Revue Frangaise de Transfusion et d'Immuno-h6matologie Tome XXL - - N ° 5. - - 1978 1069 Thrombasthdnie de Glanzmann antigone P1 A, et anticorps anti.Glanzmann par J.Y. M U L L E R , C. P A T E R E A U et J.P. S O U L I E R Centre National de Transfusion Sanguine, PARIS. L ES p r i n c i p a u x t r a i t s c l i n i q u e s d e la m a l a d i e d e G l a n z m a n n a i n s i que son mode de transmission g~n6tique autosomal r6cessif sont m a i n t e n a n t b i e n 6 t a b l i s [3]. Les a n o m a l i e s f o n c t i o n n e l l e s q u i c a r a c t 6 r i s e n t les p l a q u e t t e s d e ces p a t i e n t s o n t 6 g a l e m e n t p u ~ t r e pr6cis6es [1, 5]. P l u s r 6 c e m m e n t , l ' a n a l y s e d e s g l y c o p r o t d i n e s d e s m e m b r a n e s p l a q u e t t a i r e s a p e r m i s d e m e t t r e en 6 v i d e n c e u n d d f a u t d e c e r t a i n e s d e celles-ci d a n s c e t t e a f f e c t i o n [4]. De s u r c r o i t , l ' e x a m e n d ' u n s 6 r u m de m a l a d e a t t e i n t d e t h r o m b a s t h 6 n i e a p e r m i s d e m e t t r e en 6 v i d e n c e u n a n t i c o r p s I g G r 6 a g i s s a n t p o s i t i v e m e n t e n r 6 a c t i o n d e f i x a t i o n d u c o m p l 6 m e n t s u r p l a q u e t t e s a v e c les p l a q u e t t e s d e 350 s u j e t s n o r m a u x m a i s p a s a v e c les p l a q u e t t e s d e 8 p a t i e n t s t h r o m b a s t h ~ n i q u e s [2]. N o u s a v o n s e u r 6 c e m m e n t la p o s s i b i l i t 6 d ' ~ t u d i e r le s ~ r u m et les p l a q u e t t e s d e p a t i e n t s t h r o m b a s t h 6 n i q u e s /~ l ' a i d e d u t e s t d e C o o m b s r a d i o - a c t i f , et ce s o n t les r 6 s u l t a t s p r 6 1 i m i n a i r e s d e c e t t e 6 t u d e q u i s o n t r a p p o r t d s ici. Manuscrit re~u le 3-8-1978. 1070 MULLER J.Y. et coll. M A T E R I E L ET M E T H O D E Le s d r u m et les p l a q u e t t e s de 6 p a t i e n t s t h r o m b a s t h d n i q u e s o n t p u 6tre dtudids. Dans t o u s l e s cas, le d i a g n o s t i c de m a l a d i e de Glanzm a n n a v a i t dtd d f l m e n t d t a b l i s u r des donndes cliniques, b i o l o g i q u e s et gdndtiques. Le test de C o o m b s radio-actif s u r p l a q u e t t e s ( P I R C : pIatelet i n d i r e c t radio-active C o o m b s ) a ddjh dtd d d c r i t en d d t a i l p r d c d d e m m e n t [6]. B r i b v e m e n t , il c o n s i s t e h m e t t r e en c o n t a c t s d r u m et p l a q u e t t e s et apr6s lavage ~ f a i r e agir u n e a n t i g l o b u l i n e anti-fgG de chbvre p u r i f i d e m a r q u d e h l ' i o d e 12~. Le r d s u l t a t est e x p r i m d en pourc e n t a g e de r a d i o - a c t i v i t d fixde s u r le c u l o t p l a q u e t t a i r e p a r r a p p o r t h la r a d i o - a c t i v i t 6 totale. Un index de f i x a t i o n est calculd en f a i s a n t le r a p p o r t : p. c e n t de r a d i o a c t i v i t d fixde d a n s la r d a c t i o n IF= p. cent de r a d i o a c t i v i t d fixde p a r le t d m o i n s d r u m AB G r o u p a g e Pl A [ 7 ] : le g r o u p a g e P1A a dtd effectual h l ' a i d e du