乎对于该对映异构体的洗脱没有显著性干扰；该方法的开发没有消除该负峰。

4-甲基-D-亮氨酸和4-甲基-L-亮氨酸

【000323】对于4-甲基亮氨酸的检测，手性HPLC方法再次证明更加可靠。该方法对于化合物的低活性和低敏感性的组合，导致使用非手性HPLC检测存在困难。图12A所示为氨基酸的2.5mM标准，峰高度为大约40mAU；这显著低于对于芳族化合物的检测值。图12B中的层析谱显示了酶样品，其中转化是使用手性HPLC方法检测的；尽管不清楚，但仍然显示出4-甲基亮氨酸峰在2.7分钟洗脱，峰高和峰面积都非常低。该峰没有出现在通过手性HPLC分析是负值的样品中。

【000324】4-甲基-L-亮氨酸和4-甲基-D-亮氨酸的手性分析没有表现出任何问题。L-对映异构体在5分钟洗脱，D-对映异构体在7分钟洗脱，尽管如(i)部分中对于苯基甘氨酸所做的描述，作为对柱的敏感性的结果，没有发生一些峰移动。在图14C-14D中所示的层析谱中，给出了这些氨基酸的分离；第一个样品表示产生了两种对映异构体的酶，在第二种样品中，酶优先水解L-对映异构体，形成了少量的D-氨基酸。

(S)-环己基扁桃酸

【000325】所示为环己基扁桃酸(图13A)的标准色谱图和相应的腈(图13B)。酸在1.3分钟洗脱，而在2.5分钟观察到了羟腈。在2.1分钟洗脱的峰被认为是环己基苯基甲酮，正如在该点上通过洗脱酮标准所示。

实施例12：生物催化的酶文库方法：开发用于对映选择性产生羧酸衍生物的腈水解酶平台

【000326】生物催化过程可以在转化中提供独特的优势，这正在挑战通过传统化学方法实现转化(Wong，C.-H.；Whitesides，G.M.Enzymes in Synthetic OrganicChemistry；Pergamon，New York，1994；Drauz，K.；Waldmann，H.，Roberts，S.M.编著.Enzyme Catalysis in Organic Synthesis；VCH：Weinheim，Germany，第二版，2002)。腈水解酶(EC3.5.5.1)促进了有机腈直接缓和水解转化为相应的羧酸(Kobayashi，M.；Shimizu，S.FEMS Microbiol.Lett.1994，120，217；Bunch，A.W.In Biotechnology；Rehm，H.-J.；Reed，G.；Puhler，A.；Stadler，P.，编著；Wiley-VCH：Weinheim，Germany，8a卷，第六章，277-324页；Wieser，M.；Nagasawa，T.In stereoselective Biocatalysis；Patel，R.N.，编著；Marcel Dekker：New York，2000，第17章，461-486章。)到目前为止已经表征和报道了不到15种微生物来源的腈水解酶。(Harper，D.B.Int.J.Biochem.1985，17，677；Levy-Schil，S.；Soubrier，F.；Crutz-Le Coq，A.M.；Faucher，D.；Crouzet，J.；Petre，D.Gene 1995，161，15；Yu，F.1999，美国专利5872000；Ress-Loschke，M.；Friedrich，T.；Hauer，B.；Mattes，R.；Engels，D.PCT申请WO00/23577，2000年4月。)。先前已经开发了好几种腈水解酶用于制备单一对映异构体羧酸，但是在开发作为可行的合成工具的腈水解酶中所取得的进步是很小的。该申请描述了大量和不同种类的腈水解酶的发明，此处举例说明了该腈水解酶文库的用途，用于鉴别能催化有效的对映选择性、产生有价值的羟基羧酸衍生物的酶。

【000327】在获得最多样化范围的在自然界能发现的酶的尝试中，通过直接从环境样品中提取DNA，我们创立了大的基因组文库，其中环境样品是从业已从变化的全球生境中收集而来。(对于这些方法的描述，参见：Short，J.M.Nature Biotech.1997，15，1322；Handelsman，J.；Rondon，M.J.；Brady，S.F.；Clardy，J.；Goodman，R.M.Chem.Biol.1998，5，R245；Henne，A.；Daniel，R.；Schmitz，R.A.；Gottschalk，G.Appl.Environ.Microbiol.1999，65，3901.)。我们已经建立了多种通过筛选未培养的DNA的混和群体而用于鉴别新颖活性的方法。(Robertson，D.E.；Mathur，E.J.；Swanson，R.V.；Marrs，B.L.；Short，J.M.SIM News 1996，46，3；Short，J.M.美国专利5,958,672，1999；Short J.M.美国专利6,030,779，2000.)通过该方法，接近200种新颖腈水解酶已经被发现和表征。(对于该研究的简单描述，参见下面的材料和方法部分(Materials and Methods section))所有腈水解酶被认为在序列水平是独特的，并且显示出拥有保守性催化三联体Glu-Lys-Cys，这是该酶类别所特有的。(Pace，H.；Brenner，C.Genome Biology 2001，2，0001.1-0001.9。)在我们的文库中的每一腈水解酶被过量表达，保存为冻干的细胞溶解产物，以便有助于加速该文库对特定生物催化功能的评价。

【000328】最初研究的重点在于腈水解酶的效力，该腈水解酶用于产生通过羟腈1的水解形成的α-羟基酸2。羟腈被很好地证明，容易在碱性条件下通过HCN的可逆损失发生外消旋作用。(Inagaki，M.；Hiratake，J.；Nishioka，T.；Oda，J.；J.Org.Chem 1992，57，5643.(b)van Eikeren，P.美国专利5,241,087，1993。)因此，动态动力学拆分过程是可能的，从而酶选择性地仅水解对映异构体1，以100％理论产量和高水平地对映异构体纯度提供了2。

【000329】该类型的一个重要应用涉及商业性从扁桃腈产生(R)-扁桃酸。(Ress-Loschke，M.；Friedrich，T.；Hauer，B.；Mattes，R.；Engels，D.PCT申请WO00/23577，2000年4月；Yamamoto，K.；Oishi，K.；Fujimatsu，I.；Komatsu，K.Appl.Environ.Microbiol.1991，57，3028；Endo，T.；Tamura，K.美国专利5,296,373，1994年3月.)作为中间产物和拆解剂，扁桃酸和衍生物在用于产生许多药物和农业产品中存在广泛的用途。(Coppola，G.M.；Schuster，H.F.Chiral α-Hydroxy Acids inEnantioselective Syntheis(对映选择性合成中的手性α-羟基酸)；Wiley-VCH：Weinheim，Germany：1997.)然而，来自培养的生物体的鲜为人知的腈水解酶还没有被发现用于类似底物的有效和选择性水解。

【000330】以在扁桃腈(3a，Ar＝苯基)水解为扁桃酸中的活性和对映选择性对腈水解酶文库进行筛选。

初步结果显示，27种酶提供了＞90％ee的扁桃酸。一种酶，SEQ ID NO：385，386，被进行了更详细的研究，并且被发现对于水解扁桃腈非常活跃。在使用处于10％MeOH(v/v)0.1M磷酸缓冲液中的25mM 3a和0.12mg/mL酶，在37℃和pH8的标准条件下，在10分钟内，定量地形成了(R)-扁桃酸，具有98％ee。为了确认合成效用，使用1.0g 3a(50mM)和9mg腈水解酶(0.06mg/mL腈水解酶I)进行反应；3小时后，以高产量(0.93g，86％)分离了(R)-扁桃酸，又一次地，具有98％ee。

(a)反应是在标准条件下进行的(参见正文)。到4的完全转化的反应时间为1-3小时。在pH9和5mM底物浓度下，进行项目8-9。(b)在5分钟转化时间点测量比活性，并且被表示为μmol mg^-1 min^-1。(c)TOF＝转换频率，mol产物/mol催化剂/秒。(d)通过手性HPLC分析确定对映选择性。分离羟基酸，在所有情况下绝对构型被确定为(R)。

【000331】接着研究SEQ ID NO：385，386的底物范围。正如在表13中所示，可以通过该方法制备广泛范围的扁桃酸衍生物，以及芳族和杂芳族类似物(4)。SEQ IDNO：385，386在扁桃腈衍生物的邻位-、间位-、对位-位置可以有芳香环取代基，并且产生了具有高选择性的类型4产物。在活性位点也容纳了其它大的芳香基团如1-萘基和2-萘基，再次提供了具有高选择性的酸4(表13，项目8-9)。最后，使用该过程容易地制备了扁桃酸的3-吡啶基和3-噻吩基类似物(表13，项目10-11)。这是最先报导的腈水解酶的论证，提供了一系列类型4的扁桃酸衍生物和杂芳族类似物。特别值得注目的是，在更空间位阻的邻位取代和1-萘基衍生物上的高活性。

【000332】我们接着研究了通过相应羟腈5的水解制备芳基乳酸衍生物6。苯基乳酸和衍生物作为制备许多生物活性化合物的通用结构单元。(Coppola，G.M.；Schuster，H.F.Chiral α-Hydroxy Acids in Enantioselective Synthesis(对映选择性合成中的手性α-羟基酸)；Wiley-VCH：Weinheim，Germany：1997.)一旦针对亲本羟腈5a(Ar＝苯基)筛选了我们的腈水解酶文库，我们发现了几种酶，提供了具有高对映体过量的6a。对一种酶，SEQ ID NO：103，104，进行了进一步的表征。在最优化之后，SEQ ID NO：103，104，显示出提供了在6小时内具有完全转化(50mM)和非常高的对映选择性(98％ee)的(S)-苯基乳酸(6a)。先前报道的5到6的生物催化转化的最高对映选择性是75％ee，是通过使用假单胞菌菌株的全细胞转化获得的。(Hashimoto，Y；Kobayashi，E.；Endo，T.；Nishiyama，M.；Horinouchi，S.Biosci.Biotech.Biochem.1996，60，1279.)

表7.腈水解酶II催化产生芳基乳酸衍生物和类似物6^a

项目	6中的Ar	比活性^b	TOF^c	％ee^d
项目	6中的Ar	比活性^b	TOF^c	％ee^d	1	C₆H₅	25	16	99
2	2-Me-C₆H₅	160	100	95	1	C₆H₅	25	16	99
2	2-Me-C₆H₅	160	100	95	3	2-Br-C₆H₅	121	76	95
4	2-F-C₆H₅	155	97	91	3	2-Br-C₆H₅	121	76	95
4	2-F-C₆H₅	155	97	91	5	3-Me-C₆H₅	21	13	95
6	3-F-C₆H₅	22	14	99	5	3-Me-C₆H₅	21	13	95
6	3-F-C₆H₅	22	14	99	7	1-萘基	64	40	96
8	2-吡啶基	10.5	6.6	99	7	1-萘基	64	40	96
8	2-吡啶基	10.5	6.6	99	9	3-吡啶基	11.6	7.2	97
10	2-噻吩基	3.4	2.1	96	9	3-吡啶基	11.6	7.2	97
10	2-噻吩基	3.4	2.1	96	11	3-噻吩基	2.3	1.4	97

(a)除了使用了0.016mg/mL的腈水解酶之外，反应条件如表13所示。在6小时内观察到了到6的完全转化。(b)-(d)参见表13。苯基乳酸的绝对构型被确定为(S)，项目2-11基于相同手性HPLC峰洗脱顺序而指定。

【000333】邻位和间位取代基显示出可以被腈水解酶II很好的耐受，相对于亲本底物5a，邻位取代的衍生物可以惊人地以较高比率被转化。新颖杂芳族衍生物，如2-吡啶基、3-吡啶基、2-噻吩基和3-噻吩基乳酸，以高转化和对映选择性被制备(项目8-11)。未预料到地，对位取代基大大地降低了这些反应的速率，在这些条件下完全转化需要两周时间。

【00334】我们检验的最终转化是容易获得的前手性底物3-羟基戊二酰基腈(7)的去对称化(Johnson，F.；Panella，J.P.；Carlson，A.A.J.Org.Chem.1962，27，2241)，以提供羟基酸(R)-8，一旦被酯化为(R)-9，是在生产降低胆固醇的药物LIPITOR^TM中使用的中间产物。先前报道在该过程中使用酶的尝试没有成功，是以低选择性(最高：22％ee)和不期望的(S)-构型产生8的。(Crosby，J.A.；Parratt，J.S.；Turner，N.J.Tetrahedron：Asymmetry 1992，3，1547；Beard，T.；Cohen，M.A.；Parratt，J.S.；Turner，N.J.Tetrahedron：Asymmetry 1993，4，1085；Kakeya，H.；Sakai，N.；Sano，A.；Yokoyama，M.；Sugai，T.；Ohta，H.Chem.Lett.1991，1823.)

【000335】筛选腈水解酶文库，发现并且分离了独特的酶，该酶提供了所要求的具有高转化率(＞95％)和＞90％ee的产物(R)-8。使用(R)-特异性腈水解酶中的一种，在1.0g等级上进行该过程(240mM 7，30mg酶，22℃，pH7)，在22小时后，以98％的产率和95％ee分离出(R)-8。有趣的是，相同的筛选程序也鉴别了以90-98％ee提供另外一种的对映异构体(S)-8的腈水解酶。因此，生物多样性的广泛筛选发现了以高对映选择性提供中间产物8的任一对映异构体的酶。我们发明了能提供(R)-8的第一种酶，强调了能使用大的和多样化的腈水解酶文库的这一优点。

【000336】通过探究我们的环境基因组文库，该文库是从未培养的DNA产生的，我们已经发明了大量新颖腈水解酶。该研究已经揭示了能提供扁桃酸和芳基乳酸衍生物的特异性腈水解酶，以及以高产率和对映体过量提供4-氰基-3-羟基丁酸的任一种对映异构体的腈水解酶。

程序和分析数据：

【000337】羟基戊二酰基腈是从TCI America购买的，并且是刚刚购买到就使用的。用于制备芳基乳酸标准的氨基酸是从PepTech(Cambridge，MA)购买的。(R)-3-羟基-4-氰基丁酸是从Gateway Chemical Technology(St.Louis，MO)得到的。(R)-和(S)-扁桃酸以及(R)-和(S)-苯基乳酸标准是从Sigma Aldrich购买的。所有其它的试剂是从Sigma Aldrich购买的，并且在使用时没有经过进一步的纯化。从Aldrich购买的硅胶(Silica Gel)，70-230mesh(目)，60被用于色谱纯化。所有¹H NMRs和¹³C NMRs是在Bruker model AM-500仪器上运行的，设置为室温，对¹H和¹³C分别为500MHz和125MHz。质谱分析和单位质量分辨率是通过流动注射分析(FIA)实现的，使用了Perkin-Elmer Sciex API-4000 TURBOION^TM SprayLC/MS/MS系统。LC流量是通过Schimadzu LC-10Advp泵提供的，具有0.05％醋酸和MeOH。注射是通过Valco注射阀实现的。HPLC分析是在具有Astec’sChirobiotic R柱(100×4.6mm，目录编号(cat no.)13022或150×4.6mm，目录编号(catno.)13023)或Daicel’s Chiralcel OD柱(50X4.6mm，目录编号(cat no.)14022)的Agilent 1100 HPLC上进行的，DAD探测器设置为210、220、230和250nm。对于比旋光，使用Perkin Model 341 Polarimeter，设置为589nm，钠灯，癌室温下，使用100mm路径长度的池。比旋光的浓度以克/100mL溶剂表示。微生物技术根据已公开的规程执行。(Sambrook，J.Fritsch，EF，Maniatis，T.(1989)Molecular Cloning：A Laboratory Manual(第二版)，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Plainview NY.)分离了羟基乙酸产物，通过与文献中除了(-)-3-吡啶基羟基乙酸之外的构型已定化合物的旋光数据的比较，确定了所有情况下的绝对构型为(R)，根据我们的理解该化合物(-)-3-吡啶基羟基乙酸不是单一对映异构体。(对于扁桃酸、2-氯扁桃酸、2-甲基扁桃酸、3-氯扁桃酸、3-溴扁桃酸和4-氟扁桃酸参见Hoover，J.R.E.；Dunn，G.L.；Jakas，D.R.；Lam，L.L.；Taggart，J.J.；Guarini，J.R.；Philips，L.J.Med.Chem.1974，17(1)，34-41；对于2-溴扁桃酸参见Collet，A.；Jacques，J.；Bull.Soc.Chem.Fr.1973，12，3330-3331；对于1-和2-萘基羟基乙酸参见Takahashi，I；Y.Aoyagi，I.Nakamura，Kitagawa，A.，Matsumoto，K.，Kitajima，H.Isa，K.Odashima，K.Koga，K.Heterocycles 1999，51(6)，1371-88；对于3-噻吩基羟基乙酸参见Gronowitz，S.Ark.Kemi，1957，11，519-525.)

【000338】对于芳基乳酸产物，通过与文献中的旋光数据的比较，建立了苯基乳酸的绝对构型为(S)，对于所有其它苯基乳酸产物，使用手性HPLC基于洗脱次序预测绝对构型。通过衍生为(R)-(-)-甲基(3-O-[苯甲酰]-4-氰基)-丁酸酯，和与文献中的构型已定的化合物的旋光数据的比较，建立3-羟基-4-氰基-丁酸的绝对构型。(3.Beard，T.Cohen，M.A.Parratt，J.S.Turner，N.J.Tetrahedron：Asymm.4(6)，1993，1085-1104.)

腈水解酶发现和表征方法：

1.腈水解酶选择

【000339】在腈底物上针对腈水解酶选择进行大肠杆菌(Escherichia coli)筛选宿主菌株，SEL700的最优化。用卡那霉素抗性环境DNA文库对在10mM MgSO₄中的Abs600_nm＝1，SEL700筛选宿主的重悬浮液进行感染，在37℃感染45分钟，这样可以获得文库的完全筛选覆盖度。被感染的细胞，现在指示为卡那霉素抗性，被平板于卡那霉素LB平板上，允许在30℃生长过夜。最小滴定量平板也被用来确定感染效率。第二天早晨用10mM MgSO₄集中、洗涤和重悬浮细胞。将转化的克隆接种在M9培养基中(不含氮)，含有10mM腈水解酶底物。M9培养基包括1XM9盐(省略NH₄Cl)、0.1mM CaCl₂、1mM MgSO₄、0.2％葡萄糖和大约10mM腈选择底物。然后于30℃温育，以200rpm振荡选择培养物，时间直达五周。通过生长，鉴别阳性腈水解酶培养物，这是由于阳性克隆具有水解腈底物的能力。通过对生长的选择培养物划线接种，鉴别阳性克隆，随后在相同的合成培养基中，再次培养分离的群落。然后分离来自任何表现出再生长的阳性传代培养物的DNA，并且对其测序，以确认发现了腈水解酶基因，以及确定该基因的独特性质。

2.腈水解酶的生物淘选

【000340】传统过滤提升杂交筛选规程(tranditional filter lift hybridization screeningprotocols)限于具有大约10⁶-10⁷个成员的文库。尝试筛选一个文库，将需要大约5000个过滤提升。因此，已经开发了溶液相和其它生物淘选格式，用于基于超高通量顺序的筛选，允许快速筛选含有高达10⁸个成员的环境文库。在溶液格式中，在促进杂交的条件下，将来自大量数目的文库克隆的DNA与相关标记的分子混和。然后，从溶液中，去除标记克隆和杂交DNA，并且在一定严格水平下洗涤，以去除与探针不具有序列同一性的克隆。然后，洗脱且回收杂交DNA。对相关克隆进行测序和克隆，以提供相关酶活性。对于相关序列，该方法已经被证明每一轮获得了高达1000倍的富集。

3.高通量腈水解酶活性测定

【000341】用在0.25mL测定溶液中的25mM(～3mg/mL)底物、0.1mg/mL腈水解酶进行活性测定。测定溶液包括0.1M磷酸钠缓冲液中的0-10％(v/v)MeOH，pH7-9，温度为37℃或22℃。除非另外说明，在5分钟转化时间点，测量比活性，单位表示为μmol mg^-1 min^-1。通过将酶产物浓度与外消旋酸性产物的标准曲线比较，用高通量HPLC分析确定对映体过量和转化率。产物的分析条件列于下述表中。

分析方法：

	酸性产物	柱	液相色谱方法	对映异构体保留时间(分钟)
	酸性产物	柱	液相色谱方法	对映异构体保留时间(分钟)	1.1	扁桃酸	Chirabiotic R100X4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.4(S)；2.9(R)
1.2	2-Cl-扁桃酸	Chirabiotic R	20％[0.5％AcOH]，	2.3(S)；	1.1	扁桃酸	Chirabiotic R100X4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.4(S)；2.9(R)

		100×4.6mm	80％CH₃CN1ml/分钟	2.9(R)
		100×4.6mm	80％CH₃CN1ml/分钟	2.9(R)	1.3	2-溴-扁桃酸	Chirabiotic R100×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.8；4.0
1.4	2-CH₃-扁桃酸	Chirabiotic R100×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	3.1；3.8	1.3	2-溴-扁桃酸	Chirabiotic R100×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.8；4.0
1.4	2-CH₃-扁桃酸	Chirabiotic R100×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	3.1；3.8	1.5	3-Cl-扁桃酸	Chirabiotic R100×4.6mm	10％[0.5％AcOH]，90％CH₃CN1ml/分钟	3.1；3.8
1.6	3-溴-扁桃酸	Chirabiotic R100×4.6mm	10％[0.5％AcOH]，90％CH₃CN1ml/分钟	3.3；3.9	1.5	3-Cl-扁桃酸	Chirabiotic R100×4.6mm	10％[0.5％AcOH]，90％CH₃CN1ml/分钟	3.1；3.8
1.6	3-溴-扁桃酸	Chirabiotic R100×4.6mm	10％[0.5％AcOH]，90％CH₃CN1ml/分钟	3.3；3.9	1.7	4-氟-扁桃酸	Chirabiotic R100×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	3.7；4.8
1.8	1-萘基羟基乙酸	Chirabiotic R100×4.6mm	4％[0.5％AcOH]，96％CH₃CN1ml/分钟	3.1；3.7	1.7	4-氟-扁桃酸	Chirabiotic R100×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	3.7；4.8
1.8	1-萘基羟基乙酸	Chirabiotic R100×4.6mm	4％[0.5％AcOH]，96％CH₃CN1ml/分钟	3.1；3.7	1.9	2-萘基羟基乙酸	Chirabiotic R100×4.6mm	4％[0.5％AcOH]，96％CH₃CN1ml/分钟	3.7；4.7
1.10	3-吡啶基羟基乙酸	Chirabiotic R100×4.6mm	5％[0.5％AcOH]，65％H₂O，30％CH₃CN2ml/分钟	4.4；5.5	1.9	2-萘基羟基乙酸	Chirabiotic R100×4.6mm	4％[0.5％AcOH]，96％CH₃CN1ml/分钟	3.7；4.7
1.10	3-吡啶基羟基乙酸	Chirabiotic R100×4.6mm	5％[0.5％AcOH]，65％H₂O，30％CH₃CN2ml/分钟	4.4；5.5	1.11	3-噻吩基羟基乙酸	Chirabiotic R100×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN2ml/分钟	1.4；2.5
2.1	苯基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.8(S)；4.0(R)	1.11	3-噻吩基羟基乙酸	Chirabiotic R100×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN2ml/分钟	1.4；2.5
2.1	苯基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.8(S)；4.0(R)	2.2	2-甲基苯基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.5；2.8
2.3	2-溴苯基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.8；3.2	2.2	2-甲基苯基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.5；2.8

2.4	2-氟苯基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.6；2.9
2.4	2-氟苯基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.6；2.9	2.5	3-甲基苯基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.4；3.2
2.6	3-氟苯基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.8；3.6	2.5	3-甲基苯基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.4；3.2
2.6	3-氟苯基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.8；3.6	2.7	1-萘基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.7；3.1
2.8	2-吡啶基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.5；2.9	2.7	1-萘基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.7；3.1
2.8	2-吡啶基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.5；2.9	2.9	3-吡啶基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.9；3.6
2.10	2-噻吩基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	3.6；4.6	2.9	3-吡啶基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	2.9；3.6
2.10	2-噻吩基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	3.6；4.6	2.11	3-噻吩基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	3.5；4.6
	甲基(3-O[苯甲酰]-4-氰基)-丁酸酯	Daicel OD50×4.6mm	5％异丙醇，95％己烷1ml/分钟	4.5(R)；5.4(S)	2.11	3-噻吩基乳酸	Chirabiotic R150×4.6mm	20％[0.5％AcOH]，80％CH₃CN1ml/分钟	3.5；4.6

羟腈(底物)合成：

【000342】扁桃腈合成方法A：将丙酮合氰化氢(685μl，7.5mmol)，醛(5mmol)和催化性二异丙基乙胺(DIEA)(13μl，0.075mmol)在0℃混和。将反应物在冰上搅拌45分钟。为了推进向产物的平衡，在真空中去除丙酮。随后，用H₂SO₄(3μL)酸化粗反应物，并且于-20℃保存。用薄层层析(TLC)监控反应进展(3∶1己烷/乙酸乙酯(EtOAc))。

【000343】扁桃酸合成方法B：将醛(5mmol)和乙酸(315μL，5.5mmol)加入到溶解在MeOH(1mL)中的KCN(358mg，5.5mmol)溶液中，温度0℃。在冰上搅拌1小时后，在真空中去除MeOH，用EtOAc和H₂O分配粗反应物。保留有机组分，真空浓缩。用TLC分析监控反应进展(3∶1己烷/EtOAc)。

【000344】芳基乙醛羟腈：，在氮(克)氛围下，将芳基乳酸(50mmol)溶解在放置在双颈500ml圆底烧瓶中的50ml无水四氢呋喃(THF)中。等到该溶液冷却到0℃，在剧烈混和下，缓慢地加入105mmol叔己基氯硼烷-二甲基硫醚(thexylchloroborane-dimethyl sulfide)(2.55M，在二氯甲烷中)。允许反应继续到过夜。加入过量乙酸(10ml)猝灭反应，随后通过加入10ml水以酸化反应物。在室温下搅拌1小时后，真空中去除溶剂，将残余物溶解在100ml水中，用200mlEtOAc提取。在硫酸钠上干燥EtOAc层，过滤，然后在真空中浓缩。随后，将60mmol KCN加入到残余物中，接着加入100ml甲醇。然后将溶液冷却到0℃，加入乙酸(60mmol)。在所有KCN溶解后，将反应物搅拌1-2小时。在真空中去除溶剂，将残余物溶解在100ml水和200ml EtOAc中。用EtOAc将水层再次提取一次。混和EtOAc提取物，用饱和盐水洗涤，并且在硫酸钠上干燥，过滤，然后在真空中干燥，以得到粗羟腈产物。在必要的时候，通过二氧化硅-凝胶柱(己烷/EtOAc)纯化羟腈。

【000345】2-氯扁桃腈：¹HNMR(CDCl₃，500MHz)δ7.69(m，1H)，7.41(m，1H)，7.36(m，2H)，5.84(s，1H)，3.07(br，1H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ132.89，132.73，131.22，130.19，128.48，127.84，118.24，60.87。对于[C₈H₆ClNO]167.01，用质谱计算得到实测值167.9(LC-MS+)。

【000346】2-溴扁桃腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ7.72(d，1H，J＝6.58)，7.62(d，1H，J＝8.35)，7.43(t，1H，J＝8.42)，7.30(t，1H，J＝7.00)，5.85(s，1H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ134.550，133.584，131.564，128.819，128.535，122.565，118.153，63.379。

【000347】2-甲基扁桃腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ：7.60(d，1H，J＝7.4)，7.23-7.35(m，3H)，5.66(s，1H)，2.44(s，3H)。¹³C NMR(CDCl₃，298K，125MHz)δ：136.425，133.415，131.450，130.147，127.204，126.894，118.952，18.916。对于[C₉H₉NO]147.07，用质谱计算得到147.2(ESI+)。

【000348】3-氯扁桃腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ7.55(s，1H)，7.43-7.37(m，3H)，5.54(s，1H)。¹³C NMR(CDCl3，125MHz)δ137.183，135.480，130.718，130.303，127.047，124.891，118.395，63.156。对于[C₈H₆ClNO]167.01，用质谱(MS)计算得到167.9(LC-MS+)。

【000349】3-溴扁桃腈：¹HNMR(CDCl₃，500MHz)δ7.69(s，1H)，7.56(d，J＝6.2Hz，1H)，7.45(d，J＝5.5Hz，1H)，7.32(t，J＝6.4.Hz，1H)，5.53(s，1H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ137.376，133.201，130.934，129.208，125.359，123.380，118.458，63.006。对于[C₈H₆BrNO]212.0，用质谱计算得到211.9(LC-MS+)。

【000350】4-氟扁桃腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ5.54(s，1H)，7.13(m，2H)，7.51-7.53(m，2H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ63.02，116.44，118.97，128.90，131.54，132.51，162.575。

【000351】4-氯扁桃腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ7.47(d，J＝7.0Hz，2H)，7.42(d，J＝7.0Hz，2H)，5.53(s，1H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ136.209，133.845，129.647，128.232，118.630，63.154。对于[C₈H₆CINO]167.01，用质谱计算得到167.9(LC-MS+)。

【000352】1-萘基羟腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ8.14(d，1H，J＝8.5)，7.92(t，2H，J＝6.1)，7.82(d，1H，J＝5.7)，7.62(t，1H，J＝6.1)，7.56(t，1H，J＝6.1)，7.50(t，1H，J＝6.1)，6.18(s，1H)；¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ137.0，135.7，134.2，131.1，129.2，127.5，126.7，125.8，125.3，123.1，119.0，62.4；对于[C₁₂H₉O]183.21，用质谱计算得到183.2(ESI+)。

【000353】2-萘基羟腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ8.03(s，1H)，7.92(d，1H，J＝8.6)，7.87-7.91(m，2H)，7.61(dd，1H，J＝6.7，1.2)，7.55-7.60(m，2H)，5.72(s，1H)；¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ134.9，133.9，132.7，129.6，128.6，128.0，127.4，127.2，126.4，123.9，118.9，64.1；对于[C₁₂H₉O]183.21，用质谱计算得到183.2(ESI+，电喷雾电离质谱+)。

【000354】3-吡啶基羟腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ：8.62(d，1H，J＝1.8)，8.57(d，1H，J＝5.1)，7.94(d，1H，J＝8.1)，7.41(dd，1H，J＝8.1，5.1)，5.64(s，1H)；¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ149.921，147.355，135.412，133.044，124.443，118.980，61.085。对于[C₇H₆N₂O]134.05，用质谱计算得到135.2(ESI+)。

【000355】3-噻吩基羟腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ7.45(d，J＝2.2Hz 1H)，7.56(dd，J＝6.2Hz，1H)，7.45(d，J＝5.5Hz，1H)，7.32(t，J＝6.4.Hz，1H)，5.53(s，1H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ137.376，133.201，130.934，129.208，125.359，123.380，118.458，63.006。对于[C₆H₅NOS]139.01，用质谱计算得到139.9(LC-MS+)。

【000356】苯基乙醛羟腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ7.34(m，5H)，4.64(t，J＝6.75Hz，1H)，3.11(d，J＝6.75Hz，2H)，2.75(br，1H)：¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ133.96，129.91，129.16，128.08，119.47，62.33，41.55。

【000357】2-甲基苯基乙醛羟腈：¹HNMR(CDCl₃，500MHz)δ7.11(m，4H)，4.61(t，J＝6.62Hz，1H)，3.12(d，J＝6.62Hz，2H)，2.14(s，3H)：¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ136.94，136.47，132.57，130.48，127.61，125.75，120.11，62.95，44.73对于[C₁₀H₁₁NO]：161.08，用质谱计算得到162.2(M+Na，ESI+)

【000358】2-溴苯基乙醛羟腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ7.20(m，4H)，4.78(t，J＝6.5Hz，1H)，3.26(d，J＝6.5Hz，2H)。¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)δ133.93，132.82，131.72，129.21，128.12，124.86，119.41，63.02，44.89。

【000359】2-氟苯基乙醛羟腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ7.2(m，2H)，7.02(m，2H)，4.50(dd，J＝4.62Hz，J＝7.88Hz，1H)，3.23(dd，J＝4.62Hz，1J＝14.12Hz，1H)，2.97(dd，7.88Hz，14.12Hz，1H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ132.18，131.52，129.66，129.03，128.07，124.05，115.8，63.02，44.79。对于[C₉H₈FNO]165.06，用质谱计算得到164.2(ESI+)。

【000360】3-甲基苯基乙醛羟腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ7.18(m，1H)，7.02(m，3H)，4.54(dd，J＝4.62Hz，J＝8Hz，1H)，3.06(dd，J＝4.62Hz，J＝14.38Hz，1H)，2.83(dd，J＝8Hz，J＝14.38Hz，1H)，2.36(s，3H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ176.25，138.18，136.0，130.97，128.93，127.68，126.58，76.42，34.29，37.69。对于[C₁₀H₁₂O₃]180.08，用质谱计算得到180.0(ESI+)。

【000361】3-氟苯基乙醛羟腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ7.18(m，2H)，6.95(m，2H)，4.44(dd，1H)，3.11(dd，1H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ130.40，125.53，124.85，116.92，114.87，114.50，119.77，61.97，41.27。

【000362】1-萘基乙醛羟腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ8.07(m，1H)，7.86(m，1H)，7.74(m，1H)，7.41(m，4H)，4.20(t，J＝7Hz，1H)，3.33(d，J＝6.8Hz，2H)¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ177.7，140.31，129.74，129.24，128.92，128.26，127.84，125.63，124.53，124.05，123.42，70.58，38.0对于[C₁₃H₁₁NO]197.08，用质谱计算得到197.1(ESI+)。

【000363】2-吡啶基乙醛羟腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ8.50(m，1H)，7.85(m，1H)，7.48(m，1H)，7.34(m，1H)，4.42(m，1H)，3.19(dd，J＝3.5Hz，J＝13.7Hz，2H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ157.44，145.69，140.24，126.96，126.16，122.99，60.30，42.60。对于[C₈H₈N₂O]148.06，用质谱计算得到149.1(ESI+)。

【000364】3-吡啶基乙醛羟腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ8.62(d，1H，J＝1.8)，8.57(d，1H，J＝5.1)，7.94(d，1H，J＝8.1)，7.41(dd，1H，J＝8.1，5.1)，5.64(s，1H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ：149.921，147.355，135.412，133.044，124.443，118.980，61.085。对于[C₇H₆N₂O]134.05，用精确质量(exact mass)计算得到135.2(ESI+)。

【000365】2-噻吩基乙醛羟腈：¹HNMR(CDCl₃，500MHz)δ7.1(m，1H)，6.9(m，1H)，6.8(m，1H)，4.11(t，J＝7.0Hz，1H)，2.86(d，J＝7.0Hz，2H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ127.68，127.41，125.58，124.60，118.70，63.25，44.84。

【000366】3-噻吩基乙醛羟腈：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ7.09(m，3H)，4.60(t，J＝6.25Hz，1H)，3.12(d，J＝6.25Hz，2H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)δ129.05，127.16，125.27，122.65，119.87，61.58，44.90。

【000367】从相应的羟腈制备外消旋扁桃酸标准：(Stoughton，R.W.J.Am.Chem.Soc.1941，63，2376)将2-溴扁桃腈(230mg，1.08mmol)溶解在浓盐酸(1mL)中，在室温搅拌18小时，然后于70℃搅拌24小时。在冷却后，用乙醚(4×2mL)提取反应混合物。将有机提取物混和，在MgSO₄上干燥，过滤，在真空中浓缩。分离出无色粉末2-溴扁桃酸(180mg，0.78mmol，70％产率)。

【000368】从相应的氨基酸制备外消旋扁桃酸标准：在室温下，在氮气(g)氛围下，将苯丙氨酸(10mmol，1.65g)溶解在30mL 2N H₂SO₄中。在3-4小时的时间内，将亚硝酸钠(1.4g，在3ml水溶液中，2当量(eq))缓慢地加入到反应混合物中，在室温下，在氮气(g)氛围下，用力搅拌。将反应混合物搅拌过夜，然后将苯基乳酸提取到乙醚(3×30ml)中。在MgSO₄上将混和的醚提取物干燥，然后过滤并且在真空中浓缩。(Kenji，I.；Susumu，A.；Masaru，M.；Yasuyoshi，U.；Koki，Y.；Koichi，K.专利号WO0155074，公开日期：2001-08-02)。

酶促制备α-羟基酸的一般方法：

【000369】(R)-(-)-扁桃酸在pH8，包括10％v/v甲醇的150mL磷酸钠(100mM)缓冲液中的扁桃腈(1.005g，7.56mmol)溶液中，于37℃加入9mg腈水解酶1(以腈水解酶含量进行标准化)，所述溶液已经被氮气(g)搅动。反应在氮气(g)氛围下，在旋转的平板摇床上进行。通过取出等分试样，用于HPLC分析来监控反应进程。在温育3小时后，用1N盐酸将反应混合物酸化到pH2，用乙醚(4×50ml)提取。在真空中浓缩有机组分，然后将残余物吸收在10％碳酸氢钠溶液中。然后用乙醚(3×50ml)洗涤含水溶液，接着用1N盐酸将该溶液酸化到pH2，用乙醚(3×50ml)提取。混和有机组分，用盐水洗涤，在MgSO₄上干燥，过滤，然后在真空中浓缩。分离出无色粉末(R)-(-)-扁桃酸，产率86％(933mg，6.22mmol)。¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ12.6(br，s，1H)，7.41(m，2H)，7.34(m，2H)，7.28(m，1H)，5.015(s，1H)。¹³C NMRDMSO-d₆，125MHz)δ174.083，140.216，128.113，127.628，126.628，72.359。对于[C₈H₈O₃]150.07，用质谱计算得到实测值150.9(ESI+)；ee＝98％[HPLC]。[α]²⁰ ₅₉₈＝-134.6(c＝0.5，甲醇)。

【000370】(-)-2-氯扁桃酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ7.75(m，1H)，7.44(m，1H)，7.34(m，2H)，5.34(s，1H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ173.070，137.985，132.105，129.399，129.158，128.705，127.235。对于[C₈H₇ClO₃]186.0，用质谱计算得到185.0(LC-MS-)。ee＝96％[HPLC]。92％产率。[α]²⁰ ₅₉₈＝-137.6(c＝0.5，乙醇)。

【000371】(-)-2-溴扁桃酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ7.60(d，J＝7.93，1H)，7.48(m，1H)，7.40(m，1H)，7.25(m，1H)，5.30(s，1H)。¹³C NMR DMSO-d₆，125MHz)δ172.994，139.61，132.355，129.652，128.753，127.752，122.681，71.644。对于[C₈H₇BrO₃]230.0，用质谱计算得到230.9。ee＝96％[HPLC]。92％产率。[α]²⁰ ₅₉₈＝-116.4(c＝0.5，乙醇)。

【000372】(-)-2-甲基扁桃酸 ¹HNMR(DMSO-d₆，500MHz)δ11.78(bs，1H)，7.38(m，1H)，7.16-7.38(m，3H)，5.18(s，1H)，2.35(s，3H)。¹³C NMR DMSO-d₆，125MHz)δ174.229，138.623，135.649，130.129，127.491，126.990，125.698，125.698，69.733，18.899。对于[C₉H₁₀O₃]166.1，用质谱计算得到165.2。ee＝91％[HPLC]。86％产率。[α]²⁰ ₅₉₈＝-164.4(c＝0.5，乙醇)。

【000373】(-)-3-氯扁桃酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ7.46(s，1H)，7.36(m，3H)，5.07(s，1H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ173.554，142.685，132.813，130.069，127.568，126.355，125.289，71.659。对于[C₈H₇ClO₃]186.0，用质谱计算得到185.34(MALDI TOF-)。ee＝98％[HPLC]。70％产率。[α]²⁰ ₅₉₈＝-120.48(c＝0.5，乙醇)。

【000374】(-)-3-溴扁桃酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ7.60(s，1H)，7.49(m，1H)，7.42(m，1H)，7.31(m，1H)，5.06(s，1H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ173.551，142.917，130.468，130.379，129.237，125.687，121.404，71.605。对于[C₈H₇BrO₃]229.98，用质谱计算得到229.1(LC-MS)。ee＝98％[HPLC]。82％产率。[α]²⁰ ₅₉₈＝-84.8(c＝0.5，甲醇)。

【000375】(-)-4-氟扁桃酸 ¹HNMR(DMSO，298K，500MHz)δ12.65(s，1H)，7.44(m，2H)，7.17(m，2H)，5.91(s，1H)，5.03(s，1H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ173.93，162.57，136.47，128.61，128.55，114.96，114.80，71.61。对于[C₈H₇FO₃]170.0，用质谱计算得到168.8。ee＝99％[HPLC]。81％产率。[α]²⁰ ₅₉₈＝-152.8(c＝0.5，甲醇)。

【000376】(-)-1-萘基羟基乙酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ8.28-8.26(m，1H)，7.87-7.93(m，2H)，7.47-7.58(m，4H)，5.66(s，1H)。¹³C NMR DMSO-d₆，125MHz)δ174.288，136.284，133.423，130.654，128.353，128.192，125.926，125.694，125.613，125.266，124.558，70.940。对于[C₁₂H₁₀O₃]：202.21，用质谱计算得到201.37(MALDITOF-，基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱)。ee＝95％[HPLC]。90％产率。[α]²⁰ ₅₉₈＝-115.4(c＝0.5，乙醇)。

【000377】(-)-2-萘基羟基乙酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ12.6(bm，1H)，7.88-7.93(m，4H)，7.48-7.56(m，3H)，5.20(s，1H)。¹³C NMR(DMSO-d₆，125MHz)δ174.005，137.760，132.644，132.498，127.811，127.658，127.506，127.209，125.993，125.334，124.761，72.472。对于[C₁₂H₁₀O₃]202.21，用质谱计算得到201.37(MALDITOF)。ee＝98％[HPLC]。68％产率。[α]²⁰ ₅₉₈＝-115.4(c＝0.5，乙醇)。

【000378】(-)-3-吡啶基羟基乙酸该反应在100mM甲酸铵缓冲液中进行，pH8。为了分离产物，通过10,000MWCO(分子量截留值)膜过滤反应混合物，以去除酶，然后在真空中浓缩。¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ8.56(s，1H)，8.36(d，J＝4.57Hz，1H)，8.25(s，1H)，7.71(m，1H)，7.25(dd，J＝4.98，4.80Hz，1H)，5.45(s，1H)。¹³C NMR DMSO-d₆，125MHz)δ165.911，147.862，147.251，139.118，133.381，122.746，71.508。对于[C₇H₇NO₃]153.04，用质谱计算得到154.0(MALDITOF)。ee＝92％[HPLC]。84％产率。[α]²⁰ ₅₉₈＝-65.2(c＝0.5，水)。

【000379】(-)-3-噻吩基羟基乙酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ7.48(m，1H)，7.45(d，J＝2.81，1H)，7.10(m，1H)，5.09(s，1H)，3.33(s，1H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ173.704，141.109，126.446，126.042，122.247，68.915。对于[C₆H₆O₃S]158.00，用质谱计算得到157.224(MALDI TOF)。ee＝95％[HPLC]。70％产率。[α]²⁰ ₅₉₈＝-123.28(c＝0.5，甲醇)。

【000380】(S)-(-)-苯基乳酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ7.28(m，5H)，4.17(dd，J＝4.5Hz，J＝8.3Hz，1H)，2.98(dd，J＝4.5Hz，J＝13.7Hz，1H)，2.79(dd，J＝8.3Hz，J＝13.7Hz，1H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ178.16，133.4，129.27，128.6，127.3，70.45，44.12。ee＝97％[HPLC]，84％产率。[α]²⁰ ₅₉₈＝-17.8(c＝0.5，甲醇)。

【000381】(-)-2-甲基苯基乳酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ7.16(m，4H)，4.47(dd，J＝3.9Hz，J＝8.8Hz，1H)，3.25(dd，J＝3.9Hz，J＝14.3Hz，1H)，2.94(dd，J＝8.8Hz，J＝14.3Hz)，2.35(s，3H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ178.61，137.08，134.74，130.80，130.25，127.44，126.34，70.93，37.67，19.79。对于[C₁₀H₁₂O₃]180.08，用质谱计算得到180.0(ESI+)。86％产率。ee＝95％[HPLC]。[α]²⁰ ₅₉₈＝-13.2(c＝0.5，甲醇)。

【000382】(-)-2-溴苯基乳酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ7.28(m，4H)，4.60(dd，J＝4.0Hz，J＝9.1Hz，1H)，3.45(dd，J＝4.0Hz，J＝14.1Hz，1H)，3.04(dd，J＝8.0Hz，J＝14.1Hz，1H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ178.70，136.05，133.21，132.10，128.99，127.72，125.0，70.04，40.76。对于[C₉H₉BrO₃]243.9，用质谱计算得到243.3(ESI+)。91％产率。ee＝93％[HPLC]，[α]²⁰ ₅₉₈＝-17.6(c＝0.5，甲醇)。

【000383】(-)-2-氟苯基乳酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ7.10(m，4H)，4.64(t，J＝6.8Hz，1H)，3.11(d，J＝6.8Hz，2H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ132.18，131.52，129.66，129.03，128.07，124.05，115.8，63.02，44.79。对于[C₉H₈FNO]：165.06，用质谱计算得到164.2(ESI+)。91％产率。ee＝88％[HPLC]。[α]²⁰ ₅₉₈＝-14.0(c＝0.5，甲醇)。

【000384】(-)-3-甲基苯基乳酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ7.18(m，1H)，7.02(m，3H)，4.54(dd，J＝4.6Hz，J＝8.0Hz，1H)，3.06(dd，J＝4.54Hz，J＝14.4Hz，1H)，2.83(dd，J＝8.0Hz，J＝14.4Hz，1H)，2.36(s，3H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ175.88，163.80，130.33，130.09，125.7，116.68，113.75，71.31，34.28。对于[C₁₀H₁₁NO]161.08，用质谱计算得到162.2(ESI+)。80％产率。ee＝98％[HPLC]。[α]²⁰ ₅₉₈＝-2.4(c＝0.5，甲醇)。

【000385】(-)-3-氟苯基乳酸 ¹HNMR(DMSO-d₆，500MHz)δ7.2(m，1H)，6.9(m，3H)，4.56(dd，4.5Hz，J＝7.9Hz，1H)，3.09(dd，J＝4.5Hz，J＝14.1Hz，1H)，2.86(dd，J＝7.9Hz，J＝14.1Hz，1H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ175.88，163.80，130.33，130.09，125.7，116.68，113.75，71.31，34.28。对于[C₉H₉O₃F]184.05，用质谱计算得到184.1(ESI+)。82％产率。ee＝97％[HPLC]。[α]²⁰ ₅₉₈＝-5.2(c＝0.5，甲醇)。

【000386】(-)-1-奈基乳酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ8.57(m，1H)，8.21(m，1H)，8.08(m，1H)，7.61(m，4H)，4.64(dd，3.5Hz，8.5Hz，1H)，3.84(dd，J＝3.5Hz，J＝14.5Hz，1H)，3.38(dd，J＝8.5Hz，J＝14.5Hz，1H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ177.7，140.31，129.74，129.24，128.92，128.26，127.84，125.63，124.53，124.05，123.42，70.58，38.0。对于[C₁₃H₁₁NO]197.08，用质谱计算得到197.1(ESI+)。87％产率。ee＝94％[HPLC]。[α]²⁰ ₅₉₈＝-16.2(c＝0.5，甲醇)。

【000387】(-)-2-吡啶基乳酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ8.49(m，1H)，7.62(m，1H)，7.21(m，2H)，4.50(t，J＝5.0Hz，1H)，3.01(d，J＝5.0Hz，2H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ178.8，159.79，148.84，136.89，124.35，121.75，71.14，44.09。对于[C₈H₉NO₃]：167.06，用质谱计算得到167.0(ESI+)。62％产率。ee＝94％[HPLC]。[α]²⁰ ₅₉₈＝-3.6(c＝0.5，甲醇)。

【000388】(-)-3-吡啶基乳酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ8.43(m，2H)，7.62(m，1H)，7.28(m，1H)，4.57(t，5.37Hz，1H)，2.85(d，5.37Hz，2H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ176.6，150.03，147.12，136.41，129.45，123.26，61.56，31.46。对于[C₈H₉NO₃]167.06，用质谱计算得到167.0(ESI+)。59％产率。ee＝94％[HPLC]。[α]²⁰ ₅₉₈＝-4.0(c＝0.5，甲醇)。

【000389】(-)-2-噻吩基乳酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ7.18(m，1H)，6.94(m，1H)，6.90(m，1H)，4.49(dd，J＝4.1Hz，J＝6.25Hz，1H)，3.36(dd，J＝4.1Hz，J＝15.0Hz，1H)，3.26(dd，J＝6.25Hz，J＝15.0Hz，1H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ127.68，127.41，125.58，124.60，118.70，63.25，44.84。对于[C₇H₇NOS]153.02，用质谱计算得到153.0(ESI+)。85％产率。ee＝95％[HPLC]。[α]²⁰ ₅₉₈＝-13.0(c＝0.5，甲醇)。

【000390】(-)-3-噻吩基乳酸 ¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ7.30(m，1H)，7.13(m，1H)，7.01(m，1H)，4.50(dd，J＝4.25Hz，J＝6.5Hz，1H)，3.21(dd，J＝4.25Hz，J＝15.OHz，1H)，3.10(dd，J＝6.5Hz，J＝15.0Hz，1H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ127.50，136.09，128.83，126.24，123.32，70.65，34.84。对于[C₇H₈O₃S]172.02，用质谱计算得到172.1(ESI+)。81％产率。ee＝96％[HPLC]。[α]²⁰ ₅₉₈＝-18.8(c＝0.5，甲醇)。

3-羟基戊二酰基腈的酶促水解：

【000391】在室温下，将3-羟基戊二酰基腈(1.0g，9.0mmol，240mM)悬浮在氮气(g)搅动的磷酸钠缓冲液(37.5mL，pH7，100mM)中。加入细胞溶解产物(30mg，以腈水解酶含量进行标准化)，使浓度达到0.8mg/ml酶，在100rpm和室温下震荡该反应物。通过TLC(1∶1 EtOAc∶己烷，R_f＝0.32，腈；R_f＝0.0，酸)监控反应进程。22小时后，用1M HCl酸化反应物。用乙醚连续提取反应混合物。分离出黄色油状酸性产物(1.15g，98％产率)。¹H NMR(DMSO，298K，500MHz)δ12.32(s，1H)，5.52(s，1H)，4.10(m，1H)，2.70(dd，1H，J＝16.8，4.1Hz)，2.61(dd，1H，J＝16.9，6.3Hz)，2.44(dd，1H，J＝15.4，5.3Hz)，2.37(dd，1H，J＝15.6，7.8Hz)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ171.9，118.7，63.4，41.2，25.2。对于[C₅H₇NO₃]：129.0，用质谱计算得到130.0[M+H⁺]，(ESI+)。

制备(R)-(-)-甲基(3-O-[苯甲酰]-4-氰基)-丁酸酯

【000392】在室温下，将苯甲酰氯(0.068ml，0752mmol)加入到溶解在嘧啶(2.0ml)中的(R)-甲基-(3-羟基-4-氰基)-丁酸酯(71.7mg，0.501mmol)的搅拌溶液中。19小时后，加入另外的0.5当量苯甲酰氯(0.023ml，0.251mmol)。在23小时完成反应，这正如通过TLC所确定的。加入1ml水(H₂O)，用醚提取(3×10ml)。用盐水洗涤(2×10ml)。用MgSO₄干燥混和的含水提取物。过滤掉干燥剂，通过旋转蒸发去除溶剂。通过柱层析(己烷∶乙酸乙酯[2∶1])纯化。组分的旋转蒸发产生了黄色油状产物(46mg，0.186mmol，37％)。¹H NMR(DMSO，298K，500MHz)δ7.96(d，2H，J＝7.8)，7.70(t，1H，J＝7.25)，7.56(t，2H，J＝7.8)，5.55(m，1H)，3.59(s，3H)，3.13(m，2H)，2.90(m，2H)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ169.6，164.5，133.8，129.3，128.9，128.5，117.3，66.0，51.8，37.5，22.2。对于[C₁₃H₁₃NO₄]：247.25，用质谱计算得到270.3。[M+Na⁺]ee＝95％[HPLC]。[α]²⁰ ₅₉₈＝-32.4(c＝0.5，CHCl₃)。

(R)-乙基-(3-羟基-4氰基)-丁酸酯的合成

【000393】制备溶解在无水乙醇(1.94mL)中的(R)-3-羟基-4-氰基-丁酸的0.2M溶液。将乙醇溶液滴加到过筛的1.0ml的无水1M盐酸醚溶液和无水乙醇的50∶50(v/v)混合物中。在室温和氮气(g)氛围下，将反应物搅拌过夜。通过TLC监控反应，(1∶1 EtOAc∶己烷，R_f＝0.45，酯；R_f＝0.0，酸，用p-茴香醛染色)。30小时后，通过旋转蒸发去除溶剂。将粗产物放入到25mL醚中，洗涤，是用5mL饱和碳酸氢盐和然后用5mL盐水进行洗涤。在MgSO₄上干燥有机提取物，过滤，然后在真空中浓缩，产生了清澈油状产物。¹H NMR(DMSO，298K，500 MHz)δ5.60(d，1H，J＝5.58Hz)，4.12(m，1H)，4.07(q，2H，J＝7.1)，2.66(m，2H)，2.47(m，2H)，1.87(t，3H，J＝7.0)。¹³C NMR(DMSO，298K，125MHz)δ170.21，118.60，63.40，59.98，41.10，25.14，14.02。对于[C₇H₁₁NO₃]：157.1，用质谱计算得到158.2[M+H⁺]。

实施例13：用于对映选择性产生(R)-2-氯扁桃酸的腈水解酶的最优化

【000394】氯扁桃酸具有如下结构：

【000395】鉴别从(R，S)-2-氯扁桃腈选择性地产生(R)-2-氯扁桃酸的腈水解酶。鉴别出腈水解酶，其有助于提高这些酶的对映选择性，并且确定了工艺条件对酶的影响。完成对酶促腈水解的反应条件的检验，以便提高产物的对映体过量。另外，进行工艺条件对酶的影响的进一步研究。

2-氯扁桃腈 (R)-2-氯扁桃酸

【000396】在这一方面，对映选择性产生(R)-2-氯扁桃酸是目的。选择一种酶，SEQID NOS：385，386，用于进一步确认其针对2-氯扁桃腈的对映选择性。SEQ IDNOS：385，386显示出对于工艺成分是稳定的，具有8小时的半衰期。酶受到2-氯苯甲醛和羟腈底物中的一种污染物，2-氯苯甲酸的抑制。酶反应按比例逐步增加，直到底物浓度为45mM 2-氯扁桃腈。获得了大于90％的转化，以及97％的ee。改进了手性HPLC方法，以去除底物中存在的污染峰。使用该方法在确定对映选择性中获得了改进的准确度。

【000397】筛选针对2-氯扁桃腈的腈水解酶，具有31种腈水解酶在该底物上表现出活性。9种酶显示出高对映选择性。对这些酶中的5种进行最优化，其中一种被鉴别为下一阶段开发的候选者。

【000398】在改进所选择的用于(R)-2-氯扁桃酸的酶的对映选择性的尝试中，对大量因素进行了研究，已知这些因素对这一特性以及酶的活性有所影响。这些因素包括pH，温度，缓冲强度和反应中所加入的溶剂。最初，选择了5种酶用于这些研究，选择是基于这些酶所获得的高对映选择性。这些酶是：SEQ ID NOS：385，386，SEQ ID NOS：197，198，SEQ ID NOS：217，218，SEQ ID NOS：55，56和SEQ IDNOS：167，168。

pH的影响

【000399】在一系列pH值范围内进行酶促反应，从pH5到pH9。对于所有酶，观察到随着pH值的增加，活性和对映选择性有所增加。除了SEQ ID NOS：385，386，pH9(0.1M Tris-HCl缓冲液)被确定为活性和对映选择性的最适pH。SEQ IDNOS：385，386的最适pH为pH8(0.1M磷酸钠缓冲液)。

温度的影响

【000400】这些酶表现出类似的温度曲线，在37℃和45℃测量出最高活性。尽管后面的温度导致较高的转化，但大部分酶的对映选择性显示出明显的偏爱较低温度，当温度升高至高于37℃时，ee值降低了10-20％。在SEQ ID NOS：385，386的情况下，对映选择性的娇气的最适温度明显在37℃。因此，这一温度被确定为通过这些酶水解2-氯扁桃腈的最适温度。

酶浓度的影响

【000401】在同时进行的苯乙醛羟腈对映选择性水解为L-苯基乳酸的研究过程中，发现酶在反应过程中的浓度对反应的对映选择性有重大影响。这表明酶水解速度快于反应中剩余羟腈的外消旋作用速度。基于这一点，研究了酶浓度对于酶针对(R)-2-氯扁桃腈的对映选择性的影响。用标准酶浓度(0.6mg蛋白/ml)，标准浓度的一半和标准浓度的四分之一进行了酶促反应。

【000402】下述表格表明反应所达到的最高转化率，用相应的ee表示。除了SEQID NOS：385，386，似乎观察到，如果存在的话，对映选择性有所增加也非常小。因此，似乎剩余氯扁桃腈的外消旋速率不是获得较高对映选择性的限制因素。

其它阳性酶的研究

【000403】除了上述表中的酶，对大量其它腈水解酶针对2-氯扁桃腈的对映选择性进行了筛选。一些酶是最新发现的酶。一些酶进行了再次研究了，是在已经被发现对这些酶最适的条件下(pH8和37℃)进行。该筛选的结果如下述表中所示。

共溶剂浓度的影响

【000404】在酶促反应中，加入作为共溶剂的甲醇，显示出增加了ee值。为了确定能被加入到反应物中的最低水平的甲醇，在变化的甲醇浓度下进行了酶反应，变化范围为0-20％(v/v)。各种甲醇浓度之间，很明显，对映选择性没有显著性差异。然而，这些反应中的ee值是97-98％，而没有加入甲醇的对照组反应的ee值是95-96％。尽管在ee值上的差异较小，在研究过程中，甲醇的影响在不止一组实验中都有显示，因此认为该影响是显著的。

反应成分对SEQ ID NOS：385，386的活性的影响

【000405】对酶的过程最优化的研究中的一个关键部分，涉及确定酶促反应中可能存在的任何化合物的影响。对于SEQ ID NOS：385，386，这些成分被建立为起始材料，和羟腈的平衡产物，2-氯苯甲醛；产物，2-氯扁桃酸和底物中检测到的污染物，2-氯苯甲酸。发现，反应中加入氰化物对酶活性没有影响。也发现酶可以容忍微量三乙胺的存在。

【000406】各种反应成分对于SEQ ID NOS：385，386的活性的影响，是通过在酶反应中加入各种水平的可能抑制剂来评价的。从这些实验中，显示出醛及其氧化产物，2-氯苯甲酸都对酶活性有所损害。在反应中加入5mM 2-氯苯甲醛或5mM 2-氯苯甲酸，对SEQ ID NOS：385，386的活性分别有大约70％和40％的损失。

2-氯扁桃腈的按比例放大的水解

【000407】为了确认在用于产生(R)-2-氯扁桃酸中、由SEQ ID NOS：385，386所获得的转化和对映选择性，进行了大规模反应，并从含水混合物中分离了产物。反应在20mL反应体积中进行，底物浓度为45mM 2-氯扁桃腈。实现了羟腈的完全转化，所形成产物为30mM。产物的ee值是97％，酶的比活性是0.13mmol产物/mg腈水解酶/小时。

【000408】从该实验以及所进行的其它实验，显而易见，产物的形成不能说明底物的完全损失。在所有实验中，进行了含有腈的对照组样品，以便确定羟腈的分解程度。总的来说，在37℃，在4小时的时间段内，似乎损失了大约50％的底物。可以预期到，分解将一直到其平衡产物，氰化物和2-氯苯甲醛，该化合物将能进行进一步氧化。以90mM 2-氯扁桃腈的底物浓度，也进行了较大规模的反应。然而，在反应中没有检测到产物。应该预期到，在较高底物浓度下，平衡产物的浓度，2-氯苯甲醛和污染物，2-苯甲酸将以较高量存在。基于上述结果，很可能在这样的条件下，酶将被完全抑制。

两相条件下的反应

【000409】使用两相系统，将有助于在酶反应步骤后回收产物。这些系统也被用于去除对酶具有抑制作用的产物或副产物。在使用多种溶剂的两相条件下，腈水解酶显示出具有活性。在上述较高底物浓度下所得的低转化率之后，进一步使用命中酶，SEQ ID NOS：385，386，进行了两相系统的研究。重要的是，确定任意抑制因子是否能被溶剂相去除，以及使用两相系统是否能获得任何过程优势。

【000410】用己烷作为有机相，获得了有希望的结果。因此，进一步的研究涉及以两个不同水平使用该溶剂：水相体积的100％和70％，随着底物浓度的增加，高达90mM。将底物溶解在有机相中。己烷水平似乎对产物形成的水平没有影响，尤其是在2-氯扁桃腈浓度较高下。

【000411】再一次，在两相系统中，观察到了高转化，在5小时后观察到了76％的产物产量。产物形成率似乎比相应的单相系统中略微低一些，在相应的单相系统中反应是在1小时内完成的。在两相系统中，观察到了较低的对映选择性。导致这些结果的一些可能性是：(i)传质速率低于酶活性的速率或(ii)非极性溶剂直接影响酶。

【000412】在较高的底物浓度下，观察到了非常低的转化，从90mM 2-氯扁桃腈形成了7mM 2-氯扁桃酸。虽然这一转化水平较低，但仍然高于使用了相同底物浓度的单相系统中观察到的水平。这些结果暗示，在非极性有机溶剂中保留了一些抑制性的2-氯苯甲醛或2-氯苯甲酸。

标准测定条件：

【000413】制备下述溶液：

-底物储备溶液：50mM羟腈底物，在0.1M磷酸盐缓冲液中(pH8)。

-酶储备溶液：将3.33mL 0.1M磷酸盐缓冲液(pH8)加到每一小瓶中，其中含有20mg冻干细胞溶解产物(终浓度6mg蛋白质/ml)

【000414】反应体积在不同实验之间有所变化，这依赖于所采用的时间点的数量。除非另外说明，所有反应包括25mM 2-氯扁桃腈和10％(v/v)的酶储备溶液(终浓度6mg蛋白/ml)。除非另外说明，反应在37℃进行。对每一实验，进行了对照组，来监控腈降解。这些包括溶解在0.1M磷酸盐缓冲液(pH8)中的25mM 2-氯扁桃腈。

【000415】反应取样：通过从每一反应中取出等分试样，并且按照因数8稀释这些样品，对反应进行取样。通过手性和非手性HPLC方法，对双重复样品进行分析。除非如上述图中所示，反应在0.5，1，1.5，2，3和4小时进行取样。

HPLC方法

使用10mM磷酸钠缓冲液(pH2.5)的流动相，在SYNERGI-EP^TM柱(4μm；50×2mm)上进行非手性HPLC方法。在3.5分钟引入甲醇梯度，并且在1.5分钟内增加到50％，随后将甲醇减少到0％。2-氯扁桃酸和2-氯扁桃腈的洗脱时间是2.5和6.1分钟，腈在5.9分钟出现了另一个峰。

【000416】如上所述，在研究过程中，对手性HPLC方法进行最优化，以改善2-氯苯甲酸和(S)-2-氯扁桃酸之间的分离。在研究的后半部分，使用优化的方法，并且在CHIROBIOTIC-R^TM柱上进行。流动相是80％乙腈∶20％的0.5％(v/v)乙酸。(S)-2-氯扁桃酸和(R)-2-氯扁桃酸的洗脱时间分别是2.4和3.5分钟。2-氯苯甲酸的峰在1.9分钟洗脱。对于每一实验，在HPLC运行中包括产物的标准曲线。产物在样品中的浓度，是用这些曲线的斜率计算的。

pH的影响

【000417】通过在不同缓冲液范围内进行标准测定研究pH对酶活性和对映选择性的影响：0.1M柠檬酸磷酸盐，pH5；0.1M柠檬酸磷酸盐，pH6；0.1M磷酸钠，pH6；0.1M磷酸钠，pH7；0.1M磷酸钠，pH8；0.1M Tris-HCl，pH8；和0.1MTris-HCl，pH9。除了SEQ ID NO：385，386使用标准浓度的一半之外(5％v/v酶储备溶液)，对所有酶使用标准酶浓度。

温度的影响

【000418】温度对于活性和对映选择性的影响，是通过在一系列不同的温度范围内进行标准测定分析来研究的：室温，37℃，45℃，50℃和60℃。除了SEQ IDNO：385，386使用标准浓度的一半之外(5％v/v酶储备溶液)，对所有酶使用标准酶浓度。

酶浓度的影响

【000419】在标准条件下进行反应，使用变化的酶浓度：1％，5％和10％(v/v)的酶储备溶液。用适当的缓冲液将反应体积标准化。

溶剂的加入

【000420】在存在作为共溶剂的甲醇的情况下，进行酶反应。以下述水平将甲醇加入到标准反应混合物中：0，5，10，15和20％(v/v)。

【000421】也对具有己烷的两相系统进行了研究。水相包括处于0.1M磷酸盐缓冲液(pH8)中的10％(v/v)的酶储备溶液。在加入到反应物中之前，将羟腈溶解到己烷中。使用了两个水平的有机相：与水相体积等值，和水相体积的0.7。此外，对一系列腈浓度进行了研究：25，45和90mM。这些反应是在室温下进行的。

【000422】这些反应的样品来自水相和有机相。在真空下离心蒸发己烷，并且再次溶解在甲醇和水的50∶50混合物中，这样样品与含水样品处于相同的稀度。对样品的分析，是通过非手性和手性HPLC进行的。

工艺成分的影响

【000423】(i)活性：通过将单一成分2-氯苯甲醛，2-氯苯甲酸或2-氯扁桃酸加入到酶反应中，建立工艺成分对于酶活性的影响。酶反应在标准条件下进行，在存在2种可能的抑制剂之一的情况下，如下所述：5，10，20和25mM 2-氯苯甲醛；1.5和5mM 2-氯苯甲酸；和10，20，40和80mM 2-氯扁桃酸。对照组反应在标准条件下进行，不加入添加剂。在每一取样时间，将样品以十分之一的水平稀释。使用含有反应成分但不含有酶的对照组样品，并且稀释到相同水平。通过非手性HPLC分析样品。

【000424】(ii)稳定性：在标准条件下鉴定酶活性之前，在存在反应成分，2-氯苯甲醛和2-氯扁桃酸的情况下，通过将酶温育预定时间期间，来监控酶对工艺条件的稳定性。在这些实验中，在存在下述反应成分的每一种的情况下，以3mg蛋白/ml的浓度温育酶，所述下述反应成分为：5，10，20和25mM 2-氯苯甲醛；和10，20，40和80mM 2-氯扁桃酸。通过仅仅在缓冲液中温育酶进行对照组反应。

【000425】检测条件：在特定添加剂中，在0，4，8和24小时的温育时间下，移出20μl酶溶液，并且加入60μl的41.6mM底物储备溶液和20μl缓冲液。从而在标准条件下检测酶活性。在加入底物后90分钟，对反应取样，用非手性HPLC方法进行分析。

酶促反应的按比例放大

【000426】在两个不同的浓度下进行酶反应：45mM和90mM底物。在标准条件下进行反应，即pH8(0.1 M磷酸钠缓冲液)，37℃和10％(v/v)的酶储备溶液。在加入缓冲液之前，将底物溶解在10％(v/v)甲醇中。最终的反应体积是20ml，用磁力搅拌进行反应。

实施例14：用于对映选择性产生L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸的腈水解酶的最优化

5，5-二甲氧基戊醛 5，5-二甲氧基戊醛 L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸

氨基腈

【000427】四种分离的酶显示出将2-氨基-6-羟基己烷腈水解为(S)-2-氨基-6-羟基己酸，其具有朝向L-对映异构体的选择性。鉴别出一种新颖靶物质，该物质与(S)-2-氨基-6-羟基己酸具有类似结构。针对该靶物质，5，5-二甲氧基戊醛氨基腈，筛选了一组分离的腈水解酶。对阳性酶在该底物上进行表征。使用实验室进化技术，优化这些酶针对特定靶物质的改进的对映选择性。使用初步筛选鉴别推定的高表达突变型，这是使用HPLC确认的。

【000428】酶的优化：GSSM^TM和GeneReassembly^TM可以在选择出的腈水解酶上进行，以便提高用于产生L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸的酶的对映选择性和活性。鉴别出四种能够对映选择性地将2-氨基-6-羟基己烷腈水解为L-(S)-2-氨基-6-羟基己酸的酶。然而，在新颖靶分子L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸中，存在微小的结构差异。为了确定该差异对酶的活性和对映选择性是否有影响，针对该新颖靶物质筛选具有完全谱的腈水解酶。

【000429】选择对于产生L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸表现出活性和对映选择性的最高组合的酶用于GSSM^TM。在靶酶突变后，使用高通量筛选技术，在5，5-二甲氧基戊醛氨基腈上，筛选所得到的突变型。在通过HPLC分析确认高表达突变型之后，单一高表达突变型将被结合，以便进一步提高突变酶的性质。

【000430】与GSSM^TM平行，GeneReassembly^TM也可以在亲本酶的组合上进行，可以对其中至少一种，选择针对L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸的活性和对映选择性。至少两种具有高度同源性的其它腈水解酶，可以与前述酶进行重装配；对这些酶进行选择，以便对重装配序列提供多样性。

【000431】开发用于对映选择性的高通量检测方法是该演化努力取得成功的关键。这样的检测方法是基于新颖酶的对映选择性的检测方法，该检测方法允许在比传统使用的HPLC方法显著更短的时间期间内筛选＞30,000种突变型。

【000432】一方面，用一种非随机方法来产生变体，所述非随机方法被称作合成连接重装配(synthetic ligation reassembly)，该方法与随机改组有关，除了核酸结构单元不是被改组或连接或随机嵌合，而是被非随机地装配，可以被用于产生变异体。该方法不需要在被改组的核酸之间存在高度同源性。可以用连接重装配方法非随机地产生具有至少10100或至少101000不同嵌合体的后代分子文库(或集合)。连接重装配方法提供了一种非随机方法，用于产生一组最终的嵌合核酸，该核酸具有通过设计所选择的总装配次序，该方法包括通过设计产生多个特异性核酸结构单元，这些核酸结构单元具有有用的相互相容可连接末端，这样在装配这些核酸结构单元时，可以实现设计的总装配次序。

【000433】将被装配的核酸结构单元的相互相容可连接末端，如果它们能使得结构单元以预定次序被结合，就被认为对这一类型的有序装配是“有用的(serviceable)”。因此，一方面，其中核酸结构单元可以被结合的总装配次序是通过可连接末端的设计指定的，如果使用不止一个装配步骤，那么其中核酸结构单元可以被结合的总装配次序也可以通过装配步骤的顺序次序来指定。在本发明的一个方面，用酶，如连接酶(例如，T4 DNA连接酶)来处理退火的结构片段，以获得结构片段的共价连接。

【000434】在另一个方面，在对一组祖先核酸模板的序列分析上，获得核酸结构单元的设计，该祖先核酸模板被作为产生一组后代最终嵌合核酸分子的基础。这些祖先核酸模板因此作为序列信息来源，有助于被诱变，即嵌合，重组或改组的的核酸结构单元的设计。

【000435】在一个例证中，本发明提供了嵌合相关基因家族和它们的相关产物的编码家族。在一个特别的例证中，被编码的产物是腈水解酶。编码本发明的腈水解酶的核酸可以根据此处描述的方法被诱变。

【000436】因此，根据本发明的一个方面，编码腈水解酶的大量祖先核酸模板的序列被比对，以便选择一个或多个分界点，这些分界点可以位于一个同源性区域中。分界点可以被用来描述将要产生的核酸结构单元的边界。因此，在祖先分子中鉴别和选择的分界点，作为后代分子装配中的潜在的嵌合点。

【000437】典型地，有用的分界点是由至少两个祖先模板共有的同源性区域(包括至少一个同源的核苷酸碱基)，但分界点可以是由至少一半的祖先模板，至少三分之二的祖先模板，至少四方之三的祖先模板，和优选地至少所有祖先模板共有的同源性区域。仍然，甚至更优选地，有用的分界点是由所有祖先模板共有的同源性区域。

【000438】一方面，连接重装配过程被彻底地进行，以便产生详尽的文库。换句话说，核酸结构单元的所有可能的有序组合被表示在最终嵌合的核酸分子的集合中。同时，设计(或非随机的，非无规则的)每一组合中的装配次序(即在每一最终嵌合核酸的5’到3’序列上的每一结构单元的装配次序)。由于该方法的非随机特性，大大降低了不受欢迎的副产物的可能性。

【000439】在另一个方面，该方法提供了，连接重装配过程被系统地进行，例如以便产生系统地区室化文库，具有可以被系统地筛选的区室，例如，一个接着一个。每一区室(或部分)拥有具有已知特性的嵌合体或重组体。换句话说，本发明提供了，通过选择性和明智地使用特定核酸结构单元，结合选择性和明智地使用连续步骤的装配反应，可以实现实验设计，其中在几个反应容器中的每一个中产生后代产物的特定集合。这允许进行系统的检验和筛选程序。因此，这允许潜在的非常大量的后代分子以较小群体被系统地检验。

【000440】由于其以高度灵活但仍然彻底且系统的方式进行嵌合作用的能力，尤其当祖先分子之间存在低水平同源性时，此处描述的本发明提供了产生包括大量后代分子的文库(或集合)。由于连接重装配方法的非随机性质，所产生的后代分子优选地包括具有通过设计所选择的总装配次序的最终嵌合核酸分子的文库。在一个特定的方面，这样产生的文库包括大于10³到大于10¹⁰⁰⁰不同后代分子种类。

【000441】在另一个例证中，其中产生结构单元的步骤的合成性质，允许设计和引入核苷酸(例如一个或多个核苷酸，例如可以是密码子或内含子或调节序列)，所述核苷酸随后被任选地在体外过程中被去除(例如通过诱变)或在体内过程中被去除(例如通过使用宿主生物的基因剪接能力)。应该预期到，在许多情况下，引入这些核苷酸也是期望的，除了产生有用的分界点的潜在益处外，还有许多其它原因。

【000442】本发明的合成连接重装配方法使用了多个核酸结构单元，这些结构单元中的每一个优选地具有两个可连接末端。在每一核酸结构单元上的两个可连接末端，可以是钝末端(即每一个末端具有零个核苷酸的突出端)，或优选地一个钝末端和一个突出端，或更优选地仍然是两个突出端。在一个双链核酸上，有用的突出端可以是3’突出端，或5’突出端。核酸结构单元可以具有一个3’突出端，一个5’突出端，两个3’突出端，或两个5’突出端。其中核酸结构单元被装配形成最终嵌合核酸分子的总次序，是通过有目的的实验设计确定的(例如基于5’和3’突出端的序列，设计结构单元核酸之间的粘末端)，并且不是无规则的。

【000443】根据一个优选的方面，核酸结构单元是如下产生的：化学合成两个单链核酸(也被称作单链寡核苷酸)，并且在杂交条件下将其接触以允许它们退火形成双链核酸结构单元。双链核酸结构单元的大小是可以变化的。这些结构单元的大小可以小或大。结构单元的优选大小范围，是从1个碱基对(不包括任何突出端)到100,000个碱基对(不包括任何突出端)。也提供了其它优选的大小范围，下限为1bp到10,000bp(包括在此之间的每一个整数数值)，上限为2bp到100,100bp(包括在此之间的每一个整数数值)。

【000444】根据一个方面，首先通过产生两个单链核酸，然后允许它们退火以形成双链核酸结构单元，从而产生双链核酸结构单元。在双链核酸结构单元的两个链中，除了在任何形成突出端的核苷酸上，在每一个核苷酸可以是互补的；因此不含有错配，除了任何突出端。根据另一个方面，双链核酸结构单元的两个链在比除了任何形成突出端的核苷酸的每一个核苷酸少的情形下，是互补的。因此，根据这一方面，双链核酸结构单元可以被用来引入密码子简并。优选地，使用此处描述的位点饱和诱变引入密码子简并，使用一个或多个N，N，GIT盒子或可选择地使用一个或多个N，N，N盒子。

实施例15：评价腈水解酶活性和对映选择性的分析方法

【000445】描述了一种测定方法，该方法可以适合高通量自动装置，以便增加对于腈水解酶的发现和演化尝试的筛选通量。理想的测定方法是，即允许量化产物形成或底物转化，以及对映体过量的测定方法。开发了适合高通量筛选的两种非手性和两种手性比色测定法。

所开发的非手性比色测定：

【000446】用于残余底物的OPA测定。邻苯二醛测定(OPA测定)适用于α-氨基或α-羟基腈底物。全细胞的裂解是不必要的。针对2-氯扁桃腈和苯基乙醛羟腈，这些结果通过HPLC得到了验证。测定工作最好使用芳族腈。脂族化合物表现出线性标准曲线，荧光性被降低，从而降低了测定的效率。

【000447】所形成的羟基酸的量化和ee确定的LDH测定

LDH测定适用于苯基乳酸，但不适用于2-氯扁桃酸。使用刃天青检测系统增加灵敏度，并且降低背景。在进行测定之前，全细胞的背景荧光或者通过离心或者通过热灭活来克服。

【000448】所形成的氨基酸的量化和ee确定的AAO测定

AAO测定适用于苯基丙氨酸，和(S)-2-氨基-6-羟基己酸。使用Amplex Red检测系统增加灵敏度。显示出细胞裂解是不必要的。细胞在确定成分培养基中生长，以便防止背景荧光。

OPA测定

【000449】使用基于腈水解酶测定的邻苯二醛(OPA)荧光来量化剩余的α-羟基腈底物的量。α-羟基腈在pH控制的分解中形成相应的醛和氰化物，OPA与其中释放的氰化物反应，产生发荧光的、可以计量的产物。OPA与α-羟基腈在pH控制的、形成相应的醛和氰化物的降解中所释放的氰化物反应，产生发荧光的1-氰基-2-R-苯并异吲哚。

【000450】建立针对下述底物的标准曲线：2-氯扁桃腈(CMN，0.998)，环己基扁桃腈(CHMN，0.99)，乙酰苯基氨基腈(APA，0.99)，和苯乙醛羟腈(PAC，0.97)，(图5)，(圆括号中为R²值)。也建立了苯基甘氨酸的标准曲线(PGN，0.93)。三种所实验的底物，二甲基正丁醛氨基腈(DMB)(2-氨基-4，4-二甲基戊烷腈)，羟基新戊醛氨基腈(Hydroxypivaldehyde aminonitrile，HPA)，和新戊醛氨基腈(pivaldehyde aminonitrile，PAH)，在最初的测定条件下，给出非常低的荧光读数和不可靠的结果。然而，对于这些化合物，其中许多参数被调整，但是通过这些操作没有增加这些化合物的荧光信号强度。

【000451】在增加这三种化合物的荧光信号的尝试中，用萘二羧醛(NDA)代替OPA。构建了使用OPA或者NDA的PAH，HPA和DMB的标准曲线。为了确定灵敏度和背景荧光，加入对底物中的每一种具有疑似催化活性的冻干腈水解酶溶解产物(SEQ ID NOS：189，190)。在四种化合物中的三种化合物中检测水解。NDA急剧地增强了信号，通常以一个数量级增加，尽管这一降低的线性大概是由于信号的饱和。

【000452】NDA被确定作为脂族化合物的可替代的检测试剂。然而，对于该测定，期望的是对于所有底物使用相同的检测系统，原因在于这将有助于自动化评价多个腈水解酶底物。对于分析PAC，CMN，CHMN，APA，MN和PGN，当前基于OPA的测定是有效的。尽管已经开发了针对脂族化合物PAH，HPA和DMB的标准曲线。

全细胞最优化

【000453】评价将冻干腈水解酶溶解产物加入到测定成分中的影响，或者是未处理的，或者是热灭活的。在任一种情况下，没有观察到干涉性背景荧光。接着评价OPA测定，并且以全细胞格式最优化针对腈水解酶活性检测的OPA测定。评价表达腈水解酶的全细胞和原位溶解细胞。评价冻干细胞溶解产物，同时它们各自的全细胞克隆作为对照组。对于这一最优化研究，选择扁桃腈(MN)作为模型底物。

【000454】与表达SEQ ID NOS：187，188的全细胞，和表达SEQ ID NOS：187，188的原位溶解细胞一起，评价SEQ ID NOS：187，188的冻干细胞溶解产物。加入全细胞不会影响荧光，也不会导致荧光猝灭。加入三种细胞溶解溶液中的任一种可以提高全细胞系统中扁桃腈的渗透性(以及因此的转化)。评价三种细胞溶解溶液：B-PER(Pierce)，BugBuster(Novagen)和CelLytic B-II(Sigma)，发现对OPA测定没有有害影响。加入产物α-羟基酸或α-氨基酸不会影响OPA测定的检测。

【000455】对测定的需要几个液体转移步骤的原始格式进行修改，修改到一个平板过程中，其中细胞生长、腈水解和OPA测定反应在同一微量滴定平板中发生。使用该单一孔格式试验扁桃腈。在这种情况下，评价大肠杆菌基因位点饱和诱变(GSSM^TM)细胞宿主。对三种克隆进行试验：SEQ ID NOS：101，102，SEQ IDNOS：187，188，和一个用作对照组的空白载体。在四个时间点评价水解，在10和20mM下，也使用0mM对照组。在一个早期的实验中，针对苯乙醛羟腈底物(对于该化合物，该酶没有表现出活性)评价克隆SEQ ID NOS：187，188，没有观察到活性。

【000456】OPA测定被发现可以检测α-羟基和α-氨基腈底物的存在。用该测定可以容易地检测芳族化合物，而对于脂族化合物在检测上有一些挑战。当使用冻干细胞溶解产物、原位溶解全细胞或未溶解全细胞时，没有明显的背景问题。该测定适用于单平板分析，其中细胞生长、用底物温育、和测定是在同一平板上进行：不需要液体转移，易于实现自动化。尽管所有被试验的腈产生了线性响应，但脂族化合物显示出低荧光响应。

手性LDH测定(手性乳酸脱氢酶测定)

【000457】开发了基于乳酸脱氢酶(L-LDH)的光谱系统，用于分析通过腈水解酶催化水解羟腈所产生的手性α-羟基酸。羟基腈底物没有被次级或检测酶代谢，从而没有干扰起始材料。未经过热处理的细胞溶解产物导致LDH系统的背景活性；然而，细胞溶解产物的热灭活或造粒消除了背景活性。(参见图4)

【000458】评价此处公开的针对腈水解酶的可以商购的D-和L-乳酸脱氢酶的活性和对映体异构特异性。鉴别出LDH，其既适合于D-苯基乳酸分析，也适合于L-苯基乳酸分析。没有发现适合于2-氯扁桃酸分析的酶。所选择的LDH酶表现出实质上绝对的立体选择性。建立使用冻干细胞溶解产物检测从PAC产生的D-和L-LDH的测定的可行性。

【000459】最初，评价了三种比色染料，所有这些是四唑盐：NBT(3，3’-二甲氧基-4，4’-亚联苯基)双[2，(4-硝基苯基)-5-苯基-2H]-，氯化物)MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基溴化四唑)INT(2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-2H-氯化四唑)。这些检测系统的产物不溶解性在分析上具有挑战。为了说明这一点，评价了另一种已报导的具有可溶性产物的四唑盐，XTT(2，3-双-(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-2H-四唑-5-羧基腈)。尽管XTT产生了一种可溶性大红色的产物，但底物是不可溶的，从而导致相同的分析挑战。作为四唑染料族的一种可选择性，评价了双重性的比色/荧光染料刃天青。刃天青的氧化产生了resourfin。底物和产物都是可溶的，颜色变化可以比色或使用荧光测定法量化，从而增加了准确性。由于刃天青的灵敏度，可以量化0.05mM乳酸。当使用与底物相同范围的染料时，获得了最适结果，例如0.5mM刃天青可以量化0.05到0.5范围内的乳酸(及其类似物)，尽管最好的线性处于该数值范围的较下端。resourfin在28小时内是稳定的，并且具有线性荧光响应。

【000460】在存在LDH测定成分的情况下，冻干酶显示出背景荧光/吸收。为了说明这一问题，将溶解产物煮沸10分钟，然后离心。这导致背景信号降低了90％。有趣的是，单独离心(5分钟@14.1rcf)或离心后煮沸(5分钟@100℃)可以将荧光降低到背景水平。由于煮沸将增加蒸发(8μl孔大小)，并且潜在地挥发(volatize)腈底物，所以在高通量格式中，如1536孔平板中，旋转相对于煮沸是优选的。从生长培养基(LB和TB和M9)或细胞溶解溶液(B-PER，CelLytic和BugBuster)中没有记录到背景信号。

手性AAO测定

【000461】开发了基于氨基酸氧化酶(AAO)的光谱系统，用于分析腈水解酶催化水解氨基腈所产生的手性α-氨基酸。

测定开发和确认

【000462】最初的测定确认，使用了如上面所描述的2，2’-连氮基-双-{3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺酸(ABTS)检测系统。然而，由于颜色不稳定，进一步的研究使用了苯酚氨基安替比林(PAAP)检测系统，是在λ_max510nm分析的。对4-甲基-亮氨酸、苯丙氨酸、(S)-2-氨基-6-羟基己酸和叔亮氨酸的每一对映异构体发现了具有适当活性的酶。该测定不适合于甲基苯基甘氨酸，与苯基甘氨酸不能很好地工作。

【000463】对于苯丙氨酸产生了从0-15mM的标准曲线。当浓度保持在低于1mM时，该曲线更加线性。只要保持黑暗，颜色在好几天内都能保持稳定。三种细胞溶解溶液Bug Buster(BB)，细菌蛋白提取试剂(Bacterial Protein Extracting Reagent，BPER)，和细胞溶解试剂(Cell Lytic Reagent，CLR)被加入到标准曲线中，没有显示出对显色的影响。加入细胞溶解产物(cell lysate，cl)没有表现出形成背景颜色。加入苯基乙醛氨基腈硫酸盐(PAS)，起始材料也没有显示出对颜色形成的影响。

【000464】AAO系统在直至高达1mM的底物下表现出更强的线性。调节AAO酶和酸性底物的浓度，以试图去除L-AAO和D-AAO曲线在接近图表中间时的交叉。预先混和PAAP，HRP和AAO证明是有效的，并且没有引起所观察的活性的变化，这确定了测定成分可以被加入到混和格式的测定中。

【000465】对全细胞的AAO测定观察到了高水平的背景，这归因于TB和LB生长培养基中存在的L-氨基酸。在M9培养基中洗涤和重悬浮细胞消除了背景。对于所有未来的实验，细胞在具有0.2％葡萄糖的M9培养基中培养。与未溶解细胞相比，溶解细胞仅仅显示出略微好的响应。因此，细胞溶解是不必要的。SEQ IDNOS：187，188在基于HPLC分析的初步筛选中表现出对HPA的活性。

【00466】研究了荧光检测系统的用途，该系统允许以超高通量方式执行测定，如1536孔或千兆矩阵格式。最适合我们的系统的荧光试剂是来自Molecular Probes的Amplex Red，该试剂产生了高度荧光的试卤灵(resorufin)(λ_ex545nm；λ_em590nm)。建立苯丙氨酸和(S)-氨基-6-羟基己酸的标准曲线(0-100μM)。

【000467】在测定自动化的准备中，通过荧光激活细胞分选(FACS)将表达腈水解酶的细胞加入到含有M90.2％葡萄糖，0.25mM IPTG培养基的微量滴定平板中。评价三种表达亚克隆的腈水解酶，和空白载体对照组：SEQ ID NOS：101，102，SEQID NOS：187，188，SEQ ID NOS：29，30，和空白载体。细胞分选之后，证明细胞生存能力是不一致的。因此目前评价了菌落挑取，作为一种可选的方法，将细胞加入到微量滴定平板中。未覆盖的1536孔微量滴定平板的蒸发损失在自动培养箱中每天大约是30％(培养条件：85％相对湿度(RH)，温度为37℃)。在95％RH培养箱中培养，将每天的蒸发损失降低到了1％。

【000468】使用HPA腈，建立三种亚克隆在存在高达3.5mM腈的情况下的生长能力。生长速度仅仅略微受到了影响(低于30％)。在存在HPA的情况下，生长的亚克隆显示出表达能催化羟基正亮氨酸(hydroxy norleucine，HNL)形成的腈水解酶，正如使用Amplex Red检测系统所建立的。当酶是S-选择性时，仅仅评价了S。在10分钟时间间隔下，读取反应平板，在40分钟显示出最好的线性。尽管当细胞在pH7生长时，高于5mM的HPA极大地抑制了细胞生长，但对于细胞在pH8的生长，高于0.1mM HPA抑制了生长。

【000469】为了使用HPLC验证AAO结果，使用高浓度HPA，高达40mM(由于对于(S)-2-氨基-6-羟基己酸的HPLC检测挑战)，和冻干细胞溶解产物SEQ IDNOS：187，188进行反应。

比较对于HNL的AAO和HPLC数据

	％ee		％转化率
	％ee		％转化率		[HNL]
mM40302010	AAO89％89％86％78％	HPLC100％97％97％98％	AAO17％29％21％13％	HPLC18％36％34％35％	[HNL]

【000470】为了确定与基于HPLC筛选所用的20mM底物范围相比，以较低浓度进行筛选是否会引起结果的偏差，使用三个浓度范围用SEQ ID NOS：187，188进行实验。每一实验被进行三个重复，以便去除任何非系统误差。

【000471】AAO测定可以在384或1536孔格式上进行，细胞被分拣到M9 0.2％葡萄糖，0.25mM IPTG培养基中。在存在腈的情况下培养细胞(在这种情况下是HPA)，或者允许细胞达到一定浓度，然后加入腈。尽管细胞溶解试剂不干扰测定，当测定HPA时，发现加入溶解试剂是不必要的。或者在之前加入腈，或者在之后加入腈，母板将必须被拆分为子板，然后分别对L-和D-对映异构体含量进行测定。用AAO/Amplex Red试剂调节温育时间，以便在不同时间读取D-和L-平板。

实施例16：鉴别、开发和产生强劲、新颖酶

靶向一系列高数值对映选择性生物过程

【000472】本发明提供了通过定向进化(directed evolution)开发腈水解酶，该腈水解酶为下述化学靶物质的工艺制造提供了极大的技术和商业优势：

L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸

5，5-二甲氧基戊醛 5，5-二甲氧基戊醛氨基腈 L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸

【000473】腈水解酶显示出将2-氨基-6-羟基己烷腈水解为(S)-2-氨基-6-羟基己酸，具有针对L-对映异构体的选择性。针对靶物质5，5-二甲氧基戊醛氨基腈，筛选一系列腈水解酶。在该底物上，对阳性酶进行表征。使用初步筛选来鉴别推定的高表达突变型，然后使用HPLC来确认。

【000474】在所选择的腈水解酶上进行GSSM^TM和GeneReassembly^TM，以便提高用于产生L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸的酶的对映选择性和活性。鉴别将2-氨基-6-羟基己烷腈对映选择性水解为L-(S)-2-氨基-6-羟基己酸的腈水解酶。然而，新颖靶分子L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸表现出微小的结构差异。为了确定该差异是否影响酶的活性和对映选择性，针对该新颖靶物质筛选腈水解酶的完整谱。

【000475】首先，通过更详细的表征产生L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸的命中酶，进行用于GSSM的正确靶基因的鉴别。该尝试涉及更广泛地研究pH和温度对于活性和对映选择性的影响，以及更深入地分析酶对工艺条件的稳定性。在最初筛选之前，完成烷基氨基腈的单一对映异构体的合成；在理解该因素和酶的对映选择性之间的关系的尝试中，研究腈的外消旋作用。

选择用于产生L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸的表现出活性和对映选择性的高度组合的酶用于GSSM。在靶酶突变后，使用高通量筛选技术，针对5，5-二甲氧基戊醛氨基腈筛选所得到的突变体。在通过HPLC分析确认高表达突变型之后，达到了决策点，以便评价GSSM针对靶物质的结果。