PIRC en u t i l i s a n t c o m m e r d a c t i f de g r o u p a g e deux a n t i s d r u m s anti-P1AI. L'un, l ' a n t i s d r u m LAB... e s t un a n t i s d r u m o b t e n u h la suite d'une irnmunisation fmto-maternelle responsable d'une thrombopdnie ndonatale. Cet a n t i c o r p s a dtd d d c r i t p r d c d d e m m e n t [7]. Le second, le s d r u m MAU..., est u n a n t i - s d r u m o b t e n u chez u n e f e m m e a y a n t p r d s e n t d u n e f o r m e t y p i q u e de p u r p u r a t h r o m b o p d n i q u e p o s t - t r a n s fusionnel. Ce cas f e r a l ' o b j e t d ' u n e p u b l i c a t i o n u l t d r i e u r e . L ' a c t i v i t d anti-Pl A1 de ces deux a n t i - s d r u m s e s t p a r f a i t e m e n t corrdlde et les r d s u l t a t s o b t e n u s h a b i t u e l l e m e n t m o n t r e n t u n index de .fixation de 4 ~ 10 lois p l u s f o r t chez les s u j e t s P1A1 p o s i t i f que chez les s u j e t s P1A~ ndgatif. M o y e n n e des n d g a t i f s : 3 ~ 4 % de f i x a t i o n ; i n d e x < 1,5, M o y e n n e des p o s i t i f s : 12 h 40 % de f i x a t i o n ; index > 2 Les a u t r e s t e s t s utilisds d a n s c e t t e d t u d e o n t d t d : la m i c r o l y m p h o c y t o t o x i c i t d selon TERASAKX et coll. [8] p o u r la r e c h e r c h e des a n t i c o r p s anti-HLA et la d d t e r m i n a t i o n des p h d n o t y p e s HLA. 1071 THROMBASTHENIE DE G L A N Z M A N N RESULTATS L ' E t u d e d e s d e u x s e r u m s d e m a l a d i e d e G l a n z m a n n Luc... et BAR... sur un panel de plaquettes de groupe O prises au hasard (sauf en ce q u i c o n c e r n e les p l a q u e t t e s P1A1 nEgatif) d o n n e les r E s u l t a t s prEs e n t d s s u r le t a b l e a u I. Le s e r u m BAR... se fixe s u r les p l a q u e t t e s n o r m a l e s p l A1 + e t P 1 A 1 - d e f a q o n s i g n i f i c a t i v e m e n t p l u s 61evEe ( M : 3,5) q u e s u r les p l a q u e t t e s d e s s u j e t s G l a n z m a n n ( M : 1,14) testEes ( p < 0,001). P a r c o n t r e , la d i f f e r e n c e e n t r e les p1AI+ pas statistiquement significative. e t les P 1 A 1 - n'est Avec le s e r u m L u c .... la m E m e d i f f e r e n c e s i g n i f i c a t i v e se r e t r o u v e : t E m o i n s , M : 9,16 ; G l a n z m a n n , M : 3,4 ; p < 0,01). L ' e n s e m b l e d e ces d e u x s e r i e s m o n t r e q u e ces s e r u m s r e n f e r m e n t u n a n t i c o r p s d e spEcificit6 v o i s i n e , m a i s d e f o r c e d i f f E r e n t e , q u i se fixe d e fa~on s i g n i f i c a t i v e m e n t p l u s 6levEe s u r les p l a q u e t t e s n o r m a l e s q u e s u r les p l a q u e t t e s d e t h r o m b a s t h E n i q u e ott l a f i x a t i o n e s t tr~s indgale. D a n s l ' e n s e m b l e , la f i x a t i o n s e m b l e p l u s f o r t e s u r les p l a q u e t t e s d e s u j e t s P1nl n E g a t i f q u e s u r les p l a q u e t t e s d e s u j e t s P1A~ p o s i t i f , m a i s la d i f f e r e n c e n ' a t t e i n t p a s u n s e u i l r e e l d e s i g n i f i c a t i o n staffst i q u e . P a r c o n t r e , l a m ~ m e E t u d e f a i t e a v e c les s e r u m s d e 2 a u t r e s p a t i e n t s REN... et MEL... n ' a m o n t r 6 a u c u n e f i x a t i o n s u r a u c u n t y p e de plaquettes. GROUPAGE PI A1 DES SUJETS ATTEINTS DE THROMBASTHI~NIE. Le g r o u p a g e P1A1 a p u 6 t r e effectual c h e z 6 m a l a d e s t h r o m b a s t h E n i q u e s . Chez 4 d ' e n t r e - e u x , le g r o u p a g e a dt6 p r a t i q u e a v e c les d e u x a n t i - s E r u m s anti-P1AI. Les r E s u l t a t s d e c e t t e E t u d e s o n t prEsentEs s u r le t a b l e a u I I . L o r s q u e l ' o n c o m p a r e g l o b a l e m e n t les r E s u l t a t s , o n s ' a p e r g o i t q u e les s u j e t s t h r o m b a s t h d n i q u e s d i f f 6 r e n t d e s s u j e t s p1AI+, a l o r s q u ' i l s d o n n e l l t d e s r d s u l t a t s c o m p a r a b l e s /~ c e u x d e s s u j e t s P1A1 n d g a t i f (la d i f f e r e n c e e n t r e le g r o u p e d e s t E m o i n s P1A~ p o s i t i f e t le g r o u p e G l a n z m a n n e s t trEs h a u t e m e n t s i g n i f i c a t i v e p < 0,001). Les t h r o m b a s t h d n i q u e s se c o m p o r t e n t d o n c c o m m e d e s s u j e t s P1A1 n d g a t i f . T o u t e f o i s , le t a u x d e f i x a t i o n s e m b l e v a r i e r s e l o n les MULLER I072 r4 J . Y . et coll. u-~., b xt~ t"q~.. ~H ,o~,,o - eOt'q Z II ~ v ¢~1e¢) u~ b e~ O9 g ,,..~ ,,...~ ¢'4 r~-~- ~t-.q ...a ¢qo~ ¢7x ~ t,--,1 .o "G 0.) 6~ oO i""- g E o0 09 THROMBASTHENIE DE GLANZMANN 1073 I Ot'xl Lr'~ex I E~f~ .- ~ ~+ O.~-u'3 Z~.. ~'~ b ¢.q ,-2 eq 1074 MULLER I.Y. et coll. sujets, et certains sont moins ndgatifs et d o n n e n t des fixations de l'antiglobuline intermddiaires avec celles du groupe positif (LEG...). Afin de vdrifier que cette ndgativitd n'dtait pas due ~t des raisons techniques et n o t a m m e n t ~t des difficultds p o u r collecter le culot de plaquettes t h r o m b a s t h d n i q u e s lors des lavages, des anticorps antiHLA c o r r e s p o n d a n t aux groupes HLA des patients concernds ont dtd utilisds. Dans ces conditions, les plaquettes de Glanzmann se comportaient c o m m e des plaquettes n o r m a l e s et fixaient la m 6 m e p r o p o r t i o n d ' i m m u n o g l o b u l i n e s que les plaquettes tdmoins (index = 6,3). DISCUSSION L'existence d ' a n t i c o r p s dans le sdrum de sujets atteints de thrombasthdnie de Glanzmann a dtd ddmontrde p r d c d d e m m e n t par DEGOS et coil. [2]. Darts la prdsente sdrie, sur 4 sdrums de malades testds, deux dtaient positifs. (Le sdrum Luc... <1) est le m6me que le sdrum L. dtudid par DEGOS). L ' a u t r e malade, BAR..., une fillette de 12 ans, avait dtd hospitalisde p o u r une crise douloureuse aigu~ de la FID. La ddcouverte chez elle de ce type d'anticorps a fait surseoir plusieurs jours h l'intervention. L'anticorps anti-Glanzmann ddtectd par le PIRC est un anticorps de n a t u r e IgG (l'antiglobuline utilisde est une anti-IgG) qui se c o m p o r t e e o m m e un anticorps dirigd contre un antigone public. Cet antigone serait absent seulement chez les malades atteints de t h r o m b a s t h d n i e de Glanzmann. E n c o r e faut-il souligner