【000476】与GSSM^TM平行，GeneReassembly^TM也可以在亲本酶的组合上进行，其中至少一种是选择针对L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸的活性和对映选择性。至少两种其它腈水解酶可以与前述酶进行重装配；对这些酶进行选择，以便对重装配序列提供多样性。

【000477】本发明提供了开发针对原始底物氨基腈的外消旋条件。此外，本发明提供了通过动态动力学拆分来鉴别能将这些氨基腈转化为靶α-氨基酸的酶。本发明也提供了筛选和开发用于产生(R)-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸(ε-醛基赖氨酸)的腈水解酶催化的动力学拆分方法。(S)-2-氨基-6-羟基己酸将被用作模型底物，用于开发动力学拆分。靶α-氨基酸如下所示：

(i)D-4-氟苯基甘氨酸

4-氟苯甲醛 4-氟苯基甘氨酸腈(FPGN) D-4-氟苯基甘氨酸

(ii)L-2-氨基-6，6-二甲氧基己酸(ε-醛基赖氨酸)

5，5-二甲氧基戊醛 5，5-二甲氧基戊醛 L-2-氨基-6，6-二甲氧基

氨基腈(DMPAN) 己酸

【000478】开发了用于腈水解酶催化产生D-4-氟苯基甘氨酸和2-氨基-4，4-二甲基戊烷腈(ε-醛基赖氨酸)的氨基腈底物的外消旋作用的条件。两种模型底物，最初使用苯基甘氨酸腈和戊醛氨基腈，在不存在酶的情况下研究外消旋作用。进行了在多种可能的外消旋作用条件下同时确定一种或多种可利用的腈水解酶的性能。此外，针对用于产生(S)-2-氨基-6-羟基己酸的羟基戊醛氨基腈筛选腈水解酶，并且最优化有希望的酶。一旦建立了外消旋作用条件，筛选腈水解酶的活性。进行对产物的动力学拆分的进一步最优化。

【000479】鉴别用于将α-氨基腈水解为α-氨基酸的大量对映选择性腈水解酶。尽管这些酶显示出优先选择某些氨基腈的所需对映异构体，在进一步筛选、开发和比较候选腈水解酶中的一个限制因素，是氨基腈底物在反应条件下的外消旋作用的速率。

芳族氨基腈外消旋作用

【000480】第一个步骤是使用模型底物，苯基甘氨酸腈，建立芳族氨基腈外消旋发生的条件。外消旋作用策略包括，但不限于下述列表所示。根据它们商业适用性，粗略地区分选项的优先次序。

(1)控制反应的pH。既然显示出外消旋在高pH时比较快，该方法需要发现和最优化在pH＞10时具有活性和选择性的腈水解酶。

(2)加入已知化学外消旋试剂，如醛、酮、弱碱、树脂、金属离子、路易斯酸等等，这些试剂在较低pH下可以增加外消旋作用。

(3)合成N-酰化氨基腈衍生物，例如N-乙酰基苯基甘氨酸腈，该化合物更容易被外消旋。在N-乙酰基苯基甘氨酸腈的情况中，去除乙酰基的选择性D-酰基转移酶将能增加腈水解酶产物的光学纯度。

(4)使用两相系统，其中碱催化的外消旋发生在疏水有机相中，酶促水解发生在水相中。

(5)使用2-酶系统，该系统包括腈水解酶和氨基腈消旋酶。目前可以通过商业途径获得一种氨基酸消旋酶，该氨基酸消旋酶将被用来试验针对苯基和氟苯基甘氨酸腈的活性。搜索基因文库，以搜索与已知氨基酸酰胺消旋酶、乙内酰脲消旋酶或可以被鉴别的任何其它消旋酶表现出同源性的基因。

【000481】一旦已经建立外消旋作用的条件，就可以为开发靶芳族底物，4-氟苯基甘氨酸腈(FPGN)的外消旋条件提供基础。FPGN被认为稳定性低于模型底物；因此，可以更快地发生外消旋作用，但降解反应同样也比较快。评价样品酶忍受和/或在该条件下良好地发挥作用的能力。最终最优化筛选方法包括靶底物、样品腈水解酶和底物外消旋条件。

【000482】所进行的研究已经显示出，苯基甘氨酸腈在pH10.8易于发生外消旋。然而，似乎现有酶中的任一种酶没有显示出能忍受这样苛刻的pH条件。筛选来自高度碱性环境的样品，筛选是否存在能忍受这样的条件的腈水解酶。一旦发现，对这些酶进行测序和亚克隆，并且这些酶被以冻干细胞溶解产物形式产生，以备筛选使用。

脂族氨基腈外消旋作用

【000483】一种模型脂族氨基腈，戊醛氨基腈，被以其外消旋形式合成。然而，使用下述方法，制备旋光富集的样品：(i)制备性手性HPLC；(ii)非对映体盐拆分；(iii)非对映体衍生或柱色谱；(iv)从L-N-BOC正亮氨酸合成。用HPLC分析检测这些化合物。

HPLC测定

【000484】使用HPLC测定来检测(S)-2-氨基-6-羟基己酸。使用包括柱衍生之前的测定。

筛选/表征：

【000485】针对2-氨基-6-羟基己烷腈筛选腈水解酶。对于在大于25mM的底物下能很好地发挥作用的酶，进行按比例放大的反应。研究其它酶的底物/产物耐受性和稳定性曲线。

【000486】筛选腈水解酶，并且对命中酶进行表征，重点在于反应条件下的最适pH和最适温度，对映选择性和稳定性。

酶进化

【000487】选择表现出期望特性的靶酶用于GSSM^TM。在靶酶突变后，使用高通量筛选技术在底物上筛选所得到的突变体。一旦已经通过HPLC分析确认了高表达突变型，组合能增加性能的单一突变，并且评价可能的加性或协同效应。

【000488】此外，可以在先导酶(lead enzymes)的组合上进行GeneReassembly^TM，选择期望特性，包括在反应中的活性、对映选择性和稳定性。

实施例17：用于对映选择性产生(S)-苯基乳酸的腈水解酶的最优化

【000489】鉴别用于对映选择性水解5种不同的腈底物的腈水解酶。分离这些腈水解酶，并且针对所选择的靶物质进行最优化。最优化包括过程最优化和定向进化或定向演化(directed evolution)。尤其是，表征和最优化对于产生(S)-苯基乳酸特异的酶。这样做的目的主要在于提高酶的活性，同时保持高对映选择性。也进行了工艺条件对酶的影响的研究。

苯乙醛苯乙醛羟腈 (S)-苯基乳酸

【000490】用于从潜在的定向演化尝试中筛选突变体的高通量测定的开发取得了成功。开发了适合于高通量筛选的两种非手性和两种手性比色测定，并且用于腈水解酶定向进化。

【000491】鉴别作为用于产生(S)-苯基乳酸的高对映选择性腈水解酶的SEQ IDNOS：103，104。SEQ ID NOS：103，104的表征显示出最适反应pH和温度，分别是pH8和37℃；分别高达5mM和30mM水平的反应起始材料，苯乙醛，和产物，苯基乳酸显示出对酶活性没有影响。按比例放大的酶促反应具有95％的对映体过量(ee)。

实施例18：编码腈水解酶的核酸的定向进化

【000492】对nitB基因进行基因位点饱和诱变^TM或GSSM^TM，以产生覆盖整个酶的单一氨基酸取代突变体的文库。定向进化中所用的“亲本”nitB基因的序列是SEQ ID NOS：103，104。通过执行GSSM^TM产生nitB突变体文库。然后筛选nitB突变体文库，筛选具有增加的全细胞羟甲基硫代丁基腈(hydroxymethylthiobutryonitrile，HMTBN，是一种腈水解酶底物)活性的克隆。

腈水解酶反应在该底物上的产物是羟甲基硫代丁酸(hydroxymethylthiobutyric acid，HMTBA)。

【000493】在35℃下，用100mM HMTBN和100mM K₃PO₄，pH7进行测定，大约30-40％转化率。使用两种方法定量表示HMTBN转化，一个方法是由HPLC分析所产生的关于HMTBS的直接测量值，另一个方法使用使用荧光氰化物测定的针对残余HMTBN的间接检测，该测定先前已经进行了描述。

【000494】对推定的nitB高表达突变体进行二次测定，以确认所增加的活性。在二次测定中，在摇瓶中在表达培养基中，诱导高表达突变型和野生型对照组。然后用100mM K₃PO₄，pH7洗涤摇瓶培养基，并且重悬浮到相同的光学密度，在660nm下。然后用标准化细胞重悬浮液，在与初始测定中所用的条件相同的条件下，进行动力学测定。对已经确认的具有增加的HMTBN活性的推定高表达突变型进行测序，并且在转化回相同表达菌株后，试验增加的活性，以确保活性的增加不是由于宿主突变。

【000495】所确认的nitB GSSM^TM高表达突变型是nitB G46P，其在氨基酸46上具有甘氨酸(GGT)到脯氨酸(CCG)的取代。在25℃和35℃下，该突变体的全细胞HMTBN活性比野生型NitB均大约高50％。一旦鉴别了有利的G46P突变，再次使用nitB G46P模板，用GSSM^TM来产生双重突变体的集合。这些突变体都含有G46P突变，以及在一个随机位点具有额外的单一氨基酸取代。测定双重突变体的HMTBN活性，其高于nitB G46P的HMTBN活性。产生双重、三重和四重突变体，以便加速突变过程，更快地鉴别有利的突变。在鉴别和分离了最初几个有利的突变之后，将它们组合以产生双重突变体，其中最好的是DMl8。DMl8被用作模板来产生三重突变体。最有活性的三重突变体是TM3，其被用作模板来产生四重突变体。最有活性的四重突变体是QM2。该表概括了这些突变。

突变体	突变1	突变2	突变3	突变4
突变体	突变1	突变2	突变3	突变4	DMl8	R(gcg)29C(tgt)	Y(tac)207M(atg)
TM3	R(gcg)29C(tgt)	Y(tac)207M(atg)	L(ctt)170T(act)		DMl8	R(gcg)29C(tgt)	Y(tac)207M(atg)
TM3	R(gcg)29C(tgt)	Y(tac)207M(atg)	L(ctt)170T(act)		QM2	R(gcg)29C(tgt)	Y(tac)207M(atg)	L(ctt)170T(act)	A(gcg)197 N9(aat)

【000496】首先通过研究这些突变体的全细胞HMTBN活性表征这些突变体。在100mM HMTBN，QM2的HMTBS生产率比亲本基因的HMTBS生产率高1.2倍。然而，在200mM HMTBN，QM2的HMTBS生产率是亲本基因的3.6倍。当HMTBN浓度从100mM增加到300mM时，这些突变体的生产率有相应增加。对于转化率，在270分钟后，TM3完全地转化了底物，在该时间之后，DMl8和SM均显示出高于75％的转化率。为了进一步着手于HMTBN浓度影响NitB的活性/生产率的问题，在400mM和528mM HMTBN下，测定了好几种突变体。NitB在这些底物浓度下实质上没有活性，然而突变体在这些浓度下保留了显著的活性。尤其是，这些高浓度下的活性与它们在200mM底物下的活性实质上相同。因此，这些突变体可以在广泛的底物浓度范围内使用，并且可以在使用上提供比NitB亲本基因更好的灵活性。

【000497】突变体显示出比亲本基因具有更高的表达水平，而且，正如SDS-PAGE分析中所看到的，似乎QM2和TM3突变体比野生型含有更大比例的可溶性酶。至于稳定性，所有酶在25℃和35℃显示出实质上相同的稳定性模式。

【000498】最后，对突变体进行密码子最优化。该方法的目的在于最优化密码子，从而增加特定宿主细胞中的表达水平。这反过来又增加酶的每个细胞的活性。与对照组相比，这导致密码子最优化的突变体中全细胞活性的增加。活性的增加量大约是该活性的两倍。使用大肠杆菌表达系统。

实施例19：从腈水解酶催化剂的反应所产生的化合物的选择实施例

【000499】图15中所列出的化合物是所选择的、可以使用本发明的酶和/或方法从腈水解酶催化的反应中产生的化合物。

【000500】此外，下面是可以通过腈水解酶斯特雷克尔格式(Strecker format)产生的潜在的化合物。可以使用本发明的腈水解酶从它们各自的醛或酮产生多于100种氨基酸和许多新颖药物。例如，可以使用本发明的腈水解酶合成的具有很大市场的药物包括：同聚苯丙氨酸(homophenylalanine)，VASOTEC^TM，VASOTERIC^TM，TECZEM^TM，PRINIVIL^TM，PRINZIDE^TM，ZESTRIL^TM，ZESTORETIC^TM，RAMACE^TM，TARKA^TM，MAVIK^TM，TRANDOAPRIL^TM，TRANDOLAPRILAT^TM，ALTACE^TM，ODRIK^TM，UNIRETIC^TM，LOTENSIN^TM，LOTREL^TM，CAPOTEN^TM，MONOPRIL^TM，TANATRIL^TM，ACECOL^TM，LONGES^TM，SPIRAPRIL^TM，QUINAPRIL^TM和CILAZAPRIL^TM。其它手性药物包括DEMSER^TM(α-甲基-L-酪氨酸)，ALDOCHLOR^TM，LEVOTHROID^TM，SYNTHROID^TM，CYTOMEL^TM，THYOLAR^TM，HYCODAN^TM，CUPRIMINE^TM，DEPEN^TM，PRIMAXIN^TM，MIGRANOL^TM，D.H.E.-45，DIOVAN^TM，CEFOBID^TM，L-DOPA，D-DOPA，D-α-甲基-DOPA，L-α-甲基-DOPA，L-γ-羟基谷氨酸，D-γ-羟基谷氨酸，3-(2-萘基)-L-丙氨酸，D-高丝氨酸和L-高丝氨酸。

【000501】此外，本发明的腈水解酶可以用于合成下述氨基酸。这些氨基酸中的许多氨基酸具有药物应用。D-苯基甘氨酸，L-苯基甘氨酸，D-羟基苯基甘氨酸，L-羟基苯基甘氨酸，L-叔亮氨酸，D-叔亮氨酸，D-异亮氨酸，L-异亮氨酸，D-正亮氨酸，L-正亮氨酸，D-正缬氨酸，L-正缬氨酸，D-2-噻吩基甘氨酸，L-2-噻吩基甘氨基，L-2-氨基丁酸酯，D-2-氨基丁酸酯，D-环亮氨酸，L-环亮氨酸，D-2-甲基苯基甘氨酸，L-2-甲基苯基甘氨酸，L-噻吩基丙氨酸和D-噻吩基丙氨酸。

【000502】本发明的腈水解酶的酶能用于合成下述天然氨基酸：甘氨酸，L-丙氨酸，L-缬氨酸，L-亮氨酸，L-异亮氨酸，L-苯基丙氨酸，L-酪氨酸，L-色氨酸，L-半胱氨酸，L-甲硫氨酸，L-丝氨酸，D-丝氨酸，L-苏氨酸，L-赖氨酸，L-精氨酸，L-组氨酸，L-天冬氨酸，L-谷氨酸，L-天冬酰胺，L-谷氨酰胺和L-脯氨酸。下面是可以使用本发明的腈水解酶产生的非天然氨基酸的实例。D-丙氨酸，D-缬氨酸，D-亮氨酸，D-异亮氨酸，D-苯基丙氨酸，D-酪氨酸，D-色氨酸，D-半胱氨酸，D-甲硫氨酸，D-苏氨酸，D-赖氨酸，D-精氨酸，D-组氨酸，D-天冬氨酸，D-谷氨酸，D-天冬酰胺，D-谷氨酰胺和D-脯氨酸。

【000503】进一步，本发明的腈水解酶可以在非斯特雷克尔化学反应(non-Strecherchemical reactions)中使用，包括更多手性药物的合成，如TAXOTERE^TM，以及含有3-羟基-戊二腈($5.5B的市场)；LIPITOR^TM，BAYCOL^TM和LESCOL^TM的手性药物。不是药物的手性产物靶物质包括PANTENOL^TM，L-膦丝菌素(L-phosphinothricin)，D-膦丝菌素(D-phosphinothricin)，D-氟苯基丙氨酸和L-氟苯基丙氨酸。最后，腈水解酶可以被用来产生缺乏手性中心的非天然氨基酸化合物，如肌氨酸，亚氨基二乙酸，乙二胺四乙酸(EDTA)，α-氨基丁酸和β-丙氨酸。

图16是本发明的腈水解酶和/或本发明的方法所产生的底物和产物的实例。所示为底物和产物的化学结构。此处所示的化学反应是本发明的腈水解酶活性的非限定性实例。

实施例20：使用SEQ ID NO：210的变体的多肽的例证性制备

【000504】变体，腈水解酶1506-83-H7A，是在残基190处用His取代Ala的SEQID NO：210。在密码子水平，所发生的突变是GCT到CAT。该变体在3-羟基戊二酰基腈(HGN)转化为(R)-4-氰基-3-羟基丁酸中表现出改进的对映选择性。

【000505】该变体已经被证明，在室温下，在100mM pH7磷酸钠缓冲液中进行该转化。该突变体可以在其它缓冲液系统和温度下进行，以及具有提供额外的改变特性的潜力。例证性特性包括，但不限于，改变的反应速率，％ee和稳定性。尤其是，改变的特性可以是较高的反应速率，较高的％ee和较高的稳定性。改变的特性可以是高于野生型至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。

【000506】该变体显示出通过以10mM到3M底物(HGN)的高对映体过量产生产物来进行转换。较高或较低底物浓度也是可能的。已经达到了大于或等于95％的对映体过量。然而，对映体过量可以是高于野生型的至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％。

【000507】本发明的SEQ ID NOS：的变体可以被克隆到表达载体中。例如，核酸序列SEQ ID NO：195，205，207，209或237的变体，和编码氨基酸序列SEQ ID NO：210的变体的核苷酸可以被克隆到例证性载体中，包括但不限于，pSE420(大肠杆菌表达载体)和pMYC(假单胞菌属表达载体)。

实施例21：使用本发明的变体的制备：

【000508】在室温下，～22℃，将3-羟基戊二酰基腈(1g，9mmol)滴加到在2.12mL的100mM pH7磷酸钠缓冲液中的腈水解酶细胞溶解产物的搅拌溶液中(标准化为150mg蛋白含量)。在室温下，用磁力搅拌棒将该3M溶液搅拌24小时。通过TLC(薄层色谱)和GC(气相色谱)监控反应进程。反应应该在24小时内完成。

【000509】此处预期的其它变体包括，但不限于下述：N111S；Al90H，S，Y或T；F191L，V，M，D，G，E，Y或T；M199E，或L；D222L；A55K，G或Q；I60E，或其任意组合。

实施例22：对映选择性转化的筛选测定分析

【000510】公开了一种新颖方法，用于筛选对映选择性转化，例如将前手性底物对映选择性地转化为手性底物，该方法可以提供监控所得到的产物的对映体过量(％ee)的能力。该方法也适用于确定非对映体过量(％de)。

【000511】例如，通过标记一个分子中的两个前手性或互变性(enantiotopic)部分之一，例如通过使用重同位素或轻同位素，可以通过质谱(MS)建立由选择性催化剂例如酶对两个部分中的一个进行修饰。

【000512】通过在¹⁵N-(R)-HGN(R)(如图17所示)或¹⁵N-(S)-HGN上进行例证性腈水解酶反应，可以通过分析被形成的两个可能标记产物与未标记酸性产物的每一种的量，确定酶的对映选择性。

【000513】筛选实验可以在任一个方向进行。筛选实验可以被用于15N-(R)-和(S)-HGN部分。事实上，为了确保标记物不招致任何人为假象变化，开始时应该对两个都进行研究。

【000514】为了使所观察的腈水解酶转化所得到的对映体过量相等，可以使用下述例证性公式：

％ee＝{[130]-[129]}/{[130]+[129]}，其中轻酸(129)和重酸(130)的每一浓度通过质谱仪上的峰面积与标准曲线的相关性确定，或者通过直接比较129和130质谱峰中的每一个的面积来确定。用于确定两个对映异构体中的每一个的相对量(标记的和未标记的)的实际质量单位(actual mass units)依赖于质谱仪是如何调整的。

【000515】在一些情况下，通过质谱观察到的％ee可能与另一个替代性分析技术如液相色谱观察到的不同，具有一个因数的不同，这是由于天然同位素丰度所产生的背景或污染峰。然而，这不影响筛选过程的最终结果。量化重酸和轻酸的例证性标准曲线如图14A和B所示。

【000516】下述反应是可能的合成路线，例如用于制备15N(R)-HGN，使用了可商购的起始材料和本技术领域已知的化学技术。

【000517】通过以任一种阳性模式、阴性模式，使用MS，并且或者从亲本质量或者从任何碎裂质量的分析中，可以建立两种可能的立体结果中的每个结果的量。

实施例23：本发明的例证性酶的稳定性和活性

酶稳定性：

将野生型酶(SEQ ID NOS：209和210)与SEQ ID NOS：209和210的突变体A190H比较。在实验中，在两种不同的底物：己二腈和羟基戊二酰基腈上，在4℃和21℃，在水中以10mg/ml将每一种酶温育1、25、50、75和150小时。在所有情况下，发现两种酶可以将活性保持150小时。正如通过Nitroprusside Bertholit测定所评价的那样，野生型酶在己二腈上显示出较好的活性，而突变(A190H)的酶在羟基戊二酰基腈上显示出较好的活性(例如参见，Fawcett，J.K.&Scott，J.(1960)；J.Clin.Path.；第13卷，第156页)。

SEQ ID NOS：209和210的GSSM^TM变体	100mM羟基戊二酰基腈ee％	2.5mM羟基戊二酰基腈ee％	完成的时间(小时)
SEQ ID NOS：209和210的GSSM^TM变体	100mM羟基戊二酰基腈ee％	2.5mM羟基戊二酰基腈ee％	完成的时间(小时)	A55G	96.5±0.4	未测定	＞160
A55K	94.7±0.2	未测定	＞160	A55G	96.5±0.4	未测定	＞160
A55K	94.7±0.2	未测定	＞160	160E	96.5±0.5	未测定	＞160
N111S	95.8±0.5	96.1±0.9	＞160	160E	96.5±0.5	未测定	＞160
N111S	95.8±0.5	96.1±0.9	＞160	A190T	96.5±0.2	96.6±0.4	40
A190S	96.8±0.2	95.5±0.7	40	A190T	96.5±0.2	96.6±0.4	40
A190S	96.8±0.2	95.5±0.7	40	A190H	97.9±0.1	98.1±0.1	15
F191L	97.9±0.1	未测定	＞160	A190H	97.9±0.1	98.1±0.1	15
F191L	97.9±0.1	未测定	＞160	F191T	97.9±0.1	未测定	＞160
F191M	97.9±0.1	未测定	＞160	F191T	97.9±0.1	未测定	＞160
F191M	97.9±0.1	未测定	＞160	F191V	97.9±0.1	未测定	＞160
M199E	97.9±0.1	未测定	160	F191V	97.9±0.1	未测定	＞160
M199E	97.9±0.1	未测定	160	M199L	97.9±0.1	95.4±0.1	＞160
野生型SEQ IDNOS：209和210	94.5±0.1	87.8±0.2	24	M199L	97.9±0.1	95.4±0.1	＞160

GSSM突变体具有增强的对映选择性

在全细胞格式中，用从大肠杆菌表达的腈水解酶进行100mM反应，用36小时完成该反应。用腈水解酶作为冻干澄清细胞溶解产物，进行2.25M反应。所有报道的％ee数据是三次测量值的平均值，并给出平均数标准差。反应完成的时间是通过TLC大概估计的。

特异性：

腈水解酶活性测定，100mM HGN：

对推定腈水解酶高表达突变型进行三重测定。将每一转化体，于37℃和220rpm下，在5mL LB(100μg/mL氨苄青霉素)中培养18小时。将过夜培养物进行2倍稀释，用0.1mM IPTG于37℃和220rpm下诱导水解酶表达6小时。通过离心收获细胞，在100mM pH7磷酸钠缓冲液中洗涤，然后重悬浮在1mL的处于100mM pH7磷酸钠缓冲液中的100mM HGN中。轻轻地搅拌，在22℃允许反应至少继续进行36小时。反应进程通过TLC(1∶1 EtOAc∶己烷，Rf＝0.5，腈；Rf＝0.0，酸)监控。通过离心，去除细胞和其它碎片，在冻干之前用1体积甲醇处理。将冻干物质重新悬浮在甲醇中，用四甲基硅烷(TMS)-重氮甲烷处理(10当量，溶解在己烷中的2M溶液)，直到气体形成停止，黄色持续，以便制备用于GC分析的甲基酯。然后评价所选择的产生具有95％ee或更高ee的(R)-(-)-3-羟基-4-氰基丁酸的腈水解酶变体在2.25M HGN上的性能。

在2.25M 3-HGN下的腈水解酶活性测定

将3-HGN(0.2g，1.8mmol，3M)于22℃悬浮在磷酸钠缓冲液(0.6mL，pH7，100mM)中。加入细胞溶解产物(6mg，标准化为腈水解酶含量)，使浓度达到11mg/ml酶，振荡反应物(100rpm，22℃)。反应进程通过TLC(1∶1乙酸乙酯∶己烷，Rf＝0.32，腈；Rf＝0.0，酸)监控。在冻干之前，用1份甲醇处理反应混合物。将冻干物质重悬浮在甲醇中，用10当量TMS-重氮甲烷处理(10当量，溶解在己烷中的2M溶液)，以便制备甲基酯，并且通过GC分析。

用于筛选高数量样品的新颖高流通量LC/MS方法的描述：

超高流通量(Ultra Hieh-throughput)初步手性活性筛选：

通过自动化菌落分选仪将GSSM文库的不同成员分配到含有40μL(Luria-Bertani)LB培养基(100μg/mL氨苄青霉素)的384孔平板中，然后于37℃，85％湿度下，将其温育。用0.1mM IPTG于37将腈水解酶表达诱导24小时。复制每一平板，制备20％甘油原种，归档保存在-80℃下。将10mM 15N-(R)-1底物加入到每一个384孔平板中。于37℃、85％湿度下，将平板温育3天。通过离心去除细胞和其它碎片，在进行质谱分析之前，将上清液稀释17,576倍。

LC/MS离子喷雾以下述方式适用于高流通量(through-put)分析。通过使用CTCPAL自动取样器(Leap Technologies，Carrboro，N.C.)，从384孔平板流动注射样品实现了高流通量筛选。使用71％乙腈、29％水等度混合物，带有0.1％的甲酸，通过LC-10Advp泵(Shimadzu，Kyoto，Japan)以2.2mL/分钟通过LC-18滤筒(Supelco，Bellefonte，PA)予以提供。样品适用于API 4000 TurboIon喷雾三联四级质谱仪(Applied Biosystems，Foster City，CA)。以负离子模式，对分析物进行离子喷雾和多重反应监控(MRM)，每一分析需要60秒。

用野生型酶(SEQ ID NOS：209和210)转化的大肠杆菌被用作阳性活性对照组，用空载体(empty vector)转化的大肠杆菌被用作阴性活性对照组。或者用15N-(R)-1或者用15N-(S)-1通过质谱确定的野生型(WT)酶阳性对照组的％ee是相同的，从而证明了不存在显著的同位素影响。

温度(℃)	pH	磷酸钠缓冲液浓度(mM)	％ee	标准偏差
温度(℃)	pH	磷酸钠缓冲液浓度(mM)	％ee	标准偏差	4	7	100	98.7	0.1％
19	7	100	98.7	0.1％	4	7	100	98.7	0.1％
19	7	100	98.7	0.1％	21	7	100	98.6	0.1％
37	7	100	98.4	0.1％	21	7	100	98.6	0.1％
37	7	100	98.4	0.1％	21	7	100	98.6	0.1％
21	6	100	98.6	0.1％	21	7	100	98.6	0.1％
21	6	100	98.6	0.1％	21	8	100	98.6	0.1％
21	7	100	98.5	0.1％	21	8	100	98.6	0.1％
21	7	100	98.5	0.1％	21	7	50	98.6	0.1％
21	7	25	98.7	0.1％	21	7	50	98.6	0.1％

反应参数对具有A190H突变的SEQ ID NOS：209和210的作用

反应使用150mg/ml蛋白(～49mg/ml酶)，在3M HGN浓度下进行。％ee是通过三份重复运行的GC分析确定的。

【000518】尽管本发明已经参考某些优选的方面进行了详细的描述，但应该理解到，修改和变化也在所描述和权利要求所要求的范围和精神内。

序列表

<110>戴弗萨公司

<120>腈水解酶、编码腈水解酶的核酸，以及制备和使用它们的方法

<130>CPUSZ42557

<140>PCT/US03/15712

<141>2003-05-15

<150>US 10/241,742

<151>2002-09-09

<150>US 10/146,772

<151>2002-05-15

<150>US 60/309,006

<151>2001-07-30

<150>US 60/351,336

<151>2002-01-22

<150>US 60/300,189

<151>2001-06-21

<150>US 09/751,299

<151>2000-12-28

<150>US 60/254,414

<151>2000-12-07

<150>US 60/173,609

<151>1999-12-29

<160>386

<170>FastSEQ for Windows Version 4.0

<210>1

<211>939

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>1

atggaaaagt atattaaagt cgccgcaatt cagatagcta caaaaatagc agattcaccc 60

gtgaatatag aaaattgcga acgtttggca ttatcggcgg tcaatgaggg tgcgcgttgg 120

attgctttgc cggagttctt caatacgggc gttagttgga acaaaaaaat tgccttggct 180

attcagacgc ctgacggcaa ggctgcgatg ttcttacgcg acttttctgc aagacatcat 240

gtattgatag gaggctcatt tctgtgcagg ttgccggatg gcagtgtgcg caaccgctat 300

atgtgttatg ccaacggcgc tctcgtgggc aaacatgaca aagacctacc cacgatgtgg 360

gaaaatgctt tttatgaagg tggggattcc agcgatattg gggtgctggg aacatttgaa 420

aatacgcgcg ttggtgcagc cgtctgttgg gagttcatgc ggacgatgac tgcccggcgt 480

cttcgcaatc aggtggatgt catcatgggt ggttcctgct ggtggagcat accgaccaat 540

ttccccggtt ttgtgcaaaa gctgtgggaa cctggaaata gccgcaacgc gcttgctgcc 600

atacaggata atgcgcgtct cattggcgtg ccggttgttc atgccgctca ttgcggtgaa 660

attgagtgtc cgatgccagg attgccgata ggttacaggg ggttctttga gggtaacgcg 720

gccattgtga atgcagaagg tcaggtgctt gcgcatcggg gtgctggcga gggcgaagga 780

attgtttgcg cggagatttt accggtagcc aaatcaaaca ggtcggaaat tcccaatcgt 840

tactggttgc gctgcagagg ctttctacct atttttgcct ggcatcagca acgttggttg 900

ggaaggcatt ggtatttgcg caatgtgcgc aggacttaa 939

<210>2

<211>312

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>2

Met Glu Lys Tyr Ile Lys Val Ala Ala Ile Gln Ile Ala Thr Lys Ile

1 5 10 15

Ala Asp Ser Pro Val Asn Ile Glu Asn Cys Glu Arg Leu Ala Leu Ser

20 25 30

Ala Val Asn Glu Gly Ala Arg Trp Ile Ala Leu Pro Glu Phe Phe Asn

35 40 45

Thr Gly Val Ser Trp Asn Lys Lys Ile Ala Leu Ala Ile Gln Thr Pro

50 55 60

Asp Gly Lys Ala Ala Met Phe Leu Arg Asp Phe Ser Ala Arg His His

65 70 75 80

Val Leu Ile Gly Gly Ser Phe Leu Cys Arg Leu Pro Asp Gly Ser Val

85 90 95

Arg Asn Arg Tyr Met Cys Tyr Ala Asn Gly Ala Leu Val Gly Lys His

100 105 110

Asp Lys Asp Leu Pro Thr Met Trp Glu Asn Ala Phe Tyr Glu Gly Gly

115 120 125

Asp Ser Ser Asp Ile Gly Val Leu Gly Thr Phe Glu Asn Thr Arg Val

130 135 140

Gly Ala Ala Val Cys Trp Glu Phe Met Arg Thr Met Thr Ala Arg Arg

145 150 155 160

Leu Arg Asn Gln Val Asp Val Ile Met Gly Gly Ser Cys Trp Trp Ser

165 170 175

Ile Pro Thr Asn Phe Pro Gly Phe Val Gln Lys Leu Trp Glu Pro Gly

180 185 190

Asn Ser Arg Asn Ala Leu Ala Ala Ile Gln Asp Asn Ala Arg Leu Ile

195 200 205

Gly Val Pro Val Val His Ala Ala His Cys Gly Glu Ile Glu Cys Pro

210 215 220

Met Pro Gly Leu Pro Ile Gly Tyr Arg Gly Phe Phe Glu Gly Asn Ala

225 230 235 240

Ala Ile Val Asn Ala Glu Gly Gln Val Leu Ala His Arg Gly Ala Gly

245 250 255

Glu Gly Glu Gly Ile Val Cys Ala Glu Ile Leu Pro Val Ala Lys Ser

260 265 270

Asn Arg Ser Glu Ile Pro Asn Arg Tyr Trp Leu Arg Cys Arg Gly Phe

275 280 285

Leu Pro Ile Phe Ala Trp His Gln Gln Arg Trp Leu Gly Arg His Trp

290 295 300

Tyr Leu Arg Asn Val Arg Arg Thr

305 310

<210>3

<21l>981

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>3

atggggaatt cgttcaagat cgcggtggta caagcctgtc cggtctttct ggatcgtggc 60

gcgacagtcg ccaaggcatg ccgcctgatc gcggaggcag ccgcggcggg cgccagcctg 120

gtggtctttc cggaggcgtt tgtgcccgga tacccactgt gggtctggtt cattccggca 180

gggcattcgc aaccactgcg ggagttatac gccgaactgg tggggaacgc cgtggcggta 240

ccgggcgatg ccaccgatcg gctttgcgcg gcagccagag aagccggcgt ggtagtggcg 300

atcggcatca atgaagtgaa cagcgaagcc agcggcacga cgatttacaa tacgctgctg 360

tacatcggag cggacggcgc gattctgggc aaacaccgca aagtaatgcc gacgggcgga 420

gagcgcctgg tctgggcgct tggcgatggg agcgacctgg aggtctacga cctgcctttc 480

ggccgattgg gtggcctgtt gtgctgggag aactacatgc ccctggcccg gtacgcgatg 540

tcggcatggg gaaccgagat ctacgtggct ccaacttggg atcgcggaga accgtggctg 600

tccacaatgc ggcatatcgc gaaagaaggg cgatgctacg tagtgggatg ctgcagttgc 660

atgaaaattg acgatgtacc cgaccggctg gcgttcaaag ggaagtatct gtcgacggcc 720

gagggctggc tcaaccccgg cgatagcgta atcgtcgatc cggacggcaa gctgatcgcg 780

ggcccggcaa gcgagcagga gacgattctg tatgccgatg ccgaccggtc taagatcacc 840

gggcccaggt ggcagttgga tgtggccggc cactacgcgc ggccggatat cttcgaactg 900

atcgtgcacc gcgaacctaa gcgatttttg acgatagctc cgcggacgaa ggaggagcgg 960

gagcctgggc cggaggcctg a 981

<210>4

<21l>326

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>4

Met Gly Asn Ser Phe Lys Ile Ala Val Val Gln Ala Cys Pro Val Phe

1 5 10 15

Leu Asp Arg Gly Ala Thr Val Ala Lys Ala Cys Arg Leu Ile Ala Glu

20 25 30

Ala Ala Ala Ala Gly Ala Ser Leu Val Val Phe Pro Glu Ala Phe Val

35 40 45

Pro Gly Tyr Pro Leu Trp Val Trp Phe Ile Pro Ala Gly His Ser Gln

50 55 60

Pro Leu Arg Glu Leu Tyr Ala Glu Leu Val Gly Asn Ala Val Ala Val

65 70 75 80

Pro Gly Asp Ala Thr Asp Arg Leu Cys Ala Ala Ala Arg Glu Ala Gly

85 90 95

Val Val Val Ala Ile Gly Ile Asn Glu Val Asn Ser Glu Ala Ser Gly

100 105 110

Thr Thr Ile Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Gly Ala Asp Gly Ala Ile

115 120 125

Leu Gly Lys His Arg Lys Val Met Pro Thr Gly Gly Glu Arg Leu Val

130 135 140

Trp Ala Leu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Glu Val Tyr Asp Leu Pro Phe

145 150 155 160

Gly Arg Leu Gly Gly Leu Leu Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro Leu Ala

165 170 175

Arg Tyr Ala Met Ser Ala Trp Gly Thr Glu Ile Tyr Val Ala Pro Thr

180 185 190

Trp Asp Arg Gly Glu Pro Trp Leu Ser Thr Met Arg His Ile Ala Lys

195 200 205

Glu Gly Arg Cys Tyr Val Val Gly Cys Cys Ser Cys Met Lys Ile Asp

210 215 220

Asp Val Pro Asp Arg Leu Ala Phe Lys Gly Lys Tyr Leu Ser Thr Ala

225 230 235 240

Glu Gly Trp Leu Asn Pro Gly Asp Ser Val Ile Val Asp Pro Asp Gly

245 250 255

Lys Leu Ile Ala Gly Pro Ala Ser Glu Gln Glu Thr Ile Leu Tyr Ala

260 265 270

Asp Ala Asp Arg Ser Lys Ile Thr Gly Pro Arg Trp Gln Leu Asp Val

275 280 285

Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Ile Phe Glu Leu Ile Val His Arg

290 295 300

Glu Pro Lys Arg Phe Leu Thr Ile Ala Pro Arg Thr Lys Glu Glu Arg

305 310 315 320

Glu Pro Gly Pro Glu Ala

325

<210>5

<211>1005

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>5

atgggtacca agcacccggc cttcaaggcc gcagtggtcc aggccgcgcc ggaatggctc 60

gatctcgacc gcaccgtcga caagaccatc gcgctgatcg aggaggccgc cggcgccggc 120

gcgaagctca ttgcgttccc ggaaacctgg attcccggct atccgtggca catctgggtc 180

ggcacgccgg cgtgggcgat cagccgcggc ttcgtgcagc gctacttcga caattcactg 240

gcctacgaca gcccgcaggc ccagcgcatc gcggacgccg cgaagaagaa caagatcacc 300

gtggtgctcg gcctgtcgga gcgcgagggt ggcagccttt atatctcgca gtggctgatt 360

gggccggacg gcgagaccat tgccaagcgc cgcaaactgc gccccaccca cgtcgagcgc 420

accgtgttcg gcgatggcga cggcagccac atcgcggtgc acgagcgtgc tgacatcggc 480

cgcctcggcg cgctgtgctg ctgggagcac atccagccgc tgaccaaata cgccatgtat 540

gcccagaacg agcaggtgca cgtcgccgcc tggccgagct tctcgatgta cgagccgttc 600

gcccacgcgc tcggctggga agtcaacaat gcggcgagca agatctacgc cgtcgaaggc 660

tcgtgtttcg tgctcggcgc atgcgcggtg atctcgcagg cgatggtcga cgaaatgtgc 720

gacaccgagg acaagcgggc gctggtccat gccggcggcg gccacgcggt gatcttcggg 780

ccggacggca gatcgctggc ggacaagatt ccggagaccc aggaaggcct gctctatgcc 840

gacatcgacc tcggcgcaat tggcgtggcc aagaacgcgg ccgatccggc ggggcactac 900

tcgcgcccgg acgtgacgcg gctcctgttc aacaacaagc cggcgcgccg ggtcgagtat 960

ttctcgctgc cggtcgacgc ggtcgagacg ccgccgcagc cctga 1005

<210>6

<211>334

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>6

Met Gly Thr Lys His Pro Ala Phe Lys Ala Ala Val Val Gln Ala Ala

l 5 10 15

Pro Glu Trp Leu Asp Leu Asp Arg Thr Val Asp Lys Thr Ile Ala Leu

20 25 30

Ile Glu Glu Ala Ala Gly Ala Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Trp Ile Pro Gly Tyr Pro Trp His Ile Trp Val Gly Thr Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Ser Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ala Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Gln Arg Ile Ala Asp Ala Ala Lys Lys

85 90 95

Asn Lys Ile Thr Val Val Leu Gly Leu Ser Glu Arg Glu Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Ser Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

115 120 125

Lys Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Val Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Asp Gly Asp Gly Ser His Ile Ala Val His Glu Arg Ala Asp Ile Gly

145 150 155 160

Arg Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Ile Gln Pro Leu Thr Lys

165 170 175

Tyr Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Val Ala Ala Trp Pro

180 185 190

Ser Phe Ser Met Tyr Glu Pro Phe Ala His Ala Leu Gly Trp Glu Val

195 200 205

Asn Asn Ala Ala Ser Lys Ile Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val

210 215 220

Leu Gly Ala Cys Ala Val Ile Ser Gln Ala Met Val Asp Glu Met Cys

225 230 235 240

Asp Thr Glu Asp Lys Arg Ala Leu Val His Ala Gly Gly Gly His Ala

245 250 255

Val Ile Phe Gly Pro Asp Gly Arg Ser Leu Ala Asp Lys Ile Pro Glu

260 265 270

Thr Gln Glu Gly Leu Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Gly Ala Ile Gly

275 280 285

Val Ala Lys Asn Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp

290 295 300

Val Thr Arg Leu Leu Phe Asn Asn Lys Pro Ala Arg Arg Val Glu Tyr

305 310 315 320

Phe Ser Leu Pro Val Asp Ala Val Glu Thr Pro Pro Gln Pro

325 330

<210>7

<211>999

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>7

atgccgagtg attatcatgc tccattcaaa gtagcagttg tccaggcaac tcccgtcttt 60

ctcgatcgca gcgcgacgat tgagaaggca tgtgagctaa ttgcctgtgc tggacgtgag 120

ggcgcacgtc tgatcgtgtt tcctgaagcg ttcattccca cctatcccga ttgggtctgg 180

accattccac ctggggagat gcggctgctt ggcgaactct acacagagtt gcttgccaat 240

gcggtcacga tccccagtaa tgcaacggat aggctctgcc aggctgcgaa acgagctgct 300

gcgtatgtgg tcatgggaat gaacgaacgc aatatcgagg cgagtggaag gagtctctat 360

aacaccctgt tatacatcga tgctcagggc cagatcatgg gcaaacaccg caagttgata 420

cccacagccg gtgagcggct catatgggcg caaggagatg ggagtacatt ccaggtctac 480

gatactcctc tgggcaaact gggagggctc atctgctggg aaaactacat gcctctggct 540

cgctatgcga tgtatgcctg gggcacgcag atttatgtcg ccccgacatg ggatcgtggc 600

aacctctggc tctctactct gcggcatatc gctaaggagg gaggcgtcta tgttcttggt 660

tgtagtatgg tcatgcgcaa gaatgacatt cccgatcact ttgctttcaa agagcagttt 720

tatgctactg tggacgaatg gatcaacgtt ggtgacagcg ccattgtcca tcccgagggg 780

aactttcttg cgggaccggt gcgccacaaa gaagagattc tctatgcaga acttgatcca 840

cgccaatcgt gcggtccggg atggatgctc gatgtggctg ggcactatgc acgccctgat 900

gtgtttgaat tgattgtcca cacagagatg cgacccatga tgaagcaaga agaggtagga 960

ggagaaaata catctgaggg aggtgtacga ttcttgtaa 999

<210>8

<211>332

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>8

Met Pro Ser Asp Tyr His Ala Pro Phe Lys Val Ala Val Val Gln Ala

1 5 10 15

Thr Pro Val Phe Leu Asp Arg Ser Ala Thr Ile Glu Lys Ala Cys Glu

20 25 30

Leu Ile Ala Cys Ala Gly Arg Glu Gly Ala Arg Leu Ile Val Phe Pro

35 40 45

Glu Ala Phe Ile Pro Thr Tyr Pro Asp Trp Val Trp Thr Ile Pro Pro

50 55 60

Gly Glu Met Arg Leu Leu Gly Glu Leu Tyr Thr Glu Leu Leu Ala Asn

65 70 75 80

Ala Val Thr Ile Pro Ser Asn Ala Thr Asp Arg Leu Cys Gln Ala Ala

85 90 95

Lys Arg Ala Ala Ala Tyr Val Val Met Gly Met Asn Glu Arg Asn Ile

100 105 110

Glu Ala Ser Gly Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Asp Ala

115 120 125

Gln Gly Gln Ile Met Gly Lys His Arg Lys Leu Ile Pro Thr Ala Gly

130 135 140

Glu Arg Leu Ile Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Phe Gln Val Tyr

145 150 155 160

Asp Thr Pro Leu Gly Lys Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr

165 170 175

Met Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile Tyr

180 185 190

Val Ala Pro Thr Trp Asp Arg Gly Asn Leu Trp Leu Ser Thr Leu Arg

195 200 205

His Ile Ala Lys Glu Gly Gly Val Tyr Val Leu Gly Cys Ser Met Val

210 215 220

Met Arg Lys Asn Asp Ile Pro Asp His Phe Ala Phe Lys Glu Gln Phe

225 230 235 240

Tyr Ala Thr Val Asp Glu Trp Ile Asn Val Gly Asp Ser Ala Ile Val

245 250 255

His Pro Glu Gly Asn Phe Leu Ala Gly Pro Val Arg His Lys Glu Glu

260 265 270

Ile Leu Tyr Ala Glu Leu Asp Pro Arg Gln Ser Cys Gly Pro Gly Trp

275 280 285

Met Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Glu Leu

290 295 300

Ile Val His Thr Glu Met Arg Pro Met Met Lys Gln Glu Glu Val Gly

305 310 315 320

Gly Glu Asn Thr Ser Glu Gly Gly Val Arg Phe Leu

325 330

<210>9

<211>945

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>9

atggcggctc acaagatcgc ggtggttcag gcgcccagcg ttctcctcga tcgcgagggc 60

tcggtcgcgc gcgcggtcac gctgctcgac gaggcggcgg cggccggcgc ccgcctggtc 120

gtgtttccgg aggcctacat ccccggctac ccggactgga tctggcgcct gcgcccctac 180

ccggacgtca agctggccgc cgagctgcac gaacggctgc tcgccaacgc ggtggatctc 240

tccaccgacg tgctggcgcc ggtgctggcg gcggcggcgc gtcacgggct caccgtggtc 300

atgtgcgtgc aggagcgcga cgccggattc agccgcgcca cactttacaa caccgcgctg 360

gtcatcgacg ccgccggcaa gatcgcgaac cggcaccgca agctcatgcc caccaacccc 420

gagcgaatgg tgtggggatt cggtgacgcc tcggggctgc gggtggtgag cacgcccgtc 480

gggcgggtgg gcacgctcct gtgctgggag agctacatgc ccctggcgcg ctgcgcgctc 540

tacgccgagg gggtcgagat ctacgtgacc ccgacctggg actacggcga aggctggcgc 600

gccagcatgc agcacatcgc ccgcgagggg cgctgctggg tggtgaccgc ttgcatgtgc 660

gtgcaggcgc gcgacgtgcc ggccgacttc cccgggcgcg cccagctcta ccccgacgag 720

gaggagtggt tgaaccccgg cgattcgctg gtggtcgacc ccggcggcaa gatcgtggcc 780

ggtccgatgt cgcgcgagaa ggggatcttg tacgcggaga tcgatccgga tcgcgtggcg 840

ggggcgcacc gctcgttcga cgtcgtgggc cactactcgc gtcccgacgt gttccggctg 900

gaggtcgatc ggacaccggc ggcgccggtg agcttcaaaa aatga 945

<210>10

<211>314

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>10

Met Ala Ala His Lys Ile Ala Val Val Gln Ala Pro Ser Val Leu Leu

l 5 10 15

Asp Arg Glu Gly Ser Val Ala Arg Ala Val Thr Leu Leu Asp Glu Ala

20 25 30

Ala Ala Ala Gly Ala Arg Leu Val Val Phe Pro Glu Ala Tyr Ile Pro

35 40 45

Gly Tyr Pro Asp Trp Ile Trp Arg Leu Arg Pro Tyr Pro Asp Val Lys

50 55 60

Leu Ala Ala Glu Leu His Glu Arg Leu Leu Ala Asn Ala Val Asp Leu

65 70 75 80

Ser Thr Asp Val Leu Ala Pro Val Leu Ala Ala Ala Ala Arg His Gly

85 90 95

Leu Thr Val Val Met Cys Val Gln Glu Arg Asp Ala Gly Phe Ser Arg

100 105 110

Ala Thr Leu Tyr Asn Thr Ala Leu Val Ile Asp Ala Ala Gly Lys Ile

115 120 125

Ala Asn Arg His Arg Lys Leu Met Pro Thr Asn Pro Glu Arg Met Val

130 135 140

Trp Gly Phe Gly Asp Ala Ser Gly Leu Arg Val Val Ser Thr Pro Val

145 150 155 160

Gly Arg Val Gly Thr Leu Leu Cys Trp Glu Ser Tyr Met Pro Leu Ala

165 170 175

Arg Cys Ala Leu Tyr Ala Glu Gly Val Glu Ile Tyr Val Thr Pro Thr

180 185 190

Trp Asp Tyr Gly Glu Gly Trp Arg Ala Ser Met Gln His Ile Ala Arg

195 200 205

Glu Gly Arg Cys Trp Val Val Thr Ala Cys Met Cys Val Gln Ala Arg

210 215 220

Asp Val Pro Ala Asp Phe Pro Gly Arg Ala Gln Leu Tyr Pro Asp Glu

225 230 235 240

Glu Glu Trp Leu Asn Pro Gly Asp Ser Leu Val Val Asp Pro Gly Gly

245 250 255

Lys Ile Val Ala Gly Pro Met Ser Arg Glu Lys Gly Ile Leu Tyr Ala

260 265 270

Glu Ile Asp Pro Asp Arg Val Ala Gly Ala His Arg Ser Phe Asp Val

275 280 285

Val Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Phe Arg Leu Glu Val Asp Arg

290 295 300

Thr Pro Ala Ala Pro Val Ser Phe Lys Lys

305 310

<210>11

<211>966

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>11

atgactggat cttatcctaa agacacactg atcgttgggc tagctcaaat cgctcctgtc 60

tggctggatc gggcggggac actgtcaaag atactggctc aagtccatgc ggcaaatcaa 120

gcgggttgtc atctcgtagc atttggcgaa gggctgcttc ctggatatcc gttttggatt 180

gagcgaacaa atggcgcgct gttcaactcg actgtacaaa aggaaatcca cgcgcattat 240

atggatcagg cggtgcagat cgaagccggt catctcgatc cgctttgtgc aacagccaag 300

aaatttggaa tcaccgttgt actcggatgc atcgaacgcc cactcgatcg gggcggtcac 360

agcttgtatg caagtctggt atatattgat tccgagggca gcattcaatc cgtgcatcgc 420

aaactaatgc caacctacga agaacgactt acctggtcgt caggcgatgg gcacggttta 480

cgagtgcata ccttaggtgc gtttacggtg ggtggtctca actgttggga aaattggatg 540

cccttggcgc gcgcagcgat gtatggtcag ggtgaagatt tacatgttgc gatctggcca 600

ggcggttctc atctcacgca ggatattacc cgctttattg cgctcgaatc acgttcgtac 660

gtattatctg tctccggtct gatgcgcgca accgattttc caaaagatac tccccatctt 720

gcctccatcc tagctaaagg tgaagagatt cttgcgaatg gtggttcttg tattgcaggt 780

cctgacggca agtgggtcgt tgggcctctt gtaggagaag agaagttaat tgtcgcaacc 840

attgatcact gccgcgtgcg cgaagaacgt cagaatttcg atccttccgg gcattacagc 900

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gagtag 966

<210>12

<211>321

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>12

Met Thr Gly Ser Tyr Pro Lys Asp Thr Leu Ile Val Gly Leu Ala Gln

1 5 10 15

Ile Ala Pro Val Trp Leu Asp Arg Ala Gly Thr Leu Ser Lys Ile Leu

20 25 30

Ala Gln Val His Ala Ala Asn Gln Ala Gly Cys His Leu Val Ala Phe

35 40 45

Gly Glu Gly Leu Leu Pro Gly Tyr Pro Phe Trp Ile Glu Arg Thr Asn

50 55 60

Gly Ala Leu Phe Asn Ser Thr Val Gln Lys Glu Ile His Ala His Tyr

65 70 75 80

Met Asp Gln Ala Val Gln Ile Glu Ala Gly His Leu Asp Pro Leu Cys

85 90 95

Ala Thr Ala Lys Lys Phe Gly Ile Thr Val Val Leu Gly Cys Ile Glu

100 105 110

Arg Pro Leu Asp Arg Gly Gly His Ser Leu Tyr Ala Ser Leu Val Tyr

115 120 125

Ile Asp Ser Glu Gly Ser Ile Gln Ser Val His Arg Lys Leu Met Pro

130 135 140

Thr Tyr Glu Glu Arg Leu Thr Trp Ser Ser Gly Asp Gly His Gly Leu

145 150 155 160

Arg Val His Thr Leu Gly Ala Phe Thr Val Gly Gly Leu Asn Cys Trp

165 170 175

Glu Asn Trp Met Pro Leu Ala Arg Ala Ala Met Tyr Gly Gln Gly Glu

180 185 190

Asp Leu His Val Ala Ile Trp Pro Gly Gly Ser His Leu Thr Gln Asp

195 200 205

Ile Thr Arg Phe Ile Ala Leu Glu Ser Arg Ser Tyr Val Leu Ser Val

210 215 220

Ser Gly Leu Met Arg Ala Thr Asp Phe Pro Lys Asp Thr Pro His Leu

225 230 235 240

Ala Ser Ile Leu Ala Lys Gly Glu Glu Ile Leu Ala Asn Gly Gly Ser

245 250 255

Cys Ile Ala Gly Pro Asp Gly Lys Trp Val Val Gly Pro Leu Val Gly

260 265 270

Glu Glu Lys Leu Ile Val Ala Thr Ile Asp His Cys Arg Val Arg Glu

275 280 285

Glu Arg Gln Asn Phe Asp Pro Ser Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val

290 295 300

Leu Gln Leu Lys Ile Asn Arg Glu Arg Gln Ser Thr Ile Ser Phe Ser

305 310 315 320

Glu

<210>13

<211>1014

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>13

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<210>14

<211>337

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>14

Met Gly Ile Gln His Pro Lys Tyr Lys Val Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 l0 15

Pro Ala Trp Leu Asp Leu Asp Ala Ser Ile Ala Lys Ser Ile Ala Leu

20 25 30

Ile Glu Glu Ala Ala Ala Asn Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Ala Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Asp Ser Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ala Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Glu Lys Leu Arg Leu Ala Val Lys Lys

85 90 95

Ala Gly Leu Thr Ala Val Ile Gly Leu Ser Glu Arg Glu Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Leu Ala Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

115 120 125

Lys Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Tyr Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Asp Arg Pro Gly Ile Gly

145 150 155 160

Arg Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys

165 170 175

Tyr Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Val Ala Ala Trp Pro

180 185 190

Ser Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala Pro Ala Leu Gly Trp Glu Val

195 200 205

Asn Asn Ala Ala Ser Arg Val Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val

210 215 220

Leu Ala Pro Cys Ala Thr Val Ser Lys Ala Met Ile Asp Glu Leu Cys

225 230 235 240

Asp Arg Asp Asp Lys His Gly Leu Leu His Val Gly Gly Gly His Ala

245 250 255

Ala Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ser Ser Ile Ala Glu Lys Leu Pro Pro

260 265 270

Glu Gln Glu Gly Leu Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Gly Ala Ile Gly

275 280 285

Ile Ala Lys Asn Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp

290 295 300

Val Thr Arg Leu Leu Leu Asn Lys Lys Pro Ser Lys Arg Val Glu His

305 310 315 320

Phe Ser Leu Pro Val Asp Asn Val Glu Pro Glu Ile Asp Ala Ala Ala

325 330 335

Ser

<210>15

<211>1047

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>15

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atgtgctgtt gggaacattt gcagccgctc agcaaatatg caatgtattc tcaggatgaa 540

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aaagagccgc ttctgctgga aggtggcggg ttcaccatga tttacggccc cgatgggcga 780

cctctggcta aaccgttgcc tgaaaacgag gaagggctgc tatatgccga tattgacctg 840

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<210>16

<211>348

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>16

Met Pro Thr Ser Lys Gln Phe Arg Val Ala Ala Val Gln Ala Ala Pro

1 5 10 15

Val Phe Leu Asp Leu Glu Gly Ala Ile Ser Lys Gly Ile Ser Leu Ile

20 25 30

Glu Glu Ala Ala Ser Asn Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu Thr

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Trp Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Trp Ile Trp Leu Asp Ser Pro Ala Trp

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Gly Met Arg Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu Met Leu Gly

65 70 75 80

Ser Glu Gln Ala Lys Arg Met Asn Gln Ala Ala Ala Asn Asn Lys Ile

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Tyr Val Val Met Gly Tyr Ser Glu Arg Ser Gly Gly Ser Leu Tyr Met

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Gly Gln Ser Ile Ile Asn Asp Lys Gly Glu Thr Ile Phe Thr Arg Arg

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Lys Leu Lys Pro Thr His Val Glu Arg Thr Val Phe Gly Glu Gly Asp

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Gly Ser His Leu Cys Val Met Asp Thr Glu Ile Gly Arg Val Gly Ala

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Met Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys Tyr Ala Met Tyr

165 170 175

Ser Gln Asp Glu Gln Ile His Ile Ala Ser Trp Pro Ser Phe Set Leu

180 185 190

Tyr Arg Gly Ala Ala Tyr Ala Leu Gly Pro Glu Leu Asn Asn Ala Ala

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Ser Gln Met Tyr Ala Ala Glu Gly Gln Cys Phe Val Leu Ala Pro Cys

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Ala Thr Val Ser Lys Glu Met Ile Glu Met Leu Ile Asp Asp Pro Arg

225 230 235 240

Lys Glu Pro Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Phe Thr Met Ile Tyr Gly

245 250 255

Pro Asp Gly Arg Pro Leu Ala Lys Pro Leu Pro Glu Ash Glu Glu Gly

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Leu Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Gly Met Ile Ser Met Ala Lys Ala

275 280 285

Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Thr Arg Leu

290 295 300

Leu Phe Asn Ser Ala Pro Ala Asn Arg Val Glu Tyr Ile Asn Pro Ala

305 310 315 320

Ser Gly Pro Thr Glu Ser Leu Lys Asp Met Gly Lys Met Gln Met Glu

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Ala Glu Gln Gln Lys Ala Ala Leu Arg Glu Met Ile

340 345

<210>17

<211>993

<212>DNA

<213>未知

<220>

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<400>17

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acctttcctg agaccgtggt gccttattac ccgtactttt cgttcgttca gacgcccttg 180

cagcaaatct tcggaacaga gtatctgagg ctgctcgacc aggcagtcac cgtgccatcc 240

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cgcaccccta ccgcgcactt tcacgaacgc gcttcgcacc ccacgacagg agctgagcaa 960

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<210>18

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>18

Met Arg Val Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Leu Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Gly Thr Val Glu Lys Val Val Arg Lys Ile His Glu Leu

20 25 30

Ala Glu Glu Gly Val Glu Phe Val Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

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Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Thr Pro Leu Gln Gln Ile Phe

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Gly Thr Glu Tyr Leu Arg Leu Leu Asp Gln Ala Val Thr Val Pro Ser

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Ala Ala Thr Asp Ala Ile Gly Glu Ala Ala Arg Phe Ala Gly Val Val

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Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Ser Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys

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Gln Gln Ala Gln Ile Met Lys Asp Thr Gly Cys Ser Ile Gly Pro Ile

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Ser Gly Gly Cys Phe Thr Thr Ile Val Ala Pro Asp Gly Ser Leu Ile

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Gly Glu Pro Leu Arg Ser Gly Glu Gly Val Val Ile Ala Asp Leu Asp

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<210>19

<211>1050

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>19

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cagacggccg aaaaggccgc gtcattgatt gacgatgccg gtcggcaggg ggctcgctta 120

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ctggcgaagc cgttgccgga ggacgtcgaa ggattggtga ccgctgagat tgacttcaat 840

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<210>20

<211>349

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>20

Met Glu Ser Asn Phe Leu Ala Ala Ala Val Gln Ala Glu Pro Val Tyr

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Phe Asn Ala Phe Gln Thr Ala Glu Lys Ala Ala Ser Leu Ile Asp Asp

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Ala Gly Arg Gln Gly Ala Arg Leu Val Thr Phe Pro Glu Thr Trp Leu

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Pro Gly Tyr Pro Tyr Trp Ile Trp Leu Gly Ala Pro Ala Trp Gly Met

50 55 60

His His Phe Ile Leu Lys Tyr His Gln Asn Ser Pro Val Ala Gly Gly

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Pro Glu Glu Gln Ile Leu Cys Gln Ala Ala Arg Arg Ash Gly Ile Phe

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Val Val Met Gly Leu Ser Glu Lys Ile Gly Ala Ser Leu Tyr Met Ala

100 105 110

Gln Trp Phe Ile Ser Pro Asp Gly Lys Val Val Ala Arg Arg Arg Lys

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Ser Asp Ile Val Val Leu Asp Thr Pro Leu Gly Lys Val Gly Gly Leu

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Cys Cys Trp Glu His Met Gln Pro Leu Ser Lys Tyr Ala Met Tyr Ser

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Gln Gly Glu Gln Ile His Ala Ala Ser Trp Pro Ser Val Ser Val Tyr

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Arg Asp Lys Ile Tyr Val Leu Gly Pro Glu Leu Asn Gly Ala Ala Asn

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Gln Met Tyr Ala Ala Glu Gly Gln Cys Phe Val Leu Ala Ser Trp Ala

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Thr Val Ser Gln Ala Ala Ile Asp Leu Phe Cys Asp Thr Pro Asp Lys

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Ala Ala Leu Met Lys Ile Gly Gly Gly Phe Ser Gln Ile Tyr Gly Pro

245 250 255

Asp Gly Cys Pro Leu Ala Lys Pro Leu Pro Glu Asp Val Glu Gly Leu

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275 280 285

Ala Asp Pro Val Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Phe Arg Leu Leu

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Pro Gly Val Thr Gln Arg Thr Ala Lys Asn Gly Ser Ala Asp Glu Leu

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Val Gly His Pro Glu Asn Ala Val Ala Arg Ala Ala Glu

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<210>21

<211>1065

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>21

atggcactag aacatccgaa gtacgtggcg gccgtggttc aggccgcgcc cgaattcctg 60

aatctagaca gagggatcga aaagacgatc gcattgatcg acgaagcggg acagaaaggg 120

gcggccctga ttgcatttcc ggaaacctgg ctgccgggct atccgtttca tgtctggctc 180

ggtcctcccg catgggcgct tggctcagga ttcgtccagc gctatttcga caactcgatg 240

acgtacgata gtcctcaggc cgctgcactg agggacgctg ccgcgcgcaa cgggatcacg 300

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accgttttcg gcgatggcga cggcagcgat ctggcagtac acgatctcaa catcggccgc 480

cttggcgcac tgtgctgctg ggagcacatt cagccgctga ccaagtacgc gatgtatgcg 540

cagcacgaac aggtgcacgt cgcggcctgg ccgagcttct ccatgtatga attcgcgccc 600

gcgctcggtc acgaggtgaa caacgcagtc agccgcgtct atgccgttga gggatcgtgc 660

ttcgtgctcg cgccgtgcgc ggtcatcagc gagcaaatgg tcgacatgtt gtgcgacacg 720

gcagacaagc gcgcgatgat acgtgccggc ggcgggcacg cagtggcgtt cgggccggac 780

ggcgaagctc tggtcgagaa actgccggaa aatgaggaag gcttgctgct ggtcgatatc 840

gatctcggtc gcatctcgct tgcgaaggct gcggccgacc ccgtcggtca ctacgcgcgc 900

cccgatgtct tgcggctctg gttcgacaag caaccgcggc ggtgcgtcga acatgccggc 960

gagaacgacg cgtcgcgcag gtcgcacggg tcgtccgggt cacaatcgcc ggcgcaggat 1020

gggccggcga acgacatggt agaccgtcag gaaaacgtcg attga 1065

<210>22

<211>354

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>22

Met Ala Leu Glu His Pro Lys Tyr Val Ala Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Glu Phe Leu Asn Leu Asp Arg Gly Ile Glu Lys Thr Ile Ala Leu

20 25 30

Ile Asp Glu Ala Gly Gln Lys Gly Ala Ala Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Trp Leu Pro Gly Tyr Pro Phe His Val Trp Leu Gly Pro Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Leu Gly Ser Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Met

65 70 75 80

Thr Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Ala Ala Leu Arg Asp Ala Ala Ala Arg

85 90 95

Asn Gly Ile Thr Val Val Leu Gly Leu Ser Glu Arg Cys Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Ile Ile Gly Pro Asp Gly Ala Thr Val Ala

115 120 125

Thr Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Ile Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Asp Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Asp Leu Asn Ile Gly Arg

145 150 155 160

Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Ile Gln Pro Leu Thr Lys Tyr

165 170 175

Ala Met Tyr Ala Gln His Glu Gln Val His Val Ala Ala Trp Pro Ser

180 185 190

Phe Ser Met Tyr Glu Phe Ala Pro Ala Leu Gly His Glu Val Asn Asn

195 200 205

Ala Val Ser Arg Val Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val Leu Ala

210 215 220

Pro Cys Ala Val Ile Ser Glu Gln Met Val Asp Met Leu Cys Asp Thr

225 230 235 240

Ala Asp Lys Arg Ala Met Ile Arg Ala Gly Gly Gly His Ala Val Ala

245 250 255

Phe Gly Pro Asp Gly Glu Ala Leu Val Glu Lys Leu Pro Glu Asn Glu

260 265 270

Glu Gly Leu Leu Leu Val Asp Ile Asp Leu Gly Arg Ile Ser Leu Ala

275 280 285

Lys Ala Ala Ala Asp Pro Val Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Leu

290 295 300

Arg Leu Trp Phe Asp Lys Gln Pro Arg Arg Cys Val Glu His Ala Gly

305 310 315 320

Glu Asn Asp Ala Ser Arg Arg Ser His Gly Ser Ser Gly Ser Gln Ser

325 330 335

Pro Ala Gln Asp Gly Pro Ala Asn Asp Met Val Asp Arg Gln Glu Asn

340 345 350

Val Asp

<210>23

<211>1005

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>23

atgaccgtta tcaaagcagc cgccattcaa atcagccccg tgctctacag ccgggcgggg 60

acagtcgaga aagttgttag gaaggttaga gagctcgggg ccaaaggtgt ccgattcgct 120

acctttcccg aaaccatcat accgtactac ccgtacttct cgttcgttca gtcggcgttc 180

gacatgaagc ttgggagtga acatcagcgg ctgctcgacg aatcagtcac aattccttcg 240

tccgagacgg acgcgatcgc ccaggccgcc aaggaagcgg gcatggtggt gtccgtcggg 300

gtcaatgagc gcgatgggcg atccatctac aacactcaac ttctgttcga cgctgatggc 360

acgctcattc agcgtaggcg aaagatcacc ccgacctatc acgagcgcat gatttggggt 420

caaggcgatg gatccggcct acgcgcggtc gatagcgccg tgggccggat cggccagctt 480

gcctgctggg agcactacct tcccctggcg cggtacgccc tcatcgcgga cggagagcaa 540

atccactcgg caatgtatcc aggctcgttc gctggtccgc tatttgccga gcagatagag 600

gttagtatcc gccagcacgc gcttgagtca gcctgcttcg tcgtcaacgc gaccggatgg 660

cttagcgccg agcagcaagc tcaaatagtg aaggataccg gatgcgtcgt tggaccaatc 720

tccggtggct gctttacggc gattgttgat ccggagggtc ggatcatggg ggcgccactc 780

aaggcaggtg agggggaggt catcgcagat ctcgattttg cgcagattga tttccgcaag 840

cgtgtgatgg atacgcgagg gcactacagc cgccccgaac ttctaagcct cacgatcgac 900

cgcagtcagc accatcacat gactgagcga ggcgccgatc accgtgtaga ccacgcaaag 960

ccaacggtca ccgcagagca gtcggccgtc gagccggcgg aatga 1005

<210>24

<211>334

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>24

Met Thr Val Ile Lys Ala Ala Ala Ile Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr

l 5 10 15

Ser Arg Ala Gly Thr Val Glu Lys Val Val Arg Lys Val Arg Glu Leu

20 25 30

Gly Ala Lys Gly Val Arg Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Ile Ile Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Ser Ala Phe Asp Met Lys Leu

50 55 60

Gly Ser Glu His Gln Arg Leu Leu Asp Glu Ser Val Thr Ile Pro Ser

65 70 75 80

Ser Glu Thr Asp Ala Ile Ala Gln Ala Ala Lys Glu Ala Gly Met Val

85 90 95

Val Ser Val Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Arg Ser Ile Tyr Asn Thr

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys

115 120 125

Ile Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Ala Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu

145 150 155 160

Ala Cys Trp Glu His Tyr Leu Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Ile Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Tyr Pro Gly Ser Phe Ala Gly

180 185 190

Pro Leu Phe Ala Glu Gln Ile Glu Val Ser Ile Arg Gln His Ala Leu

195 200 205

Glu Ser Ala Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Gly Trp Leu Ser Ala Glu

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Val Lys Asp Thr Gly Cys Val Val Gly Pro Ile

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Asp Pro Glu Gly Arg Ile Met

245 250 255

Gly Ala Pro Leu Lys Ala Gly Glu Gly Glu Val Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Phe Ala Gln Ile Asp Phe Arg Lys Arg Val Met Asp Thr Arg Gly His

275 280 285

Tyr Ser Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ile Asp Arg Ser Gln His

290 295 300

His His Met Thr Glu Arg Gly Ala Asp His Arg Val Asp His Ala Lys

305 310 315 320

Pro Thr Val Thr Ala Glu Gln Ser Ala Val Glu Pro Ala Glu

325 330

<210>25

<211>939

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>25

gtgtcatcaa ctatcaaagt cgccattatt caggccgctc ctgcttacta cgacctgcag 60

gcgtcgctgg caaaggccgc cagtctgatc cgcgaggcgg cacgcggcgg cgcgcaattc 120

gtcgcgttcg gggagacatg gctgccgggc tatccgatgt ggctggattg gtgtcctggc 180

gcgatcatct gggataaccc cgccaccaaa accgtcttcg cgcgcctcca tgaaaacagc 240

gtcgccgttc ccggcaggga aacggcattt ctcgccgacc ttgcgatgtc gttaagcatc 300

gtattatgca tcggcgtcaa tgagaaggtc atgaatgggc cgggacacgg cacgctctac 360

aacacgctcc tgacgtttga tgcaacgggt gaaatcatca atcatcatcg caagttgatg 420

ccaacctatg gcgagagatt ggtatggggg ccgggcgacg cagttggcgt gcaagcggtt 480

gatagtacgg tcgggcgcat cggcgggctg atctgttggg agcactggat gccgctgcca 540

cgccaactca tgcacaacag cggcgagcag attcacgtct gcgcatggcc gggcgtgcac 600

gaaatgcacc agatcgcgag ccgtcattat gcattcgagg gccgctgctt tgtgctggcc 660

gccggattga tcatgcccgc gttcgacctg cccagcgaac tcgaatttcc gcccgaactg 720

gccgacaagc gcgactatct cctaatgaac ggcggcagcg ccatcatcaa gcccaatggc 780

aaatatctcg ccgggccggt ttatgacgaa gagactattc tctgcgccga ccttgacctg 840

actgagaaca tcaaggagca gatgacgctg gacgtgacag ggcattatgc gcgagcggaa 900

ctgtttgact tgaatgtggt gcggcggcgg aatgcgtag 939

<210>26

<211>312

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>26

Val Ser Ser Thr Ile Lys Val Ala Ile Ile Gln Ala Ala Pro Ala Tyr

1 5 10 15

Tyr Asp Leu Gln Ala Ser Leu Ala Lys Ala Ala Ser Leu Ile Arg Glu

20 25 30

Ala Ala Arg Gly Gly Ala Gln Phe Val Ala Phe Gly Glu Thr Trp Leu

35 40 45

Pro Gly Tyr Pro Met Trp Leu Asp Trp Cys Pro Gly Ala Ile Ile Trp

50 55 60

Asp Asn Pro Ala Thr Lys Thr Val Phe Ala Arg Leu His Glu Asn Ser

65 70 75 80

Val Ala Val Pro Gly Arg Glu Thr Ala Phe Leu Ala Asp Leu Ala Met

85 90 95

Ser Leu Ser Ile Val Leu Cys Ile Gly Val Asn Glu Lys Val Met Asn

100 105 110

Gly Pro Gly His Gly Thr Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Thr Phe Asp Ala

115 120 125

Thr Gly Glu Ile Ile Asn His His Arg Lys Leu Met Pro Thr Tyr Gly

130 135 140

Glu Arg Leu Val Trp Gly Pro Gly Asp Ala Val Gly Val Gln Ala Val

145 150 155 160

Asp Ser Thr Val Gly Arg Ile Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu His Trp

165 170 175

Met Pro Leu Pro Arg Gln Leu Met His Asn Ser Gly Glu Gln Ile His

180 185 190

Val Cys Ala Trp Pro Gly Val His Glu Met His Gln Ile Ala Ser Arg

195 200 205

His Tyr Ala Phe Glu Gly Arg Cys Phe Val Leu Ala Ala Gly Leu Ile

210 215 220

Met Pro Ala Phe Asp Leu Pro Ser Glu Leu Glu Phe Pro Pro Glu Leu

225 230 235 240

Ala Asp Lys Arg Asp Tyr Leu Leu Met Asn Gly Gly Ser Ala Ile Ile

245 250 255

Lys Pro Asn Gly Lys Tyr Leu Ala Gly Pro Val Tyr Asp Glu Glu Thr

260 265 270

Ile Leu Cys Ala Asp Leu Asp Leu Thr Glu Asn Ile Lys Glu Gln Met

275 280 285

Thr Leu Asp Val Thr Gly His Tyr Ala Arg Ala Glu Leu Phe Asp Leu

290 295 300

Asn Val Val Arg Arg Arg Asn Ala

305 310

<210>27

<211>1056

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>27

atgccaaccc ccagcgatca tttcaaaatc gccgctgttc aggcctcgcc cgtgtttctg 60

gaccgggagg ccactgtgga aaaggcctgc cggttgatcg ccgaagccgc aaagcagggc 120

gcccgcctca tcgtctttcc ggaatctttc atcccgacct acccggattg ggtgtgggcc 180

gttcccccgg gaagggaaag aatcctgaac cagctgtatt ctgaattcct ggccaatgcc 240

gtcgatgttc ccggcgcggc gaccgaacaa cttgcccagg ctgcacgaat ggccggcgcc 300

tatgtgatta tgggcgtcac cgaaagagac acctcggcca gcggggccag cctctacaac 360

accctgctct acttcagccc cgaaggcatc ctaatgggca aacaccggaa gctggttccc 420

acggggggcg aacggctggt ctgggcctac ggagacggca gcacgctgga ggtctacgac 480

actccgctgg gaaagatcgg cgggctgatc tgctgggaga actacatgcc cctggcccgg 540

tacacgatgt acgcctgggg cacccagatt tacatcgccg ccacctggga ccgcggggaa 600

ccgtggctct ccaccctgcg gcatatcgcc aaggaaggaa gggtctacgt catcgggtgc 660

tgcatcgccc tgcgccaggg ggatatcccg gaccggttcg agtacaaggg aaaattttat 720

tccgggtccc gggagtggat caatgagggc gacagcgcca tcgtgaaccc ggacggggaa 780

ttcatcgccg ggccggtgcg gatgaaggag gagatcctgt atgccgagat agacccccgg 840

cagatgcggg gccccaagtg gatgctcgat gtggccggtc attacgcccg gccggatatc 900

ttcgagctca tcgtccaccg gaatccccac ccgatgatca aaatcgccga agacaggggc 960

acggggatcg cctcaagttt gattcgcccc cgccctaacc ttcccccatc aagggggagg 1020

aaatcggcaa gaagcaaacg caagcccaaa aaatga 1056

<210>28

<211>351

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>28

Met Pro Thr Pro Ser Asp His Phe Lys Ile Ala Ala Val Gln Ala Ser

1 5 10 15

Pro Val Phe Leu Asp Arg Glu Ala Thr Val Glu Lys Ala Cys Arg Leu

20 25 30

Ile Ala Glu Ala Ala Lys Gln Gly Ala Arg Leu Ile Val Phe Pro Glu

35 40 45

Ser Phe Ile Pro Thr Tyr Pro Asp Trp Val Trp Ala Val Pro Pro Gly

50 55 60

Arg Glu Arg Ile Leu Asn Gln Leu Tyr Ser Glu Phe Leu Ala Asn Ala

65 70 75 80

Val Asp Val Pro Gly Ala Ala Thr Glu Gln Leu Ala Gln Ala Ala Arg

85 90 95

Met Ala Gly Ala Tyr Val Ile Met Gly Val Thr Glu Arg Asp Thr Ser

100 105 110

Ala Ser Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Phe Ser Pro Glu

115 120 125

Gly Ile Leu Met Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly Gly Glu

130 135 140

Arg Leu Val Trp Ala Tyr Gly Asp Gly Ser Thr Leu Glu Val Tyr Asp

145 150 155 160

Thr Pro Leu Gly Lys Ile Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met

165 170 175

Pro Leu Ala Arg Tyr Thr Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile Tyr Ile

180 185 190

Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Glu Pro Trp Leu Ser Thr Leu Arg His

195 200 205

Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Ile Gly Cys Cys Ile Ala Leu

210 215 220

Arg Gln Gly Asp Ile Pro Asp Arg Phe Glu Tyr Lys Gly Lys Phe Tyr

225 230 235 240

Ser Gly Ser Arg Glu Trp Ile Asn Glu Gly Asp Ser Ala Ile Val Asn

245 250 255

Pro Asp Gly Glu Phe Ile Ala Gly Pro Val Arg Met Lys Glu Glu Ile

260 265 270

Leu Tyr Ala Glu Ile Asp Pro Arg Gln Met Arg Gly Pro Lys Trp Met

275 280 285

Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Ile Phe Glu Leu Ile

290 295 300

Val His Arg Asn Pro His Pro Met Ile Lys Ile Ala Glu Asp Arg Gly

305 310 315 320

Thr Gly Ile Ala Ser Ser Leu Ile Arg Pro Arg Pro Asn Leu Pro Pro

325 330 335

Ser Arg Gly Arg Lys Ser Ala Arg Ser Lys Arg Lys Pro Lys Lys

340 345 350

<210>29

<211>1017

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>29

atgggcatcg aacatacgaa atacaaggtg gcggtggtgc aggcggcgcc ggcctggctc 60

gacctcgagg cctcgatcgg caagtccatc ggcctaatca aggaggccgc ggacaagggc 120

gccaagctga tcgcctttcc ggaggccttc atccccggtt acccctggta tatctggatg 180

gactcgccgg cctgggcgat cggccgcggc ttcgtccagc gctatttcga caattcgctc 240

tcctacgaca gtccccaggc cgagcggctg cgtgatgccg tgcgccaggc caagctcacc 300

gccgtgatcg gcctgtccga acgcgacggc ggcagccttt acctggcgca atggttgatc 360

gggcccgacg gcgaaaccat tgccaagcgc cgcaagctgc ggccgaccca tgccgagcgc 420

accgtctatg gcgaaggcga cggcagcgat ctggccgtac atgcccggcc cgacatcggt 480

cgcttgggcg cgctgtgctg ctgggagcat cttcagccgt tgtcgaagta cgcaatgtac 540

gcccagaacg agcaggtcca cgtcgctgcc tggccgagct tctcgctcta cgatcccttc 600

gccccggcgc tcggcgccga ggtcaacaac gctgcctcgc gcgtctatgc ggtggagggc 660

tcctgcttcg tgctcgcgcc ttgcgcgacg gtgtcgcagg ccatgatcga cgaactctgc 720

gatcggcccg ataagcatgc gctgctgcat gccggcggag gctttgccgc gatctacggc 780

cccgacggca gccagatcgg cgagaagctg gcgccggatc aggagggtct gctgatcgcc 840

gagattgatc tgggcgccat cggtgttgcc aagaacgcgg cagatcccgc cggtcattat 900

tcacggccgg atgtgacgcg gttgctgctc aacaagaagc ggtaccagcg cgtcgagcaa 960

tttgccttgc ccgccgacat ggtcgagccc gcggacatag gcgcggcggc gagctga 1017

<210>30

<211>338

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>30

Met Gly Ile Glu His Thr Lys Tyr Lys Val Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ala Trp Leu Asp Leu Glu Ala Ser Ile Gly Lys Ser Ile Gly Leu

20 25 30

Ile Lys Glu Ala Ala Asp Lys Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Ala Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Tyr Ile Trp Met Asp Ser Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ser Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Glu Arg Leu Arg Asp Ala Val Arg Gln

85 90 95

Ala Lys Leu Thr Ala Val Ile Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Leu Ala Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

115 120 125

Lys Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Tyr Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Ala Arg Pro Asp Ile Gly

145 150 155 160

Arg Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys

165 170 175

Tyr Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Val Ala Ala Trp Pro

180 185 190

Ser Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala Pro Ala Leu Gly Ala Glu Val

195 200 205

Asn Asn Ala Ala Ser Arg Val Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val

210 215 220

Leu Ala Pro Cys Ala Thr Val Ser Gln Ala Met Ile Asp Glu Leu Cys

225 230 235 240

Asp Arg Pro Asp Lys His Ala Leu Leu His Ala Gly Gly Gly Phe Ala

245 250 255

Ala Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ser Gln Ile Gly Glu Lys Leu Ala Pro

260 265 270

Asp Gln Glu Gly Leu Leu Ile Ala Glu Ile Asp Leu Gly Ala Ile Gly

275 280 285

Val Ala Lys Asn Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp

290 295 300

Val Thr Arg Leu Leu Leu Asn Lys Lys Arg Tyr Gln Arg Val Glu Gln

305 310 315 320

Phe Ala Leu Pro Ala Asp Met Val Glu Pro Ala Asp Ile Gly Ala Ala

325 330 335

Ala Ser

<210>31

<211>933

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>31

atgaccagaa tagccattat tcagcgaccg cccgtgctgc tcgatcgaag cgccaccatt 60

gcccgggccg tgcaatcggt cgccgaagcg gcagcgcaag gcgcgaccct gattgtcttg 120

cccgaatcgt acatccctgg ctatccctca tggatctggc ggctcgcgcc tggcaaagac 180

ggcgcgatcg tgggccagtt gcatgcgcgc ttgctggcca atgcggtcga cctgagcagc 240

actgacctcg atgcgcttct tgaagcggcc cgtcagcacg gcgtgaccat tgtttgcggc 300

atgaacgagt gcgaacggcg tcgcggcggc ggcaccttgt acaacacggt ggtcgtgatc 360

ggaccggacg gcgtcatgct caaccggcat cgcaaattga tgccgaccaa tcccgagcgc 420

atggtgcatg gctttggcga tgcatccgga ctgaaagcag ttgatacgcc tgccggccgg 480

ctgggcacgc tgatctgctg ggagagctac atgccgctgg cacgctatgc cctgtacgag 540

caaggcatcg agatctacat cgcaccaact tatgacagtg gtgacggctg gatcagcacc 600

atgcgccaca ttgcactcga agggcgctgc tgggtgattg gcagcggcac ggtcctgaaa 660

ggcagtgata ttccggacga tttcccggaa cgggcacgcc tgttccctga tccggatgag 720

tggatcaacg atggtgattc ggtagttatc gatccgcagg gaaagatcgt tgccggtccg 780

atgcgtaggg aagcaggcat tctatacgcc gatatcgacg tcgcgcgcgt agcaccatca 840

cgccgcacgc tggatgtcgc ggggcattac gcgcgtccgg acgtcttcga gcttcgggta 900

caccaggcac cgggggcacg agtaagtaat tga 933

<210>32

<211>310

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>32

Met Thr Arg Ile Ala Ile Ile Gln Arg Pro Pro Val Leu Leu Asp Arg

1 5 10 15

Ser Ala Thr Ile Ala Arg Ala Val Gln Ser Val Ala Glu Ala Ala Ala

20 25 30

Gln Gly Ala Thr Leu Ile Val Leu Pro Glu Ser Tyr Ile Pro Gly Tyr

35 40 45

Pro Ser Trp Ile Trp Arg Leu Ala Pro Gly Lys Asp Gly Ala Ile Val

50 55 60

Gly Gln Leu His Ala Arg Leu Leu Ala Asn Ala Val Asp Leu Ser Ser

65 70 75 80

Thr Asp Leu Asp Ala Leu Leu Glu Ala Ala Arg Gln His Gly Val Thr

85 90 95

Ile Val Cys Gly Met Asn Glu Cys Glu Arg Arg Arg Gly Gly Gly Thr

100 105 110

Leu Tyr Asn Thr Val Val Val Ile Gly Pro Asp Gly Val Met Leu Asn

115 120 125

Arg His Arg Lys Leu Met Pro Thr Asn Pro Glu Arg Met Val His Gly

130 135 140

Phe Gly Asp Ala Ser Gly Leu Lys Ala Val Asp Thr Pro Ala Gly Arg

145 150 155 160

Leu Gly Thr Leu Ile Cys Trp Glu Ser Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr

165 170 175

Ala Leu Tyr Glu Gln Gly Ile Glu Ile Tyr Ile Ala Pro Thr Tyr Asp

180 185 190

Ser Gly Asp Gly Trp Ile Ser Thr Met Arg His Ile Ala Leu Glu Gly

195 200 205

Arg Cys Trp Val Ile Gly Ser Gly Thr Val Leu Lys Gly Ser Asp Ile

210 215 220

Pro Asp Asp Phe Pro Glu Arg Ala Arg Leu Phe Pro Asp Pro Asp Glu

225 230 235 240

Trp Ile Asn Asp Gly Asp Ser Val Val Ile Asp Pro Gln Gly Lys Ile

245 250 255

Val Ala Gly Pro Met Arg Arg Glu Ala Gly Ile Leu Tyr Ala Asp Ile

260 265 270

Asp Val Ala Arg Val Ala Pro Ser Arg Arg Thr Leu Asp Val Ala Gly

275 280 285

His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Glu Leu Arg Val His Gln Ala Pro

290 295 300

Gly Ala Arg Val Ser Asn

305 310

<210>33

<211>1026

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>33

atgttaagtc ccgtgacgca gtatcgcgcc gccgcggtgc aggcggcgcc atcttttctc 60

gatctcgacc gcaccgtcga gaagacgatc gcgatcatcg agcaggcggc cgagcaggat 120

gtgcgcctga tcgcgtttcc ggaaacctgg attcccggct atccgctctg gatctggctc 180

ggctcgccgg cctggggcat gcgcttcgtg cagcgctatt tcgagaactc gctggtgcgc 240

ggcagcaaac agtggaacgc gatcgccgat gcggcgcggc gccaccgcat gaccgtcgtc 300

gtcggcttca gcgagcgcgc gggaggcagc ctctacatgg gccaggcgat cttcggcccc 360

gaaggcgagc tcatcgcggc gcgccggaag ctcaagccga cacacgccga gcgaacggtg 420

ttcggcgagg gcgacggcag ccacttggcc gtttacgaga cgggcgttgg tcgcatcggc 480

gccctctgct gctgggagca catccagccg ctctcgaaat acgcgatgta tgcggccaac 540

gaacaggtgc atgtggcctc gtggccgtgc ttcagccttt atcgcggcat ggcctatgcg 600

ctcgggccgg aggtgaacac cgccgcgagc caggtctacg cggtcgaggg cggctgctac 660

gtgctggcct cctgtctcgt cgtgacaccc gagatcctga aggtgctgat cgacacgccc 720

gacaaggagc cgttgctgct cgccggcggg gggttctcga tgatcttcgg ccccgacggc 780

cgcgcgctcg cccagccgct gccggagacc gaagaggggc tcgtcacggc cgagatcgat 840

ctcggcgcga tcgcgctcgc caaggccgcg gccgatcccg ccggccatta cgcgcggccc 900

gacgtgacgc ggttgttgct gaacccgcgc cccgcggcgc gcgtcgaagc gctgggtccg 960

cgcttcgagg tcgtgcagag cgagcaggcc gagccgccca cgcaaccggc cgaagcggcg 1020

gattga 1026

<210>34

<211>341

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>34

Met Leu Ser Pro Val Thr Gln Tyr Arg Ala Ala Ala Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ser Phe Leu Asp Leu Asp Arg Thr Val Glu Lys Thr Ile Ala Ile

20 25 30

Ile Glu Gln Ala Ala Glu Gln Asp Val Arg Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Trp Ile Pro Gly Tyr Pro Leu Trp Ile Trp Leu Gly Ser Pro Ala

50 55 60

Trp Gly Met Arg Phe Val Gln Arg Tyr Phe Glu Asn Ser Leu Val Arg

65 70 75 80

Gly Ser Lys Gln Trp Asn Ala Ile Ala Asp Ala Ala Arg Arg His Arg

85 90 95

Met Thr Val Val Val Gly Phe Ser Glu Arg Ala Gly Gly Ser Leu Tyr

100 105 110

Met Gly Gln Ala Ile Phe Gly Pro Glu Gly Glu Leu Ile Ala Ala Arg

115 120 125

Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Phe Gly Glu Gly

130 135 140

Asp Gly Ser His Leu Ala Val Tyr Glu Thr Gly Val Gly Arg Ile Gly

145 150 155 160

Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Ile Gln Pro Leu Ser Lys Tyr Ala Met

165 170 175

Tyr Ala Ala Asn Glu Gln Val His Val Ala Ser Trp Pro Cys Phe Ser

180 185 190

Leu Tyr Arg Gly Met Ala Tyr Ala Leu Gly Pro Glu Val Asn Thr Ala

195 200 205

Ala Ser Gln Val Tyr Ala Val Glu Gly Gly Cys Tyr Val Leu Ala Ser

210 215 220

Cys Leu Val Val Thr Pro Glu Ile Leu Lys Val Leu Ile Asp Thr Pro

225 230 235 240

Asp Lys Glu Pro Leu Leu Leu Ala Gly Gly Gly Phe Ser Met Ile Phe

245 250 255

Gly Pro Asp Gly Arg Ala Leu Ala Gln Pro Leu Pro Glu Thr Glu Glu

260 265 270

Gly Leu Val Thr Ala Glu Ile Asp Leu Gly Ala Ile Ala Leu Ala Lys

275 280 285

Ala Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Thr Arg

290 295 300

Leu Leu Leu Asn Pro Arg Pro Ala Ala Arg Val Glu Ala Leu Gly Pro

305 310 315 320

Arg Phe Glu Val Val Gln Ser Glu Gln Ala Glu Pro Pro Thr Gln Pro

325 330 335

Ala Glu Ala Ala Asp

340

<210>35

<211>942

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>35

atgacagctc taaaaattgc tgctgttcaa atgtgcgccg aattgggcgc tacagatcga 60

aacctgagtg cagctggatc attcgtgcgc gacgcatttc gcgaaggtgc ccagtgggta 120

atcctcccag agttttttac ctcggcaatg gcattcgcac cttcgatggc gcaagcttgg 180

ttgccactgg aaggaaaggc gctagcgatg atgcgcagcc ttgcgcgtca attcgatggg 240

gttgttggag gctcatatgt tgccagagag gggaacgact gcgtaaatgc ctttcttctc 300

gtctttccgg atggaagcta ctaccggcat gacaaagata ttccaacaat gtgggagaac 360

tgttactaca tcggcggcgt cgacgatggg gtgctggaaa caccaattgg tgcggtggga 420

gttgcactgt gttgggagtt catccgaaca caaaccgccc gaagactgaa ggatcgcgtt 480

caattagtgg ttggcggtac ttgctggtgg gattttccga tgcctgtacc tgaacgatat 540

ctgaggctga ccaggcatat ctccaggaac tttgagcgcg atgctccggc gcggttggcc 600

agtatgttgg gtgtgcctgt tgtacacgct tcccatgctg gggattttac tgctgtcacc 660

ccaggcaatg aaacgaagaa ttaccgatcc aactatctgg gagagaccca gatcgtcgat 720

gccaatggaa atgtgttgaa gcgaatgaca gtggctgatg gtgagggtta cgtcattgct 780

gacgttcaat tgggggccat atcaaccggt cgaacttcga tccccgacac cttctggacc 840

tgcaagctaa cgccaggggc acaacaggct tgggatgaac aaaatgcttt tgggtgtggc 900

tactatgaga acgtcacacg caaacaccta atcggtcgat ga 942

<210>36

<211>313

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>36

Met Thr Ala Leu Lys Ile Ala Ala Val Gln Met Cys Ala Glu Leu Gly

1 5 10 15

Ala Thr Asp Arg Asn Leu Ser Ala Ala Gly Ser Phe Val Arg Asp Ala

20 25 30

Phe Arg Glu Gly Ala Gln Trp Val Ile Leu Pro Glu Phe Phe Thr Ser

35 40 45

Ala Met Ala Phe Ala Pro Ser Met Ala Gln Ala Trp Leu Pro Leu Glu

50 55 60

Gly Lys Ala Leu Ala Met Met Arg Ser Leu Ala Arg Gln Phe Asp Gly

65 70 75 80

Val Val Gly Gly Ser Tyr Val Ala Arg Glu Gly Asn Asp Cys Val Asn

85 90 95

Ala Phe Leu Leu Val Phe Pro Asp Gly Ser Tyr Tyr Arg His Asp Lys

100 105 110

Asp Ile Pro Thr Met Trp Glu Asn Cys Tyr Tyr Ile Gly Gly Val Asp

115 120 125

Asp Gly Val Leu Glu Thr Pro Ile Gly Ala Val Gly Val Ala Leu Cys

130 135 140

Trp Glu Phe Ile Arg Thr Gln Thr Ala Arg Arg Leu Lys Asp Arg Val

145 150 155 160

Gln Leu Val Val Gly Gly Thr Cys Trp Trp Asp Phe Pro Met Pro Val

165 170 175

Pro Glu Arg Tyr Leu Arg Leu Thr Arg His Ile Ser Arg Asn Phe Glu

180 185 190

Arg Asp Ala Pro Ala Arg Leu Ala Ser Met Leu Gly Val Pro Val Val

195 200 205

His Ala Ser His Ala Gly Asp Phe Thr Ala Val Thr Pro Gly Asn Glu

210 215 220

Thr Lys Asn Tyr Arg Ser Asn Tyr Leu Gly Glu Thr Gln Ile Val Asp

225 230 235 240

Ala Asn Gly Asn Val Leu Lys Arg Met Thr Val Ala Asp Gly Glu Gly

245 250 255

Tyr Val Ile Ala Asp Val Gln Leu Gly Ala Ile Ser Thr Gly Arg Thr

260 265 270

Ser Ile Pro Asp Thr Phe Trp Thr Cys Lys Leu Thr Pro Gly Ala Gln

275 280 285

Gln Ala Trp Asp Glu Gln Asn Ala Phe Gly Cys Gly Tyr Tyr Glu Asn

290 295 300

Val Thr Arg Lys His Leu Ile Gly Arg

305 310

<210>37

<211>993

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>37

atggattcag atatgacgga tacttttaag gcagccatta ttcagcacgc gcctgttttt 60

ttaaatctcg aagagagtct ggacaaagcc ggcagcctta tagaaaaggc tgccgatcaa 120

ggcgcgaaag tgatcgcctt tcctgaaaca tggctgcccg gttatcccgt atggctcgac 180

tactctccaa aagcgggtct gtgggactat cagcctgcaa aatctctcta tcgtctgcta 240

gtcgataatt cagtcacctt acccggcaaa cacctcgatc aactcctctc catagcgcaa 300

aagaccggcg catatgttgt aatgggggca cacgaacgag tgggtggaac actctataac 360

acgacgatct atgttgggat tgatgggaag gagtacaaac ttcatagaaa gctggtgccg 420

acctataccg aaagattgat ctgggggcgg ggagacggca gcacattgag tgtgttgatg 480

acggattatg gcgttcttgg aggattgatc tgctgggagc actggatgcc tctggcaaga 540

gccgcaatgc atgccagata tgaaaccctt catgtggcgc aatggccggc tgtaaaagat 600

atccatcaga tagcaagcag acattatgct tttgaaggcc ggtgtttcgt gctcgcggca 660

ggctctgttc tgactcgaag agatataata gaaggattca actcactggc tcgcgccgat 720

agtgatgcat tggaacttct gaaagctatt tcgggagaag atagtgatct tattttgaat 780

gggggaagcg cgataattgc gccgaatgga gagtatcttg cgggcccggt ctttaatgaa 840

ccctccatta tttatgctga aattgatcct gcactgataa gtgagggcca tcttacactg 900

gatacaagcg gacactactc gcgccctgac atttttcgtc tggagataaa cgatcaacct 960

caacatgatg taactttcag atcggggcat tag 993

<210>38

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>38

Met Asp Ser Asp Met Thr Asp Thr Phe Lys Ala Ala Ile Ile Gln His

1 5 10 15

Ala Pro Val Phe Leu Asn Leu Glu Glu Ser Leu Asp Lys Ala Gly Ser

20 25 30

Leu Ile Glu Lys Ala Ala Asp Gln Gly Ala Lys Val Ile Ala Phe Pro

35 40 45

Glu Thr Trp Leu Pro Gly Tyr Pro Val Trp Leu Asp Tyr Ser Pro Lys

50 55 60

Ala Gly Leu Trp Asp Tyr Gln Pro Ala Lys Ser Leu Tyr Arg Leu Leu

65 70 75 80

Val Asp Asn Ser Val Thr Leu Pro Gly Lys His Leu Asp Gln Leu Leu

85 90 95

Ser Ile Ala Gln Lys Thr Gly Ala Tyr Val Val Met Gly Ala His Glu

100 105 110

Arg Val Gly Gly Thr Leu Tyr Asn Thr Thr Ile Tyr Val Gly Ile Asp

115 120 125

Gly Lys Glu Tyr Lys Leu His Arg Lys Leu Val Pro Thr Tyr Thr Glu

130 135 140

Arg Leu Ile Trp Gly Arg Gly Asp Gly Ser Thr Leu Ser Val Leu Met

145 150 155 160

Thr Asp Tyr Gly Val Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu His Trp Met

165 170 175

Pro Leu Ala Arg Ala Ala Met His Ala Arg Tyr Glu Thr Leu His Val

180 185 190

Ala Gln Trp Pro Ala Val Lys Asp Ile His Gln Ile Ala Ser Arg His

195 200 205

Tyr Ala Phe Glu Gly Arg Cys Phe Val Leu Ala Ala Gly Ser Val Leu

210 215 220

Thr Arg Arg Asp Ile Ile Glu Gly Phe Asn Ser Leu Ala Arg Ala Asp

225 230 235 240

Ser Asp Ala Leu Glu Leu Leu Lys Ala Ile Ser Gly Glu Asp Ser Asp

245 250 255

Leu Ile Leu Asn Gly Gly Ser Ala Ile Ile Ala Pro Asn Gly Glu Tyr

260 265 270

Leu Ala Gly Pro Val Phe Asn Glu Pro Ser Ile Ile Tyr Ala Glu Ile

275 280 285

Asp Pro Ala Leu Ile Ser Glu Gly His Leu Thr Leu Asp Thr Ser Gly

290 295 300

His Tyr Ser Arg Pro Asp Ile Phe Arg Leu Glu Ile Asn Asp Gln Pro

305 310 315 320

Gln His Asp Val Thr Phe Arg Ser Gly His

325 330

<210>39

<211>1008

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>39

atgaaaaata tcaaaaactc agaaaaaagc agcacagtaa gagtcgctgc ggtacaaatc 60

agtccggtgt tgtacaaccg cgaagctacc gttcaaaaag tagtcaacaa aatccttgaa 120

ctaggaaaac aaggggtaca attcgccact tttccggaaa cgatagtgcc ttattatcct 180

tatttctctt ttattcaggc gccttatgcc atgggcaaag aacacctgcg cttgcttgaa 240

caatcagtta ctgttccgtc agccgcgacc gatgccataa gtgaggcggc aaaggaagcc 300

aatatggtag tgtctattgg tgtcaatgaa cgagacggtg gtaccattta caatacgcaa 360

ctcctttttg atgctgacgg aacattaatt cagcgcagac gtaaacttac accaacgtat 420

catgaaagaa tgatttgggg acaaggtgac gcttcaggtc ttcgtgccac agacagcgct 480

gttgggcgta tcgggcagtt ggcttgttgg gaacattaca atccattgtt ccgttatgct 540

ttgattgctg atggagaaca aatccattct gccatgtatc ccggatcatt tttaggtgcg 600

ttgcacggtg aacaaaccga aatcaatgta cgccaacacg ctttagaatc ggccagcttc 660

gtcgtagtgg ctaccggttg gttggatgcc gatcaacaag cacaaattgc gaaagacacc 720

ggtggaccaa tcggaccaat ttcgggaggt tgttttacag ccgttatagg ccctgacgga 780

caactaatcg gggaagccct tacatcaggt gaaggggaag tgattgccga tattgatttg 840

gcacaaattg atgcccgcaa aagattaatg gatgccagtg gtcactacaa ccgtcctgaa 900

ttgttgagct tgcatatcga tcacactccg actgctccta tgcatgaaag agtagtttac 960

actgagccgg gattagcaaa aagacaaaat gaaaattcat caaattaa 1008

<210>40

<211>335

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>40

Met Lys Asn Ile Lys Asn Ser Glu Lys Ser Ser Thr Val Arg Val Ala

1 5 10 15

Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr Asn Arg Glu Ala Thr Val Gln

20 25 30

Lys Val Val Asn Lys Ile Leu Glu Leu Gly Lys Gln Gly Val Gln Phe

35 40 45

Ala Thr Phe Pro Glu Thr Ile Val Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe

50 55 60

Ile Gln Ala Pro Tyr Ala Met Gly Lys Glu His Leu Arg Leu Leu Glu

65 70 75 80

Gln Ser Val Thr Val Pro Ser Ala Ala Thr Asp Ala Ile Ser Glu Ala

85 90 95

Ala Lys Glu Ala Asn Met Val Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp

100 105 110

Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Thr Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr

115 120 125

Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys Leu Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met

130 135 140

Ile Trp Gly Gln Gly Asp Ala Ser Gly Leu Arg Ala Thr Asp Ser Ala

145 150 155 160

Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu

165 170 175

Phe Arg Tyr Ala Leu Ile Ala Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met

180 185 190

Tyr Pro Gly Ser Phe Leu Gly Ala Leu His Gly Glu Gln Thr Glu Ile

195 200 205

Asn Val Arg Gln His Ala Leu Glu Ser Ala Ser Phe Val Val Val Ala

210 215 220

Thr Gly Trp Leu Asp Ala Asp Gln Gln Ala Gln Ile Ala Lys Asp Thr

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ile Gly Pro Ile Ser Gly Gly Cys Phe Thr Ala Val Ile

245 250 255

Gly Pro Asp Gly Gln Leu Ile Gly Glu Ala Leu Thr Ser Gly Glu Gly

260 265 270

Glu Val Ile Ala Asp Ile Asp Leu Ala Gln Ile Asp Ala Arg Lys Arg

275 280 285

Leu Met Asp Ala Ser Gly His Tyr Asn Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu

290 295 300

His Ile Asp His Thr Pro Thr Ala Pro Met His Glu Arg Val Val Tyr

305 310 315 320

Thr Glu Pro Gly Leu Ala Lys Arg Gln Asn Glu Asn Ser Ser Asn

325 330 335

<210>41

<211>966

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>41

atgcccaatg agaataacat cgctacattc aaagttgccg cagtccaggc cacaccggtg 60

tttcttgatc gtgaagcaac catcgacaaa gcttgcgggt tgattgccac tgccggcaat 120

gaaggagcgc gcctgattgt gtttccagaa gcgttcatcc caacctatcc tgaatgggtt 180

tggggtattc cttccggtga gcaaggttta ctcaatgaac tctatgcaga gctgctcacc 240

aatgcggtca ctattcccag tgacgcgact gacaggctgt gcgaggccgc gcagcttgcg 300

aatgcctacg tagtgatggg aatgagcgaa cggaatgtcg aggcgagtgg cgcaagccta 360

tataatacgc tgttgtacat caatgcgcag ggggagattt tagggaaaca tcgaaagctg 420

gtgccaacgg gcggcgaacg cctggtatgg gcgcagggtg atggcagcac gctgcaggtc 480

tacgatacgc cattgggaaa actcggtggt ctcatttgct gggaaaatta tatgccgctg 540

gcacgctatg ctatgtatgc ctgggggaca caaatctatg tcgcggcaac gtgggatcga 600

ggccaaccct ggctttctac attacggcat atcgccaaag aaggcagggt atacgtgatt 660

ggttgctgta tcgcgatgcg aaaagacgat attccggata gttactccat gaagcagaaa 720

taccatgctg aaatggatga atggattaat gttggcgaca gtgtgattgt caatcccgaa 780

ggacacttta tcgcagggcc tgtgcgcaag caagaagaaa ttctctacgc ggagatcgat 840

ccacgtatgg tgcaaggccc gaagtggatg ctcgatgtgg cggggcatta tgcgagacca 900

gatgtgttcc agttgacggt gcatacgaat gtgagagaga tgatgcgggt ggaagatgat 960

tcataa 966

<210>42

<211>321

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>42

Met Pro Asn Glu Asn Asn Ile Ala Thr Phe Lys Val Ala Ala Val Gln

1 5 10 15

Ala Thr Pro Val Phe Leu Asp Arg Glu Ala Thr Ile Asp Lys Ala Cys

20 25 30

Gly Leu Ile Ala Thr Ala Gly Asn Glu Gly Ala Arg Leu Ile Val Phe

35 40 45

Pro Glu Ala Phe Ile Pro Thr Tyr Pro Glu Trp Val Trp Gly Ile Pro

50 55 60

Ser Gly Glu Gln Gly Leu Leu Asn Glu Leu Tyr Ala Glu Leu Leu Thr

65 70 75 80

Asn Ala Val Thr Ile Pro Ser Asp Ala Thr Asp Arg Leu Cys Glu Ala

85 90 95

Ala Gln Leu Ala Asn Ala Tyr Val Val Met Gly Met Ser Glu Arg Asn

100 105 110

Val Glu Ala Ser Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Asn

115 120 125

Ala Gln Gly Glu Ile Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly

130 135 140

Gly Glu Arg Leu Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Gln Val

145 150 155 160

Tyr Asp Thr Pro Leu Gly Lys Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn

165 170 175

Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile

180 185 190

Tyr Val Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Gln Pro Trp Leu Ser Thr Leu

195 200 205

Arg His Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Ile Gly Cys Cys Ile

210 215 220

Ala Met Arg Lys Asp Asp Ile Pro Asp Ser Tyr Ser Met Lys Gln Lys

225 230 235 240

Tyr His Ala Glu Met Asp Glu Trp Ile Asn Val Gly Asp Ser Val Ile

245 250 255

Val Asn Pro Glu Gly His Phe Ile Ala Gly Pro Val Arg Lys Gln Glu

260 265 270

Glu Ile Leu Tyr Ala Glu Ile Asp Pro Arg Met Val Gln Gly Pro Lys

275 280 285

Trp Met Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Gln

290 295 300

Leu Thr Val His Thr Asn Val Arg Glu Met Met Arg Val Glu Asp Asp

305 310 315 320

Ser

<210>43

<211>993

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>43

atgagagtcg ttaaagccgc ggcggtccaa ctgaaacctg tcctctatag ccgagaggga 60

actgtcgaaa acgtcgtccg taaaatccac gagcttggac agcaaggggt acagttcgcg 120

acgtttccag agactgtggt gccttactac ccgtactttt cgatcgtgca gtccggctat 180

caaattcttg gcggtggtga gttcctgaag ctgcttgatc agtcagtaac cgtgccatct 240

ctcgctacgg aagcgatcgg cgaggcttgc aggcaggcgg gcgtcgttgt ctccatcggc 300

gtcaacgagc gtgatggagg aactctatac aacacgcaac ttctctttga tgccgacgga 360

acattgattc aaagacgacg caagatcaca cccacccatt acgagcgcat ggtctggggc 420

cagggcgatg gctcaggttt acgggccatt gacagcaagg tcgcgcgcat tggtcaactg 480

gcgtgttttg agcactacaa ccctctcgca cgttacgcga tgatggccga tggcgagcag 540

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cacgtagtag acacacgcgg ccattatagc cggccagaat tgctcagcct cctgattgat 900

cggacgccga cggcccacat acacgaaagg accgagcaac cgagggcggc catcgagaaa 960

gagtcgcagg atgttttcac cgctgttgct taa 993

<210>44

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>44

Met Arg Val Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Leu Lys Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Gly Thr Val Glu Asn Val Val Arg Lys Ile His Glu Leu

20 25 30

Gly Gln Gln Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Ile Val Gln Ser Gly Tyr Gln Ile Leu Gly

50 55 60

Gly Gly Glu Phe Leu Lys Leu Leu Asp Gln Ser Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Leu Ala Thr Glu Ala Ile Gly Glu Ala Cys Arg Gln Ala Gly Val Val

85 90 95

Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Leu Tyr Asn Thr

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys

115 120 125

Ile Thr Pro Thr His Tyr Glu Arg Met Val Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Ile Asp Ser Lys Val Ala Arg Ile Gly Gln Leu

145 150 155 160

Ala Cys Phe Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Met Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Phe Pro Gly Ser Met Phe Gly

180 185 190

Asp Asn Phe Ser Glu Lys Val Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala Met

195 200 205

Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Cys Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Met Lys Asp Thr Gly Cys Glu Ile Gly Pro Ile

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Phe Thr Ala Ile Ala Ala Pro Asp Gly Ser Leu Ile

245 250 255

Gly Glu Pro Ile Arg Ser Gly Glu Gly Val Cys Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Phe Lys Leu Ile Asp Lys Arg Lys His Val Val Asp Thr Arg Gly His

275 280 285

Tyr Ser Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro Thr

290 295 300

Ala His Ile His Glu Arg Thr Glu Gln Pro Arg Ala Ala Ile Glu Lys

305 310 315 320

Glu Ser Gln Asp Val Phe Thr Ala Val Ala

325 330

<210>45

<211>996

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>45

gtgaaaccgc cgacgtcatt ccgcgtggcc gccgttcagg cctgtcccgt ctacctcgat 60

cgcgacctga cgatcggcaa ggcagaaggg ttgatcgccg aggcggctgg aaacggcgcg 120

aacctcatcg tgttccccga agcgttcgtg cctggctatc cggtgtgggt gtggttcatc 180

ccgcccggtc gcacggcgga tcttcgcgaa gcgtacagcg tcctccacgc caactcgatc 240

gcggtcccca gccagtcgac cgagcgtctg tgcgcggcgg cgcggcgcgc tggcgtcgcc 300

gtggcgattg gtgtcaacga aagaaacagc gaggccagcg gcggcagcct cttcaacacg 360

ctgctgtaca tcggaccgga cggcacgctg ctcggtaaac accgaaagct ggtgccaaca 420

ggcggagagc gtcttgtctg ggccagcggc gacggcagcg accttgccgt gttcacactg 480

cctttcgcgc gagtcggcgg actgatctgc tgggagaact acatgccgct cgcccgctac 540

gcgctggcgg cctggggtgc gcaaatccac gtggcgccga cctgggaccg cggcgagccg 600

tggctctcaa cactgcgtca tgtcgcgaag gaaggtagag ccgtgacgat cggctgctgt 660

caggccgtcc gcaaggaaga cattccggac gggctggcat tcaagtcccg atacctggcc 720

gacgtgggcg cctgggtcaa cccaggcggg agcgtcatcg tcgatcccga cggaaaaatt 780

cttgccggac ctgcgaacga aaccgaaggc atcttgtacg ctgacatcag ggccgatcag 840

ctcgtcgggc cgagatggca actcgacatt gccggacact acgcgcggcc ggacgtcttc 900

gagctgatcg tgcatcggcg ttcgacgccg atgattcgcg aggtctcggc gcctcgtcgt 960

cgcgcaagaa cgggaaagcg accgcgacgc cgctga 996

<210>46

<211>331

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>46

Val Lys Pro Pro Thr Ser Phe Arg Val Ala Ala Val Gln Ala Cys Pro

1 5 10 15

Val Tyr Leu Asp Arg Asp Leu Thr Ile Gly Lys Ala Glu Gly Leu Ile

20 25 30

Ala Glu Ala Ala Gly Asn Gly Ala Asn Leu Ile Val Phe Pro Glu Ala

35 40 45

Phe Val Pro Gly Tyr Pro Val Trp Val Trp Phe Ile Pro Pro Gly Arg

50 55 60

Thr Ala Asp Leu Arg Glu Ala Tyr Ser Val Leu His Ala Asn Ser Ile

65 70 75 80

Ala Val Pro Ser Gln Ser Thr Glu Arg Leu Cys Ala Ala Ala Arg Arg

85 90 95

Ala Gly Val Ala Val Ala Ile Gly Val Asn Glu Arg Asn Ser Glu Ala

100 105 110

Ser Gly Gly Ser Leu Phe Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Gly Pro Asp Gly

115 120 125

Thr Leu Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly Gly Glu Arg

130 135 140

Leu Val Trp Ala Ser Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val Phe Thr Leu

145 150 155 160

Pro Phe Ala Arg Val Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro

165 170 175

Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Ala Ala Trp Gly Ala Gln Ile His Val Ala

180 185 190

Pro Thr Trp Asp Arg Gly Glu Pro Trp Leu Ser Thr Leu Arg His Val

195 200 205

Ala Lys Glu Gly Arg Ala Val Thr Ile Gly Cys Cys Gln Ala Val Arg

210 215 220

Lys Glu Asp Ile Pro Asp Gly Leu Ala Phe Lys Ser Arg Tyr Leu Ala

225 230 235 240

Asp Val Gly Ala Trp Val Asn Pro Gly Gly Ser Val Ile Val Asp Pro

245 250 255

Asp Gly Lys Ile Leu Ala Gly Pro Ala Asn Glu Thr Glu Gly Ile Leu

260 265 270

Tyr Ala Asp Ile Arg Ala Asp Gln Leu Val Gly Pro Arg Trp Gln Leu

275 280 285

Asp Ile Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Glu Leu Ile Val

290 295 300

His Arg Arg Ser Thr Pro Met Ile Arg Glu Val Ser Ala Pro Arg Arg

305 310 315 320

Arg Ala Arg Thr Gly Lys Arg Pro Arg Arg Arg

325 330

<210>47

<211>1014

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>47

gtgaaagaag caatcaaagt agcctgtgtg caagcagctc cagtctttct cgacctggac 60

gccacagtgg acaagaccgt cgccctgatt gaggaggcag cccgtaacgg cgcacgccta 120

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gcctggggga tgcaattcgt gcgccgatac cacgagaact cactggtcct cgacagccct 240

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<210>48

<211>337

<212>PRI

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>48

Val Lys Glu Ala Ile Lys Val Ala Cys Val Gln Ala Ala Pro Val Phe

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Leu Asp Leu Asp Ala Thr Val Asp Lys Thr Val Ala Leu Ile Glu Glu

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Ala Ala Arg Asn Gly Ala Arg Leu Ile Ala Phe Pro Glu Thr Trp Ile

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Pro Gly Tyr Pro Trp Phe Leu Trp Leu Asp Ser Pro Ala Trp Gly Met

50 55 60

Gln Phe Val Arg Arg Tyr His Glu Asn Ser Leu Val Leu Asp Ser Pro

65 70 75 80

Gln Ala Lys Arg Ile Ser Glu Ala Ala Gln Arg Ala Gly Ile Tyr Val

85 90 95

Ala Leu Gly Tyr Ser Glu Arg Val Ser Gly Thr Leu Tyr Met Gly Gln

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Trp Leu Ile Asp Asp Lys Gly Glu Thr Ala Gly Leu Arg Arg Lys Leu

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Lys Pro Thr His Val Glu Arg Thr Leu Phe Gly Glu Gly Asp Gly Ser

130 135 140

Ser Leu Ser Thr Phe Asp Thr Pro Leu Gly Val Leu Gly Gly Leu Cys

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Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys Tyr Ala Leu Tyr Ala Gln

165 170 175

Asn Glu Glu Ile His Phe Ala Ala Trp Pro Ser Phe Ser Ile Tyr Arg

180 185 190

Gln Ala Thr Glu Val Leu Gly Pro Glu Val Asn Val Ala Ala Ser Arg

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Ile Tyr Ala Val Glu Gly Gln Cys Phe Val Leu Ala Ser Cys Ala Leu

210 215 220

Val Ser Pro Glu Met Ile Glu Met Leu Cys Thr Asp Glu Ser Lys His

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Ser Leu Leu Gln Ala Gly Gly Gly Tyr Ser Arg Ile Ile Gly Pro Asp

245 250 255

Gly Ser Asp Leu Ala Arg Pro Leu Gly Glu Asn Glu Glu Gly Ile Leu

260 265 270

Tyr Ala Thr Leu Asp Pro Ala Ala Arg Ile Tyr Ala Lys Thr Ala Ala

275 280 285

Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Thr Arg Leu Leu Ile

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Asn Arg Ser Ala Asn Gln Pro Val Val Glu Val Gly Arg Glu Ile Pro

305 310 315 320

Ala Ser Ala Gln Gly Phe Glu Val Glu Ala Ala Pro Gly Tyr Glu Gly

325 330 335

Asp

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<211>1038

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>49

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<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

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Met Asn Lys Val Val Ala Ala Ala Val Gln Cys Ser Pro Val Leu Tyr

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Ser Cys Ala Gly Thr Val Asn Lys Ile Cys Glu Trp Ile Ala Asp Leu

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Gly Lys Gln Gly Val Glu Leu Ala Val Phe Ala Glu Thr Leu Val Pro

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Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Ile Gln Ala Pro Cys Ala Met Gly Ala

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Leu Phe Asp Ala Gly Gly Gln Leu Val Gln His Arg Arg Lys Ile Thr

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Asn Ala Asn Leu Phe Ser Ala Ser Asn

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<212>DNA

<213>未知

<220>

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<220>

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<400>52

Val Asn Val Arg Val Ala Val Val Gln Ala Thr Pro Ala Val Leu Asp

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Gly Pro Ala Ser Val Arg Lys Ala Cys Arg Leu Ile Gly Glu Ala Ala

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Met Pro Arg Ser Cys Trp Gly His His Phe Ala Leu Ile Ala Ser Pro

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Lys Ser Ala Ala Leu His Arg Arg Ile Trp Glu Asn Ala Val Asp Val

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Gly Gly Pro Leu Ala Arg Glu Leu Gly Asp Ala Ala Arg Arg Ala Asp

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Arg Arg His Arg Lys Leu Val Pro Thr Met His Glu Arg Thr Phe Trp

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Arg Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Phe Met Pro Ala Ala Arg

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Asp Asp Arg Asp Ile Trp Val Ala Ala Met Arg Thr Phe Ala Phe Glu

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Ala Gly Ala Phe Val Leu Ser Pro Val Gln Tyr Leu Arg Thr Ala Asp

210 215 220

Phe Pro Glu Asp Phe Pro Leu Arg Glu Glu Leu Ala Asp Cys Pro Glu

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Val Gln Phe Thr Gly Gly Ser Val Ile Cys Asp Pro Trp Gly Asn Leu

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Leu Ala Gly Pro Val His Gly Gly Glu Glu Ile Leu Tyr Ala Asp Cys

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Asp Leu Asp Leu Val Leu Glu Ala Arg Arg Val Leu Asp Thr Ala Gly

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His Tyr Asp Arg Pro Asp Leu Ala Ser Ala

290 295

<210>53

<211>954

<212>DNA

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<220>

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actttgctct ttctcgactc agccggcggc atgttaggca agcatcgcaa actgatcccc 420

accggcggcg agcgcctggt ctgggctcag ggtgatggca gcactctggc ggtgtacgag 480

actaggtttg gaaaaatggg agggttgatt tgctgggaga attacatgcc cctggcccgt 540

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<220>

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<400>54

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Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Glu Leu Ile

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<213>未知

<220>

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Met Gly Ile Glu His Pro Lys Tyr Lys Val Ala Val Val Gln Ala Ala

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Ile Glu Glu Ala Ala Gln Lys Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

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Trp Ala Ile Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

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Ala Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Glu Lys Leu Arg Ala Ala Val Arg Lys

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Ala Lys Leu Thr Ala Val Leu Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

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Asn Asn Ala Ala Ser Arg Val Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val

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Asp Arg Pro Asp Lys His Thr Leu Leu His Val Gly Gly Gly Phe Ala

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Ala Ser

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tgttgggaac acttacaacc tctttcgaaa tatgcgctct acgcacagaa cgaggaaata 540

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gaagtaaatg tcgcagcttc tcggatctac gccgtggaag ggcagtgttt tgttctcgct 660

tcctgcgcgc tcgtctcgcc agagatgatc gaaatgctct gcactgacga aagcaagcac 720

agccttcttc aggccggcgg cgggtactcc cgcattatcg gtcccgatgg cagcgaccta 780

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cggctgctga tcaatcgcag tgccaatcag ccagtcgtag aggttggacg ggaaatacct 960

gcatcggccc aaggctttga agttgaggcg gcccccgggt acggaggcga ttga 1014

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<220>

<223>从环境样品获得

<400>58

Val Lys Glu Ala Ile Lys Val Ala Cys Val Gln Ala Ala Pro Val Phe

1 5 10 15

Leu Asp Leu Asp Ala Thr Val Asp Lys Thr Val Ala Leu Ile Glu Glu

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Ala Ala Arg Asn Gly Ala Arg Leu Ile Ala Phe Pro Glu Thr Trp Ile

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Gln Phe Val Arg Arg Tyr His Glu Asn Ser Leu Val Leu Asp Ser Pro

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Gln Ala Lys Arg Ile Ser Glu Ala Ala Gln Arg Ala Gly Ile Tyr Val

85 90 95

Ala Leu Gly Tyr Ser Glu Arg Val Ser Gly Thr Leu Tyr Met Gly Gln

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Trp Leu Ile Asp Asp Lys Gly Glu Thr Ala Gly Leu Arg Arg Lys Leu

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Lys Pro Thr His Val Glu Arg Thr Leu Phe Gly Glu Gly Asp Gly Ser

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Ser Leu Ser Thr Phe Asp Thr Pro Leu Gly Val Leu Gly Gly Leu Cys

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165 170 175

Asn Glu Glu Ile His Phe Ala Ala Trp Pro Ser Phe Ser Ile Tyr Arg

180 185 190

Gln Ala Thr Glu Val Leu Gly Pro Glu Val Asn Val Ala Ala Ser Arg

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210 215 220

Val Ser Pro Glu Met Ile Glu Met Leu Cys Thr Asp Glu Ser Lys His

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Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Thr Arg Leu Leu Ile

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Asn Arg Ser Ala Asn Gln Pro Val Val Glu Val Gly Arg Glu Ile Pro

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Ala Ser Ala Gln Gly Phe Glu Val Glu Ala Ala Pro Gly Tyr Gly Gly

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Asp

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cccggtcccg agacggatca attatgcgag gcggcgaaaa aggccggcat cgatgtggcg 300

atcggagtgg ttgaactcga cgagtttacg aagggaacgg cttactgcac gctgctcttc 360

atcggcaaag aagggaagat cctgggaaag caccgcaaac tcaagccgac gcaccgggag 420

cgcacggtat ggggagaggg cgatgcgacg ggactcagtg tccatgagcg tccttacggg 480

cggatcagcg gcctgaactg ctgggagcat aatatggtcc tgcccggcta tgtcctgatg 540

tctcagggca cgcacattca tatcgcggcc tggccgggtt cggaagggaa agcacctccc 600

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gccgcatacg tgattctggt cggaggactc ctgaacccgc agaatattcc ggcgccctac 720

gatgaacttg ccgtcaagta ccggggagac agtttcatca tcgatccgcg cggggagatc 780

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ctcgcggcaa agtccgcctt cgatgtcgcg ggacattatt cccgccccga cgtctttcaa 900

ctctgcgtca accgcaaacc gtaccggcgt gtaagggaaa cttcggagca ggaccaaccc 960

gcttctgaaa gagaatcgga atcgtaa 987

<210>60

<211>328

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>60

Met Arg Asp Arg Asn Phe Lys Leu Ala Ala Ile Gln Ala Glu Pro Val

1 5 10 15

Phe Phe Asn Arg Arg Ala Ser Thr Glu Lys Ala Cys Arg Leu Ile Lys

20 25 30

Glu Ala Gly Ala Met Gly Ala Asp Ile Ala Gly Phe Ser Glu Thr Trp

35 40 45

Leu Pro Gly Tyr Pro Phe Phe Ile Trp Gly Ala Ser Ala Asp Pro Ser

50 55 60

Leu Leu Trp Lys Ala Ser Ala Glu Tyr Leu Ala Asn Ala Val Gln Ile

65 70 75 80

Pro Gly Pro Glu Thr Asp Gln Leu Cys Glu Ala Ala Lys Lys Ala Gly

85 90 95

Ile Asp Val Ala Ile Gly Val Val Glu Leu Asp Glu Phe Thr Lys Gly

100 105 110

Thr Ala Tyr Cys Thr Leu Leu Phe Ile Gly Lys Glu Gly Lys Ile Leu

115 120 125

Gly Lys His Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Arg Glu Arg Thr Val Trp

130 135 140

Gly Glu Gly Asp Ala Thr Gly Leu Ser Val His Glu Arg Pro Tyr Gly

145 150 155 160

Arg Ile Ser Gly Leu Asn Cys Trp Glu His Asn Met Val Leu Pro Gly

165 170 175

Tyr Val Leu Met Ser Gln Gly Thr His Ile His Ile Ala Ala Trp Pro

180 185 190

Gly Ser Glu Gly Lys Ala Pro Pro Ala Pro Ser Pro Met Trp Glu Arg

195 200 205

Gln Leu Leu Leu Ser Arg Ala Phe Ala Ser Gln Ser Ala Ala Tyr Val

210 215 220

Ile Leu Val Gly Gly Leu Leu Asn Pro Gln Asn Ile Pro Ala Pro Tyr

225 230 235 240

Asp Glu Leu Ala Val Lys Tyr Arg Gly Asp Ser Phe Ile Ile Asp Pro

245 250 255

Arg Gly Glu Ile Ile Ala Gly Pro Ala Lys Gly Glu Thr Ile Leu Ile

260 265 270

Ala Glu Gly Ser Met Glu Gln Val Leu Ala Ala Lys Ser Ala Phe Asp

275 280 285

Val Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Phe Gln Leu Cys Val Asn

290 295 300

Arg Lys Pro Tyr Arg Arg Val Arg Glu Thr Ser Glu Gln Asp Gln Pro

305 310 315 320

Ala Ser Glu Arg Glu Ser Glu Ser

325

<210>61

<211>966

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>61

atgactcgat cttacccgaa tgacacactc acggttgggc ttgcgcaaat tgctccagtc 60

tggttggatc gtacagggac aatttcaaag atattagctc aagtccatgc ggcaaatgaa 120

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ctggatcagg ctgtccagat cgaagcaggt catcttgagg cgctttgcga agcagccaag 300

gaatatgaga tcgcaattgt cctgggatgc attgaacgtc cgcaagatcg tggagggcac 360

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cctttggcac gcgcggccat gtatggtcaa ggcgaggatt tgcatattgc catttggccc 600

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gcatccatcc tggctaaagg tgaggatatt cttgccaacg gtggttcatg tatcgccggt 780

cctgacggca aatggatcgt tgagccgctt gtaggagaag agaagttaat tgttgcaacg 840

attgatcatt gtcgtgtgcg cgaagagcgt caaaattttg atccttcagg acattacagc 900

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gagtaa 966

<210>62

<211>321

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>62

Met Thr Arg Ser Tyr Pro Asn Asp Thr Leu Thr Val Gly Leu Ala Gln

1 5 10 15

Ile Ala Pro Val Trp Leu Asp Arg Thr Gly Thr Ile Ser Lys Ile Leu

20 25 30

Ala Gln Val His Ala Ala Asn Glu Ala Gly Cys His Leu Val Ala Phe

35 40 45

Gly Glu Gly Leu Leu Pro Gly Tyr Pro Phe Trp Ile Glu Arg Thr Asn

50 55 60

Gly Ala Val Phe Asn Ser Pro Thr Gln Lys Glu Ile His Ala His Tyr

65 70 75 80

Leu Asp Gln Ala Val Gln Ile Glu Ala Gly His Leu Glu Ala Leu Cys

85 90 95

Glu Ala Ala Lys Glu Tyr Glu Ile Ala Ile Val Leu Gly Cys Ile Glu

100 105 110

Arg Pro Gln Asp Arg Gly Gly His Ser Leu Tyr Ala Ser Leu Val Tyr

115 120 125

Ile Asp Ser Asp Gly Ile Ile Gln Ser Val His Arg Lys Leu Met Pro

130 135 140

Thr Tyr Glu Glu Arg Leu Thr Trp Ser Pro Gly Asp Gly His Gly Leu

145 150 155 160

Arg Val His Lys Leu Gly Ala Phe Thr Val Gly Gly Leu Asn Cys Trp

165 170 175

Glu Asn Trp Met Pro Leu Ala Arg Ala Ala Met Tyr Gly Gln Gly Glu

180 185 190

Asp Leu His Ile Ala Ile Trp Pro Gly Gly Ser His Asn Thr Gln Asp

195 200 205

Ile Thr Arg Phe Ile Ala Leu Glu Ser Arg Ser Tyr Val Leu Ser Val

210 215 220

Ser Gly Leu Met Arg Ser Gly Asp Phe Pro Lys Glu Thr Pro His Leu

225 230 235 240

Ala Ser Ile Leu Ala Lys Gly Glu Asp Ile Leu Ala Asn Gly Gly Ser

245 250 255

Cys Ile Ala Gly Pro Asp Gly Lys Trp Ile Val Glu Pro Leu Val Gly

260 265 270

Glu Glu Lys Leu Ile Val Ala Thr Ile Asp His Cys Arg Val Arg Glu

275 280 285

Glu Arg Gln Asn Phe Asp Pro Ser Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val

290 295 300

Leu Gln Leu Lys Ile Asn Arg Gln Arg Gln Ser Thr Ile Ser Phe Gly

305 310 315 320

Glu

<210>63

<211>978

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>63

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gctcgagcca ccgttgtcat gggattgaat gagcgcgcgg tcgataacaa cacgctttac 360

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cccaccaatc acgaacggat gatctggggt atgggagatg ggagcaccct gcgggttttt 480

gatacaccct gtggaaaagt aggcggtctc atctgctggg aaaactacat gcctctggcg 540

cgttatgcac tctatggaca gggcgaacaa atccatgtcg cgccgactgc gcacgatggt 600

gagatcactc tggtcaatgc acgcaatacc gcctatgagg gacgcttatt cgtcatctcc 660

gtgtgcatga tccttcgcaa gtccagcttt ccccatgatt ttgagctggg cgaggaattg 720

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<210>64

<211>325

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>64

Met Gln Asp Arg Val Pro Ile Val Arg Ala Ala Ala Ile Gln Ala Glu

1 5 10 15

Pro Ile Val Leu Asp Cys Asp Ala Thr Val Glu Lys Ala Cys Arg Leu

20 25 30

Ile Gly Glu Ala Ala Glu Asn Gly Ala Asn Leu Ile Val Phe Pro Glu

35 40 45

Ala Phe Ile Pro Val Tyr Pro Asn Ala Ala Ile Trp Gly Arg Gly Leu

50 55 60

Ala Thr Phe Gly Gly Gln Arg Gln Lys Tyr Val Trp Thr Arg Leu Trp

65 70 75 80

Asn Asn Ser Val Glu Ile Pro Gly Pro Ala Thr Asp Arg Leu Ala Lys

85 90 95

Ala Ala His Glu Ala Arg Ala Thr Val Val Met Gly Leu Asn Glu Arg

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Ala Val Asp Asn Asn Thr Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Phe Ile Gly Pro

115 120 125

Asp Gly Arg Leu Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Met Pro Thr Asn His

130 135 140

Glu Arg Met Ile Trp Gly Met Gly Asp Gly Ser Thr Leu Arg Val Phe

145 150 155 160

Asp Thr Pro Cys Gly Lys Val Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr

165 170 175

Met Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Tyr Gly Gln Gly Glu Gln Ile His

180 185 190

Val Ala Pro Thr Ala His Asp Gly Glu Ile Thr Leu Val Asn Ala Arg

195 200 205

Asn Thr Ala Tyr Glu Gly Arg Leu Phe Val Ile Ser Val Cys Met Ile

210 215 220

Leu Arg Lys Ser Ser Phe Pro His Asp Phe Glu Leu Gly Glu Glu Leu

225 230 235 240

Ala Glu Ala Asp Asp Phe Ile Lys Ser Gly Gly Ser Ala Ile Val Gly

245 250 255

Pro Asp Gly Glu Val Leu Ala Gly Pro Leu Trp Asn Glu Glu Asn Ile

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Leu Tyr Ala Asp Leu Asp Leu Asn Arg Ile Val Asp Glu Arg Arg Val

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Phe Asp Val Thr Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Leu Arg Leu His

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Phe Asn Ala Ser Pro Gln Lys Thr Ile Glu Arg Tyr Glu Gln Pro Leu

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Asp Pro Ser Glu Gly

325

<210>65

<211>1002

<212>DNA

<213>未知

<220>

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<400>65

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tatgtcgtca tgggcgtcac ggaaaaggac accgacgcaa gcggcgcgag cctttacaac 360

acgctcctct atttcaaccc cgcgggggac ctcctgggaa aacaccggaa gcttgttcct 420

accggcgggg agcggctggt ctgggcgcag ggcgacggca gcaccctgga agtgtacgac 480

actcccctgg gaaaaatcgg aggcctcatc tgctgggaaa actacatgcc cctcgcccgg 540

tacacgatgt atgcctgggg gacccagatt tatatcgcgg ccacatggga ccagggggag 600

acgtggcttg ccaccctgcg gcatatcgct aaggaaggac gggtgtacgt catcggctgc 660

tgcatcgcgc tgcggcggga cgacatcccc gaccggctgg aatacaagaa gaagttctac 720

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<210>66

<211>333

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>66

Met Pro Thr Pro Thr Ser Lys Phe Lys Ile Gly Ala Val Gln Ala Ser

1 5 10 15

Pro Val Phe Leu Asp Arg Glu Ala Thr Ala Gln Lys Ala Cys Lys Leu

20 25 30

Ile Ala Glu Ala Gly Gly Gln Gly Ala Arg Leu Ile Val Phe Pro Glu

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Ser Phe Ile Pro Thr Tyr Pro Asp Trp Val Trp Ala Val Pro Pro Gly

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Arg Gly Lys Val Leu Ser Glu Leu Tyr Ala Glu Leu Leu Ala Asn Ala

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Val Glu Val Pro Gly Pro Val Thr Asp Gln Leu Gly Glu Ala Ala Gln

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Lys Thr Gly Ala Tyr Val Val Met Gly Val Thr Glu Lys Asp Thr Asp

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Ala Ser Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Phe Asn Pro Ala

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Gly Asp Leu Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly Gly Glu

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Arg Leu Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Glu Val Tyr Asp

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Thr Pro Leu Gly Lys Ile Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met

165 170 175

Pro Leu Ala Arg Tyr Thr Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile Tyr Ile

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Ala Ala Thr Trp Asp Gln Gly Glu Thr Trp Leu Ala Thr Leu Arg His

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Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Ile Gly Cys Cys Ile Ala Leu

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Arg Arg Asp Asp Ile Pro Asp Arg Leu Glu Tyr Lys Lys Lys Phe Tyr

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Ser Gly Ser Arg Glu Trp Ile Asn Met Gly Asp Ser Ala Ile Val Asn

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Pro Glu Gly Glu Phe Ile Ala Gly Pro Val Arg Met Lys Glu Glu Ile

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Leu Tyr Ala Glu Val Asp Pro Leu Leu Met Ala Gly Ser Lys Trp Met

275 280 285

Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Glu Leu Ile

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Val His Arg Gln Pro His Pro Met Ile Arg Val Ile Glu Lys Glu Gly

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Gly Ala Gly Arg Thr Gly Asp Glu Lys Lys Glu Asn Glu

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<210>67

<211>936

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>67

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<210>68

<211>311

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>68

Met Pro Arg Val Ala Val Val Gln Arg Pro Pro Val Phe Leu Asp Arg

1 5 10 15

Ala Ala Thr Leu Glu Asn Ala Val Ala Ser Leu Ala Glu Ala Ala Ser

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Asn Gly Ala Arg Leu Ala Val Phe Pro Glu Ala Leu Val Pro Gly Tyr

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Pro Ala Trp Met Trp Arg Leu Arg Pro Gly Pro Asp Met Ala Leu Thr

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Asp Glu Leu Ala Pro Leu Arg Glu Ala Ala Arg Arg His Glu Leu Thr

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Val Val Cys Gly Leu His Glu Arg Asp Glu Ala Leu Gly Gly Gly Thr

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Leu Tyr Asn Thr Val Val Thr Ile Gly Ala Asp Gly Ala Val Leu Asn

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Arg His Arg Lys Leu Met Pro Thr Asn Pro Glu Arg Met Val Trp Gly

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Cys Gly Asp Ala Ser Gly Leu Arg Thr Val Pro Thr Gln Cys Gly Arg

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Val Gly Ala Leu Ile Cys Trp Glu Ser Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr

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Ala Leu Tyr Ala Gln Gly Ile Asp Leu Tyr Val Thr Pro Thr Tyr Asp

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Ser Gly Glu Arg Ala Val Ala Thr Met Gln His Ile Ala Arg Glu Gly

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Gly Cys Trp Val Val Ser Cys Gly Ser Ala Phe Gln Ala Arg Asp Val

210 215 220

Pro Asp Ala Phe Pro Gly Lys Ser Glu Leu Phe Arg Asp Asn Asp Glu

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Trp Ile Asn Pro Gly Asp Ser Val Val Val Ala Pro Gly Gly Lys Val

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Val Ala Gly Pro Leu His Lys Glu Arg Ala Ile Leu Tyr Ala Glu Ile

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Asp Leu Glu Arg Val Gly Val Ala Arg Arg Ser Leu Asp Val Val Gly

275 280 285

His Tyr Ala Arg Pro Asp Leu Phe Asp Leu His Val Asn Ala Arg Pro

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Gln Ser Val Val Glu Leu Arg

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<210>69

<211>939

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>69

gtgaccgagt ttcggacggt gcgggtcgca gcggtgcagg cgacgccggt gaccctcgac 60

gccgatgcct cggtcgagaa ggcgatcggg ctgatcggcg aggcggtggc cggtggagcg 120

cagctcgtcg tgctgcccga ggccttcgtg tcgctctacc cgtcgaacgc gtgggcgcga 180

gcggccgccg gattcggcgg cttcgacgag ctctgggagc ggatgtgggc cagctcgctc 240

gacgtcccgg gcccgctggt cgaccggctg gtcgatgcgt gccgcaggca tgacgtggta 300

tgcgtgatcg gcgtgaacga gcgcgaaagc gaaaggccgg ggtcgcttta caacacgatg 360

ctgaccctcg gcccgtcggg cctcctgcac cggcaccgca agctcatgcc gacgcaccac 420

gagcggctgt tccatgggat cggcgacggt caagacctcg gcgttgtgga gaccgacgcg 480

ggacggatcg ggggactgat ctgctgggag aaccgaatgc cgctcgcgcg ctacgcggtc 540

taccagggtg gaccgcagat ctgggtcgcg ccgacggccg atgactccga cggctggctc 600

gcgagcatgc gccacatcgc gatcgagtcg ggcgcgttcg tcgtgtcggt gccgcagttc 660

atcccggcgt ccgcgttccc cgacgatttc cccgtcgagc taccgccggg caaggaggtg 720

ttcggccgcg gcggtgcggc gatcgtcgag ccgacctggg gcgaggtaat cgccgggccg 780

ctctacgatc gggaggggat cgtgttcgcc gactgtgacc tgcgacgcgg cttgcatgcc 840

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<210>70

<211>312

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>70

Val Thr Glu Phe Arg Thr Val Arg Val Ala Ala Val Gln Ala Thr Pro

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Val Thr Leu Asp Ala Asp Ala Ser Val Glu Lys Ala Ile Gly Leu Ile

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Gly Glu Ala Val Ala Gly Gly Ala Gln Leu Val Val Leu Pro Glu Ala

35 40 45

Phe Val Ser Leu Tyr Pro Ser Asn Ala Trp Ala Arg Ala Ala Ala Gly

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Phe Gly Gly Phe Asp Glu Leu Trp Glu Arg Met Trp Ala Ser Ser Leu

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Asp Val Pro Gly Pro Leu Val Asp Arg Leu Val Asp Ala Cys Arg Arg

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His Asp Val Val Cys Val Ile Gly Val Asn Glu Arg Glu Ser Glu Arg

100 105 110

Pro Gly Ser Leu Tyr Asn Thr Met Leu Thr Leu Gly Pro Ser Gly Leu

115 120 125

Leu His Arg His Arg Lys Leu Met Pro Thr His His Glu Arg Leu Phe

130 135 140

His Gly Ile Gly Asp Gly Gln Asp Leu Gly Val Val Glu Thr Asp Ala

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Gly Arg Ile Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Arg Met Pro Leu Ala

165 170 175

Arg Tyr Ala Val Tyr Gln Gly Gly Pro Gln Ile Trp Val Ala Pro Thr

180 185 190

Ala Asp Asp Ser Asp Gly Trp Leu Ala Ser Met Arg His Ile Ala Ile

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Glu Ser Gly Ala Phe Val Val Ser Val Pro Gln Phe Ile Pro Ala Ser

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Asp Leu Arg Arg Gly Leu His Ala Lys Arg Trp Phe Asp Ser Val Gly

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His Tyr Ser Arg Ala Glu Val Leu Asp Gly Gly Val Glu Arg Val Pro

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Ala Pro Val Asp Gly Glu Ser Pro

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<210>71

<211>966

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>71

atgccaaacg agaacaccaa cgccacattc aaagttgccg ctgtgcaggc ttcgcctgtg 60

tttcttgatc gtgccgcaac aatcgacaag gcttgcgatt tgatcgccgc tgctggcggt 120

gaaggggcac gcttgattgt ctttccagaa gcattcatcc cgtcttatcc tgattgggta 180

tgggcaattc cttcgggtga agagggcgta ctcaatgagt tgtacgcaga tctgctatcc 240

aactcggtca cgattcccag tgactcgacg gacaaactgt gcagagcagc caggcttgct 300

aatgcctacg tggtgatggg tatgagcgaa cgcaatgctg aggcaagcgg cgcgagcatg 360

tataacacgc tattgtatat tgatgcacag ggggagattc tgggcaagca tcggaagttg 420

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<210>72

<211>321

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>72

Met Pro Asn Glu Asn Thr Asn Ala Thr Phe Lys Val Ala Ala Val Gln

1 5 10 15

Ala Ser Pro Val Phe Leu Asp Arg Ala Ala Thr Ile Asp Lys Ala Cys

20 25 30

Asp Leu Ile Ala Ala Ala Gly Gly Glu Gly Ala Arg Leu Ile Val Phe

35 40 45

Pro Glu Ala Phe Ile Pro Ser Tyr Pro Asp Trp Val Trp Ala Ile Pro

50 55 60

Ser Gly Glu Glu Gly Val Leu Asn Glu Leu Tyr Ala Asp Leu Leu Ser

65 70 75 80

Asn Ser Val Thr Ile Pro Ser Asp Ser Thr Asp Lys Leu Cys Arg Ala

85 90 95

Ala Arg Leu Ala Asn Ala Tyr Val Val Met Gly Met Ser Glu Arg Asn

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Ala Glu Ala Ser Gly Ala Ser Met Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Asp

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130 135 140

Gly Glu Arg Leu Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Gln Val

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Tyr Asp Thr Pro Leu Gly Lys Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn

165 170 175

Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr Thr Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile

180 185 190

Tyr Val Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Gln Pro Trp Leu Ser Thr Leu

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Arg His Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Ile Gly Cys Cys Ile

210 215 220

Ala Met Arg Lys Asp Asp Ile Pro Asp His Tyr Thr Met Lys Gln Lys

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Phe Tyr Ser Asp Ala Asp Glu Trp Ile Asn Ile Gly Asp Ser Ala Ile

245 250 255

Val Asn Pro Glu Gly Gln Phe Ile Ala Gly Pro Val Arg Lys Gln Glu

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Glu Ile Leu Tyr Ala Glu Ile Asp Pro Arg Met Val Gln Gly Pro Lys

275 280 285

Trp Met Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Glu

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Leu Ile Val His Thr Asp Ile Arg Arg Met Ile Lys Ser Glu Lys Asn

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Ser

<210>73

<211>1035

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

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<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>74

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Pro Val Phe Leu Asn Arg Asp Ala Thr Val Glu Lys Ala Cys Arg Leu

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Ile Lys Ser Ala Ala Glu Gly Gly Ala Arg Leu Ile Val Phe Pro Glu

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65 70 75 80

Val Thr Ile Pro Ser Asp Ile Thr Thr Glu Leu Cys Asn Ala Ala Arg

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Ala Ala Asn Ala Tyr Val Val Ile Gly Val Asn Glu Arg Asn Ala Glu

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Ala Ser Asn Gly Ser Leu Tyr Asn Ser Leu Leu Tyr Ile Asp Ala Asn

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165 170 175

Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Tyr Ala Trp Gly Val Gln Leu Tyr Val

180 185 190

Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Gly Pro Trp Thr Ala Thr Leu Arg His

195 200 205

Val Ala Lys Glu Gly Gln Met Tyr Val Ile Gly Cys Cys Gln Ala Leu

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His Lys Asp Asp Leu Pro Glu Leu Asp Gly Leu Lys Glu Lys Tyr Tyr

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Ala Asn Ala Arg Glu Trp Ile Asn Val Gly Asp Ser Ala Ile Val Gly

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Val Asn Arg Glu Gln Arg Pro Met Val Arg Val Val Gly Asp Ser Ser

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Asp Gln Lys Glu Arg Pro Leu Pro Asp Asp Gly Arg Leu Trp Tyr Ala

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<211>1125

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<213>未知

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tggcttgacg ccagccagca ggcacaaatc atgaatgaca cgggttgcca aatcggtccg 720

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<400>76

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Gly Ser Gly Leu Arg Ala Val Lys Ser Gln Val Gly Arg Ile Gly Gln

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Leu Ala Cys Phe Glu His Asn Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Met

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Gly Glu Gly Phe Ala Glu Lys Met Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala

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Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala

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Ile Ser Gly Gly Cys Phe Thr Thr Ile Val Thr Pro Asp Gly Thr Phe

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Leu Gly Glu Pro Leu Arg Ser Gly Glu Gly Glu Val Ile Ala Asp Leu

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Asp Phe Lys Leu Ile Asp Lys Arg Lys Met Leu Met Asp Ser Arg Gly

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<220>

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actccgctgg gaaagatcgg cgggctgatc tgctgggaga actacatgcc cctggcccgg 540

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Met Pro Thr Pro Ser Asp His Phe Lys Ile Ala Ala Val Gln Ala Ser

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tacctcgcag acgtggacgg ctggatcaac ccaggtggca gcgtcatcat caatcctgac 780

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<211>329

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<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>80

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Ala Ser Ser Val Tyr Leu Asp Arg Glu Arg Ser Ile Glu Lys Ala Cys

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Arg Leu Ile Asp Asp Ala Gly Arg Asn Asp Ala Asp Leu Val Val Phe

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Tyr Leu Ala Asp Val Asp Gly Trp Ile Asn Pro Gly Gly Ser Val Ile

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Ile Asn Pro Asp Gly Lys Val Val Ala Gly Pro Ala Met Glu Thr Glu

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Val Arg Arg Arg Lys Arg Ala Arg Arg

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<212>DNA

<213>未知

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<223>从环境样品获得

<400>81

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accgtcgcca aggtcgtccg gaaaatccac gagctcggtc agaaaggcgt gcagttcgcc 120

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gctgcgaccg atgcaatcgg cgaagccgcg cgacaggccg gcatggtcgt gtccatcggc 300

gtcaatgagc gtgacggcgg cacgctttac aacacgcaac tgctcttcga tgccgacggt 360

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atccattcag cgatgtaccc tggctcggcc tttggcgagg gcttcgccca gcgtatggag 600

atcaacatcc gccagcatgc gctcgagtcc gccgctttcg tcgtcaacgc aacggcgtgg 660

cttgacgccg accagcaggc gcaaatcatg aaggacaccg gttgtggaat cggtccgatc 720

tcgggcggct gcttcaccac gatcgtttct cctgacggta tgctgatggc cgatccgctt 780

cgctcgggcg aaggcgaagt gattgtcgat ctcgacttca cgcagatcga ccgccgcaag 840

atgctgatgg actcggccgg ccactacaac cgccctgaac tgctgagtct gatgatcgac 900

cgtacgccgg ctgcgcatgt tcacgaacgc gcttcgcgcc cgatgaccgt cgacgaccag 960

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<210>82

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>82

Met Lys Val Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Phe Ser Pro Val Leu Tyr

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Ser Arg Glu Ala Thr Val Ala Lys Val Val Arg Lys Ile His Glu Leu

20 25 30

Gly Gln Lys Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

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Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ala Ala Val Gln Thr Gly Ile Glu Leu Leu Ser

50 55 60

Gly Thr Glu His Leu Arg Leu Leu Glu Gln Ala Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Ala Ala Thr Asp Ala Ile Gly Glu Ala Ala Arg Gln Ala Gly Met Val

85 90 95

Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Leu Tyr Asn Thr

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys

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Ile Thr Pro Thr His Phe Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Ala Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu

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Ala Cys Phe Glu His Asn Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Ile Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Tyr Pro Gly Ser Ala Phe Gly

180 185 190

Glu Gly Phe Ala Gln Arg Met Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala Leu

195 200 205

Glu Ser Ala Ala Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Met Lys Asp Thr Gly Cys Gly Ile Gly Pro Ile

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Phe Thr Thr Ile Val Ser Pro Asp Gly Met Leu Met

245 250 255

Ala Asp Pro Leu Arg Ser Gly Glu Gly Glu Val Ile Val Asp Leu Asp

260 265 270

Phe Thr Gln Ile Asp Arg Arg Lys Met Leu Met Asp Ser Ala Gly His

275 280 285

Tyr Asn Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Met Ile Asp Arg Thr Pro Ala

290 295 300

Ala His Val His Glu Arg Ala Ser Arg Pro Met Thr Val Asp Asp Gln

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325 330

<210>83

<211>1071

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>83

atgatgagtt cagcccgtgt aataaaactc gccgcagcac agctttcacc tgtgctgccg 60

ggggagtcca caaatagccg cgacggcacc attgccaaag tcgtcgcggc gattgcggag 120

gctgcgcgcg ccggcgcgca gctgatcgtg tttcccgaaa cggtggtgcc gtattacccg 180

tatttctcgt tcattacgcc ggcggtgacg atgggggcgg agcatttgcg cttgtacgat 240

cagtctgtcg tggtgccgag cgccgccact gatactgttg ccgccgctgc aaaaaaacac 300

agcatggtgg tcgtgctcgg tattaacgaa cgcgatcacg gcacgctcta caacgcgcaa 360

ttaattttcg atgcgagcgg cgaattatta ttaaaacgcc gaaaaattac cccgacctat 420

cacgagcgca tggtgtgggg tcagggcgac ggcagcggtt tgaaaaccgt cgacaccgcg 480

atcggccgtg tcggtgcgct cgcctgctgg gaacattaca acccattggc gcgttacagc 540

ctgatggccc agcacgaaga aattcattgc agtcaatttc cggggtcatt ggtcgggcca 600

attttcgccg agcaaatgga agtgacaatg cgccaccacg cgctcgaatc cggttgcttc 660

gtcgttaatg caacggcgtg gttatcggaa gcgcaaattc aatcgatcag cagcgatccc 720

gcgatgcaaa aagcactgcg cggcggttgc tacaccgcaa ttatttcgcc cgaaggcaaa 780

catctgtgcg agccgctacg cgaaggtgaa ggtttgattt ttgccgaagc cgatatggcg 840

ctcattacca aacgcaaacg catgatggat tcggttggtc attacgcgcg acccgaattg 900

ctgtcgctgt taatcgacca tcgcgccacc acaccattgc atagcgtcac cgcgagtgat 960

gccgccgccg taaaaaatac tcggagttcc gctcatgaat cagccgatag tgaaaccatc 1020

cgcgagtcag ttaataacgg aactccaatc gcacggcttg cgcctagttg a 1071

<210>84

<211>356

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>84

Met Met Ser Ser Ala Arg Val Ile Lys Leu Ala Ala Ala Gln Leu Ser

1 5 10 15

Pro Val Leu Pro Gly Glu Ser Thr Asn Ser Arg Asp Gly Thr Ile Ala

20 25 30

Lys Val Val Ala Ala Ile Ala Glu Ala Ala Arg Ala Gly Ala Gln Leu

35 40 45

Ile Val Phe Pro Glu Thr Val Val Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe

50 55 60

Ile Thr Pro Ala Val Thr Met Gly Ala Glu His Leu Arg Leu Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Ser Val Val Val Pro Ser Ala Ala Thr Asp Thr Val Ala Ala Ala

85 90 95

Ala Lys Lys His Ser Met Val Val Val Leu Gly Ile Asn Glu Arg Asp

100 105 110

His Gly Thr Leu Tyr Asn Ala Gln Leu Ile Phe Asp Ala Ser Gly Glu

115 120 125

Leu Leu Leu Lys Arg Arg Lys Ile Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met

130 135 140

Val Trp Gly Gln Gly Asp Gly Ser Gly Leu Lys Thr Val Asp Thr Ala

145 150 155 160

Ile Gly Arg Val Gly Ala Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu

165 170 175

Ala Arg Tyr Ser Leu Met Ala Gln His Glu Glu Ile His Cys Ser Gln

180 185 190

Phe Pro Gly Ser Leu Val Gly Pro Ile Phe Ala Glu Gln Met Glu Val

195 200 205

Thr Met Arg His His Ala Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala

210 215 220

Thr Ala Trp Leu Ser Glu Ala Gln Ile Gln Ser Ile Ser Ser Asp Pro

225 230 235 240

Ala Met Gln Lys Ala Leu Arg Gly Gly Cys Tyr Thr Ala Ile Ile Ser

245 250 255

Pro Glu Gly Lys His Leu Cys Glu Pro Leu Arg Glu Gly Glu Gly Leu

260 265 270

Ile Phe Ala Glu Ala Asp Met Ala Leu Ile Thr Lys Arg Lys Arg Met

275 280 285

Met Asp Ser Val Gly His Tyr Ala Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu

290 295 300

Ile Asp His Arg Ala Thr Thr Pro Leu His Ser Val Thr Ala Ser Asp

305 310 315 320

Ala Ala Ala Val Lys Asn Thr Arg Ser Ser Ala His Glu Ser Ala Asp

325 330 335

Ser Glu Thr Ile Arg Glu Ser Val Asn Asn Gly Thr Pro Ile Ala Arg

340 345 350

Leu Ala Pro Ser

355

<210>85

<211>1014

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>85

atgggtctgg ttcatcagaa atacaaggtt gcggtggttc aggcggcgcc ggtctttctc 60

gacctcgatg cgacggtgga caagacgatc gccctgatcg agcaggccgc agcacagggc 120

gcgaagctga tcgcgtttcc cgagaccttc attcccggat atccgtggca gatctggctt 180

ggggcgcccg cctgggcgat cggccgtggc ttcgtgcagc gctatttcga taactcgttg 240

tcatttgaca gcccgcaggc cgaaaaaatt cgcaaggccg tcaagcgcgc caagctgacc 300

gcggtgatcg gcgtctccga acgcgacggc ggcagcctct atatcggcca atggctgatc 360

ggtcccgacg gcgagaccat tgcgaagcgc cgcaagctgc ggccgaccca tgccgaacgc 420

accgtgttcg gcgagggcga cggcagcgac ctcgccgtcc atgatcgcgc cgacgtggga 480

cggctcggtg caatgtgctg ctgggagcat ctgcagccgc tgtcgaaata cgcgatgtac 540

gcccagaacg agcaggttca cgtcggcgcc tggccgagct tctcattgta cgacccattc 600

gcccatgcgc ttggctggga agtaaacaac gcggcgagca aggtttatgc tgtcgagggc 660

tcatgtttct tcctcggccc gtgcgcggtg gtctcgcagg ccatgatcga cgagctctgc 720

gattcccccg aaaagcacgc cttcctgcac gctggcggcg gccacgcggt aatctatggg 780

ccggacggga gttcgcttgc cgacaaactt ccacccgatc aggagggcat tctgtatgcc 840

gatatcgatc tcggcatgat cggcgtggca aagaacgccg ccgaccccgc aggacactat 900

tccaggccgg acgtcacgcg gctgctgctc aacacttccc gcgccaatcg cgtcgagcat 960

ttttcattgc cgatcgatgc cgaggtcatg agcgaaatca gacttcaggc ctga 1014

<210>86

<211>337

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>86

Met Gly Leu Val His Gln Lys Tyr Lys Val Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Val Phe Leu Asp Leu Asp Ala Thr Val Asp Lys Thr Ile Ala Leu

20 25 30

Ile Glu Gln Ala Ala Ala Gln Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Gln Ile Trp Leu Gly Ala Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ser Phe Asp Ser Pro Gln Ala Glu Lys Ile Arg Lys Ala Val Lys Arg

85 90 95

Ala Lys Leu Thr Ala Val Ile Gly Val Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Gly Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

115 120 125

Lys Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Asp Arg Ala Asp Val Gly

145 150 155 160

Arg Leu Gly Ala Met Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys

165 170 175

Tyr Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Val Gly Ala Trp Pro

180 185 190

Ser Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala His Ala Leu Gly Trp Glu Val

195 200 205

Asn Asn Ala Ala Ser Lys Val Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Phe

210 215 220

Leu Gly Pro Cys Ala Val Val Ser Gln Ala Met Ile Asp Glu Leu Cys

225 230 235 240

Asp Ser Pro Glu Lys His Ala Phe Leu His Ala Gly Gly Gly His Ala

245 250 255

Val Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ser Ser Leu Ala Asp Lys Leu Pro Pro

260 265 270

Asp Gln Glu Gly Ile Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Gly Met Ile Gly

275 280 285

Val Ala Lys Asn Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp

290 295 300

Val Thr Arg Leu Leu Leu Asn Thr Ser Arg Ala Asn Arg Val Glu His

305 310 315 320

Phe Ser Leu Pro Ile Asp Ala Glu Val Met Ser Glu Ile Arg Leu Gln

325 330 335

Ala

<210>87

<211>1062

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>87

atggcggaat cgaagctgaa ggtcgccgca attcaagttg cgcccgtgtt catggatcgc 60

gatgccacga tcgcccgcgc ctgcgagcgg atcgccgaag ccgcccgcgc cggcgcggag 120

ttggtggtct ttcccgaggc attcgtgccc gggtatcccg actggatctg ggtggcgcgg 180

ccaagccaac gcaaactgct caatgatctt tacgcgcacc tcgtctcgca gtcggtcgac 240

gtgccgtcgg cctccgtgga tcgtttgcgc gacgcggctc gcgacggcgg ggtcacggtg 300

gtgatcggcg tcaacgagcg caacaccgaa gcgagcggcg cgagcctcta caacaccgcg 360

ctcgtgatcg gtccactggg gcagctgatc ggccgccacc gcaagcttgt gccgaccggg 420

ccggagcgca tggtgtgggc gcagggcgac ggcagcacgc tcgacgtcta cgacacaccc 480

gtcggcaagc tttcgacgtt gatctgctgg gagaactaca tgccgctcgc gcgctacgcc 540

atggcggcgt ggggcgcgcg catccacgtc gccggcacgt gggaccgcgg cgagccgtgg 600

atctcgacca tgcgtcatgt ggcgacggag ggccgcgtat tcgtgattag ctgttgcatg 660

gcgctgcgca aacgagacat tcccgccgag ctcgagttcg cgatgctcta tcccgacggg 720

cgcgaatgga tcaacgccgg tgattcgctg gtcgtgaatc ccgctggcca gatcatcgct 780

gggccgttgc acgagcagga aggaatcctc tacgccgagc tcgagcgcaa tcagatgacc 840

ggtccgcgtt ggatgttcga cgccgccggc cattacgcgc gaccggacgt cttccaactc 900

acggtaaacc gctccccgcg cccgatgctg cgggaggcgg gggcaaagac gagtgaggca 960

aacacgagag atgccgtacc catggacagc acgccctcga gatcgcggcc ccgcgcggtg 1020

gcgcgaaagg ccgcacgcac cggtcgctcc aagcggcggt ga 1062

<210>88

<211>353

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>88

Met Ala Glu Ser Lys Leu Lys Val Ala Ala Ile Gln Val Ala Pro Val

1 5 10 15

Phe Met Asp Arg Asp Ala Thr Ile Ala Arg Ala Cys Glu Arg Ile Ala

20 25 30

Glu Ala Ala Arg Ala Gly Ala Glu Leu Val Val Phe Pro Glu Ala Phe

35 40 45

Val Pro Gly Tyr Pro Asp Trp Ile Trp Val Ala Arg Pro Ser Gln Arg

50 55 60

Lys Leu Leu Asn Asp Leu Tyr Ala His Leu Val Ser Gln Ser Val Asp

65 70 75 80

Val Pro Ser Ala Ser Val Asp Arg Leu Arg Asp Ala Ala Arg Asp Gly

85 90 95

Gly Val Thr Val Val Ile Gly Val Asn Glu Arg Asn Thr Glu Ala Ser

100 105 110

Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Ala Leu Val Ile Gly Pro Leu Gly Gln

115 120 125

Leu Ile Gly Arg His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly Pro Glu Arg Met

130 135 140

Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Asp Val Tyr Asp Thr Pro

145 150 155 160

Val Gly Lys Leu Ser Thr Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro Leu

165 170 175

Ala Arg Tyr Ala Met Ala Ala Trp Gly Ala Arg Ile His Val Ala Gly

180 185 190

Thr Trp Asp Arg Gly Glu Pro Trp Ile Ser Thr Met Arg His Val Ala

195 200 205

Thr Glu Gly Arg Val Phe Val Ile Ser Cys Cys Met Ala Leu Arg Lys

210 215 220

Arg Asp Ile Pro Ala Glu Leu Glu Phe Ala Met Leu Tyr Pro Asp Gly

225 230 235 240

Arg Glu Trp Ile Asn Ala Gly Asp Ser Leu Val Val Asn Pro Ala GIy

245 250 255

Gln Ile Ile Ala Gly Pro Leu His Glu Gln Glu Gly Ile Leu Tyr Ala

260 265 270

Glu Leu Glu Arg Asn Gln Met Thr Gly Pro Arg Trp Met Phe Asp Ala

275 280 285

Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Gln Leu Thr Val Asn Arg

290 295 300

Ser Pro Arg Pro Met Leu Arg Glu Ala Gly Ala Lys Thr Ser Glu Ala

305 310 315 320

Asn Thr Arg Asp Ala Val Pro Met Asp Ser Thr Pro Ser Arg Ser Arg

325 330 335

Pro Arg Ala Val Ala Arg Lys Ala Ala Arg Thr Gly Arg Ser Lys Arg

340 345 350

Arg

<210>89

<211>918

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>89

atgaatacca aagaagtaaa ggtcgcagcc gctcaatttg ccccacattt tctgaatttg 60

agcaaaacgg tggaaaaaac ctgcaacttg atttccgaag caggcaaaaa tggagcaaag 120

ctcattgtat ttccggaagc cttcctctct ggttatcccg attgggtctg gttaattccc 180

aatggaaatt caacaatgct ggatgattta tatcaggaat tggttgagaa cgctgtaaca 240

atccctgatt caacaacaca gaaactctgt caggcagcaa aagatgccgg ggtatatgtc 300

gcagtcggta tccatgaaag aaatgcagaa gcaagtggct tcacactttt caataccctt 360

ctatacatta atgatcaagg cagcatcatt ggaaaacacc gaaaactgat cccaacaggg 420

ggcgaacgcc tggtctgggg gcagggtaat ggggatacgc ttgctgcatt cgatacacac 480

tttggcaaat tgggaggatt gctttgctgg gaaaactaca tgcccctggc tcggcaagct 540

atgtacgcag ttgggactga agtttatgtt gccccaacct gggactccag tgagaattgg 600

ttgctgagta tgcgccatat agccagagag ggcggcatgt ttgtgatcaa tgtttgccag 660

gctgtccgaa aagacgatat tcctgaccgc tatgcattca agcaactcta ttctggtaat 720

tcagaatgga tcaatagcgg caacagttgc atcatcaatc cgcgcggtga aatcattgcc 780

ggaccatcct caaacaggca agaaatactc tacgcagatt tagatctgag tttgattaca 840

aaatctaaac gcatgttcga tgttaccggg cattatgccc ggccggatgt gtttagatat 900

gaaatcaaaa aaagctag 918

<210>90

<211>305

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>90

Met Asn Thr Lys Glu Val Lys Val Ala Ala Ala Gln Phe Ala Pro His

1 5 10 15

Phe Leu Asn Leu Ser Lys Thr Val Glu Lys Thr Cys Asn Leu Ile Ser

20 25 30

Glu Ala Gly Lys Asn Gly Ala Lys Leu Ile Val Phe Pro Glu Ala Phe

35 40 45

Leu Ser Gly Tyr Pro Asp Trp Val Trp Leu Ile Pro Asn Gly Asn Ser

50 55 60

Thr Met Leu Asp Asp Leu Tyr Gln Glu Leu Val Glu Asn Ala Val Thr

65 70 75 80

Ile Pro Asp Ser Thr Thr Gln Lys Leu Cys Gln Ala Ala Lys Asp Ala

85 90 95

Gly Val Tyr Val Ala Val Gly Ile His Glu Arg Asn Ala Glu Ala Ser

100 105 110

Gly Phe Thr Leu Phe Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Asn Asp Gln Gly Ser

115 120 125

Ile Ile Gly Lys His Arg Lys Leu Ile Pro Thr Gly Gly Glu Arg Leu

130 135 140

Val Trp Gly Gln Gly Asn Gly Asp Thr Leu Ala Ala Phe Asp Thr His

145 150 155 160

Phe Gly Lys Leu Gly Gly Leu Leu Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro Leu

165 170 175

Ala Arg Gln Ala Met Tyr Ala Val Gly Thr Glu Val Tyr Val Ala Pro

180 185 190

Thr Trp Asp Ser Ser Glu Asn Trp Leu Leu Ser Met Arg His Ile Ala

195 200 205

Arg Glu Gly Gly Met Phe Val Ile Asn Val Cys Gln Ala Val Arg Lys

210 215 220

Asp Asp Ile Pro Asp Arg Tyr Ala Phe Lys Gln Leu Tyr Ser Gly Asn

225 230 235 240

Ser Glu Trp Ile Asn Ser Gly Asn Ser Cys Ile Ile Asn Pro Arg Gly

245 250 255

Glu Ile Ile Ala Gly Pro Ser Ser Asn Arg Gln Glu Ile Leu Tyr Ala

260 265 270

Asp Leu Asp Leu Ser Leu Ile Thr Lys Ser Lys Arg Met Phe Asp Val

275 280 285

Thr Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Arg Tyr Glu Ile Lys Lys

290 295 300

Ser

305

<210>91

<211>939

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>91

atgaccaaaa tcgctgtcat tcaagaacct ccggtctatc tgaatctgag taaatcgatg 60

gacagagcgg tcgacttgat tgccaatgct gcaagcaagg ggtgtgagtt gattgtgttt 120

cccgaagcct ggcttgcagg ttaccccacc ttcgtctggc gtcttgcgcc gggcagcgga 180

atgggaaaaa ctgatgagct ttacgcgcgt ttgctcgcca actcggtcga ccgtagcaaa 240

gaggggctta gaccattgca ggaggccgca aaggagcatg gcgttgtcat tgtgctgggt 300

tatcaagagg tggatggcgc gggaagcagc agcacgatct tcaacagctg tgcgattatt 360

gatgcggacg ggcgactggc caacaatcat cgcaagttga tgcccaccaa tccggagagg 420

atggtttggg gttttggcga cggttcaggc ctgaacgtcg ttgacaccgc ggtgggcagg 480

atcggcacgc tgatttgctg ggaaaactac atgccgttag cgcgctacgc gctgtatgtc 540

caaaacatcg aaatctatgt tgccccgact tgggacagtg gtgccatgtg gcaggcgacc 600

ctgcagcata tcgcgcgcga aggtggctgc tgggtcatcg gatgtgcaac gtcgctggaa 660

gcctctgaca tcccggacga cgttccccat cgggatgagc tattcccgaa caaagacgaa 720

tgggtaaacc ctggcgatgc ggtggtttat aagccatttg gcggcattgt ggccggcccc 780

atgcatcagg aaaaggggct tctcatcgca gagttggacg tcgccgctgt tcagtcgtca 840

cgtcggaagt tcgatgcgag cgggcactac gctcgccccg atgtcttcaa actgcatgtg 900

aatcgcaccg cgatgcggcc agttgatttc acgaattag 939

<210>92

<211>312

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>92

Met Thr Lys Ile Ala Val Ile Gln Glu Pro Pro Val Tyr Leu Asn Leu

1 5 10 15

Ser Lys Ser Met Asp Arg Ala Val Asp Leu Ile Ala Asn Ala Ala Ser

20 25 30

Lys Gly Cys Glu Leu Ile Val Phe Pro Glu Ala Trp Leu Ala Gly Tyr

35 40 45

Pro Thr Phe Val Trp Arg Leu Ala Pro Gly Ser Gly Met Gly Lys Thr

50 55 60

Asp Glu Leu Tyr Ala Arg Leu Leu Ala Asn Ser Val Asp Arg Ser Lys

65 70 75 80

Glu Gly Leu Arg Pro Leu Gln Glu Ala Ala Lys Glu His Gly Val Val

85 90 95

Ile Val Leu Gly Tyr Gln Glu Val Asp Gly Ala Gly Ser Ser Ser Thr

100 105 110

Ile Phe Asn Ser Cys Ala Ile Ile Asp Ala Asp Gly Arg Leu Ala Asn

115 120 125

Asn His Arg Lys Leu Met Pro Thr Asn Pro Glu Arg Met Val Trp Gly

130 135 140

Phe Gly Asp Gly Ser Gly Leu Asn Val Val Asp Thr Ala Val Gly Arg

145 150 155 160

Ile Gly Thr Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr

165 170 175

Ala Leu Tyr Val Gln Asn Ile Glu Ile Tyr Val Ala Pro Thr Trp Asp

180 185 190

Ser Gly Ala Met Trp Gln Ala Thr Leu Gln His Ile Ala Arg Glu Gly

195 200 205

Gly Cys Trp Val Ile Gly Cys Ala Thr Ser Leu Glu Ala Ser Asp Ile

210 215 220

Pro Asp Asp Val Pro His Arg Asp Glu Leu Phe Pro Asn Lys Asp Glu

225 230 235 240

Trp Val Asn Pro Gly Asp Ala Val Val Tyr Lys Pro Phe Gly Gly Ile

245 250 255

Val Ala Gly Pro Met His Gln Glu Lys Gly Leu Leu Ile Ala Glu Leu

260 265 270

Asp Val Ala Ala Val Gln Ser Ser Arg Arg Lys Phe Asp Ala Ser Gly

275 280 285

His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Lys Leu His Val Asn Arg Thr Ala

290 295 300

Met Arg Pro Val Asp Phe Thr Asn

305 310

<210>93

<211>978

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>93

atgcccatca tcaaagccgc tgccgtgcaa atcagcccgg tgctttacag tcgcgaaggc 60

accgtggaca aggtctgtca acagatcatc gacctcggtc ggcaaggcgt gcagttcgcc 120

gtctttccgg aaacggtggt gccttactac ccgtactttt cgtttgtgca gccggccttt 180

gccatgggcg cacagcacct caagttgctg gatcaatcgg tgacagtgcc gtcggccgcc 240

accttggcca tcggtgaagc ttgcaagcaa gcagggatag tggtgtccat cggcgtcaac 300

gaacgcgatg gcggtacgat ctacaacgcg caattactct tcgatgccga cggcagcctg 360

attcagcatc gccgcaaaat caccccgacc tatcacgaac gcatggtctg ggggcaaggc 420

gatggttccg gcctgcgcgc catcgacagt gcagtggggc gcattggctc cctggcctgt 480

tgggagcatt acaacccgct ggctcgttat gccttgatgg ccgatggcga gcagatccac 540

gccgcgatgt ttcccggctc gctggtgggc gacatttttg ccgagcagat cgaagtcacc 600

atccgccatc acgccttgga gtccggctgt ttcgtggtca acgccaccgc ctggctggac 660

gccgatcagc agggccaaat catgcaagac accggttgca gcctcggccc gatctcgggt 720

ggctgcttca ccgccatcgt ttcccctgaa ggcaagttgc tcggtgagcc gctgcgttcc 780

ggcgaagggg tggtgatcgc cgatctcgat ctggcactga tcgataagcg taaacggatg 840

atggattcgg tcgggcatta cagtcgcccg gaactgctca gcctgttgat cgaccgcacg 900

cccacagcgc atgtgcatga acgcagcgcg cacctggtgg ctgtcgctac cgaggagttc 960

gatcatgcaa accaatga 978

<210>94

<211>325

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>94

Met Pro Ile Ile Lys Ala Ala Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Gly Thr Val Asp Lys Val Cys Gln Gln Ile Ile Asp Leu

20 25 30

Gly Arg Gln Gly Val Gln Phe Ala Val Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Pro Ala Phe Ala Met Gly Ala

50 55 60

Gln His Leu Lys Leu Leu Asp Gln Ser Val Thr Val Pro Ser Ala Ala

65 70 75 80

Thr Leu Ala Ile Gly Glu Ala Cys Lys Gln Ala Gly Ile Val Val Ser

85 90 95

Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Ala Gln Leu

100 105 110

Leu Phe Asp Ala Asp Gly Ser Leu Ile Gln His Arg Arg Lys Ile Thr

115 120 125

Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Val Trp Gly Gln Gly Asp Gly Ser Gly

130 135 140

Leu Arg Ala Ile Asp Ser Ala Val Gly Arg Ile Gly Ser Leu Ala Cys

145 150 155 160

Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met Ala Asp Gly

165 170 175

Glu Gln Ile His Ala Ala Met Phe Pro Gly Ser Leu Val Gly Asp Ile

180 185 190

Phe Ala Glu Gln Ile Glu Val Thr Ile Arg His His Ala Leu Glu Ser

195 200 205

Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp Gln Gln

210 215 220

Gly Gln Ile Met Gln Asp Thr Gly Cys Ser Leu Gly Pro Ile Ser Gly

225 230 235 240

Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Ser Pro Glu Gly Lys Leu Leu Gly Glu

245 250 255

Pro Leu Arg Ser Gly Glu Gly Val Val Ile Ala Asp Leu Asp Leu Ala

260 265 270

Leu Ile Asp Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His Tyr Ser

275 280 285

Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro Thr Ala His

290 295 300

Val His Glu Arg Ser Ala His Leu Val Ala Val Ala Thr Glu Glu Phe

305 310 315 320

Asp His Ala Asn Gln

325

<210>95

<211>966

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>95

atgtccaacg agaataacat tgctacattc aaagttgccg cagtccaggc cacacctgtg 60

tttcttgatc gtgaagcaac catcgacaaa gcttgcgcgt tgattgccac tgctggcagt 120

gaaggagcgc gcctgattgt gtttccagaa gcattcatcc caacttatcc tgaatgggta 180

tggggtattc cctccggtga gcaaggttta ctcaacgaac tctatgcaga gttgctcacc 240

aatgcggtca ccattcccag cgatgcgact gacaggctgt gcgaggctgc gcagcttgcg 300

aatgcctacg tagtgatggg catgagcgaa cggaacgtcg aggcgagtgg cgcaagcctg 360

tataatacgc tgttgtacat aaatgcgcag ggggagattt tagggaaaca tcgaaagctg 420

gtgccaacgg gcggcgaacg cctggtatgg gcgcagggtg atggcagtac gctgcaggtc 480

tacgatactc cattgggaaa actcggtggc ttaatttgct gggaaaatta tatgccgctg 540

gcacggtatg ctatgtatgc ctggggaaca caaatctatg tcgcggcaac gtgggatcgc 600

ggtcaaccct ggctttctac attaaggcat atcgccaaag aaggcagggt atacgtgatt 660

ggttgctgta tcgcgatgcg taaagacgat attccagatc gttacaccat gaagcaaaaa 720

tattatgctg aaatggatga atggatgaat gttggtgaca gtgtgattgt caatcccgag 780

gggcacttta ttgccgggcc tgtgcgcaag caggaagaaa ttctctacgc ggagattgat 840

cctcgcatgg tgcaaggccc gaagtggatg ctcgatgtgg cagggcatta tgcgagaccg 900

gatgtgttcc agttgacggt gcatacggat gtgaggcgga tgatgcgggt ggaagatgat 960

tcataa 966

<210>96

<211>321

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>96

Met Ser Asn Glu Asn Asn Ile Ala Thr Phe Lys Val Ala Ala Val Gln

1 5 10 15

Ala Thr Pro Val Phe Leu Asp Arg Glu Ala Thr Ile Asp Lys Ala Cys

20 25 30

Ala Leu Ile Ala Thr Ala Gly Ser Glu Gly Ala Arg Leu Ile Val Phe

35 40 45

Pro Glu Ala Phe Ile Pro Thr Tyr Pro Glu Trp Val Trp Gly Ile Pro

50 55 60

Ser Gly Glu Gln Gly Leu Leu Asn Glu Leu Tyr Ala Glu Leu Leu Thr

65 70 75 80

Asn Ala Val Thr Ile Pro Ser Asp Ala Thr Asp Arg Leu Cys Glu Ala

85 90 95

Ala Gln Leu Ala Asn Ala Tyr Val Val Met Gly Met Ser Glu Arg Asn

100 105 110

Val Glu Ala Ser Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Asn

115 120 125

Ala Gln Gly Glu Ile Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly

130 135 140

Gly Glu Arg Leu Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Gln Val

145 150 155 160

Tyr Asp Thr Pro Leu Gly Lys Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn

165 170 175

Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile

180 185 190

Tyr Val Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Gln Pro Trp Leu Ser Thr Leu

195 200 205

Arg His Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Ile Gly Cys Cys Ile

210 215 220

Ala Met Arg Lys Asp Asp Ile Pro Asp Arg Tyr Thr Met Lys Gln Lys

225 230 235 240

Tyr Tyr Ala Glu Met Asp Glu Trp Met Asn Val Gly Asp Ser Val Ile

245 250 255

Val Asn Pro Glu Gly His Phe Ile Ala Gly Pro Val Arg Lys Gln Glu

260 265 270

Glu Ile Leu Tyr Ala Glu Ile Asp Pro Arg Met Val Gln Gly Pro Lys

275 280 285

Trp Met Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Gln

290 295 300

Leu Thr Val His Thr Asp Val Arg Arg Met Met Arg Val Glu Asp Asp

305 310 315 320

Ser

<210>97

<211>1017

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>97

atgggcatcg aacatccgaa atacaaggtc gccgtggtgc aagctgcgcc cgcctggctc 60

gacctcgacg cgtcgatcga caagacgatc gggctgatcg aggaggcggc gaagaaaggc 120

gccaagctga tcgctttccc cgaagccttc attcccggct acccttggca catctggctc 180

gactcacccg cctgggcgat cggccgcggt ttcgtgcagc gctatttcga caattcgctc 240

gcctacgaca gcccacaggc ggaaaggctg cgacaggccg tgcggaaggc caagctcacc 300

gccgtgatcg gcctgtccga gcgcgacggc ggcagcctct atctcgcgca gtggctgatc 360

gggcccgacg gtgagaccat cgcaaagcgc cgcaagctgc ggccgaccca tgccgagcgc 420

accgtctatg gcgaaggcga cggcagcgat ctcgccgtcc atgagcgggc cgacatcggc 480

cggctcggcg cgctgtgctg ctgggagcat ctgcagccgc tgtcgaaatt cgccatgtac 540

gcccagaacg agcaggtaca tgtcgcggcc tggccgagct tctcgctcta cgatcccttc 600

gcgcctgcgc tgggcgcgga ggtgaacaac gccgcctccc gcatctatgc ggtggaaggc 660

tcctgcttcg tgctcgcacc gtgcgcgacg gtctcgcagg ccatgatcga cgagctctgc 720

gatcggccgg acaagcacgc gctgctgcat gccggcggcg gcttcgccgc gatctacggg 780

cccgacggca gccagatcgg cgacaagctg ccgcccgagc aggagggcct gctgatcgcc 840

gagatcgatc tgggcgcgat cggcgtcgcc aagaacgcgg ccgatcccgc cgggcattat 900

tcgcggcccg acgtcacgcg gctcctgctc aacaggaagc cgaacaagcg cgtggagcag 960

ttcgcgctgc ccgtcgacac ggtcgagccc gtcgacgtcg cggcggcagc aagctga 1017

<210>98

<211>338

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>98

Met Gly Ile Glu His Pro Lys Tyr Lys Val Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ala Trp Leu Asp Leu Asp Ala Ser Ile Asp Lys Thr Ile Gly Leu

20 25 30

Ile Glu Glu Ala Ala Lys Lys Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Ala Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp His Ile Trp Leu Asp Ser Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ala Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Glu Arg Leu Arg Gln Ala Val Arg Lys

85 90 95

Ala Lys Leu Thr Ala Val Ile Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Leu Ala Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

115 120 125

Lys Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Tyr Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Glu Arg Ala Asp Ile Gly

145 150 155 160

Arg Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys

165 170 175

Phe Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Val Ala Ala Trp Pro

180 185 190

Ser Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala Pro Ala Leu Gly Ala Glu Val

195 200 205

Asn Asn Ala Ala Ser Arg Ile Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val

210 215 220

Leu Ala Pro Cys Ala Thr Val Ser Gln Ala Met Ile Asp Glu Leu Cys

225 230 235 240

Asp Arg Pro Asp Lys His Ala Leu Leu His Ala Gly Gly Gly Phe Ala

245 250 255

Ala Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ser Gln Ile Gly Asp Lys Leu Pro Pro