que les sujets atteints fixent de faqon variable cet anticorps. La fixation est nulle chez certains d'entre eux, alors qu'elle atteint un taux presque c o m p a r a b l e ~ celui observd chez les sujets n o r m a u x chez certains autres. Ce fait nous para~t i m p o r t a n t et indicatif de l'hdtdrogdnditd de cette maladie h l'dchelle moldculaire. I1 est en effet possible que les sujets fixant l'anticorps anti-Glanzmann reprdsentent une variante de l'affection dans laquelle le ddfaut des glycoprotdines de m e m b r a n e s ne serait plus quantitatif mais qualitatif. Cette hypothose exigerait p o u r 6tre confirmde que les glycoprotdines de membranes des plaquettes de tels sujets soient isoldes et analysdes. L'autre fair e x t r 6 m e m e n t f r a p p a n t est la coincidence thrombasthdnie groupage P W ndgatif qui ne peut 6tre due au hasard, le phdnotype P1AI ndgatif ayant dans la p o p u l a t i o n une frdquence de 3 %, (1) Ce sdrum nous a dtd obligeamment fourni par le Dr SALEUN,de Brest. THROMBASTHEN1E DE GLANZMANN 1075 la probabilit6 de l'observer 6 fois de suite chez des sujets pris au h a s a r d est de p = 7,29.10 -1°. Cette association p o u r r a i t 6tre interpr6tde de trois fa~ons : 1° Un artdfact technique : le groupage P1a~, par l'intermddiaire du PIRC, fair intervenir des manipulations techniques n o t a m m e n t au niveau de la centrifugation et de la constitution du culot plaquettaire ; p a r suite de leur ddfaut d'agr6gation, les plaquettes de thrombasth6niques donneraient des r6sultats f a u s s e m e n t ndgatifs p a r cette technique. La constatation d'une fixation n o r m a l e des anticorps antiHLA sur ces m6mes plaquettes nous parent u n a r g u m e n t p e r m e t t a n t d'~liminer cette hypoth6se. 2° Les locus g6n6tiques codant p o u r les sp6cificit6s P1A et la glycoprot6ine de Glanzmann seraient g6n6tiquement li6s avec une tr6s forte association gam6tique entre P1A2 et g6ne Glanzmann. Ce fait ne peut pas 6tre f o r m e l l e m e n t exclu, d ' a u t a n t plus q u e b e a u c o u p des t h r o m b a s t h 6 n i q u e s observ6s en France ont une origine ethnique commune. Si cette hypoth6se 6tait vraie, on devrait observer les fairs suivants : - les Glanzmann P1A1 n6gatifs devraient r6agir positivement avec un anti-P1 A2 ; - - - les parents et les descendants de Glanzmann devraient tous 6tre P1A2 positif, 6ventuellement h~t6rozygotes P1A1/P1A2. Les enfants p1A2/p1A2 de double hdtdrozygotes devraient ~tre tous atteints. Malheureusement, nous n'avons pas la possibilit~ de tester cette hypoth~se faute d'antis6rum anti-P1A2. 3° La glycoprot6ine qui fait d6faut dens la t h r o m b a s t h d n i e de Glanzmann est le s u b s t r a t de la substance P1A ( c o m m e la substance H p o u r les g~nes ABO). Cette hypoth~se s6duisante a plusieurs i m p l i c a t i o n s : les Glanzmann p h 6 n o t y p i q u e m e n t P1*~ n6gatif p o u r r a i e n t ~tre g 6 n o t y p i q u e m e n t P1A~ positif; - - - - les t h r o m b a s t h d n i q u e s ne devraient 6tre ni PI A1, ni P1A2 positif, mais ne r6agir avec a u c u n anticorps anti-pIA; 1076 MULLER J . Y . et coll. les a n