260 265 270

Glu Gln Glu Gly Leu Leu Ile Ala Glu Ile Asp Leu Gly Ala Ile Gly

275 280 285

Val Ala Lys Asn Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp

290 295 300

Val Thr Arg Leu Leu Leu Asn Arg Lys Pro Asn Lys Arg Val Glu Gln

305 310 315 320

Phe Ala Leu Pro Val Asp Thr Val Glu Pro Val Asp Val Ala Ala Ala

325 330 335

Ala Ser

<210>99

<211>1014

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>99

atgcctgaca agagaatcgt ccgcgccgcc gcggtccaga tagcaccgga cctcgaacgg 60

cccggtggca cgctcgagaa ggtcctcgag acgatcgacg acgccgcacg ccagggcgtg 120

cagctcatcg tcttccccga gaccttcctg ccctactacc cgtacttttc gttcgtgcgg 180

gcgccggtgg catcgggtgc agagcacatg cggctctatg acgaagcggt ggtcgtgccc 240

gggccggtga cgcatgcggt ggccgagcgg gcacggcggc acggcatggt cgtcgtgctc 300

ggcgtgaacg agcgcgatca cggcagctta tacaacgcac aactgatctt cgataccgac 360

ggcgagctgc tgctcaagcg ccgcaagatc acgccgacgt ttcacgaacg gatgatctgg 420

ggcatgggcg acgcagccgg cctgaaggta gcggaaacgc gtatcggccg ggtgggtgca 480

ctcgcttgct gggaacacta caacccgctt gcacgttatg cactgatgac ccagcacgaa 540

gagattcatt gcagccagtt tcccggctcg ctggtcggac ccatcttcgg tgaacagatc 600

gaagtgacca tccggcatca cgcactggaa tccggctgct tcgtgatcaa ttccaccggc 660

tggctgaccg agccgcagat cgagtcgatc acgaaagatc cgggcctgca gaaggcgctt 720

cgcggcggct gcaacacggc gatcatctcg cccgaaggcc agcatctcgc cccgccgctg 780

cgtgagggcg agggcatggt catcgctgac ctggacatgt cgctgatcac caaacgcaaa 840

cgcatgatgg attctgtcgg ccactacgcg cggcccgaac tgctgagcct cgccatcaac 900

gaccggccgg cggtcacgtc ggcacccatg aacagcttct catcttcaac cgggggattg 960

caccttgaac gcgaacgaga ccttgtcggc cgtgagccgg caattgatga ctga 1014

<210>100

<211>337

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>100

Met Pro Asp Lys Arg Ile Val Arg Ala Ala Ala Val Gln Ile Ala Pro

1 5 10 15

Asp Leu Glu Arg Pro Gly Gly Thr Leu Glu Lys Val Leu Glu Thr Ile

20 25 30

Asp Asp Ala Ala Arg Gln Gly Val Gln Leu Ile Val Phe Pro Glu Thr

35 40 45

Phe Leu Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Arg Ala Pro Val Ala

50 55 60

Ser Gly Ala Glu His Met Arg Leu Tyr Asp Glu Ala Val Val Val Pro

65 70 75 80

Gly Pro Val Thr His Ala Val Ala Glu Arg Ala Arg Arg His Gly Met

85 90 95

Val Val Val Leu Gly Val Asn Glu Arg Asp His Gly Ser Leu Tyr Asn

100 105 110

Ala Gln Leu Ile Phe Asp Thr Asp Gly Glu Leu Leu Leu Lys Arg Arg

115 120 125

Lys Ile Thr Pro Thr Phe His Glu Arg Met Ile Trp Gly Met Gly Asp

130 135 140

Ala Ala Gly Leu Lys Val Ala Glu Thr Arg Ile Gly Arg Val Gly Ala

145 150 155 160

Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met

165 170 175

Thr Gln His Glu Glu Ile His Cys Ser Gln Phe Pro Gly Ser Leu Val

180 185 190

Gly Pro Ile Phe Gly Glu Gln Ile Glu Val Thr Ile Arg His His Ala

195 200 205

Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Ile Asn Ser Thr Gly Trp Leu Thr Glu

210 215 220

Pro Gln Ile Glu Ser Ile Thr Lys Asp Pro Gly Leu Gln Lys Ala Leu

225 230 235 240

Arg Gly Gly Cys Asn Thr Ala Ile Ile Ser Pro Glu Gly Gln His Leu

245 250 255

Ala Pro Pro Leu Arg Glu Gly Glu Gly Met Val Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Met Ser Leu Ile Thr Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His

275 280 285

Tyr Ala Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Ala Ile Asn Asp Arg Pro Ala

290 295 300

Val Thr Ser Ala Pro Met Asn Ser Phe Ser Ser Ser Thr Gly Gly Leu

305 310 315 320

His Leu Glu Arg Glu Arg Asp Leu Val Gly Arg Glu Pro Ala Ile Asp

325 330 335

Asp

<210>101

<211>1065

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>101

atggcgacag tccatccgaa atttaaagta gccgccgtcc aggcggcccc ggcctttctc 60

gacctcgacg cgtcggtgga aaaagcggtg cgcctgattg atgaagccgg cgccgctggt 120

gcccggctca tcgcgtttcc agagactttt atccccggtt atccgtggtg gatctggctc 180

ggtgctccgg cctgggcgat catgcgcggc ttcgtctccc gctatttcga caactcgctg 240

cagtacggca ccccggaagc cgaccggctg cgggcagccg ccaaacgcaa caaaatgttc 300

gtcgcgctcg gactgtcaga gcgcgacggc ggcagtctct acatcgccca atggattatc 360

ggacccgacg gcgagacggt cgcaacgcgc cgcaagctca agcctactca cgccgagcgg 420

acggtgttcg gcgaaggcga tggctcgcac cttgcggtcc acgaacttga tatcgggcgg 480

gtcggtgcgc tgtgctgttg ggagcacctg cagccactgt cgaagtacgc gatgtatgcg 540

cagaacgagc aagttcatat cgcggcgtgg ccgagctttt cgctttacga tccgttcgcg 600

catgcgcttg gcgccgaggt caacaacgcg gcgagcaaga tctacgcggt cgaaggctca 660

tgctttgtga ttgcgccatg cgcgaccgtt tcccaggcga tgatcgacga attgtgtgac 720

tcgcccgaga agcatcagtt cctgcacgtc ggcggcggtt tcgccgtgat ctatggtccc 780

gacggcgcgc cactcgccaa gccactggcg cccgatcagg agggtctcct ttacgcggat 840

atcgacctcg gcatgatttc ggtcgcgaaa gcggcggccg atccggctgg acattacgcg 900

cgcccggacg tgacccgtct gttgttcaac aatcgtcctg ggaaccgggt ggagacactc 960

gcgctgccgg tcgaccagga ggcagaggcg ggagcaggcg gcaaacctgc gcccaagtca 1020

ccgagtgtcg ctgcgttcac actgacgcag gcggcagccg agtag 1065

<210>102

<211>354

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>102

Met Ala Thr Val His Pro Lys Phe Lys Val Ala Ala Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ala Phe Leu Asp Leu Asp Ala Ser Val Glu Lys Ala Val Arg Leu

20 25 30

Ile Asp Glu Ala Gly Ala Ala Gly Ala Arg Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Trp Ile Trp Leu Gly Ala Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Met Arg Gly Phe Val Ser Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Gln Tyr Gly Thr Pro Glu Ala Asp Arg Leu Arg Ala Ala Ala Lys Arg

85 90 95

Asn Lys Met Phe Val Ala Leu Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Ile Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Val Ala

115 120 125

Thr Arg Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser His Leu Ala Val His Glu Leu Asp Ile Gly Arg

145 150 155 160

Val Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys Tyr

165 170 175

Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Ile Ala Ala Trp Pro Ser

180 185 190

Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala His Ala Leu Gly Ala Glu Val Asn

195 200 205

Asn Ala Ala Ser Lys Ile Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val Ile

210 215 220

Ala Pro Cys Ala Thr Val Ser Gln Ala Met Ile Asp Glu Leu Cys Asp

225 230 235 240

Ser Pro Glu Lys His Gln Phe Leu His Val Gly Gly Gly Phe Ala Val

245 250 255

Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ala Pro Leu Ala Lys Pro Leu Ala Pro Asp

260 265 270

Gln Glu Gly Leu Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Gly Met Ile Ser Val

275 280 285

Ala Lys Ala Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val

290 295 300

Thr Arg Leu Leu Phe Asn Asn Arg Pro Gly Asn Arg Val Glu Thr Leu

305 310 315 320

Ala Leu Pro Val Asp Gln Glu Ala Glu Ala Gly Ala Gly Gly Lys Pro

325 330 335

Ala Pro Lys Ser Pro Ser Val Ala Ala Phe Thr Leu Thr Gln Ala Ala

340 345 350

Ala Glu

<210>103

<211>945

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>103

atgggcgagt tcggcgaggt gacgctgggg gtggcgcagg cggcgccggt gtacttogac 60

cgggaggcgt cgacggagaa ggctcgcggc ctgatccggg aggcggggga gaagggcgtc 120

gacctgttgg cgttcgggga gacgtggctg acggggtacc cgtactggaa ggatgcgccg 180

tggtctcggg agtacaacga cctgcgcgcg cggtacgtgg cgaatggcgt gatgataccg 240

gggccggaga cggacgcgct atgccaggca gcggcggaag cgggggtgga cgtggcaatc 300

ggcgtggtgg agctggagcc ggggagcctt tcgagcgtgt attgcacgtt gctgttcatc 360

tcgcgcgagg gcgagatcct ggggcggcac cggaagctga agccgacgga ttcggaacgg 420

cggtactggt cagagggtga tgcgacgggg ctgcgggtgt acgagcggcc atatggccgg 480

ttgagcggat tgaactgctg ggaacacctt atgatgttgc cggggtacgc gctggcggca 540

caggggacgc agtttcatgt ggcagcgtgg ccgaacatgg cgagctcggc gagcgagctg 600

ctgtcgcggg cgtatgcgta ccaggccgga tgctacgtgt tgtgcgcggg cgggctcggg 660

cctgcgccgg gagagctacc ggacggcatc gcggcggagt cgctggacca cctgacgggc 720

gagagctgca tcatcgaccc gtggggaaaa gtgatcgcgg ggccggtgtc gtgcgaggag 780

acgctgatta cggcgcgggt atcgaccgcg tcaatctacc ggcgcaagtc gctgacggac 840

gtgggtggcc actactcgcg accggacgtg ttccggttcg aggtggatag gtcggagcgc 900

ccgcgagtgg tgtttcggga tggggatgtg gacgaccggg ggtaa 945

<210>104

<211>314

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>104

Met Gly Glu Phe Gly Glu Val Thr Leu Gly Val Ala Gln Ala Ala Pro

1 5 10 15

Val Tyr Phe Asp Arg Glu Ala Ser Thr Glu Lys Ala Arg Gly Leu Ile

20 25 30

Arg Glu Ala Gly Glu Lys Gly Val Asp Leu Leu Ala Phe Gly Glu Thr

35 40 45

Trp Leu Thr Gly Tyr Pro Tyr Trp Lys Asp Ala Pro Trp Ser Arg Glu

50 55 60

Tyr Asn Asp Leu Arg Ala Arg Tyr Val Ala Asn Gly Val Met Ile Pro

65 70 75 80

Gly Pro Glu Thr Asp Ala Leu Cys Gln Ala Ala Ala Glu Ala Gly Val

85 90 95

Asp Val Ala Ile Gly Val Val Glu Leu Glu Pro Gly Ser Leu Ser Ser

100 105 110

Val Tyr Cys Thr Leu Leu Phe Ile Ser Arg Glu Gly Glu Ile Leu Gly

115 120 125

Arg His Arg Lys Leu Lys Pro Thr Asp Ser Glu Arg Arg Tyr Trp Ser

130 135 140

Glu Gly Asp Ala Thr Gly Leu Arg Val Tyr Glu Arg Pro Tyr Gly Arg

145 150 155 160

Leu Ser Gly Leu Asn Cys Trp Glu His Leu Met Met Leu Pro Gly Tyr

165 170 175

Ala Leu Ala Ala Gln Gly Thr Gln Phe His Val Ala Ala Trp Pro Asn

180 185 190

Met Ala Ser Ser Ala Ser Glu Leu Leu Ser Arg Ala Tyr Ala Tyr Gln

195 200 205

Ala Gly Cys Tyr Val Leu Cys Ala Gly Gly Leu Gly Pro Ala Pro Gly

210 215 220

Glu Leu Pro Asp Gly Ile Ala Ala Glu Ser Leu Asp His Leu Thr Gly

225 230 235 240

Glu Ser Cys Ile Ile Asp Pro Trp Gly Lys Val Ile Ala Gly Pro Val

245 250 255

Ser Cys Glu Glu Thr Leu Ile Thr Ala Arg Val Ser Thr Ala Ser Ile

260 265 270

Tyr Arg Arg Lys Ser Leu Thr Asp Val Gly Gly His Tyr Ser Arg Pro

275 280 285

Asp Val Phe Arg Phe Glu Val Asp Arg Ser Glu Arg Pro Arg Val Val

290 295 300

Phe Arg Asp Gly Asp Val Asp Asp Arg Gly

305 310

<210>105

<211>975

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>105

atgaccattg tcaaagccgc tgccgtccag attgcccccg ttctctacag ccgtgaaggc 60

actgtagaaa aggtcgttaa caagattcgc gaactcggcg agaagggcgt gcagttcgcc 120

gttttccctg aaaccgtcgt accgtactac ccgtactttt cctttgtgca gagccctttc 180

aaaatgggtt ccgagcacta caaattgctc gaccaggccg ttgtcgtgcc gtcggcgacc 240

accgatgcca tcggcaaagc ggccaaggaa gccaacatgg tggtgtccat cggcgtcaac 300

gaacgcgatg gcagcaccct ctacaacacg cagttgctgt ttgatgccga cggcactttg 360

attcaggccc gtcgcaagat ttcaccgacc taccacgaac gcatgatctg gggcatgggc 420

gacggttccg gcctgcgcgc caccgacagc gcggtcgggc gcatcggaca attggcctgc 480

tgggaacatt acaatccgct ggcgcgttac gccttgatcg aagacggcga acagatccac 540

gcctcgatgt acccgggctc gttcgcaggt cctttattca ctcgccagat ggaagtcagc 600

atccgcatgc atgccctgga atcggcgtgc ttcgtggtca actcgaccgc gtggttgtac 660

ccggaacagc aagcccagat catggccgac accggttgcg agatcgggcc gatctccggc 720

ggctgctaca ccgcgatcat cgacccacag ggtgaagtcg tcggcgcact gaccgaaggc 780

gagggcgaag tgattgccga catcgatctg ttccagatcg aaatccgtaa acgtcagatg 840

gacggccgtg gtcactacag ccgtccggaa atcctgagcc tgaacatcga ccgtacgccg 900

catcgccatg ttcacgaacg caacgaccag cagaaaccgg gtgtgatcga cactgctgaa 960

gaaaccgggc gttga 975

<210>106

<211>324

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>106

Met Thr Ile Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Ile Ala Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Gly Thr Val Glu Lys Val Val Asn Lys Ile Arg Glu Leu

20 25 30

Gly Glu Lys Gly Val Gln Phe Ala Val Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Ser Pro Phe Lys Met Gly Ser

50 55 60

Glu His Tyr Lys Leu Leu Asp Gln Ala Val Val Val Pro Ser Ala Thr

65 70 75 80

Thr Asp Ala Ile Gly Lys Ala Ala Lys Glu Ala Asn Met Val Val Ser

85 90 95

Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Ser Thr Leu Tyr Asn Thr Gln Leu

100 105 110

Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Ile Gln Ala Arg Arg Lys Ile Ser

115 120 125

Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Ile Trp Gly Met Gly Asp Gly Ser Gly

130 135 140

Leu Arg Ala Thr Asp Ser Ala Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu Ala Cys

145 150 155 160

Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Ile Glu Asp Gly

165 170 175

Glu Gln Ile His Ala Ser Met Tyr Pro Gly Ser Phe Ala Gly Pro Leu

180 185 190

Phe Thr Arg Gln Met Glu Val Ser Ile Arg Met His Ala Leu Glu Ser

195 200 205

Ala Cys Phe Val Val Asn Ser Thr Ala Trp Leu Tyr Pro Glu Gln Gln

210 215 220

Ala Gln Ile Met Ala Asp Thr Gly Cys Glu Ile Gly Pro Ile Ser Gly

225 230 235 240

Gly Cys Tyr Thr Ala Ile Ile Asp Pro Gln Gly Glu Val Val Gly Ala

245 250 255

Leu Thr Glu Gly Glu Gly Glu Val Ile Ala Asp Ile Asp Leu Phe Gln

260 265 270

Ile Glu Ile Arg Lys Arg Gln Met Asp Gly Arg Gly His Tyr Ser Arg

275 280 285

Pro Glu Ile Leu Ser Leu Asn Ile Asp Arg Thr Pro His Arg His Val

290 295 300

His Glu Arg Asn Asp Gln Gln Lys Pro Gly Val Ile Asp Thr Ala Glu

305 310 315 320

Glu Thr Gly Arg

<210>107

<211>981

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>107

atggccatca ttcgcgcagc agccgtacag atcagcccgg ttctttacag ccgcgaaggc 60

accgtggaca aggtctgcca gcagatcatc acccttggca aacagggtgt gcagttcgcc 120

gtgttcccgg aaacggtggt gccgtactac ccctattttt cctttgtgca gccggcgttc 180

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accctggcga ttggcgaagc gtgcaagcaa gcaggaatgg tcgtttccat cggagtcaat 300

gaacgcgatg gcggtacgat ttacaacgcg caattactct tcgatgctga cggcacgctg 360

attcagcatc ggcgcaaaat caccccgacc taccacgagc gcatggtctg ggggcagggc 420

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tgggaacatt acaacccgct ggcccgttac gccttgatgg cagacggcga acagatccac 540

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<210>108

<211>326

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>108

Met Ala Ile Ile Arg Ala Ala Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Gly Thr Val Asp Lys Val Cys Gln Gln Ile Ile Thr Leu

20 25 30

Gly Lys Gln Gly Val Gln Phe Ala Val Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Pro Ala Phe Ala Met Gly Ala

50 55 60

Gln His Leu Lys Leu Leu Asp Gln Ser Val Thr Val Pro Ser Ala Ala

65 70 75 80

Thr Leu Ala Ile Gly Glu Ala Cys Lys Gln Ala Gly Met Val Val Ser

85 90 95

Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Ala Gln Leu

100 105 110

Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Ile Gln His Arg Arg Lys Ile Thr

115 120 125

Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Val Trp Gly Gln Gly Asp Gly Ser Gly

130 135 140

Leu Arg Ala Ile Asp Ser Ala Val Gly Arg Ile Gly Ser Leu Ala Cys

145 150 155 160

Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met Ala Asp Gly

165 170 175

Glu Gln Ile His Ala Ala Met Phe Pro Gly Ser Leu Val Gly Asp Ile

180 185 190

Phe Ala Glu Gln Ile Glu Val Thr Ile Arg His His Ala Leu Glu Ser

195 200 205

Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp Gln Gln

210 215 220

Gly Gln Ile Met Gln Asp Thr Gly Cys Gly Leu Gly Pro Ile Ser Gly

225 230 235 240

Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Ser Pro Glu Gly Lys Leu Leu Gly Glu

245 250 255

Pro Leu Arg Ser Gly Glu Gly Val Val Ile Ala Asp Leu Asp Thr Ala

260 265 270

Leu Ile Asp Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His Tyr Ser

275 280 285

Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Ser Pro Thr Ala His

290 295 300

Val His Glu Arg Ala Gly Phe Val Ser Ser Asn Ala Gly Leu Gln Glu

305 310 315 320

Val Ala His Ala Asp Gln

325

<210>109

<211>1092

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>109

atggccatca ttcgcgcagc agccgtacag atcagcccgg ttctttacag ccgcgaaggc 60

accgtggaca gggtctgcca gcagatcatc acccttggca aacaaggtgt gcagttcgcc 120

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<210>110

<211>363

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>110

Met Ala Ile Ile Arg Ala Ala Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Gly Thr Val Asp Arg Val Cys Gln Gln Ile Ile Thr Leu

20 25 30

Gly Lys Gln Gly Val Gln Phe Ala Val Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Pro Ala Phe Ala Met Gly Ala

50 55 60

Gln His Leu Lys Leu Leu Asp Gln Ser Val Thr Val Pro Ser Ala Ala

65 70 75 80

Thr Leu Ala Ile Gly Glu Ala Cys Lys Gln Ala Gly Met Val Val Ser

85 90 95

Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Ala Gln Leu

100 105 110

Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Ile Gln His Arg Arg Lys Ile Thr

115 120 125

Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Val Trp Gly Gln Gly Asp Gly Ser Gly

130 135 140

Leu Arg Ala Ile Asp Ser Ala Val Gly Arg Ile Gly Ser Leu Ala Cys

145 150 155 160

Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met Ala Asp Gly

165 170 175

Glu Gln Ile His Ala Ala Met Phe Pro Gly Ser Leu Val Gly Asp Ile

180 185 190

Phe Ala Glu Gln Ile Glu Val Thr Ile Arg His His Ala Leu Glu Ser

195 200 205

Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp Gln Gln

210 215 220

Gly Gln Ile Met Gln Asp Thr Gly Cys Gly Leu Gly Pro Ile Ser Gly

225 230 235 240

Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Ser Pro Glu Gly Lys Leu Leu Gly Glu

245 250 255

Pro Leu Arg Ser Gly Glu Gly Val Val Ile Ala Asp Leu Asp Met Ala

260 265 270

Leu Ile Asp Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His Tyr Ser

275 280 285

Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Ser Pro Thr Ala His

290 295 300

Phe His Glu Arg Ala Gly Leu Cys Ser Glu Arg Arg Arg Phe Ala Gly

305 310 315 320

Gly Arg Ala Cys Arg Pro Met Asn Cys Ser Leu Thr Cys Lys Ser Lys

325 330 335

Ala Cys Val Gly Arg Pro Arg Lys Trp Leu Val Ala Pro Arg Arg Arg

340 345 350

Arg Ser Phe Arg Pro Gln Gly Ala Glu Pro Arg

355 360

<210>111

<211>990

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>111

atgcccaaaa cagtacgtgc cgcagcagtc cagatcgcgc ccgacctgac gtcacgcgcc 60

ggcaccgtcg agcgggtcct caatgcaatc gccgaagctg ctgacaaagg cgccgagctg 120

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<210>112

<211>329

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>112

Met Pro Lys Thr Val Arg Ala Ala Ala Val Gln Ile Ala Pro Asp Leu

1 5 10 15

Thr Ser Arg Ala Gly Thr Val Glu Arg Val Leu Asn Ala Ile Ala Glu

20 25 30

Ala Ala Asp Lys Gly Ala Glu Leu Ile Val Phe Pro Glu Thr Phe Val

35 40 45

Pro Trp Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Leu Pro Pro Val Gln Gln Gly

50 55 60

Pro Glu His Leu Arg Leu Tyr Glu Glu Ala Val Thr Val Pro Ser Ala

65 70 75 80

Glu Thr Arg Ala Val Ala Asp Ala Ala Arg Lys Arg Asn Ala Val Ile

85 90 95

Val Leu Gly Val Asn Glu Arg Asp His Gly Ser Leu Tyr Asn Thr Gln

100 105 110

Leu Ile Phe Asp Ala Asp Gly Ser Leu Lys Leu Lys Arg Arg Lys Ile

115 120 125

Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly Ala

130 135 140

Gly Leu Lys Val Val Asp Thr Ala Val Gly Arg Val Gly Ala Leu Ala

145 150 155 160

Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Thr Leu Met Ala Gln

165 170 175

His Glu Glu Ile His Ala Ser His Phe Pro Gly Ser Leu Val Gly Pro

180 185 190

Ile Phe Gly Glu Gln Ile Glu Val Thr Met Arg His His Ala Leu Glu

195 200 205

Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Gly Trp Leu Ser Glu Glu Gln

210 215 220

Ile Ala Ser Ile His Pro Asp Pro Ala Leu Gln Lys Gly Leu Arg Asp

225 230 235 240

Gly Cys Met Thr Cys Ile Ile Thr Pro Glu Gly Arg His Val Val Pro

245 250 255

Pro Leu Thr Ser Gly Glu Gly Ile Leu Ile Gly Asp Leu Asp Met Arg

260 265 270

Leu Ile Thr Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His Tyr Ala

275 280 285

Arg Pro Glu Leu Leu His Leu Val His Asp Thr Thr Pro Ala Arg Ala

290 295 300

Arg Glu Gln Val Gly Leu Ser Gly Asp Phe Pro Asp Ala Glu Gln Asp

305 310 315 320

Lys Leu Phe Glu Glu Val His Asn Ala

325

<210>113

<211>993

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>113

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<210>114

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>114

Met Thr Lys Glu Arg Ala Ala Arg Ser Leu Arg Ala Ala Ala Ile Gln

1 5 10 15

Leu Glu Ala Glu Val Gly Asp Ile Ala Ala Asn Leu Ala Arg Ile Glu

20 25 30

Ala Met Val Glu Glu Ala Ala Gly Lys Gly Ala Glu Leu Ile Ala Ile

35 40 45

Pro Glu Phe Cys Thr Ser Arg Met Pro Phe Asp Ala Arg Val His Asp

50 55 60

Ala Val Leu Pro Pro Asp Asn Phe Val Val Asp Ala Phe Arg Arg Met

65 70 75 80

Ala Ala Thr His Asn Cys Arg Leu Gly Gly Ser Met Leu Ile Ala Asp

85 90 95

Gly Gly Glu Ile Tyr Asn Arg Tyr His Phe Val Glu Pro Asp Gly Ser

100 105 110

Val His Leu His Asp Lys Asp Leu Pro Thr Met Trp Glu Asn Ala Phe

115 120 125

Tyr Thr Gly Gly Ser Asp Asp Gly Val Phe Asp Thr Gly Ile Gly Gly

130 135 140

Val Gly Ala Ala Val Cys Trp Glu Leu Val Arg Thr Gly Thr Val Arg

145 150 155 160

Arg Met Leu Gly Arg Val Asp Val Ala Met Thr Gly Thr His Trp Trp

165 170 175

Thr Met Pro His Asn Trp Gly Ser Ala Val Ala Arg Thr Leu Ala Ala

180 185 190

Met Thr Gln Tyr Asn Arg Tyr Met Ser Glu Asn Ala Pro Thr Glu Phe

195 200 205

Ala Arg Arg Leu Gly Val Pro Val Leu Gln Ala Ser His Cys Gly Ser

210 215 220

Phe Arg Thr Gly Phe Leu Leu Leu Pro Gly Ser Gly Arg Ala Leu Pro

225 230 235 240

Tyr Asp Thr Glu Tyr Val Gly Ala Thr Gln Ile Val Asp Ala Asp Gly

245 250 255

His Ile Leu Ala His Arg Arg Thr Gln Glu Gly Pro Gly Val Val Val

260 265 270

Ala Asp Ile Thr Leu Gly Ala Arg Thr Pro Glu Leu Pro Leu Glu Asp

275 280 285

Arg Phe Trp Ile Pro Glu Leu Pro Leu Phe Leu Lys Ala Tyr Trp His

290 295 300

His Gln Asn Leu Cys Gly Lys Ser Tyr Tyr Arg Arg Val Gly Arg Asp

305 310 315 320

Ala Gly Leu Ala Ala Ala Glu Arg Ser Ala

325 330

<210>115

<211>993

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>115

atgaaccaaa tcattaaagc ggcggcagtt caatgtagcc ctgtgttgta tagccaagcg 60

ggtacagtca agaaaatctg tgacacgatt ttggagttgg ggcagcaagg tgtgcaattt 120

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gcaacaactt taattggaca ggcatgcaaa gaagcgaaca tggtggtttc tattggtatt 300

aatgagcgtg caggcggcac gatttataac gctcaattgt tgtttgatgc ggatggttcg 360

attattcagc atcgccgtaa aattacccca acgtatcatg aacgtatggt gtgggggcaa 420

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tgttgggagc attacaaccc tttggctcgg tttgctttga tggcggatgg tgagcaaatt 540

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<210>116

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>116

Met Asn Gln Ile Ile Lys Ala Ala Ala Val Gln Cys Ser Pro Val Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Gln Ala Gly Thr Val Lys Lys Ile Cys Asp Thr Ile Leu Glu

20 25 30

Leu Gly Gln Gln Gly Val Gln Phe Ala Val Phe Pro Glu Thr Val Val

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Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Pro Pro Phe Ala Met Gly

50 55 60

Lys Glu His Leu Lys Leu Leu His Glu Ser Val Val Val Pro Ser Ala

65 70 75 80

Ala Thr Thr Leu Ile Gly Gln Ala Cys Lys Glu Ala Asn Met Val Val

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Ser Ile Gly Ile Asn Glu Arg Ala Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Ala Gln

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Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Ser Ile Ile Gln His Arg Arg Lys Ile

115 120 125

Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Val Trp Gly Gln Gly Asp Gly Ser

130 135 140

Gly Leu Arg Ala Ile Asp Ser Ala Val Gly Arg Ile Gly Ser Leu Ala

145 150 155 160

Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Phe Ala Leu Met Ala Asp

165 170 175

Gly Glu Gln Ile His Ala Ala Met Phe Pro Gly Ser Leu Val Gly Gln

180 185 190

Ile Phe Ala Asp Gln Ile Ser Ala Thr Ile Gln His His Ala Leu Glu

195 200 205

Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Pro Glu Gln

210 215 220

Gln Gln Gln Ile Met Gln Asp Thr Gly Cys Glu Leu Gly Pro Ile Ser

225 230 235 240

Gly Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Ser Pro Glu Gly Lys Phe Leu Ser

245 250 255

Glu Pro Ile Thr Gln Gly Glu Gly Tyr Val Ile Ala Asp Leu Asp Phe

260 265 270

Ser Leu Ile Glu Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His Tyr

275 280 285

Ser Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Arg Pro Thr Ser

290 295 300

Val Leu His Glu Leu Lys Leu Glu Asn Pro Ser Asn Asn Ser Ile Glu

305 310 315 320

Lys Val Ser Glu Phe Ala Glu Val His Ala

325 330

<210>117

<211>957

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>117

atgactcaat ccaggataat tcgtgctgcg gcagcgcaga tcgctccgga tttgcaggtt 60

ccaggtaaca cgatcgacaa agtttgccgc accatcagcg aggcggccgc aaaaggcgta 120

cagattattg ttttccctga aaccttggtg ccttattacc cttacttctc ttacatttca 180

ccgcccattc aacagggcaa agaacatttg cggctgtatg accatgcagt ggttgtgccc 240

ggctcggaaa ccgaggcaat ttcagctctt gccgcccaac acaatatggt ggtggttttg 300

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ggaaagattc tgttgaagcg ccgaaaaatt acaccaactt atcacgagcg gatggtgtgg 420

gggcagggtg acgcttcagg cttgaaggtg gttgattccg cagtgggccg tgtgggtgca 480

ttggcctgtt gggaacacta caaccccttg gctcgctatt gtttgatggc ccagcacgaa 540

gaaattcact gtgcgcagtt tcccggttca ttggtggggc aagtttttgc cgaccaaatg 600

gaagtgacca ttcgtcacca cgcacttgag tcgggctgtt ttgtcatcaa cagcaccgct 660

tggctttctg aagaacaggt tcaaagtatt tcatccgaca gcgcattgca gaaagggctt 720

agaggcggtt gtttcacggc cattgtcagc cctgagggaa agctgttggc tgagccgctc 780

accgagggtg agggcatggt gatcgccgac ctcgacatgg cgttggttac gaaacgcaaa 840

cgcatgatgg attcagtggg ccattatgcg cgccccgagt tgttgagttt gctggttcgg 900

gatgaggctt caagccccat gaaaaaaatt cagggagttc aacatgctga gtactga 957

<210>118

<211>318

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>118

Met Thr Gln Ser Arg Ile Ile Arg Ala Ala Ala Ala Gln Ile Ala Pro

1 5 10 15

Asp Leu Gln Val Pro Gly Asn Thr Ile Asp Lys Val Cys Arg Thr Ile

20 25 30

Ser Glu Ala Ala Ala Lys Gly Val Gln Ile Ile Val Phe Pro Glu Thr

35 40 45

Leu Val Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Tyr Ile Ser Pro Pro Ile Gln

50 55 60

Gln Gly Lys Glu His Leu Arg Leu Tyr Asp His Ala Val Val Val Pro

65 70 75 80

Gly Ser Glu Thr Glu Ala Ile Ser Ala Leu Ala Ala Gln His Asn Met

85 90 95

Val Val Val Leu Gly Val Asn Glu Arg Asp His Gly Thr Leu Tyr Asn

100 105 110

Ala Gln Ile Ile Phe Asn Ser Asp Gly Lys Ile Leu Leu Lys Arg Arg

115 120 125

Lys Ile Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Val Trp Gly Gln Gly Asp

130 135 140

Ala Ser Gly Leu Lys Val Val Asp Ser Ala Val Gly Arg Val Gly Ala

145 150 155 160

Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Cys Leu Met

165 170 175

Ala Gln His Glu Glu Ile His Cys Ala Gln Phe Pro Gly Ser Leu Val

180 185 190

Gly Gln Val Phe Ala Asp Gln Met Glu Val Thr Ile Arg His His Ala

195 200 205

Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Ile Asn Ser Thr Ala Trp Leu Ser Glu

210 215 220

Glu Gln Val Gln Ser Ile Ser Ser Asp Ser Ala Leu Gln Lys Gly Leu

225 230 235 240

Arg Gly Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Ser Pro Glu Gly Lys Leu Leu

245 250 255

Ala Glu Pro Leu Thr Glu Gly Glu Gly Met Val Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Met Ala Leu Val Thr Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His

275 280 285

Tyr Ala Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Val Arg Asp Glu Ala Ser

290 295 300

Ser Pro Met Lys Lys Ile Gln Gly Val Gln His Ala Glu Tyr

305 310 315

<210>119

<211>984

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>119

atggatacac tcaaagttgg attggttcag atggccccca tctggttgaa ccgggataaa 60

accctgatca aagttgagga atacatgcag aaagcaggca aacagggctg caacctggta 120

gcttttggtg aagcgctggt tcccggctac cccttctggg tggaacgcac agagggcgcc 180

agattcaatt ccaaagtcca gaaagaactc tttgcacatt accttgatca ggcggtgcag 240

atcgaagccg gccaccttga tcctctccag gcattagccc aacaatacaa gatggctgtg 300

tacgtgggga cgattgaacg cccgcctgag cggagcggcc acagcctgta ctgctcccta 360

atatttatag acccagaagg cgagatcggc tcggttcacc gcaagttgat gcccacccat 420

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tatgatataa ccaaattcat tgccaaggaa tctcgctctt atgtgatctc cgtatccggg 660

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tcggatgaaa atcaatccct ttaa 984

<210>120

<211>327

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>120

Met Asp Thr Leu Lys Val Gly Leu Val Gln Met Ala Pro Ile Trp Leu

1 5 10 15

Asn Arg Asp Lys Thr Leu Ile Lys Val Glu Glu Tyr Met Gln Lys Ala

20 25 30

Gly Lys Gln Gly Cys Asn Leu Val Ala Phe Gly Glu Ala Leu Val Pro

35 40 45

Gly Tyr Pro Phe Trp Val Glu Arg Thr Glu Gly Ala Arg Phe Asn Ser

50 55 60

Lys Val Gln Lys Glu Leu Phe Ala His Tyr Leu Asp Gln Ala Val Gln

65 70 75 80

Ile Glu Ala Gly His Leu Asp Pro Leu Gln Ala Leu Ala Gln Gln Tyr

85 90 95

Lys Met Ala Val Tyr Val Gly Thr Ile Glu Arg Pro Pro Glu Arg Ser

100 105 110

Gly His Ser Leu Tyr Cys Ser Leu Ile Phe Ile Asp Pro Glu Gly Glu

115 120 125

Ile Gly Ser Val His Arg Lys Leu Met Pro Thr His Glu Glu Arg Leu

130 135 140

Val Trp Ser Thr Gly Asp Gly His Gly Leu Arg Thr His Ser Leu Gly

145 150 155 160

Ala Phe Thr Val Gly Gly Leu Asn Cys Trp Glu Asn Trp Met Pro Leu

165 170 175

Ser Arg Thr Ala Leu Tyr Ala Met Gly Glu Asp Leu His Val Ala Ala

180 185 190

Trp Pro Gly Ser Gln Arg Asn Thr Tyr Asp Ile Thr Lys Phe Ile Ala

195 200 205

Lys Glu Ser Arg Ser Tyr Val Ile Ser Val Ser Gly Met Met Lys Lys

210 215 220

Glu Asn Ile Leu Ser Glu Ile Pro His Ser Gln Leu Met Leu Glu Asn

225 230 235 240

Ser Glu Asp Ile Met Ala Asp Gly Gly Ser Cys Leu Ala Gly Pro Asp

245 250 255

Gly Glu Trp Ile Ile Glu Pro Ile Val Gly Glu Glu Thr Leu Val Thr

260 265 270

Ala Glu Leu Ser His Gln Arg Val Arg Glu Glu Arg Gln Asn Phe Asp

275 280 285

Pro Thr Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Thr Arg Leu Val Val Asp

290 295 300

Arg Arg Arg Gln Gln Ile Leu Glu Ile Thr Pro Asp Glu Lys Gly Arg

305 310 315 320

Ser Asp Glu Asn Gln Ser Leu

325

<210>121

<211>1158

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>121

atgagcaaaa aagttctagg cggcagagaa aaagtaaaag ttgcagtagt tcaggctgcg 60

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tactataccg tcggctatga aaccccttct caagaatgga gagattacgt gattgcgcta 240

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<210>122

<211>385

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>122

Met Ser Lys Lys Val Leu Gly Gly Arg Glu Lys Val Lys Val Ala Val

1 5 10 15

Val Gln Ala Ala Pro Val Phe Met Asp Lys Glu Lys Thr Ile Glu Lys

20 25 30

Ala Cys Lys Leu Ile Lys Glu Ala Gly Arg Asn Arg Ala Glu Leu Ile

35 40 45

Ala Phe Ser Glu Ser Phe Ile Pro Val Tyr Pro Ala Tyr Tyr Thr Val

50 55 60

Gly Tyr Glu Thr Pro Ser Gln Glu Trp Arg Asp Tyr Val Ile Ala Leu

65 70 75 80

Gln Asp Asn Ser Val Leu Ile Pro Ser Glu Asp Thr Glu Val Leu Gly

85 90 95

Gln Ala Ala Lys Glu Ala Gly Ala Tyr Ala Val Ile Gly Cys Ser Glu

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Met Asp Asp Arg Pro Gly Ser Arg Thr Val Tyr Asn Thr Leu Leu Phe

115 120 125

Ile Gly Lys Asp Gly Lys Val Met Gly Arg His Arg Lys Leu Lys Pro

130 135 140

Thr Phe Thr Glu Arg Ile Tyr Trp Gly Glu Gly Asp Ala Gly Asp Ile

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Lys Val Phe Asp Thr Glu Ile Gly Arg Ile Gly Gly Leu Val Cys Trp

165 170 175

Glu Asn His Met Thr Leu Val Arg Ala Ala Met Ile His Arg Gly Glu

180 185 190

Glu Phe His Ile Ala Val Trp Pro Gly Asn Trp Lys Gly Ala Glu Asn

195 200 205

Lys Leu Leu Gln Ala Asp Asn Ser Pro Gly Gly Ala Leu Cys Asn Leu

210 215 220

Gln Ser Leu Ile Lys Val His Ala Phe Glu Ala Gly Ala Phe Val Leu

225 230 235 240

Ser Ala Cys Gly Phe Leu Thr Pro Glu Asp Phe Pro Glu Arg Trp His

245 250 255

Tyr Ile Arg Asp Gly Asn His Ile Asn Cys Asp Trp Ala Leu Gly Gly

260 265 270

Ser Ser Ile Val Asn Pro Ala Gly Arg Tyr Leu Val Glu Pro Asn Phe

275 280 285

Glu Lys Asp Ala Ile Leu Tyr Ala Asp Cys Tyr Ala Asn Gln Ile Lys

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Ala Val Lys Ala Val Phe Asp Ser Leu Gly His Tyr Ser Arg Trp Asp

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Ile Ala Gln Leu Ala Ile Arg Gln Glu Ala Trp Asn Pro Glu Val Ser

325 330 335

Leu Ile Asp Ser Ser Ser Thr Glu Val Glu Leu Pro Ala Asp Glu Leu

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Arg Arg Ile Ser Glu Lys Phe Glu Val Thr Ala Asp Lys Leu Glu Ser

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Leu Leu Glu Glu Ile Gly Lys Ile Lys Lys Pro Arg Lys Gln Ala Gly

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Ser

385

<210>123

<211>990

<212>DNA

<213>未知

<220>

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<400>123

atgtcaactt tcaagatcgc taccgtgcag agtgcaccag tatttatgga ccgcgaagct 60

accattgaca agacttgcga gctgatcgcc gaagcagcac aagatgacga cgttcgccta 120

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<210>124

<211>329

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>124

Met Ser Thr Phe Lys Ile Ala Thr Val Gln Ser Ala Pro Val Phe Met

1 5 10 15

Asp Arg Glu Ala Thr Ile Asp Lys Thr Cys Glu Leu Ile Ala Glu Ala

20 25 30

Ala Gln Asp Asp Asp Val Arg Leu Val Val Phe Pro Glu Ala Phe Ile

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Pro Thr Tyr Pro Asp Trp Val Trp Arg Ile Pro Pro Gly Gln His Gln

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Met Leu Ala Asp Leu Tyr Gly Glu Leu Leu Glu Gln Ser Val Thr Ile

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Pro Ser Leu Ala Thr Glu Arg Leu Cys Gln Ala Ala Lys Lys Ala Gly

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Val Tyr Val Ala Val Gly Leu Asn Glu Arg Asn Thr Glu Ala Ser Asn

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Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Ala Pro Glu Arg Met Val

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Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Glu Val Tyr Glu Thr Ser Phe

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Gly Lys Leu Ser Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro Leu Ala

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Arg Tyr Ala Leu Tyr Ala Trp Gly Val Gln Leu Tyr Leu Ala Pro Thr

180 185 190

Trp Asp Arg Gly Glu Pro Trp Leu Ser Thr Leu Arg His Ile Ala Lys

195 200 205

Glu Gly Arg Val Tyr Val Val Gly Cys Ser Ile Ala Leu Arg Lys Glu

210 215 220

Asp Ile Pro Asp Arg Phe Glu Phe Lys Ala Lys Tyr Tyr Ala Glu Ala

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Gly Glu Trp Ile Asn Lys Gly Asp Ser Val Ile Val Gly Pro Asp Gly

245 250 255

Glu Leu Ile Ala Gly Pro Leu His Lys Glu Gln Gly Ile Leu Tyr Ala

260 265 270

Glu Leu Asp Thr Arg Gln Met His Ala Pro Lys Trp Asn Leu Asp Val

275 280 285

Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Arg Leu Thr Val Ser Lys

290 295 300

Asp Gly His Pro Met Leu Gly Val Ala Gln Gly Pro Lys His Glu Pro

305 310 315 320

Gln Asp Lys Thr Glu Val Leu Glu Gly

325

<210>125

<211>1050

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>125

atgacaactg taaaaaagac ggtacgcgca gcagcgatcc agatcgcacc tgacctcgac 60

agtgcaggcg gtacgctgga caaggtttgc acggccattc aaaaggcggc ggcacaaggc 120

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ttacgtggcg gttgctgcac cgccatcgtc tcgccggaag gtgtgctcct ggcagagccg 780

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<210>126

<211>349

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>126

Met Thr Thr Val Lys Lys Thr Val Arg Ala Ala Ala Ile Gln Ile Ala

1 5 10 15

Pro Asp Leu Asp Ser Ala Gly Gly Thr Leu Asp Lys Val Cys Thr Ala

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Ile Gln Lys Ala Ala Ala Gln Gly Ala Glu Leu Val Val Phe Pro Glu

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Thr Phe Leu Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Arg Pro Pro Phe

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Ala Ser Gly Pro Glu His Leu Leu Leu Tyr Glu Arg Ala Val Ala Val

65 70 75 80

Pro Gly Pro Val Thr Asp Ala Val Ser Ala Val Ala Arg Ser His Gly

85 90 95

Val Val Val Val Leu Gly Val Asn Glu Arg Asp His Gly Thr Leu Tyr

100 105 110

Asn Thr Gln Leu Val Phe Asp Ala Asn Gly Glu Leu Val Leu Lys Arg

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Arg Lys Ile Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly

130 135 140

Asp Gly Ser Gly Leu Lys Val Val Gln Thr Ala Val Gly Arg Leu Gly

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Ala Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu

165 170 175

Met Ala Gln His Glu Glu Ile His Cys Ala Gln Phe Pro Gly Ser Met

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Val Gly Gln Ile Phe Ala Asp Gln Met Glu Val Thr Ile Arg His His

195 200 205

Ala Leu Glu Ser Ala Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Gly Trp Leu Thr

210 215 220

Asp Ala Gln Ile Thr Ser Ile Thr Pro Asp Pro Ala Leu Gln Lys Ala

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Leu Arg Gly Gly Cys Cys Thr Ala Ile Val Ser Pro Glu Gly Val Leu

245 250 255

Leu Ala Glu Pro Leu Arg Ser Gly Glu Gly Met Val Ile Ala Asp Leu

260 265 270

Asp Met Ala Leu Ile Thr Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly

275 280 285

His Tyr Ala Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Val Asp Asp Arg Arg

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Lys Val Pro Val Ser Ala Leu Phe Ala Asp Ser Asn Pro Ala Asn Gly

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His Thr Val Phe Thr Pro Ser Asp Ile Pro Thr Leu Gly Ser Ala His

325 330 335

His Ala Asn Ser Tyr Gln Thr Glu Pro Ala Thr Asp His

340 345

<210>127

<211>1005

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>127

atgatagcac ggaagacaat aagggcggcg gcggtgcaga tagcgcctgt gatggaagat 60

cggaaggcga cgaccgacaa ggtgtgcgcc tacattcagg aagcaggcga gaatggagcc 120

gaaattgtgg tgtttcctga aaccttcatt cccaattatc cctatttctc ttttgtaaaa 180

cctcccgtgt tggcaggtaa ggatcacctt accttgtatg accaagcggt ggaaatccct 240

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ggtgatattg tattggtgag acgcaaaatc acccctacct atcatgaacg gatgatctgg 420

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ttggcgtgtt gggaacacta taatccactt gcgcgctacg cccttatggt agaccatgag 540

gaaattcatt gcagccaatt ccctggctct atggtcggcc ccattttcgg tgaccagata 600

gaagtgacga ttcgccacca tgcgttggaa tcgggttgtt ttgtcatcaa ttccacaggt 660

tggctgtttg aagagcaaat ccaagccatc accgatgatc cgaaactgca caaagcattg 720

aaagacggct gtatgaccgc cattatttct cccgaaggcg tgcatttgac caaaccctta 780

acagaaggcg aaggcatcat ctacgcctat ctggacatga aactcataga caagcggaaa 840

cggatgatgg actcggtagg acactatgca cgtccagagt tgctctcttt gcatatcaac 900

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<210>128

<211>334

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>128

Met Ile Ala Arg Lys Thr Ile Arg Ala Ala Ala Val Gln Ile Ala Pro

1 5 10 15

Val Met Glu Asp Arg Lys Ala Thr Thr Asp Lys Val Cys Ala Tyr Ile

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Gln Glu Ala Gly Glu Ash Gly Ala Glu Ile Val Val Phe Pro Glu Thr

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Phe Ile Pro Asn Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Lys Pro Pro Val Leu

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Ala Gly Lys Asp His Leu Thr Leu Tyr Asp Gln Ala Val Glu Ile Pro

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Asp Gln Val Gly Ser Met Ala Lys Lys Trp Gly Ile

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Val Val Val Leu Gly Val Asn Glu Arg Ser His Gly Thr Leu Tyr Asn

100 105 110

Ala Gln Ile Val Phe Asp Ala Thr Gly Asp Ile Val Leu Val Arg Arg

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Lys Ile Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp

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Gly Ser Gly Leu Lys Ala Val Asp Thr Ala Val Gly Arg Val Gly Ala

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Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met

165 170 175

Val Asp His Glu Glu Ile His Cys Ser Gln Phe Pro Gly Ser Met Val

180 185 190

Gly Pro Ile Phe Gly Asp Gln Ile Glu Val Thr Ile Arg His His Ala

195 200 205

Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Ile Asn Ser Thr Gly Trp Leu Phe Glu

210 215 220

Glu Gln Ile Gln Ala Ile Thr Asp Asp Pro Lys Leu His Lys Ala Leu

225 230 235 240

Lys Asp Gly Cys Met Thr Ala Ile Ile Ser Pro Glu Gly Val His Leu

245 250 255

Thr Lys Pro Leu Thr Glu Gly Glu Gly Ile Ile Tyr Ala Tyr Leu Asp

260 265 270

Met Lys Leu Ile Asp Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His

275 280 285

Tyr Ala Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu His Ile Asn Asn Ala Glu Gln

290 295 300

Lys Pro Ala Val Tyr Thr Ser Pro Leu Thr Lys Thr Glu Thr Lys Glu

305 310 315 320

Asp Val Lys Ser Tyr Asp Arg Asn Lys Glu Gln Leu Ile Val

325 330

<210>129

<211>1011

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>129

atgtcagaaa agcgaattat taaagcggct gcagttcaaa tcacaccaga ttttgaatcg 60

catgatggaa ccgtaaagaa ggtttgtaat gtaattgatg aagcgggtgc taaaggtgta 120

cagatcattg tattccctga aacctttatt ccatattacc catatttttc tttcatcact 180

ccaccagtga ctgctggcgc ggagcatttg cggctctatg aaaaaagtgt cgtgatacct 240

ggtcccgtta ctcaagccat ttccgaacgt gcacgcatga ataatatggt tgttgtactt 300

ggtgtaaatg agcgtgataa cggcagtcta tataacaccc agattatttt tgatgctacc 360

ggtgagatgc ttctgaagag aagaaaaatc acacctacct atcatgagcg catgatttgg 420

gggcaaggag atgcttcagg cctgaaggtc gtcgatacgg ctattgggcg agtcggagca 480

ttggcatgct gggagcacta taaccctttg gctagataca gcctcatgac acagcatgaa 540

gaaattcact gtgctcaatt tccaggctcc atggttggtc agatcttcgc agatcaaatg 600

gatgtcacga ttcgtcatca tgccttggag tcaggttgct tcgtcatcaa ctccactggc 660

tggttaactg atgatcagat caaatctatc accgacgatc ccaaaatgca gaaagcttta 720

agaggtggtt gcaacacggc cattatttct ccagaaggga atcatttaac cgagcctttg 780

cgagaaggtg aaggcatggt gattgctgat cttgatatgg cactcatcac caaacgaaaa 840

agaatgatgg actcagttgg ccactacgcc agaccagaac tgttgagctt agcgatcaat 900

gatgctccgg ctactccttc attccagatg aacgaacatc gtcttaaatc agtgcaatta 960

cctatcgcag aggagcttaa aaatgacaac aagcttagca gtggacagta a 1011

<210>130

<211>336

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>130

Met Ser Glu Lys Arg Ile Ile Lys Ala Ala Ala Val Gln Ile Thr Pro

1 5 10 15

Asp Phe Glu Ser His Asp Gly Thr Val Lys Lys Val Cys Asn Val Ile

20 25 30

Asp Glu Ala Gly Ala Lys Gly Val Gln Ile Ile Val Phe Pro Glu Thr

35 40 45

Phe Ile Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Ile Thr Pro Pro Val Thr

50 55 60

Ala Gly Ala Glu His Leu Arg Leu Tyr Glu Lys Ser Val Val Ile Pro

65 70 75 80

Gly Pro Val Thr Gln Ala Ile Ser Glu Arg Ala Arg Met Asn Asn Met

85 90 95

Val Val Val Leu Gly Val Asn Glu Arg Asp Asn Gly Ser Leu Tyr Asn

100 105 110

Thr Gln Ile Ile Phe Asp Ala Thr Gly Glu Met Leu Leu Lys Arg Arg

115 120 125

Lys Ile Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp

130 135 140

Ala Ser Gly Leu Lys Val Val Asp Thr Ala Ile Gly Arg Val Gly Ala

145 150 155 160

Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ser Leu Met

165 170 175

Thr Gln His Glu Glu Ile His Cys Ala Gln Phe Pro Gly Ser Met Val

180 185 190

Gly Gln Ile Phe Ala Asp Gln Met Asp Val Thr Ile Arg His His Ala

195 200 205

Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Ile Asn Ser Thr Gly Trp Leu Thr Asp

210 215 220

Asp Gln Ile Lys Ser Ile Thr Asp Asp Pro Lys Met Gln Lys Ala Leu

225 230 235 240

Arg Gly Gly Cys Asn Thr Ala Ile Ile Ser Pro Glu Gly Asn His Leu

245 250 255

Thr Glu Pro Leu Arg Glu Gly Glu Gly Met Val Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Met Ala Leu Ile Thr Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His

275 280 285

Tyr Ala Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Ala Ile Asn Asp Ala Pro Ala

290 295 300

Thr Pro Ser Phe Gln Met Asn Glu His Arg Leu Lys Ser Val Gln Leu

305 310 315 320

Pro Ile Ala Glu Glu Leu Lys Asn Asp Asn Lys Leu Ser Ser Gly Gln

325 330 335

<210>131

<211>1011

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>131

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<211>336

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>132

Met Ser Glu Lys Arg Ile Ile Lys Ala Ala Ala Val Gln Ile Thr Pro

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Asp Phe Glu Ser His Asp Gly Thr Val Lys Lys Val Cys Asn Val Ile

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Asp Glu Ala Gly Ala Lys Gly Val Gln Ile Ile Val Phe Pro Glu Thr

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Ala Gly Ala Glu His Leu Arg Leu Tyr Glu Lys Ser Val Val Ile Pro

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Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Ile Asn Ser Thr Gly Trp Leu Thr Asp

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Arg Gly Gly Cys Asn Thr Ala Ile Ile Ser Pro Glu Gly Asn His Leu

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Pro Ile Ala Glu Glu Leu Lys Asn Asp Asn Lys Leu Ser Ser Gly Gln

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<210>133

<211>1026

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

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<211>336

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caatag 1026

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180 185 190

Gly Phe Glu Pro Val Ala Asp Ile Gln Ile Asp Ala Met Met Lys Thr

195 200 205

His Ala Leu Thr Ala Gln Cys Trp Val Leu Ser Ala Gly Asn Pro Val

210 215 220

Asp Arg Thr Cys Leu Asp Trp Met Glu Lys Asn Ile Gly Pro Gln Asp

225 230 235 240

Tyr Val Thr Glu Gly Gly Gly Trp Ser Ala Val Ile His Pro Phe Asn

245 250 255

Ser Tyr Leu Gly Gly Pro His Thr Gly Leu Glu Glu Lys Leu Val Val

260 265 270

Gly Glu Ile Asn Leu Asp Asp Leu Lys Phe Val Lys Val Trp Leu Asp

275 280 285

Ser Lys Gly His Tyr Ala Arg Pro Glu Ile Leu Lys Leu Gly Val Asn

290 295 300

Gln Lys Gln Ile Trp Pro Asp Glu His Leu Leu Ala Arg Gln Asp Val

305 310 315 320

Thr Glu Leu Leu Glu Ala Asp Ile Ile Glu Tyr Pro Leu Gln Leu Leu

325 330 335

Gln Asp Arg Ala Gln

340

<210>143

<211>1122

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>143

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<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>144

Met Thr Ile Ile Ala Gly Ala Val His Ala Ala Pro Val Phe Met Asp

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Val Asp Ala Thr Ile Asp Lys Ala Cys Glu Ile Ile Arg Lys Ala Gly

20 25 30

Lys Asp Gly Ile Glu Leu Leu Val Phe Pro Glu Val Phe Val Pro Gly

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Tyr Pro Tyr Phe Ile Glu Cys Tyr Pro Thr Leu Asn Gln Thr Ala Ala

50 55 60

Leu Ala Ala Tyr Thr Asp Ala Ser Ile Glu Val Pro Gly Pro Glu Val

65 70 75 80

Arg Arg Leu Gln Val Ala Ala His Gln Ala Gly Val Met Val Val Met

85 90 95

Gly Val Ser Glu Arg Leu Arg Gly Ser Arg Thr Cys Phe Asn Ser Gln

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Val Phe Ile Asp Arg Asp Gly Thr Leu Leu Gly Val His Arg Lys Leu

115 120 125

Gln Pro Thr Tyr Val Glu Arg Ile Val Trp Gly Gln Gly Gly Gly His

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Thr Leu Lys Val Phe Asp Ser Thr Leu Gly Lys Val Gly Gly Leu Ala

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Cys Trp Glu His Thr Met Asn Leu Ala Arg His Ala Leu Ile Ala Gln

165 170 175

Gly Ile Gln Ile His Ala Ala Ala Trp Pro Gly Leu Ser Thr Met Ala

180 185 190

Gly Phe Glu Ala Val Ala Asp Val Gln Ile Asp Ala Met Met Lys Thr

195 200 205

His Ala Leu Ser Ala Gln Cys Phe Val Val Ser Ala Ala Asn Pro Val

210 215 220

Asp Gln Thr Cys Leu Glu Trp Met Glu Lys His Leu Gly Pro Gln Gln

225 230 235 240

Leu Val Thr Ala Gly Gly Gly Trp Ser Ala Ile Val His Pro Phe Cys

245 250 255

Gly Tyr Ile Ala Ala Pro His Thr Gly Ala Glu Glu Lys Val Leu Val

260 265 270

Gly Glu Ile Asn Leu Asp Asp Leu Lys Gln Val Lys Val Trp Val Asp

275 280 285

Ser Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Glu Val Val Gln Leu Arg Asp Ala

290 295 300

Leu Glu Ser Arg Gly Asn Tyr Arg Val Ala Leu Thr Arg Asp Ala Asp

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Thr Phe Val Pro Leu Glu Asp Arg Val Arg Phe Ala Arg Gln Gln Asn

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Ala Asp Leu Phe Ile Ser Ile His Ala Asp Ala Asn Ala Asn His Asp

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Ala Arg Gly Ala Gly Phe Thr Ser Lys Val Glu Asn Leu Ser Thr Gly

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Ile Leu Pro Gly Asp

370

<210>145

<211>1014

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>145

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<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>146

Met Gly Ile Thr His Pro Asn Tyr Lys Val Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Val Trp Leu Asn Leu Glu Ala Thr Val Glu Lys Thr Ile Arg Tyr

20 25 30

Ile Glu Glu Ala Ala Lys Ala Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

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Thr Trp Ile Pro Gly Tyr Pro Trp His Ile Trp Ile Gly Thr Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Gly Lys Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ser Tyr Asp Ser Pro Leu Ala Arg Gln Ile Ala Asp Ala Ala Ala Lys

85 90 95

Ser Lys Ile Thr Val Val Leu Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

115 120 125

Lys Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Val Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Asp Gly Asp Gly Ser His Ile Ala Val His Asp Arg Ser Asp Leu Gly

145 150 155 160

Arg Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Val Gln Pro Leu Thr Lys

165 170 175

Phe Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Val Ala Ala Trp Pro

180 185 190

Ser Phe Ser Met Tyr Glu Pro Phe Ala His Ala Leu Gly Trp Glu Thr

195 200 205

Asn Asn Ala Val Ser Lys Val Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val

210 215 220

Leu Ala Pro Cys Ala Val Ile Ser Gln Ala Met Val Asp Glu Met Cys

225 230 235 240

Asp Thr Pro Asp Lys Arg Glu Leu Val His Ala Gly Gly Gly His Ala

245 250 255

Val Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ser Pro Leu Ala Glu Lys Leu Gly Glu

260 265 270

Asn Glu Glu Gly Leu Leu Tyr Ala Thr Val Asn Leu Ala Ala Ile Gly

275 280 285

Val Ala Lys Asn Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp

290 295 300

Val Leu Arg Leu Leu Phe Asn Lys Ser Pro Ala Arg Arg Val Glu His

305 310 315 320

Phe Ala Leu Pro His Glu Gln Leu Glu Ile Gly Ala Gly Pro Ser Gly

325 330 335

Asp

<210>147

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<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>147

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<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>148

Met Thr Gln His Glu Thr Thr Ala Arg Arg Leu Ala Ala Val His Ala

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Ala Pro Val Phe Met Asp Thr Asp Ala Thr Ile Asp Lys Val Ile Gly

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Gly Val His Arg Lys Leu Gln Pro Thr Tyr Val Glu Arg Ile Val Trp

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Ala Gln Gly Gly Gly Ala Thr Leu Ser Val Phe Gly Ser Arg Ser Gly

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Arg Ile Gly Gly Leu Ala Cys Trp Glu His Thr Met Asn Leu Ala Arg

165 170 175

Gln Ala Leu Leu Glu Gln Glu Gln Gln Ile His Ala Ala Ala Trp Pro

180 185 190

Ala Leu Ser Thr Met Ala Gly Phe Glu Thr Val Ala Asp Ala Gln Ile

195 200 205

Glu Ala Met Met Lys Thr His Ala Leu Thr Ala Gln Val Phe Val Ile

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Cys Ala Ser Asn Pro Val Asp Gly Thr Cys Leu Glu Trp Met Arg Asp

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Asn Leu Gly Glu Gln Lys Phe Val Thr Ala Gly Gly Gly Trp Ser AIa

245 250 255

Val Ile His Pro Phe Asn Ser Phe Leu Gly Gly Pro His Thr Gly Leu

260 265 270

Glu Glu Lys Leu Val Ser Ala Thr Ile Asp Phe Ser Asp Ile Arg Leu

275 280 285

Val Lys Ala Trp Val Asp Ser Lys Gly His Tyr Ala Arg Pro Glu Val

290 295 300

Leu Arg Leu Ala Val Asp Arg Lys Pro Leu Trp His Asp Glu Cys Glu

305 310 315 320

Val Pro Gly Gln Ala Gln Val Arg Thr Arg Ala Ala Ser Leu Ala Val

325 330 335

Gln Glu His Pro Val Val Leu Pro Gln Gly Ala Ala Arg Pro Ala Pro

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Gln Asp Trp Asp Thr Ser Ala Ala Gln Glu Leu Thr Ser

355 360 365

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<211>942

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>149

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<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>150

Met Thr Lys Leu Glu Lys Val Val Ala Ala Ala Val Gln Ala Thr Pro

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<210>152

<211>330

<212>PRT

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<220>

<223>从环境样品获得

<400>152

Met Arg Val Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Leu Lys Pro Val Leu Tyr

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Ser Arg Glu Gly Thr Val Asp Asn Val Val Lys Lys Ile His Glu Leu

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Gly Gly Glu Phe Leu Lys Leu Leu Asp Gln Ser Val Thr Val Pro Ser

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130 135 140

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Ala Cys Phe Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Met Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Phe Pro Gly Ser Met Phe Gly

180 185 190

Asp Ala Phe Ser Glu Lys Val Glu Ile Asn Val Arg Gln His Ala Met

195 200 205

Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Cys Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Met Lys Asp Thr Gly Cys Glu Ile Gly Pro Ile

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Thr Pro Asp Gly Thr Leu Ile

245 250 255

Gly Glu Pro Ile His Ser Gly Glu Gly Val Cys Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

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275 280 285

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290 295 300

Ala His Ile His Glu Arg Asn Glu Gln Pro Lys Ser Ala Val Glu Gln

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Asp Ser Gln Asn Val Phe Thr Ala Ile Ala

325 330

<210>153

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<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>153

atgccaaacg caagaaagat tgttggagcc gtggcccaag ttgcacagga attcttcgac 60

actgaagcga atctcggtaa agcgatagcg gcgattcaca atgctgcgaa gcaaggcgca 120

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ggatattttc cgaaggacaa tatatccgat gagtggcgcg aagcgattcc aaaccttcaa 780

gcgcagtggg ctgtgggcgg gagttctatc gtggcaccgg ggggctccta tctggtccca 840

ccactcatta atgaggagaa gatcctctgc gccgaactcg atttcaatct caggcgtctt 900

tggaaagcct ggatcgatcc gattggtcac tattcgcgtc ccgatgttta tagcctgcaa 960

ctgcataacg ttgctgggcg tgagtattcc tatcaggccg tagatttgaa gcgcacgcca 1020

aagccccaat cgctgtgggt agatgcgtcc gaggaagacg gtgcgctgaa ttga 1074

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<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>154

Met Pro Asn Ala Arg Lys Ile Val Gly Ala Val Ala Gln Val Ala Gln

1 5 10 15

Glu Phe Phe Asp Thr Glu Ala Asn Leu Gly Lys Ala Ile Ala Ala Ile

20 25 30

His Asn Ala Ala Lys Gln Gly Ala Asp Ile Val Val Phe Ala Glu Cys

35 40 45

Tyr Leu Gly Gln Tyr Pro Tyr Trp Ala Gln Phe Tyr Asp Asn Ser Ala

50 55 60

Lys Asn Tyr Ser Lys Val Trp Thr Ala Leu Tyr Asp Gly Ala Ile Thr

65 70 75 80

Val Gly Gly Asp Glu Cys Arg Ala Ile Ala Ala Ala Ala Arg Gln Ser

85 90 95

Lys Ile His Val Val Met Gly Cys Asn Glu Leu Ser Asp Arg Ala Gly

100 105 110

Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Ser Leu Leu Phe Phe Asp Arg Lys Gly Glu

115 120 125

Leu Ile Gly Arg His Arg Lys Leu Met Pro Ser Met His Glu Arg Leu

130 135 140

Ile His Gly Thr Gly Asp Gly Arg Asp Leu Asn Val Tyr Asp Thr Asp

145 150 155 160

Ile Gly Met Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu His His Met Ser Leu

165 170 175

Ser Lys Tyr Ala Met Ala Thr Met Gly Glu Glu Val His Val Ala Ser

180 185 190

Trp Pro Gly Met Trp Arg Gly Gly Asp Ala Ala Ile Gly Glu Arg Met

195 200 205

Val Glu Ala Asp Leu Gly Ala Pro Phe Val Cys Asp Ala Glu Phe Ala

210 215 220

Ile Arg Glu Tyr Ala Ala Glu Thr Gly Asn Phe Val Leu Ser Ala Ser

225 230 235 240

Gly Tyr Phe Pro Lys Asp Asn Ile Ser Asp Glu Trp Arg Glu Ala Ile

245 250 255

Pro Asn Leu Gln Ala Gln Trp Ala Val Gly Gly Ser Ser Ile Val Ala

260 265 270

Pro Gly Gly Ser Tyr Leu Val Pro Pro Leu Ile Asn Glu Glu Lys Ile

275 280 285

Leu Cys Ala Glu Leu Asp Phe Asn Leu Arg Arg Leu Trp Lys Ala Trp

290 295 300

Ile Asp Pro Ile Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Tyr Ser Leu Gln

305 310 315 320

Leu His Asn Val Ala Gly Arg Glu Tyr Ser Tyr Gln Ala Val Asp Leu

325 330 335

Lys Arg Thr Pro Lys Pro Gln Ser Leu Trp Val Asp Ala Ser Glu Glu

340 345 350

Asp Gly Ala Leu Asn

355

<210>155

<211>1041

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>155

atgggcatcg aacatccgaa atacaaggtg gccgtggtgc aggccgcgcc ggcctggctc 60

gatctcgacg gctcgatcaa gaaggcgatt gcgctgatcg aggaagcggc cgccaagggc 120

gctaagctga tcgctttccc cgaaaccttc attcccggct atccctggca catctggctg 180

gactcgccgg cctgggcgat cggccgcggc tttgtgcagc gctacttcga taactcgctg 240

gcctacgaca gcccgcaagc cgaaaagctg cgcgccgcgg tcaagaaggc caagctcact 300

gccgtgattg gcctgtcgga gcgcgacggc ggcagcctct atatagcgca atggctgatt 360

ggccctgatg gcgagaccat cgcaaaacgc agaaagctgc ggccaacgca cgcggaacgc 420

accgtttttg gcgagggtga cggcagcgac cttgccgtgc acgaccggcc cggaatcggg 480

cggctgggag cgctgtgctg ctgggagcac ctgcaaccgc tttcgaaata cgcgatgtat 540

gcgcagaacg aacaggtcca tgtcgcgtca tggccgagct tctcgctcta cgaccccttc 600

gcgccggcgc tcggcgccga ggtcaacaat gcggcttccc gcgtctacgc ggtcgagggc 660

tcgtgcttcg tgctggcgcc gtgcgccacg gtttcgcaag ccatgatcga cgagctgtgt 720

gaccggccgg acaagcatgc gctgttgcac gccggtggcg gacacgccgc gatttacggc 780

ccggacggca gctcgatcgc ggagaagctg ccgcaggacg cggagggcct gttgatcgcc 840

gagatcgatc tcggggcgat cggggttgcc aagaatgcag ccgacccggc cggtcattat 900

tcgcggccgg acgtgacgcg actcctgctg aacaagaacc ggatgcgaag ggtcgaggag 960

tttgcgctgc cggtcgatcc ggtcgcaacg accgaggagg agcaagtcgc gacgccgtcg 1020

aggcccagcc aggccgcgta a 1041

<210>156

<211>346

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>156

Met Gly Ile Glu His Pro Lys Tyr Lys Val Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ala Trp Leu Asp Leu Asp Gly Ser Ile Lys Lys Ala Ile Ala Leu

20 25 30

Ile Glu Glu Ala Ala Ala Lys Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp His Ile Trp Leu Asp Ser Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ala Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Glu Lys Leu Arg Ala Ala Val Lys Lys

85 90 95

Ala Lys Leu Thr Ala Val Ile Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

115 120 125

Lys Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Asp Arg Pro Gly Ile Gly

145 150 155 160

Arg Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys

165 170 175

Tyr Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Val Ala Ser Trp Pro

180 185 190

Ser Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala Pro Ala Leu Gly Ala Glu Val

195 200 205

Asn Asn Ala Ala Ser Arg Val Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val

210 215 220

Leu Ala Pro Cys Ala Thr Val Ser Gln Ala Met Ile Asp Glu Leu Cys

225 230 235 240

Asp Arg Pro Asp Lys His Ala Leu Leu His Ala Gly Gly Gly His Ala

245 250 255

Ala Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ser Ser Ile Ala Glu Lys Leu Pro Gln

260 265 270

Asp Ala Glu Gly Leu Leu Ile Ala Glu Ile Asp Leu Gly Ala Ile Gly

275 280 285

Val Ala Lys Asn Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp

290 295 300

Val Thr Arg Leu Leu Leu Asn Lys Asn Arg Met Arg Arg Val Glu Glu

305 310 315 320

Phe Ala Leu Pro Val Asp Pro Val Ala Thr Thr Glu Glu Glu Gln Val

325 330 335

Ala Thr Pro Ser Arg Pro Ser Gln Ala Ala

340 345

<210>157

<211>1011

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>157

atgagagtcg ttaaagctgc tgcggtccaa ctgagtcccg tgctgtatag ccgtgaggga 60

acagtagaaa aggtcgttcg gaagatccac gagcttggcg atcaaggagt cgagttcgcc 120

acgttcccgg agaccgtagt gccctactat ccgtacttct cggccgtcca gacgccgatt 180

cagaacatgc acggcccgga gcacctgaag ttgctcgagc aatcggtgac cgtcccgtcg 240

cccgccaccg acgcgatcgg cgacgcctgc cgccacgccg gcgtcgtcgt ctcgatcggc 300

gtcaacgaac gcgatggcgg cacgatctac aacacgcagc tcctgttcga cgccgacggc 360

accttgatcc agcgccggcg aaagatcacg ccgaccttct acgaacgaat ggtctgggga 420

cagggtgacg gttcggggct gcgcgccgtc gacagccgcg taggacgcat cggccagctc 480

gcctgtttcg agcactacaa cccgctggcg cgctacgcca tgatggccga cggcgagcag 540

attcactccg cgatgtaccc cggctccatc tttggagacg cattcgcgca gaaaatcgag 600

atcaacatcc gccagcacgc gctcgagtcc ggtgcgttcg tcgtcaacgc caccgcctgg 660

ctcgatgccg accagcaggc gcggatcatg aaggataccg gctgcaccat cgaaccgatc 720

tcgggcggtt gcttcaccgc catcgtcacc ccggacggga ccctgctggg cgaagcgata 780

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caagtgatgg actctcgtgg tcactacagt cggccggagt tgctcagcct tctgatcgac 900

cgcacaccca ccgcacacct acacgaacgc gaagcgcacc ccagagcaag tgaggactgg 960

caaggttccg agagtctgcg cgccatgcag gcctcggcac cgaaggtctg a 1011

<210>158

<211>336

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>158

Met Arg Val Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Leu Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Gly Thr Val Glu Lys Val Val Arg Lys Ile His Glu Leu

20 25 30

Gly Asp Gln Gly Val Glu Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Ala Val Gln Thr Pro Ile Gln Asn Met His

50 55 60

Gly Pro Glu His Leu Lys Leu Leu Glu Gln Ser Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Pro Ala Thr Asp Ala Ile Gly Asp Ala Cys Arg His Ala Gly Val Val

85 90 95

Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Thr

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys

115 120 125

Ile Thr Pro Thr Phe Tyr Glu Arg Met Val Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Arg Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu

145 150 155 160

Ala Cys Phe Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Met Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Tyr Pro Gly Ser Ile Phe Gly

180 185 190

Asp Ala Phe Ala Gln Lys Ile Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala Leu

195 200 205

Glu Ser Gly Ala Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

210 215 220

Gln Gln Ala Arg Ile Met Lys Asp Thr Gly Cys Thr Ile Glu Pro Ile

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Thr Pro Asp Gly Thr Leu Leu

245 250 255

Gly Glu Ala Ile Arg Ser Gly Glu Gly Val Val Val Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Phe Thr Leu Ile Asp Arg Arg Lys Gln Val Met Asp Ser Arg Gly His

275 280 285

Tyr Ser Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro Thr

290 295 300

Ala His Leu His Glu Arg Glu Ala His Pro Arg Ala Ser Glu Asp Trp

305 310 315 320

Gln Gly Ser Glu Ser Leu Arg Ala Met Gln Ala Ser Ala Pro Lys Val

325 330 335

<210>159

<211>930

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>159

atgtcatcaa ccgtgacggt tgccattatt caggcagcac ccgtgtatta tgacctgcct 60

gccacgctgg acaaagccgc caaactggtg gcggatgcgg cggcacaggg cgcaacgctg 120

attgtcttcg gcgagacatg gtttccgggg tatccggcat ggctggatta ctgccccaat 180

gtcgcgctgt ggaatcatcc cccgaccaag caggtatttg agcgcctgca tcgcaacagc 240

atcgctgtgc caagcaagga actcgatttt ctgggggcgc tggcacgcaa gcatcaggtg 300

gtgctggtgt tgagcattaa tgaacgtgtg gagcagggcg cggggcatgg cacgctgtat 360

aacacgctgc tcacgattga cgccgatggc acgctggcaa atcatcatcg caaactgatg 420

ccgacctata ccgagcgcat ggtgtggggc atgggcgacg gggtggggtt gcaagcggtg 480

gatactgccg tcgggcgcgt aggcggctta atctgctggg aacactggat gccgttggca 540

cgccagacca tgcacatcag cggcgaacag attcatattt ccgtcttccc aaccgtccat 600

gagatgcacc agattgccag ccgccagtat gcctttgaag ggcggacgtt tgtgctgacc 660

gttggcggca ttcttgcggc acaggacttg cccgccgaac tggaacgccc cgccgatttg 720

ccgcccacgc agcttgtcca gcgcggcggc agcgccatta tcgcgccgga tggtcgttat 780

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atcatccgcg agagcatgac gctggatgtc accggacatt atgcccgccc ggatgttttt 900

gacctgaccg tgaagcgcag ccgaccatga 930

<210>160

<211>309

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>160

Met Ser Ser Thr Val Thr Val Ala Ile Ile Gln Ala Ala Pro Val Tyr

1 5 10 15

Tyr Asp Leu Pro Ala Thr Leu Asp Lys Ala Ala Lys Leu Val Ala Asp

20 25 30

Ala Ala Ala Gln Gly Ala Thr Leu Ile Val Phe Gly Glu Thr Trp Phe

35 40 45

Pro Gly Tyr Pro Ala Trp Leu Asp Tyr Cys Pro Asn Val Ala Leu Trp

50 55 60

Asn His Pro Pro Thr Lys Gln Val Phe Glu Arg Leu His Arg Asn Ser

65 70 75 80

Ile Ala Val Pro Ser Lys Glu Leu Asp Phe Leu Gly Ala Leu Ala Arg

85 90 95

Lys His Gln Val Val Leu Val Leu Ser Ile Asn Glu Arg Val Glu Gln

100 105 110

Gly Ala Gly His Gly Thr Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Thr Ile Asp Ala

115 120 125

Asp Gly Thr Leu Ala Asn His His Arg Lys Leu Met Pro Thr Tyr Thr

130 135 140

Glu Arg Met Val Trp Gly Met Gly Asp Gly Val Gly Leu Gln Ala Val

145 150 155 160

Asp Thr Ala Val Gly Arg Val Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu His Trp

165 170 175

Met Pro Leu Ala Arg Gln Thr Met His Ile Ser Gly Glu Gln Ile His

180 185 190

Ile Ser Val Phe Pro Thr Val His Glu Met His Gln Ile Ala Ser Arg

195 200 205

Gln Tyr Ala Phe Glu Gly Arg Thr Phe Val Leu Thr Val Gly Gly Ile

210 215 220

Leu Ala Ala Gln Asp Leu Pro Ala Glu Leu Glu Arg Pro Ala Asp Leu

225 230 235 240

Pro Pro Thr Gln Leu Val Gln Arg Gly Gly Ser Ala Ile Ile Ala Pro

245 250 255

Asp Gly Arg Tyr Leu Ala Gly Pro Val Tyr Asn Glu Glu Thr Ile Leu

260 265 270

Thr Ala Thr Leu Asp Leu Gly Glu Ile Ile Arg Glu Ser Met Thr Leu

275 280 285

Asp Val Thr Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Asp Leu Thr Val

290 295 300

Lys Arg Ser Arg Pro

305

<210>161

<211>1008

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>161

atgaccacca tccgcgccgc cgccgtgcag tttagcccgg tgctgtactc gcgccaggcc 60

accgtcgaca agctgtgccg caccctgctg gaactgggcc gcgaaggggt gcagttcgcg 120

gtattcccgg aaaccgtggt gccgtactac ccatattttt ccttcgtgca gccaccgttc 180

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acccggcaga tcggtgaggc ctgccgggaa gcggggatcg tcgccagcat cggcgtcaac 300

gaacgcgacg gcggcactat ttataacgcg cagttgctgt tcgatgccga cggcagcctg 360

attcagcagc ggcgcaagat caccccgacc tatcacgaac gcatggtctg ggggcagggc 420

gatggttccg gcctgcgcgc cgtggacagt gcggtggggc gtatcggttc cctggcctgc 480

tgggaacatt acaaccccct ggcgcgctac gcgctgatgg ccgatggcga acagattcat 540

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ctagtgtcga cctgcaggcg cgcgagctcc agcttttgtt ccctttag 1008

<210>162

<211>335

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>162

Met Thr Thr Ile Arg Ala Ala Ala Val Gln Phe Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Gln Ala Thr Val Asp Lys Leu Cys Arg Thr Leu Leu Glu Leu

20 25 30

Gly Arg Glu Gly Val Gln Phe Ala Val Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Pro Pro Phe Ala Met Gly Lys

50 55 60

Gln His Leu Leu Leu Leu Glu Gln Ser Val Thr Val Pro Ser Asp Val

65 70 75 80

Thr Arg Gln Ile Gly Glu Ala Cys Arg Glu Ala Gly Ile Val Ala Ser

85 90 95

Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Ala Gln Leu

100 105 110

Leu Phe Asp Ala Asp Gly Ser Leu Ile Gln Gln Arg Arg Lys Ile Thr

115 120 125

Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Val Trp Gly Gln Gly Asp Gly Ser Gly

130 135 140

Leu Arg Ala Val Asp Ser Ala Val Gly Arg Ile Gly Ser Leu Ala Cys

145 150 155 160

Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met Ala Asp Gly

165 170 175

Glu Gln Ile His Val Ala Met Phe Pro Gly Ser Leu Val Gly Asp Ile

180 185 190

Phe Ala Glu Gln Ile Glu Val Thr Ile Arg His His Ala Leu Glu Ser

195 200 205

Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp Gln Gln

210 215 220

Gly Arg Ile Met Gln Asp Thr Gly Cys Glu Leu Gly Pro Ile Ser Gly

225 230 235 240

Gly Cys Phe Thr Ala Ile Ile Ser Pro Glu Gly Lys Val Leu Gly Glu

245 250 255

Pro Leu Arg Ser Gly Glu Gly Val Val Ile Ala Asp Leu Asp Leu Ala

260 265 270

Leu Ile Asp Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His Tyr Ser

275 280 285

Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Ser Pro Thr Ala His

290 295 300

Val His Glu Leu Ala Ala Ala Leu Asn Pro Ala Arg Glu Ser Asp Pro

305 310 315 320

Leu Val Ser Thr Cys Arg Arg Ala Ser Ser Ser Phe Cys Ser Leu

325 330 335

<210>163

<211>978

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>163

gtgaccatca tcaaagccgc cgcagtgcag atcagccccg tgctttacag ccgggaagcc 60

accgtcgaaa aggtcgttcg cgagacccgc gaactcggcc agaagggcgt gcagttcgca 120

acgtttccgg aaaccgtggt gccgtactac ccatacttct ccgccgtcca gacgggcatc 180

gaactgctgt ccggcaaaga gcacctgcga ctgctggagc aggccgtgac tgttccttcc 240

cccgccactg atgcgattgc ccaggcggca cgcgaggccg gcatggtggt gtcgatcggc 300

gtcaacgagc gtgacggcgg caccatctac aacacgcagc tgctctttga tgccgacggc 360

acgctggtgc agcgccgccg caagatcacg ccgacgcatt tcgagcgcat ggtgtggggc 420

cagggcgacg gttcgggcct gcgcgcagtg gataccaagg tcggccgcat tggccagctg 480

gcctgcttcg agcacaacaa cccgctcgcg cgctacgcaa tgatggccga tggcgagcag 540

atccattcct ccatgtaccc gggctccgcc ttcggcgacg gattcgcgca gcgcatggag 600

atcaacattc gccaacacgc cctggagtcg ggttgcttcg tggtgaatgc caccgcgtgg 660

ctcgacgccg accagcaggc gcagatcatg aaggacacgg gctgcgccat cgggccgatc 720

tctggcggct gcttcacgac catcgtcacg ccggacggca tgctgatcgg cgaacccctc 780

cgcgagggcg agggcgagat catcgccgac ctcgatttca ccctgatcga ccgccgcaag 840

ctgctgatgg actcggtcgg ccactacaac cgtccggagc tgctgagcct gctgatcgac 900

cgcacacccg cggcgaactt ccatgagcgc agtacgcatc cggccgtcga tgccgccagc 960

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<210>164

<211>325

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>164

Val Thr Ile Ile Lys Ala Ala Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Ala Thr Val Glu Lys Val Val Arg Glu Thr Arg Glu Leu

20 25 30

Gly Gln Lys Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Ala Val Gln Thr Gly Ile Glu Leu Leu Ser

50 55 60

Gly Lys Glu His Leu Arg Leu Leu Glu Gln Ala Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Pro Ala Thr Asp Ala Ile Ala Gln Ala Ala Arg Glu Ala Gly Met Val

85 90 95

Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Thr

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Val Gln Arg Arg Arg Lys

115 120 125

Ile Thr Pro Thr His Phe Glu Arg Met Val Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Thr Lys Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu

145 150 155 160

Ala Cys Phe Glu His Asn Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Met Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ser Met Tyr Pro Gly Ser Ala Phe Gly

180 185 190

Asp Gly Phe Ala Gln Arg Met Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala Leu

195 200 205

Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Met Lys Asp Thr Gly Cys Ala Ile Gly Pro Ile

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Phe Thr Thr Ile Val Thr Pro Asp Gly Met Leu Ile

245 250 255

Gly Glu Pro Leu Arg Glu Gly Glu Gly Glu Ile Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Phe Thr Leu Ile Asp Arg Arg Lys Leu Leu Met Asp Ser Val Gly His

275 280 285

Tyr Asn Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro Ala

290 295 300

Ala Asn Phe His Glu Arg Ser Thr His Pro Ala Val Asp Ala Ala Ser

305 310 315 320

Gly Leu Glu Ile Leu

325

<210>165

<211>1008

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>165

atggccaatt tcaaattcaa ggcggcggcg gtgcaggccg cgcccgcttt cctcgatctc 60

gaggctagca tcgccaagtc gatcgccctg atcgaacaag ccgccgccaa cggcgccaag 120

ctgatcgcct ttcccgaagt cttcattccc ggctacccct ggcacatctg gctcgacagt 180

cccgcctggg cgatcgggcg cggcttcgtc tcgcgctatt tcgagaactc gctggactac 240

aacagccccg aggccgagcg cctcaggctc gccgtcaaga aggcgggcct gacggcggtg 300

atcggcctct ccgagcgcga cggcggcagc ctctacatcg cgcaatggat catcggccct 360

gacggcgaga ccgttgcgaa acggcgtaag ctccggccga cccattgcga gcgcacggtc 420

tatggagaag gcgacggcag cgacctcgcg gttcacgacg tatctggcat cggccgtctc 480

ggcgcgctct gctgctggga gcatatccag ccgctgtcga aattcgcgat gtattcgcaa 540

aatgagcaag tgcacgtcgc gtcctggccg agcttctcgc tctacgaccc gttcgcgccg 600

gcgctgggcg ccgaggtcaa caacgcagcc tcgcggatct atgcggtcga aggctcatgc 660

ttcgtcattg cgccctgcgc gaccgtttcg cctgcaatga tcgaggaact gtgcgacgcg 720

ccaaacaaac atgcgcttct gcacgcgggc ggcggcttcg cgcgcatcta tgggccggac 780

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ttgcccgtcg atgcgccggc gccggagacg cagaccgccg cgagctga 1008

<210>166

<211>335

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>166

Met Ala Asn Phe Lys Phe Lys Ala Ala Ala Val Gln Ala Ala Pro Ala

1 5 10 15

Phe Leu Asp Leu Glu Ala Ser Ile Ala Lys Ser Ile Ala Leu Ile Glu

20 25 30

Gln Ala Ala Ala Asn Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu Val Phe

35 40 45

Ile Pro Gly Tyr Pro Trp His Ile Trp Leu Asp Ser Pro Ala Trp Ala

50 55 60

Ile Gly Arg Gly Phe Val Ser Arg Tyr Phe Glu Asn Ser Leu Asp Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Pro Glu Ala Glu Arg Leu Arg Leu Ala Val Lys Lys Ala Gly

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Leu Thr Ala Val Ile Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser Leu Tyr

100 105 110

Ile Ala Gln Trp Ile Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Val Ala Lys Arg

115 120 125

Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Cys Glu Arg Thr Val Tyr Gly Glu Gly

130 135 140

Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Asp Val Ser Gly Ile Gly Arg Leu

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Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Ile Gln Pro Leu Ser Lys Phe Ala

165 170 175

Met Tyr Ser Gln Asn Glu Gln Val His Val Ala Ser Trp Pro Ser Phe

180 185 190

Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala Pro Ala Leu Gly Ala Glu Val Asn Asn

195 200 205

Ala Ala Ser Arg Ile Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val Ile Ala

210 215 220

Pro Cys Ala Thr Val Ser Pro Ala Met Ile Glu Glu Leu Cys Asp Ala

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Pro Asn Lys His Ala Leu Leu His Ala Gly Gly Gly Phe Ala Arg Ile

245 250 255

Tyr Gly Pro Asp Gly Ala Ser Ile Ala Glu Thr Leu Pro Pro Asp Gln

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Glu Gly Leu Ile Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Thr Ala Ile Gly Val Ala

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Lys Ala Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Thr

290 295 300

Arg Leu Leu Phe Asn Lys Lys Pro Ala Arg Arg Val Glu Thr Phe Ala

305 310 315 320

Leu Pro Val Asp Ala Pro Ala Pro Glu Thr Gln Thr Ala Ala Ser

325 330 335

<210>167

<211>1017

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>167

atgggtattg aacatccgaa gtacagggtt gccgtggtgc aggccgcacc ggcctggctc 60

gatcttgacg cgtcgatcga caagtcgatc gcgctgatcg aggaggctgc ccagaaaggc 120

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<211>338

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>168

Met Gly Ile Glu His Pro Lys Tyr Arg Val Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ala Trp Leu Asp Leu Asp Ala Set Ile Asp Lys Ser Ile Ala Leu

20 25 30

Ile Glu Glu Ala Ala Gln Lys Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Ala Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp His Ile Trp Met Asp Ser Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ala Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Glu Lys Leu Arg Ala Ala Val Arg Lys

85 90 95

Ala Lys Leu Thr Ala Val Ile Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Leu Ala Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

115 120 125

Lys Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Tyr Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Asn Arg Pro Asp Ile Gly

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Arg Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys

165 170 175

Tyr Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Val Ala Ala Trp Pro

180 185 190

Ser Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala Val Ala Leu Gly Ala Glu Val

195 200 205

Asn Asn Ala Ala Ser Arg Val Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val

210 215 220

Leu Ala Pro Cys Ala Thr Val Ser Gln Ala Met Ile Asp Glu Leu Cys

225 230 235 240

Asp Arg Pro Asp Lys His Ala Leu Leu His Val Gly Gly Gly Phe Ala

245 250 255

Ala Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ser Gln Ile Gly Asp Lys Leu Ala Pro

260 265 270

Asp Gln Glu Gly Leu Leu Ile Ala Glu Ile Asp Leu Gly Ala Ile Gly

275 280 285

Val Ala Lys Asn Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp

290 295 300

Val Thr Arg Leu Leu Leu Asn Lys Lys Pro Tyr Lys Arg Val Glu Gln

305 310 315 320

Phe Ser Pro Pro Ser Glu Ala Val Glu Pro Thr Asp Ile Ala Ala Ala

325 330 335

Ala Ser

<210>169

<211>1077

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>169

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<210>170

<211>358

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>170

Met Ala Leu Thr His Pro Lys Leu Lys Val Ala Ala Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ala Phe Leu Asp Val Asp Ala Ala Val Asp Lys Ala Val Arg Leu

20 25 30

Ile Asp Glu Ala Ala Ala Asn Gly Ser Ser Leu Val Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Trp Ile Pro Gly Tyr Pro Phe Trp Ile Trp Leu Gly Ser Pro Ala

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Trp Ala Ile Met Arg Gly Phe Val Ser Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ser Tyr Asp Ser Arg Gln Ala Glu Arg Leu Arg Asp Ala Ala Lys Arg

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His Lys Leu Thr Val Val Met Gly Leu Ser Glu Arg Ala Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Ile Ile Gly Pro Asn Gly Glu Thr Val Ala

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Gln Arg Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser His Leu Ala Val His Asn Leu Pro Ile Gly Arg

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Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys Tyr

165 170 175

Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Glu Ile His Val Ala Ala Trp Pro Ser

180 185 190

Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala His Ala Leu Gly Ala Glu Val Asn

195 200 205

Asn Ala Ala Ser Gln Ile Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val Val

210 215 220

Ala Pro Cys Ala Val Ile Ser Gln Glu Met Ile Asp Leu Met Cys Asp

225 230 235 240

Thr Pro Asp Lys His Gln Leu Ile His Val Gly Gly Gly Phe Thr Val

245 250 255

Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ala Arg Ile Gly Asp Lys Leu Ala Pro Asp

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Gln Glu Gly Ile Val Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Gly Met Ile Pro Ile

275 280 285

Ala Lys Ala Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val

290 295 300

Thr Arg Leu Leu Phe Asn Asn Arg Pro Ala Asn Arg Val Glu Thr Leu

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Val Leu Pro Val Asp Gln Val Arg Asp Ile Asp Ala Arg Val Glu Ala

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Lys Pro Met Ala Ala Glu

355

<210>171

<211>1011

<212>DNA

<213>未知

<220>

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<400>171

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<210>172

<211>336

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>172

Met Thr Lys Gly Thr Val Lys Val Ala Ala Ala Gln Val Thr Pro Val

1 5 10 15

Phe Met Asp Arg Lys Ala Thr Ile Val Lys Ala Cys Asp Thr Ile Ala

20 25 30

Glu Ala Gly Lys Asn Gly Ala Arg Leu Val Val Phe Pro Glu Thr Phe

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Val Pro Gly Tyr Pro Asp Trp Val Trp Thr Ala Thr Ala Gly Thr His

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Arg Asp Ile His Gln Ala Met Tyr Ala Glu Leu Leu Asp Gln Ala Val

65 70 75 80

Ser Ile Pro Ser Pro Ala Thr Asp Ala Leu Cys Arg Ala Ala Lys Lys

85 90 95

Ala Gly Val Tyr Val Val Ile Gly Val Asn Glu Leu Ser Gly Pro Gly

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Gly Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Ile Tyr Ile Asp Asp Glu Gly Glu Ile

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Trp Ala Pro Gly Asp Gly Ser Thr Leu Glu Ala Tyr Glu Thr Ser Ile

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Gly Arg Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro Leu Ala

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Arg Tyr Ala Met Tyr Ala Trp Gly Val Gln Ile Tyr Val Ala Pro Thr

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Trp Asp Ser Ser Asp Gly Trp Val Gly Ser Met Gln His Ile Ala Arg

195 200 205

Glu Gly Arg Thr Ala Val Ile Gly Cys Cys Met Ala Ile Arg Arg Ser

210 215 220

Asp Ile Pro Asp Lys Tyr Glu Phe Lys Lys Leu Tyr Pro Pro Ser Lys

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Ser Lys Asp Glu Glu Trp Val Asn Asp Gly Asn Ser Val Ile Val Ala

245 250 255

Pro Gly Gly Arg Ile Leu Ala Gly Pro Val Ala Lys Glu Glu Thr Ile

260 265 270

Leu Tyr Ala Asp Leu Asp Pro Ala Ala Glu Arg Gly Ser Lys Phe Ser

275 280 285

Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Gln Leu Thr

290 295 300

Val Asn Arg Gly Pro Ala Glu Leu Val Asn Val Ala Gly Asp Ile Ala

305 310 315 320

Pro Ala Thr Asn Gly Lys Val Lys Thr Pro Ala Lys Leu Arg Arg Lys

325 330 335

<210>173

<211>993

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>173

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caggtgatgg actcgcgcgg ccactacaac cggccggaat tgctcagtct cctgatcgac 900

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<210>174

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>174

Met Lys Val Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Leu Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Gly Thr Val Glu Arg Val Val Arg Lys Ile His Glu Leu

20 25 30

Gly Arg Gln Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

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Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Thr Pro Leu Gln Ile Ile Ala

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Gly Pro Glu His Leu Lys Leu Leu Asp Gln Ala Val Thr Val Pro Ser

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Pro Ala Thr Asp Ala Ile Ser Glu Ala Ala Arg Gln Ala Gly Val Val

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Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Leu Tyr Asn Thr

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Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Ala Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys

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Ile Thr Pro Thr His Phe Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Lys Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu

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Ala Cys Trp Glu His Asn Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Ile Ala

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Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Tyr Pro Gly Ser Met Phe Gly

180 185 190

Asp Pro Phe Ala Gln Lys Thr Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala Leu

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Glu Ser Ala Cys Phe Val Val Cys Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

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Gln Gln Ala Gln Ile Cys Lys Asp Thr Gly Cys Asp Ile Gly Pro Ile

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Ser Gly Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Ala Pro Asp Gly Thr Leu Leu

245 250 255

Gly Glu Pro Ile Arg Ser Gly Glu Gly Met Val Ile Val Asp Leu Asp

260 265 270

Phe Thr Leu Ile Asp Lys Arg Lys Gln Val Met Asp Ser Arg Gly His

275 280 285

Tyr Asn Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro Thr

290 295 300

Ala His Val His Asp Arg Ala Val Arg Pro Glu Ser Ala Ala Glu Gln

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Arg Ser Glu Glu Leu Leu Ala Thr Ala Val

325 330

<210>175

<211>945

<212>DNA

<213>未知

<220>

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<400>175

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agggaagcat ccaccgaaaa agcttgccgg ctcattctcg aagcgggggc atcaggggcg 120

acgctggcgg cgtttggcga gacgtggctt cccggctatc cattccacat ctggagggaa 180

gttccgactg ctctccgagt ggaatacatc gctaatgccg tcgagattcc cagcccaacg 240

accgaccgat tgtgcgcggc ggctcgtcag gcgaacatcg atgttgtgat cggcgttgtc 300

gaactggatg cgcagacaca cgggacggtc tactgtacgc tcttgttcat tggcagcgat 360

ggctcaattc tgggacgtca tcgaaagatt aaaccgactt tcgtggagcg aaccgcatgg 420

ggggaaggtg acggcagcag cctgatcgtc tacgagcgcc cgtatggcaa gatcagtggt 480

ctgtgttgct gggaacacaa tatggttctg ccgggctacg cgctgatggc gcaggggacg 540

cagattcata tcgccgcatg gcccggctgg gaaagcactc gccatctgct cttatcaaga 600

gcattcgctt ctcaggcagc ggcgtatgtg attgatgtag gcgctatcgt caatcgtgac 660

gaccttcggg aagattacca ggctttgatt gctggaagct actggggcgg aagttgcatc 720

atcaacccag aaggcgaggt catcgctggt ccagcgaaat cggagaccat tctggttgca 780

gattgctcaa ccgagcagat ctttagctca aaagtgctct gtgatgtggg cgggcattat 840

tctcgcccgg atatttttca gctccatgtc aatcgaaagc catatcaacg tatcgtcgag 900

acgaacaacc cacaccccgc tccgattgag ttcgattacc gttga 945

<210>176

<211>314

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>176

Met Thr Thr Tyr Gly Gln Phe Arg Leu Ala Ala Ile Asn Ala Ala Pro

1 5 10 15

Val Tyr Phe Asp Arg Glu Ala Ser Thr Glu Lys Ala Cys Arg Leu Ile

20 25 30

Leu Glu Ala Gly Ala Ser Gly Ala Thr Leu Ala Ala Phe Gly Glu Thr

35 40 45

Trp Leu Pro Gly Tyr Pro Phe His Ile Trp Arg Glu Val Pro Thr Ala

50 55 60

Leu Arg Val Glu Tyr Ile Ala Asn Ala Val Glu Ile Pro Ser Pro Thr

65 70 75 80

Thr Asp Arg Leu Cys Ala Ala Ala Arg Gln Ala Asn Ile Asp Val Val

85 90 95

Ile Gly Val Val Glu Leu Asp Ala Gln Thr His Gly Thr Val Tyr Cys

100 105 110

Thr Leu Leu Phe Ile Gly Ser Asp Gly Ser Ile Leu Gly Arg His Arg

115 120 125

Lys Ile Lys Pro Thr Phe Val Glu Arg Thr Ala Trp Gly Glu Gly Asp

130 135 140

Gly Ser Ser Leu Ile Val Tyr Glu Arg Pro Tyr Gly Lys Ile Ser Gly

145 150 155 160

Leu Cys Cys Trp Glu His Asn Met Val Leu Pro Gly Tyr Ala Leu Met

165 170 175

Ala Gln Gly Thr Gln Ile His Ile Ala Ala Trp Pro Gly Trp Glu Ser

180 185 190

Thr Arg His Leu Leu Leu Ser Arg Ala Phe Ala Ser Gln Ala Ala Ala

195 200 205

Tyr Val Ile Asp Val Gly Ala Ile Val Asn Arg Asp Asp Leu Arg Glu

210 215 220

Asp Tyr Gln Ala Leu Ile Ala Gly Ser Tyr Trp Gly Gly Ser Cys Ile

225 230 235 240

Ile Asn Pro Glu Gly Glu Val Ile Ala Gly Pro Ala Lys Ser Glu Thr

245 250 255

Ile Leu Val Ala Asp Cys Ser Thr Glu Gln Ile Phe Ser Ser Lys Val

260 265 270

Leu Cys Asp Val Gly Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Ile Phe Gln Leu

275 280 285

His Val Asn Arg Lys Pro Tyr Gln Arg Ile Val Glu Thr Asn Asn Pro

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His Pro Ala Pro Ile Glu Phe Asp Tyr Arg

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<210>177

<211>948

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>177

atggactcac ttaccgttgg tctcgcgcaa atcgcgcccg tttggttgaa tcgggcgggg 60

acgttgtcaa agatgttgga acaggttcga gcggcgaaag aggcgggctg tcagcttgtt 120

gtgtttggtg aggcgttgct ccccggttat ccattttgga tcgaactgac gaacggcgca 180

gtcttcaatt cgccgatgca aaaggaaatc cacgcgcact acatggatca agctgtgcag 240

atcgaagcag ggcatcttga tccattgtgc ggcgcggcaa aagcgcacgg catcaccgtg 300

gtcgcgggca tcatcgagcg tccgttggat cgcggcggac atagtttata tgcgagtctg 360

gtgtatatcg atttgaacgg tgtcatccaa tcggtgcatc gcaaactgat gcccacctat 420

gaagaacgac tcacctggtc gcctggcgat ggtcatgggt tacgcgtgca tacactgggc 480

gcttttacgg ttggcaaact caattgttgg gaaaactgga tgccgctgcc gcgcgcggct 540

ctgtatgcgc aaggcgaaga tctgcacgtt gctgtctggc ccgggtccgt gcgcaacaca 600

caggatatta cgcgctttat cgcaatggag tcgcgatcgt ttgtcgtttc ggtttcgagt 660

ttgatgcgca agagtgactt cccacaagat acgcctcatc tctccgccat tcttgaatct 720

gcacccgatc cactcgccaa cggaggttcg tgtctggctg gacctgacgg taaatggatc 780

gttgaaccgg ttgcggatga agagaagttg atcgtcgcca ccattgacca tgcccgtgta 840

cgtgaagaac gccagaactt tgatccatcc ggtcattaca gccgaccaga tgtgacacaa 900

ttgagagtca accgccagcg acaaagcgtt atcgcttttg atgagtag 948

<210>178

<211>315

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>178

Met Asp Ser Leu Thr Val Gly Leu Ala Gln Ile Ala Pro Val Trp Leu

1 5 10 15

Asn Arg Ala Gly Thr Leu Ser Lys Met Leu Glu Gln Val Arg Ala Ala

20 25 30

Lys Glu Ala Gly Cys Gln Leu Val Val Phe Gly Glu Ala Leu Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Pro Phe Trp Ile Glu Leu Thr Asn Gly Ala Val Phe Asn Ser

50 55 60

Pro Met Gln Lys Glu Ile His Ala His Tyr Met Asp Gln Ala Val Gln

65 70 75 80

Ile Glu Ala Gly His Leu Asp Pro Leu Cys Gly Ala Ala Lys Ala His

85 90 95

Gly Ile Thr Val Val Ala Gly Ile Ile Glu Arg Pro Leu Asp Arg Gly

100 105 110

Gly His Ser Leu Tyr Ala Ser Leu Val Tyr Ile Asp Leu Asn Gly Val

115 120 125

Ile Gln Ser Val His Arg Lys Leu Met Pro Thr Tyr Glu Glu Arg Leu

130 135 140

Thr Trp Ser Pro Gly Asp Gly His Gly Leu Arg Val His Thr Leu Gly

145 150 155 160

Ala Phe Thr Val Gly Lys Leu Asn Cys Trp Glu Asn Trp Met Pro Leu

165 170 175

Pro Arg Ala Ala Leu Tyr Ala Gln Gly Glu Asp Leu His Val Ala Val

180 185 190

Trp Pro Gly Ser Val Arg Asn Thr Gln Asp Ile Thr Arg Phe Ile Ala

195 200 205

Met Glu Ser Arg Ser Phe Val Val Ser Val Ser Ser Leu Met Arg Lys

2l0 215 220

Ser Asp Phe Pro Gln Asp Thr Pro His Leu Ser Ala Ile Leu Glu Ser

225 230 235 240

Ala Pro Asp Pro Leu Ala Asn Gly Gly Ser Cys Leu Ala Gly Pro Asp

245 250 255

Gly Lys Trp Ile Val Glu Pro Val Ala Asp Glu Glu Lys Leu Ile Val

260 265 270

Ala Thr Ile Asp His Ala Arg Val Arg Glu Glu Arg Gln Asn Phe Asp

275 280 285

Pro Ser Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Thr Gln Leu Arg Val Asn

290 295 300

Arg Gln Arg Gln Ser Val Ile Ala Phe Asp Glu

305 310 315

<210>179

<211>915

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>179

atgaccacca aagcagccat cattcaggcg cgccccatat actacgatct ggcggcgtgt 60

gtcgataagg cgcttgccct catcaccgag gcggcggcac gcggcgcgaa catcgtcacg 120

ctcggcgaga cgtggctgcc gggctatccc gcgtggctgg atgtgtgcgt cgagatgggg 180

ctgtgggatc acgcgccgac caaagccgtc tttcagcggc tccatgccaa cagcgtcacc 240

atccccggcg cggagatcag ccagttctgc gacatcgccc gccgccttag catcgtgctg 300

gtgctcagcg tcaacgagcg cgtccgcaac accttgttca acaccctgct cacgattgac 360

gagcgcggcg acatccgcaa ccaccaccgc aagctgatgc cgacctacac tgagcgcatc 420

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cagcggaaaa tttag 915

<210>180

<211>304

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>180

Met Thr Thr Lys Ala Ala Ile Ile Gln Ala Arg Pro Ile Tyr Tyr Asp

1 5 10 15

Leu Ala Ala Cys Val Asp Lys Ala Leu Ala Leu Ile Thr Glu Ala Ala

20 25 30

Ala Arg Gly Ala Asn Ile Val Thr Leu Gly Glu Thr Trp Leu Pro Gly

35 40 45

Tyr Pro Ala Trp Leu Asp Val Cys Val Glu Met Gly Leu Trp Asp His

50 55 60

Ala Pro Thr Lys Ala Val Phe Gln Arg Leu His Ala Asn Ser Val Thr

65 70 75 80

Ile Pro Gly Ala Glu Ile Ser Gln Phe Cys Asp Ile Ala Arg Arg Leu

85 90 95

Ser Ile Val Leu Val Leu Ser Val Asn Glu Arg Val Arg Asn Thr Leu

100 105 110

Phe Asn Thr Leu Leu Thr Ile Asp Glu Arg Gly Asp Ile Arg Asn His

115 120 125

His Arg Lys Leu Met Pro Thr Tyr Thr Glu Arg Ile Val Trp Gly Gln

130 135 140

Gly Asp Gly Ala Gly Leu Gln Ala Val Glu Thr Ala Thr Gly Arg Val

145 150 155 160

Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu His Trp Met Pro Leu Ala Arg Gln Ala

165 170 175

Leu His Asn Ala Gly Glu Gln Ile His Val Ser Val Phe Pro Thr Val

180 185 190

Asn Asp Pro Arg His Gln Val Ala Ser Arg Gln Tyr Ala Phe Glu Gly

195 200 205

Arg Cys Phe Val Leu Thr Ala Gly Ser Ile Gln Arg Ala Asp Asp Leu

210 215 220

Pro Pro Glu Leu Thr Val Lys Ala Gly Ile Ala Pro Asp Asp Leu Val

225 230 235 240

Gln Gly Gly Gly Ser Ala Ile Ile Ala Pro Asp Met Arg Tyr Leu Ala

245 250 255

Gly Pro Cys Phe Asp Glu Glu Thr Ile Leu Tyr Ala Asp Leu Asp Leu

260 265 270

SerGlu Thr Ile Arg Glu Ser Met Thr Leu Asp Val Ser Gly His Tyr

275 280 285

Ser Arg Pro Asp Val Phe Thr Phe Glu Val Asn Arg Gln Arg Lys Ile

290 295 300

<210>181

<211>990

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>181

atgcccaaga ccgtacgcgc agccgcagtc cagatcgcgc ccgacctgac gtcacgcgct 60

ggcaccgtcg agcgggtcct gaatgcgatt gccgaagcct ctgacaaagg cgcggagctg 120

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<210>182

<211>329

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>182

Met Pro Lys Thr Val Arg Ala Ala Ala Val Gln Ile Ala Pro Asp Leu

1 5 10 15

ThrSer Arg Ala Gly Thr Val Glu Arg Val Leu Asn Ala Ile Ala Glu

20 25 30

Ala Ser Asp Lys Gly Ala Glu Leu Ile Val Phe Pro Glu Thr Phe Val

35 40 45

Pro Trp Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Leu Pro Pro Val Gln Gln Gly

50 55 60

Pro Glu His Leu Arg Leu Tyr Glu Glu Ala Val Thr Val Pro Ser Ala

65 70 75 80

Glu Thr Arg Ala Val Ala Asp Ala Ala Arg Lys Arg Asn Ala Val Ile

85 90 95

Val Leu Gly Val Asn Glu Arg Asp His Gly Ser Leu Tyr Asn Thr Gln

100 105 110

Leu Ile Phe Asp Ala Asp Gly Ser Leu Lys Leu Lys Arg Arg Lys Ile

115 120 125

Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly Ala

130 135 140

Gly Leu Lys Val Val Glu Thr Ala Ile Gly Arg Met Gly Ala Leu Ala

145 150 155 160

Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met Ala Gln

165 170 175

His Glu Glu Ile His Ala Ser His Phe Pro Gly Ser Leu Val Gly Pro

180 185 190

Ile Phe Gly Glu Gln Ile Glu Val Thr Met Arg His His Ala Leu Glu

195 200 205

Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Gly Trp Leu Ser Glu Glu Gln

210 215 220

Ile Ala Ser Ile His Pro Asp Pro Ser Leu Gln Lys Gly Leu Arg Asp

225 230 235 240

Gly Cys Met Thr Cys Ile Ile Thr Pro Glu Gly Arg His Val Val Pro

245 250 255

Pro Leu Thr Ser Gly Glu Gly Ile Leu Ile Gly Asp Leu Asp Met Arg

260 265 270

Leu Ile Thr Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His Tyr Ala

275 280 285

Arg Pro Glu Leu Leu His Leu Val His Asp Thr Thr Pro Ala Arg Ala

290 295 300

Arg Glu Gln Val Gly Leu Ser Gly Asp Phe Ser Asp Ala Gly Gln Asp

305 310 315 320

Lys Leu Phe Glu Glu Val Gln Asp Ala

325

<210>183

<211>1002

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>183

atggctgagt cacgcattat tcgtgccgcc gccgcccaga ttgcgccaga tctccatgag 60

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gagatccatt gcagccagtt ccctggttca ctggtggggc cgatttttgc cgagcagatg 600

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tggctgaccg aggagcagat caacgagctg accagcgacc cggcgttaca aaaggggctg 720

cgtggtggct gcaacaccgc catcatctcg ccggaaggcc gccatctggt gccgccactg 780

accgaaggtg aggggatttt gattgccgat ctggacatgg ccctgatcac caaacgcaaa 840

cgcatgatgg attctgtcgg ccactatgcc cgaccggaat tactcagcct gcgcctcgat 900

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gatgcagaac gtaccgtcta cgcgccagca gctgatcact ga 1002

<210>184

<211>333

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>184

Met Ala Glu Ser Arg Ile Ile Arg Ala Ala Ala Ala Gln Ile Ala Pro

1 5 10 15

Asp Leu His Glu Ala Ser Lys Thr Leu Ala Arg Val Leu Asp Ala Ile

20 25 30

Asp Gln Ala Ala Ala Gln Gly Ala Glu Ile Ile Val Phe Pro Glu Thr

35 40 45

Phe Val Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Ile Thr Pro Ala Met Thr

50 55 60

Ala Gly Ala Ala His Leu Lys Leu Tyr Asp Gln Ala Val Val Val Pro

65 70 75 80

Gly Pro Ile Thr His Ala Val Gly Glu Arg Ala Arg Leu Arg Asn Ile

85 90 95

Val Val Val Leu Gly Val Asn Glu Arg Asp His Gly Thr Leu Tyr Asn

100 105 110

Thr Gln Leu Val Phe Asp Ala Ser Gly Glu Leu Val Leu Lys Arg Arg

115 120 125

Lys Ile Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp

130 135 140

Gly Ala Gly Leu Lys Val Val Asp Ser Ala Val Gly Arg Ile Gly Ala

145 150 155 160

Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ser Leu Met

165 170 175

Thr Gln His Glu Glu Ile His Cys Ser Gln Phe Pro Gly Ser Leu Val

180 185 190

Gly Pro Ile Phe Ala Glu Gln Met Asp Val Thr Ile Arg His His Ala

195 200 205

Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Ile Asn Ala Thr Gly Trp Leu Thr Glu

210 215 220

Glu Gln Ile Asn Glu Leu Thr Ser Asp Pro Ala Leu Gln Lys Gly Leu

225 230 235 240

Arg Gly Gly Cys Asn Thr Ala Ile Ile Ser Pro Glu Gly Arg His Leu

245 250 255

Val Pro Pro Leu Thr Glu Gly Glu Gly Ile Leu Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Met Ala Leu Ile Thr Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His

275 280 285

Tyr Ala Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Arg Leu Asp Ala Thr Pro Ala

290 295 300

Arg Tyr Val Val Ala Arg Asp Asn Glu Ser Glu Thr Gly Gly Gly Asn

305 310 315 320

Asp Ala Glu Arg Thr Val Tyr Ala Pro Ala Ala Asp His

325 330

<210>185

<211>1017

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>185

atgggcattg aacatccgaa atacaaggtc gcggtggtgc aggcggcccc cgcctggctc 60

gatctcgacg gctcggtcga taagtcgatc gcgctgatca aggaggcggc cgagaagggg 120

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accgtctatg gcgaaggcga cggcagcgat cttgccgtgc atgcgcgcgc cgacatcggc 480

cggatcggcg cgctctgctg ctgggagcat ctgcagccac tgtcgaaata cgcgatgtac 540

gcccagaacg aacaggtcca tgtcgcagcc tggcccagct tctcgctgta cgaccccttc 600

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tcctgcttcg tgctcgcgcc gtgcgcgacg gtgtcgcagg cgatgatcga cgagctctgc 720

gaccggcccg acaagaacgc gctgctgcac gtcggcggcg gctttgccgc gatctatggc 780

cccgacggca gccagatcgg cgacaagctg gcgccggacc aggaggggct gctgatcgcc 840

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tcgcgtcccg acgtgacgcg gttgctgctc aacaagaagc gataccagcg cgtcgagcag 960

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<210>186

<211>338

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>186

Met Gly Ile Glu His Pro Lys Tyr Lys Val Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ala Trp Leu Asp Leu Asp Gly Ser Val Asp Lys Ser Ile Ala Leu

20 25 30

Ile Lys Glu Ala Ala Glu Lys Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Ala Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp His Ile Trp Met Asp Ser Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ser Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Glu Arg Leu Arg Asp Ala Val Lys Lys

85 90 95

Ala Lys Leu Thr Ala Val Phe Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Leu Ala Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

115 120 125

Lys Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Tyr Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Ala Arg Ala Asp Ile Gly

145 150 155 160

Arg Ile Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys

165 170 175

Tyr Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Val Ala Ala Trp Pro

180 185 190

Ser Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala Pro Ala Leu Gly Ala Glu Val

195 200 205

Asn Asn Ala Ala Ser Arg Val Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val

210 215 220

Leu Ala Pro Cys Ala Thr Val Ser Gln Ala Met Ile Asp Glu Leu Cys

225 230 235 240

Asp Arg Pro Asp Lys Asn Ala Leu Leu His Val Gly Gly Gly Phe Ala

245 250 255

Ala Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ser Gln Ile Gly Asp Lys Leu Ala Pro

260 265 270

Asp Gln Glu Gly Leu Leu Ile Ala Glu Ile Asp Leu Gly Ala Ile Gly

275 280 285

Val Ala Lys Asn Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp

290 295 300

Val Thr Arg Leu Leu Leu Asn Lys Lys Arg Tyr Gln Arg Val Glu Gln

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Phe Ala Leu Pro Val Asp Thr Val Glu Pro Ala Asp Ile Gly Ala Ala

325 330 335

Ala Ser

<210>187

<211>1059

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>187

atgggcatca atcatcccaa gtacaaagtg gccgtcgtgc aagcggcacc tgtctggctc 60

gacctggatg gaacagtcga caagtgcatt cggctgatag gcgaggccgc tgagaaggga 120

tgcaagctca ttgcatttcc cgagacgttc atcccggggt acccctggca catctggatg 180

ggagctccgg cctggacgat cgggcgcgga ttcgtgcagc gatacttcga caattcgctt 240

gcgtacgaca gtccgcaggc aaacaagctt cgcgccgcgg tgaagcgcgc cggagtgacg 300

gcagttctcg gcttgtcgga gcgccgcgga ggctccctgt acatcgccca gtggctcatc 360

ggacctgatg gcgagaccat cgctcaacgg cgaaagctgc gccccaccca tgcggagcgc 420

accgtcttcg gcgagggcga tggcagcgat ttggcggtgc acagccgccc cgacatcggc 480

cgactgggtg ccctttgctg ctgggaacat ctccagcctt tgaccaagta cgcgatgtac 540

gcgcaagacg agcaagtgca cgtcgctgca tggccgagct tctcgatgta cgagcctttc 600

gcgcacgccc tggggtggga gacgaacaac gcggtgagca aggtgtacgc ggtcgaaggt 660

tcgtgctacg tcctggcccc ctgcgccatc atctctcagg cgatggtgga cgaactcgtc 720

gacagcgagg acaagaagcc gctggttcat gccggcgggg ggcatgcggt gatctatggt 780

cccgatggca ccctgcttac tcccaagctt gcagaagacg aggagggcct actgatcgcg 840

gagatcgatc tgggggcaat cggggtcgcc aagaacgcgg cagaccccgc cggccactac 900

tcgcggcccg atgtcacccg cctgctcttc aacaaccggc cggccaagcg cgtggagacg 960

atgctgctcc cggtcgacgc ggcagaagtc gtggagccgg cggacggagc gctcaatgcg 1020

tccgagggac gccagcgaca gttcaagctg cccgcctag 1059

<210>188

<211>352

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>188

Met Gly Ile Asn His Pro Lys Tyr Lys Val Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Val Trp Leu Asp Leu Asp Gly Thr Val Asp Lys Cys Ile Arg Leu

20 25 30

Ile Gly Glu Ala Ala Glu Lys Gly Cys Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp His Ile Trp Met Gly Ala Pro Ala

50 55 60

Trp Thr Ile Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ala Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Asn Lys Leu Arg Ala Ala Val Lys Arg

85 90 95

Ala Gly Val Thr Ala Val Leu Gly Leu Ser Glu Arg Arg Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

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Gln Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Ser Arg Pro Asp Ile Gly

145 150 155 160

Arg Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Thr Lys

165 170 175

Tyr Ala Met Tyr Ala Gln Asp Glu Gln Val His Val Ala Ala Trp Pro

180 185 190

Ser Phe Ser Met Tyr Glu Pro Phe Ala His Ala Leu Gly Trp Glu Thr

195 200 205

Asn Asn Ala Val Ser Lys Val Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Tyr Val

210 215 220

Leu Ala Pro Cys Ala Ile Ile Ser Gln Ala Met Val Asp Glu Leu Val

225 230 235 240

Asp Ser Glu Asp Lys Lys Pro Leu Val His Ala Gly Gly Gly His Ala

245 250 255

Val Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Thr Leu Leu Thr Pro Lys Leu Ala Glu

260 265 270

Asp Glu Glu Gly Leu Leu Ile Ala Glu Ile Asp Leu Gly Ala Ile Gly

275 280 285

Val Ala Lys Asn Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp

290 295 300

Val Thr Arg Leu Leu Phe Asn Asn Arg Pro Ala Lys Arg Val Glu Thr

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Met Leu Leu Pro Val Asp Ala Ala Glu Val Val Glu Pro Ala Asp Gly

325 330 335

Ala Leu Asn Ala Ser Glu Gly Arg Gln Arg Gln Phe Lys Leu Pro Ala

340 345 350

<210>189

<211>1005

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>189

atgcaagaca cgaaattcaa agttgcagtc gtccaggccg cgccggtatt catggatgcg 60

ccagcctccg tggccaaggc gatcggtttc atccaggagg cgggcgcagc cggggcgaag 120

ctgctggcgt tcccggaggt ctggattccg ggctaccctt ggtggctttg gctcgggacg 180

ccggcgtggg gaatgcagtt tgtgccgcgc tatcacgcca attcgctgcg tgctgatgga 240

cccgaaatcc tcgctctttg tgcggccgcc gccgaagcga agatcaacgt cgtgatgggc 300

ttctccgaaa tcgacggagg aacgctctac ctaagtcagg ttttcatcag cgatgcgggc 360

aagatcatct tcaagcgccg aaagctcaag ccgacccacg tcgaacgtac gctatttggt 420

gaaggagatg ggtctgattt ccgagtcgtc gacagcagcg tcgggcgcct cggagccctg 480

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attcatgtgg cgtcgtggcc atctttcacg ctctatcgcg gcaaagccta cgctttgggt 600

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catgccacgg caattaccgg tcaggatatg ttcgacatgc tttgcgacac tccggaaagg 720

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<210>190

<211>334

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>190

Met Gln Asp Thr Lys Phe Lys Val Ala Val Val Gln Ala Ala Pro Val

1 5 10 15

Phe Met Asp Ala Pro Ala Ser Val Ala Lys Ala Ile Gly Phe Ile Gln

20 25 30

Glu Ala Gly Ala Ala Gly Ala Lys Leu Leu Ala Phe Pro Glu Val Trp

35 40 45

Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Trp Leu Trp Leu Gly Thr Pro Ala Trp Gly

50 55 60

Met Gln Phe Val Pro Arg Tyr His Ala Asn Ser Leu Arg Ala Asp Gly

65 70 75 80

Pro Glu Ile Leu Ala Leu Cys Ala Ala Ala Ala Glu Ala Lys Ile Asn

85 90 95

Val Val Met Gly Phe Ser Glu Ile Asp Gly Gly Thr Leu Tyr Leu Ser

100 105 110

Gln Val Phe Ile Ser Asp Ala Gly Lys Ile Ile Phe Lys Arg Arg Lys

115 120 125

Leu Lys Pro Thr His Val Glu Arg Thr Leu Phe Gly Glu Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Asp Phe Arg Val Val Asp Ser Ser Val Gly Arg Leu Gly Ala Leu

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Cys Cys Ala Glu His Ile Gln Pro Leu Ser Lys Tyr Ala Met Tyr Ala

165 170 175

Met Asn Glu Gln Ile His Val Ala Ser Trp Pro Ser Phe Thr Leu Tyr

180 185 190

Arg Gly Lys Ala Tyr Ala Leu Gly His Glu Val Asn Leu Ala Ala Ser

195 200 205

Gln Ile Tyr Ala Leu Glu Gly Gly Cys Phe Val Leu His Ala Thr Ala

210 215 220

Ile Thr Gly Gln Asp Met Phe Asp Met Leu Cys Asp Thr Pro Glu Arg

225 230 235 240

Ala Asp Leu Leu Asn Ala Glu Gly Ala Lys Pro Gly Gly Gly Tyr Ser

245 250 255

Met Ile Phe Gly Pro Asp Gly Gln Pro Met Cys Glu His Leu Pro Gln

260 265 270

Asp Lys Glu Gly Ile Leu Tyr Ala Gly Val Asp Leu Ser Met Ile Ala

275 280 285

Ile Ala Lys Ala Ala Tyr Asp Pro Thr Gly His Tyr Ala Arg Gly Asp

290 295 300

Val Val Arg Leu Met Val Asn Arg Ser Pro Arg Arg Thr Ser Val Ser

305 310 315 320

Phe Ser Glu Asp Glu Asn Ala Ala Val Thr Phe Thr Glu Thr

325 330

<210>191

<211>945

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>191

atgaaaaagt tagctgtggt tcaacgtgcg tcaggatttt tagataagca gcagagcatc 60

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<211>314

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>192

Met Lys Lys Leu Ala Val Val Gln Arg Ala Ser Gly Phe Leu Asp Lys

1 5 10 15

Gln Gln Ser Ile Ala Leu Ala Val Glu Ser Ile Gln Ser Ala Ala Asn

20 25 30

Asn Gly Ala Glu Leu Val Val Phe Thr Glu Ala Phe Ile Pro Gly Tyr

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Pro Val Trp Leu Trp Arg Leu Arg Pro Gly Lys Asp Trp Gly Thr Thr

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Asp Ser Leu Tyr Gln Arg Leu Ile Ser Asn Ala Val Asp Leu Ser Ser

65 70 75 80

Ser Asp Leu Asp Pro Ile Tyr Glu Ala Ala Lys Arg His His Val Thr

85 90 95

Val Val Cys Gly Ile Asn Glu Arg Asp Ser Ser Val Ser Arg Thr Thr

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Leu Tyr Asn Thr Tyr Ile Thr Val Cys His Glu Gly Asn Leu Ile Asn

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Val His Arg Lys Leu Met Pro Thr Asn Pro Glu Arg Met Val Trp Gly

130 135 140

Phe Gly Asp Ala Thr Gly Leu Arg Val Val Asp Thr Pro Val Gly Arg

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Ile Gly Ser Leu Val Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr

165 170 175

Ala Leu Tyr Ala Gln Gly Val Glu Ile Tyr Ile Ala Pro Thr Tyr Asp

180 185 190

Ser Gly Ser Asp Trp Thr Glu Ser Leu Arg His Ile Ala Arg Glu Gly

195 200 205

Arg Cys Tyr Val Val Gly Ser Gly Asn Leu Leu Arg Ala Ser Asp Leu

210 215 220

Pro Asp Asp Phe Pro Glu Lys Glu Thr Leu Tyr Pro Asp Lys Asp Glu

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Trp Ile Asn Gly Gly Asp Ser Thr Val Ile Ala Pro Gly Gly Glu Thr

245 250 255

Leu Val Ala Pro Leu His Ala Glu Glu Gly Ile Leu Tyr Cys Asp Ile

260 265 270

Asp Thr Asp Lys Val Ala Ala Ala Arg Arg Ser Phe Asp Val Ala Gly

275 280 285

His Tyr Ser Arg Pro Asp Ile Phe Thr Leu Asn Val Asn Arg Ala Pro

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<211>966

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>193

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gtttaa 966

<210>194

<211>321

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>194

Met Ser Asn Glu Asn His Asn Gln Thr Phe Lys Val Ala Ala Val Gln

1 5 10 15

Ala Thr Pro Val Phe Leu Asp Arg Glu Ala Thr Ile Asp Lys Ala Cys

20 25 30

Glu Leu Ile Ala Ala Ala Gly Asn Glu Gly Ala Arg Leu Val Val Phe

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Pro Glu Ala Phe Ile Pro Ser Tyr Pro Asp Trp Val Trp Ala Ile Pro

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Pro Gly Glu Glu Gly Val Leu Asn Glu Leu Tyr Ala Glu Leu Leu Ser

65 70 75 80

Asn Ser Val Thr Ile Pro Ser Asp Val Thr Asp Arg Leu Cys Arg Ala

85 90 95

Ala Arg Leu Ala Asn Ala Tyr Val Val Met Gly Met Ser Glu Arg Asn

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Ala Glu Ala Ser Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Asp

115 120 125

Ala Gln Gly Glu Ile Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly

130 135 140

Gly Glu Arg Leu Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Gln Val

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Tyr Asp Thr Pro Leu Gly Lys Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn

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Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr Thr Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile

180 185 190

Tyr Val Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Gln Pro Trp Leu Ser Thr Leu

195 200 205

Arg His Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Ile Gly Cys Cys Ile

210 215 220

Val Met Arg Lys Asp Asp Ile Pro Asp Arg Tyr Pro Met Lys Gln Lys

225 230 235 240

Phe Tyr Ala Glu Ala Asp Glu Trp Ile Asn Ile Gly Asp Ser Ala Ile

245 250 255

Val Asn Pro Glu Gly Gln Phe Ser Ala Gly Pro Val Arg Lys Gln Glu

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Glu Ile Leu Tyr Ala Glu Ile Asp Pro Arg Met Val Gln Gly Pro Lys

275 280 285

Trp Met Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Gln

290 295 300

Leu Thr Val His Thr Asp Ala Arg Gln Met Ile Arg Leu Glu His Asp

305 310 315 320

Val

<210>195

<211>993

<212>DNA

<213>未知

<220>

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<400>195

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atccattcgg cgatgtaccc tggctcggcc tttggcgagg gcttcgccca gcgtatggaa 600

atcaacatcc gccagcatgc gctcgagtcc gccgctttcg tcgtcaacgc aacagcgtgg 660

ctggacgccg accagcaggc gcaaatcatg aaggacaccg gttgtggaat cggtccgatc 720

acgggcggct gcttcaccac gatcgtctct cctgacggca tgctgatggc cgagccgctt 780

cgctcgggtg aaggcgaagt gatcgtcgat ctcgacttca cgcagatcga ccgccgcaag 840

atgctgatgg actcggccgg ccactacaac cgccctgaac tgctgagtct gatgatcgac 900

cgtacgccga ccgcgcatgt tcacgaacgc gcttcgcacc cgatgatcgt caacgaccag 960

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<210>196

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>196

Met Lys Val Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Phe Ser Pro Val Leu Tyr

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Ser Arg Glu Ala Thr Val Ala Lys Val Val Gln Lys Ile His Glu Leu

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Gly Gln Lys Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

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Ala Ala Thr Asp Ala Ile Gly Glu Ala Ala Arg Lys Ala Gly Met Val

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Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Leu Tyr Asn Ala

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Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys

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Ile Thr Pro Thr His Phe Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Ala Val Gly Arg Val Gly Gln Leu

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Ala Cys Phe Glu His Asn Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Ile Ala

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Glu Gly Phe Ala Gln Arg Met Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala Leu

195 200 205

Glu Ser Ala Ala Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Met Lys Asp Thr Gly Cys Gly Ile Gly Pro Ile

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Thr Gly Gly Cys Phe Thr Thr Ile Val Ser Pro Asp Gly Met Leu Met

245 250 255

Ala Glu Pro Leu Arg Ser Gly Glu Gly Glu Val Ile Val Asp Leu Asp

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Phe Thr Gln Ile Asp Arg Arg Lys Met Leu Met Asp Ser Ala Gly His

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Tyr Asn Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Met Ile Asp Arg Thr Pro Thr

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Ala His Val His Glu Arg Ala Ser His Pro Met Ile Val Asn Asp Gln

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Gly Ser Asp Asp Leu Arg Thr Gln Ala Ala

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<210>197

<211>1017

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>197

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gccccggcgc tcggcgcgga ggtgaacaat gcggcctccc gggtctatgc ggtcgaaggc 660

tcctgcttcg tgctggcgcc gtgcgcgacc gtctcgcagg ccatgatcga tgagctgtgc 720

gaccggcccg acaagcacgc gctgctccat gccggcggtg gctttgccgc gatctacggg 780

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<211>338

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>198

Met Gly Ile Glu His Pro Lys Tyr Arg Val Ala Ala Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ala Trp Leu Asp Leu Asp Arg Ser Ile Asp Lys Ala Ile Ala Leu

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Ile Glu Glu Ala Ala Ala Asn Gly Ala Arg Leu Ile Ala Phe Pro Glu

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Val Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp His Ile Trp Leu Asp Ser Pro Ala

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Trp Ala Ile Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ala Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Glu Arg Leu Arg Ala Ala Val Arg Lys

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Ala Arg Leu Thr Ala Val Ile Gly Leu Ser Glu Arg Ser Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Leu Val Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

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Lys Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Tyr Gly

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Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Asp Arg Pro Asp Ile Gly

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Arg Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys

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Tyr Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Val Ala Ser Trp Pro

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Ser Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala Pro Ala Leu Gly Ala Glu Val

195 200 205

Asn Asn Ala Ala Ser Arg Val Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val

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Leu Ala Pro Cys Ala Thr Val Ser Gln Ala Met Ile Asp Glu Leu Cys

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Asp Arg Pro Asp Lys His Ala Leu Leu His Ala Gly Gly Gly Phe Ala

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Ala Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ser Ser Leu Ala Glu Lys Leu Ala Pro

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Asp Gln Glu Gly Leu Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Gly Ala Ile Gly

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Val Ala Lys Asn Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp

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Val Thr Arg Leu Leu Leu Asn Asn Lys Pro Tyr Lys Arg Val Glu His

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Phe Ala Leu Pro Gly Asp Thr Val Ala Pro Ala Asp Val Asp Ala Ala

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Ala Ser

<210>199

<211>993

<212>DNA

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<220>

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<400>199

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tatgtcgtca tgggcgtgac cgagcgggac acggaggcga gcggagccag tttgttcaac 360

accttgattt atttcggtcc gaccggggaa attttgggca aacaccggaa gctggttccc 420

accgggggcg aacggatcgt ctgggcccag ggggacggaa gcaccctgga ggtctacgat 480

acgcccctgg gaaaactggg cgggctgatc tgctgggaaa actacatgcc cctggcccgg 540

tacgccatgt acgcctgggg aacccagctt tacgtggccg ccacctggga ccgaggcgaa 600

ccctggcttt cgacgcttcg gcatatcgcc aaggaagggc gggtgtatgt catcgggtgc 660

tgcatcgcca tgcggaaagg ggatatcccg gatcggttcg aacacaaggg gctctacgcc 720

cccgaccggg actggatcaa ccccggcgac agcgcgatcg tcaaccccca gggggagatg 780

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atgcgcgggc ccaaatggat gctcgatgtg gccggccatt acgcgcggcc cgatgtcttc 900

gagctcaccg tccgccggga accgcggccg atgatccgcg tggcgggagg cgcgggcggg 960

accgaaccca aagagaagaa gaccgccggc tga 993

<210>200

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>200

Met Ser Asn Ala Leu Lys Pro Phe Lys Ile Ala Ala Val Gln Ala Thr

1 5 10 15

Pro Val Phe Leu Asn Arg Glu Ala Thr Ala Glu Lys Ala Ala Ala Leu

20 25 30

Ile Arg Glu Ala Gly Ser Ala Gly Ala Lys Leu Ile Val Phe Pro Glu

35 40 45

Ser Phe Ile Pro Ala Tyr Pro Asp Trp Val Trp Val Val Pro Ser Gly

50 55 60

Arg Asp Arg Leu Leu Ser Gly Leu Tyr Gly Glu Met Leu Glu Asn Ala

65 70 75 80

Val Glu Ile Pro Gly Pro Ala Thr Gly His Ile Gly Arg Ala Ala Lys

85 90 95

Glu Ser Gly Ala Tyr Val Val Met Gly Val Thr Glu Arg Asp Thr Glu

100 105 110

Ala Ser Gly Ala Ser Leu Phe Asn Thr Leu Ile Tyr Phe Gly Pro Thr

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Gly Glu Ile Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly Gly Glu

130 135 140

Arg Ile Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Glu Val Tyr Asp

145 150 155 160

Thr Pro Leu Gly Lys Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met

165 170 175

Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Leu Tyr Val

180 185 190

Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Glu Pro Trp Leu Ser Thr Leu Arg His

195 200 205

Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Ile Gly Cys Cys Ile Ala Met

210 215 220

Arg Lys Gly Asp Ile Pro Asp Arg Phe Glu His Lys Gly Leu Tyr Ala

225 230 235 240

Pro Asp Arg Asp Trp Ile Asn Pro Gly Asp Ser Ala Ile Val Asn Pro

245 250 255

Gln Gly Glu Met Ile Ala Gly Pro Ala Ser Asn Lys Glu Glu Ile Leu

260 265 270

Tyr Ala Glu Val Asp Pro Gln Met Met Arg Gly Pro Lys Trp Met Leu

275 280 285

Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Glu Leu Thr Val

290 295 300

Arg Arg Glu Pro Arg Pro Met Ile Arg Val Ala Gly Gly Ala Gly Gly

305 310 315 320

Thr Glu Pro Lys Glu Lys Lys Thr Ala Gly

325 330

<210>201

<211>930

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>201

atgaccacga agagcatccg catcgcggcc gtacaggcgg ctcccgcgtt tctcgacctg 60

gctggtacgc tggaccggct cgaggcctgg gcccgcaagg ccgccgccac cggtgcccgc 120

gtcatcgcgt tccccgagac ctggctgccg ggctacccgg cgtggatcga ctcgtcgccg 180

gaggccgcga tctggggcca tcccggctcg cgcgacctgc accagcgcct gatggagaat 240

gccgtcgagg tcccgggccc cgcgaccgcg cgcatcgcga agctcgccgg cgagctcggc 300

gtgacgatcg tggtcggcgc gcacgagcgg gcggggaaca ccctctacaa cacggcgctg 360

acgttcgggc ccgagggcag gctgctcaat caccaccgga agctggtgcc gacctacagc 420

gaacggctgc tgtggggcta cggcgacggc gctggactgg tggcgccggc ggtggacggt 480

gtgaaggtcg gggcgctggt gtgctgggag cactggatgc cgctcacccg ccaggcgatg 540

cacgacgtcg gcgagcacgt gcacgtcgcc ctgtggcccg gcgtccacga gatgcaccag 600

gtggcctcgc ggcactatgc gttcgagggc cgctgtttcg tgatcgcggt cgggagcatc 660

ctgcgcgtgg accagatgcc gaagcagctg ccgccgctgg agaagtacgc gaagagcgcc 720

aaggggctga tgatcgcggg cggcagcgcc atcatcgcgc cgaacggccg ctacgtcgcg 780

gcgccggtgt acgacgagga gacgatcgtc accgccgact gcgacctcgg cgagatcccg 840

cgcgaggcgc agacgctcga tgtctcgggc cactacagcc ggccggacgt gttcagcttc 900

ggggtggtca gacaccggcc gcgtgcgtaa 930

<210>202

<211>309

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>202

Met Thr Thr Lys Ser Ile Arg Ile Ala Ala Val Gln Ala Ala Pro Ala

1 5 10 15

Phe Leu Asp Leu Ala Gly Thr Leu Asp Arg Leu Glu Ala Trp Ala Arg

20 25 30

Lys Ala Ala Ala Thr Gly Ala Arg Val Ile Ala Phe Pro Glu Thr Trp

35 40 45

Leu Pro Gly Tyr Pro Ala Trp Ile Asp Ser Ser Pro Glu Ala Ala Ile

50 55 60

Trp Gly His Pro Gly Ser Arg Asp Leu His Gln Arg Leu Met Glu Asn

65 70 75 80

Ala Val Glu Val Pro Gly Pro Ala Thr Ala Arg Ile Ala Lys Leu Ala

85 90 95

Gly Glu Leu Gly Val Thr Ile Val Val Gly Ala His Glu Arg Ala Gly

100 105 110

Asn Thr Leu Tyr Asn Thr Ala Leu Thr Phe Gly Pro Glu Gly Arg Leu

115 120 125

Leu Asn His His Arg Lys Leu Val Pro Thr Tyr Ser Glu Arg Leu Leu

130 135 140

Trp Gly Tyr Gly Asp Gly Ala Gly Leu Val Ala Pro Ala Val Asp Gly

145 150 155 160

Val Lys Val Gly Ala Leu Val Cys Trp Glu His Trp Met Pro Leu Thr

165 170 175

Arg Gln Ala Met His Asp Val Gly Glu His Val His Val Ala Leu Trp

180 185 190

Pro Gly Val His Glu Met His Gln Val Ala Ser Arg His Tyr Ala Phe

195 200 205

Glu Gly Arg Cys Phe Val Ile Ala Val Gly Ser Ile Leu Arg Val Asp

210 215 220

Gln Met Pro Lys Gln Leu Pro Pro Leu Glu Lys Tyr Ala Lys Ser Ala

225 230 235 240

Lys Gly Leu Met Ile Ala Gly Gly Ser Ala Ile Ile Ala Pro Asn Gly

245 250 255

Arg Tyr Val Ala Ala Pro Val Tyr Asp Glu Glu Thr Ile Val Thr Ala

260 265 270

Asp Cys Asp Leu Gly Glu Ile Pro Arg Glu Ala Gln Thr Leu Asp Val

275 280 285

Ser Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Phe Ser Phe Gly Val Val Arg

290 295 300

His Arg Pro Arg Ala

305

<210>203

<211>966

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>203

atgtcaagct tacccacatc cgcgttcacc gtcgccgccg cgcaagcgtc gccagtgttc 60

ctcgaccgcg acgcgacgct gcagaaggct tgcgggctga tcgccgacgc cgggcgcgcg 120

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tcgctggcta ttccgagcga cgcgaccgat cggctatgtc gcgcggcgca ggccgcgcat 300

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aacacgctgc tgtatatcga cgcggcggga acgatcctgg gtaaacaccg caagcttgtg 420

ccgaccggcg gggagcgcct ggtctgggcg cagggcgacg gcagcacgct cgatgtgtac 480

gacaccgcgc tcggcaagct cggcggcctg atctgttggg aaaactacat gccgctggca 540

cgctacgcgc tgtacgcctg gggtgtgcaa atctatgtcg cggccacctg ggatcgcggc 600

gagccctggc tttctactct gcgacatatc gccaaggaag gccgtgtcta cgtgatcggc 660

tgtggcatgg cgctgcgcag agatgatatt cccgatcgct tcgctttcaa gcagcgcttc 720

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gagtttattg ccggacctgt gcgcgaacgc gaggagattc tgtacgcgga ggtcgacccg 840

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acctga 966

<210>204

<211>321

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>204

Met Ser Ser Leu Pro Thr Ser Ala Phe Thr Val Ala Ala Ala Gln Ala

1 5 10 15

Ser Pro Val Phe Leu Asp Arg Asp Ala Thr Leu Gln Lys Ala Cys Gly

20 25 30

Leu Ile Ala Asp Ala Gly Arg Ala Gly Ala Arg Leu Ile Val Phe Pro

35 40 45

Glu Ala Phe Ile Pro Ala Tyr Pro Asp Trp Val Trp Ala Val Pro Ala

50 55 60

Gly Glu Glu Gly Met Leu Ser Glu Leu Tyr Ala Glu Leu Val Ala Asn

65 70 75 80

Ser Leu Ala Ile Pro Ser Asp Ala Thr Asp Arg Leu Cys Arg Ala Ala

85 90 95

Gln Ala Ala His Ile Asn Val Val Val Gly Leu Ser Glu Arg Asn Val

100 105 110

Glu Ala Ser Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Asp Ala

115 120 125

Ala Gly Thr Ile Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly Gly

130 135 140

Glu Arg Leu Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Asp Val Tyr

145 150 155 160

Asp Thr Ala Leu Gly Lys Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr

165 170 175

Met Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Tyr Ala Trp Gly Val Gln Ile Tyr

180 185 190

Val Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Glu Pro Trp Leu Ser Thr Leu Arg

195 200 205

His Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Ile Gly Cys Gly Met Ala

210 215 220

Leu Arg Arg Asp Asp Ile Pro Asp Arg Phe Ala Phe Lys Gln Arg Phe

225 230 235 240

Tyr Ala Gln Ala Gly Glu Trp Ile Asn Val Gly Asp Ser Ala Ile Val

245 250 255

Asn Pro Ser Gly Glu Phe Ile Ala Gly Pro Val Arg Glu Arg Glu Glu

260 265 270

Ile Leu Tyr Ala Glu Val Asp Pro Glu Gln Met Ser Gly Pro Lys Trp

275 280 285

Met Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Gly Arg Pro Asp Val Phe Arg Leu

290 295 300

Ser Val Asn Arg Ala Pro His Gln Met Ile Gln Thr Glu Asn Arg Glu

305 310 315 320

Thr

<210>205

<211>969

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>205

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cagggcgatg gttcgggatt gcgcgccgcg gacaccaagg ttggccgcat cggccagttg 480

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ctcgatgccg accaacaggc gcagatcatg aaggacaccg gttgctcgat cggcccgatc 720

tccggcggct gcttcacgac catcgtcacg cctgagggca tgctgattgg cgagccgctc 780

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atcctctga 969

<210>206

<211>322

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>206

Met Thr Thr Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Ala Thr Val Asp Lys Val Val Arg Lys Ile Arg Glu Leu

20 25 30

Gly Gln Lys Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ala Ala Val Gln Thr Gly Ile Glu Leu Leu Ser

50 55 60

Gly Lys Glu His Met Arg Leu Leu Glu Gln Ala Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Pro Ala Thr Asp Ala Ile Ala Gln Ala Ala Arg Glu Ala Asn Met Val

85 90 95

Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Thr

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Val Gln Arg Arg Arg Lys

115 120 125

Ile Thr Pro Thr His Phe Glu Arg Met Val Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Ala Asp Thr Lys Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu

145 150 155 160

Ala Cys Phe Glu His Asn Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Met Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Tyr Pro Gly Ser Ala Phe Gly

180 185 190

Glu Gly Phe Ala Gln Arg Met Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala Leu

195 200 205

Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Met Lys Asp Thr Gly Cys Ser Ile Gly Pro Ile

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Phe Thr Thr Ile Val Thr Pro Glu Gly Met Leu Ile

245 250 255

Gly Glu Pro Leu Arg Glu Gly Glu Gly Glu Ile Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Phe Ser Met Ile Asp Arg Arg Lys Leu Leu Met Asp Ser Val Gly His

275 280 285

Tyr Asn Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro Ala

290 295 300

Ala Asn Phe His Glu Arg Thr Ala Ser Gln Ala Asn Ala Gly Val Glu

305 310 315 320

Ile Leu

<210>207

<211>966

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>207

atgtcaaacg agaacaacaa cgctacattc aaagttgccg cagtacaggc tacacctgtt 60

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tacgatactc cactgggaaa actcggcggt ttaatttgct gggagaatta tatgccgctg 540

gcccgctata ccatgtatgc ctggggcaca caaatctatg tcgccgctac gtgggatcgc 600

gggcaaccct ggctctccac tttgcggcat atcgccaaag aaggcagggt gtacgtgatt 660

ggttgttgta tcgcgatgcg caaagacgat atccctgatc gttacgcaat gaagcagaag 720

ttttacgcgg aggcagatga gtggatcaat ataggtgaca gcgcgattgt caatcctgaa 780

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tcttaa 966

<210>208

<211>321

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>208

Met Ser Asn Glu Asn Asn Asn Ala Thr Phe Lys Val Ala Ala Val Gln

1 5 10 15

Ala Thr Pro Val Phe Leu Asp Arg Glu Ala Thr Leu Asp Lys Ala Cys

20 25 30

Asp Leu Ile Ala Ala Ala Gly Gly Glu Gly Ala Arg Leu Val Val Phe

35 40 45

Pro Glu Ala Phe Ile Pro Ala Tyr Pro Asp Trp Val Trp Ala Ile Pro

50 55 60

Pro Gly Glu Glu Gly Val Leu Asn Glu Leu Tyr Ala Glu Leu Leu Ser

65 70 75 80

Asn Ser Val Thr Ile Pro Ser Asp Ala Thr Asp Arg Leu Cys Arg Ala

85 90 95

Ala Arg Leu Ala Asn Ala Tyr Val Val Met Gly Ile Ser Glu Arg Asn

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Val Glu Ala Ser Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Asp

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Ala Gln Gly Glu Ile Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly

130 135 140

Gly Glu Arg Leu Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Gln Val

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Tyr Asp Thr Pro Leu Gly Lys Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn

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Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr Thr Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile

180 185 190

Tyr Val Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Gln Pro Trp Leu Ser Thr Leu

195 200 205

Arg His Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Ile Gly Cys Cys Ile

210 215 220

Ala Met Arg Lys Asp Asp Ile Pro Asp Arg Tyr Ala Met Lys Gln Lys

225 230 235 240

Phe Tyr Ala Glu Ala Asp Glu Trp Ile Asn Ile Gly Asp Ser Ala Ile

245 250 255

Val Asn Pro Glu Gly Gln Phe Ile Ala Gly Pro Val Arg Lys Gln Glu

260 265 270

Glu Ile Leu Tyr Ala Glu Ile Asp Pro Arg Met Val Gln Gly Pro Lys

275 280 285

Trp Met Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Gln

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Leu Thr Val His Thr Asp Val Arg Gln Met Ile Arg Met Glu His Asp

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Ser

<210>209

<211>993

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>209

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cgttcgggcg agggtgaggt catcgtggat ctcgacttca cgctgatcga ccgacgcaag 840

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<210>210

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>210

Met Lys Val Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Ala Thr Val Glu Lys Val Val Lys Lys Ile His Glu Leu

20 25 30

Gly Gln Leu Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Ala Val Gln Thr Gly Ile Glu Leu Leu Ser

50 55 60

Gly Thr Glu His Leu Arg Leu Leu Asp Gln Ala Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Pro Ala Thr Asp Ala Ile Gly Glu Ala Ala Arg Lys Ala Gly Met Val

85 90 95

Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Leu Tyr Asn Thr

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys

115 120 125

Ile Thr Pro Thr His Phe Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Lys Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu

145 150 155 160

Ala Cys Phe Glu His Asn Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Ile Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Tyr Pro Gly Ser Ala Phe Gly

180 185 190

Glu Gly Phe Ala Gln Arg Met Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala Leu

195 200 205

Glu Ser Gly Ala Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Ile Lys Asp Thr Gly Cys Gly Ile Gly Pro Ile

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Phe Thr Thr Ile Val Ala Pro Asp Gly Met Leu Met

245 250 255

Ala Glu Pro Leu Arg Ser Gly Glu Gly Glu Val Ile Val Asp Leu Asp

260 265 270

Phe Thr Leu Ile Asp Arg Arg Lys Met Leu Met Asp Ser Ala Gly His

275 280 285

Tyr Asn Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Met Ile Asp Arg Thr Ala Thr

290 295 300

Ala His Val His Glu Arg Ala Ala His Pro Val Ser Gly Ala Glu Gln

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Gly Pro Glu Asp Leu Arg Thr Pro Ala Ala

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<210>211

<211>1062

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>211

atgggcgtcg cacatccgaa atacaaagtg gccgccgtgc aggcagcgcc cgcttttctc 60

gacctggacg cctcggtcga aaaggccgtc cgtttcatcg acgaagccgg cgccgccggc 120

gcccgcctca tcgcctttcc ggagacctgg atacccggtt acccctggtg gatctggcta 180

ggcgcgccgg cctgggctat catgcgcggc ttcgtctcgc gctatttcga caactcgctc 240

agctacgaca gcccgcaggc cgagaagctc cgcgccgccg ccaagcgcaa caagatggtg 300

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accgtgttcg gcgaaggcga cggctcgcat cttgcggtgc acgagcttga tgttggccgg 480

ctcggcgcgc tgtgctgctg ggaacacctg cagccgctgt ccaaatacgc catgtatgcg 540

cagaacgaac aggtgcatgt cgcggcctgg ccgagctttt cgctttacga tccgttcgcg 600

cacgcgctcg gcgcggaagt gaacaatgcg gcgagcaaaa tctatgcggt cgagggctcg 660

tgtttcgtca tcgcgccgtg cgcgaccgtt tcgcaggcga tgatcgacga actctgcgat 720

acgccggaga agcatcagtt cctgcatgcc ggcggcggct ttgccgtgat ttacggcccc 780

gacggcgccc cgctcgcggc gccgctgccg cccgacaagg aaggcttgct ctacgccgac 840

atcgatctcg ggatgatttc ggttgccaaa gcggcagccg atccggccgg gcattatgca 900

cgccccgacg tcacccggct tctgttcaac aatcggcctg ggtatcgggt cgagaccatg 960

gcgttgccga tcgatgcgga gaccaaggcg gaagcaccgg ctaagccgga acccaaggca 1020

ccgaacgtgg cgccgttcgc gccggtgcaa gcggccgagt ga 1062

<210>212

<211>353

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

Met Gly Val Ala His Pro Lys Tyr Lys Val Ala Ala Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ala Phe Leu Asp Leu Asp Ala Ser Val Glu Lys Ala Val Arg Phe

20 25 30

Ile Asp Glu Ala Gly Ala Ala Gly Ala Arg Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Trp Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Trp Ile Trp Leu Gly Ala Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Met Arg Gly Phe Val Ser Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ser Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Glu Lys Leu Arg Ala Ala Ala Lys Arg

85 90 95

Asn Lys Met Val Val Val Leu Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Ile Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

115 120 125

Lys Arg Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser His Leu Ala Val His Glu Leu Asp Val Gly Arg

145 150 155 160

Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys Tyr

165 170 175

Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Val Ala Ala Trp Pro Ser

180 185 190

Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala His Ala Leu Gly Ala Glu Val Asn

195 200 205

Asn Ala Ala Ser Lys Ile Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val Ile

210 215 220

Ala Pro Cys Ala Thr Val Ser Gln Ala Met Ile Asp Glu Leu Cys Asp

225 230 235 240

Thr Pro Glu Lys His Gln Phe Leu His Ala Gly Gly Gly Phe Ala Val

245 250 255

Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ala Pro Leu Ala Ala Pro Leu Pro Pro Asp

260 265 270

Lys Glu Gly Leu Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Gly Met Ile Ser Val

275 280 285

Ala Lys Ala Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val

290 295 300

Thr Arg Leu Leu Phe Asn Asn Arg Pro Gly Tyr Arg Val Glu Thr Met

305 310 315 320

Ala Leu Pro Ile Asp Ala Glu Thr Lys Ala Glu Ala Pro Ala Lys Pro

325 330 335

Glu Pro Lys Ala Pro Asn Val Ala Pro Phe Ala Pro Val Gln Ala Ala

340 345 350

Glu

<210>213

<211>993

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>213

atgagagttg ttaaagccgc tgctgtccaa ctgagtcccg tcctctatag tcgcgaggga 60

acggtcgaaa aggtcgtgcg gaagatccat gaacttgccg aagagggagt cgagttcgcc 120

acctttcctg agaccgtggt gccttactac ccgtactttt ccttcgttca gacgcccttg 180

gagcaaatct tcggaacaga gtatctgagg ctgctcgacc aggcagtcac cgtgccatcc 240

cctgccaccg acgcgatcgg cgaggcagcc aggttcgctg gagttgttgt ctcgatcggc 300

gtcaacgagc gagacggggg aactctatac aacactcagc ttctcttcga tgccgacggc 360

aggataattc agcggcgccg caagatcacg cccacccatt acgagcgcat gatctggggc 420

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gcatgctggg agcacaacaa tccactggcg cgctacgcgc tgatggccga cggcgagcag 540

atccattccg ccatgtatcc gggctccatg ttcggcgact cgtttgccca gaagaccgaa 600

atcaatatcc ggcagcatgc cctagagtct gggtgcttcg tcgtgaacgc aacggcctgg 660

ctggacggcg atcagcaggc gcatatcatg aaggacaccg gctgcagcat cggcccgatc 720

tccggcggtt gcttcactgc gatcgtcgca cccgatggta gcctgctggg cgaacccatc 780

cgttccggtg agggcgtggt catcgccgac ctcgacttca cgttgatcga caggcgtaag 840

caggtgatgg actcgcgagg ccattacagc cggccggagt tgctcagcct cttaatagac 900

cgcaccccta ccgcgcactt tcacgaacgc gcttcgcccc ccacgacaga agctgagcaa 960

ggctccgagg atgtgttcga ggctcgcatt taa 993

<210>214

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>214

Met Arg Val Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Leu Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Gly Thr Val Glu Lys Val Val Arg Lys Ile His Glu Leu

20 25 30

Ala Glu Glu Gly Val Glu Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Thr Pro Leu Glu Gln Ile Phe

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Leu Arg Leu Leu Asp Gln Ala Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Pro Ala Thr Asp Ala Ile Gly Glu Ala Ala Arg Phe Ala Gly Val Val

85 90 95

Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Leu Tyr Asn Thr

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Arg Ile Ile Gln Arg Arg Arg Lys

115 120 125

Ile Thr Pro Thr His Tyr Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Lys Ala Gly Arg Ile Gly Gln Leu

145 150 155 160

Ala Cys Trp Glu His Asn Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Tyr Pro Gly Ser Met Phe Gly

180 185 190

Asp Ser Phe Ala Gln Lys Thr Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala Leu

195 200 205

Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Gly Asp

210 215 220

Gln Gln Ala His Ile Met Lys Asp Thr Gly Cys Ser Ile Gly Pro Ile

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Ala Pro Asp Gly Ser Leu Leu

245 250 255

Gly Glu Pro Ile Arg Ser Gly Glu Gly Val Val Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Phe Thr Leu Ile Asp Arg Arg Lys Gln Val Met Asp Ser Arg Gly His

275 280 285

Tyr Ser Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro Thr

290 295 300

Ala His Phe His Glu Arg Ala Ser Pro Pro Thr Thr Glu Ala Glu Gln

305 310 315 320

Gly Ser Glu Asp Val Phe Glu Ala Arg Ile

325 330

<210>215

<211>1008

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>215

atgagtatta cccaccccaa atttaaagct gctgttgttc aagctgcccc agtatttcta 60

gacctagatg ggtctgttaa taaggcgatt aatctcattg atgaagctgc cgctgccgga 120

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cagtacgaca gcccgcaggc ggatcgctta cgcgaggcgg cacgacgcaa cagcattacg 300

gtcgtgctgg gcttgtccga gcgtgatggc ggttctctct atatcgcaca gtggctgatc 360

ggcccggatg gcgaaaccat cgcgcagcgg cgcaagcttc gtcctactca tggggagcgc 420

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cttggcgcgc ttaactgctg ggagaacatc ctgtctctga acaaatatgt gatgtactcc 540

cagcatgaac aggtccatgt agcatcctgg cccagtttct cgacgtatga accgttcgcg 600

catgcgctcg gctatgaggt aaacaacgca attagccagg tctatgcggt ggaaggcggg 660

tgcttcgtgt tggccccgtg ctctaccatc tctgaagaaa tgattgccga actgtgcgat 720

acacccgata aattcgagct gacgcatgct ggtggcggcc acgcaatcat ctatggtccg 780

gacggtcgtg ctctgtgcga aaagctgccc gagaaccagg agggcctgct gtacgcggaa 840

atcgatctgg gggtgatttc tatggcaaaa agtgccatgg atcctgtcgg ccattactct 900

cgccccgatg tctaccgtgt gctgttcaat aagatcccgg caaagcgtat cgagcacttc 960

aatttgccgt tggatgagca agcaggggaa gagccaccag ctgattaa 1008

<210>216

<211>335

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>216

Met Ser Ile Thr His Pro Lys Phe Lys Ala Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Val Phe Leu Asp Leu Asp Gly Ser Val Asn Lys Ala Ile Asn Leu

20 25 30

Ile Asp Glu Ala Ala Ala Ala Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Trp Ile Trp Leu Gly Ser Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Leu Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Gln Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Asp Arg Leu Arg Glu Ala Ala Arg Arg

85 90 95

Asn Ser Ile Thr Val Val Leu Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

115 120 125

Gln Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Gly Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Val Val His Gln Thr Glu Leu Gly Arg

145 150 155 160

Leu Gly Ala Leu Asn Cys Trp Glu Asn Ile Leu Ser Leu Asn Lys Tyr

165 170 175

Val Met Tyr Ser Gln His Glu Gln Val His Val Ala Ser Trp Pro Ser

180 185 190

Phe Ser Thr Tyr Glu Pro Phe Ala His Ala Leu Gly Tyr Glu Val Asn

195 200 205

Asn Ala Ile Ser Gln Val Tyr Ala Val Glu Gly Gly Cys Phe Val Leu

210 215 220

Ala Pro Cys Ser Thr Ile Ser Glu Glu Met Ile Ala Glu Leu Cys Asp

225 230 235 240

Thr Pro Asp Lys Phe Glu Leu Thr His Ala Gly Gly Gly His Ala Ile

245 250 255

Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Arg Ala Leu Cys Glu Lys Leu Pro Glu Asn

260 265 270

Gln Glu Gly Leu Leu Tyr Ala Glu Ile Asp Leu Gly Val Ile Ser Met

275 280 285

Ala Lys Ser Ala Met Asp Pro Val Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val

290 295 300

Tyr Arg Val Leu Phe Asn Lys Ile Pro Ala Lys Arg Ile Glu His Phe

305 310 315 320

Asn Leu Pro Leu Asp Glu Gln Ala Gly Glu Glu Pro Pro Ala Asp

325 330 335

<210>217

<211>1011

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>217

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gtgtcgcttg ggtttgcgga acgcgatgga ggcacgcttt atatcgcgca gtggctcatc 360

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actgtatttg gcgagggaga cggaagcgat ctctccgtgc atgatacggc gcttggacgt 480

atcggctcac tttgttgctg ggagcatttg caaccgttgt cgaaatacgc aatgtacgcc 540

cagaatgaac agattcacat tggcgcatgg cccagctttt cgctatacca gccatttgcg 600

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tgtttcttcc tcgcgccgtg cgcgacggtt tcggacgcca tgatcgaaac actgtgcgat 720

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gatggaagtc tgctgacgcc tacggtagcg gatacttacg agggcctgct gtatgcagaa 840

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gtgttaccac tggagacggt cacggagccc gaaggcccgg ttcagcccta g 1011

<210>218

<211>336

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>218

Val Gly Ile Ser His Pro Lys Phe Lys Ala Ala Val Val Gln Ala Gly

1 5 10 15

Pro Ala Phe Leu Asp Leu Asp Gly Gly Val Glu Arg Ala Val Ser Leu

20 25 30

Ile Gly Gln Ala Ala Ala Glu Gly Ala Gln Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Trp Ile Pro Gly Tyr Pro Trp His Thr Trp Leu Gly Ser Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Met Glu Lys Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ala Leu

65 70 75 80

Arg His Gly Ser Pro Gln Ala Glu Arg Ile Ser Gly Ala Ala Ala Glu

85 90 95

His Lys Ile Met Val Ser Leu Gly Phe Ala Glu Arg Asp Gly Gly Thr

100 105 110

Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Gln Thr Ile Ser

115 120 125

Arg Arg Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Val Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ser Val His Asp Thr Ala Leu Gly Arg

145 150 155 160

Ile Gly Ser Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys Tyr

165 170 175

Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Ile His Ile Gly Ala Trp Pro Ser

180 185 190

Phe Ser Leu Tyr Gln Pro Phe Ala Asn Ala Leu Ser Pro Glu Val Asn

195 200 205

Ile Ala Val Ser Arg Val Tyr Ala Val Glu Gly Gln Cys Phe Phe Leu

210 215 220

Ala Pro Cys Ala Thr Val Ser Asp Ala Met Ile Glu Thr Leu Cys Asp

225 230 235 240

Thr Pro Glu Lys Gln Gly Leu Ile Arg Ala Gly Gly Gly His Ala Ala

245 250 255

Ile Phe Gly Pro Asp Gly Ser Leu Leu Thr Pro Thr Val Ala Asp Thr

260 265 270

Tyr Glu Gly Leu Leu Tyr Ala Glu Leu Asp Leu Gly Val Ile Ser Ile

275 280 285

Ala Lys Ser Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val

290 295 300

Thr Arg Leu Leu Leu Asn Gln Thr Pro Ser Lys Arg Val Gln Asn Met

305 310 315 320

Val Leu Pro Leu Glu Thr Val Thr Glu Pro Glu Gly Pro Val Gln Pro

325 330 335

<210>219

<211>996

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>219

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gctgccacgc acgcgatcgg ccaggcatgc aaacaggcag gagtggttgt ttcgatcggc 300

atcaatgagc gggacaatgg aacgatctac aacacccagc ttctcttcga ctccgacgga 360

accctgctgc agcggcgccg caagatctca cccacttacc acgaacggat gatctggggc 420

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atccattccg ccatgtaccc tggctccatc ttcggcgatc tgtttgccga acagacccag 600

atcaacgtcc ggcagcacgc gttggagtcc ggctgtttcg tagtctgctc caccgcctgg 660

ttggatcccg atcaacaagc gcaaatcgtc aaggacacag gcggcgccat tggtgcgatc 720

tcgggcggct gtttcacggc gattgtggcc cccgatagca ctctgctcgg agagccgatc 780

cgctccggcg aaggcgtggt cattgcggat ctcgacttca cccggatcga caagcgtaaa 840

cagttgatgg attcccgagg tcattacagc cggccggaat tgctgagtct gctgattgat 900

cgcacttcca ccgcacatgt gcaaaaccgc gtgccggccg atccattcgg cgccggctgt 960

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<210>220

<211>331

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>220

Met Lys Ile Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Asp Gly Thr Val Glu Lys Val Val Arg Lys Ile His Glu Leu

20 25 30

Gly Gln Gln Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Ile Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Leu Gln Pro Ala Tyr Gln Ile Ala Ala

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Gly Gln Glu His Leu Lys Leu Leu Asp Gln Ala Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Ala Ala Thr His Ala Ile Gly Gln Ala Cys Lys Gln Ala Gly Val Val

85 90 95

Val Ser Ile Gly Ile Asn Glu Arg Asp Asn Gly Thr Ile Tyr Asn Thr

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ser Asp Gly Thr Leu Leu Gln Arg Arg Arg Lys

115 120 125

Ile Ser Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Lys Ala Gly Arg Ile Gly Gln Leu

145 150 155 160

Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro LeH Ala Arg Tyr Ala Met Met Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Tyr Pro Gly Ser Ile Phe Gly

180 185 190

Asp Leu Phe Ala Glu Gln Thr Gln Ile Asn Val Arg Gln His Ala Leu

195 200 205

Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Cys Ser Thr Ala Trp Leu Asp Pro Asp

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Val Lys Asp Thr Gly Gly Ala Ile Gly Ala Ile

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Ala Pro Asp Ser Thr Leu Leu

245 250 255

Gly Glu Pro Ile Arg Ser Gly Glu Gly Val Val Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Phe Thr Arg Ile Asp Lys Arg Lys Gln Leu Met Asp Ser Arg Gly His

275 280 285

Tyr Ser Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Ser Thr

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Ala His Val Gln Asn Arg Val Pro Ala Asp Pro Phe Gly Ala Gly Cys

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Val Ala Glu Pro Gly Val Glu Thr Cys Pro Arg

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<210>221

<211>1146

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>221

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ttaggtgcag gcgctaacga ggcggtcacc cgctcttacg cgatcgaagg cgcatgttat 660

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gagcatcaca agctgcttgg catgggcgga gggtgggccc gaattttcgg cccggacggt 780

gagtatctcg cagaatcgct cgctcatgac gcggagggca tcctgtacgc tgacattgat 840

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<210>222

<211>381

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>222

Met Leu Thr Tyr Lys Gly Val Phe Lys Ala Ala Thr Val Gln Ala Glu

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Pro Val Trp Met Asp Ala Asp Ala Thr Ile Thr Lys Ala Ile Arg Ile

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Ile Glu Glu Ala Ala Asp Asn Gly Ala Lys Phe Val Ala Phe Pro Glu

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Trp Gly Ala Lys Phe Val Val Pro Phe His Glu Asn Cys Leu Glu Leu

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Gly Asp Lys Arg Met Gln Arg Ile Gln Ala Ala Ala Lys Gln Asn Gly

85 90 95

Ile Ala Leu Val Met Gly Tyr Gly Glu Arg Asp Gly Gly Ser Arg Tyr

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Met Ser Gln Val Phe Ile Asp Asp Ser Gly Lys Ile Val Ala Asn Arg

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Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Glu Glu Arg Thr Ile Phe Gly Glu Gly

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Asn Gly Ser Asp Phe Ile Thr His Asp Phe Pro Phe Ala Arg Val Gly

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Gly Phe Asn Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys Tyr Met Met

165 170 175

Tyr Ser Leu Gln Glu Gln Val His Val Ala Ser Trp Pro Ala Met Cys

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Thr Tyr Gln Pro Asp Val Pro Gln Leu Gly Ala Gly Ala Asn Glu Ala

195 200 205

Val Thr Arg Ser Tyr Ala Ile Glu Gly Ala Cys Tyr Val Leu Gly Ala

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Thr Leu Val Ile Gly Lys Ala Ala His Asp Ala Phe Cys Asp Thr Glu

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Glu His His Lys Leu Leu Gly Met Gly Gly Gly Trp Ala Arg Ile Phe

245 250 255

Gly Pro Asp Gly Glu Tyr Leu Ala Glu Ser Leu Ala His Asp Ala Glu

260 265 270

Gly Ile Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Ser Lys Ile Leu Leu Ala Lys

275 280 285

Ala Asn Thr Asp Thr Val Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Leu Ser

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Leu Leu Val Asn Thr His Asn Pro Gly Pro Val Arg Tyr Leu Asp Glu

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Glu Gly Arg Gln Val Ser Thr Ser Ile Arg Arg His Glu Lys Leu Glu

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<210>223

<211>996

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>223

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gcgttccctg agaccgtggt gccttattac ccgtactttt cgatcgtgca gtccggctat 180

caaatccttc gcggcggtga gttcgtcaag ctcctcgatc agtccgtgac ggtgccatct 240

tatagcactg aagccatcgg cgaagcctgc aggcaggagg agatggttgt ctccataggc 300

gtcaacgagc gtgatggcgg aacgatctac aacgcgcagt tactctttga ttccgacggc 360

acgttgatcc aaagacgacg caagatcacc cccacccatt acgaacgcat gatctggggc 420

cagggcgatg gctcaggtct gcgcgctgtt gacagcaatg tcgcacgcat tggtcaactg 480

gcatgctttg agcactacaa ccctcttgcg cggtacgcga tgatggccga tggcgagcag 540

atccattccg ccatgttccc cggttccatg ttcggcgatg gttttgcgga gaggacggaa 600

attgccgtaa ggcaacatgc gatggagtcc gggtgctttg tcgtttgcgc tacggcctgg 660

ctcgatcccg gccagcaggc tcagatcgcc aacgacaccg gtatcaccga catcggcccg 720

atctccgggg gttgcttcac tgcgatcatc gcacccgatg ggagcctgct gggccaacct 780

atccgctcgg gtgaaggcga agtcatcgtc gacctcgatt tcacgttaat tgacaagcgg 840

aaacatattg tcgactcgag aggacattac agccggccag aattgctgag cctgctgatc 900

gatcgcactc ccaccgcgca ccttcacgac cgcgctgtgc agcacaatgc cggatcggaa 960

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<210>224

<211>331

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>224

Met Arg Val Val Lys Ala Ser Ala Val Gln Leu Lys Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Gly Thr Val Glu Lys Val Val Ala Lys Ile His Glu Leu

20 25 30

Gly Gln Gln Gly Val Gln Phe Ala Ala Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

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Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Ile Val Gln Ser Gly Tyr Gln Ile Leu Arg

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Gly Gly Glu Phe Val Lys Leu Leu Asp Gln Ser Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Tyr Ser Thr Glu Ala Ile Gly Glu Ala Cys Arg Gln Glu Glu Met Val

85 90 95

Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Ala

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ser Asp Gly Thr Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys

115 120 125

Ile Thr Pro Thr His Tyr Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Asn Val Ala Arg Ile Gly Gln Leu

145 150 155 160

Ala Cys Phe Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Met Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Phe Pro Gly Ser Met Phe Gly

180 185 190

Asp Gly Phe Ala Glu Arg Thr Glu Ile Ala Val Arg Gln His Ala Met

195 200 205

Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Cys Ala Thr Ala Trp Leu Asp Pro Gly

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Ala Asn Asp Thr Gly Ile Thr Asp Ile Gly Pro

225 230 235 240

Ile Ser Gly Gly Cys Phe Thr Ala Ile Ile Ala Pro Asp Gly Ser Leu

245 250 255

Leu Gly Gln Pro Ile Arg Ser Gly Glu Gly Glu Val Ile Val Asp Leu

260 265 270

Asp Phe Thr Leu Ile Asp Lys Arg Lys His Ile Val Asp Ser Arg Gly

275 280 285

His Tyr Ser Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro

290 295 300

Thr Ala His Leu His Asp Arg Ala Val Gln His Asn Ala Gly Ser Glu

305 310 315 320

Gly Ala Ser Glu His Leu Arg Glu Asp Ala Ala

325 330

<210>225

<211>951

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>225

atgaccaccg tcaaagccgc cgctgtccag atgagtcccg tgctttacag tcgcgacgat 60

accatcgaga aaatttgtcg acagatcatc gagcttggcc gacagggagt gcagttcgcc 120

acgtttccag agacagttat tccgtattat ccatatttcg ccttcgtgca gcggccttac 180

gaaatgtcgg cccaatatca tcagttgctt gatcaagcgg tgaccgtgcc ttccggttca 240

acgcacgcca ttggggccgc ctgtaaacaa gccggaattg ttgtctcaat cggcgtcaac 300

gagcgggagg gcggcacgct ctatggcaca cagttgctgt ttgatgcaga cggcctcttg 360

atccagcgtc gccgcaagat cactccgacc taccacgagc ggatgatttg gggacagggt 420

gacggttccg ggctgcgagc cgtagatagc gcggtcggtc gaatcggaca gttggcgtgt 480

tgggaacacc acaatccgct ggctcgttat gctttagcgg ccgatggcga acaaattcac 540

gcggcgatgt accctggctc gatcttgggt gaactatttg ccgagcagat tcaggtcaac 600

atccggcagc acgccatgga atctggttgc ttcgtcgtga acgccacggc ctggctaagc 660

gaggaacagc aagcccgaat catgaaggac accggatcat tcgatagccc aatcaccggt 720

ggttgcttta ccgccattgt cgcgcccaac gggcagataa tcggtgaacc gctgcgcatc 780

ggcgaaggcg tcgtgattgc cgatttggac ttcgctttga ttgatgagag gaagcggctg 840

atggactcac gcggcctcta tagccgccct gagttgctaa gcttgttaat cgacagaatg 900

cctacatccc atgtgcatga acgggttgag cgtagcatgg cgatggcatg a 951

<210>226

<211>316

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>226

Met Thr Thr Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Met Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Asp Asp Thr Ile Glu Lys Ile Cys Arg Gln Ile Ile Glu Leu

20 25 30

Gly Arg Gln Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Ile Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ala Phe Val Gln Arg Pro Tyr Glu Met Ser Ala

50 55 60

Gln Tyr His Gln Leu Leu Asp Gln Ala Val Thr Val Pro Ser Gly Ser

65 70 75 80

Thr His Ala Ile Gly Ala Ala Cys Lys Gln Ala Gly Ile Val Val Ser

85 90 95

Ile Gly Val Asn Glu Arg Glu Gly Gly Thr Leu Tyr Gly Thr Gln Leu

100 105 110

Leu Phe Asp Ala Asp Gly Leu Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys Ile Thr

115 120 125

Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly Ser Gly

130 135 140

Leu Arg Ala Val Asp Ser Ala Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu Ala Cys

145 150 155 160

Trp Glu His His Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Ala Ala Asp Gly

165 170 175

Glu Gln Ile His Ala Ala Met Tyr Pro Gly Ser Ile Leu Gly Glu Leu

180 185 190

Phe Ala Glu Gln Ile Gln Val Asn Ile Arg Gln His Ala Met Glu Ser

195 200 205

Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Ser Glu Glu Gln Gln

210 215 220

Ala Arg Ile Met Lys Asp Thr Gly Ser Phe Asp Ser Pro Ile Thr Gly

225 230 235 240

Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Ala Pro Asn Gly Gln Ile Ile Gly Glu

245 250 255

Pro Leu Arg Ile Gly Glu Gly Val Val Ile Ala Asp Leu Asp Phe Ala

260 265 270

Leu Ile Asp Glu Arg Lys Arg Leu Met Asp Ser Arg Gly Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Met Pro Thr Ser His

290 295 300

Val His Glu Arg Val Glu Arg Ser Met Ala Met Ala

305 310 315

<210>227

<211>1035

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>227

atgtccgatc gacgcatcgt tcgcgcggca gccattcaga tcgccccgga tctcgagcgc 60

tgcagtgtaa cgctcgagaa ggtttgctcg gcgatcgacg aagccgcggg caaaggcgct 120

caactgagcg tctttcccga gaccttcgtc ccgtactacc cctatttctc gtttgtccgc 180

cctccggtcg catcgggggc cgatcacatg cggctatacg aggaagcggt ggtggtgccg 240

ggtcccgtga cgcaggctgt ttccgaacgt gcgcgcatgc atgggatggt ggtggtgctc 300

ggcgtcaacg agcgcgacca cgggagcctc tacaacaccc aactgatttt cgattgcgat 360

ggtcggctcg ctctgaaacg ccgcaagatc acgccgacgt ttcacgagcg catgatctgg 420

ggccagggcg acgccagtgg actgaaagtc gcgcgcacgg gtatcgggcg ggtcggcgcg 480

ctcgcgtgct gggagcatta caacccgctc gcgcgctacg cgctgatgac ccagcacgaa 540

gagatccatt gcagtcaatt tccaggctcg ctcgtcggtc cgatcttctc cgagcagatg 600

gacgtgacga tccgccatca cgccctcgaa tcggggtgct tcgtcgtgaa cgcaaccggt 660

tggctcacgg acgcgcagat cgcctcgatc accgatgacc cgaagcttca acgggcgctg 720

cgcggtggct gcaacacggc gatcgtttca ccggaaggcc agcatctggc ggagccgttg 780

cgcgaaggcg aggggatggt ggtcgcggac ctcgacatgt cgctcatcac caagcgcaag 840

cgaatgatgg attcggtcgg ccactatgcg cggccggaac tgttgagcct cgcgatcaac 900

gatcgtcccg cagccccttt cggccggatg tgcgctgccg aagcaatgcg gggagccgac 960

gacgtcgtca cagtaggagc atttcatgag cgccagcgag aacgtgtcgg cgaagagccg 1020

gcaattgatg actga 1035

<210>228

<211>344

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>228

Met Ser Asp Arg Arg Ile Val Arg Ala Ala Ala Ile Gln Ile Ala Pro

1 5 10 15

Asp Leu Glu Arg Cys Ser Val Thr Leu Glu Lys Val Cys Ser Ala Ile

20 25 30

Asp Glu Ala Ala Gly Lys Gly Ala Gln Leu Ser Val Phe Pro Glu Thr

35 40 45

Phe Val Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Arg Pro Pro Val Ala

50 55 60

Ser Gly Ala Asp His Met Arg Leu Tyr Glu Glu Ala Val Val Val Pro

65 70 75 80

Gly Pro Val Thr Gln Ala Val Ser Glu Arg Ala Arg Met His Gly Met

85 90 95

Val Val Val Leu Gly Val Asn Glu Arg Asp His Gly Ser Leu Tyr Asn

100 105 110

Thr Gln Leu Ile Phe Asp Cys Asp Gly Arg Leu Ala Leu Lys Arg Arg

115 120 125

Lys Ile Thr Pro Thr Phe His Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp

130 135 140

Ala Ser Gly Leu Lys Val Ala Arg Thr Gly Ile Gly Arg Val Gly Ala

145 150 155 160

Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met

165 170 175

Thr Gln His Glu Glu Ile His Cys Ser Gln Phe Pro Gly Ser Leu Val

180 185 190

Gly Pro Ile Phe Ser Glu Gln Met Asp Val Thr Ile Arg His His Ala

195 200 205

Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Gly Trp Leu Thr Asp

210 215 220

Ala Gln Ile Ala Ser Ile Thr Asp Asp Pro Lys Leu Gln Arg Ala Leu

225 230 235 240

Arg Gly Gly Cys Asn Thr Ala Ile Val Ser Pro Glu Gly Gln His Leu

245 250 255

Ala Glu Pro Leu Arg Glu Gly Glu Gly Met Val Val Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Met Ser Leu Ile Thr Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His

275 280 285

Tyr Ala Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Ala Ile Asn Asp Arg Pro Ala

290 295 300

Ala Pro Phe Gly Arg Met Cys Ala Ala Glu Ala Met Arg Gly Ala Asp

305 310 315 320

Asp Val Val Thr Val Gly Ala Phe His Glu Arg Gln Arg Glu Arg Val

325 330 335

Gly Glu Glu Pro Ala Ile Asp Asp

340

<210>229

<211>975

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>229

atgcctgaaa acaaagtcaa agttgccctc gttcagcatc cgcctgtttt tctgaatttg 60

ccgaaaacgt tggaaaaagt agaaggtttg gcgcgagagt gcgccgccaa tgaagcgaaa 120

atcgttgtct ttcctgaaac ctggctgacc ggctatccgg tctggcttga tgaagcgccg 180

agagccgcgc tgtgggatta tccgcccgcc aagcgtttgt atcaatacct cacggaaaat 240

tcattgcaga ttccgagcgc tgagtttgaa tctttgcgcg aaatcgctaa gaaaaattcc 300

ctttatttag tcgttggagt tcacgaacga agcggcggaa cgctctacaa tacgataatt 360

tatctcacgc ccgacggcag ttataaaact caccgcaaat tggttccaac ttacacggaa 420

agacttgtct ggggcgcagg cgacggaagc ggtctaaatg ttgtggaaac gccttacggg 480

attctcggag gtttgatttg ctgggaacat tggatgcctc tggctagggc ggcaatgcat 540

tcaaaaaatg aagcgattca cgtttgccaa tttcccacgg ttcacgagcg acatcaaatc 600

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ttaaatctcg atttaaccaa gcagggacat ctgtttttgg ataccgacgg acattattcg 900

cgtcccgatg ttttcgagtt gcgcgtcaac gataaagcga accgaaacgt ccgttttgca 960

tccgaaacag tatag 975

<210>230

<211>324

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>230

Met Pro Glu Asn Lys Val Lys Val Ala Leu Val Gln His Pro Pro Val

1 5 10 15

Phe Leu Asn Leu Pro Lys Thr Leu Glu Lys Val Glu Gly Leu Ala Arg

20 25 30

Glu Cys Ala Ala Asn Glu Ala Lys Ile Val Val Phe Pro Glu Thr Trp

35 40 45

Leu Thr Gly Tyr Pro Val Trp Leu Asp Glu Ala Pro Arg Ala Ala Leu

50 55 60

Trp Asp Tyr Pro Pro Ala Lys Arg Leu Tyr Gln Tyr Leu Thr Glu Asn

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ile Pro Ser Ala Glu Phe Glu Ser Leu Arg Glu Ile Ala

85 90 95

Lys Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Val Val Gly Val His Glu Arg Ser Gly

100 105 110

Gly Thr Leu Tyr Asn Thr Ile Ile Tyr Leu Thr Pro Asp Gly Ser Tyr

115 120 125

Lys Thr His Arg Lys Leu Val Pro Thr Tyr Thr Glu Arg Leu Val Trp

130 135 140

Gly Ala Gly Asp Gly Ser Gly Leu Asn Val Val Glu Thr Pro Tyr Gly

145 150 155 160

Ile Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu His Trp Met Pro Leu Ala Arg

165 170 175

Ala Ala Met His Ser Lys Asn Glu Ala Ile His Val Cys Gln Phe Pro

180 185 190

Thr Val His Glu Arg His Gln Ile Ala Ser Arg His Tyr Ala Phe Glu

195 200 205

Gly Gln Cys Phe Val Leu Thr Ser Gly Cys Ala Met Thr Lys Thr Asp

210 215 220

Val Leu Glu Gly Phe Glu Ser Leu Glu Thr Asn Asp His Glu Val Phe

225 230 235 240

Gly Leu Leu Asp Ser Ile Glu Lys Glu Glu Leu Met Arg Gly Gly Ser

245 250 255

Ala Ile Ile Ala Pro Asp Leu Ser Tyr Ser Val Glu Pro Val Phe Asp

260 265 270

Glu Lys Thr Ile Val Tyr Gly Glu Leu Asn Leu Asp Leu Thr Lys Gln

275 280 285

Gly His Leu Phe Leu Asp Thr Asp Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val

290 295 300

Phe Glu Leu Arg Val Asn Asp Lys Ala Asn Arg Asn Val Arg Phe Ala

305 310 315 320

Ser Glu Thr Val

<210>231

<211>1062

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>231

atgagtcaga tccatccaaa acttaaggtc gcggccgtgc aggctgcccc cgcctttctc 60

gatctcgatg catcgatcga aaagacaata cgctatgtcg acgaagcggc tgcggccggg 120

gcgaagttga ttgcgtttcc ggaaacctgg attcccggct acccatggtg gatctggctc 180

ggcgctccgg cctgggcgat catgcgtggc ttcgtctcgc gctatttcga caactcgctg 240

caatatggca gtccggaagc tgaacggctg cgggacgccg ccaggcgcaa caagatatac 300

atcgccctcg gcctgtccga gcgcgacggg ggcagtcttt atatcgcgca atggatcatc 360

gggcctggcg gcgaaacggt tgcacaacgc cgcaagctca agcccacgca cgccgagcgc 420

actgtattcg gcgaaggcga tggttcacat ctggccgtgc atgatctcga tattggaaga 480

ttgggcgcgc tttgttgctg ggaacatctg caaccgttgt cgaaatatgc aatgtacgcc 540

cagaacgagc aaattcacgt cgccgcctgg ccgagcttct cgctatacga tccctttgca 600

cacgcactcg gcgccgaggt caataacgct gcgagcaaga tctatgcggt cgagggatcg 660

tgcttcgtca ttgcgccgtg cgcaacggtt tcgcaggtga tgatcgatga gctctgcgat 720

acccccgaaa agcatcaatt ccttcacgtc ggcggcggct tcgccgtcat ttacggtccc 780

gacggctcgc cactggccaa acctcttccg ccagaccagg agggacttct ctatgccgac 840

atcgatctcg gcatgatctc ggtcgccaag gccgcagccg atcccgccgg acattatgca 900

cgtcccgatg taactcgcct gctgttcaac aatcgcccgg caaaccgcgt cgagaagctg 960

gcgttgccgg tcgatcagga ggccgaagtg gatagtccgc tgaaggctcc cgacgcatct 1020

cccaaagtga cggcgctcaa gccgtcgcag gctgcggagt ag 1062

<210>232

<211>353

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>232

Met Ser Gln Ile His Pro Lys Leu Lys Val Ala Ala Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ala Phe Leu Asp Leu Asp Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Arg Tyr