t i - G l a z m a n n q u a l i t a t i f s , s'ils existent, a y a n t un s u b s t r a t a n o r m a l , p o u r r a i e n t 6 v e n t u e l l e m e n t ~tre c a p a b l e s de fixer des q u a n t i t d s v a r i a b l e s de s u b s t a n c e P1A. Nous p o u v o n s g cet dgard o b s e r v e r que, dans n o t r e t r o p c o u r t e sdrie, le s u j e t t h r o m b a s t h d n i q u e (LEG...) qui fixe le plus d ' a n t i c o r p s antiG l a n z m a n n a d g a l e m e n t u n e rdactivit~ i n t e r m d d i a i r e en ce qui c o n c e r n e la f i x a t i o n des a n t i c o r p s anti-P1 a~. --enfin, En d e r n i e r lieu, c e t t e h y p o t h 6 s e p o u r r a i t ~tre p r o u v d e en mont r a n t que les a n t i c o r p s anti-P1A se fixent au n i v e a u des g l y c o p r o t d i n e s f a i s a n t d d f a u t chez les t h r o m b a s t h d n i q u e s . Quelle que soit l ' h y p o t h ~ s e qui se v d r i f i e r a dans l'avenir, r a p p e lons que l ' a p p a r i t i o n d ' u n a n t i c o r p s ,< a n t i - p u b l i c ,, chez les t h r o m b a s t h d n i q u e s c o n s t i t u e u n e des c o m p l i c a t i o n s m a j e u r e s de l ' a f f e c t i o n p u i s q u ' e l l e r e n d les t r a n s f u s i o n s u l t 6 r i e u r e s de p l a q u e t t e s inefficaces. I1 nous p a r a l t i m p o r t a n t de r e c h e r c h e r r d g u l i 6 r e m e n t cette c o m p l i c a t i o n apr~s c h a q u e d p i s o d e t r a n s f u s i o n n e l . Le PIRC nous para~t ~tre un t e s t p a r t i c u l i 6 r e m e n t b i e n a d a p t d ~ cette r e c h e r c h e . RESUME Six t e s t de patients testdes, cas de t h r o m b a s t h d n i e de G l a n z m a n n ont 6td 6tudids p a r le C o o m b s r a d i o - a c t i f s u r p l a q u e t t e s . Le s d r u m de 2 des 6 c o n t e n a i t u n a n t i c o r p s se f i x a n t s u r t o u t e s les p l a q u e t t e s /t l ' e x c e p t i o n des p l a q u e t t e s des p a t i e n t s t h r o m b a s t h d n i q u e s . Cet a n t i c o r p s anti-public, qui r a c c o u r c i t la survie des p l a q u e t t e s t r a n s f u s d e s , n o u s para~t 6tre u n e c o m p l i c a t i o n grave de la t h r o m b a s t h d n i e de G l a n z m a n n . L ' d t u d e des g r o u p e s p l a q u e t t a i r e s de ces p a t i e n t s nous a m o n t r d qu'ils 6taient tous P1A1 ndgatif. Ce fait ne p e u t ~tre a t t r i b u d au h a s a r d et. dvoque t r o i s p o s s i b i l i t d s : -- p r e m i 6 r e m e n t une e x p l i c a t i o n t e c h n i q u e : le d d f a u t d'agrdgat i o n des p l a q u e t t e s G l a n z m a n n les r e n d i m p r o p r e s ~ l'utilis a t i o n dans ce test. Toutefois, des tests effectuds avec des a n t i c o r p s anti-HLA se sont rdvdlds n o r r n a u x ; le gbne PI a2 et le g6ne G l a n z m a n n s e r a i e n t en tr~s f o r t e a s s o c i a t i o n gdndtique, et t o u s l e s t h r o m b a s t h d n i ques s e r a i e n t P1A2 h o m o z y g o t e s ; --deuxibmement, THROMBASTHENIE DE GLANZMANN 1077 - - t r o i s i 6 m e m e n t , le g&ne G l a n z m a n n , q u i c o d e p o u r u n e glycop r o t d i n e d e