20 25 30

Val Asp Glu Ala Ala Ala Ala Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Trp Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Trp Ile Trp Leu Gly Ala Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Met Arg Gly Phe Val Ser Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Gln Tyr Gly Ser Pro Glu Ala Glu Arg Leu Arg Asp Ala Ala Arg Arg

85 90 95

Asn Lys Ile Tyr Ile Ala Leu Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Ile Ile Gly Pro Gly Gly Glu Thr Val Ala

115 120 125

Gln Arg Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser His Leu Ala Val His Asp Leu Asp Ile Gly Arg

145 150 155 160

Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys Tyr

165 170 175

Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Ile His Val Ala Ala Trp Pro Ser

180 185 190

Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala His Ala Leu Gly Ala Glu Val Asn

195 200 205

Asn Ala Ala Ser Lys Ile Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val Ile

210 215 220

Ala Pro Cys Ala Thr Val Ser Gln Val Met Ile Asp Glu Leu Cys Asp

225 230 235 240

Thr Pro Glu Lys His Gln Phe Leu His Val Gly Gly Gly Phe Ala Val

245 250 255

Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ser Pro Leu Ala Lys Pro Leu Pro Pro Asp

260 265 270

Gln Glu Gly Leu Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Gly Met Ile Ser Val

275 280 285

Ala Lys Ala Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val

290 295 300

Thr Arg Leu Leu Phe Asn Asn Arg Pro Ala Asn Arg Val Glu Lys Leu

305 310 315 320

Ala Leu Pro Val Asp Gln Glu Ala Glu Val Asp Ser Pro Leu Lys Ala

325 330 335

Pro Asp Ala Ser Pro Lys Val Thr Ala Leu Lys Pro Ser Gln Ala Ala

340 345 350

Glu

<210>233

<211>1002

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>233

gtgagcacca tcgtcaaagc cgcggccgtg cagatcagcc ccgtgctgta cagccgcgag 60

ggcaccgtcg agcgggtcgt gaagaagatc cgggagctgg gcgaaaaggg cgtccagttc 120

gccaccttcc ccgagaccgt catcccttac tacccgtact tttccttcgt tcagacgccc 180

ttgcagatcc tcgccggccc cgagcatctg aagctgctcg accagtcggt gaccgtgccg 240

tcccccgcca cggacgcgat cggccaggcc gcccggcagg caggaatggt ggtgtccatc 300

ggcgtcaacg agcgtgacgg cggcaccctg tacaacacgc agctgctctt cgacgcggac 360

ggcgcgctga tccagcgtcg ccgcaagatc aagcccaccc actacgagcg catgatctgg 420

ggcgagggcg acggctccgg cctgcgcgcc gtcgacagcc aggtcggtcg tatcggccag 480

ctggcctgct gggagcacaa caaccccctg gcgcgctacg ccatgatggc cgacggcgag 540

cagatccatt cggccatgta tccgggctcg atgttcggcg acccgttcgc ccagaagacg 600

gaaatcaaca tccggcagca tgcgctggaa tccggatgct tcgtcgtctg ctcgacggcc 660

tggttggacg ccgatcagca ggcgcaaatc atgcaggaca cgggctgcgc catcggcccg 720

atctcgggcg gctgcctcac ggcgatcgtg gcgcccgacg gcacgttcct gggcgaaccg 780

ctcacgtcgg gcgagggcga ggtcatcgcc gacctcgatt tcaagctgat cgacaagcgc 840

aagcagacga tggactcgcg cggccactac aaccgccccg aactgctcag cctgctgatc 900

gatcgaacgc cgacgtcgaa cgtccatgag cgcgccgcgc acccgaaggt cgaggcgtca 960

caaacggctg gcgacacgga gcggacccgc gaggtcctgt aa 1002

<210>234

<211>333

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>234

Val Ser Thr Ile Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Arg Glu Gly Thr Val Glu Arg Val Val Lys Lys Ile Arg Glu

20 25 30

Leu Gly Glu Lys Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Ile

35 40 45

Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Thr Pro Leu Gln Ile Leu

50 55 60

Ala Gly Pro Glu His Leu Lys Leu Leu Asp Gln Ser Val Thr Val Pro

65 70 75 80

Ser Pro Ala Thr Asp Ala Ile Gly Gln Ala Ala Arg Gln Ala Gly Met

85 90 95

Val Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Leu Tyr Asn

100 105 110

Thr Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Ala Leu Ile Gln Arg Arg Arg

115 120 125

Lys Ile Lys Pro Thr His Tyr Glu Arg Met Ile Trp Gly Glu Gly Asp

130 135 140

Gly Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Gln Val Gly Arg Ile Gly Gln

145 150 155 160

Leu Ala Cys Trp Glu His Asn Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Met

165 170 175

Ala Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Tyr Pro Gly Ser Met Phe

180 185 190

Gly Asp Pro Phe Ala Gln Lys Thr Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala

195 200 205

Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Cys Ser Thr Ala Trp Leu Asp Ala

210 215 220

Asp Gln Gln Ala Gln Ile Met Gln Asp Thr Gly Cys Ala Ile Gly Pro

225 230 235 240

Ile Ser Gly Gly Cys Leu Thr Ala Ile Val Ala Pro Asp Gly Thr Phe

245 250 255

Leu Gly Glu Pro Leu Thr Ser Gly Glu Gly Glu Val Ile Ala Asp Leu

260 265 270

Asp Phe Lys Leu Ile Asp Lys Arg Lys Gln Thr Met Asp Ser Arg Gly

275 280 285

His Tyr Asn Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro

290 295 300

Thr Ser Asn Val His Glu Arg Ala Ala His Pro Lys Val Glu Ala Ser

305 310 315 320

Gln Thr Ala Gly Asp Thr Glu Arg Thr Arg Glu Val Leu

325 330

<210>235

<211>993

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>235

atgaaaattg ttaaagcggc agcagttcag ctgagccccg tcctctatag ccgcgagggg 60

acggtcgaaa gagtagtgcg gaagattcat caacttggtc aacagggagt gcagtttgcc 120

accttcccgg aaacagtggt gccttactac ccgtattttt cgatcgtgca gtccgggtat 180

caaatccttc gcggcggtga gttcgtgaag ctgctcgatc agtcagtgac ggtgccatct 240

cttgccaccg aagcgatcgc cgaggcctgc aggcaggcgg gcgtcgttgt ctccatcggc 300

gtcaatgagc gtgacggcgg aactatatac aatgcgcagc ttctgtttga ttcggacggc 360

acattgattc agaggcgacg caagatcacg cccacccact acgagcgcat gatctggggc 420

cagggcgatg gctcgggtct gcgggctgtg gacagcaagg tggcacgtat tggtcaactg 480

gcgtgctttg agcattacaa ccccctcgca cgatacgcga tgatcgccga tggcgagcag 540

atccactctg caatgtttcc cggttccatg ttcggcgatg gtttcgcgga gaggaccgag 600

atcgcggtca ggcagcatgc gcaggagtcc ggatgctttg tagtttgtgc tacggcgtgg 660

ctggatgccg accagcaggc tcaaattgcc gcggacacag gcatcaccga cctgggaccg 720

atctccggcg gttgcttcac tgcgatcatt gcacctgatg ggagcctgct gggtcaacca 780

atccgctcgg gcgaaggtga cgtcattgtc gatctcgatt tcactctgat cgacaggcgg 840

aagcatgttg tggactcgag aggtcactac agccggccgg aattgctaag cctgctgatc 900

gaccgtactc ccacagcgca cgttcacgaa cgggccgcgc actctcactt ggccgccgag 960

caatgcttgg aggatcttaa cgcgcttgct taa 993

<210>236

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>236

Met Lys Ile Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Leu Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Gly Thr Val Glu Arg Val Val Arg Lys Ile His Gln Leu

20 25 30

Gly Gln Gln Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Ile Val Gln Ser Gly Tyr Gln Ile Leu Arg

50 55 60

Gly Gly Glu Phe Val Lys Leu Leu Asp Gln Ser Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Leu Ala Thr Glu Ala Ile Ala Glu Ala Cys Arg Gln Ala Gly Val Val

85 90 95

Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Ala

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ser Asp Gly Thr Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys

115 120 125

Ile Thr Pro Thr His Tyr Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Lys Val Ala Arg Ile Gly Gln Leu

145 150 155 160

Ala Cys Phe Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Ile Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Phe Pro Gly Ser Met Phe Gly

180 185 190

Asp Gly Phe Ala Glu Arg Thr Glu Ile Ala Val Arg Gln His Ala Gln

195 200 205

Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Cys Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Ala Ala Asp Thr Gly Ile Thr Asp Leu Gly Pro

225 230 235 240

Ile Ser Gly Gly Cys Phe Thr Ala Ile Ile Ala Pro Asp Gly Ser Leu

245 250 255

Leu Gly Gln Pro Ile Arg Ser Gly Glu Gly Asp Val Ile Val Asp Leu

260 265 270

Asp Phe Thr Leu Ile Asp Arg Arg Lys His Val Val Asp Ser Arg Gly

275 280 285

His Tyr Ser Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro

290 295 300

Thr Ala His Val His Glu Arg Ala Ala His Ser His Leu Ala Ala Glu

305 310 315 320

Gln Cys Leu Glu Asp Leu Asn Ala Leu Ala

325 330

<210>237

<211>993

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>237

atgaaagtcg tcaaagccgc cgcagtgcag atcagtcctg ttctctacag ccgagaggca 60

accgtcgcca aggtcgtgca gaagatccac gaactcggcc agaaaggcgt gcagttcgcc 120

acctttccag agaccgtagt gccttactac ccgtactttt ccgccgtcca gacaggcatc 180

gagcttctgt ccggcacgga gcatctccgg ctgctcgatc aggccgtgac ggtgccgtct 240

gccgctaccg acgcgatcgg agaggcagcc cggaaggcag gcatggtggt gtcgatcggc 300

gtcaatgaac gcgatggcgg caccttgtac aacacacagt tgctcttcga tgccgatggc 360

accttgatcc agcgccgccg caagatcacg ccgacccact tcgaacgcat gatctggggc 420

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<210>238

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>238

Met Lys Val Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Ala Thr Val Ala Lys Val Val Gln Lys Ile His Glu Leu

20 25 30

Gly Gln Lys Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Ala Val Gln Thr Gly Ile Glu Leu Leu Ser

50 55 60

Gly Thr Glu His Leu Arg Leu Leu Asp Gln Ala Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Ala Ala Thr Asp Ala Ile Gly Glu Ala Ala Arg Lys Ala Gly Met Val

85 90 95

Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Leu Tyr Asn Thr

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys

115 120 125

Ile Thr Pro Thr His Phe Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Lys Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu

145 150 155 160

Ala Cys Phe Glu His Asn Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Ile Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Tyr Pro Gly Ser Ala Phe Gly

180 185 190

Glu Gly Phe Ala Gln Arg Met Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala Leu

195 200 205

Glu Ser Gly Ala Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Met Lys Asp Thr Gly Cys Gly Ile Gly Pro Ile

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Phe Thr Thr Ile Val Ser Pro Asp Gly Met Leu Met

245 250 255

Ala Glu Pro Leu Arg Ser Gly Glu Gly Glu Val Ile Val Asp Leu Asp

260 265 270

Phe Thr Leu Ile Asp Arg Arg Lys Met Leu Met Asp Ser Ala Gly His

275 280 285

Tyr Asn Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Met Ile Asp Arg Thr Pro Thr

290 295 300

Ala His Val His Glu Arg Ala Ala Arg Pro Val Ser Gly Val Glu Gln

305 310 315 320

Asn Pro Glu Glu Leu Arg Ile Pro Ala Ala

325 330

<210>239

<211>969

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>239

atgtccaatg agaataagta tgacacattt aaagttgctg cagtccaggc cacacctgtg 60

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aatgcctatg tagtgatggg aatgagcgaa cggaatgtcg aagcgagtgg tgcaagcctg 360

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<210>240

<211>322

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>240

Met Ser Asn Glu Asn Lys Tyr Asp Thr Phe Lys Val Ala Ala Val Gln

1 5 10 15

Ala Thr Pro Val Phe Leu Asp Arg Glu Ala Thr Ile Asp Lys Ala Cys

20 25 30

Glu Leu Ile Ala Thr Ala Gly Arg Glu Gly Ala Arg Leu Ile Val Phe

35 40 45

Pro Glu Ala Phe Ile Pro Ser Tyr Pro Glu Trp Val Trp Gly Ile Pro

50 55 60

Ser Gly Glu Gln Gly Leu Leu Asn Glu Leu Tyr Ser Glu Leu Leu Thr

65 70 75 80

Asn Ala Val Thr Ile Pro Ser Asp Ala Thr Asp Arg Leu Cys Glu Ala

85 90 95

Ala Lys Leu Ala Asn Ala Tyr Val Val Met Gly Met Ser Glu Arg Asn

100 105 110

Val Glu Ala Ser Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Met Leu Tyr Ile Asp

115 120 125

Ala Gln Gly Glu Ile Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly

130 135 140

Gly Glu Arg Leu Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Gln Val

145 150 155 160

Tyr Asp Thr Pro Leu Gly Lys Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn

165 170 175

Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr Thr Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile

180 185 190

Tyr Val Ala Ala Thr Trp Asp Cys Gly Gln Pro Trp Leu Ser Thr Ile

195 200 205

Arg His Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Val Gly Cys Cys Ile

210 215 220

Ala Met Arg Lys Asp Asp Ile Pro Asp Arg Tyr Ser Met Lys Gln Lys

225 230 235 240

Tyr Tyr Ala Glu Met Asp Glu Trp Ile Asn Val Gly Asp Ser Ala Ile

245 250 255

Val Asn Pro Glu Gly His Phe Ile Ala Gly Pro Val Arg Lys Gln Glu

260 265 270

Glu Ile Leu Tyr Ala Glu Ile Asp Pro Arg Met Met Gln Gly Pro Lys

275 280 285

Trp Met Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Gln

290 295 300

Leu Thr Val His Thr Asp Val Arg Gln Met Ile Arg Val Glu Asp Asp

305 310 315 320

Ser Gln

<210>241

<211>972

<212>DNA

<213>未知

<220>

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<400>241

atgatatcca acgagcataa caatactcca ttcaaggttg ctgctgtgca ggctacacct 60

gtgtttcttg atcgcgaagc aacgatcgat aaagcgtgtg aactgatcgc tactgccggt 120

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gattatcaat ga 972

<210>242

<211>323

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>242

Met Ile Ser Asn Glu His Asn Asn Thr Pro Phe Lys Val Ala Ala Val

1 5 10 15

Gln Ala Thr Pro Val Phe Leu Asp Arg Glu Ala Thr Ile Asp Lys Ala

20 25 30

Cys Glu Leu Ile Ala Thr Ala Gly His Glu Gly Ala Arg Leu Ile Val

35 40 45

Phe Pro Glu Ala Phe Ile Pro Ser Tyr Pro Glu Trp Val Trp Gly Ile

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Pro Ser Gly Glu Gln Gly Leu Leu Asn Asp Leu Tyr Ala Glu Leu Leu

65 70 75 80

Thr Asn Ser Val Thr Ile Pro Ser Asn Ala Thr Asp Arg Leu Cys Arg

85 90 95

Ala Ala Lys Leu Ala Asn Ala Tyr Val Val Met Gly Met Ser Glu Arg

100 105 110

Asn Ile Glu Ala Ser Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Met Leu Tyr Ile

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Asp Ala Gln Gly Glu Ile Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr

130 135 140

Gly Gly Glu Arg Leu Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Gln

145 150 155 160

Val Tyr Asp Thr Pro Leu Gly Lys Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu

165 170 175

Asn Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln

180 185 190

Ile Tyr Val Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Gln Pro Trp Leu Ser Thr

195 200 205

Ile Arg His Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Ile Gly Cys Cys

210 215 220

Ile Ala Met Arg Lys Asp Asp Ile Pro Asp Arg Tyr Ser Met Lys Gln

225 230 235 240

Lys Tyr Tyr Ala Glu Met Asp Glu Trp Ile Asn Val Gly Asp Ser Ala

245 250 255

Ile Val Asn Pro Glu Gly Asp Phe Ile Ala Gly Pro Val Ser Lys Gln

260 265 270

Glu Glu Ile Leu Tyr Ala Glu Ile Asp Pro Arg Met Val Gln Gly Pro

275 280 285

Lys Trp Met Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe

290 295 300

Glu Leu Thr Val His Thr Asp Val Arg Glu Met Met Arg Val Glu His

305 310 315 320

Asp Tyr Gln

<210>243

<211>999

<212>DNA

<213>未知

<220>

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<400>243

atgaagcaaa ctcgagtagc gatcattcag gcggaacctg tatatctcaa tttgcaagcg 60

agtgttgcga gggctatcga tcttgccgga cgcgccgcga agcaaggagc gcgtctgata 120

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gtaattccgg gaaaggaaat cgaacagctc tgtaaaactg cggcggagct gggagttgta 300

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tctcttttgc tgattgatga atcaggaaaa ctggccggcc atcaccgcaa actggttccg 420

acttatacgg aacggatggt gtggggaatg ggtgatggag gtggaatgga agccatatcg 480

actgcagccg gcagggttgg cggattgatt tgctgggagc actggatgcc attgagccgg 540

caggtgctgc acatgtcggg tgaggaaatt catgtggcag tgtggcccac ggttcatgag 600

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tacattgtgg agccgttgtt tgatcgagag gcgattctca cagccgatct tgaattagcc 840

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<210>244

<211>332

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>244

Met Lys Gln Thr Arg Val Ala Ile Ile Gln Ala Glu Pro Val Tyr Leu

1 5 10 15

Asn Leu Gln Ala Ser Val Ala Arg Ala Ile Asp Leu Ala Gly Arg Ala

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Ala Lys Gln Gly Ala Arg Leu Ile Val Phe Gly Glu Thr Trp Leu Pro

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Gly Tyr Pro Ala Trp Leu Asp Tyr Cys Pro Gly Met Ala Phe Trp Asp

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Val Ile Pro Gly Lys Glu Ile Glu Gln Leu Cys Lys Thr Ala Ala Glu

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Leu Gly Val Val Ile Ser Ile Gly Val Asn Glu Lys Ile Leu Glu Gly

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Pro Gly Asn Gly Thr Leu Tyr Asn Ser Leu Leu Leu Ile Asp Glu Ser

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Gly Lys Leu Ala Gly His His Arg Lys Leu Val Pro Thr Tyr Thr Glu

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Arg Met Val Trp Gly Met Gly Asp Gly Gly Gly Met Glu Ala Ile Ser

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Thr Ala Ala Gly Arg Val Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu His Trp Met

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Pro Leu Ser Arg Gln Val Leu His Met Ser Gly Glu Glu Ile His Val

180 185 190

Ala Val Trp Pro Thr Val His Glu Val His Gln Leu Ala Ser Arg His

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Tyr Ala Phe Glu Gly Arg Cys Phe Val Leu Ala Ala Gly Leu Leu Met

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Lys Val Arg Asp Ile Pro Pro Glu Leu Glu Leu Pro Ser Gln Met Ser

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Arg Glu Ser Glu Asp Trp Leu Leu Arg Gly Gly Ser Ala Val Ile Gly

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Pro Asp Gly Lys Tyr Ile Val Glu Pro Leu Phe Asp Arg Glu Ala Ile

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Leu Thr Ala Asp Leu Glu Leu Ala Ala Cys Asp Arg Glu Lys Met Thr

275 280 285

Leu Asp Val Thr Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Leu Phe His Leu Glu

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Phe Arg Lys Gln Gln Ser Gly His Ile Ala Gly Ala Gly Thr Ile Ser

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Arg Gln Lys Ser Ala Pro Asp Arg Ala Asp Asp His

325 330

<210>245

<211>999

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>245

atgggtgaga atgccaactt caccgtcgca gctgtccagg caacgccggt cttcttagac 60

cgggatgcga cggtcgagaa ggcttgcgag ctcatcgctg aagccgggcg aaacggagcg 120

cgcctggccg tttttcccga ggcgtttgtg ccggcttacc cggactgggt ctgggctgtt 180

ccgccgggcg attcaaggct gctgcacgag ctctacggtg agctgatcca gaactctgtc 240

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<211>332

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Met Gly Glu Asn Ala Asn Phe Thr Val Ala Ala Val Gln Ala Thr Pro

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Val Phe Leu Asp Arg Asp Ala Thr Val Glu Lys Ala Cys Glu Leu Ile

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Ala Glu Ala Gly Arg Asn Gly Ala Arg Leu Ala Val Phe Pro Glu Ala

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Ser Arg Leu Leu His Glu Leu Tyr Gly Glu Leu Ile Gln Asn Ser Val

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Thr Ile Pro Ser Glu Ser Thr Glu Lys Leu Cys Arg Ala Ala Arg Gly

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Ala Lys Val Cys Val Ala Ile Gly Ile Asn Glu Arg Asn Ala Glu Ala

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Ser Gly Gly Ser Leu Tyr Asn Ser Leu Leu Tyr Ile Ser Pro Asp Gly

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Leu Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Ile Asp Val Phe Glu Leu

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Pro Phe Cys Arg Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro

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Ala Thr Trp Asp His Gly Glu Pro Trp Leu Ser Thr Leu Arg His Ile

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Ala Arg Glu Gly Arg Ala Tyr Val Ile Gly Val Cys Met Pro Met Arg

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Gly Arg Asp Trp Ile Asn Thr Gly Asp Ser Ala Ile Val Gly Pro Asp

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Gly Asn Phe Ile Ala Gly Pro Leu Ser Glu Arg Glu Glu Ile Leu Tyr

260 265 270

Ala Asp Ile Asp Leu Asn Arg Leu Ala Asn Ser Lys Trp Met Leu Asp

275 280 285

Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Gln Leu Thr Val Asn

290 295 300

Arg Glu Pro Asn Pro Met Ile Ser Glu Asp Gly His Lys Thr Val Pro

305 310 315 320

Thr Leu Pro Lys Arg Ala Gly Lys Ser Arg Thr Arg

325 330

<210>247

<211>990

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>247

atgccgaccc ccaaggaaaa gtttagaatc gccgccgttc aggcttgccc cgtttttctg 60

gaccgggggg agacggtaaa gaaggcctgc cggctggcgg ccgaggccgg gggccagggc 120

gcccggctga tcgtgtttcc ggagtccttc atccccgctt acccggactg ggtgtgggcc 180

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tacctggtca tgggggtcac cgagcgggac accgaggcca gcggggcaag cctgtacaac 360

accctcctct atttcggtcc ccagggaagc ctgctgggaa aacaccgcaa actggtgccc 420

acgggagggg aacggaccgt ctgggcccgg ggggacggca gcacgctgca ggtgtacgat 480

acccccctgg gaaagatcgg cggcctgatc tgctgggaga actacatgcc cctggcccgc 540

tacgccatgt atgcgtgggg cactcagatt tacctggccc ccacctggga ccggggggaa 600

ccctggcttt caaccctgcg gcacatcgcc aaggaagggc gggtttacgt ggtggggtgc 660

tgcatggcta tgcaaaaagg ggacatcccg gatcgcttcg aatacaagca aaaatactat 720

cccgcagccc gggagtggat caacacgggc gacagcgcca tcctgaaccc ggagggggaa 780

ttcatcgccg ggccggcggg aaagaaggaa gagatcctgt acgctgaaat agacccccgg 840

cagatggggg ggcccaagtg gatgctggac gtggccggcc attacgcccg gccggatgtc 900

ttcgaactga tcgttcaccg ggaggcccgg ccgatgatcc gggtgacgga agcgccgtct 960

ccgggagaga aagaaacggg tgaaggatag 990

<210>248

<211>329

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>248

Met Pro Thr Pro Lys Glu Lys Phe Arg Ile Ala Ala Val Gln Ala Cys

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Pro Val Phe Leu Asp Arg Gly Glu Thr Val Lys Lys Ala Cys Arg Leu

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Ala Ala Glu Ala Gly Gly Gln Gly Ala Arg Leu Ile Val Phe Pro Glu

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Ser Phe Ile Pro Ala Tyr Pro Asp Trp Val Trp Ala Val Pro Pro Gly

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Val Glu Val Pro Gly Pro Val Thr Glu Glu Leu Gly Arg Ala Ala Glu

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Ala Ser Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Phe Gly Pro Gln

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165 170 175

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180 185 190

Ala Pro Thr Trp Asp Arg Gly Glu Pro Trp Leu Ser Thr Leu Arg His

195 200 205

Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Val Gly Cys Cys Met Ala Met

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Gln Lys Gly Asp Ile Pro Asp Arg Phe Glu Tyr Lys Gln Lys Tyr Tyr

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Pro Ala Ala Arg Glu Trp Ile Asn Thr Gly Asp Ser Ala Ile Leu Asn

245 250 255

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325

<210>249

<211>1017

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>249

atgggcattc aacatccgaa atatcgcgtc gcggtggtgc aggcggcacc ggcctggctc 60

gacctcgagg cgtcggtcag caagagcatc gcgctgatag aggaggccgc cgccaagggc 120

gccaagctga tcgcgttccc cgaggccttc atccccggct atccctggta catctggctg 180

gactcgccgg cctgggcgat cggccgcggc ttcgtgcagc gctatttcga caattcgctc 240

agctatgaca gcccgcaggc ggagcgcctg aggctcgcag tgaagaaggc cggcatgacc 300

gcagtgctcg gcctgtccga gcgcgacggc ggcagcctct atctcgcgca atggttgatc 360

ggacccgacg gcgagaccat cgcaaagcgg cgcaagctgc ggccgaccca tgccgagcgc 420

accgtctacg gcgagggcga cggcagcgac cttgcggtgc atgaccgccc cggcatcggc 480

cggctcggtg cgctgtgctg ctgggagcat ctgcagccgc tgtcgaaata cgcgatgtac 540

gcccagaacg agcaggtgca tgtcgcggcc tggccgagct tctcgctgta cgatccgttc 600

gcgccggcgc tcggctggga ggtcaacaat gcggcctcgc gcgtctatgc cgtcgagggc 660

tcctgcttcg tgctggcgcc ctgcgccacc gtctcgcagg cgatgatcga cgagctctgc 720

gaccgcgacg acaagcatgc gctgctgcat gttggcggcg gccatgccgc gatcttcggc 780

cccgacggca gcgcgatcgc ggacaagctt ccgtccgacc aggagggcct cctgttcgcc 840

gacatcgatc tcggcgcgat cgggatcgcg aagaatgccg ctgatccggc cgggcactat 900

tcgcgcccgg acgtgacgcg gctgctgctc aacaagaagc cctcgaagcg cgtcgagcac 960

ttcgcgctgc cgctcgacac gctcgcgggc gaggagatcg acgcggccgc aagctaa 1017

<210>250

<211>338

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>250

Met Gly Ile Gln His Pro Lys Tyr Arg Val Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ala Trp Leu Asp Leu Glu Ala Ser Val Ser Lys Ser Ile Ala Leu

20 25 30

Ile Glu Glu Ala Ala Ala Lys Gly Ala Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Ala Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Asp Ser Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ser Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Glu Arg Leu Arg Leu Ala Val Lys Lys

85 90 95

Ala Gly Met Thr Ala Val Leu Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Leu Ala Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

115 120 125

Lys Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Tyr Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Asp Arg Pro Gly Ile Gly

145 150 155 160

Arg Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys

165 170 175

Tyr Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Val Ala Ala Trp Pro

180 185 190

Ser Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala Pro Ala Leu Gly Trp Glu Val

195 200 205

Asn Asn Ala Ala Ser Arg Val Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Val

210 215 220

Leu Ala Pro Cys Ala Thr Val Ser Gln Ala Met Ile Asp Glu Leu Cys

225 230 235 240

Asp Arg Asp Asp Lys His Ala Leu Leu His Val Gly Gly Gly His Ala

245 250 255

Ala Ile Phe Gly Pro Asp Gly Ser Ala Ile Ala Asp Lys Leu Pro Ser

260 265 270

Asp Gln Glu Gly Leu Leu Phe Ala Asp Ile Asp Leu Gly Ala Ile Gly

275 280 285

Ile Ala Lys Asn Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp

290 295 300

Val Thr Arg Leu Leu Leu Asn Lys Lys Pro Ser Lys Arg Val Glu His

305 310 315 320

Phe Ala Leu Pro Leu Asp Thr Leu Ala Gly Glu Glu Ile Asp Ala Ala

325 330 335

Ala Ser

<210>251

<211>978

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>251

gtgaccatcg tgagagctgc cgccgtgcag atcagtcccg tgctctacag ccgggaagcc 60

accgtagaaa aagtcgttcg caagatccgc gaactgggaa gaaacggcgt gcagttcgcc 120

accttcccgg aaaccctggt gccctactac ccgtacttcg cggccgtgca gacgggcatc 180

gaactgctgt ccggcaagga gcacctgcga ctgctggaac aatccgtaac ggttccctcg 240

cccgccaccg atgccattgc ccaggcggca cgcgaagccg gcatggtggt gtccatcggt 300

gtcaacgagc gcgacggagg caccatctac aacacgcagc tgctgtttga cgccgacggc 360

acgctggtac agcgccgccg caagatcacg ccgacgcatt tcgagcgcat ggtctggggc 420

cagggcgacg gctcgggcct gcgagccgtg gacaccaagg ccggccgcat cggtcagctc 480

gcctgcttcg agcacaacaa cccgctggcg cgctacgcca tgatcgccga cggtgagcag 540

atccattcgg ccatgtaccc gggctctgcc ttcggcgagg gcttcgcgca gcgcatggaa 600

atcaacatac gccagcacgc cctggagtct ggctgcttcg tggtgaatgc gaccgcgtgg 660

ctggatgccg accagcaggc gcagatcatg aaggatacgg gctgcggcat cggcccgatc 720

tccggcggct gcttcacgac catcgtcacg ccggacggca tgctgatcgg tgaacccctc 780

cgcgaaggcg aaggcgaagt catcgccgac ctcgatttca ccctgatcga ccggcgcaag 840

ctgctggtgg actcggtggg ccactacaac cgtccggagc tgctgagcct gctgatcgat 900

cgcacccctg cggcgaactt ccatgagcgc aatgcgcttc cgtccgtcaa caccgccagc 960

agcctcgaaa tcgtctga 978

<210>252

<211>325

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>252

Val Thr Ile Val Arg Ala Ala Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Ala Thr Val Glu Lys Val Val Arg Lys Ile Arg Glu Leu

20 25 30

Gly Arg Asn Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Leu Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ala Ala Val Gln Thr Gly Ile Glu Leu Leu Ser

50 55 60

Gly Lys Glu His Leu Arg Leu Leu Glu Gln Ser Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Pro Ala Thr Asp Ala Ile Ala Gln Ala Ala Arg Glu Ala Gly Met Val

85 90 95

Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Thr

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Val Gln Arg Arg Arg Lys

115 120 125

Ile Thr Pro Thr His Phe Glu Arg Met Val Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Thr Lys Ala Gly Arg Ile Gly Gln Leu

145 150 155 160

Ala Cys Phe Glu His Asn Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Ile Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Tyr Pro Gly Ser Ala Phe Gly

180 185 190

Glu Gly Phe Ala Gln Arg Met Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala Leu

195 200 205

Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Met Lys Asp Thr Gly Cys Gly Ile Gly Pro Ile

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Phe Thr Thr Ile Val Thr Pro Asp Gly Met Leu Ile

245 250 255

Gly Glu Pro Leu Arg Glu Gly Glu Gly Glu Val Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Phe Thr Leu Ile Asp Arg Arg Lys Leu Leu Val Asp Ser Val Gly His

275 280 285

Tyr Asn Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro Ala

290 295 300

Ala Asn Phe His Glu Arg Asn Ala Leu Pro Ser Val Asn Thr Ala Ser

305 310 315 320

Ser Leu Glu Ile Val

325

<210>253

<211>924

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>253

atgtcaaacg agaaccacaa ccaaacattc aaagttgccg cggtgcaggc cacacctgta 60

ttcctcgatc gtgaagcgac catcgacaaa gcttgcgagt tgattgctgc agccggcaat 120

gaaggggcga ggctggttgt cttcccggag gcattcatcc cgtcctatcc agattgggta 180

tgggcaatcc caccgggcga agaaggcgtg ctcaatgagt tgtacgcgga actgctctcc 240

aattcggtca cgattcccag tgacgtgacg gatagactgt gccgggccgc gaggcttgcc 300

aatgcctacg tagtgatggg gatgagcgaa tgcaatgccg aggccagtgg cgcaagcctg 360

tataacacgc tattgtacat cgatgcgaag ggtgaaatcc tgggtaaaca tcgaaagttg 420

gtgccaactg gcggcgagcg actggtgtgg gcacagggcg atggcagcac gctgcaggtc 480

tacgatactc cactgggtaa actcggcggt ttaatttgct gggagaatta tatgccgctg 540

gcccgctaca ccatgtacgc ctggggcaca caaatctata tcgcagcgac atgggatcgc 600

gggcaaccct ggctctccac cttgcggcat atcgccaaag aaggcagggt gtacgtgatc 660

ggctgttgta tcgcgatgcg caaagatgat atcccagagc gttacccaat gaagcagaag 720

ttttacgcgg aggccgatga gtggatcaat ataggcgaca gcgcgatcgt caatcctgaa 780

gggcagttta tcgcggggcc ggtacgcaaa caggaagaga ttctctacgc ggagattaat 840

ccgcgcatgg tgcaaggccc gaagtggatg ctcgacgtgg cagggcacta cgccaggccg 900

gacgtattcc agttgacagt gtaa 924

<210>254

<211>307

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>254

Met Ser Asn Glu Asn His Asn Gln Thr Phe Lys Val Ala Ala Val Gln

1 5 10 15

Ala Thr Pro Val Phe Leu Asp Arg Glu Ala Thr Ile Asp Lys Ala Cys

20 25 30

Glu Leu Ile Ala Ala Ala Gly Asn Glu Gly Ala Arg Leu Val Val Phe

35 40 45

Pro Glu Ala Phe Ile Pro Ser Tyr Pro Asp Trp Val Trp Ala Ile Pro

50 55 60

Pro Gly Glu Glu Gly Val Leu Asn Glu Leu Tyr Ala Glu Leu Leu Ser

65 70 75 80

Asn Ser Val Thr Ile Pro Ser Asp Val Thr Asp Arg Leu Cys Arg Ala

85 90 95

Ala Arg Leu Ala Asn Ala Tyr Val Val Met Gly Met Ser Glu Cys Asn

100 105 110

Ala Glu Ala Ser Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Asp

115 120 125

Ala Lys Gly Glu Ile Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly

130 135 140

Gly Glu Arg Leu Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Gln Val

145 150 155 160

Tyr Asp Thr Pro Leu Gly Lys Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn

165 170 175

Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr Thr Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile

180 185 190

Tyr Ile Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Gln Pro Trp Leu Ser Thr Leu

195 200 205

Arg His Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Ile Gly Cys Cys Ile

210 215 220

Ala Met Arg Lys Asp Asp Ile Pro Glu Arg Tyr Pro Met Lys Gln Lys

225 230 235 240

Phe Tyr Ala Glu Ala Asp Glu Trp Ile Asn Ile Gly Asp Ser Ala Ile

245 250 255

Val Asn Pro Glu Gly Gln Phe Ile Ala Gly Pro Val Arg Lys Gln Glu

260 265 270

Glu Ile Leu Tyr Ala Glu Ile Asn Pro Arg Met Val Gln Gly Pro Lys

275 280 285

Trp Met Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Gln

290 295 300

Leu Thr Val

305

<210>255

<211>1005

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>255

atgacaatgt ctaagaccaa atttagggtt gcagctgtgc aggcggcgcc ggttttcctt 60

gatcgggaag cgacgttgga taaagcttgt ggattgattg aggaggcggg ccgcaacggc 120

gccagcctcg tcgtcttccc tgagtcattc attccggcct accccgattg ggtttgggct 180

gtgccggcgg gcgaagaagc tttactcaat gaactgtacg cacaactgtt ggccaacgcc 240

gttgaaattc ccggcccggc cactcaacgt ttgagccagg cggctaaaaa ggctaaggtt 300

cacctggcta tgggcctgac cgaacgcaac agcgaggcca gcggcggcag cctttacaac 360

accttgctct atcttgaccc gcagggccac attctgggca agcatcgtaa gctggtgccc 420

accggcggtg agcggctggt ttgggcccag ggcgacggca gcactttgca agtttacgat 480

acgcctctgg gtaaactcag cggcctgatt tgctgggaaa attatatgcc gctggcgcgc 540

tacgcgctgt atgcctgggg tacgcaaatt tatattgcgg ccacctggga tcggggtgag 600

ccgtggcttt cgacgttgcg gcatattgcc aaagagggcc gggtgttggt catcggttgc 660

ggtatggcct tgcgcaaggc tgatattcct gatcattttg aattcaagca gcgcttttat 720

caaaacgccg ccgagtggat caacgggggc gacagcgcca ttgtcaaccc tgatggtgaa 780

tttattgctg gccccttaag cgagcaggaa ggcattttgt acgccgagat tgatccggcc 840

cagatgggcg ggccaaagtg gatgctcgac gtggccgggc attacgctcg cccggatgtg 900

tttgaactga cggtccatac cgccgcccga cccatgatca cctcgaaaaa ggatggccta 960

acacccgccg aggccgttac gcaagtaacg aaagcattat tgtaa 1005

<210>256

<211>334

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>256

Met Thr Met Ser Lys Thr Lys Phe Arg Val Ala Ala Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Val Phe Leu Asp Arg Glu Ala Thr Leu Asp Lys Ala Cys Gly Leu

20 25 30

Ile Glu Glu Ala Gly Arg Asn Gly Ala Ser Leu Val Val Phe Pro Glu

35 40 45

Ser Phe Ile Pro Ala Tyr Pro Asp Trp Val Trp Ala Val Pro Ala Gly

50 55 60

Glu Glu Ala Leu Leu Asn Glu Leu Tyr Ala Gln Leu Leu Ala Asn Ala

65 70 75 80

Val Glu Ile Pro Gly Pro Ala Thr Gln Arg Leu Ser Gln Ala Ala Lys

85 90 95

Lys Ala Lys Val His Leu Ala Met Gly Leu Thr Glu Arg Asn Ser Glu

100 105 110

Ala Ser Gly Gly Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Leu Asp Pro Gln

115 120 125

Gly His Ile Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly Gly Glu

130 135 140

Arg Leu Val Trp Ala Gln Gly Asp Gly Ser Thr Leu Gln Val Tyr Asp

145 150 155 160

Thr Pro Leu Gly Lys Leu Ser Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met

165 170 175

Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile Tyr Ile

180 185 190

Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Glu Pro Trp Leu Ser Thr Leu Arg His

195 200 205

Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Leu Val Ile Gly Cys Gly Met Ala Leu

210 215 220

Arg Lys Ala Asp Ile Pro Asp His Phe Glu Phe Lys Gln Arg Phe Tyr

225 230 235 240

Gln Asn Ala Ala Glu Trp Ile Asn Gly Gly Asp Ser Ala Ile Val Asn

245 250 255

Pro Asp Gly Glu Phe Ile Ala Gly Pro Leu Ser Glu Gln Glu Gly Ile

260 265 270

Leu Tyr Ala Glu Ile Asp Pro Ala Gln Met Gly Gly Pro Lys Trp Met

275 280 285

Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Glu Leu Thr

290 295 300

Val His Thr Ala Ala Arg Pro Met Ile Thr Ser Lys Lys Asp Gly Leu

305 310 315 320

Thr Pro Ala Glu Ala Val Thr Gln Val Thr Lys Ala Leu Leu

325 330

<210>257

<211>942

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>257

atgaacaaga tcgcgatcat tcagcgceca cccgtgctac tcgaccgcat cgccacgctg 60

gcggttgcgg tggagtcgat cgacgaagct gccgcagccg gtgcctcact gatcgttctt 120

ccagaaacct tcatccccgg ctacccgtcc tggatctggc gtctcgcgcc ggggagggat 180

ggtgcgctca ttgcccagtt gcatgcccga ctgctcgcca acgcggtcga tcttgcggct 240

ggagatctgg atgccctgtg tgaagttgcg cacggccacc gggtgaccgt ggtgtgcggc 300

ctcaacgaat gcgagcgcag tcgcggcggg ggcactctct acaacacggt cgtcgtgatc 360

gaccccgacg gcaagctgtg caatcgccac cgcaagctga tgccgaccaa cccggaacgc 420

atggtgcacg gtctgggtga tgcatcgggc ctgcgcgccg tcgacacccc ggtgggtcga 480

gtgggcgcac tcatctgctg ggaaaactat atgccgctgg cacgctacgc actttacgcc 540

gagggggtgg aagtctacgt ggcgcccacc tatgacagcg gcgatggctg gatcagtacg 600

atgcgtcata ttgcgcttga gggacgctgc tgggtgctgg gtagcggaac cgtactgcgt 660

ggcagcgacg tcccagaaga ctttccgtca cacctggacc tgtttcccga cgcggaggaa 720

tggatcaatc cgggcgactc ggtggtcgtc gatcctcagg gcaagatcgt cgcaggcccg 780

atgcgacgtg agacaggcat tctctacgca gaaatcgacg ccgaacgggt cgcgccttcg 840

cgccgcacgc tcgatgtcgc cggacactac gcccgcccgg atattttcga gctccatgtc 900

cgacgtacgc cggcgatgcc ggtccacgcc gttgatgcat ga 942

<210>258

<211>313

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>258

Met Asn Lys Ile Ala Ile Ile Gln Arg Pro Pro Val Leu Leu Asp Arg

1 5 10 15

Ile Ala Thr Leu Ala Val Ala Val Glu Ser Ile Asp Glu Ala Ala Ala

20 25 30

Ala Gly Ala Ser Leu Ile Val Leu Pro Glu Thr Phe Ile Pro Gly Tyr

35 40 45

Pro Ser Trp Ile Trp Arg Leu Ala Pro Gly Arg Asp Gly Ala Leu Ile

50 55 60

Ala Gln Leu His Ala Arg Leu Leu Ala Asn Ala Val Asp Leu Ala Ala

65 70 75 80

Gly Asp Leu Asp Ala Leu Cys Glu Val Ala His Gly His Arg Val Thr

85 90 95

Val Val Cys Gly Leu Asn Glu Cys Glu Arg Ser Arg Gly Gly Gly Thr

100 105 110

Leu Tyr Asn Thr Val Val Val Ile Asp Pro Asp Gly Lys Leu Cys Asn

115 120 125

Arg His Arg Lys Leu Met Pro Thr Asn Pro Glu Arg Met Val His Gly

130 135 140

Leu Gly Asp Ala Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Thr Pro Val Gly Arg

145 150 155 160

Val Gly Ala Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr

165 170 175

Ala Leu Tyr Ala Glu Gly Val Glu Val Tyr Val Ala Pro Thr Tyr Asp

180 185 190

Ser Gly Asp Gly Trp Ile Ser Thr Met Arg His Ile Ala Leu Glu Gly

195 200 205

Arg Cys Trp Val Leu Gly Ser Gly Thr Val Leu Arg Gly Ser Asp Val

210 215 220

Pro Glu Asp Phe Pro Ser His Leu Asp Leu Phe Pro Asp Ala Glu Glu

225 230 235 240

Trp Ile Asn Pro Gly Asp Ser Val Val Val Asp Pro Gln Gly Lys Ile

245 250 255

Val Ala Gly Pro Met Arg Arg Glu Thr Gly Ile Leu Tyr Ala Glu Ile

260 265 270

Asp Ala Glu Arg Val Ala Pro Ser Arg Arg Thr Leu Asp Val Ala Gly

275 280 285

His Tyr Ala Arg Pro Asp Ile Phe Glu Leu His Val Arg Arg Thr Pro

290 295 300

Ala Met Pro Val His Ala Val Asp Ala

305 310

<210>259

<211>981

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>259

atggccatca tcaaagccgc cgccgtccag atcagtccgg tgctgtatag ccgcgaggga 60

accgtggaca aggtctgcca gcagatcatc gccctcggtc agcaaggcgt gcaatttgcg 120

gtctttccgg aaacggtggt gccgtactac ccctatttct ccttcgtcca gccgccgttc 180

gccatgggca aggaacacct gaaactgttg gaacaatcgg tgattgtgcc gtcggctgcc 240

accttggcga tcggcgaagc gtgcaaacaa gcgggaatgg tggtgtctat cggcgtcaat 300

gagcgcgatg gcggcacgat ctacaacgcc cagttgctgt ttgacgctga tggcagcttg 360

attcagcacc gtcgcaaaat aaccccgacg taccacgagc ggatgatctg gggtcaaggc 420

gacggctccg ggttgcgcgc catcgacagc gcggtcgggc gtattggctc gctggcctgc 480

tgggaacatt acaacccctt ggcccgctac gccctgatgg ccgacggcga gcagattcac 540

gcggctatgt ttcccggctc tctggtgggt gacatttttg ccgatcagat agaggtcact 600

attcgtcatc acgccttgga gtccggctgc ttcgtggtca actccaccgc gtggcttgat 660

gctgatcagc aaggccaaat catgcaggac accggttgca gcattggccc aatctcgggt 720

ggctgcttca cggccatcgt ttccccggaa ggcaaattac tcggcgaacc gctgcgttca 780

ggtgagggcg cagtcatcgc cgacctggac atggcattga tcgacaagcg caaacggatg 840

atggattccg tcggccatta cagccgccca gaactgctca gtttattgat cgaccgcacg 900

cccaccgctc atgtgcatga gcgcggcgcc catcaccttg ccgtagcctc tatcggggag 960

cttgaccatg caaaccaatg a 981

<210>260

<211>326

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>260

Met Ala Ile Ile Lys Ala Ala Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Glu Gly Thr Val Asp Lys Val Cys Gln Gln Ile Ile Ala Leu

20 25 30

Gly Gln Gln Gly Val Gln Phe Ala Val Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Pro Pro Phe Ala Met Gly Lys

50 55 60

Glu His Leu Lys Leu Leu Glu Gln Ser Val Ile Val Pro Ser Ala Ala

65 70 75 80

Thr Leu Ala Ile Gly Glu Ala Cys Lys Gln Ala Gly Met Val Val Ser

85 90 95

Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Ala Gln Leu

100 105 110

Leu Phe Asp Ala Asp Gly Ser Leu Ile Gln His Arg Arg Lys Ile Thr

115 120 125

Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly Ser Gly

130 135 140

Leu Arg Ala Ile Asp Ser Ala Val Gly Arg Ile Gly Ser Leu Ala Cys

145 150 155 160

Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met Ala Asp Gly

165 170 175

Glu Gln Ile His Ala Ala Met Phe Pro Gly Ser Leu Val Gly Asp Ile

180 185 190

Phe Ala Asp Gln Ile Glu Val Thr Ile Arg His His Ala Leu Glu Ser

195 200 205

Gly Cys Phe Val Val Asn Ser Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp Gln Gln

210 215 220

Gly Gln Ile Met Gln Asp Thr Gly Cys Ser Ile Gly Pro Ile Ser Gly

225 230 235 240

Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Ser Pro Glu Gly Lys Leu Leu Gly Glu

245 250 255

Pro Leu Arg Ser Gly Glu Gly Ala Val Ile Ala Asp Leu Asp Met Ala

260 265 270

Leu Ile Asp Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His Tyr Ser

275 280 285

Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro Thr Ala His

290 295 300

Val His Glu Arg Gly Ala His His Leu Ala Val Ala Ser Ile Gly Glu

305 310 315 320

Leu Asp His Ala Asn Gln

325

<210>261

<211>1014

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>261

atgggtctgg ttcatcagaa atacaaggta gcggtggttc aggcggcacc ggtttttctc 60

gatctcgatg caaccgtgga caagaccatt gcgctgatcg aggaagcttc cgcgcaaggc 120

gcaaaactgg tcgcgtttcc cgagaccttc attcccggat atccgtggca gatctggctc 180

ggcgcgccgg cctgggcgat cggccgcggc tttgtgcagc gctacttcga caattcgctg 240

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<210>262

<211>337

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>262

Met Gly Leu Val His Gln Lys Tyr Lys Val Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Val Phe Leu Asp Leu Asp Ala Thr Val Asp Lys Thr Ile Ala Leu

20 25 30

Ile Glu Glu Ala Ser Ala Gln Gly Ala Lys Leu Val Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Gln Ile Trp Leu Gly Ala Pro Ala

50 55 60

Trp Ala Ile Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Gly Phe Asp Ser Pro Gln Ala Glu Lys Ile Arg Gln Ala Val Lys Arg

85 90 95

Ala Lys Leu Thr Ala Val Leu Gly Leu Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ala

115 120 125

Lys Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Asp Arg Ala Asp Val Gly

145 150 155 160

Arg Leu Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys

165 170 175

Tyr Ala Met Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Val Gly Ala Trp Pro

180 185 190

Ser Phe Ser Leu Tyr Asp Pro Phe Ala His Ala Leu Gly His Glu Val

195 200 205

Asn Asn Ala Ala Ser Lys Val Tyr Ala Val Glu Gly Ser Cys Phe Phe

210 215 220

Leu Gly Pro Cys Ala Val Val Ser Gln Ala Met Ile Asp Glu Leu Cys

225 230 235 240

Asp Ser Pro Glu Lys His Ala Phe Leu His Val Gly Gly Gly His Ala

245 250 255

Val Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ser Ser Leu Ala Glu Lys Leu Pro Pro

260 265 270

Asp Gln Glu Gly Ile Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Gly Met Ile Gly

275 280 285

Val Ala Lys Asn Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp

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Val Thr Arg Leu Leu Leu Asn Thr Thr Arg Ala Asn Arg Val Glu His

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Phe Ser Leu Pro Val Asp Ala Glu Val Met Ser Glu Ile Arg Leu Gln

325 330 335

Ala

<210>263

<211>1014

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>263

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<211>337

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>264

Met Lys Val Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Leu Ser Pro Val Leu Tyr

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Ser Arg Glu Ala Thr Val Ala Lys Val Val Arg Lys Ile His Glu Leu

20 25 30

Gly Gln Gln Gly Val Gln Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Ala Val Gln Thr Pro Met Gln Leu Leu Ala

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Gly Thr Glu His Leu Lys Leu Leu Asp Gln Ala Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Pro Ala Thr Asp Ala Ile Gly Glu Ala Ala Arg Lys Ala Gly Met Val

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Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Leu Tyr Asn Thr

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Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys

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Ile Thr Pro Thr His Phe Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly

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Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Lys Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu

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Ala Cys Phe Glu His Asn Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Met Ala

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Glu Gly Phe Ala Gln Arg Met Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala Leu

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Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

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Gln Gln Ala Gln Ile Met Lys Asp Thr Gly Cys Gly Ile Gly Pro Ile

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Ser Gly Gly Cys Phe Thr Thr Ile Val Ala Pro Asp Gly Thr Leu Leu

245 250 255

Gly Glu Pro Leu Arg Ser Gly Glu Gly Glu Val Ile Ala Asp Leu Asp

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Phe Thr Glu Ile Asp Arg Arg Lys Met Leu Met Asp Ser Ala Gly His

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Tyr Asn Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro Thr

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Ala Asn Val His Glu Arg Met Ala His Pro Gln Ala Ser Thr Lys Gln

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Pro Arg Ser Gly Asp Leu Pro Ala Ala Leu Ala Gly Ala Gln Glu Ile

325 330 335

Leu

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<211>999

<212>DNA

<213>未知

<220>

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<400>265

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<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>266

Met Leu Asn Leu Gly Ile Val Gln Met Asn Ala Glu Pro Leu Asn Val

1 5 10 15

Glu Gly Asn Leu Leu Lys Ala Glu Arg Tyr Val Ala Lys Cys Ala Ala

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Asp Gly Ala Gln Leu Val Val Leu Pro Glu Met Phe Asn Val Gly Phe

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His Leu Gly Glu Ser Leu Met Met Val Ala Glu Pro Leu Asp Gly Lys

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Phe Asp Ser Phe Ala Arg Glu Thr His Glu Gly Phe Lys Gln Ser Gly

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Val Glu Ala Val Val Ile Ile Ala Leu Trp Gly Ala Asn Arg Ala Arg

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Arg Trp Ser Arg Leu Ala Ser Glu Asp Val Pro Arg Asn His Ala Lys

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Glu Leu Gly Val Pro Val Ala Phe Val Asn Gln Ser Gly Thr Ile Arg

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Met Thr Ser Pro Ile Pro Phe Pro Asp Trp Pro Val Gln Ser Ser Phe

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Tyr Asp Phe Ile Gly Lys Ser His Val Arg Asp Ala Ser Gly Glu Val

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Ile Ala Arg Val Asp Glu Gly Glu Ile Asp Ser Cys Leu Val Val Pro

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Val Glu Val Glu Gln Ala Gln Ser Arg Pro Glu Ile Arg Lys Ser Asn

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Ile Ser Pro Gly Tyr Leu Gly Lys Asp Tyr Tyr Phe Val Glu Pro Pro

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Leu Ile Cys Lys Leu Phe Gln Val Trp Phe Leu Ser Gly Leu Val Pro

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Thr Glu Tyr Glu Ala Arg Arg Leu Arg His Leu Phe

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<210>267

<211>1038

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>267

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acgggcgaga cgcgcgcagt gcgccgcaag ttgcgaccaa cgcacgtcga gcgaaccgtt 420

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ggtctcttgt gctgggaaca cctgcaaccg ctgtcgcgct acgcgatgtt ctcgatgaac 540

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<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>268

Met Gly Ile Thr His Pro Lys Phe Lys Ala Ala Ala Val Gln Ala Ala

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Pro Gly Phe Leu Asp Ser Glu Ala Thr Val Asp Lys Thr Ile Arg Leu

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Gly Asp Asp Leu Phe Arg Arg Ile Glu Arg Ala Ala Ala Lys Ala Lys

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Leu Ala Gln Ala Phe Ile Ser Ser Thr Gly Glu Thr Arg Ala Val Arg

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Asp Gly Ser Asp Phe Lys Val Phe Asp Thr Pro Leu Gly Arg Val Gly

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Gly Leu Leu Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Arg Tyr Ala Met

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Leu Tyr Thr Asp Phe Ala His Ala Leu Gly His Glu Leu Asn Leu Ala

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Ala Ser Ala Thr Tyr Ala Ala Glu Gly Gln Cys Tyr Val Ile Ala Ala

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Pro Pro Glu Tyr Leu Arg Val Gly Gly Gly Tyr Ala Met Ile Phe Ala

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Pro Asp Gly Arg Arg Ile Ala Ala Ala Leu Pro Pro Glu Gln Glu Gly

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Leu Asp Ser Ala Ala Arg Arg Glu Asn Glu Pro Ala Arg Glu Thr Ala

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<211>1014

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<220>

<223>从环境样品获得

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gagataatgt tcaaacggcg caagctgaag ccgacgcacg tcgaacgcac gttgttcggc 420

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acgcaactgc tgaactccga cggcggcaag gtcggcggcg gctactcgat gatcttcggt 780

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<211>337

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<220>

<223>从环境样品获得

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Met Ser Glu Thr Ala Phe Lys Ile Ala Val Val Gln Ala Ala Pro Val

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Glu Ala Gly Ala Lys Gly Ala Lys Leu Leu Ala Phe Pro Glu Val Phe

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Ala Val Ile Gly Phe Ser Glu Ile Asp Gly Gly Ser Leu Tyr Ile Ser

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Gln Ala Leu Ile Ser Asp Lys Gly Glu Ile Met Phe Lys Arg Arg Lys

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Cys Cys Ala Glu His Ile Gln Pro Leu Ser Lys Tyr Ala Met Tyr Ser

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Gln Ile Tyr Ala Leu Glu Gly Gly Cys Phe Val Leu His Ala Ser Ala

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Thr Gln Leu Leu Asn Ser Asp Gly Gly Lys Val Gly Gly Gly Tyr Ser

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Asp Thr Glu Gly Ile Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Ala Asn Ile Ser

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Val Ala Lys Ala Ala Tyr Asp Pro Ser Gly His Tyr Ala Arg Gly Asp

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Val Val Arg Leu Met Val Asn Arg Asn Pro Arg His Thr Ser Val Ala

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Phe Gly Gly Gly Ala Gly Glu Ala Ala Thr Trp Thr Glu Ala Lys Ala

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Glu

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<220>

<223>从环境样品获得

<400>271

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tggggtattc cttctggtga gcaaggttta ctcaacgagc tctattcaga gttgctcacc 240

aattcggtca cgattcccag cgacgcgact gacagactgt gcgaggccgc gaagcttgct 300

aatgcctacg tggtgatggg aatgagtgaa cggaatgtcg aagcgagtgg tgcaagcctg 360

tataatacgc tcttgtacat agatgcgcag ggggagattt tagggaaaca tcgaaagttg 420

gtaccaacgg gcggtgagcg cctggtatgg gcgcaaggtg atggcagcac gctgcaggtc 480

tacgatactc cattgggaaa actcggtggt ttaatttgct gggaaaatta tatgccactg 540

gcacgctacg ctatgtatgc ctggggtaca caaatctatg tcgcagcaac gtgggatcgc 600

ggccaaccct ggctctcaac gttacggcat attgccaaag aaggcagggt atacgtaatt 660

ggttgctgta ttgcgatgcg taaagatgat attccagatc gttactccat gaagcagaag 720

tattacgctg aaatggagga atggattaat attggtgaca gcgcgattgt caatcccgaa 780

ggacacttta ttgcagggcc tgtgcgcaag caagaagaaa ttctttacgc ggagatcgat 840

ccacgcatgg tgcaaggccc gaagtggatg ctcgatgtgg ctgggcacta tgcgagacca 900

gatgtgttcc agttgacggt gcatacggat gtgaggcaga tgattcgggt ggaacatgat 960

tcataa 966

<210>272

<211>321

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>272

Met Ser Ser Glu Asn Asn Asn Ala Thr Phe Lys Val Ala Ala Val Gln

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Ala Thr Pro Val Tyr Leu Asp Arg Glu Ala Thr Ile Asp Lys Ala Cys

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Glu Leu Ile Ala Thr Ala Gly Ser Glu Gly Ala Arg Leu Ile Ile Phe

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Val Glu Ala Ser Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Asp

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Ala Gln Gly Glu Ile Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly

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Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile

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Tyr Val Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Gln Pro Trp Leu Ser Thr Leu

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Trp Met Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Gln

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Leu Thr Val His Thr Asp Val Arg Gln Met Ile Arg Val Glu His Asp

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Ser

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<213>未知

<220>

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Ile Ala Ser Ala Ala Lys Glu Gly Ala Gln Leu Val Val Phe Pro Glu

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Thr Phe Ile Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Ile Gln Pro Pro Val

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Leu Met Gly Lys Glu His Met Arg Leu Tyr Glu Glu Ala Val Thr Val

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Pro Gly Pro Val Thr Asp Ala Val Ser Arg Ala Ala Arg Ser Tyr Gly

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Met Val Val Val Leu Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Ser Ile Tyr

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Asn Thr Gln Leu Ile Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Leu Leu Lys Arg

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Leu Ser Gly Gly Cys Asn Thr Ala Ile Ile Gly Pro Glu Gly Asn His

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His Tyr Ser Arg Pro Asp Leu Leu Lys Leu Gln Leu Asn Ala Thr Ala

290 295 300

Trp Ser Val Leu Ala Gly Glu Gln Gly Ala Gly Ala Arg Glu Gln Gly

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Met Thr Lys Leu Lys Ile Ala Ile Gly Gln Phe Ser Ser Asn His Leu

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Asp Leu Lys Cys Ser Leu Glu Lys Leu Glu Lys Ile Met Glu Thr Ala

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His Lys Ala Lys Val Asp Phe Leu Val Leu Gly Glu Thr Trp Leu Ser

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Gly Tyr Pro Ala Trp Leu Asp His Cys Pro Asp Val Gly Arg Trp Asp

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65 70 75 80

Ser Val Pro Gly Lys Glu Phe Asp Phe Leu Thr Gly Leu Cys Lys Lys

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Gly Thr Leu Leu Asn His His Arg Lys Leu Val Pro Thr Phe Thr Glu

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Lys Leu Leu Tyr Gly His Gly Asp Gly His Gly Leu Lys Ser Met Asp

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Ala Leu Trp Pro Thr Val His Asp Ile His Gln Val Ala Ser Arg Ser

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Gln Asn Pro Asp Gln Leu Ile Leu Asn Gly Gly Ser Cys Val Ile Gly

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Pro Asp Gly Lys Tyr Leu Ile Glu Pro Val Phe Asp Arg Glu Glu Leu

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Ile Val Cys Glu Leu Asp Leu Asp Glu Ala Tyr Lys Glu Arg Met Thr

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Pro Val Phe Leu Asp Arg Glu Ala Thr Val Glu Lys Ala Cys Arg Leu

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Ile Ala Glu Ala Ala Lys Gln Gly Ala Arg Leu Ile Val Phe Pro Glu

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Ser Phe Ile Pro Thr Tyr Pro Asp Trp Val Trp Ala Val Pro Pro Gly

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Arg Glu Arg Ile Leu Asn Gln Leu Tyr Ser Glu Phe Leu Ala Asn Ala

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Val Asp Val Pro Gly Ala Ala Thr Glu Gln Leu Ala Gln Ala Ala Arg

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Met Ala Gly Ala Tyr Val Ile Met Gly Val Thr Glu Arg Asp Thr Ser

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Ala Ser Gly Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Phe Ser Pro Glu

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Gly Ile Leu Met Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Gly Gly Glu

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Arg Leu Val Trp Ala Tyr Gly Asp Gly Ser Thr Leu Glu Val Tyr Asp

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Thr Pro Leu Gly Lys Ile Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met

165 170 175

Pro Leu Ala Arg Tyr Thr Met Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile Tyr Ile

180 185 190

Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Glu Pro Trp Leu Ser Thr Leu Arg His

195 200 205

Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Tyr Val Ile Gly Cys Cys Ile Ala Leu

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Arg Gln Gly Asp Ile Pro Asp Arg Phe Glu Tyr Lys Gly Lys Phe Tyr

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Ser Gly Ser Arg Glu Trp Ile Asn Glu Gly Asp Ser Ala Ile Val Asn

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Pro Asp Gly Glu Phe Ile Ala Gly Pro Val Arg Met Lys Glu Glu Ile

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Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Ile Phe Glu Leu Ile

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Val His Arg Asn Pro His Pro Met Ile Lys Ile Ala Glu Asp Arg Gly

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Ala Gly Ile Ala Ser Ser Leu Ile Arg Pro Arg Pro Asn Leu Pro Pro

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<220>

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<223>从环境样品获得

<400>280

Met Gly Ile Thr His Pro Lys Tyr Lys Val Ala Ala Val Gln Ala Ala

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Pro Val Trp Leu Asp Leu Asp Ala Thr Val Asp Lys Cys Ile Arg Leu

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Ile Gln Glu Ala Ala Asp Lys Gly Cys Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

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Thr Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp His Ile Trp Met Gly Ala Pro Ala

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Trp Ala Ile Gly Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

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Ser Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Glu Lys Leu Arg Gln Ala Val Lys Ala

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Ala Gly Ile Thr Ala Ser Leu Gly Leu Ser Glu Arg Ser Gly Gly Ser

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Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Leu Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile Ser

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Gln Arg Arg Lys Leu Arg Pro Thr His Ser Glu Arg Thr Val Phe Gly

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Asp Gly Asp Gly Ser Asp Leu Lys Val His Asp Thr Pro Leu Gly Arg

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Val Gly Glu Leu Ala Cys Trp Glu Asn Ile Leu Ser Leu Asn Lys Tyr

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Ala Met Phe Ser Gln His Glu Gln Val His Ile Ala Ala Trp Pro Ser

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Asn Ala Val Ser Lys Val Tyr Ala Val Glu Gly Gly Cys Phe Val Val

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Ala Pro Cys Ala Ile Ile Ser Lys Glu Met Val Asp Glu Leu Cys Asp

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Thr Pro Asp Lys His Thr Leu Thr His Val Gly Gly Gly His Ala Val

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Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ala Pro Leu Ala Asp Lys Leu Pro Glu Asp

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Ala Glu Gly Leu Leu Ile Ala Glu Ile Asp Leu Gly Met Ile Gly Val

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Ala Lys Asn Ala Met Asp Pro Val Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val

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His Arg Leu Leu Leu Asn Arg Lys Lys Ala Ala Gln Val Glu His Phe

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Ala Leu Pro Val Asp Ala Ile Asp Ser Glu Pro Gln Ala Thr Thr Ala

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His

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<213>未知

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<400>282

Met Ser Lys Ile Ala Val Val Gln Glu Pro Pro Val Leu Leu Asp Arg

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Ala Ala Thr Leu Glu Arg Ala Val Ser Ala Ile Glu Arg Ala Ala Asp

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Val Gly Ala His Leu Val Val Phe Pro Glu Thr Tyr Val Pro Gly Tyr

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Pro Asp Trp Val Trp Arg Thr Arg Pro Asp Asp Phe Lys Leu Ala Gly

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Ala Leu His Glu Arg Leu Leu Ala Asn Ala Val Asp Leu Glu Lys Asp

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Gln Leu Ala Pro Leu Arg Glu Ala Ala Arg Arg Arg Gly Val Thr Ile

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Gly Ala Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro Leu Ala Arg Phe Ala

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Leu Tyr Ala Gln Gly Val Glu Val Tyr Leu Ala Pro Thr Trp Asp His

180 185 190

Gly Asp Thr Trp Leu Ala Ser Met Arg His Ile Ala Arg Glu Ala Arg

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Ala Trp Val Val Ser Gly Ala Ile Cys Met Gln Ala Lys Asp Val Pro

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Ala Gly Pro Leu His Arg Glu Arg Gly Ile Leu Tyr Ala Glu Cys Asp

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Pro Ala Arg Ala Ser Leu Ala Arg Arg Thr Leu Asp Val Ser Gly His

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<211>1017

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>283

atgggcatcg aacatccgaa gtacaaggtc gcggtggtgc aggcggcacc ggcctggctc 60

gatctcgacg cgtcgatcga caagaccatc gggctgatcg aggaggccgc ccaaaaaggc 120

gccaagctga ttgcattccc cgaggccttc atccccggtt acccctggca catctggatg 180

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<211>338

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<213>未知

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<223>从环境样品获得

<400>284

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Leu Ala Pro Cys Ala Thr Val Ser Gln Ala Met Ile Asp Glu Leu Cys

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305 310 315 320

Phe Ser Pro Pro Ala Glu Ala Leu Glu Pro Thr Asp Ile Ala Ala Ala

325 330 335

Ala Ser

<210>285

<211>918

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>285

atgaatacta atctagtaaa ggtcgcggcg gctcaagttg ctccccattt tctcaatttg 60

agcaatacgg tggaaaaaac ctgcaactta atttctgaag caggcaaaaa tggagcaaag 120

ctaatcgtat ttccagaagc cttcatctct ggttatcccg attgggtctg gcttattccc 180

aatgcgaatt ctgcaatgct ggatgattta taccaggaat tggttgagaa cgcagtaacg 240

atccctgata caacaacaca taaactatgt caggctgcaa aagatgcagg ggtatatgtt 300

gcggtaggta tacatgagag aaattcagaa gcaagtggct tcacgctttt caatacgctt 360

ctatacatca acgatcaagg cgtaatcatc ggaaaacacc gaaaattaat ccctacaggg 420

ggcgaacggc tggtctgggg gcagggtaat ggggatacac tttctgcatt cgatacagac 480

ttcggcaaat taggaggatt gctttgttgg gaaaattata tgccactcgc gcgtcaagct 540

atgtattccg ttggaactga agtatatgta gccccaacct gggactccag cgagaattgg 600

ttgttaagca tgcgccatat tgcccgagag ggcggtatgt ttgtaattag tgtttgccag 660

gctctccgaa aagacgacat ccctgatcag tatgaattta agaaactcta tcctgataat 720

tcagaatgga tcaatagcgg taacagttgc atcatcaacc cgcgcggtga gattattgct 780

ggaccaatct caaaccaaca agaaatactt tatgcagatt tagacctgag tttaattgca 840

aaatctaaac gtatgttcga tgttactggg cattattccc ggccggatgt gtttagctat 900

gaaatcaaca aaagctag 918

<210>286

<211>305

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>286

Met Asn Thr Asn Leu Val Lys Val Ala Ala Ala Gln Val Ala Pro His

1 5 10 15

Phe Leu Asn Leu Ser Asn Thr Val Glu Lys Thr Cys Asn Leu Ile Ser

20 25 30

Glu Ala Gly Lys Asn Gly Ala Lys Leu Ile Val Phe Pro Glu Ala Phe

35 40 45

Ile Ser Gly Tyr Pro Asp Trp Val Trp Leu Ile Pro Asn Ala Asn Ser

50 55 60

Ala Met Leu Asp Asp Leu Tyr Gln Glu Leu Val Glu Asn Ala Val Thr

65 70 75 80

Ile Pro Asp Thr Thr Thr His Lys Leu Cys Gln Ala Ala Lys Asp Ala

85 90 95

Gly Val Tyr Val Ala Val Gly Ile His Glu Arg Asn Ser Glu Ala Ser

100 105 110

Gly Phe Thr Leu Phe Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Asn Asp Gln Gly Val

115 120 125

Ile Ile Gly Lys His Arg Lys Leu Ile Pro Thr Gly Gly Glu Arg Leu

130 135 140

Val Trp Gly Gln Gly Asn Gly Asp Thr Leu Ser Ala Phe Asp Thr Asp

145 150 155 160

Phe Gly Lys Leu Gly Gly Leu Leu Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro Leu

165 170 175

Ala Arg Gln Ala Met Tyr Ser Val Gly Thr Glu Val Tyr Val Ala Pro

180 185 190

Thr Trp Asp Ser Ser Glu Asn Trp Leu Leu Ser Met Arg His Ile Ala

195 200 205

Arg Glu Gly Gly Met Phe Val Ile Ser Val Cys Gln Ala Leu Arg Lys

210 215 220

Asp Asp Ile Pro Asp Gln Tyr Glu Phe Lys Lys Leu Tyr Pro Asp Asn

225 230 235 240

Ser Glu Trp Ile Asn Ser Gly Asn Ser Cys Ile Ile Asn Pro Arg Gly

245 250 255

Glu Ile Ile Ala Gly Pro Ile Ser Asn Gln Gln Glu Ile Leu Tyr Ala

260 265 270

Asp Leu Asp Leu Ser Leu Ile Ala Lys Ser Lys Arg Met Phe Asp Val

275 280 285

Thr Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Phe Ser Tyr Glu Ile Asn Lys

290 295 300

Ser

305

<210>287

<211>936

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>287

gtgatcaagg tagcaatcgc ccaggtggca ccggtggttc tggacaaggc gcgcaccatt 60

gagaaagcgg taggaattat tcgcgctgcc gcgcaagagg gcattgagct cctggttttc 120

ccggagacgt ttatcccgac ctatccagcc tgggtatggc gcttgcgtcc gggtactgat 180

tacggcctga gcgaggaact gcacgcgctc ctgctggata attcggtaga tatggagagc 240

aaggacctgg agccattgca agctgttgct gcagagacca gcatgaccgt ggtaataggt 300

atgaacgagc gagacggccg attcagccgg ggtacaatct acaatgccct ggttgtgatc 360

ggtccaggtg gcacgatcct gaacaggcac cgcaagctta tgcccaccaa ccccgagcgt 420

atggtttggg gtatgggcga tgccagcggg ctgaaggtag tggaaatgtc ttacgggcgc 480

ctgggtgggc tgatttgctg ggagaatttc atgcctctcg cgcgctatgg cttgtatgcc 540

cagggtgtgg agatttacgt ggcgcccacc tatgaccagg gcgacggctg ggtcggcagc 600

atgcagcata tagcccggga gggtcgttgc tgggtactct cggccgggac ccttttgcgt 660

ggcagtgatt ttctgccgga ttttccgggc aagaccgagt tatatcccga tgaccaggag 720

tgggtgaatc cgggtggctc ggtgatcgtg gcaccggggg gagagattgt ggccggcccc 780

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gatggcgacc cgctggaacc catagagtgg gattga 936

<210>288

<211>311

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>288

Val Ile Lys Val Ala Ile Ala Gln Val Ala Pro Val Val Leu Asp Lys

1 5 10 15

Ala Arg Thr Ile Glu Lys Ala Val Gly Ile Ile Arg Ala Ala Ala Gln

20 25 30

Glu Gly Ile Glu Leu Leu Val Phe Pro Glu Thr Phe Ile Pro Thr Tyr

35 40 45

Pro Ala Trp Val Trp Arg Leu Arg Pro Gly Thr Asp Tyr Gly Leu Ser

50 55 60

Glu Glu Leu His Ala Leu Leu Leu Asp Asn Ser Val Asp Met Glu Ser

65 70 75 80

Lys Asp Leu Glu Pro Leu Gln Ala Val Ala Ala Glu Thr Ser Met Thr

85 90 95

Val Val Ile Gly Met Asn Glu Arg Asp Gly Arg Phe Ser Arg Gly Thr

100 105 110

Ile Tyr Asn Ala Leu Val Val Ile Gly Pro Gly Gly Thr Ile Leu Asn

115 120 125

Arg His Arg Lys Leu Met Pro Thr Asn Pro Glu Arg Met Val Trp Gly

130 135 140

Met Gly Asp Ala Ser Gly Leu Lys Val Val Glu Met Ser Tyr Gly Arg

145 150 155 160

Leu Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Phe Met Pro Leu Ala Arg Tyr

165 170 175

Gly Leu Tyr Ala Gln Gly Val Glu Ile Tyr Val Ala Pro Thr Tyr Asp

180 185 190

Gln Gly Asp Gly Trp Val Gly Ser Met Gln His Ile Ala Arg Glu Gly

195 200 205

Arg Cys Trp Val Leu Ser Ala Gly Thr Leu Leu Arg Gly Ser Asp Phe

210 215 220

Leu Pro Asp Phe Pro Gly Lys Thr Glu Leu Tyr Pro Asp Asp Gln Glu

225 230 235 240

Trp Val Asn Pro Gly Gly Ser Val Ile Val Ala Pro Gly Gly Glu Ile

245 250 255

Val Ala Gly Pro Met Tyr Arg Asp Glu Gly Leu Leu Val Cys Glu Leu

260 265 270

Asp Ala Thr Leu Ser Val Arg Gly Lys Arg Ser Leu Asp Val Ala Gly

275 280 285

His Tyr Ser Arg Pro Asp Leu Phe Glu Leu Glu Ile Asp Gly Asp Pro

290 295 300

Leu Glu Pro Ile Glu Trp Asp

305 310

<210>289

<211>921

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>289

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gacaaggtct gcgccttggt caaggaggcg gccggccacg gggcagaact gatcgtcttc 120

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cgcatcggcg cagcggcggc ggaggcggag gcgtacgtcg tgatcggcgt gaccgagatc 300

gacggcggaa ctctctacaa cacccttctc tacctgggcc cggacggaca gctgttgcaa 360

cggcatcgca agctcatgcc caccggtggg gagcggaccg tgtggggaat gggagacggc 420

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<210>290

<211>306

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>290

Met Val Thr Val Ala Ala Val Gln Ala Thr Pro Val Phe Leu Asp Arg

1 5 10 15

Glu Ala Thr Ser Asp Lys Val Cys Ala Leu Val Lys Glu Ala Ala Gly

20 25 30

His Gly Ala Glu Leu Ile Val Phe Pro Glu Ser Phe Val Pro Ala Tyr

35 40 45

Pro Asp Trp Val Trp Arg Thr Pro Ala Trp Ser Asp Thr Glu Phe Val

50 55 60

Lys Arg Phe Tyr Ala Asn Ala Val Thr Val Pro Gly Ala Thr Leu Glu

65 70 75 80

Arg Ile Gly Ala Ala Ala Ala Glu Ala Glu Ala Tyr Val Val Ile Gly

85 90 95

Val Thr Glu Ile Asp Gly Gly Thr Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Leu

100 105 110

Gly Pro Asp Gly Gln Leu Leu Gln Arg His Arg Lys Leu Met Pro Thr

115 120 125

Gly Gly Glu Arg Thr Val Trp Gly Met Gly Asp Gly Ser Glu Leu Asp

130 135 140

Val Val Ser Thr Pro Phe Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Cys Trp Glu

145 150 155 160

Asn Tyr Met Pro Leu Ala Arg Ala Ala Ile Tyr Ala Gln His Cys Asp

165 170 175

Ile Tyr Leu Ala Pro Thr Trp Asp Asn Ser Asp Thr Trp Val Ala Thr

180 185 190

Leu Arg His Ile Ala Lys Glu Gly Arg Gln Phe Val Ile Gly Val Ala

195 200 205

Pro Leu Leu Arg Gly Ser Asp Val Pro Glu Asp Leu Arg Gly Thr Leu

210 215 220

Tyr Gly Leu Ser Asp Asp Trp Met Ser Arg Gly Tyr Thr Thr Ile Val

225 230 235 240

Ala Pro Ser Gly Glu Val Ile Ala Gly Pro Val Leu Glu Arg Glu Glu

245 250 255

Ile Leu Phe Ala Asp Leu Asp Leu Ala Asp Val Gln Glu Gln Arg Arg

260 265 270

Met Phe Asp Pro Val Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Phe Thr Leu

275 280 285

His Val Asp Ala Arg Pro Lys Ser Pro Val Val Phe Glu Arg Asp Ala

290 295 300

Pro Thr

305

<210>291

<211>1002

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>291

atgatgaaaa caactgttac cgttgcctgc gttcaggccg cccccgtatt tatggattta 60

gaaggcacca tagataaaac gatcaccctc atctctgaag ccgcacagaa aggcgcggag 120

ctcatcgctt ttccggagac ctggataccc ggttacccgt ggttcttatg gctgaactcg 180

cccgcgacaa atatgcccct ggtttatcaa tatcatcaga actctctggt gctggacagt 240

gcccaggcga agcgaattgc ggatgctgca cagcagaata acatcactgt cgttctggga 300

ttcagcgagc gcgatcatgg aagcctctat atctcacagt ggctgattgg cagcgacggg 360

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cctgacgtca acacggcggc ttcacgcctc tatgccgcgg aggggcagtg cttcgtgtta 660

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acccgccttc tttttaatcc ttcagccaac aagactgtta ttaaacggca ttcgcctcct 960

gagttaattg ccgaacaggc tccggaagaa gaggaggagt ag 1002

<210>292

<211>333

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>292

Met Met Lys Thr Thr Val Thr Val Ala Cys Val Gln Ala Ala Pro Val

1 5 10 15

Phe Met Asp Leu Glu Gly Thr Ile Asp Lys Thr Ile Thr Leu Ile Ser

20 25 30

Glu Ala Ala Gln Lys Gly Ala Glu Leu Ile Ala Phe Pro Glu Thr Trp

35 40 45

Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Phe Leu Trp Leu Asn Ser Pro Ala Thr Asn

50 55 60

Met Pro Leu Val Tyr Gln Tyr His Gln Asn Ser Leu Val Leu Asp Ser

65 70 75 80

Ala Gln Ala Lys Arg Ile Ala Asp Ala Ala Gln Gln Asn Asn Ile Thr

85 90 95

Val Val Leu Gly Phe Ser Glu Arg Asp His Gly Ser Leu Tyr Ile Ser

100 105 110

Gln Trp Leu Ile Gly Ser Asp Gly Glu Thr Ile Gly Ile Arg Arg Lys

115 120 125

Leu Lys Ala Thr His Val Glu Arg Thr Leu Phe Gly Glu Ser Asp Gly

130 135 140

Ser Ser Leu Thr Thr Trp Glu Thr Pro Leu Gly Asn Val Gly Ala Leu

145 150 155 160

Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Arg Tyr Ala Met Tyr Ser

165 170 175

Gln His Glu Glu Ile His Ile Ala Ala Trp Pro Ser Phe Ser Leu Tyr

180 185 190

Thr Ser Ala Thr Ala Ala Leu Gly Pro Asp Val Asn Thr Ala Ala Ser

195 200 205

Arg Leu Tyr Ala Ala Glu Gly Gln Cys Phe Val Leu Ala Pro Cys Ala

210 215 220

Val Val Ser Asp Glu Met Ile Asp Leu Leu Cys Pro Asp Asp Asp Arg

225 230 235 240

Arg Ala Leu Leu Ser Ala Gly Gly Gly His Ala Arg Ile Tyr Gly Pro

245 250 255

Asp Gly Arg Glu Leu Val Thr Pro Leu Gly Glu Asn Glu Glu Gly Leu

260 265 270

Leu Ile Ala Glu Leu Asp Ser Ala Ala Ile Thr Phe Ala Lys Leu Ala

275 280 285

Ala Asp Pro Val Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Thr Arg Leu Leu

290 295 300

Phe Asn Pro Ser Ala Asn Lys Thr Val Ile Lys Arg His Ser Pro Pro

305 310 315 320

Glu Leu Ile Ala Glu Gln Ala Pro Glu Glu Glu Glu Glu

325 330

<210>293

<211>1008

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>293

atgaaaaata tcaaaaactc agaaaaaagc agcacagtaa gagtcgctgc ggtacaaatc 60

agtccggtgt tgtacaaccg cgaagctacc gttcaaaaag tagtcaacaa aatccttgaa 120

ctaggaaaac aaggggtaca attcgccact tttccggaaa cgatagtgcc ttattatcct 180

tatttctctt ttattcaggc gccttatgcc atgggcaaag aacacctgcg cttgcttgaa 240

caatcagtta ctgttccgtc agccgcgacc gatgccataa gtgaggcggc aaaggaagcc 300

aatatggtag tgtctattgg tgtcaatgaa cgagacggtg gtaccattta caatacgcaa 360

ctcctttttg atgctgacgg aacattaatt cagcgcagac gtaaacttac accaacgtat 420

catgaaagaa tgatttgggg acaaggtgac gcttcaggtc ttcgtgccac agacagcgct 480

gttgggcgta tcgggcagtt ggcttgttgg gaacattaca atccattgtt ccgttatgct 540

ttgattgctg atggagaaca aatccattct gccatgtatc ccggatcatt tttaggtgcg 600

ttgcacggtg aacaaaccga aatcaatgta cgccaacacg ctttagaatc ggccagcttc 660

gtcgtagtgg ctaccggttg gttggatgcc gatcaacaag cacaaattgc gaaagacacc 720

ggtggaccaa tcggaccaat ttcgggaggt tgttttacag ccgttatagg ccctgacgga 780

caactaatcg gggaagccct tacatcaggt gaaggggaag tgattgccga tattgatttg 840

gcacaaattg atgcccgcaa aagattaatg gatgccagtg gtcactacaa ccgtcctgaa 900

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actgagccgg gattagcaaa aagacaaaat gaaaattcat caaattaa 1008

<210>294

<211>335

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>294

Met Lys Asn Ile Lys Asn Ser Glu Lys Ser Ser Thr Val Arg Val Ala

1 5 10 15

Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr Asn Arg Glu Ala Thr Val Gln

20 25 30

Lys Val Val Asn Lys Ile Leu Glu Leu Gly Lys Gln Gly Val Gln Phe

35 40 45

Ala Thr Phe Pro Glu Thr Ile Val Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe

50 55 60

Ile Gln Ala Pro Tyr Ala Met Gly Lys Glu His Leu Arg Leu Leu Glu

65 70 75 80

Gln Ser Val Thr Val Pro Ser Ala Ala Thr Asp Ala Ile Ser Glu Ala

85 90 95

Ala Lys Glu Ala Asn Met Val Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp

100 105 110

Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Thr Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr

115 120 125

Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys Leu Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met

130 135 140

Ile Trp Gly Gln Gly Asp Ala Ser Gly Leu Arg Ala Thr Asp Ser Ala

145 150 155 160

Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu

165 170 175

Phe Arg Tyr Ala Leu Ile Ala Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met

180 185 190

Tyr Pro Gly Ser Phe Leu Gly Ala Leu His Gly Glu Gln Thr Glu Ile

195 200 205

Asn Val Arg Gln His Ala Leu Glu Ser Ala Ser Phe Val Val Val Ala

210 215 220

Thr Gly Trp Leu Asp Ala Asp Gln Gln Ala Gln Ile Ala Lys Asp Thr

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ile Gly Pro Ile Ser Gly Gly Cys Phe Thr Ala Val Ile

245 250 255

Gly Pro Asp Gly Gln Leu Ile Gly Glu Ala Leu Thr Ser Gly Glu Gly

260 265 270

Glu Val Ile Ala Asp Ile Asp Leu Ala Gln Ile Asp Ala Arg Lys Arg

275 280 285

Leu Met Asp Ala Ser Gly His Tyr Asn Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu

290 295 300

His Ile Asp His Thr Pro Thr Ala Pro Met His Glu Arg Val Val Tyr

305 310 315 320

Thr Glu Pro Gly Leu Ala Lys Arg Gln Asn Glu Asn Ser Ser Asn

325 330 335

<210>295

<211>1134

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>295

atggccgcaa aagtacttgg aggacgtgac acagtaaaag tagcagttgt tcaaacacca 60

tcagtcttta tggacaagaa agcctgtctc gaacttgcct gcgataagat tatcgaagcc 120

ggcaaagagg gcgcggagct tgttgttttt cctgaaacct ggattccgac atatccttat 180

tggaccatgg gatgggatac catcgcccat ggcttccatg atgtgatggc ggacctgcag 240

gacaattccg tggtcgtcgg gagcgaagac accgacatat tgggcaaagc cgcccgggaa 300

gctggcgcct acgtcgtcat gggctgtaat gagctcgatg accgggtcgg cagcaggacc 360

ttgttcaact cgctggtcta tatggacaaa tatggcggcg tgctcggccg tcaccgtaaa 420

ttaatcccgt cctttatcga acgcatctgg tggggcaatg gggacagccg cgatctcaaa 480

gtttacgaca cggaaattgg gcgcatcggc ggtcaaatct gctgggaaaa tcacattgtg 540

aacatcaccg catggtacat tgcccaaggc gtggatattc atgtctcggt ttggccggga 600

atgtggaact gtggcgcaga agaaggagaa tccttcatat acgccggtca cgacatcaac 660

aaatgtgacc tcatccctgc tacacgcgga cgggcattta cgggtcagtg ttatgtcctc 720

tcagccaaca acctactgcg gatggaagac attcctgacg atttcccgtt ccgggatacc 780

atgaactatg gcggtccggg ccaggaggat tttgtcggat gggcttgcgg tggcagccat 840

attgttgcgc caacgtctga atttatggtg ccgccgacgt ttgatataga caccatcatc 900

tatgcagaac ttcaggcgaa atacatcaaa gtggtgaagt cggtcttcga ttccctcggc 960

cactacgcgc ggtgggacct cgtcaacttg accacgccgc caccgccgta tgaacctgaa 1020

accgacgcac cagctctcac ggccgatatc cgtgatcggg tcatcgagag tgtggctaaa 1080

gagttcaagc tcgaaccaga aaaagtggct gaagttgtgc gcaatgccgc ctag 1134

<210>296

<211>377

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>296

Met Ala Ala Lys Val Leu Gly Gly Arg Asp Thr Val Lys Val Ala Val

1 5 10 15

Val Gln Thr Pro Ser Val Phe Met Asp Lys Lys Ala Cys Leu Glu Leu

20 25 30

Ala Cys Asp Lys Ile Ile Glu Ala Gly Lys Glu Gly Ala Glu Leu Val

35 40 45

Val Phe Pro Glu Thr Trp Ile Pro Thr Tyr Pro Tyr Trp Thr Met Gly

50 55 60

Trp Asp Thr Ile Ala His Gly Phe His Asp Val Met Ala Asp Leu Gln

65 70 75 80

Asp Asn Ser Val Val Val Gly Ser Glu Asp Thr Asp Ile Leu Gly Lys

85 90 95

Ala Ala Arg Glu Ala Gly Ala Tyr Val Val Met Gly Cys Asn Glu Leu

100 105 110

Asp Asp Arg Val Gly Ser Arg Thr Leu Phe Asn Ser Leu Val Tyr Met

115 120 125

Asp Lys Tyr Gly Gly Val Leu Gly Arg His Arg Lys Leu Ile Pro Ser

130 135 140

Phe Ile Glu Arg Ile Trp Trp Gly Asn Gly Asp Ser Arg Asp Leu Lys

145 150 155 160

Val Tyr Asp Thr Glu Ile Gly Arg Ile Gly Gly Gln Ile Cys Trp Glu

165 170 175

Asn His Ile Val Asn Ile Thr Ala Trp Tyr Ile Ala Gln Gly Val Asp

180 185 190

Ile His Val Ser Val Trp Pro Gly Met Trp Asn Cys Gly Ala Glu Glu

195 200 205

Gly Glu Ser Phe Ile Tyr Ala Gly His Asp Ile Asn Lys Cys Asp Leu

210 215 220

Ile Pro Ala Thr Arg Gly Arg Ala Phe Thr Gly Gln Cys Tyr Val Leu

225 230 235 240

Ser Ala Asn Asn Leu Leu Arg Met Glu Asp Ile Pro Asp Asp Phe Pro

245 250 255

Phe Arg Asp Thr Met Asn Tyr Gly Gly Pro Gly Gln Glu Asp Phe Val

260 265 270

Gly Trp Ala Cys Gly Gly Ser His Ile Val Ala Pro Thr Ser Glu Phe

275 280 285

Met Val Pro Pro Thr Phe Asp Ile Asp Thr Ile Ile Tyr Ala Glu Leu

290 295 300

Gln Ala Lys Tyr Ile Lys Val Val Lys Ser Val Phe Asp Ser Leu Gly

305 310 315 320

His Tyr Ala Arg Trp Asp Leu Val Asn Leu Thr Thr Pro Pro Pro Pro

325 330 335

Tyr Glu Pro Glu Thr Asp Ala Pro Ala Leu Thr Ala Asp Ile Arg Asp

340 345 350

Arg Val Ile Glu Ser Val Ala Lys Glu Phe Lys Leu Glu Pro Glu Lys

355 360 365

Val Ala Glu Val Val Arg Asn Ala Ala

370 375

<210>297

<211>1059

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>297

atgacacgtt ttcgggacgt cacggtggcg gcggttcagg ccgcacccgt ctatttcgat 60

cgggaggcct ccacagataa ggcgtgccaa ttgattcacg aagcggcgaa gaaaggcgca 120

gccctcgcgg cgttcggcga aacgtggttg ccgggatatc cgttctttgc atgggggttc 180

gcgcacaacc ggagcctgtt ctggaatgcg gccgccgagt acatcgccaa tgctgtggag 240

attccgagtc caacgacgga ccgcctctgc gccgcagcga agatcgccgg gattgacgtg 300

gtaatcggcg tcgtagaact ggatggacga acgcgagcgt cggtttacag cacactgctg 360

ttcatcggga gagagggggc gatcctgggg cgccaccgca aattgaagcc aacccacatg 420

gagcgaacgg tgtggggtga aggggacgct cacgggctcc gcgttcacga gcgtccgtac 480

ggccgcctca gcgggctgaa ttgctgggaa cacaacatga tgctgcccgg ctatgtgctt 540

gccgcgcagg gcacgcagtt tcacgtcgcg acatggcctg ggaaagagag gctcacagtt 600

ccgccgaacg aggcggctta tacgcgccag cttctcctct ctcgcgccta tgcatcccag 660

gcgggcgcgt acgtgatcag cgtcgcgggg ctgctcggac ccgactcgat gccggagcgt 720

tatcgcgaac tgggacagtc ctatgagttg accggcgaca gcgtcatcat cgatccgcgc 780

ggcgaggtca tcgcggggcc cgcgaagggc gagaccatcc tgctcgcgca atgcagccag 840

gaagccctct tcgccgcaaa gtccgccatt gacgtcggcg gtcattactc gcgcccggat 900

atttttcagc tgcgtgtcaa cgatcagcta cagcatcagg tccggagact cgaggcgact 960

ctcacgcccc cagtcgccgt agttgtcggg cctgagggta gctcacatga gcaggagacg 1020

gccttcgggc catccagcct cctggccacg acaagctag 1059

<210>298

<211>352

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>298

Met Thr Arg Phe Arg Asp Val Thr Val Ala Ala Val Gln Ala Ala Pro

1 5 10 15

Val Tyr Phe Asp Arg Glu Ala Ser Thr Asp Lys Ala Cys Gln Leu Ile

20 25 30

His Glu Ala Ala Lys Lys Gly Ala Ala Leu Ala Ala Phe Gly Glu Thr

35 40 45

Trp Leu Pro Gly Tyr Pro Phe Phe Ala Trp Gly Phe Ala His Asn Arg

50 55 60

Ser Leu Phe Trp Asn Ala Ala Ala Glu Tyr Ile Ala Asn Ala Val Glu

65 70 75 80

Ile Pro Ser Pro Thr Thr Asp Arg Leu Cys Ala Ala Ala Lys Ile Ala

85 90 95

Gly Ile Asp Val Val Ile Gly Val Val Glu Leu Asp Gly Arg Thr Arg

100 105 110

Ala Ser Val Tyr Ser Thr Leu Leu Phe Ile Gly Arg Glu Gly Ala Ile

115 120 125

Leu Gly Arg His Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Met Glu Arg Thr Val

130 135 140

Trp Gly Glu Gly Asp Ala His Gly Leu Arg Val His Glu Arg Pro Tyr

145 150 155 160

Gly Arg Leu Ser Gly Leu Asn Cys Trp Glu His Asn Met Met Leu Pro

165 170 175

Gly Tyr Val Leu Ala Ala Gln Gly Thr Gln Phe His Val Ala Thr Trp

180 185 190

Pro Gly Lys Glu Arg Leu Thr Val Pro Pro Asn Glu Ala Ala Tyr Thr

195 200 205

Arg Gln Leu Leu Leu Ser Arg Ala Tyr Ala Ser Gln Ala Gly Ala Tyr

210 215 220

Val Ile Ser Val Ala Gly Leu Leu Gly Pro Asp Ser Met Pro Glu Arg

225 230 235 240

Tyr Arg Glu Leu Gly Gln Ser Tyr Glu Leu Thr Gly Asp Ser Val Ile

245 250 255

Ile Asp Pro Arg Gly Glu Val Ile Ala Gly Pro Ala Lys Gly Glu Thr

260 265 270

Ile Leu Leu Ala Gln Cys Ser Gln Glu Ala Leu Phe Ala Ala Lys Ser

275 280 285

Ala Ile Asp Val Gly Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Ile Phe Gln Leu

290 295 300

Arg Val Asn Asp Gln Leu Gln His Gln Val Arg Arg Leu Glu Ala Thr

305 310 315 320

Leu Thr Pro Pro Val Ala Val Val Val Gly Pro Glu Gly Ser Ser His

325 330 335

Glu Gln Glu Thr Ala Phe Gly Pro Ser Ser Leu Leu Ala Thr Thr Ser

340 345 350

<210>299

<211>987

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>299

atgactgttg ttaaggccgc cgcagtgcag atcagcccgg tgctctacag ccgtgcagga 60

accgtcgaga aggtcgtgaa gaagatcgac gagctgggcc agaagggtgt cgagtttgcc 120

gtcttccctg aaaccgttgt cccctactac ccctacttct ccttcgtgca gcccccctac 180

aaactggcca cggagcacct gcgcctgctt gaggagtcgg tgaccgtgcc ctctgccgag 240

acggacgcca tcggcgacgc cgcccgcaag gccaacatgg tcgtctcgat cggtgtcaac 300

gaacgtgatg gcggcaccat ttacaacacc caactcctgt tcgacgccga cggaaccctg 360

atccagcgcc gccgcaagat cacgccgacc taccacgagc ggatgatctg gggacaggga 420

gacggatcag gcttgcgcgc ggtcgacagc gtcgtcggcc gcatcggcca gctcgcctgc 480

tgggagcact accagccgct ggcccgttac gctctcatcg ccgacggcga gcagatccac 540

gccgcgatgt accccggcgc cttcgggggc gatctgttcg cagagcagat cgaagtcaat 600

gtccgtcagc acgctctgga atcggccagt ttcgtcgtca gcgccaccgc ctggctcgac 660

gccgaccagc aggcccagat tgcgaaggac accggcggcc ccgtacaggc gatctccggc 720

ggcttcttca cagccatcat cgaccccgac ggccgcatca tcggcgaacc gatcacctcc 780

ggcgaaggcg aagtcatcgc tgacctcgac tttgcgctca tcgaccgccg caagcgcctg 840

atggacgcca gcggccacta cagccgcccc gaactgctca gcctgcagat cgaccggacg 900

ccggcacccg ccgtccacga tcgcaatcgc caggggtcct caagcgctcc ggcaactgaa 960

aagggccgct cagccgaggc caagtga 987

<210>300

<211>328

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>300

Met Thr Val Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Arg Ala Gly Thr Val Glu Lys Val Val Lys Lys Ile Asp Glu Leu

20 25 30

Gly Gln Lys Gly Val Glu Phe Ala Val Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Pro Pro Tyr Lys Leu Ala Thr

50 55 60

Glu His Leu Arg Leu Leu Glu Glu Ser Val Thr Val Pro Ser Ala Glu

65 70 75 80

Thr Asp Ala Ile Gly Asp Ala Ala Arg Lys Ala Asn Met Val Val Ser

85 90 95

Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Thr Gln Leu

100 105 110

Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys Ile Thr

115 120 125

Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly Ser Gly

130 135 140

Leu Arg Ala Val Asp Ser Val Val Gly Arg Ile Gly Gln Leu Ala Cys

145 150 155 160

Trp Glu His Tyr Gln Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Ile Ala Asp Gly

165 170 175

Glu Gln Ile His Ala Ala Met Tyr Pro Gly Ala Phe Gly Gly Asp Leu

180 185 190

Phe Ala Glu Gln Ile Glu Val Asn Val Arg Gln His Ala Leu Glu Ser

195 200 205

Ala Ser Phe Val Val Ser Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp Gln Gln

210 215 220

Ala Gln Ile Ala Lys Asp Thr Gly Gly Pro Val Gln Ala Ile Ser Gly

225 230 235 240

Gly Phe Phe Thr Ala Ile Ile Asp Pro Asp Gly Arg Ile Ile Gly Glu

245 250 255

Pro Ile Thr Ser Gly Glu Gly Glu Val Ile Ala Asp Leu Asp Phe Ala

260 265 270

Leu Ile Asp Arg Arg Lys Arg Leu Met Asp Ala Ser Gly His Tyr Ser

275 280 285

Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Gln Ile Asp Arg Thr Pro Ala Pro Ala

290 295 300

Val His Asp Arg Asn Arg Gln Gly Ser Ser Ser Ala Pro Ala Thr Glu

305 310 315 320

Lys Gly Arg Ser Ala Glu Ala Lys

325

<210>301

<211>1032

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>301

atgaccacgc ccgcgccgtt caccgccgcc gtcgtccagg cgtcgcccgt gttcctcgac 60

cgcgatgcca cggtcgataa ggcgtgcgcc ctgatcaccg cggccggagc gcgcggcgcg 120

aagctcgtcg tgctgcccga gaccttcgtg cccgcatacc ccgcgtgggt ctggtacctg 180

ccgctcacgc gtcggcccga cgtcgcgaag ctctaccgcg cgctcgtcga gaacgcgatc 240

gacgtgccgg gtccggaaac cgagcgcctc gggcgcgcgg cgcgtgacgc gggcgcgtgg 300

gtggcgatcg gtgtcaacga gcgcaacgcg aaggcgagcc gcacgtcgct ctacaacacc 360

gtgctcctgt tcgacgacca gggcacgctg gtcgagtcgc ggcgcaagct gatgccgacc 420

ggcggcgagc gcctggtgtg gacgccgggc gagccggtgc cgttgcgggt tcacgacacg 480

ccgctcggcc gcgtcggcgc gctgatctgc tgggagaact acatgccgct cgcgcgcttc 540

gcgctctacg agcagggcgt ccagatctat ctcgcgccga cctgggacta cagcgaggcg 600

tggctcgcgt ccatgcggca cgtcgcgcgt gaaggtcgca cgtgggtgat cgggtgcagc 660

caggcggtgc ggcgtgacga gatcccggac cacctgccgt tcaaggacgc gatccccgag 720

agcctcgagt ggatcaacgc cgggaacagc atcgtcgtcg atccggacgg cgcggtggtc 780

gcgggaccgc tggcgcgggc gcacgacacg ctctacgtcg agatcgatcc gggccgcgcc 840

gccggctccc gatggatctt cgacgccgcc ggtcactatc accgtcccga cctgttccat 900

ttcgcgatgc gcgcgccggt ggcgccagag accgcgccgg ttgtgcggaa gcgcggccgg 960

cggctagcct cggccccggc gcggaagcca cggaaacggc cggcgcgtcc cacccgaagg 1020

aggactcgat ga 1032

<210>302

<211>335

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>302

Met Thr Thr Pro Ala Pro Phe Thr Ala Ala Val Val Gln Ala Ser Pro

1 5 10 15

Val Phe Leu Asp Arg Asp Ala Thr Val Asp Lys Ala Cys Ala Leu Ile

20 25 30

Thr Ala Ala Gly Ala Arg Gly Ala Lys Leu Val Val Leu Pro Glu Thr

35 40 45

Phe Val Pro Ala Tyr Pro Ala Trp Val Trp Tyr Leu Pro Leu Thr Arg

50 55 60

Arg Pro Asp Val Ala Lys Leu Tyr Arg Ala Leu Val Glu Asn Ala Ile

65 70 75 80

Asp Val Pro Gly Pro Glu Thr Glu Arg Leu Gly Arg Ala Ala Arg Asp

85 90 95

Ala Gly Ala Trp Val Ala Ile Gly Val Asn Glu Arg Asn Ala Lys Ala

100 105 110

Ser Arg Thr Ser Leu Tyr Asn Thr Val Leu Leu Phe Asp Asp Gln Gly

115 120 125

Thr Leu Val Glu Ser Arg Arg Lys Leu Met Pro Thr Gly Gly Glu Arg

130 135 140

Leu Val Trp Thr Pro Gly Glu Pro Val Pro Leu Arg Val His Asp Thr

145 150 155 160

Pro Leu Gly Arg Val Gly Ala Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro

165 170 175

Leu Ala Arg Phe Ala Leu Tyr Glu Gln Gly Val Gln Ile Tyr Leu Ala

180 185 190

Pro Thr Trp Asp Tyr Ser Glu Ala Trp Leu Ala Ser Met Arg His Val

195 200 205

Ala Arg Glu Gly Arg Thr Trp Val Ile Gly Cys Ser Gln Ala Val Arg

210 215 220

Arg Asp Glu Ile Pro Asp His Leu Pro Phe Lys Asp Ala Ile Pro Glu

225 230 235 240

Ser Leu Glu Trp Ile Asn Ala Gly Asn Ser Ile Val Val Asp Pro Asp

245 250 255

Gly Ala Val Val Ala Gly Pro Leu Ala Arg Ala His Asp Thr Leu Tyr

260 265 270

Val Glu Ile Asp Pro Gly Arg Ala Ala Gly Ser Arg Trp Ile Phe Asp

275 280 285

Ala Ala Gly His Tyr His Arg Pro Asp Leu Phe His Phe Ala Met Arg

290 295 300

Ala Pro Val Ala Pro Glu Thr Ala Pro Val Val Arg Lys Arg Gly Arg

305 310 315 320

Arg Leu Ala Ser Ala Pro Ala Arg Lys Pro Arg Lys Arg Pro Ala

325 330 335

<210>303

<211>1011

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>303

atgggcatcg ttcaccccaa gtacaaagtc gctgtcgttc aggctgcccc tgtatggcta 60

gacctggagg ccactgttga taaatgcatt cagttgattg aagaagcagc cagcaagggc 120

tgcaagctca tcgccttccc tgagaccttc attcccggat acccttggta tatctggatg 180

ggaacgcctg cctggactat tcagcgcggc tttgtacagc gctattttga taattctctg 240

tcttatgaca gtccgcaagc ggagaagcta aggcaggcag tcaaaaaggc tgagatcacg 300

gccgtactag gtctttctga gcgcagcggc ggtagcttgt acattgcaca atggaccatt 360

ggccctgacg gagaaaccat acacaaacgc agaaaagtgc gtccaacgca tggtgagcgt 420

acggtatttg gcgacggtga cggtagtgat cttgcggtgc acgatacccc cctggggcgg 480

ctgggcgcgc ttgcgtgctg ggagaacata ctgtcactga acaagtatgc gatgtattca 540

cagaatgagc aggtgcacgt agccgcttgg cctagcttct cggtctacga gcctttcgcc 600

catgcattgg gttgggaggt caataacgca gtcagcaagg tttacgcggt agaaggcggc 660

tgttttgtat tggcgccttg cgcagtggtc tccgaggaaa tgatcgaagc actgtgcgat 720

acacccgata agcaccaact ggctcatgcg ggtggagggc atgctgtcat ttacggacca 780

gatggcagtc ctctggcaga taagttaccc gaaggagagg aggggctatt aattgcagaa 840

attgatctcg gtctcatcag cttggcgaaa aatgccatgg acccggtggg gcattactct 900

cgacctgacg tacatcgctt gctattgaat cgcaatccag caaagcgggt tgaggaattt 960

tctctgccca ttgatttggc agagacaact ccgccaatat taggcacgta g 1011

<210>304

<211>336

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>304

Met Gly Ile Val His Pro Lys Tyr Lys Val Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Val Trp Leu Asp Leu Glu Ala Thr Val Asp Lys Cys Ile Gln Leu

20 25 30

Ile Glu Glu Ala Ala Ser Lys Gly Cys Lys Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Phe Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Tyr Ile Trp Met Gly Thr Pro Ala

50 55 60

Trp Thr Ile Gln Arg Gly Phe Val Gln Arg Tyr Phe Asp Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ser Tyr Asp Ser Pro Gln Ala Glu Lys Leu Arg Gln Ala Val Lys Lys

85 90 95

Ala Glu Ile Thr Ala Val Leu Gly Leu Ser Glu Arg Ser Gly Gly Ser

100 105 110

Leu Tyr Ile Ala Gln Trp Thr Ile Gly Pro Asp Gly Glu Thr Ile His

115 120 125

Lys Arg Arg Lys Val Arg Pro Thr His Gly Glu Arg Thr Val Phe Gly

130 135 140

Asp Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Asp Thr Pro Leu Gly Arg

145 150 155 160

Leu Gly Ala Leu Ala Cys Trp Glu Asn Ile Leu Ser Leu Asn Lys Tyr

165 170 175

Ala Met Tyr Ser Gln Asn Glu Gln Val His Val Ala Ala Trp Pro Ser

180 185 190

Phe Ser Val Tyr Glu Pro Phe Ala His Ala Leu Gly Trp Glu Val Asn

195 200 205

Asn Ala Val Ser Lys Val Tyr Ala Val Glu Gly Gly Cys Phe Val Leu

210 215 220

Ala Pro Cys Ala Val Val Ser Glu Glu Met Ile Glu Ala Leu Cys Asp

225 230 235 240

Thr Pro Asp Lys His Gln Leu Ala His Ala Gly Gly Gly His Ala Val

245 250 255

Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ser Pro Leu Ala Asp Lys Leu Pro Glu Gly

260 265 270

Glu Glu Gly Leu Leu Ile Ala Glu Ile Asp Leu Gly Leu Ile Ser Leu

275 280 285

Ala Lys Asn Ala Met Asp Pro Val Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val

290 295 300

His Arg Leu Leu Leu Asn Arg Asn Pro Ala Lys Arg Val Glu Glu Phe

305 310 315 320

Ser Leu Pro Ile Asp Leu Ala Glu Thr Thr Pro Pro Ile Leu Gly Thr

325 330 335

<210>305

<211>1068

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>305

atgacgatgc aacatcccaa gtttcgcgct gctgccgtgc aggcggcacc ggtcttcctt 60

gaccttgatg cgtcgataga taaagccatc gacctgatcg cgcaagccgc caaaggcggc 120

gcgcaattga ttgcctttcc ggaaacctgg ctgcccggct accccttttt catctggctc 180

gattcgccgg cctggggcat gcaattcatc cagcgctacc atgacaattc cctggtctac 240

ggcacaccgc aggccgagcg catcgcgcag gctgcgaaaa agcatcgcat catggtcgtc 300

atggggcaca gcgagcggga tcatggaagt ctgtacatcg ctcagtggat catcggtgcc 360

gatggggaaa cggttgcgac acgtcgtaag ctcaaaccga ctcatgccga gcgcaccttg 420

tttggggaag gcgatggcag tgacctgagc gtgttcgata caccgctggg aagggttggc 480

gcactatgct gctgggagca cctccagccc ctgtcgaaat acgcgctata cgcacagaat 540

gagcaggtcc acattgcttc ctggccaagc ttttccctgt atcgcggggg cgcctacgcg 600

ctcggcgccg aagtgaacaa tgcggccagc cagatttatg ctgtcgaagg ccagtgtttt 660

gtgatcgcgc cgtgcggggt cgtcacgaaa gaaatgctgg acgtgctgtg caccgacgaa 720

atgaaaaagc agttgttggt tgaaggcggc gggttcgcgc gaatttacgc gcccgatgga 780

cagatgatgc acgcgccgct ggcggaaaac gaagagggcc tggtgtatgc cgatctcgac 840

ctgggcatga tctcgctggc caaagtagtc gccgacccgg ccgggcatta tgcgcggccc 900

gacgtaaccc ggttactgct ggacaagact ccgggagacc gcgtcatgct ggcgagccgt 960

cgcggcaagg aggtcagccg cgctggtaac gacgagccgc aagtgctggt ctcgcgcaac 1020

gacacgctga cctcgccgaa gccagcgtct tcgcgcaaag caagctga 1068

<210>306

<211>355

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>306

Met Thr Met Gln His Pro Lys Phe Arg Ala Ala Ala Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Val Phe Leu Asp Leu Asp Ala Ser Ile Asp Lys Ala Ile Asp Leu

20 25 30

Ile Ala Gln Ala Ala Lys Gly Gly Ala Gln Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Trp Leu Pro Gly Tyr Pro Phe Phe Ile Trp Leu Asp Ser Pro Ala

50 55 60

Trp Gly Met Gln Phe Ile Gln Arg Tyr His Asp Asn Ser Leu Val Tyr

65 70 75 80

Gly Thr Pro Gln Ala Glu Arg Ile Ala Gln Ala Ala Lys Lys His Arg

85 90 95

Ile Met Val Val Met Gly His Ser Glu Arg Asp His Gly Ser Leu Tyr

100 105 110

Ile Ala Gln Trp Ile Ile Gly Ala Asp Gly Glu Thr Val Ala Thr Arg

115 120 125

Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Leu Phe Gly Glu Gly

130 135 140

Asp Gly Ser Asp Leu Ser Val Phe Asp Thr Pro Leu Gly Arg Val Gly

145 150 155 160

Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys Tyr Ala Leu

165 170 175

Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Ile Ala Ser Trp Pro Ser Phe Ser

180 185 190

Leu Tyr Arg Gly Gly Ala Tyr Ala Leu Gly Ala Glu Val Asn Asn Ala

195 200 205

Ala Ser Gln Ile Tyr Ala Val Glu Gly Gln Cys Phe Val Ile Ala Pro

210 215 220

Cys Gly Val Val Thr Lys Glu Met Leu Asp Val Leu Cys Thr Asp Glu

225 230 235 240

Met Lys Lys Gln Leu Leu Val Glu Gly Gly Gly Phe Ala Arg Ile Tyr

245 250 255

Ala Pro Asp Gly Gln Met Met His Ala Pro Leu Ala Glu Asn Glu Glu

260 265 270

Gly Leu Val Tyr Ala Asp Leu Asp Leu Gly Met Ile Ser Leu Ala Lys

275 280 285

Val Val Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Thr Arg

290 295 300

Leu Leu Leu Asp Lys Thr Pro Gly Asp Arg Val Met Leu Ala Ser Arg

305 310 315 320

Arg Gly Lys Glu Val Ser Arg Ala Gly Asn Asp Glu Pro Gln Val Leu

325 330 335

Val Ser Arg Asn Asp Thr Leu Thr Ser Pro Lys Pro Ala Ser Ser Arg

340 345 350

Lys Ala Ser

355

<210>307

<211>942

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>307

atggctgaac cggaatcctt tatcgtcgct gctgtacagg ctacaccgat ctttcttgac 60

cgccaggcaa cccttgagaa agcgtgcgac ctgattgccg aagctggcag caatggcgca 120

aaactcgttc tttttcccga agcctttatc cccacctatc ctgattggat atgggcggtg 180

acaggctcac aatctgcgct gctcgacgaa ctttatgtgg aactactgga aaactccgtg 240

accatccccg acgcgaccac tgagcaactt tgtgaagcag cacgtaacgc cggtctctac 300

gtcgtcatgg gagtgaatga gcgcaacgcc gaggcgagca acgccacact ctataacacc 360

ctgctctata ttgacgatca gggcaaaatt ctcggcaagc atcgcaaatt ggtcccgacc 420

gccctggagc gaatcgtctg gggctatggc gatggcagca cgcttgacgc ctttgaaacg 480

ccgctgggca agattggcgg gctgatctgt tgggaaaatt acatgccact ggcgcgccaa 540

acactttatg cctggggggt gcaaatttac ttggccgcaa cgtgggatcg cggcgaagtt 600

tggcaggcga ccatgcgcca tattgccagg gaaggcggcg tctatgtagt cgcctcctgt 660

attccatttc acatcaaaga cattcctgac cacatgcctg aaatccgcaa tctctatgca 720

ccggggacag actggatcaa cgtcggccaa agctgcatca tcaaccccag cggcgactat 780

attgcaggcc ctgtcgagtg tcgcgaggag attctttatg ccgaggtaaa tctgcgccag 840

agtgcggcgg caaaacgtat gttggatgtg gcgggccatt atggacgccc tgatgtcttt 900

cacctcaccg tcaaccgcac gcccaatccg catattcgat aa 942

<210>308

<211>313

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>308

Met Ala Glu Pro Glu Ser Phe Ile Val Ala Ala Val Gln Ala Thr Pro

1 5 10 15

Ile Phe Leu Asp Arg Gln Ala Thr Leu Glu Lys Ala Cys Asp Leu Ile

20 25 30

Ala Glu Ala Gly Ser Asn Gly Ala Lys Leu Val Leu Phe Pro Glu Ala

35 40 45

Phe Ile Pro Thr Tyr Pro Asp Trp Ile Trp Ala Val Thr Gly Ser Gln

50 55 60

Ser Ala Leu Leu Asp Glu Leu Tyr Val Glu Leu Leu Glu Asn Ser Val

65 70 75 80

Thr Ile Pro Asp Ala Thr Thr Glu Gln Leu Cys Glu Ala Ala Arg Asn

85 90 95

Ala Gly Leu Tyr Val Val Met Gly Val Asn Glu Arg Asn Ala Glu Ala

100 105 110

Ser Asn Ala Thr Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Asp Asp Gln Gly

115 120 125

Lys Ile Leu Gly Lys His Arg Lys Leu Val Pro Thr Ala Leu Glu Arg

130 135 140

Ile Val Trp Gly Tyr Gly Asp Gly Ser Thr Leu Asp Ala Phe Glu Thr

145 150 155 160

Pro Leu Gly Lys Ile Gly Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro

165 170 175

Leu Ala Arg Gln Thr Leu Tyr Ala Trp Gly Val Gln Ile Tyr Leu Ala

180 185 190

Ala Thr Trp Asp Arg Gly Glu Val Trp Gln Ala Thr Met Arg His Ile

195 200 205

Ala Arg Glu Gly Gly Val Tyr Val Val Ala Ser Cys Ile Pro Phe His

210 215 220

Ile Lys Asp Ile Pro Asp His Met Pro Glu Ile Arg Asn Leu Tyr Ala

225 230 235 240

Pro Gly Thr Asp Trp Ile Asn Val Gly Gln Ser Cys Ile Ile Asn Pro

245 250 255

Ser Gly Asp Tyr Ile Ala Gly Pro Val Glu Cys Arg Glu Glu Ile Leu

260 265 270

Tyr Ala Glu Val Asn Leu Arg Gln Ser Ala Ala Ala Lys Arg Met Leu

275 280 285

Asp Val Ala Gly His Tyr Gly Arg Pro Asp Val Phe His Leu Thr Val

290 295 300

Asn Arg Thr Pro Asn Pro His Ile Arg

305 310

<210>309

<211>951

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>309

ttgaccgact gtctcaaaat agccgccgcc caaatcactc cggtcttcct cgaccgcgtt 60

gcgaccacga agaaggtcgt cgaaaccatc gaaaaagcgg ccgccggcgg tgcgcggctg 120

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<210>310

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<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>310

Leu Thr Asp Cys Leu Lys Ile Ala Ala Ala Gln Ile Thr Pro Val Phe

1 5 10 15

Leu Asp Arg Val Ala Thr Thr Lys Lys Val Val Glu Thr Ile Glu Lys

20 25 30

Ala Ala Ala Gly Gly Ala Arg Leu Val Ala Phe Gly Glu Ala Leu Leu

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Pro Ala Tyr Pro Leu Trp Leu Thr Arg Thr Asp Ala Ala Arg Phe Asn

50 55 60

Ser Asp Val Gln Lys Asn Leu His Ala Ile Tyr Leu Lys Gln Ser Val

65 70 75 80

Ser Ile Ala Gly Gly His Leu Ser Pro Ile Cys Lys Ile Ala Ser Glu

85 90 95

Arg Lys Ile Ala Val Ile Leu Gly Ile Ala Glu Arg Ala Thr Asp Arg

100 105 110

Gly Asp His Thr Ile Tyr Cys Ser Cys Val Phe Ile Asp Ala Asp Gly

115 120 125

Arg Ile Ala Ser Val His Arg Lys Leu Met Pro Thr Tyr Glu Glu Arg

130 135 140

Leu Ser Trp Gly Phe Gly Asp Gly Ala Gly Leu Val Thr His Pro Val

145 150 155 160

Gly Pro Phe Thr Val Gly Ala Leu Asn Cys Trp Glu Asn Trp Met Pro

165 170 175

Leu Ala Arg Thr Ala Leu Tyr Ala Gly Gly Glu Asp Leu His Val Ala

180 185 190

Ile Trp Pro Gly Gly Ser Val Leu Thr Glu Asp Ile Thr Arg Phe Ile

195 200 205

Ala Arg Glu Ser Arg Ser Phe Val Leu Ser Val Ser Gly Ile Ile Arg

210 215 220

Glu Ser Asp Ile Pro Ser Gly Val Pro Tyr Arg Asp Glu Met Cys Ala

225 230 235 240

Lys Gly Glu Thr Ile Tyr Asn Gly Gly Ser Cys Ile Ala Gly Pro Asp

245 250 255

Gly Gln Trp Ile Ile Ala Pro Val Thr Asp Arg Glu Glu Leu Ile Phe

260 265 270

Ala Glu Ile Asp His Glu His Val Arg Arg Glu Arg Gln Asn Phe Asp

275 280 285

Pro Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Leu Gln Ile Thr Val Asp

290 295 300

Arg Arg Arg Gln Thr Ala Ala Asn Phe Ile Asp Asp

305 310 315

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<211>1011

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>311

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ggtcctgtca ctcaagcgat cgccgagaga gctagagtga atcaaatggt cgtcgtactc 300

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<212>PRT

<213>未知

<220>

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Met Ser Glu Lys Arg Ile Ile Arg Ala Ala Ala Val Gln Ile Thr Pro

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Glu Phe Asp Ser Ala Asp Gly Thr Val Lys Lys Val Cys Lys Val Ile

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Asp Glu Ala Gly Ala Lys Gly Val Gln Ile Ile Val Phe Pro Glu Thr

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Phe Ile Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Ile Thr Pro Pro Val Ser

50 55 60

Ala Gly Ala Glu His Leu Lys Leu Tyr Glu Lys Ser Val Val Ile Pro

65 70 75 80

Gly Pro Val Thr Gln Ala Ile Ala Glu Arg Ala Arg Val Asn Gln Met

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Val Val Val Leu Gly Val Asn Glu Arg Asp Asn Gly Ser Leu Tyr Asn

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Thr Gln Leu Ile Phe Asp Thr Asn Gly Glu Leu Met Leu Lys Arg Arg

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Ala Ser Gly Leu Lys Val Val Glu Thr Ser Ile Ala Arg Val Gly Ala

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Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ser Leu Met

165 170 175

Thr Gln His Glu Glu Ile His Cys Ala Gln Phe Pro Gly Ser Met Val

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Gly Gln Ile Phe Ala Asp Gln Met Asp Val Thr Ile Arg His His Ala

195 200 205

Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Ile Asn Ala Thr Gly Trp Leu Thr Asp

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Glu Gln Ile Gln Ser Ile Thr Asp Asp Pro Lys Met Gln Lys Ala Leu

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Arg Gly Gly Cys Asn Thr Ala Ile Ile Ser Pro Glu Gly Val His Leu

245 250 255

Thr Glu Pro Leu Arg Glu Gly Glu Gly Ile Leu Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Met Ser Leu Ile Thr Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His

275 280 285

Tyr Ser Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Ala Ile Asn Asp Lys Pro Ala

290 295 300

Thr Thr Lys Phe Ser Met Thr Glu Gly Cys Thr Gln Thr Glu Gln Phe

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Arg Ile Ala Glu Glu Leu Lys Asn Asp Asp Lys Leu Ser Thr Gly Asn

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<212>PRT

<213>未知

<220>

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<400>314

Met Ala Ala Val Gln Ala Ala Pro Val Pro Phe Asp Ala Glu Ala Ser

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Val Asp Lys Ala Cys Arg Leu Ile Gln Glu Ala Ala Ala Lys Gly Ala

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Asp Ile Val Ala Phe Gly Glu Ala Trp Leu Pro Gly Tyr Pro Tyr Phe

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Ala Trp Leu Pro Gln Val Thr Pro Glu Trp Tyr Ser Ala Ala Ala Asp

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Tyr Leu Ala Ser Ser Val Asp Ile Pro Gly Pro Ile Thr Asp Lys Leu

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Cys Gln Ala Ala Arg Arg Ala Ser Val Glu Leu Ile Met Gly Val Val

85 90 95

Glu Arg Ser Lys Ser Gln Gly Thr Thr Tyr Cys Thr Leu Leu Phe Ile

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Ser Lys Asp Gly Glu Ile Ile Gly Lys His Arg Lys Leu Lys Pro Thr

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Leu Ala Glu Arg Thr Val Trp Gly Glu Gly Asp Ala Ser Gly Leu Arg

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Val His Asp Arg Pro Ile Ala Arg Ile Ser Gly Leu Ser Cys Trp Glu

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Asn Lys Met Met Leu Pro Gly Tyr Ala Leu Met Ala Gln Gly Thr Gln

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Val His Val Ser Ala Trp Pro Gly Ile Pro Glu Asp Ser Pro Met Glu

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Val Pro Ala His Pro Arg Gln Lys Leu Leu Ser Gln Ala Phe Ala Leu

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Gln Gly Gly Cys Tyr Val Ile Ser Pro Ser Ile Val Leu Arg Ala Glu

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Asp Val Pro Glu Lys His Ala Ala Leu Leu Met Gly Asp Gln Val Gly

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Gly Ser Tyr Ile Ile Asp Pro Cys Gly Lys Val Ile Ala Glu Ala Gly

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Ala Gly Glu Thr Ile Leu Ile Ala Lys Gly Asn Leu Asp Leu Val Ara

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Ala Ala Lys Met Ala Ser Asp Val Gly Gly Ser Tyr Ser Arg Pro Asp

275 280 285

Leu Leu Gln Leu Met Ile Asn Asn Arg Pro Leu Glu Gln Leu Ile Glu

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Glu Val Ser Glu Gln Glu Gly Glu

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<211>960

<212>DNA

<213>未知

<220>

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<400>315

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<212>PRT

<213>未知

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<223>从环境样品获得

<400>316

Met Thr Met Leu Lys Thr Lys Phe Arg Val Ala Ala Val Gln Ala Ala

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Pro Val Phe Leu Asp Arg Glu Ala Thr Leu Glu Lys Ala Cys Gly Leu

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Ile Glu Glu Ala Gly Arg Asn Gly Ala Ser Leu Val Val Phe Pro Glu

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Ser Phe Ile Pro Ala Tyr Pro Asp Trp Val Trp Ala Val Pro Ala Gly

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Glu Glu Ala Leu Leu Asn Glu Leu Tyr Ala Gln Leu Leu Ala Asn Ala

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Val Glu Ile Pro Ser Pro Ala Thr Glu Arg Leu Ser Gln Ala Ala Lys

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Lys Ala Lys Val His Val Val Met Gly Leu Thr Glu Arg Asn Ser Glu

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Ala Ser Gly Gly Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Leu Asp Pro Gln

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Thr Pro Leu Gly Lys Leu Ser Gly Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met

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Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Tyr Ala Trp Gly Thr Gln Ile Tyr Ile

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Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Glu Pro Trp Leu Ser Thr Leu Arg His

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Ile Ala Lys Glu Gly Arg Val Phe Val Ile Gly Cys Gly Met Ala Leu

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Arg Lys Ala Asp Ile Pro Asp His Phe Glu Phe Lys Gln Arg Phe Tyr

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Gln Asn Ala Gly Glu Trp Ile Asn Gly Gly Asp Ser Ala Ile Val Asn

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Pro Glu Gly Glu Phe Ile Ala Gly Pro Leu Ser Glu Gln Glu Gly Ile

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Leu Tyr Ala Glu Ile Asp Pro Gly Gln Met Ala Gly Pro Lys Trp Met

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<213>未知

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accgtggaca aggttgtcca gaagatcctc gaactcggca agcaaggcgt ccagttcgcc 120

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<400>318

Met Thr Ile Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Ile Ser Pro Val Leu Tyr

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Ser Arg Glu Gly Thr Val Asp Lys Val Val Gln Lys Ile Leu Glu Leu

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Tyr Ala Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Ala Thr

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Ala His Val His Glu Arg Ser Ala His Pro Lys Ala Thr Ala Glu Gln

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Ala Asp Gly Pro Ser Ala Val Asn Ala Gln

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<210>319

<211>1017

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>319

atgacgaccc cgcgtatcgt ccgcgtcgcc gcggtgcaga tggcgcccga cctggaatcc 60

gcacacggca cggtagacaa ggtctgccgc gccattctgg aggccggcga aaaaggcgcg 120

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ctggcctgct gggagcacta caacccgctc gcccgctaca ccctgatggc gcagcatgaa 540

gagatccacg ccgcgcagtt ccccggttcc atggtcggcc agatctttgc cgaccagatg 600

gcggtgacca tccgccacca cgcgctggaa tccggctgct tcgtggtgaa cgccaccggc 660

tggctcaccg atgcgcagat caccgccatc acccccgacc cggccatgca gcgcgcgctg 720

cgcggcggct gccacaccgc catcgtgtcg ccggaaggca gctacgtctg cgaaccgctc 780

accgagggcg aaggcatgct ggtggccgac ctcgacatgc ggctggtcac caagcgcaag 840

cggatgatgg attcggtcgg ccactacgcc cggccggagc tgctttcgct caacgccgat 900

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<210>320

<211>338

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<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>320

Met Thr Thr Pro Arg Ile Val Arg Val Ala Ala Val Gln Met Ala Pro

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Asp Leu Glu Ser Ala His Gly Thr Val Asp Lys Val Cys Arg Ala Ile

20 25 30

Leu Glu Ala Gly Glu Lys Gly Ala Arg Met Val Val Phe Pro Glu Thr

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Phe Val Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Ile Gln Pro Ala Val Thr

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Met Gly Ala Ala His Leu Glu Leu Tyr Glu Arg Ala Val Thr Val Pro

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Gly Pro Val Thr Leu Ala Val Gly Glu Ala Ala Arg Arg Ala Gly Ala

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Val Val Val Leu Gly Val Asn Glu Arg Asp His Gly Ser Leu Tyr Asn

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Thr Gln Leu Ile Phe Asp Glu Thr Gly Ala Leu Val Leu Lys Arg Arg

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Gly Ser Gly Leu Lys Val Val Asp Thr Gly Ile Gly Arg Ile Gly Ala

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Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Thr Leu Met

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Ala Gln His Glu Glu Ile His Ala Ala Gln Phe Pro Gly Ser Met Val

180 185 190

Gly Gln Ile Phe Ala Asp Gln Met Ala Val Thr Ile Arg His His Ala

195 200 205

Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Gly Trp Leu Thr Asp

210 215 220

Ala Gln Ile Thr Ala Ile Thr Pro Asp Pro Ala Met Gln Arg Ala Leu

225 230 235 240

Arg Gly Gly Cys His Thr Ala Ile Val Ser Pro Glu Gly Ser Tyr Val

245 250 255

Cys Glu Pro Leu Thr Glu Gly Glu Gly Met Leu Val Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Met Arg Leu Val Thr Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His

275 280 285

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290 295 300

Pro Ala Leu His Thr Gln Pro Ala Ala Ser Leu Pro Leu Ser Leu Gln

305 310 315 320

Ala Gly Ala Asp His Val Asp Asp Asp Arg Thr Ala Ser Ala Thr Ala

325 330 335

Asp Leu

<210>321

<211>993

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>321

atgagagttg tcaaagccgc tgctgtccaa ctgagtcctg tcctccatag ccgcgacgga 60

acggtcgaaa aggtcgtgcg gaagatccat gaactcgccg aagagggagt cgagttcgcc 120

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<210>322

<211>330

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>322

Met Arg Val Val Lys Ala Ala Ala Val Gln Leu Ser Pro Val Leu His

1 5 10 15

Ser Arg Asp Gly Thr Val Glu Lys Val Val Arg Lys Ile His Glu Leu

20 25 30

Ala Glu Glu Gly Val Glu Phe Ala Thr Phe Pro Glu Thr Val Val Pro

35 40 45

Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Gln Thr Pro Leu Gln Gln Ile Phe

50 55 60

Gly Thr Glu Tyr Leu Arg Leu Leu Asp Gln Ala Val Thr Val Pro Ser

65 70 75 80

Ala Ala Thr Asp Ala Ile Gly Glu Ala Ala Arg Trp Ala Gly Leu Val

85 90 95

Val Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp Gly Gly Thr Leu Tyr Asn Thr

100 105 110

Gln Leu Leu Phe Asp Ala Asp Gly Ser Leu Ile Gln Arg Arg Arg Lys

115 120 125

Ile Thr Pro Thr His Tyr Glu Arg Met Ile Trp Gly Gln Gly Asp Gly

130 135 140

Ser Gly Leu Arg Ala Val Asp Ser Lys Ala Gly Arg Ile Gly Gln Leu

145 150 155 160

Ala Cys Trp Glu His Asn Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met Ala

165 170 175

Asp Gly Glu Gln Ile His Ser Ala Met Tyr Pro Gly Ser Met Phe Gly

180 185 190

Asp Ser Phe Ser Gln Lys Thr Glu Ile Asn Ile Arg Gln His Ala Leu

195 200 205

Glu Ser Ala Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Asp Ala Asp

210 215 220

Gln Gln Ala Gln Ile Met Lys Asp Thr Gly Cys Gly Ile Gly Pro Ile

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Ala Pro Asp Gly Ser Leu Leu

245 250 255

Gly Glu Pro Ile Arg Ser Gly Glu Gly Val Val Val Ala Asn Leu Asp

260 265 270

Phe Thr Leu Ile Asp Arg Arg Lys Gln Val Met Asp Ser Arg Gly His

275 280 285

Tyr Ser Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Ile Asp Arg Thr Pro Thr

290 295 300

Ala His Val His Glu Arg Ala Thr His Pro Thr Thr Gly Ala Glu Gln

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Gly Ser Glu Asp Val Phe Glu Ala Arg Ile

325 330

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<211>951

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

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<210>324

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<212>PRT

<213>未知

<220>

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<400>324

Met Ser Asn Val Lys Val Ala Val Val Gln Arg Ala Pro Val Phe Gly

1 5 10 15

Asn Arg Ala Ala Thr Leu Asp Arg Ala Val Ala Ala Leu Ala Glu Ala

20 25 30

Ala Gln Gln Gly Ala Lys Leu Val Val Met Pro Glu His Phe Ile Pro

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Gly Tyr Pro Ala Trp Ile Trp Arg Leu Arg Pro Gly Thr Asp Leu Arg

50 55 60

Leu Cys Glu Gln Leu His Ala Met Leu Arg Ala Asn Ala Val Arg Leu

65 70 75 80

Asp Asp Gly Asp Leu Ala Pro Leu Thr Glu Ala Ala Gln Arg His Ala

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Leu Thr Val Val Cys Gly Val Cys Glu Ile Asp Thr Glu Phe Ser Arg

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Gly Thr Leu Tyr Asn Thr Val Val Val Ile Gly Pro Asp Gly Thr Leu

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Leu Asn Arg His Arg Lys Leu Met Pro Thr Asn Pro Glu Arg Met Val

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Trp Gly Met Gly Asp Ala Thr Gly Leu Lys Val Val Asp Thr Pro Cys

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Gly Arg Ile Gly Thr Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro Phe Ala

165 170 175

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180 185 190

Tyr Asp Glu Gly Pro Val Trp Leu Ala Ser Met Gln His Ile Ala Arg

195 200 205

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Asp Met Pro Asp Thr Leu Pro Gly Lys Ala Gln Leu Phe Pro Glu Ala

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Asp Ala Trp Val Asn Ala Gly Asp Ser Val Ile Val Ala Pro Gly Gly

245 250 255

Arg Thr Val Ala Gly Pro Leu His Glu Ala Phe Gly Leu Phe Thr Ala

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Glu Ile Asp Leu Ser Arg Val Gly Met Ala Arg Arg Ser Leu Asp Val

275 280 285

Ala Gly His Tyr Gly Arg Pro Asp Ile Phe Cys Leu Gln Val Asn Ala

290 295 300

Arg Ala Gln Pro Pro Val Glu Val Thr His His Gly

305 310 315

<210>325

<211>1077

<212>DNA

<213>未知

<220>

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<400>325

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gagatccatt gcagccagtt ccccggctcg ctggtcggcc cgatcttttc cgagcagatg 600

gaaatcacca tgcgtcatca cgcgctggaa tccggctgct tcgtcgtcaa cgccactgca 660

tggctgacgc ctgagcaggt gcgatcacag gcgccaacac cggcaatgga aaaagccttc 720

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cgcgacggcg aaggcatggt catcgccgat cttgattttg atctcatcac caagcgcaag 840

cgaatgatgg attcggttgg ccactacgca cggccggaat tgttgagcct gcagctcgac 900

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<210>326

<211>358

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>326

Met Thr Ala Lys Lys Ile Val Arg Ala Ala Ala Val Gln Leu Asn Pro

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Val Leu Asp Ser Ala Asp Gly Thr Leu Val Lys Val Leu Gln Ala Ile

20 25 30

Ala Asp Ala Ala Ala Gln Gly Val Gln Leu Ile Val Phe Pro Glu Thr

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Val Val Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Val Thr Pro Ala Val Ser

50 55 60

Met Gly Ala Ala His Leu Lys Leu Tyr Glu Gln Ser Pro Thr Val Pro

65 70 75 80

Gly Pro Leu Thr Asp Ala Val Ala Ala Ala Ala Arg Ala His Gln Met

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Val Val Val Leu Gly Val Asn Glu Arg Asp His Gly Thr Leu Tyr Asn

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Thr Gln Leu Ile Phe Asp Ala Asp Gly Thr Leu Pro Leu Lys Arg Arg

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Lys Ile Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Val Trp Gly Met Gly Asp

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Gly Ser Gly Leu Arg Thr Val Lys Thr Glu Val Gly Thr Val Gly Ala

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Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met

165 170 175

Ala Gln His Glu Glu Ile His Cys Ser Gln Phe Pro Gly Ser Leu Val

180 185 190

Gly Pro Ile Phe Ser Glu Gln Met Glu Ile Thr Met Arg His His Ala

195 200 205

Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala Trp Leu Thr Pro

210 215 220

Glu Gln Val Arg Ser Gln Ala Pro Thr Pro Ala Met Glu Lys Ala Phe

225 230 235 240

Ser Gly Gly Cys Tyr Thr Ala Ile Ile Ser Pro Glu Gly Lys His Leu

245 250 255

Gly Glu Pro Leu Arg Asp Gly Glu Gly Met Val Ile Ala Asp Leu Asp

260 265 270

Phe Asp Leu Ile Thr Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His

275 280 285

Tyr Ala Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Gln Leu Asp Asn Arg Ser Thr

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Ala Pro Leu Thr Thr Ser Pro Val Ala Ala Ala Ala Pro Ser Leu Ala

305 310 315 320

Glu Met Glu Ala Gln Arg Leu Ser Arg Tyr Leu Asp Ala Ser Ser Gly

325 330 335

Ser Ala Ala Gln Gly Ile Glu Ala Ala Tyr Ile Asn Ala Leu Ser Ser

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<210>327

<211>975

<212>DNA

<213>未知

<220>

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<400>327

atggttgatc aaatacttaa cgatcgttct gaattattaa cagttggttt ggcgcagatt 60

gctccaatct ggctgaaccg cgaaaaaaca cttgcgaaag tggttgagaa agtaaatcaa 120

gctgcaaagc aagattgtca tcttgttgct tttggtgaag ctttggtccc cggatatccc 180

ttttggattg aacttacaga tggcgcgcga ttcaactcca atgttcaaaa agaaattcac 240

gcgcactata tggatcaggc agtacagata gagaatggtc atttaaaagc gctttgtgaa 300

acatcggccg caaacaagat tgccgtgatc gttgggtgca ttgaacgcgc agccgatcgc 360

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aactggatgc cattgccacg cgccgcattg tacgcacaag gtgaagactt tcatgtcgca 600

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cactattccc gtcctgatgt cacgcagttg attgtgaaca gacaaagaca atcaacaatc 960

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<210>328

<211>324

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>328

Met Val Asp Gln Ile Leu Asn Asp Arg Ser Glu Leu Leu Thr Val Gly

1 5 10 15

Leu Ala Gln Ile Ala Pro Ile Trp Leu Asn Arg Glu Lys Thr Leu Ala

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Lys Val Val Glu Lys Val Asn Gln Ala Ala Lys Gln Asp Cys His Leu

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Val Ala Phe Gly Glu Ala Leu Val Pro Gly Tyr Pro Phe Trp Ile Glu

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Leu Thr Asp Gly Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Gln Lys Glu Ile His

65 70 75 80

Ala His Tyr Met Asp Gln Ala Val Gln Ile Glu Asn Gly His Leu Lys

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Ala Leu Cys Glu Thr Ser Ala Ala Asn Lys Ile Ala Val Ile Val Gly

100 105 110

Cys Ile Glu Arg Ala Ala Asp Arg Gly Gly His Ser Leu Tyr Ala Ser

115 120 125

Leu Val Phe Ile Asn Pro Gln Gly Gln Ile Gly Ser Val His Arg Lys

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Leu Met Pro Thr Tyr Glu Glu Arg Leu Thr Trp Ser Pro Gly Asp Gly

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His Gly Leu Arg Thr His Gln Leu Gly Ala Phe Thr Val Gly Gly Leu

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Asn Cys Trp Glu Asn Trp Met Pro Leu Pro Arg Ala Ala Leu Tyr Ala

180 185 190

Gln Gly Glu Asp Phe His Val Ala Ile Trp Pro Gly Ser Ile His Asn

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Thr Gln Asp Ile Thr Arg Tyr Ile Ala Lys Glu Ser Arg Ser Phe Val

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Met Ser Thr Ser Gly Phe Met Arg Lys Glu Asp Phe Pro Ser Asp Thr

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Pro His Leu Asp Lys Ile Leu Ala Asn Ser Pro Asn Val Leu Ala Asn

245 250 255

Gly Gly Ser Cys Leu Ala Gly Pro Asp Gly Gln Trp Ile Val Glu Pro

260 265 270

Phe Val Asn Glu Glu Lys Leu Val Val Ala Thr Val Asn His Lys Gln

275 280 285

Val Arg Glu Glu Arg Gln Asn Phe Asp Pro Val Gly His Tyr Ser Arg

290 295 300

Pro Asp Val Thr Gln Leu Ile Val Asn Arg Gln Arg Gln Ser Thr Ile

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Lys Leu Asn Asp

<210>329

<211>1023

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>329

gtgccggcca aagtacgcgc cgccgccgtg cagctcagcc ccgtgctctt cagccgtgaa 60

ggcacgacca gcaaggtctg cgacaagatt gccgaggcgg cggcgcaggg cgccgagctg 120

gtggtgtttc ccgaaaccgt agtgccgtat tacccgtatt tctcgttcat caaggctccg 180

gccgtgatcg gcgccgagca cttactcttg ctcgaacaag ccgtcacggt gcccgggccc 240

agcgtcgaag ccatcgcaga agccgctcgc aaggcgggcg cggtggtttc gatcggcgtc 300

aacgaacgcg atcacggcac gctgtacaac acccagctgt tgttcgacgc cgacggtcgg 360

ttggcgcaag cccgccgcaa gatcaccccc acgtatcacg agcggatgat ctgggggcag 420

ggcgatggct cgggcttggt ggcggtggat acgcgagtcg gcaggattgg ctccctggcg 480

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cacgtggcca tgttccctgg ctcgctcgtg ggcgacatct tccgcgagca aatcgaggtc 600

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agcgacgcgc aggtgacgca gatcgcgggc gacaccaagc tcgaccgcgc cctgcgcggc 720

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tga 1023

<210>330

<211>340

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>330

Val Pro Ala Lys Val Arg Ala Ala Ala Val Gln Leu Ser Pro Val Leu

1 5 10 15

Phe Ser Arg Glu Gly Thr Thr Ser Lys Val Cys Asp Lys Ile Ala Glu

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Ala Ala Ala Gln Gly Ala Glu Leu Val Val Phe Pro Glu Thr Val Val

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Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Ile Lys Ala Pro Ala Val Ile Gly

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Ser Val Glu Ala Ile Ala Glu Ala Ala Arg Lys Ala Gly Ala Val Val

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Ser Ile Gly Val Asn Glu Arg Asp His Gly Thr Leu Tyr Asn Thr Gln

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Gly Leu Val Ala Val Asp Thr Arg Val Gly Arg Ile Gly Ser Leu Ala

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Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met Ala Asp

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His Glu Gln Ile His Val Ala Met Phe Pro Gly Ser Leu Val Gly Asp

180 185 190

Ile Phe Arg Glu Gln Ile Glu Val Thr Ile Arg His His Ala Leu Glu

195 200 205

Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Gly Tyr Leu Ser Asp Ala Gln

210 215 220

Val Thr Gln Ile Ala Gly Asp Thr Lys Leu Asp Arg Ala Leu Arg Gly

225 230 235 240

Gly Cys Phe Thr Ala Ile Val Ser Pro Glu Gly Thr Leu Leu Ala Pro

245 250 255

Pro Leu Thr Asp Gly Glu Gly Met Val Ile Ala Asp Leu Asp Leu Ser

260 265 270

Leu Ile Ala Lys Arg Lys Arg Met Met Asp Ser Val Gly His Tyr Ser

275 280 285

Arg Pro Glu Leu Leu Ser Val Leu Ile Asp Arg Ser Pro Gln Pro His

290 295 300

Leu Arg Glu Lys Thr Ala Ser Leu Pro Glu Pro Arg Met Ser His Glu

305 310 315 320

Ser Leu Ala Pro Asp Ser Asn Gly Leu Arg Asp Ala Asp Ala Lys Ala

325 330 335

Ser Thr Leu Ser

340

<210>331

<211>1041

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>331

atgtccggaa caggacctat cggaccggtc gtgaaggtcg ccgtcgtaca agccgcgcca 60

tgtctgctcg atcttgatgc gggcgtcgag aaggcgatcg ccttgatcga ccaagcgggc 120

aaggctggcg cgcggctcat caattttccc gaaatttggc tgccgggtta tccttggtgg 180

atctggctga atccacccgc catcaacatg cagtatgtcg cgccttacat gaacaactcc 240

attgtcgcag gcagcaagca tgaccacgca cttcgggccg ccgcgcgccg caacaatatt 300

cacgtcgtga tcggtgtctc cgagcgcgcc ggcggcagtc tgtacatggc tcagtggcac 360

tatgggcccg agggcgaggt gatctcgcgt cgtcgtaagc taaaacccac ccatgtcgaa 420

cgcagcgtct ttggcgaagg cgacggcagc gacatgatcg ttactcagac cgatttcggg 480

cgcgtcggcg cgctatgctg ttgggaacac ctgcaaccgc tgtcgaaata cgcgctcttt 540

tcccaggacg agcagattca ttgcgcggcg tggcccgctt tcagcctcta tgcaaaactc 600

tcgaaggcct tcagccccga agtcagcgtc aacgtgaacc aaatctacgc cgtagaaggg 660

caatgcttcg tcctgtcgtc gtgctcggtt atcgatcagg cgatctacga cacgttggtg 720

cagaacgaat tgcaccagaa gttcctcgag gtgggcgggg gctacagccg aatcttcggg 780

ccgaacggtg cggaattcgg tgagaatctc ccacccgata gggaaggcct ggtggttgcc 840

gatatcgatc tcggcctgat ctcgcactcc aagagtgccg ctgatccggc tggtcactac 900

gcgagggccg acgctctggc gctcatgcat aaccgtaatc cccgccgtcc ggttatcggt 960

ttcggcgagg cgacgcgcaa ggttgccgac gcactgccta aaggcgcgga acccgcggaa 1020

gcgctcgaag cggccgagtg a 1041

<210>332

<211>346

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>332

Met Ser Gly Thr Gly Pro Ile Gly Pro Val Val Lys Val Ala Val Val

1 5 10 15

Gln Ala Ala Pro Cys Leu Leu Asp Leu Asp Ala Gly Val Glu Lys Ala

20 25 30

Ile Ala Leu Ile Asp Gln Ala Gly Lys Ala Gly Ala Arg Leu Ile Asn

35 40 45

Phe Pro Glu Ile Trp Leu Pro Gly Tyr Pro Trp Trp Ile Trp Leu Asn

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Pro Pro Ala Ile Asn Met Gln Tyr Val Ala Pro Tyr Met Asn Asn Ser

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Ile Val Ala Gly Ser Lys His Asp His Ala Leu Arg Ala Ala Ala Arg

85 90 95

Arg Asn Asn Ile His Val Val Ile Gly Val Ser Glu Arg Ala Gly Gly

100 105 110

Ser Leu Tyr Met Ala Gln Trp His Tyr Gly Pro Glu Gly Glu Val Ile

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Ser Arg Arg Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Val Glu Arg Ser Val Phe

130 135 140

Gly Glu Gly Asp Gly Ser Asp Met Ile Val Thr Gln Thr Asp Phe Gly

145 150 155 160

Arg Val Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys

165 170 175

Tyr Ala Leu Phe Ser Gln Asp Glu Gln Ile His Cys Ala Ala Trp Pro

180 185 190

Ala Phe Ser Leu Tyr Ala Lys Leu Ser Lys Ala Phe Ser Pro Glu Val

195 200 205

Ser Val Asn Val Asn Gln Ile Tyr Ala Val Glu Gly Gln Cys Phe Val

210 215 220

Leu Ser Ser Cys Ser Val Ile Asp Gln Ala Ile Tyr Asp Thr Leu Val

225 230 235 240

Gln Asn Glu Leu His Gln Lys Phe Leu Glu Val Gly Gly Gly Tyr Ser

245 250 255

Arg Ile Phe Gly Pro Asn Gly Ala Glu Phe Gly Glu Asn Leu Pro Pro

260 265 270

Asp Arg Glu Gly Leu Val Val Ala Asp Ile Asp Leu Gly Leu Ile Ser

275 280 285

His Ser Lys Ser Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ala Arg Ala Asp

290 295 300

Ala Leu Ala Leu Met His Asn Arg Asn Pro Arg Arg Pro Val Ile Gly

305 310 315 320

Phe Gly Glu Ala Thr Arg Lys Val Ala Asp Ala Leu Pro Lys Gly Ala

325 330 335

Glu Pro Ala Glu Ala Leu Glu Ala Ala Glu

340 345

<210>333

<211>1038

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>333

atggccattg aacatccccg ctatcgggtc gctgccgttc aggcggcgcc agagttcctt 60

aatctcgagg caaccgttga caagacgatt gcgcttatcg aggaggccgc ccgcggaggc 120

gcaagtctca ttgctttccc tgaaacttgg atacctggat atccatggtt tgcctggctt 180

ggtgcgccga tctggggcat gaaattcatc caggcgtacc atgacaactc gatggtgatc 240

gacggcgccc agtttgagcg tattgcgcaa gcagcatcgc gttgcaacat cactgttgtg 300

cttggcttta gcgagaagga cgcaggaagc ctgtatattg cccaggccat cctgagccct 360

gaagggaaga ccatcgccac gcgtcgcaag ctgaaaccca ctcatgtcga acgcgcgatc 420

ttcggcgaag gcgacggcag cgacctggca gttcacgaca ccaagctcgg cagggtgggc 480

gccctttgct gctgggagca tcttcagcca ctttccaaat acgcgatgta tgctcagaac 540

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cttgggccag aggtgaacaa cgccgcgagt cggttgtatg cggtcgaggg ccagtgcttc 660

gtggttgcgc cgtgtgcaac ggtttcgcaa aagatgatcg atatgctttg cgagacaccc 720

gagcaacaag cgctcttgaa gccggggggt ggtcacgcgc aaatctacgg tcccgacgga 780

cgatcgctgg ccgatccgct gcctccggac gcggaggggc tgttgtatgc agacattgac 840

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gacgtgacac aactgctgct tgaccgcaat ccaaagcccc gtgtcgtgca tgctaagccc 960

ggccaaagcg ccaacaacag ctcacccggc atgcgggccg tcgagcatac cgagctcgaa 1020

gaaggtgaac aggcctga 1038

<210>334

<211>345

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>334

Met Ala Ile Glu His Pro Arg Tyr Arg Val Ala Ala Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Glu Phe Leu Asn Leu Glu Ala Thr Val Asp Lys Thr Ile Ala Leu

20 25 30

Ile Glu Glu Ala Ala Arg Gly Gly Ala Ser Leu Ile Ala Phe Pro GIu

35 40 45

Thr Trp Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Phe Ala Trp Leu Gly Ala Pro Ile

50 55 60

Trp Gly Met Lys Phe Ile Gln Ala Tyr His Asp Asn Ser Met Val Ile

65 70 75 80

Asp Gly Ala Gln Phe Glu Arg Ile Ala Gln Ala Ala Ser Arg Cys Asn

85 90 95

Ile Thr Val Val Leu Gly Phe Ser Glu Lys Asp Ala Gly Ser Leu Tyr

100 105 110

Ile Ala Gln Ala Ile Leu Ser Pro Glu Gly Lys Thr Ile Ala Thr Arg

115 120 125

Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Val Glu Arg Ala Ile Phe Gly Glu GIy

130 135 140

Asp Gly Ser Asp Leu Ala Val His Asp Thr Lys Leu Gly Arg Val Gly

145 150 155 160

Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys Tyr Ala Met

165 170 175

Tyr Ala Gln Asn Glu Gln Val His Ile Ala Ala Trp Pro Ser Phe Ser

180 185 190

Leu Tyr Val Asp Ala Ala Tyr Ala Leu Gly Pro Glu Val Asn Asn Ala

195 200 205

Ala Ser Arg Leu Tyr Ala Val Glu Gly Gln Cys Phe Val Val Ala Pro

210 215 220

Cys Ala Thr Val Ser Gln Lys Met Ile Asp Met Leu Cys Glu Thr Pro

225 230 235 240

Glu Gln Gln Ala Leu Leu Lys Pro Gly Gly Gly His Ala Gln Ile Tyr

245 250 255

Gly Pro Asp Gly Arg Ser Leu Ala Asp Pro Leu Pro Pro Asp Ala Glu

260 265 270

Gly Leu Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Leu Ala Ala Ile Thr Leu Ala Lys

275 280 285

Ala Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Thr Gln

290 295 300

Leu Leu Leu Asp Arg Asn Pro Lys Pro Arg Val Val His Ala Lys Pro

305 310 315 320

Gly Gln Ser Ala Asn Asn Ser Ser Pro Gly Met Arg Ala Val Glu His

325 330 335

Thr Glu Leu Glu Glu Gly Glu Gln Ala

340 345

<210>335

<211>1053

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>335

atgactacgc gcgtgattaa agtcgctgcc gcgcagctgt ctccggtgct ggcaactgca 60

tcggagcaca gccgcgagga cacgattgcg aaagtgatcg acgccatcgc tgcggcgtcg 120

caacagggcg cgcaactgat tgtgtttccg gaaacagtcg ttccgtatta cccgtatttt 180

tcatttatca cgcccgcggt aacgatgggt gccgaacatt tgaaattgta cgaacaggca 240

gtgacggtac ccagcgcagc gacagatgct gtcgctgcgg cggcaaaaaa ttatggcatg 300

gtagtggtgc tcggaattaa tgaacgcgat cacggctcgc tgtacaacgc gcaattaatt 360

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cgcatggtgt ggggacaagg cgacggcagc ggtttaaaag ttgtcgatac tgctgccggc 480

cgtgtcggcg cgctcgcgtg ctgggaacat tacaacccgc tcgcgcgtta cagcctgatg 540

gcacaacacg aagaaattca ttgcagtcaa tttccgggat cgttggtcgg ccctattttc 600

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aatgcaacgg cctggcttag cgatacacaa atccaatcaa ttacccccga taaagccatg 720

cagaaagcac tgcgcggcgg ttgctacacc gcaatcatct cgcccgaagg caaacatctg 780

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accaaacgta aacgcatgat ggattccgtc ggccattacg cgcgaccaga actactttct 900

ttgctcctcg atgatcgcgt aactgcgccg ctcaaaaact tacagacgac gatggcctct 960

gccaaatccg ctgaagatgg ttttccttta tttgcagacg ttttatatcc agacagttct 1020

ttcattgaga cgtcgaaatt cgcggagtca tga 1053

<210>336

<211>350

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>336

Met Thr Thr Arg Val Ile Lys Val Ala Ala Ala Gln Leu Ser Pro Val

1 5 10 15

Leu Ala Thr Ala Ser Glu His Ser Arg Glu Asp Thr Ile Ala Lys Val

20 25 30

Ile Asp Ala Ile Ala Ala Ala Ser Gln Gln Gly Ala Gln Leu Ile Val

35 40 45

Phe Pro Glu Thr Val Val Pro Tyr Tyr Pro Tyr Phe Ser Phe Ile Thr

50 55 60

Pro Ala Val Thr Met Gly Ala Glu His Leu Lys Leu Tyr Glu Gln Ala

65 70 75 80

Val Thr Val Pro Ser Ala Ala Thr Asp Ala Val Ala Ala Ala Ala Lys

85 90 95

Asn Tyr Gly Met Val Val Val Leu Gly Ile Asn Glu Arg Asp His Gly

100 105 110

Ser Leu Tyr Asn Ala Gln Leu Ile Phe Asp Ala Asp Gly Glu Leu Leu

115 120 125

Leu Lys Arg Arg Lys Ile Thr Pro Thr Tyr His Glu Arg Met Val Trp

130 135 140

Gly Gln Gly Asp Gly Ser Gly Leu Lys Val Val Asp Thr Ala Ala Gly

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Arg Val Gly Ala Leu Ala Cys Trp Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg

165 170 175

Tyr Ser Leu Met Ala Gln His Glu Glu Ile His Cys Ser Gln Phe Pro

180 185 190

Gly Ser Leu Val Gly Pro Ile Phe Ala Glu Gln Met Glu Ile Thr Met

195 200 205

Arg His His Ala Leu Glu Ser Gly Cys Phe Val Val Asn Ala Thr Ala

210 215 220

Trp Leu Ser Asp Thr Gln Ile Gln Ser Ile Thr Pro Asp Lys Ala Met

225 230 235 240

Gln Lys Ala Leu Arg Gly Gly Cys Tyr Thr Ala Ile Ile Ser Pro Glu

245 250 255

Gly Lys His Leu Cys Pro Pro Leu Tyr Asp Gly Glu Gly Ile Ile Val

260 265 270

Ala Glu Leu Asp Phe Ala Leu Ile Thr Lys Arg Lys Arg Met Met Asp

275 280 285

Ser Val Gly His Tyr Ala Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Leu Leu Asp

290 295 300

Asp Arg Val Thr Ala Pro Leu Lys Asn Leu Gln Thr Thr Met Ala Ser

305 310 315 320

Ala Lys Ser Ala Glu Asp Gly Phe Pro Leu Phe Ala Asp Val Leu Tyr

325 330 335

Pro Asp Ser Ser Phe Ile Glu Thr Ser Lys Phe Ala Glu Ser

340 345 350

<210>337

<211>957

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>337

atgaagggag tgtgtgccat gtcgacgaaa gttgccatcg tccaggcgcc gccggtcctg 60

ctgcatcgcg acaggacgat tgcgaaggtg cgttcgtcga tcgaggatgc cgccaatgcg 120

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ggcgcgactg tcgttatcgg catcaatgaa ctcgacagcg agttcagcgg aacgacattg 360

ttcaacaccg tggtggtcat cggccccgac ggaacgcgcc tcaacaggca tcgaaaatta 420

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<210>338

<211>313

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>338

Met Lys Gly Val Cys Ala Met Ser Thr Lys Val Ala Ile Val Gln Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Leu Leu His Arg Asp Gly Arg Leu Arg Arg Cys Val Arg

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Arg Ser Arg Met Pro Pro Met Arg Ala Pro Arg Ser Tyr Phe Pro Ala

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Tyr Val Pro Gly Tyr Pro Ser Trp Ile Trp Arg Leu Arg Pro Gly Gly

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Asp Met Gly Leu Ser Ser Glu Ile Thr Gln Asp Cys Gly Lys Met Pro

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Leu Ile Ser Arg Thr Glu Ala Trp Arg Met Ser Arg Gly Leu Gln Gln

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Asn Ser Ala Arg Leu Ser Leu Ser Ala Ser Met Asn Ser Thr Ala Ser

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Ser Ala Glu Arg His Cys Ser Thr Val Val Val Ile Gly Pro Asp Gly

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Thr Arg Leu Asn Arg His Arg Lys Leu Met Pro Thr Asn Pro Glu His

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Gly Val Gly His Gly Arg Cys Leu Gly Ser Ala Cys His Arg Tyr Ala

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Gly Gly Thr Ala Gly Asn His Ile Cys Trp Glu Ser Tyr Met Pro Leu

165 170 175

Ala Arg Tyr Ala Leu Tyr Ala Gln Gly Ile Glu Ile Tyr Val Ala Pro

180 185 190

Thr Trp Asp Ala Gly Glu Ser Trp Ile Ala Thr Met Arg His Ile Ala

195 200 205

Lys Glu Ala Gly Cys Trp Val Ile Gly Thr Ala Thr Val Ile Gln Gly

210 215 220

Ser Asp Val Pro Asp Asp Phe Pro Glu Arg Asp Lys Leu Phe Lys Pro

225 230 235 240

Arg Ser Gly Ser Thr Thr Ala Met Arg Ser Trp Ser Ser Pro Trp Ala

245 250 255

Arg Leu Leu Pro Asp Arg Thr Ile Asp Arg Lys Ala Tyr Ser Thr Pro

260 265 270

Thr Ser Thr Gly Arg Pro Arg Gly Glu Pro Ala Gly Arg Ser Met Cys

275 280 285

Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Phe Ser Phe Ser Val Asn Arg Lys

290 295 300

Pro Phe Arg Pro Ala Asp Phe Val Gly

305 310

<210>339

<211>1020

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>339

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gcgggcatcg acaaggcggt ggcgctgatc gagcaagccg ccgcgcagga cgttcagctc 120

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<210>340

<211>329

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>340

Met Ser Gly Ser Phe Lys Val Ala Ala Val Gln Ala Ala Pro Ala Phe

1 5 10 15

Leu Asn Leu Asp Ala Gly Ile Asp Gly Gly Gly Ala Asp Arg Ala Ser

20 25 30

Arg Arg Ala Gly Arg Ser Ala His Arg Leu Ser Arg Asp Leu Val Ala

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Gly Tyr Pro Trp Trp Ile Trp Leu Asp Ala Pro Ala Val Thr Met Gly

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Tyr Val Val Pro Tyr Asn Leu Asn Ser Arg Gly Gly Gln Pro Ala Gly

65 70 75 80

Gln Ala Ser Gly Lys Cys Arg Ala Glu Gln His Pro Gly Gly Asp Gly

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Leu Ser Glu Arg His Asp Gly Thr Leu Tyr Ile Ala Gln Trp His Tyr

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Gly Glu Asp Gly Glu Val Ile Ala Thr Ala Gln Ala Gln Ala Asp Pro

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Cys Arg Thr His Gly Val Arg Gly Arg Arg Arg Gln Arg His Val Val

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Lys Asp Thr Ser Leu Gly Arg Val Gly Ala Leu Cys Cys Trp Glu His

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Leu Gln Pro Leu Asn Lys Thr Arg Cys Thr Pro Arg Thr Ser Arg Ser

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Thr Ser Val Pro Gly Pro Ala Ser Ala Ser Thr Arg Ala Ala Leu Cys

180 185 190

Ala Trp Gly Arg Pro Gln His Gly Gly Lys Pro Asp Val Cys Gly Arg

195 200 205

Gly Pro Val Leu Cys Ser Leu Pro Ala Pro Arg Ser Val Arg Thr Cys

210 215 220

Ser Thr Cys Ser Ala Thr Arg Lys Ser Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly

225 230 235 240

Phe Ala Arg Ile Phe Gly Pro Asp Gly Ser Pro Met Gly Asn Val Leu

245 250 255

Glu Glu His Glu Arg Ala Gly Asp Arg Arg Asn Arg Ser His His Asp

260 265 270

Cys Asp Arg Gln Gly Gly Gly Pro Val Arg Ala Leu Phe Pro Ala Arg

275 280 285

Cys Val Pro Thr Asp Val Gln Pro Glu Ala Lys Pro Gly Gly Asp Ala

290 295 300

Ile Arg Lys Thr Trp Pro Ala Arg Leu Ser Arg Pro Pro Arg Ile Arg

305 310 315 320

Ser Ala Gln Thr Gly Ser Gln Arg Asn

325

<210>341

<211>1056

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>341

atggcactga ccaacccaaa atataaagtc gccgccgtcc aggccgcgcc agcgttcctc 60

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gtcgatctcg gcatgatctc ggtcgcgaag gccgccgccg atccggccgg acattatgcg 900

cggccggatg tcacaaggtt gctgctcaac aaacgcccgg gcaatcgtgt cgaggcgctg 960

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<210>342

<211>342

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>342

Met Ala Leu Thr Asn Pro Lys Tyr Lys Val Ala Ala Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ala Phe Leu Asp Leu Asp Ala Pro Ser Lys Lys Arg Ser Gly Ser

20 25 30

Thr Arg Pro Ala Pro Arg Ala Arg Ala Ser Leu Arg Ser Arg Thr Trp

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Ile Pro Gly Tyr Pro Trp Trp Ile Trp Leu Gly Ala Pro Ala Trp Ala

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Ile Met Lys Gly Phe Val Ser Pro Ile Ser Thr Ile Arg Ser Pro Met

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Thr Val Arg Pro Arg Thr Asn Cys Ala Arg Pro Pro Ser Ala Thr Tyr

85 90 95

Arg Arg Gly Ala Arg Pro Val Gly Ala Arg Arg Arg Gln Ser Leu Tyr

100 105 110

Arg Ala Met Asp His Arg Pro Thr Ala Lys Leu Ser Pro Ser Ala Ala

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Ser Ser Ser Arg Pro Met Ser Ser Val Arg Cys Ser Ala Arg Ala Met

130 135 140

Ala Ala Thr Leu Pro Cys Met Ser Ser Arg Ser Gly Ala Ser Ala Arg

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Cys Ala Ala Gly Ser Ile Cys Thr Ala Val Glu Ile Arg His Val Cys

165 170 175

Ala Glu Arg Ala Gly Ser Arg Gly Gly Leu Ala Glu Leu Phe Ala Thr

180 185 190

Ile Arg Ser Pro Met Pro Ser Val Arg Arg Ser Thr Thr Pro Pro Ala

195 200 205

Arg Ser Thr Arg Ser Arg Asp Arg Ala Ser Ser Trp His Pro Ala Pro

210 215 220

Pro Phe Gln Arg Lys Ser Thr Cys Cys Ala Thr Arg Arg Thr His Gly

225 230 235 240

Leu Leu His Ala Gly Gly Gly Phe Ala Ala Ile Tyr Gly Pro Asp Gly

245 250 255

Ser Pro Ile Gly Asp Arg Trp Arg Pro Thr Arg Lys Val Ser Met Pro

260 265 270

Met Ser Ile Ser Ala Ser Arg Ser Arg Arg Pro Pro Asp Pro Ala Gly

275 280 285

His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Thr Arg Leu Leu Leu Asn Lys Arg Pro

290 295 300

Gly Asn Arg Val Arg Arg Trp His Phe Arg Trp Ile Arg Leu Arg Gln

305 310 315 320

Val Arg Arg Ser Pro Arg Tyr Arg Asp Arg Pro Glu Gly Cys Arg Thr

325 330 335

Ala Lys Arg Gly Arg Ile

340

<210>343

<211>942

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>343

atgaagtcaa aaattgcggt tattcagcga cctcctgtat tgttagacct tcaggcttca 60

atcgcccgtg ccattacttc tgttgaggaa gcggcaggca agggatctga gctccttgtt 120

tttcccgaga catttctgcc tggttatccg tcctggatct ggcgtctcaa gccgggcgga 180

gacatggtgc tgacatctga aatccacgca aaatatcgcg cgaactctgt tgatgttgag 240

cgcggggatc tggccccttt atgcgaagcg gcggcgaaac acggcgtcac aattgtcatg 300

gggctcagtg aaattgatgg gcgctacagc gggactacac tctttaatac agtggtgacc 360

attggcgcgg aaggagagct ccttaataga caccgcaagc tcatgccgac aaacccagag 420

cgtatggtct gggggcaagg ggatgcctct ggtctgcggg ttgtcgacac gcccgtgggc 480

cgcgtcggca cgctgatctg ctgggaaaac tacatgccgc tatcgcgcta tgcgctttat 540

tctcaaaaca ttgacatcta tgtggcgccg acctgggacg cgggcgagag ctggatcgcc 600

tccatgcagc atatcgccaa agaaggtggc tgctgggtga tcggcacggc cacggcgatg 660

gagggctctg atgtcccagc cgacttccct cagcgggagg tgcttttccc tgatagcagc 720

gaatggatca atgacggtga cgctgtagtg gttaaaccca tgggggcgat tgtcgcgggt 780

ccgcatcacc gggataagag tattctctat gctgagattg acgtcgaagt ggcacgcaat 840

gcgcggcgct cgctcgatgt ggcggggcat tactcccggc cggatatttt ttcctttggc 900

gtggatcgcc ggcctttgcc gccggttacg tttgaggatt ga 942

<210>344

<211>303

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>344

Met Lys Ser Lys Ile Ala Val Ile Gln Arg Pro Pro Val Leu Leu Asp

1 5 10 15

Leu Gln Ala Ser Ile Ala Arg Ala Ile Thr Leu Leu Arg Lys Arg Gln

20 25 30

Ala Arg Asp Leu Ser Ser Leu Phe Phe Pro Arg His Phe Cys Leu Val

35 40 45

Ile Arg Pro Gly Ser Gly Val Ser Ser Arg Ala Glu Thr Trp Cys His

50 55 60

Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ile Ala Arg Thr Leu Asp Val Glu Arg Gly

65 70 75 80

Asp Leu Ala Pro Leu Cys Glu Ala Ala Ala Lys His Gly Val Thr Ile

85 90 95

Val Met Gly Gln Asn Trp Ala Leu Gln Arg Asp Tyr Thr Leu Tyr Ser

100 105 110

Gly Asp His Trp Arg Gly Arg Arg Leu Leu Asn Arg His Arg Lys Leu

115 120 125

Met Pro Thr Asn Pro Glu Arg Met Val Trp Gly Gln Gly Asp Ala Ser

130 135 140

Val Cys Gly Leu Ser Thr Arg Pro Trp Ala Ala Ser Ala Arg Ser Ala

145 150 155 160

Gly Lys Thr Thr Cys Arg Tyr Arg Tyr Ala Leu Tyr Ser Gln Asn Ile

165 170 175

Asp Ile Tyr Val Ala Pro Thr Trp Asp Ala Gly Glu Ser Trp Ile Ala

180 185 190

Ser Met Gln His Ile Ala Lys Glu Gly Gly Cys Trp Val Ile Gly Thr

195 200 205

Ala Thr Ala Met Glu Gly Ser Asp Ser Gln Pro Thr Ser Leu Ser Gly

210 215 220

Arg Cys Phe Ser Leu Ile Ala Ala Asn Gly Ser Met Thr Val Thr Leu

225 230 235 240

Trp Leu Asn Pro Trp Gly Arg Leu Ser Arg Val Arg Ile Thr Gly Ile

245 250 255

Arg Val Phe Ser Met Leu Arg Leu Thr Arg Ser Gly Thr Gln Cys Ala

260 265 270

Ala Leu Ala Arg Cys Gly Gly Ala Leu Leu Pro Ala Gly Tyr Phe Phe

275 280 285

Leu Trp Val Asp Arg Arg Pro Leu Pro Pro Val Thr Phe Glu Asp

290 295 300

<210>345

<211>1011

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>345

atgaaagcga tcaaggccgc tgccgtgcag gcagcaccgg tattcctgaa cctcgacgca 60

tcgatcacca aggcggaaac attcgtcgcc gaggccgccg cgaatggtgc caagctggtg 120

gcgtttccgg aaacctggct gccgggctat ccctggttca tctggctcgg tgcgcccgcc 180

gaaggcatgc agttcatccc gcgctatcac gaaaacagca tggagctccg ctcgcccgag 240

atgcgccgct tgcaggcgat cgcgcgcaag tatgaagtga cgctcgtcat gggctattcc 300

gagcgcgatg gtggcagccg ctacatgtcc caggtcatta ttggcgatca gggcgacatc 360

cttctcaatc gccgtaaatt gaagccaacc catgtcgagc ggacggtctt cggcgaaggc 420

gacggttcgg acctggtggt ggtcgaaacg gcattcggca ggctcggtgc gctcaattgc 480

tgggaacata tccagccgct cgtcaagatg tcgatgtatg cccagcatga ggaaatccat 540

gtcgcgggtt ggccgagctt ctgcgtctac cgcgatctcg cctatgccct gggaccggaa 600

gtcaacaatg ccgtcagtca ggtctatgcc gtggagggta gcgcctatgt tctggcaccc 660

tgtgcgatcg taagccagga gatgttcgac attctggccg acaagcctga aaaggccttt 720

ctcctcaatc cccgcacatc caagcccggc ggtggcttca cgcagatcta tgcgccggat 780

ggtcgaccgc tttgcgagcc gcttgccgac gatgtggaag gcatcctcta tgccgatctc 840

gatccggcaa cgatcgccgt cgcgaaggcg gccgccgatc ctgcggggca ctattcgcgg 900

ccggacgcac tctcgctggt gatcaatcgc gaaaagcgcg cggtgatggc tgaaatcaac 960

gcgccggcga cgccgacctt cacccccatc tccctggacg ctgcggagta g 1011

<210>346

<211>329

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>346

Met Lys Ala Ile Lys Ala Ala Ala Val Gln Ala Ala Pro Val Phe Leu

1 5 10 15

Asn Leu Asp Ala Ser Ile Thr Lys Ala Glu Thr Phe Val Ala Glu Ala

20 25 30

Ala Ala Asn Gly Ala Lys Leu Val Ala Phe Pro Glu Thr Trp Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Pro Trp Phe Ile Trp Leu Gly Ala Pro Ala Glu Gly Met Gln

50 55 60

Phe Ile Pro Arg Tyr His Glu Asn His Gly Ala Pro Leu Ala Arg Asp

65 70 75 80

Ala Pro Leu Ala Gly Asp Arg Ala Gln Val Ser Asp Ala Arg His Gly

85 90 95

Tyr Ser Glu Arg Asp Gly Gly Ser Arg Tyr Met Ser Gln Val Ile Ile

100 105 110

Gly Asp Gln Gly Asp Ile Leu Leu Asn Arg Arg Lys Leu Lys Pro Thr

115 120 125

His Val Glu Arg Thr Val Phe Gly Glu Gly Asp Gly Ser Asp Leu Val

130 135 140

Trp Ser Lys Arg His Ser Ala Gly Ser Val Arg Ser Ile Ala Gly Asn

145 150 155 160

Ile Ser Ser Arg Ser Ser Arg Cys Met Tyr Ala Gln His Glu Glu Ile

165 170 175

His Val Ala Gly Trp Pro Ser Phe Cys Val Tyr Arg Asp Leu Ala Tyr

180 185 190

Ala Trp Asp Arg Lys Ser Thr Met Pro Ser Val Arg Ser Met Pro Trp

195 200 205

Arg Val Ala Pro Met Phe Trp His Pro Val Arg Ser Ala Arg Arg Cys

210 215 220

Ser Thr Phe Trp Pro Thr Ser Leu Lys Arg Pro Phe Ser Ser Ile Pro

225 230 235 240

Ala His Pro Ser Pro Ala Val Ala Ser Arg Arg Ser Met Arg Arg Met

245 250 255

Val Asp Arg Phe Ala Ser Arg Leu Pro Thr Val Glu Gly Ile Leu Tyr

260 265 270

Ala Asp Leu Asp Pro Ala Thr Ile Ala Val Ala Lys Ala Ala Ala Asp

275 280 285

Pro Ala Gly Thr Ile Arg Gly Arg Thr His Ser Arg Trp Ser Ile Ala

290 295 300

Lys Ser Ala Arg Trp Leu Lys Ser Arg Ala Gly Asp Ala Asp Leu His

305 310 315 320

Pro His Leu Pro Gly Arg Cys Gly Val

325

<210>347

<211>909

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>347

atgaaagtcg cggcgattca agcggcgccg gtctacttgg accggcaagc cacgctggaa 60

aaggcgcttt ctctaatgga tgaagcggcc gcaaacggcg cccaagtctg cgccttccct 120

gagaccttcc tcgcgggcta tcccgtctgg atggacttga cggacggcgc caagtggaat 180

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cctgagttgc aagccattgc caagaaatcg aaggcgctcg gcctgttcac ctatctgggc 300

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gacaagggtc tcgtcagcct acaccgaaaa ctcatgccca cctacaccga gcgcctcgtg 420

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gcgctaaact gctgggaaaa ttggatgccc ctcgcccgtt acgcaatgta cgcccagggc 540

gaacagctcc acgtcgcgac ctggcccggg tccccctggc tcaccaagga catcacccgt 600

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cgacgatag 909

<210>348

<211>297

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>348

Met Lys Val Ala Ala Ile Gln Ala Ala Pro Val Tyr Leu Asp Arg Gln

1 5 10 15

Ala Thr Leu Glu Lys Ala Leu Ser Trp Met Lys Arg Pro Gln Thr Ala

20 25 30

Pro Lys Ser Ala Pro Ser Leu Arg Pro Ser Ser Arg Ala Ile Pro Trp

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Met Asp Leu Thr Asp Gly Ala Lys Trp Asn Asp Asp Lys Gln Lys Ala

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Ala Tyr Ala Cys Tyr Val Asp Ala Ala Val Glu Ala Asp Gly Pro Glu

65 70 75 80

Leu Gln Ala Ile Ala Lys Lys Ser Lys Ala Leu Gly Leu Phe Thr Ile

85 90 95

Trp Ala Trp Ser Asn Ala Arg Arg Arg Pro Gly Gln Tyr Ile Val Pro

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Ser Leu Pro Ser Ile Pro Thr Arg Val Ser Ser Ala Tyr Thr Glu Asn

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Ser Cys Pro Pro Thr Pro Ser Ala Ser Cys Gly Ala Lys Ala Thr Asp

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Thr Asp Ser Arg Cys Met Asn Ser Pro Ala Ser Lys Ser Ala Arg Thr

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Ala Gly Lys Ile Gly Cys Pro Ala Arg Tyr Ala Met Tyr Ala Gln Gly

165 170 175

Glu Gln Leu His Val Ala Thr Trp Pro Gly Ser Pro Trp Leu Thr Lys

180 185 190

Asp Ile Thr Arg Phe Ile Ala Leu Glu Gly Arg Ile Tyr Val Met Ser

195 200 205

Val Gly Gly Val Leu Ser Ala Asn Asp Ile Pro Asp Ser Phe Pro Leu

210 215 220

Lys Thr Asp Leu Leu Lys Ile Arg Asp Arg Tyr Leu Ser Gly Gly Thr

225 230 235 240

Asp Ser Arg Pro Arg Arg His His Pro Arg Arg Pro Arg Gln Lys Arg

245 250 255

Arg Asp His Thr Leu Arg Gly Leu Asp Leu Asn Thr Val Leu Gln Glu

260 265 270

Arg Gln Asn Phe Asp Pro Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Ser

275 280 285

Asn Trp Lys Ser Thr Lys Ile Asp Asp

290 295

<210>349

<211>1002

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>349

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ctcgatctcg acaaaggcgt tgccaaagcg gtgcgcctga tcgaagaagc cgccacccaa 120

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<210>350

<211>333

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>350

Met Thr Ser Pro Val Gln Thr Lys Tyr Lys Val Ala Cys Val Gln Ala

1 5 10 15

Ala Pro Glu Phe Leu Asp Leu Asp Lys Gly Val Ala Lys Ala Val Arg

20 25 30

Leu Ile Glu Glu Ala Ala Thr Gln Lys Ala Ser Leu Ile Ala Phe Pro

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Glu Val Trp Leu Pro Gly Tyr Pro Trp Trp Ile Trp Leu Asp Ser Pro

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Ala Trp Gly Leu Gln Phe Val Gln Arg Tyr Phe Glu Asn Ala Leu Val

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Val Gly Ser Pro Gln Trp Glu Arg Leu Cys Lys Ala Ala Ala Asp Asn

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Asn Ile His Val Val Leu Gly Phe Ser Glu Arg Asp Gly Ser Thr Leu

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Tyr Leu Ala Gln Ala Ile Ile Asp Asn Thr Gly Lys Val Ile Ala Thr

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Arg Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Phe Gly Glu

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Gly Asp Gly Ser His Ile Ala Val His Glu Thr Thr Leu Gly Arg Met

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Gly Ala Leu Cys Cys Ala Glu His Ile Gln Pro Leu Thr Lys Tyr Ala

165 170 175

Met Tyr Ser Gln His Glu Gln Ile His Ile Ala Ala Trp Pro Ser Phe

180 185 190

Ser Val Tyr Arg Gly Ala Ala Phe Gln Leu Ser Ala Glu Ala Asn Asn

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Ala Ala Ser Gln Val Tyr Ala Leu Glu Gly Ser Cys Tyr Val Val Ala

210 215 220

Pro Cys Ala Thr Val Ser Lys Glu Met Leu Asp Met Leu Ala Asp Ser

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Pro Gln Lys Lys Gln Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Ala Met Ile

245 250 255

Tyr Gly Pro Asp Ala Lys Pro Leu Cys Glu Pro Ile Pro Glu Thr Glu

260 265 270

Glu Gly Ile Leu Tyr Ala Asp Val Asp Leu Gly Phe Ile Gly Val Thr

275 280 285

Lys Ala Ala Tyr Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Leu

290 295 300

Arg Leu Leu Phe Asn Arg Lys Pro Ala Pro Arg Val His Asp Phe Asp

305 310 315 320

Pro Glu Tyr Thr Ala Thr Glu Gln Lys Thr Asp Ala Ala

325 330

<210>351

<211>936

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>351

atgattacag caggcatcgc agtcgccgct ccggtggtgt tggacaaaac aaaaaccatt 60

gagaaagccg ttggcattat tcacgaggca gcgggtaagg gtgtgaacct gcttgtgttt 120

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cagggcgtag aagtgtatgt tgcgcccacc tacgaccagg gtgatgggtg gataggatcc 600

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ggcagtgatt ttcccgcgga catgccgggc aaggctcaac tgtttcccga tgacgatgaa 720

tgggtgaatc ccggtgggtc agtggttatc gcaccgggtg gggaattagt ggctggaccg 780

cttttccgtg aggagggcat ccttgtctgt gaattggatc cggcgaaaag tgctcatgcc 840

aagcggtcct ttgacgtggc cggtcattac gccaggccag atattttcga gttggaaata 900

gaccgtgatc cacaggatcc cgtcgagtgg gactga 936

<210>352

<211>301

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>352

Met Ile Thr Ala Gly Ile Ala Val Ala Ala Pro Val Val Leu Asp Lys

1 5 10 15

Thr Lys Thr Ile Glu Lys Ala Val Ala Leu Phe Thr Arg Gln Arg Val

20 25 30

Arg Val Thr Cys Leu Cys Phe Pro Arg His Leu Phe Pro Pro Ile Pro

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Pro Gly Val Gly Ala Cys Val Pro Val Glu Ile Ser Gly Cys Ala Arg

50 55 60

Ser Cys Thr Pro Cys Cys Leu Ile Ile Arg Asn Leu Gln Gly Asp Asp

65 70 75 80

Leu Asp Pro Val Arg Gly Ala Ala Ala Glu His Ser Met Thr Val Val

85 90 95

Met Gly Glu Ala Arg Arg Pro Val Arg Ser Gly Tyr Pro Val Arg His

100 105 110

Gly Ile Tyr Arg Ser Gly Arg Gln His Pro Glu Pro Ser Ser Glu Thr

115 120 125

Tyr Ala Asn Gln Ser Ala Tyr Asp Ser Trp Leu Arg Arg Cys Ala Gly

130 135 140

Ile Glu Ser Gly Gly Tyr Pro Val Arg Ser Arg Gly Trp Ser Asp Leu

145 150 155 160

Leu Gly Glu Phe His Ala Pro Gly Ser Leu Gly Leu Tyr Ala Gln Gly

165 170 175

Val Glu Val Tyr Val Ala Pro Thr Tyr Asp Gln Gly Asp Gly Trp Ile

180 185 190

Gly Ser Ala Ala Tyr Cys Pro Gly Arg Thr Val Leu Gly Val Ile Gly

195 200 205

Arg Asn Thr Ala Thr Arg Gln Phe Ser Arg Thr Cys Arg Ala Arg Leu

210 215 220

Asn Cys Phe Pro Met Thr Met Asn Gly Ile Pro Val Gly Gln Trp Leu

225 230 235 240

Ala Pro Gly Gly Glu Leu Val Ala Gly Pro Leu Phe Arg Glu Glu Gly

245 250 255

Ile Leu Val Cys Glu Leu Asp Pro Ala Lys Ser Ala His Ala Lys Arg

260 265 270

Ser Phe Asp Val Ala Gly His Tyr Ala Arg Pro Asp Ile Phe Glu Leu

275 280 285

Glu Ile Asp Arg Asp Pro Gln Asp Pro Val Glu Trp Asp

290 295 300

<210>353

<211>1035

<212>DNA

<213>Psuedomonas putida ATCC 700801

<400>353

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gatttggaca aaggggttga taaggctata cgcctcatta aagaagcagc tgataacgga 120