m e m b r a n e , f o u r n i t a u g6ne P1A la s u b s t a n c e d e b a s e i n d i s p e n s a b l e ~ s o n e x p r e s s i o n . D a n s ce cas, les t h r o m b a s t h d n i q u e s d e v r a i e n t e t r e P1A1 et P1A2 n d g a t i f s . SUMMARY Six c a s e s of G l a n z m a n n ' s t h r o m b a s t h e n i a w e r e s t u d i e d u s i n g a platelet indirect radioactive Coombs (PIRC). I n s e r u m of t w o a m o n g six p a t i e n t s , a n a n t i b o d y w a s f o u n d , w h i c h r e a c t e d posi, t i v e l y w i t h all p l a t e l e t s e x c e p t t h o s e o f t h r o m b a s t h e n i c p a t i e n t s . S u c h - a n t i - p u b l i c ,, a n t i b o d y w h i c h s h o r t e n s t h e life of t r a n s f u s e d p l a t e l e t s is a v e r y s e r i o u s c o m p l i c a t i o n o f G l a n z m a n n ' s t h r o m b a s thenia. A t t e m p t s to d e f i n e t h e P D g r o u p of t h e six G l a n z m a n n p a t i e n t s , w i t h h u m a n a l l o a n t i s e r a r e c o g n i z i n g P1A' a n t i g e n , gave n e g a t i v e r e s u l t s . T h r e e h y p o t h e s i s w e r e d i s c u s s e d : (1) I n t e r f e r e n c e in t h e t e s t of t h e a g g r e g a t i o n d e f e c t o f t h r o m b a s t h e n i c p l a t e l e t s . H o w e v e r a n t i - H L A a n t i b o d i e s w e r e n o r m a l l y f i x e d in t h e P I R C t e s t . (2) P1Az gene a n d G l a n z m a n n g e n e h a v e a s t r o n g g a m e t i c a s s o c i a t i o n a n d all G l a n z m a n n ' s p a t i e n t s a r e P1At n e g a t i v e . (3) G l a n z m a n n g e n e is c o d i n g f o r t h e P1A gene s u b s t r a t e . I n s u c h case, t h r o m b a s t h e n i c p a t i e n t s m i g h t b e g e n e t i c a l l y P1A~ p o s i t i v e a n d p h e n o t y p i c a l l y PI A~ n e g a t i v e . M o r e o v e r t h e y w o u l d a l s o b e P1A2 n e g a t i v e , t h i s c o u l d n o t b e t e s t e d d u e to t h e l a c k o f anti-P1 A2 a n t i s e r u m . Docteur J.Y. MULLER, Centre National de Transfusion Sanguine, 6, rue Alexandre-Cabanel, 75739 PARIS. Les sdrums et les plaquettes des sujets t h r o m b a s t h d n i q u e s nous ont 6t6 envoy6s p a r les Docteurs GAZENGEL,SALEUN,DIEBOLTauxquels nous tenons ~ a d r e s s e r tous nos r e m e r c i e m e n t s p o u r leur aide, REMERCIEMENTS. - - MULLER J.Y. et coll. 1078 ADDENDUM Alors q u e ce t e x t e 6tait d6j~ rddig6, n o u s a v o n s p r i s c o n n a i s s a n c e d ' u n a r t i c l e de KUNICHI et ASTER s u r le m 6 m e s u j e t : ,~ D e l e t i o n of t h e p l a t e l e t - s p e c i f i c allo a n t i g e n P1A1 f r o m p l a t e l e t s in G l a n z m a n n ' s t h r o m b a s t h e n i a ,,. (J. Clin. Invest., 61, 1225, 1978). Ces a u t e u r s o n t f a i t des c o n s t a t a t i o n s tr6s c o m p a r a b l e s attx n 6 t r e s e n ce q u i c o n c e r n e 1'absence de d 6 t e r m i n a n t s P1A1 chez 5 t h r o m b a s t h 6 n i q u e s . BIBLIOGRAPHIE [1] CAEN J.P., CASTALDI P.A., LECLERC J.C., INCEMAN S., LARRIEU M J . , PROBST M. a n d BERNARD J . 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