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ggctctcccg catggggaat gcagtttgtt cagcgctacg tagaaaactc gcttgattta 240

aaaagcgagc agttcgagcg actgtgcaaa gcggctgcta cttaccgtat tcacgttgta 300

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agcgggaaag taattggtac gcgccgtaag ctcaagccca cccatgctga gcgtactgtt 420

tacggtgagg gtaacggcag tgacctcagg gttttcaatt cgcaacttgg aagggtaggt 480

gcactctgct gcgcagagca cgtacaacca ctctcgaagt ttgcgatgta cagccagcat 540

gagcagttgc acattgcctc ttggccgagc ttctcggtat atcgcggtgg cgcatatcaa 600

ctgagcgctg aggctaactg cgcggccacc caagtctatg ctcttgaagg ccagtgcttc 660

gtaatttcag catgcgcaat cgtatctaaa gacatgctaa acgttctcat cgacacccct 720

gacaagggta acctgttgca ggatggcggt ggcttcgcga tgatttatgg ccccgatggc 780

gcaccgctgt gtgaacccct gggcgaacat gaagaaggca tcctttatgc cgacgtcgat 840

ttgggcgcca tttccgtagc taaagcggca ctcgacccgg ttggccatta ctcgcggcca 900

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ccgatatctg aataa 1035

<210>354

<211>312

<212>PRT

<213>Psuedomonas putida ATCC 700801

<400>354

Met Asn Ala Ser Lys Thr His Tyr Lys Val Ala Ala Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Glu Phe Leu Asp Leu Asp Lys Gly Val Asp Lys Ala Ile Arg Leu

20 25 30

Ile Lys Glu Ala Ala Asp Asn Gly Ala Ser Leu Val Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Val Tyr Ser Arg Val Ser Val Val Asp Leu Ala Trp Leu Ser Arg Met

50 55 60

Gly Asn Ala Val Cys Ser Ala Leu Arg Arg Lys Arg Leu Ile Lys Ala

65 70 75 80

Ser Ser Ser Ser Asp Cys Ala Lys Arg Leu Leu Leu Thr Val Phe Thr

85 90 95

Leu Trp Leu Gln Arg Thr Leu Val Trp His Pro Leu Pro Arg Ser Ser

100 105 110

Asn Tyr Arg Gln Arg Glu Ser Asn Trp Tyr Ala Pro Ala Gln Ala His

115 120 125

Pro Cys Ala Tyr Cys Leu Arg Gly Arg Gln Pro Gln Gly Phe Gln Phe

130 135 140

Ala Thr Trp Lys Gly Arg Cys Thr Leu Leu Arg Arg Ala Arg Thr Thr

145 150 155 160

Thr Leu Glu Val Cys Asp Val Gln Pro Ala Ala Val Ala His Cys Leu

165 170 175

Leu Ala Glu Leu Leu Gly Ile Ser Arg Trp Arg Ile Ser Thr Glu Arg

180 185 190

Gly Leu Arg Gly His Pro Ser Leu Cys Ser Arg Pro Val Leu Arg Asn

195 200 205

Phe Ser Met Arg Asn Val Ser Lys Asp Met Leu Asn Val Leu Ile Asp

210 215 220

Thr Pro Asp Lys Gly Asn Leu Leu Gln Asp Gly Gly Gly Phe Ala Met

225 230 235 240

Ile Tyr Gly Pro Asp Gly Ala Pro Leu Cys Glu Pro Leu Gly Glu His

245 250 255

Glu Glu Gly Ile Leu Tyr Arg Arg Arg Phe Gly Arg His Phe Arg Ser

260 265 270

Ser Gly Thr Arg Pro Gly Trp Pro Leu Leu Ala Ala Arg Cys Leu Arg

275 280 285

Leu Leu Phe Asn Asp Gln Pro Thr Pro Cys Val Glu Ala Phe Asn Pro

290 295 300

Ala Pro Val Gly Thr Asp Ala Pro

305 310

<210>355

<211>1014

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>355

atggccgtct ctaaagacgg tactgtttca ggaaagtcgc ctatccgatt gcatgtcgcc 60

gcgatacaga tggtcccaaa gctgggtgac gcgcaggcga acgtgaatca ggcagaagcc 120

cttattcgga aggctcttgg gctgggtgcg cgttggatcg tgttaccaga gatgtttacc 180

tccggtgcgg cgtttcatcc cgacatgctc aaagccattc agccattcga tggcgcccca 240

ctccagttgc tgaaagacct ttctcgcaag ggcaatgctg tcatcggcgg ctcgtttctc 300

gccaagcgtg ggcaacaagt attcaatacc ttcgttttgg tttctccgga cgggtcagtc 360

gtaacgcatg acaaggattc accgacctat tgggaaaatt gctattaccg gggcggtacc 420

gatgatggcg tgttgtctac gcccattggc ccggtcggct ccgtcctctg ttgggaattt 480

atccgctcaa gaaccgcgag acggctggcg aacaaggtca agatggtcgt gggaggctcc 540

tgttggtgga cgctccccga tgatgctgat ccagacagcc cgcgcagagc cgtgaacctc 600

aagatgctgc aagaagcgcc ggttcgcatg gcgcggatgc tgggtgttcc ggtaatacat 660

ggctcccacg cgggcagctt cgaaggattc ttcagtccgg aacttgcgga tgttccctat 720

aactcgacgt acctgggcga gacaatgatt gtcgacgcgg gtggccgggt acttgcccgt 780

agagcgcaag atgcaggcga aggcgtggta acggcagaag tggttttgcc cgacaagtcc 840

gtaccaagcg aacccatccc ggagactttc tggattccca aggaaatgcc ggatgattgg 900

aaagaagcct gggagcgttg gttcgatacc ggtgcggatt actacgagat ggtgaccgcg 960

ccctttatca agacgggtgt gataaacgag tacacaccgg aatatcttag gtag 1014

<210>356

<211>325

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>356

Met Ala Val Ser Lys Asp Gly Thr Val Ser Gly Lys Ser Pro Ile Arg

1 5 10 15

Leu His Val Ala Ala Ile Gln Met Val Gln Ser Trp Val Thr Arg Arg

20 25 30

Arg Thr Ile Arg Gln Lys Pro Leu Phe Gly Arg Leu Leu Gly Trp Val

35 40 45

Arg Val Gly Ser Cys Tyr Gln Arg Cys Leu Pro Pro Val Arg Arg Phe

50 55 60

Ile Pro Thr Cys Ser Lys Pro Phe Ser Phe Asp Gly Ala Pro Leu Gln

65 70 75 80

Leu Leu Lys Asp Leu Ser Arg Lys Gly Asn Ala Val Ile Gly Gly Ser

85 90 95

Phe Leu Gln Ala Trp Ala Thr Ser Ile Gln Tyr Leu Arg Phe Gly Phe

100 105 110

Ser Gly Arg Val Ser Arg Asn Ala Gln Gly Ser Pro Thr Tyr Trp Glu

115 120 125

Asn Cys Tyr Tyr Arg Gly Gly Thr Asp Asp Gly Val Leu Ser Thr Pro

130 135 140

Ile Gly Pro Ser Ala Pro Ser Ser Val Gly Asn Leu Ser Ala Gln Glu

145 150 155 160

Pro Arg Asp Gly Trp Arg Thr Arg Ser Arg Trp Val Gly Gly Ser Cys

165 170 175

Trp Trp Thr Leu Pro Asp Asp Ala Asp Pro Asp Ser Pro Arg Arg Ala

180 185 190

Val Asn Leu Arg Cys Cys Lys Lys Arg Arg Phe Ala Trp Arg Gly Cys

195 200 205

Trp Val Phe Arg Tyr Met Ala Pro Thr Arg Gln Leu Arg Arg Ile Leu

210 215 220

Gln Ser Gly Thr Cys Gly Cys Ser Leu Leu Asp Val Pro Gly Arg Asp

225 230 235 240

Asn Asp Val Asp Ala Gly Gly Arg Val Leu Ala Arg Arg Ala Gln Asp

245 250 255

Ala Gly Glu Gly Val Val Thr Ala Glu Gly Phe Ala Arg Gln Val Arg

260 265 270

Thr Lys Arg Thr His Pro Gly Asp Phe Leu Asp Ser Gln Gly Asn Ala

275 280 285

Gly Ile Gly Lys Lys Pro Gly Ser Val Gly Ser Ile Pro Val Arg Ile

290 295 300

Thr Thr Arg Trp Pro Arg Pro Leu Ser Arg Arg Val Thr Ser Thr His

305 310 315 320

Arg Asn Ile Leu Gly

325

<210>357

<211>951

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>357

atgacaaaac tagccatcgt acaaaaaccg ccagtctttc tggataagca aaaaaccatt 60

gagctggccg tcgccaacat tgaagaggcc gccgccaagg gtgccgatct cgtggtgttt 120

tctgaagctt tcattcccgg ctatcctgcc tggatctggc gtctacgccc cggcggtgac 180

tgggggcttt cagaagagtt gcaccagcgt ttgctgcgca atgccgtcaa tgtggactcc 240

gatgatctgg ctccgttgtt tgaggtcgcc cgcaagcacg aactcaccat cgtttgcggt 300

atcgaggagc gtgacaacaa actaagtcaa acaaccttat ataacaccgt catcacgatt 360

ggtcccgatg gatcgttact gaacaaacat cgcaagctta tgcccaccaa cccggagcga 420

atggtgtggg ggtttggtga cgcatccggt ttaaaagtcg ttgataccaa tgctggtcga 480

attggctcat taatgtgctg ggaaaattac atgccgctgg ctcgctatgc cctatatgca 540

caaggtgtcg agatctatat cgcaccgacc tacgacagcg gtgatggctg gataggcagc 600

atgcagcaca tcgcacgtga agggggctgt tgggtggtgg gatgtgggtg tctcatgaaa 660

ggcagtgata ttccagatga tttcccggag aaatccacgt tgtatccaga tgcagatgaa 720

tgggtgaacc cgggtgattc tgtagtgata gcacccggcg gtgaaattat ggccggccca 780

atgaacagag agtccggtat tttgtatcac gagctagaca gagaaaaagt cagcaacgct 840

aaacgagcat tcgatgttgc cgggcattat tcacgtcccg atatctttca gctgcatgta 900

aatacacagg agcagtcacc ctgcgtattc gaaaataatt ccataactta a 951

<210>358

<211>300

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>358

Met Thr Lys Leu Ala Ile Val Gln Lys Pro Pro Val Phe Leu Asp Lys

1 5 10 15

Gln Lys Thr Ile Glu Leu Ala Val Pro Thr Leu Lys Arg Pro Pro Pro

20 25 30

Arg Val Pro Ile Ser Trp Cys Phe Leu Lys Leu Ser Phe Pro Ala Ile

35 40 45

Leu Trp Ile Trp Arg Leu Arg Pro Gly Gly Asp Trp Gly Leu Ser Glu

50 55 60

Glu Leu His Gln Arg Leu Leu Arg Asn Ala Val Asn Val Asp Ser Asp

65 70 75 80

Asp Leu Ala Pro Leu Phe Glu Val Ala Arg Lys His Glu Leu Thr Ile

85 90 95

Val Cys Gly Arg Gly Ala Gln Gln Thr Lys Ser Asn Asn Leu Ile His

100 105 110

Arg His His Asp Trp Ser Arg Trp Ile Tyr Thr Asn Ile Ala Ser Leu

115 120 125

Cys Pro Pro Thr Arg Ser Glu Trp Cys Gly Gly Leu Val Thr His Pro

130 135 140

Leu Lys Val Val Asp Thr Asn Ala Gly Arg Ile Gly Ser Leu Met Cys

145 150 155 160

Trp Glu Asn Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Tyr Ala Gln Gly

165 170 175

Val Glu Ile Tyr Ile Ala Pro Thr Tyr Asp Ser Gly Asp Gly Trp Ile

180 185 190

Gly Ser Ala Ala His Arg Thr Arg Gly Leu Leu Gly Gly Gly Met Trp

195 200 205

Val Ser His Glu Arg Gln Tyr Ser Met Ile Ser Arg Arg Asn Pro Arg

210 215 220

Cys Ile Gln Met Gln Met Asn Gly Thr Arg Val Ile Leu Thr Arg Arg

225 230 235 240

Asn Tyr Gly Arg Pro Asn Glu Gln Arg Val Arg Tyr Phe Val Ser Arg

245 250 255

Ala Arg Gln Arg Lys Val Ser Asn Ala Lys Arg Ala Phe Asp Val Ala

260 265 270

Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Ile Phe Gln Leu His Val Ile His Arg

275 280 285

Ser Ser His Pro Ala Tyr Ser Lys Ile Ile Pro Leu

290 295 300

<210>359

<211>1029

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>359

atggcaaacg tcgttcgtgc tgcggccgta cagttgagcc ctgttttggg tagtcgcgag 60

ggtacggtag agaaggtagt tgctgcgatc cgtgacgccg cctcgcaggg cgcacagctg 120

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agcacgaacg cgattgccgc ggcggccaaa caacactcga tcgtcgtttc aatcggcgtc 300

aatgaacgcg atcacggtac gatatacaac acgcagttgt tgttcgatgc cgacgggaca 360

ctcgtgcaac ggcgtcgcaa gataaccccc acgttccacg agcgtatggt gtggggtcaa 420

ggtgatgggt cgggtttgcg ctgtgtcgac acacaaatcg ggcgcatcgg tagcctggct 480

tgttgggaac attacaatcc cttggcgcgc tacgcattga tggccgatca cgaagagatc 540

cacgtcgcca tgtttccggg ttcgatggtg ggtcagatct tcgccgatca aattcaggta 600

accattcgcc accacgcgct cgaaagcggc tgtttcgtcg tcaacgctac ggggtatctg 660

agcaaggaac aggtcgccca gttgtcacaa ggcacgtcgc tcgacgcggc gttgaccggt 720

ggttgttaca ccgcgattgt atcgcctgaa ggcgtcgtac tgggcgaacc gctcaccgac 780

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ccaacccaca cggcggtcga cgtcgaattc aactccaatt ccgagtctca tcatgtcagc 960

aatacacgaa caccaaagcg cacaactggc ccacgttcga accttcaagt tgccgctgat 1020

cgcgagtaa 1029

<210>360

<211>335

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>360

Met Ala Asn Val Val Arg Ala Ala Ala Val Gln Leu Ser Pro Val Leu

1 5 10 15

Gly Ser Arg Glu Gly Thr Val Glu Lys Val Val Ala Ala Ile Arg Asp

20 25 30

Ala Ala Ser Gln Gly Ala Gln Leu Cys Val Phe Pro Glu Thr Val Val

35 40 45

Pro Tyr Ser Val Phe Leu Val His Ser Ala Ala Arg Gly His Gly Gln

50 55 60

Arg Pro His Ala Ala Val Arg Ala Ser Cys Gly Arg Ala Phe Ser Gln

65 70 75 80

His Glu Arg Asp Cys Arg Gly Gly Gln Thr Thr Leu Asp Arg Arg Phe

85 90 95

Asn Arg Arg Met Asn Ala Ile Thr Val Arg Tyr Thr Thr Arg Ser Cys

100 105 110

Cys Ser Met Pro Thr Gly His Ser Cys Asn Gly Arg Lys Ile Thr Pro

115 120 125

Thr Phe His Glu Arg Met Val Trp Gly Gln Gly Asp Gly Ser Gly Leu

130 135 140

Arg Cys Val Asp Thr Gln Ile Gly Arg Ile Gly Ser Leu Ala Cys Trp

145 150 155 160

Glu His Tyr Asn Pro Leu Ala Arg Tyr Ala Leu Met Ala Asp His Glu

165 170 175

Glu Ile His Val Ala Met Phe Pro Gly Ser Met Val Gly Gln Ile Phe

180 185 190

Ala Asp Gln Ile Gln Val Pro Phe Ala Thr Thr Arg Ser Lys Ala Ala

195 200 205

Val Ser Ser Ser Thr Leu Arg Gly Ile Ala Arg Asn Arg Ala Gln Leu

210 215 220

Ser Gln Gly Thr Ser Leu Asp Ala Ala Leu Thr Gly Gly Cys Tyr Thr

225 230 235 240

Ala Ile Val Ser Pro Glu Gly Val Val Leu Gly Glu Pro Leu Thr Asp

245 250 255

Gly Glu Gly Met Val Val Ala Asp Met Asp Leu Ser Leu Ile Pro Asn

260 265 270

Ala Asn Ala Trp Ile Ala Ser Gly Thr Thr Val Ala Arg Asn Cys Cys

275 280 285

Leu Cys Ser Ile Thr Pro Thr His Thr Ala Val Asp Val Glu Phe Asn

290 295 300

Ser Asn Ser Glu Ser His His Val Ser Asn Thr Arg His Gln Ser Ala

305 310 315 320

Gln Leu Ala His Val Arg Thr Phe Lys Leu Pro Leu Ile Ala Ser

325 330 335

<210>361

<211>951

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>361

atgctaaacg agaacaatgg cgctactttc aaggttgctg ccgtgcaggc ttcaccggta 60

tttcttgatc gcgctgctac aatcgacaag gcttgcgatt taattgctac ggccggacgc 120

gagggggctc gcctgatcgt ctttccagaa gcgttcgtcc cggcctatcc tgattgggta 180

tgggcgattc ccgcgggtga tgagggcatg ctcaatgagc tgtatgcaga attacttgcc 240

aatgctgtca ccattcccag cgatgcgacc gagaggttgt gtcgcgcggc gcggcttgct 300

aatgcttacg tggtgatggg gatgagcgaa cgcaatgccg aagcgagtgg cgccagcctg 360

tataatacgc tgttgtatat tgatgcacag ggacaaatcc tgggaaagca ccggaagctg 420

gttccaacgg gcggcgagcg cctggtatgg gcacagggag atggcagcac cctggaggtt 480

tacgatactc ctttgggaaa actcggtggc ttaatctgct gggagaatta tatgccgctg 540

gcacgctata ctatgtatgc ctggggcacg caaatctaca ttgcagcgac gtgggatcgc 600

gggcagccat ggctatccac tttgcgacac attgctaaag agggcagagt atatgtgatc 660

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tattacgcgg aagaagacga gtggatcaat attggcgata gcgcaatcgt caatccagaa 780

ggggtattta ttgccgggcc agtgcgtaag caagaagaaa tcctctacgc cgaggttgac 840

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<210>362

<211>302

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>362

Met Leu Asn Glu Asn Asn Gly Ala Thr Phe Lys Val Ala Ala Val Gln

1 5 10 15

Ala Ser Pro Val Phe Leu Asp Arg Ala Tyr Asn Arg Gln Gly Leu Arg

20 25 30

Phe Asn Cys Tyr Gly Arg Thr Arg Gly Gly Ser Pro Asp Arg Leu Ser

35 40 45

Arg Ser Val Arg Pro Gly Leu Ser Leu Gly Met Gly Asp Ser Arg Gly

50 55 60

Gly His Ala Gln Ala Val Cys Glu Leu Leu Ala Asn Ala Val Thr Ile

65 70 75 80

Pro Ser Asp Ala Thr Glu Arg Leu Cys Arg Ala Ala Arg Leu Ala Asn

85 90 95

Ala Tyr Val Val Met Gly Met Ser Glu Arg Asn Ala Glu Ala Ser Gly

100 105 110

Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Leu Leu Tyr Cys Thr Gly Thr Asn Pro Gly

115 120 125

Lys Ala Pro Glu Ala Gly Ser Asn Gly Arg Arg Ala Pro Gly Met Gly

130 135 140

Thr Gly Arg Trp Gln His Pro Gly Gly Leu Arg Tyr Ser Phe Gly Lys

145 150 155 160

Thr Arg Trp Leu Asn Leu Leu Arg Ile Ile Cys Arg Trp His Ala Ile

165 170 175

Leu Cys Met Pro Gly Ala Arg Lys Ser Thr Leu Gln Arg Arg Gly Ile

180 185 190

Ala Gly Ser His Gly Tyr Pro Leu Cys Asp Thr Leu Leu Lys Arg Ala

195 200 205

Glu Tyr Met Ser Ala Val Val Leu Tyr Ala Gln Arg Tyr Pro Arg Pro

210 215 220

Leu Arg Asp Glu Gly Glu Val Leu Arg Gly Arg Arg Arg Val Asp Gln

225 230 235 240

Tyr Trp Arg Arg Asn Arg Gln Ser Arg Arg Gly Ile Tyr Cys Arg Ala

245 250 255

Ser Ala Ala Arg Arg Ile Leu Tyr Ala Glu Val Asp Pro Arg Met Met

260 265 270

Gln Gly Pro Lys Trp Met Leu Asp Val Ala Gly His Tyr Arg Ala Arg

275 280 285

Met Tyr Ser Ser Arg Cys Thr Arg Arg Gly Gly Arg Ser Thr

290 295 300

<210>363

<211>1053

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>363

atgccgaaaa agtcgaccgt ccgggtcgca gccgtccaga ttgcgccgga tctgacatcg 60

cgggaaaaga cggtggcacg cgtgatcgag gcgatcgccc aggcatccgc caaaggtgcg 120

gagcttgtgg tttttcccga gacctttgtg ccgtggtatc cttatttctc gttcgtgttg 180

cccccggtct tgtcgggcaa ggagcacctg cggctctacg aagaggcggt tgcggtgcca 240

agtgccgcca caagaagcgt agcggctgcc gctcgcgaac atggcatcgt cgtggcgctt 300

ggcgtcaacg agcgcgacta tggcacgctc tacaatacgc aactgctttt cgatgccgat 360

ggcagtctga tcctgaagcg gcgcaagatc accccgactt tccacgagcg gatgatctgg 420

ggccagggcg atgcctcagg cctgaaggtt gtcgacagcg ccattggccg catcggcgcg 480

ctggcctgct gggaacacta caatccgcta gcccgctatg cgctgatggc gcagcacgag 540

gaaatccaca ttgcgcagtt tcccggctcc atggtcgggc cgatctttgc cgatcagatg 600

gaggtgacga tccgccatca cgcgctggaa agcggctgct tcgtcgtcaa tgccacggga 660

tggctgacgg atgatcagat cgtctcgatc acaccggata ccggcctgca aaaagcgctg 720

cggggtggct gcatgacggc gatcatttcc cccgaaggca agcatctcgt gccgccgctc 780

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ttgacaaccg acatgaccga tggagaacag gatgcgtctt tcgacggaaa cgctgatcaa 1020

cgaatt gcag tccttcggag cccggctggt tga 1053

<210>364

<211>335

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>364

Met Pro Lys Lys Ser Thr Val Arg Val Ala Ala Val Gln Ile Ala Pro

1 5 10 15

Asp Leu Thr Ser Arg Glu Lys Gly Gly Thr Arg Asp Arg Gly Asp Arg

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Pro Gly Ile Arg Gln Arg Cys Gly Ala Cys Gly Phe Ser Arg Asp Leu

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Cys Arg Gly Ile Leu Ile Ser Arg Ser Cys Cys Pro Arg Ser Cys Arg

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Ala Arg Ser Thr Cys Gly Ser Thr Lys Arg Arg Leu Arg Cys Gln Val

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Pro Pro Gln Glu Ala Arg Leu Pro Leu Ala Asn Met Ala Ser Ser Trp

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Arg Leu Ala Ser Thr Ser Ala Thr Met Ala Arg Ser Thr Ile Arg Asn

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Cys Phe Ser Met Pro Met Ala Val Ser Ser Gly Ala Arg Ser Pro Arg

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Leu Ser Thr Ser Gly Ser Gly Ala Arg Ala Met Pro Gln Ala Glu Gly

130 135 140

Cys Arg Gln Arg His Trp Pro His Arg Arg Ala Gly Leu Leu Gly Thr

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Leu Gln Ser Ala Ser Pro Tyr Ala Leu Met Ala Gln His Glu Glu Ile

165 170 175

His Ile Ala Gln Phe Pro Gly Ser Met Val Gly Pro Ile Phe Ala Asp

180 185 190

Gln Met Glu Val Thr Ile Arg His His Ala Leu Glu Ser Gly Cys Phe

195 200 205

Val Val Asn Ala Thr Gly Trp Arg Met Ile Arg Ser Ser Arg Ser His

210 215 220

Arg Ile Pro Ala Cys Lys Lys Arg Cys Gly Val Ala Ala Gly Asp His

225 230 235 240

Phe Pro Arg Arg Gln Ala Ser Arg Ala Ala Ala His Arg Arg Gly Tyr

245 250 255

Pro Arg Arg Arg Ser Thr Ala Ser Phe Ser Ser Ala Ser Ala Trp Ile

260 265 270

Arg Ser Ala Thr Met Pro Gly Pro Ser Cys Cys Thr Ser Ser Trp Thr

275 280 285

Pro Gly Arg Leu Arg Arg Gly Asn Arg Pro Cys Pro Leu Pro Ser Pro

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Ala Lys Ile Asp Asn Arg His Asp Arg Trp Arg Thr Gly Cys Val Phe

305 310 315 320

Arg Arg Lys Arg Ser Thr Asn Cys Ser Leu Arg Ser Pro Ala Gly

325 330 335

<210>365

<211>975

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>365

atgacaaagc tagccatcgt tcaaaaaccc cccgtctttc tggataaaga aaaaaccata 60

gcgaagacgg ttgattccat aaaagaggcc gcgacacaaa atgccgactt ggtcatcttc 120

accgaagcct tcatcccggg ctaccccacc tggatatggc gacttaggcc aggcgctgat 180

tggggcctct cagaagagct gcacgagcag ttattgcgta acgcggtgag tatgggatcg 240

accgacctgg atccgcttta tgaagccgcc caacagcata acgtcactat tgtttgcggc 300

atcgtagaaa gagaccacca actcagccaa tcaaccctct acaacagcat ggtcgtcatt 360

gacacagacg gaacccttct caacaagcac cgcaaactca tgccaactaa tcccgaacgc 420

atggtgtggg gctttggcga cgcctcagga ctcaaagccg ttgcaacacc tgcaggccgc 480

atcagcacgt tgttgtgttg ggagaactac atgccattgg cccgatatgc tctgtatgca 540

caaggcgtgg aaatctatat cgcgccaact tacgacagtg gtgcgggttg gataggaagc 600

ttgcaacaca tagcacgcga aggtcgatgc tgggtcgtgg gctgtggcaa cctgattcag 660

gccagtgatc tgcctgaaga cttcccggac aaggacaacc tctacccgga cgcagaagag 720

tgggtgaacc cgggtgactc catagtcatt gcaccagacg gtgagattgt ggccggtcca 780

atgcacaaag agacaggaat tttgtactgc gagatagatc tggagaaagt cagaattgca 840

aaacgagcat tagacgtgac cgggcattat tcgcgaccgg acgttttcaa actgcatgtg 900

aatacccgac ctcaatcacc tgtggaattt gaaggtcagg agaccaacaa tccaacaaca 960

ggagaaagct catga 975

<210>366

<211>315

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>366

Met Thr Lys Leu Ala Ile Val Gln Lys Pro Pro Val Phe Leu Asp Lys

1 5 10 15

Glu Lys Thr Ile Ala Lys Thr Val Ile Pro Lys Arg Pro Arg His Lys

20 25 30

Met Pro Thr Trp Ser Ser Ser Pro Lys Pro Ser Ser Arg Ala Thr Thr

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Trp Ile Trp Arg Leu Arg Pro Gly Ala Asp Trp Gly Leu Ser Glu Glu

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Leu His Glu Gln Leu Leu Arg Arg Gly Glu Tyr Gly Ile Asp Arg Pro

65 70 75 80

Gly Ser Ala Leu Ser Arg Pro Thr Ala Arg His Tyr Cys Leu Arg His

85 90 95

Arg Arg Lys Arg Pro Pro Thr Gln Pro Ile Asn Pro Leu Gln Gln His

100 105 110

Gly Arg His His Arg Arg Asn Pro Ser Gln Gln Ala Pro Gln Thr His

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Ala Asn Ser Arg Thr His Gly Val Gly Leu Trp Arg Ala Ser Gly Leu

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Lys Ala Val Ala Thr Pro Ala Gly Arg Ile Ser Thr Leu Leu Cys Trp

145 150 155 160

Glu Asn Tyr Met Ile Gly Pro Ile Cys Ser Val Cys Thr Arg Arg Gly

165 170 175

Asn Leu Tyr Arg Ala Asn Leu Arg Gln Trp Cys Gly Leu Asp Arg Lys

180 185 190

Leu Ala Thr His Ser Thr Arg Arg Ser Met Leu Gly Arg Gly Leu Trp

195 200 205

Gln Pro Asp Ser Gly Ser Asp Leu Pro Glu Asp Phe Pro Asp Lys Asp

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Asn Leu Tyr Pro Asp Ala Glu Glu Trp Val Asn Pro Gly Asp Ser Ile

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Val Ile Ala Pro Asp Gly Glu Ile Val Ala Gly Pro Met His Lys Glu

245 250 255

Thr Gly Ile Leu Tyr Arg Asp Arg Ser Gly Glu Ser Gln Asn Cys Lys

260 265 270

Thr Ser Ile Arg Arg Asp Arg Ala Leu Phe Ala Thr Gly Arg Phe Gln

275 280 285

Thr Ala Cys Glu Tyr Pro Thr Ser Ile Thr Cys Gly Ile Arg Ser Gly

290 295 300

Asp Gln Gln Ser Asn Asn Arg Arg Lys Leu Met

305 310 315

<210>367

<211>981

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>367

atgactgccc actttgccga taccctgacc gttgccgtgg cccagatcgc gccggtgtgg 60

ctacagcgcg aagctaccct gcaaaagatg ctggtctggg tggagcgcgc cgcgcgcgaa 120

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cacacggacg gcgcccgctt cgagtcgccg ttacagaagc gcctgtacgc ccactactgc 240

gatcagtcgg tccagatcaa tgctgggcac ctcgcaccac tctgcgctgc cgcggccaga 300

caccagattt gggtggtctg cggcgtcatc gagcgcgaca gcgcacgcgg actcagcgtg 360

tttgcatcaa tggtcaccat cgatgccgaa ggcgcgatcc gcagtgtgca ccgcaagctg 420

atgccgacct acgaagaacg cctggtgtgg tcgcccggcg acgcgcacgg actgcgctgc 480

catccgctcg gccagttccg cctcggcagc ctcaattgct gggagaactg gatgccgctg 540

gcgcgcgccg ccctgtacgc ccagggcgag tctttgcatg ttgcatcctg gcccggcagt 600

cgccgcaaca ccgagaccat tactcccttc atcgcccgcg aaggccgcag ttacgcgctg 660

tccgccagtt ccgtgctgca ccgggatgat ctgcccgact ccgttccggc gctgtcggtg 720

ctgcgcgact gcctgccgga cgtgatggcc gacggcggct cctgcgtcgc cggccccgac 780

ggacatttcc tgatcgagcc ggtcgtcggc cgggaagagc tgctgctcgc gcagatcgat 840

catgcccggg tacgcgagga acgtcagaac ttcgacccct tcggccacta ctcgcggccg 900

gaactcctgt cgctggtggt ggatacgcgc cgggcgagcg gagtgcagat agtgaatgct 960

gaccat ggct ttaagccctg a 981

<210>368

<211>317

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>368

Met Thr Ala His Phe Ala Asp Thr Leu Thr Val Ala Val Ala Gln Ile

1 5 10 15

Ala Pro Val Trp Leu Gln Arg Glu Tyr Pro Ala Lys Asp Ala Gly Leu

20 25 30

Gly Gly Ala Arg Arg Ala Arg Arg Arg Gly Pro Gly Arg Leu Gln Gly

35 40 45

Pro Ala Ala Trp Leu Pro Leu Leu Asp Thr His Gly Arg Arg Pro Leu

50 55 60

Arg Val Ala Val Thr Glu Ala Cys Thr Pro Thr Thr Ala Ile Ser Arg

65 70 75 80

Ser Arg Ser Met Leu Gly Thr Ser His His Ser Ala Leu Pro Ala Arg

85 90 95

His Gln Ile Trp Val Val Cys Gly Val Ile Glu Arg Asp Ser Ala Arg

100 105 110

Gly Leu Ser Val Phe Ala Gln Trp Ser Pro Ser Met Pro Lys Ala Arg

115 120 125

Ser Ala Val Cys Thr Ala Ser Cys Arg Pro Thr Lys Asn Ala Trp Cys

130 135 140

Gly Arg Pro Ala Thr Arg Thr Asp Cys Ala Ala Ile Arg Ser Ala Ser

145 150 155 160

Ser Ala Ser Ala Ala Gln Leu Leu Gly Glu Leu Asp Ala Ala Gly Ala

165 170 175

Arg Arg Pro Val Arg Pro Gly Arg Val Phe Ala Cys Cys Ile Leu Ala

180 185 190

Arg Gln Ser Pro Gln His Arg Asp His Tyr Ser Leu His Arg Pro Arg

195 200 205

Arg Pro Gln Leu Arg Ala Ser Ala Ser Ser Val Leu His Arg Asp Asp

210 215 220

Leu Pro Asp Ser Val Pro Ala Leu Ser Val Leu Arg Asp Cys Leu Arg

225 230 235 240

Thr Trp Pro Thr Ala Ala Pro Ala Ser Pro Ala Pro Thr Asp Ile Ser

245 250 255

Ser Ser Arg Ser Ser Pro Gly Arg Ala Ala Ala Arg Ala Asp Arg Ser

260 265 270

Cys Pro Gly Thr Arg Gly Thr Ser Glu Leu Arg Pro Leu Gly His Tyr

275 280 285

Ser Arg Pro Glu Leu Leu Ser Leu Val Val Asp Thr Arg Arg Ala Ser

290 295 300

Gly Val Gln Ile Val Asn Ala Asp His Gly Phe Lys Pro

305 310 315

<210>369

<211>1074

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>369

atgtccgaag agaacaccac caccgaatca agctcggacg cgatctggac cgttgcggcc 60

gtccaggcgg cgccggtgtt cttgaatcgg gatgcgacgg tgcgtaaggc cgtctcgctg 120

attgccgagg ccgcggcgca cggcgcgcgt ctcattgttt ttcccgaggc gttcattcca 180

tcgtacccgg attgggcgtg ggcggtcccg cccggacagg gcggaaccaa ctcgagactg 240

tatgccaaac tgctcgacaa ttcggttacg gtgcccagcc cagccaccga tgccctggcc 300

agggcggctc gcgacgcggg cgcctacgtc gtcatgggca taaacgagcg gaacacggcg 360

gcgagcggcg gaagtctcta caacagcttg ctctatattg gtccggacgg tcgcatcctg 420

ggcattcatc ggaagttggt gccgacctcg gcggagcggc tgatctgggc acaaggcgat 480

ggaagcacgc ttggcgtgtt cgatacgccg ggcggccggc ttggcggctt gatctgctgg 540

gaaaactata tgccgctggc ccgatattcg atgtacgcgc gcggcgtgca aatatatgtt 600

gcggcgacct gggacagggg cgagccatgg ctttcgacgc tgcgacacat agccaaggaa 660

ggccagacct acgtgatagg ctgttgcatc gccatgcgga cggccgacat cgacgacgcc 720

gagctcgtcg agaagtatta cgcggacgcc ggtgagtgga tcaatgaagg cgacagcgcg 780

attgtcgatc cgagcggaac aatcattgcc ggtccggccc atcagaccaa tgaaatcctc 840

tacgccgcga tcgatcgcca gaaggtgctg gaatcaaaat ggatgttgga cgtggccggg 900

cactacgcgc gtccggacgt gttttcattt ggcgttcgaa ccgatgccaa cccgataatg 960

accatgaacg aaccaagcgc gacggccgag ccgaggcaca atagcgcggg agccgagggt 1020

cgcgacggcc tacgcgggcg tcgtgaccct cgctcgagaa ttcggcagat gtag 1074

<210>370

<211>346

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>370

Met Ser Glu Glu Asn Thr Thr Thr Glu Ser Ser Ser Asp Ala Ile Trp

1 5 10 15

Thr Val Ala Ala Val Gln Ala Ala Gly Val Leu Glu Ser Gly Cys Asp

20 25 30

Gly Ala Gly Arg Leu Ala Asp Cys Arg Gly Arg Gly Ala Arg Ala Arg

35 40 45

Leu Ile Val Phe Pro Glu Ala Phe Ile Pro Ser Tyr Pro Asp Trp Ala

50 55 60

Trp Ala Val Pro Pro Gly Gln Ala Glu Pro Thr Arg Asp Cys Met Pro

65 70 75 80

Asn Cys Ser Thr Ile Arg Leu Arg Cys Pro Ala Gln Pro Pro Met Pro

85 90 95

Gly Gln Gly Gly Ser Arg Arg Gly Arg Leu Arg Arg His Gly His Lys

100 105 110

Arg Ala Glu His Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Tyr Asn Ser Leu Leu

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Tyr Ile Gly Pro Asp Gly Arg Ile Leu Gly Ile His Arg Lys Leu Cys

130 135 140

Arg Pro Arg Arg Ser Gly Ser Gly His Lys Ala Met Glu Ala Arg Leu

145 150 155 160

Ala Cys Ser Ile Arg Arg Ala Ala Gly Leu Ala Ala Ser Ala Gly Lys

165 170 175

Thr Ile Cys Arg Trp Pro Asp Ile Arg Cys Thr Arg Ala Val Gln Ile

180 185 190

Tyr Val Ala Ala Thr Trp Asp Arg Gly Glu Pro Trp Leu Ser Thr Leu

195 200 205

Arg His Ile Ala Lys Lys Ala Arg Pro Thr Ala Val Ala Ser Pro Cys

210 215 220

Gly Arg Pro Thr Ser Thr Thr Pro Ser Ser Ser Arg Ser Ile Thr Arg

225 230 235 240

Thr Pro Val Ser Gly Ser Met Lys Ala Thr Ala Arg Leu Ser Ile Arg

245 250 255

Ala Glu Ile Ile Ala Gly Pro Ala His Gln Thr Asn Glu Ile Leu Tyr

260 265 270

Ala Ala Ile Asp Arg Gln Lys Val Leu Glu Lys Met Asp Val Gly Arg

275 280 285

Gly Arg Ala Leu Arg Ala Ser Gly Arg Val Phe Ile Trp Arg Ser Asn

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Arg Cys Gln Pro Asp Asn Asp His Glu Arg Thr Lys Arg Asp Gly Arg

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Ala Glu Ala Gln Arg Gly Ser Arg Val Ala Thr Ala Tyr Ala Gly Val

325 330 335

Val Thr Leu Ala Arg Glu Phe Gly Arg Cys

340 345

<210>371

<211>1014

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>371

atgggtatcg aacatccgaa gtacaaggtt gcggtggtac aggcggcgcc ggcctggctc 60

gatctcgacg catcgatcgc caagaccatc gcgctgatcg aggaggcggc cgccaagggc 120

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accgtctacg gcgaaggcga cggcagtgac cttgcggtcc atgaccgcgc tgacattggc 480

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<210>372

<211>327

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>372

Met Gly Ile Glu His Pro Lys Tyr Lys Val Ala Val Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Ala Trp Leu Asp Leu Asp Ala Arg Ser Pro Arg Pro Ser Arg Ser

20 25 30

Arg Arg Arg Pro Pro Arg Ala Pro Ser Ser His Ser Leu Ala Phe Ile

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Pro Gly Tyr Pro Trp His Ile Trp Met Asp Ser Pro Ala Trp Ala Ile

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Gly Arg Gly Phe Val Gln Ala Ile Ser Thr Ile Arg Phe Pro Thr Thr

65 70 75 80

Ala Arg Arg Pro Asn Gly Cys Gly Ser Arg Arg Arg Pro His His Arg

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Arg Ala Arg Pro Val Arg Ala Gly Arg Arg Gln Pro Leu Ser Arg Ala

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Met Ala Asp Arg Ser Thr Ala Arg Pro Ser Pro Ser Gly Ala Ser Cys

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Gly Arg Arg Met Pro Ser Ala Pro Ser Thr Ala Lys Ala Thr Ala Val

130 135 140

Thr Leu Arg Ser Met Thr Ala Leu Thr Leu Ala Val Ser Ala Arg Cys

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Ala Ala Gly Asn Leu Gln Pro Leu Ser Lys Tyr Ala Met Tyr Ala Gln

165 170 175

Asn Glu Gln Val His Val Ala Ala Trp Pro Ser Phe Ala Val Arg Pro

180 185 190

Val Arg Ala Gly Ala Gly Leu Gly Gly Gln Gln Arg Gly Ile Pro Arg

195 200 205

Leu Cys Gly Arg Gly Ser Cys Phe Val Leu Ala Pro Cys Ala Thr Val

210 215 220

Ser Gln Ala Met Val Asp Glu Leu Cys Asp Arg Asp Gln Ala Cys Ala

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Ala Ala Cys Arg Arg Arg Pro Arg Arg Asp Leu Arg Thr Gly Arg Gln

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Leu Asp Gly Thr Ser Ser Ile Pro Ser Arg Arg Ala Cys Cys Ser Pro

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Thr Ser Ile Ser Gly Arg Ser Gly Trp Gln Arg Thr Pro Pro Ile Arg

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Pro Gly Thr Ile Arg Gly Arg Met Pro Val Cys Ser Thr Glu Asn Pro

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Gln Ala Arg Arg Ala Leu Cys Ala Ala Ala Arg Pro Ser Arg Gly Arg

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Gly Arg Cys Ser Gly Asp Leu

325

<210>373

<211>1056

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>373

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cgggaggcat cgacggagaa agcgtgccgg ttgatccacg aagcggcagg gctcggcgcg 120

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<210>374

<211>351

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>374

Met Thr Asn Phe Leu Asp Val Thr Val Ala Ala Val Gln Ala Ala Pro

1 5 10 15

Val Tyr Phe Asp Arg Glu Ala Ser Thr Glu Lys Ala Cys Arg Leu Ile

20 25 30

His Glu Ala Ala Gly Leu Gly Ala Thr Leu Ala Ala Phe Gly Glu Thr

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Trp Leu Pro Gly Tyr Pro Phe Phe Val Trp Gly Phe Ala His Asn Arg

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Ser Leu Phe Trp Gln Ala Ala Ala Glu Tyr Ile Ala Asn Ala Val Glu

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Ile Pro Ser Pro Thr Thr Asp Arg Leu Cys Ala Ala Ala Lys Ala Ala

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Gly Val Asp Val Val Ile Gly Val Val Glu Leu Asp Glu Arg Thr Arg

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Ala Ser Val Tyr Ser Thr Leu Leu Phe Ile Gly Arg Asp Gly Thr Ile

115 120 125

Leu Gly Arg His Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Met Glu Arg Thr Ile

130 135 140

Trp Gly Glu Gly Asp Ala Tyr Gly Leu Arg Val Tyr Glu Arg Ser Tyr

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Gly Arg Leu Ser Gly Leu Asn Cys Trp Glu His Asn Met Met Leu Pro

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Gly Tyr Val Leu Ala Ala Gln Gly Thr Gln Phe His Val Ala Ala Trp

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Pro Gly Lys Glu Arg Leu Thr Val Pro Pro Asn Glu Ala Ala Tyr Thr

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Arg Gln Leu Leu Leu Ser Arg Ala Tyr Ala Ser Gln Ala Gly Ala Tyr

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Val Ile Ser Val Ala Gly Leu Leu Ala Pro Asp Ser Met Pro Glu Arg

225 230 235 240

Tyr Arg Glu Leu Gly Arg Ser Tyr Glu Leu Thr Gly Asp Ser Val Ile

245 250 255

Val Asp Pro Arg Gly Glu Val Ile Ala Gly Pro Ala Lys Gly Glu Thr

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Ile Leu Leu Ala Gln Cys Ser Gln Glu Ala Leu Leu Ala Ala Lys Ser

275 280 285

Ala Ile Asp Leu Gly Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Ile Phe Gln Leu

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Arg Val Asn Asp Gln Leu Gln His Arg Val Arg Arg Val Glu Pro His

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Phe Thr Ala Ala Ile Gly His Ile Gly Ala Glu Arg Arg Ser Gln Glu

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Asp Gly Thr Gly Pro Phe Asp Leu Ala Glu Ser Leu Thr Asn Ser

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<210>375

<211>939

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>375

atgaccaaaa tcgctgtcat tcaagaaccc ccggtctatc tgaatctgag caaatcgatg 60

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gaggggcttc ggcctttgca ggaggctgca aaagagcatg gcgttgtcat tgttctgggt 300

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atcggcacgc tgatttgctg ggaaaactac atgcccttgg cgcgctacgc gctgtatgcc 540

caaaacatcg aaatctatgt ggcgccgacc tgggacagcg gtgccatgtg gcaagccacc 600

ctgcaacata tcgcacgtga aggtggctgc tgggtcatcg gatgtgcaac ctcgctgcaa 660

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<210>376

<211>312

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>376

Met Thr Lys Ile Ala Val Ile Gln Glu Pro Pro Val Tyr Leu Asn Leu

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Ser Lys Ser Met Asp Arg Ala Val Asp Leu Ile Ala Asp Ala Ala Ser

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Gln Gly Cys Gln Leu Ile Val Phe Pro Glu Ala Trp Leu Ala Gly Tyr

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Pro Thr Phe Val Trp Arg Leu Ala Pro Gly Ser Gly Met Gly Lys Thr

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Asp Glu Leu Tyr Ala Arg Leu Leu Ala Asn Ser Val Asp Arg Ser Lys

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Glu Gly Leu Arg Pro Leu Gln Glu Ala Ala Lys Glu His Gly Val Val

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Ile Val Leu Gly Tyr Gln Glu Val Asp Gly Ser Gly Ser Ser Ser Thr

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Ile Phe Asn Ser Cys Ala Ile Ile Asp Ala Asp Gly Arg Leu Ala Asn

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Asn His Arg Lys Leu Met Pro Thr Asn Ala Glu Arg Met Val Trp Gly

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Phe Gly Asp Gly Ser Gly Leu Asn Val Val Asp Thr Ala Val Gly Arg

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Ile Gly Thr Leu Ile Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr

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Ala Leu Tyr Ala Gln Asn Ile Glu Ile Tyr Val Ala Pro Thr Trp Asp

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Ser Gly Ala Met Trp Gln Ala Thr Leu Gln His Ile Ala Arg Glu Gly

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Gly Cys Trp Val Ile Gly Cys Ala Thr Ser Leu Gln Ala Ser Asp Ile

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Pro Asp Asp Leu Pro His Arg Asp Glu Leu Phe Pro Asn Lys Asp Glu

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Trp Val Asn Pro Gly Asp Ala Val Val Tyr Lys Pro Phe Gly Gly Leu

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Val Ala Gly Pro Met His Gln Glu Lys Gly Leu Leu Ile Ala Glu Leu

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Asp Val Ala Ala Val Gln Val Ser Arg Arg Lys Phe Asp Ala Thr Gly

275 280 285

His Tyr Ala Arg Pro Asp Val Phe Gln Leu His Val Asn Arg Ser Ala

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Met Arg Pro Val Glu Phe Thr Asn

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<211>1050

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

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<212>PRT

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<220>

<223>从环境样品获得

<400>378

Met Ser Ser Thr Thr His Pro Arg Leu Arg Val Ala Ala Val Gln Ala

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Ala Pro Val Phe Leu Asp Leu Asp Gly Thr Ile Asp Lys Thr Ile Asp

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Leu Met Ala Arg Ala Ala Gly Gln Gly Val Gln Leu Ile Ala Phe Pro

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Glu Thr Trp Val Pro Gly Tyr Pro Trp Trp Ile Trp Leu Asp Ser Pro

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Ala Trp Gly Met Gln Phe Val Gln Arg Tyr His Asp Asn Ala Leu Val

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Val Gly Ser Pro Glu Phe Asp Arg Ile Arg Glu Ala Ala Arg Lys His

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Arg Ile Trp Val Ser Leu Gly Tyr Ser Glu Lys Ala Ala Gly Ser Leu

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Tyr Ile Ala Gln Ala Leu Ile Asp Asp Gln Gly Asn Thr Leu Gln Thr

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Arg Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Val Glu Arg Thr Val Phe Gly Glu

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Gly Asp Gly Ser Asp Leu Ser Val Val Glu Thr Ala Ile Gly Asn Ile

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Gly Ser Leu Ser Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Ser Lys Tyr Ala

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Met Tyr Ser Gln Asn Glu Gln Ile His Cys Gly Ala Trp Pro Ser Phe

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Ser Leu Tyr Arg Gly Gly Ala Tyr Ala Leu Gly Ala Glu Val Asn Asn

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Ala Ala Ser Gln Val Tyr Ala Ala Glu Gly Gln Cys Phe Val Ile Ala

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Pro Cys Ala Thr Val Ser Lys Ala Met His Glu Leu Leu Cys Thr Asp

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Pro Gly Lys Gln Gln Met Leu Leu Val Gly Gly Gly Phe Ala Arg Ile

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Tyr Gly Pro Asp Gly Ser Pro Leu Gly Lys Asn Leu Ala Glu Asp Glu

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Glu Gly Leu Val Val Ala Asp Ile Asp Leu Gly Met Ile Ser Leu Ala

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Lys Ala Ala Gly Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Thr

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Gln Leu Leu Phe Asn Arg Lys Arg Arg Glu Pro Val Val Leu Gln Gly

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Pro Ala Glu Pro Glu Lys Ala Val Ala Glu Pro Val Ser Thr Pro Ser

325 330 335

Glu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Arg Gln Pro Val Val Ala

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<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>379

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gccagtgctg taagagaggt agagctggca gcggcggaag gtgccgagct ggtagtgttt 120

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tgggggctat ctgaagatct tcattcccgt ttgttgacaa gcgccgtaga cctgggtggt 240

gatgacctgg atccacttta tgccgcagct aaagaaaata acgtgacgat agtgtgcggt 300

attaatgaac gtgataaccg gctcagtaag gcaacgctat ataattctat cgttattatt 360

ggttccgatg gttcattgtt aaatcgacat cgtaagttga tgccgacgaa tccggagaga 420

atggtatggg gctttggtga tgcctctggt ctgaaggtcg ttgatacccc cgttggtcgt 480

gttggtacgc ttgtctgttg ggaaaactat atgcccttgg ccagatatgc gttgtattcg 540

cagggggtag aggtttatat tgcgccgacc tacgatagcg gtgatgactg gatttctaca 600

ttacagcata ttgccaggga gggtcgttgt tgggttgttg gctgtggcaa tctattgcgt 660

ggcagcgata taccggatga cttccctgag aagttggcgt tatacccaga tgaggatgag 720

tggataaatc ctggggattc cgttgtgatt gcacctgggg gtaaaatcat ggccgggcca 780

ttgcgccagg aggcggggat tgtctattgt gatattgcgt ctgaaagtgc cagtcaggca 840

aaacgtgcgc tggatgtggc tggacattat tcccggcctg atatctttga gttgcatgtg 900

aatacgaagg tgcagacccc ggttgtatat gattag 936

<210>380

<211>311

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>380

Met Ala Lys Ile Ala Ile Val Gln Lys Ala Ser Val Thr Leu Asn Lys

1 5 10 15

Gln Glu Thr Val Ala Ser Ala Val Arg Glu Val Glu Leu Ala Ala Ala

20 25 30

Glu Gly Ala Glu Leu Val Val Phe Thr Glu Ala Phe Ile Ala Gly Tyr

35 40 45

Pro Ala Trp Ile Trp Arg Leu Arg Pro Gly Gly Asp Trp Gly Leu Ser

50 55 60

Glu Asp Leu His Ser Arg Leu Leu Thr Ser Ala Val Asp Leu Gly Gly

65 70 75 80

Asp Asp Leu Asp Pro Leu Tyr Ala Ala Ala Lys Glu Asn Asn Val Thr

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Ile Val Cys Gly Ile Asn Glu Arg Asp Asn Arg Leu Ser Lys Ala Thr

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Leu Tyr Asn Ser Ile Val Ile Ile Gly Ser Asp Gly Ser Leu Leu Asn

115 120 125

Arg His Arg Lys Leu Met Pro Thr Asn Pro Glu Arg Met Val Trp Gly

130 135 140

Phe Gly Asp Ala Ser Gly Leu Lys Val Val Asp Thr Pro Val Gly Arg

145 150 155 160

Val Gly Thr Leu Val Cys Trp Glu Asn Tyr Met Pro Leu Ala Arg Tyr

165 170 175

Ala Leu Tyr Ser Gln Gly Val Glu Val Tyr Ile Ala Pro Thr Tyr Asp

180 185 190

Ser Gly Asp Asp Trp Ile Ser Thr Leu Gln His Ile Ala Arg Glu Gly

195 200 205

Arg Cys Trp Val Val Gly Cys Gly Asn Leu Leu Arg Gly Ser Asp Ile

210 215 220

Pro Asp Asp Phe Pro Glu Lys Leu Ala Leu Tyr Pro Asp Glu Asp Glu

225 230 235 240

Trp Ile Asn Pro Gly Asp Ser Val Val Ile Ala Pro Gly Gly Lys Ile

245 250 255

Met Ala Gly Pro Leu Arg Gln Glu Ala Gly Ile Val Tyr Cys Asp Ile

260 265 270

Ala Ser Glu Ser Ala Ser Gln Ala Lys Arg Ala Leu Asp Val Ala Gly

275 280 285

His Tyr Ser Arg Pro Asp Ile Phe Glu Leu His Val Asn Thr Lys Val

290 295 300

Gln Thr Pro Val Val Tyr Asp

305 310

<210>381

<211>945

<212>DNA

<213>Clostridium acetobutylicum ATCC 3625

<400>381

atgggcgaat tcggtgaagt taccctgggc gtggctcagg ctgctcccgt gtactttgac 60

cgcgaggcct cgaccgagaa agcctgtggc ctgatccgcg aggcgggcga aaagggtgta 120

gatcttctgg cgttcggtga aacgtggtta accggctatc catactggaa agatgcgcct 180

tggtctcgcg aatacaacga cttgcgtgca cgttatgttg cgaacggtgt gatgattcct 240

ggtccggaaa cggacgctct gtgccaagca gccgcggaag caggtgtgga tgtggcgatc 300

ggagtagtag aactggagcc gggctctctt tcctcggttt attgcactct gttatttata 360

agccgcgagg gcgagatcct gggtcgtcac cgcaaactga aaccgaccga tagcgaacgt 420

cgttactggt ctgaaggcga cgcgactggt ctgcgcgttt atgagcgccc atatggtcgg 480

cttagcggcc tgaattgctg ggagcacact atgatgctgc cggggtacgc cctggcggcg 540

cagggcaccc agttccatgt ggccgcttgg ccaaacatgg catcctcgaa ttctgaactt 600

ctgtctcgtg cctacgctat gcaggcgggc tgctacgttt tatgcgcggg tggcctgggc 660

ccggccccag gtgaactgcc ggatggtatc gcggcggaaa gtttagatca cttgactgga 720

gagtcatgta tcatcgaccc gtgggggaaa gtaattgctg gtccggtgtc ttgcgaggaa 780

acccttatca cggctcgcgt tagcaccgca tctatttatc gccgcaaaag tttgacggac 840

gtgggcggtc attatagccg cccggatgtt ttccgttttg aagtcgatcg ctctgagcgt 900

ccccgtgtcg tgtttcgcga tggtgacgtg gatgaccgag gttaa 945

<210>382

<211>314

<212>PRT

<213>Clostridium acetobutylicum ATCC 3625

<400>382

Met Gly Glu Phe Gly Glu Val Thr Leu Gly Val Ala Gln Ala Ala Pro

1 5 10 15

Val Tyr Phe Asp Arg Glu Ala Ser Thr Glu Lys Ala Cys Gly Leu Ile

20 25 30

Arg Glu Ala Gly Glu Lys Gly Val Asp Leu Leu Ala Phe Gly Glu Thr

35 40 45

Trp Leu Thr Gly Tyr Pro Tyr Trp Lys Asp Ala Pro Trp Ser Arg Glu

50 55 60

Tyr Asn Asp Leu Arg Ala Arg Tyr Val Ala Asn Gly Val Met Ile Pro

65 70 75 80

Gly Pro Glu Thr Asp Ala Leu Cys Gln Ala Ala Ala Glu Ala Gly Val

85 90 95

Asp Val Ala Ile Gly Val Val Glu Leu Glu Pro Gly Ser Leu Ser Ser

100 105 110

Val Tyr Cys Thr Leu Leu Phe Ile Ser Arg Glu Gly Glu Ile Leu Gly

115 120 125

Arg His Arg Lys Leu Lys Pro Thr Asp Ser Glu Arg Arg Tyr Trp Ser

130 135 140

Glu Gly Asp Ala Thr Gly Leu Arg Val Tyr Glu Arg Pro Tyr Gly Arg

145 150 155 160

Leu Ser Gly Leu Asn Cys Trp Glu His Thr Met Met Leu Pro Gly Tyr

165 170 175

Ala Leu Ala Ala Gln Gly Thr Gln Phe His Val Ala Ala Trp Pro Asn

180 185 190

Met Ala Ser Ser Asn Ser Glu Leu Leu Ser Arg Ala Tyr Ala Met Gln

195 200 205

Ala Gly Cys Tyr Val Leu Cys Ala Gly Gly Leu Gly Pro Ala Pro Gly

210 215 220

Glu Leu Pro Asp Gly Ile Ala Ala Glu Ser Leu Asp His Leu Thr Gly

225 230 235 240

Glu Ser Cys Ile Ile Asp Pro Trp Gly Lys Val Ile Ala Gly Pro Val

245 250 255

Ser Cys Glu Glu Thr Leu Ile Thr Ala Arg Val Ser Thr Ala Ser Ile

260 265 270

Tyr Arg Arg Lys Ser Leu Thr Asp Val Gly Gly His Tyr Ser Arg Pro

275 280 285

Asp Val Phe Arg Phe Glu Val Asp Arg Ser Glu Arg Pro Arg Val Val

290 295 300

Phe Arg Asp Gly Asp Val Asp Asp Arg Gly

305 310

<210>383

<211>1041

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>383

atgtcggagc ccatgacgaa gtatcgcggc gcggcggtgc aggccgcgcc ggtgttcctc 60

gatctcgacc gcacagtcga gaaagcgatc ggcctgatcg agcaggcggc caagcaggac 120

gtgcgcctga tcgcattccc agagacttgg attcccggct atcccttttg gatatggctg 180

ggcgcgccgg cttggggcat gcgcttcgtc cagcgctatt tcgagaattc gctcgtgcgc 240

ggcagcaagc agtggcaggc cctggcggat gcggcccgcc gccacggcat gcatgtcgtg 300

gccggctata gcgagcgcgc gggcggcagc ctctatatgg gccaggcgat cttcggcccc 360

gatggcgatc tgatcgccgc gcgccgcaag ctcaagccta cccatgcgga gcgcaccgtg 420

ttcggcgagg gagacggcag ccatctcgcg gtgcacgata ccgccatcgg gcgcctcggc 480

gcgctctgtt gctgggagca catccagcca ttgtcgaaat acgccatgta cgccgccgac 540

gaacaggtcc acgtcgcgtc gtggccgagc ttcagcctct atcgcggcat ggcctatgcg 600

ctcggaccgg aggtcaatac cgccgcaagc cagatctacg cggtcgaggg cggctgctac 660

gtgctggcgt cgtgcgcgac cgtttcgccg gagatgatca aggtattggt ggatacgccc 720

gacaaggaga tgttcctcaa ggccggcggc ggttttgcca tgattttcgg gcccgacggc 780

cgcgccctgg ccgagccgct cccggagacc gaagagggac tgctggtcgc cgatatcgac 840

ctcggcatga tcgcgttggc caaggcggcg gccgatccgg cgggccacta ttcacggccc 900

gacgtaacgc ggctgctgct ggatcgacgt ccggcccaac gcgtcgtcac gcttgatgcc 960

gcattcgaac cgcaaaacga ggacaagggc gacgcgcccg cgctgcgcgt ggtggcggaa 1020

agcgccgccg ccgcgcagta g 1041

<210>384

<211>346

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>384

Met Ser Glu Pro Met Thr Lys Tyr Arg Gly Ala Ala Val Gln Ala Ala

1 5 10 15

Pro Val Phe Leu Asp Leu Asp Arg Thr Val Glu Lys Ala Ile Gly Leu

20 25 30

Ile Glu Gln Ala Ala Lys Gln Asp Val Arg Leu Ile Ala Phe Pro Glu

35 40 45

Thr Trp Ile Pro Gly Tyr Pro Phe Trp Ile Trp Leu Gly Ala Pro Ala

50 55 60

Trp Gly Met Arg Phe Val Gln Arg Tyr Phe Glu Asn Ser Leu Val Arg

65 70 75 80

Gly Ser Lys Gln Trp Gln Ala Leu Ala Asp Ala Ala Arg Arg His Gly

85 90 95

Met His Val Val Ala Gly Tyr Ser Glu Arg Ala Gly Gly Ser Leu Tyr

100 105 110

Met Gly Gln Ala Ile Phe Gly Pro Asp Gly Asp Leu Ile Ala Ala Arg

115 120 125

Arg Lys Leu Lys Pro Thr His Ala Glu Arg Thr Val Phe Gly Glu Gly

130 135 140

Asp Gly Ser His Leu Ala Val His Asp Thr Ala Ile Gly Arg Leu Gly

145 150 155 160

Ala Leu Cys Cys Trp Glu His Ile Gln Pro Leu Ser Lys Tyr Ala Met

165 170 175

Tyr Ala Ala Asp Glu Gln Val His Val Ala Ser Trp Pro Ser Phe Ser

180 185 190

Leu Tyr Arg Gly Met Ala Tyr Ala Leu Gly Pro Glu Val Asn Thr Ala

195 200 205

Ala Ser Gln Ile Tyr Ala Val Glu Gly Gly Cys Tyr Val Leu Ala Ser

210 215 220

Cys Ala Thr Val Ser Pro Glu Met Ile Lys Val Leu Val Asp Thr Pro

225 230 235 240

Asp Lys Glu Met Phe Leu Lys Ala Gly Gly Gly Phe Ala Met Ile Phe

245 250 255

Gly Pro Asp Gly Arg Ala Leu Ala Glu Pro Leu Pro Glu Thr Glu Glu

260 265 270

Gly Leu Leu Val Ala Asp Ile Asp Leu Gly Met Ile Ala Leu Ala Lys

275 280 285

Ala Ala Ala Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Val Thr Arg

290 295 300

Leu Leu Leu Asp Arg Arg Pro Ala Gln Arg Val Val Thr Leu Asp Ala

305 310 315 320

Ala Phe Glu Pro Gln Asn Glu Asp Lys Gly Asp Ala Pro Ala Leu Arg

325 330 335

Val Val Ala Glu Ser Ala Ala Ala Ala Gln

340 345

<210>385

<211>1014

<212>DNA

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>385

atgaaagaag ctatcaaggt cgcctgcgtg caagccgccc cgatctacat ggatttgaag 60

gcgacggtgg acaaaaccat tgagttgatg gaagaagcag cacgtaataa tgctcgtctg 120

atcgcctttc cggaaacttg gattccaggc tacccatggt ttctttggct tgactcacca 180

gcatgggcaa tgcaatttgt acgccaatac catgagaact cattggagtt ggatggccct 240

caagctaagc gcatttcaga tgcagccaag cggttgggaa tcatggtcac cctggggatg 300

agtgaacggg tcggtggcac cctttacatc agtcagtggt tcataggcga taatggtgac 360

accattgggg cccggcgaaa gttgaaacct acttttgttg aacgtacttt gttcggcgaa 420

ggggatggtt catcgctagc ggttttcgag acgtctgttg gaaggctggg tggcttatgc 480

tgttgggagc accttcaacc gctaacaaaa tacgctttgt atgcacaaaa tgaagagatt 540

cattgtgcgg cttggccgag ctttagcctt tatcctaatg cggcgaaagc cctggggcct 600

gatgtcaatg tagcggcctc tcgaatctat gccgttgaag ggcaatgctt cgtactagcg 660

tcgtgtgcgc tcgtttcaca atccatgatc gatatgcttt gtacagatga cgaaaagcat 720

gcgttgcttc tggctggtgg tggacactca cgtatcatag ggcctgatgg tggtgacttg 780

gtcgcgcctc ttgccgaaaa tgaagagggt attctctacg caaaccttga tcctggagta 840

cgcatccttg ctaaaatggc ggcagaccct gctggtcatt attcccgtcc cgacattact 900

cgcttgctaa tagatcgcag ccctaaatta ccggtagttg aaattgaagg tgatcttcgt 960

ccttacgctt tgggtaaagc gtctgagacg ggtgcgcaac tcgaagaaat ttga 1014

<210>386

<211>337

<212>PRT

<213>未知

<220>

<223>从环境样品获得

<400>386

Met Lys Glu Ala Ile Lys Val Ala Cys Val Gln Ala Ala Pro Ile Tyr

1 5 10 15

Met Asp Leu Lys Ala Thr Val Asp Lys Thr Ile Glu Leu Met Glu Glu

20 25 30

Ala Ala Arg Asn Asn Ala Arg Leu Ile Ala Phe Pro Glu Thr Trp Ile

35 40 45

Pro Gly Tyr Pro Trp Phe Leu Trp Leu Asp Ser Pro Ala Trp Ala Met

50 55 60

Gln Phe Val Arg Gln Tyr His Glu Asn Ser Leu Glu Leu Asp Gly Pro

65 70 75 80

Gln Ala Lys Arg Ile Ser Asp Ala Ala Lys Arg Leu Gly Ile Met Val

85 90 95

Thr Leu Gly Met Ser Glu Arg Val Gly Gly Thr Leu Tyr Ile Ser Gln

100 105 110

Trp Phe Ile Gly Asp Asn Gly Asp Thr Ile Gly Ala Arg Arg Lys Leu

115 120 125

Lys Pro Thr Phe Val Glu Arg Thr Leu Phe Gly Glu Gly Asp Gly Ser

130 135 140

Ser Leu Ala Val Phe Glu Thr Ser Val Gly Arg Leu Gly Gly Leu Cys

145 150 155 160

Cys Trp Glu His Leu Gln Pro Leu Thr Lys Tyr Ala Leu Tyr Ala Gln

165 170 175

Asn Glu Glu Ile His Cys Ala Ala Trp Pro Ser Phe Ser Leu Tyr Pro

180 185 190

Asn Ala Ala Lys Ala Leu Gly Pro Asp Val Asn Val Ala Ala Ser Arg

195 200 205

Ile Tyr Ala Val Glu Gly Gln Cys Phe Val Leu Ala Ser Cys Ala Leu

210 215 220

Val Ser Gln Ser Met Ile Asp Met Leu Cys Thr Asp Asp Glu Lys His

225 230 235 240

Ala Leu Leu Leu Ala Gly Gly Gly His Ser Arg Ile Ile Gly Pro Asp

245 250 255

Gly Gly Asp Leu Val Ala Pro Leu Ala Glu Asn Glu Glu Gly Ile Leu

260 265 270

Tyr Ala Asn Leu Asp Pro Gly Val Arg Ile Leu Ala Lys Met Ala Ala

275 280 285

Asp Pro Ala Gly His Tyr Ser Arg Pro Asp Ile Thr Arg Leu Leu Ile

290 295 300

Asp Arg Ser Pro Lys Leu Pro Val Val Glu Ile Glu Gly Asp Leu Arg

305 310 315 320

Pro Tyr Ala Leu Gly Lys Ala Ser Glu Thr Gly Ala Gln Leu Glu Glu

325 330 335

Ile

Claims

1.一种分离的或重组的核酸，所述分离的或重组的核酸包括核苷酸，所述核苷酸具有一个序列，所述序列与下述序列具有至少50％的同一性，SEQ ID NO：195，205，207，209或237，SEQ ID NO：195，205，207，209或237的变体，具有一个或多个突变：位点163-165 AAA，AAG，GGT，GGC，GGA，GGG，CAA或CAG；位点178-180 GAA或GAG；位点331-333 TCT，TCC，TCA，TCG，AGT或AGC；位点568-570 CAT，CAC，TCT，TCC，TCA，TCG，AGT，AGC，ACT，ACC，ACA，TCA，TAT，TAC，ATG或ACG；位点571-573 TTA，TTG，CTT，CTC，CTA，CTG，GTT，GTC，GTA，GTG，ATG，ACT，ACC，ACA，GAT，GAC，GGT，GGC，GGA，GGG，GAA，GAG，TAT，TAC或ACG；位点595-597GAA，GAG，TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；位点646-666 TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；或其任意组合，其片段，其中所述核酸或片段编码具有腈水解酶活性的多肽，或它们的补体。

2.如权利要求1所述的分离的或重组的核酸，其中所述核酸包括核苷酸，所述核苷酸具有一个序列，所述序列与如下序列是基本上相同的，SEQ ID NO：195，205，207，209或237，SEQ ID NO：195，205，207，209或237的变体，在如下位点具有一个或多个突变：位点163-165 AAA，AAG，GGT，GGC，GGA，GGG，CAA或CAG；位点178-180 GAA或GAG；位点331-333 TCT，TCC，TCA，TCG，AGT或AGC；位点568-570 CAT，CAC，TCT，TCC，TCA，TCG，AGT，AGC，ACT，ACC，ACA，TCA，TAT，TAC，ATG或ACG；位点571-573 TTA，TTG，CTT，CTC，CTA，CTG，GTT，GTC，GTA，GTG，ATG，ACT，ACC，ACA，GAT，GAC，GGT，GGC，GGA，GGG，GAA，GAG，TAT，TAC或ACG；位点595-597 GAA，GAG，TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；位点646-666 TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；或其任意组合，或它们的补体。

3.一种分离的或重组的核酸，其中所述核酸包括核苷酸，所述核苷酸具有一个与如下序列同一的序列，SEQ ID NO：195，205，207，209或237，具有腈水解酶活性的片段，或它们的补体。

4.一种分离的或重组的核酸，其中所述核酸包括核苷酸，所述核苷酸具有一个与如下序列同一的序列，SEQ ID NO：195，205，207，209或237的变体，在如下位点具有一个或多个突变：位点163-165 AAA，AAG，GGT，GGC，GGA，GGG，CAA或CAG；位点178-180 GAA或GAG；位点331-333 TCT，TCC，TCA，TCG，AGT或AGC；位点568-570 CAT，CAC，TCT，TCC，TCA，TCG，AGT，AGC，ACT，ACC，ACA，TCA，TAT，TAC，ATG或ACG；位点571-573 TTA，TTG，CTT，CTC，CTA，CTG，GTT，GTC，GTA，GTG，ATG，ACT，ACC，ACA，GAT，GAC，GGT，GGC，GGA，GGG，GAA，GAG，TAT，TAC或ACG；位点595-597GAA，GAG，TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；位点646-666 TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；或其任意组合，具有腈水解酶活性的片段，或它们的补体。

5.一种分离的或重组的核酸，所述核酸可以与如下序列杂交，SEQ ID NO：195，205，207，209或237，SEQ ID NO：195，205，207，209或237的变体，在如下位点具有一个或更多突变：位点163-165AAA，AAG，GGT，GGC，GGA，GGG，CAA或CAG；位点178-180GAA或GAG；位点331-333TCT，TCC，TCA，TCG，AGT或AGC；位点568-570CAT，CAC，TCT，TCC，TCA，TCG，AGT，AGC，ACT，ACC，ACA，TCA，TAT，TAC，ATG或ACG；位点571-573TTA，TTG，CTT，CTC，CTA，CTG，GTT，GTC，GTA，GTG，ATG，ACT，ACC，ACA，GAT，GAC，GGT，GGC，GGA，GGG，GAA，GAG，TAT，TAC或ACG；位点595-597GAA，GAG，TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；位点646-666TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；或其任意组合，具有腈水解酶活性的片段，或它们的补体。

6.如权利要求5所述的分离的或重组的核酸，其中严格杂交条件包括至少50％甲酰胺，和大约37℃到大约42℃的温度。

7.一种核酸探针，所述探针包括从大约15个核苷酸到大约50个核苷酸，其中，至少15个连续核苷酸是与在如下核酸序列之中的核酸靶区域具有至少50％的互补性，SEQ ID NO：195，205，207，209或237，SEQ ID NO：195，205，207，209或237的变体，在如下位点具有一个或更多突变：位点163-165AAA，AAG，GGT，GGC，GGA，GGG，CAA或CAG；位点178-180GAA或GAG；位点331-333TCT，TCC，TCA，TCG，AGT或AGC；位点568-570CAT，CAC，TCT，TCC，TCA，TCG，AGT，AGC，ACT，ACC，ACA，TCA，TAT，TAC，ATG或ACG；位点571-573TTA，TTG，CTT，CTC，CTA，CTG，GTT，GTC，GTA，GTG，ATG，ACT，ACC，ACA，GAT，GAC，GGT，GGC，GGA，GGG，GAA，GAG，TAT，TAC或ACG；位点595-597GAA，GAG，TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；位点646-666TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；或其任意组合，或它们的补体。

8.一种核酸探针，所述探针包括SEQ ID NO：195，205，207，209或237，SEQ ID NO：195，205，207，209或237的变体的核酸序列内的核酸靶区域的至少15个连续核苷酸，其中所述SEQ ID NO：195，205，207，209或237的变体具有一个或更多突变：位点163-165AAA，AAG，GGT，GGC，GGA，GGG，CAA或CAG；位点178-180GAA或GAG；位点331-333TCT，TCC，TCA，TCG，AGT或AGC；位点568-570CAT，CAC，TCT，TCC，TCA，TCG，AGT，AGC，ACT，ACC，ACA，TCA，TAT，TAC，ATG或ACG；位点571-573TTA，TTG，CTT，CTC，CTA，CTG，GTT，GTC，GTA，GTG，ATG，ACT，ACC，ACA，GAT，GAC，GGT，GGC，GGA，GGG，GAA，GAG，TAT，TAC或ACG；位点595-597GAA，GAG，TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；位点646-666TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；或其任意组合，或者它们的补体。

9.一种能在宿主细胞内复制的核酸载体，其中所述载体包括权利要求1到6，12或13中的任一项所述的核酸。

10.一种宿主细胞，所述宿主细胞包括权利要求1到6，12或13中的任一项所述的核酸。

11.一种宿主生物体，包括权利要求10的宿主细胞。

12.一种分离的或重组的核酸，所述核酸编码包括氨基酸的多肽，所述氨基酸具有一个与SEQ ID NO：196，206，208，210或238，或SEQ ID NO：196，206，208，210或238的变体具有至少50％同一性的序列，其中SEQ ID NO：196，206，208，210或238的变体具有一个或多个突变：在残基55处，赖氨酸、甘氨酸或谷氨酰胺；在残基60处，谷氨酸；在残基111处，丝氨酸；在残基190处，丝氨酸、组氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基191处，亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基199处，谷氨酸或亮氨酸；在残基222处，亮氨酸；或其任意组合，编码多肽的片段，其中多肽具有腈水解酶活性，或它的补体。

13.一种分离的或重组的核酸，所述核酸编码包括氨基酸的多肽，所述氨基酸具有SEQ ID NO：196，206，208，210或238，或SEQ ID NO：196，206，208，210或238的变体的序列，其中SEQ ID NO：196，206，208，210或238的变体具有一个或多个突变：在残基55处，赖氨酸、甘氨酸或谷氨酰胺；在残基60处，谷氨酸；在残基111处，丝氨酸；在残基190处，丝氨酸、组氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基191处，亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基199处，谷氨酸或亮氨酸；在残基222处，亮氨酸；或其任意组合，编码多肽的具有腈水解酶活性的片段，或它的补体。

14.如权利要求1到6，12或13中的任一项所述的分离的或重组的核酸，其中所述核酸被固定到固相支持体上。

15.如权利要求14所述的分离的或重组的核酸，其中固相支持体选自凝胶、树脂、聚合物、陶瓷制品、玻璃、微电极和其任意组合。

16.一种分离的或重组的多肽，所述多肽包括具有如下序列的氨基酸，所述序列与SEQ ID NO：196，206，208，210或238，或SEQ ID NO：196，206，208，210或238的变体具有至少50％同一性，SEQ ID NO：196，206，208，210或238的变体具有一个或多个突变：在残基55处，赖氨酸、甘氨酸或谷氨酰胺；在残基60处，谷氨酸；在残基111处，丝氨酸；在残基190处，丝氨酸、组氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基191处，亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基199处，谷氨酸或亮氨酸；在残基222处，亮氨酸；或其任意组合，或其片段，其中所述多肽具有腈水解酶活性。

17.一种分离的或重组的多肽，所述多肽包括具有SEQ ID NO：196，206，208，210或238，或SEQ ID NO：196，206，208，210或238的变体的氨基酸，其中SEQID NO：196，206，208，210或238的变体具有一个或多个突变：在残基55处，赖氨酸、甘氨酸或谷氨酰胺；在残基60处，谷氨酸；在残基111处，丝氨酸；在残基190处，丝氨酸、组氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基191处，亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基199处，谷氨酸或亮氨酸；在残基222处，亮氨酸；或其任意组合，或其片段，其中所述多肽具有腈水解酶活性。

18.如权利要求16或权利要求17中的任一项所述的分离的或重组的多肽，其中所述片段在长度上至少是20个氨基酸，并且其中所述片段具有腈水解酶活性。

19.如权利要求16或权利要求17所述的多肽的肽模拟体，或其片段，具有腈水解酶活性。

20.如权利要求16或权利要求17中的多肽的密码子最优化的多肽，或其片段，具有腈水解酶活性，其中密码子使用被最优化，以适合特定生物体或细胞。

21.如权利要求16或权利要求17所述的多肽，或其片段，或其具有腈水解酶活性的肽模拟体，其中多肽、片段或肽模拟体被固定到固相支持体上。

22.如权利要求21所述的多肽，其中固相支持体选自凝胶、树脂、聚合物、陶瓷制品、玻璃、微电极和其任意组合。

23.一种纯化的抗体，所述抗体特异性地与权利要求16或权利要求17所述的多肽或其具有腈水解酶活性的片段结合。

24.如权利要求23所述的抗体的片段，其中所述片段与具有腈水解酶活性的多肽特异性地结合。

25.一种酶制剂，所述制剂包括权利要求16或17中任一项所述多肽的至少一种，其中所述制剂是液体或干燥的。

26.如权利要求25所述的酶制剂，其中所述制剂被固定到固相支持体上。

27.一种组合物，包括权利要求1到6，12或13所述核酸的至少一种，或包括权利要求16或权利要求17所述的至少一种多肽或其片段，或其具有腈水解酶活性的肽模拟体，或其任意组合。

28.一种方法，用于将腈水解为羧酸，所述方法包括将分子与权利要求16或权利要求17所述的至少一种多肽，或其片段，或其肽模拟体接触，具有腈水解酶活性，条件是适合腈水解酶活性。

29.一种方法，用于水解分子的羟腈部分或氨基腈部分，所述方法包括将所述分子与权利要求16或权利要求17中的任一项所述的至少一种多肽或其片段，或其肽模拟体接触，具有腈水解酶活性，条件是适合腈水解酶活性。

30.一种方法，用于产生手性α-羟基酸分子或手性氨基酸分子，所述方法包括将具有羟腈部分或氨基酸部分的分子与至少一种多肽，所述多肽具有权利要求16或权利要求17所述的氨基酸序列，或其片段，或其肽模拟体混和，具有对映选择性腈水解酶活性。

31.一种方法，用于制备一种组合物及其中间产物，所述方法包括：将该组合物或中间产物的前体与权利要求16或权利要求17中任一项所述的至少一种具有腈水解酶活性的多肽、或其片段或其肽模拟体接触，其中所述前体包括羟腈部分或氨基腈部分，水解前体中的羟腈部分或氨基腈部分，从而制备该组合物或其中间产物。

32.一种方法，用于制备(R)-乙基4-氰基-3-羟基丁酸，所述方法包括将羟基戊二酰基腈与至少一种多肽接触，所述至少一种多肽由具有SEQ ID NO：195，205，207，209或237，或SEQ ID NO：195，205，207，209或237的变体的一个序列的核酸编码，其中SEQ ID NO：195，205，207，209或237的变体在如下位点具有一个或多个突变：位点163-165AAA，AAG，GGT，GGC，GGA，GGG，CAA或CAG；位点178-180GAA或GAG；位点331-333TCT，TCC，TCA，TCG，AGT或AGC；位点568-570CAT，CAC，TCT，TCC，TCA，TCG，AGT，AGC，ACT，ACC，ACA，TCA，TAT，TAC，ATG或ACG；位点571-573TTA，TTG，CTT，CTC，CTA，CTG，GTT，GTC，GTA，GTG，ATG，ACT，ACC，ACA，GAT，GAC，GGT，GGC，GGA，GGG，GAA，GAG，TAT，TAC或ACG；位点595-597GAA，GAG，TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；位点646-666 TTA，TTG，CTT，CTC，CTA或CTG；或其任意组合，或其编码具有腈水解酶活性的多肽的片段，选择性地产生了(R)-对映异构体，从而制备(R)-乙基4-氰基-3-羟基丁酸。

33.一种方法，用于制备(S)-乙基4-氰基-3-羟基丁酸，所述方法包括将羟基戊二酰基腈与至少一种多肽接触，所述至少一种多肽具有SEQ ID NO：196，206，208，210或238，或SEQ ID NO：196，206，208，210或238的变体中的任一个序列的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：196，206，208，210或238的变体具有一个或多个突变：在残基55处，赖氨酸、甘氨酸或谷氨酰胺；在残基60处，谷氨酸；在残基111处，丝氨酸；在残基190处，丝氨酸、组氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基191处，亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基199处，谷氨酸或亮氨酸；在残基222处，亮氨酸；或其任意组合，或其具有腈水解酶活性的片段或肽模拟体，选择性地产生了(S)-对映异构体，从而制备(S)-乙基4-氰基-3-羟基丁酸。

34.一种方法，用于制备(R)-扁桃酸，所述方法包括将扁桃腈与至少一种多肽混和，所述至少一种多肽具有氨基酸序列，所述氨基酸序列是SEQ ID NO：196，206，208，210或238，或SEQ ID NO：196，206，208，210或238的变体中的任一个所述序列，其中SEQ ID NO：196，206，208，210或238的变体具有一个或多个突变：在残基55处，赖氨酸、甘氨酸或谷氨酰胺；在残基60处，谷氨酸；在残基111处，丝氨酸；在残基190处，丝氨酸、组氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基191处，亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基199处，谷氨酸或亮氨酸；在残基222处，亮氨酸；或其任意组合，或其具有腈水解酶活性的片段或肽模拟体。

35.一种方法，用于制备(S)-扁桃酸，所述方法包括将扁桃腈与至少一种多肽混和，所述至少一种多肽具有氨基酸序列，所述氨基酸序列是SEQ ID NO：196，206，208，210或238，或SEQ ID NO：196，206，208，210或238的变体中的任一个序列，具有一个或多个突变：在残基55处，赖氨酸、甘氨酸或谷氨酰胺；在残基60处，谷氨酸；在残基111处，丝氨酸；在残基190，丝氨酸、组氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基191处，亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基199处，谷氨酸或亮氨酸；在残基222处，亮氨酸；或其任意组合，或其具有腈水解酶活性的片段或肽模拟体。

36.一种方法，所述方法用于制备(S)-苯基乳酸衍生物或(R)-苯基乳酸衍生物，所述方法包括将苯基乳氰腈与至少一种多肽混和，所述至少一种多肽选自SEQ IDNO：196，206，208，210或238，或SEQ IDNO：196，206，208，210或238的变体，具有一个或多个突变：在残基55处，赖氨酸、甘氨酸或谷氨酰胺；在残基60处，谷氨酸；在残基111处，丝氨酸；在残基190处，丝氨酸、组氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基191处，亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基199处，谷氨酸或亮氨酸；在残基222处，亮氨酸；或其任意组合，或其具有腈水解酶活性的任意片段或肽模拟体，或其任意活性片段或肽模拟体，选择性地产生了(S)-对映异构体或(R)-对映异构体，从而产生(S)-苯基乳酸衍生物或(R)-苯基乳酸衍生物。

37.一种方法，用于制备权利要求16或权利要求17所述的多肽或其片段，所述方法包括：

(a)将编码多肽的核酸在允许通过宿主细胞产生多肽的条件下引入宿主细胞，和

(b)回收如此所产生的多肽。

38.一种方法，用于产生编码具有腈水解酶活性的多肽的核酸变体，其中所述变体具有相对于天然发生的生物活性而发生改变的生物活性，所述方法包括：

(a)通过如下步骤修饰权利要求1到6，12，或13中任一项所述的核酸

(i)用一个不同的核苷酸取代一个或多个核苷酸，其中所述核苷酸包括天然或非天然核苷酸，

(ii)删除一个或多个核苷酸，

(iii)添加一个或多个核苷酸，或

(iv)其任意组合。

39.一种方法，用于从两个或多个核酸产生一个多核苷酸，所述方法包括：

(a)鉴别两个或多个核酸之间的同一性区域和多样性区域，其中所述核酸中的至少一个包括权利要求1到6，12，或13中任一项所述的一个核酸；

(b)提供一组寡核苷酸，所述寡核苷酸在序列上与两个或多个核酸中的至少两个相应；和

(c)用聚合酶延伸寡核苷酸，从而产生多核苷酸。

40.一种筛选测定法，用于鉴别腈水解酶，所述测定法包括：

(a)提供多个核酸或多肽，包括权利要求1到6，12，或13中任一项所述的核酸中的至少一个核酸，或权利要求16或权利要求17所述的多肽的至少一个多肽，或其片段；

(b)从所述多个中，得到将被用来测试腈水解酶活性的多肽候选者；

(c)测试候选者的腈水解酶活性；和

(d)鉴别那些是腈水解酶的多肽候选者。

41.一个试剂盒，所述试剂盒包括(a)权利要求1到6，12，或13中任一项权利要求所述的核酸，或其编码具有腈水解酶活性的多肽的片段，或(b)权利要求16或权利要求17中任一项权利要求所述的多肽，或其片段，或其具有腈水解酶活性的肽模拟体，或其组合；和(c)缓冲剂。

42.一种方法，用于修饰分析，所述方法包括：

(a)将权利要求16或权利要求17中任一项权利要求所述的多肽，或其片段，或其具有腈水解酶活性的肽模拟体，与起始分子混和，以产生反应混合物；

(b)将起始分子与多肽反应，以产生修饰的分子。

43.一种方法，用于鉴别修饰的化合物，所述方法包括：

(a)将权利要求16或权利要求17中任一项权利要求所述的多肽，或其片段，或其具有腈水解酶活性的肽模拟体，与起始化合物混和，以产生反应混合物，随后产生修饰的起始化合物的文库；

(b)测试所产生的文库，以确定文库中是否存在表现出期望活性的修饰的起始化合物；

(c)鉴别表现出期望活性的修饰化合物。

44.一种计算机可读的介质，其上已经存储了至少一个选自如下的核苷酸序列：SEQ ID NO：1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，163，165，167，169，171，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385，或其变体，和/或至少一个选自如下序列的氨基酸序列：SEQ ID NO：2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384和386，及其变体。

45.一种计算机系统，所述系统包括一个处理器和一个数据存储设备，其中所述数据存储设备上已经存储了至少一个选自如下的核苷酸序列：SEQ ID NO：1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，163，165，167，169，171，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385，和其变体，和/或至少一个选自如下序列的氨基酸序列：SEQ ID NO：2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，164，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386及其变体。

46.一种方法，用于鉴别序列中的特征，所述方法包括：

(a)将序列输入到计算机中；

(b)在计算机上运行序列特征识别程序，以便在序列中识别特征；和

(c)识别序列中的特征，

其中所述序列包括SEQ ID NO：1-386，变体，或其任意组合。

47.一种测定方法，用于识别多肽的功能片段，所述方法包括：

(a)获得权利要求16或权利要求17所述的至少一个多肽的片段；

(b)将步骤(a)的至少一个片段与具有一个羟腈部分或氨基腈部分的底物接触，条件是适合腈水解酶活性；

(c)测量从步骤(b)中至少一个片段中的每一个所产生的反应产物的量；和

(d)识别能产生腈水解酶反应产物的至少一个片段；从而识别多肽的功能片段。

48.一种测定方法，用于识别多肽的功能变体，所述方法包括：

(a)获得权利要求16或权利要求17的至少一个多肽的至少一个变体；

(b)将步骤(a)的至少一个变体与具有一个羟腈部分或氨基腈部分的底物接触，条件是适合腈水解酶活性；

(c)测量步骤(b)的至少一个变体中的每一个所产生的反应产物的量；和

(d)识别能产生腈水解酶反应产物的至少一个变体；从而识别多肽的功能变体。

49.一种测定方法，用于筛选对映选择性转化，所述测定方法包括：

(a)标记分中子的两个前手性或对映性部分中的一个；

(b)通过选择性催化剂修饰两个部分中的至少一个，从而产生产物；和

(c)通过质谱分析法测定所得产物。

50.如权利要求49所述的测定方法，其中所述标记物是重同位素或轻同位素。

51.如权利要求49所述的测定方法，其中所述选择性催化剂是酶。

52.如权利要求49所述的测定方法，其中所述使用质谱学技术是通过阳性模式或阴性模式。

53.如权利要求49所述的测定方法，其中所述分析或者是亲本质谱或者是断裂质谱。

54.如权利要求49所述的测定方法，其中所述所述测定方法可以被用来监控或确定对映体过量百分比，或非对映体过量百分比。

55.一种具有腈水解酶活性的分离的或重组的多肽，所述多肽包括一个在SEQ ID NO：196，206，208，210或238中所示的序列，在如下残基处具有一个或多个突变：残基55赖氨酸，残基55甘氨酸，残基55谷氨酰胺，残基60谷氨酸，残基111丝氨酸，残基190，残基190丝氨酸，残基190组氨酸，残基190酪氨酸，残基190苏氨酸，残基191亮氨酸，残基191缬氨酸，残基191蛋氨酸，残基191天冬氨酸，残基191甘氨酸，残基191谷氨酸，残基191酪氨酸，残基191苏氨酸，残基199谷氨酸，残基199亮氨酸，残基222亮氨酸；和它们的任意组合。

56.一种分离的或重组的多肽，具有腈水解酶活性，所述多肽包括一个在SEQID NO：196，206，208，210或238中所示的序列，在残基190或等效残基位置具有一个突变，其中丙氨酸被结合氢的氨基酸或肽模拟体残基替换。

57.一种分离的或重组的多肽，具有腈水解酶活性，所述多肽包括一个在SEQID NO：196，206，208，210或238中所示的序列，在残基190或等效残基位置具有一个突变，其中丙氨酸被疏水氨基酸或肽模拟体残基替换。

58.一种分离的或重组的腈水解酶，所述腈水解酶在SEQ ID NO：196，206，208，210或238的如下位置具有一个或多个突变的等价物：在残基55处，赖氨酸、甘氨酸或谷氨酰胺；在残基60处，谷氨酸；在残基111处，丝氨酸；在残基190处，丝氨酸、组氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基191处，亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、酪氨酸或苏氨酸；在残基199处，谷氨酸或亮氨酸；在残基222处，亮氨酸。

59.一种扩增引物对，用于扩增编码具有腈水解酶活性的多肽的核酸，其中所述引物对能扩增包括权利要求1中所述的一个序列，或其子序列的核酸。

60.如权利要求59所述的扩增引物对，其中扩增引物序列对的一个成员包括寡核苷酸，所述寡核苷酸包括所述序列的至少大约10个到50个连续碱基，或所述序列的大约12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或多个连续碱基。

61.一种编码腈水解酶的核酸，其中所述核酸是通过使用如权利要求59中所述的扩增引物对扩增多核苷酸产生的。

62.如权利要求61的编码腈水解酶的核酸，其中所述扩增是通过聚合酶链式反应(PCR)。

63.如权利要求62的编码腈水解酶的核酸，其中所述核酸是通过扩增基因文库产生的。

64.如权利要求63的编码腈水解酶的核酸，其中所述基因文库是环境文库。

65.一种分离的或重组的腈水解酶，所述腈水解酶是由如权利要求61中所述的编码腈水解酶的核酸编码的。