Reporte 5 Quimiotaxis y Fagocitosis

PRÁCTICA No.
5 QUIMIOTAXIS Y FAGOCITOSIS DE PARTÍCULAS DE LÁTEX

6to “A”
Piñón- García BJ, Rivera-Pacheco EA, Ramírez-Escobedo AA, Plascencia-Díaz CJ, Reyes-
Escobedo D, Miércoles 10:00pm-12:00pm. Agosto-Diciembre 2020.
Laboratorio de Inmunología General, Unidad Académica de Ciencias Químicas, Universidad
Autónoma de Zacatecas.
RESUMEN: Cuando hablamos de quimiotaxis sabemos que nos referimos al movimiento en respuesta de un
estímulo quimiotáctico de tal manera que se busco analizar la capacidad de movimiento de células
sanguíneas (leucocitos) en respuesta a un gradiente observando la migración de células en microscopio en
respuesta de quimiotácticos como lo fueron; suero humano, medio de cultivo bacteriano, zimosan y caseína.
La fagocitosis es uno de los procesos mas importantes de la inmunidad innata donde glóbulos blancos rodean,
ingieren y destruyen sustancias extrañas, para apreciar este fenómeno se realizo una fagocitosis con partículas
de látex, donde se observará de entrada la separación de células fagociticas de sangre periférica previamente
obtenida y asi poder realizar con ayuda de una cámara de Neubauer el conteo de células fagociticas, y apreciar
la función fagocítica de estas células sobre las partículas de látex además se calculó el IF, obteniendo un
resultado de 6.6 células.
PALABRAS CLAVE: Quimiotaxis, movimiento, fagocitosis, conteo.
INTRODUCCIÓN La respuesta inflamatoria es la reacción del

La integridad del sistema inmune es fundamental organismo frente a lesiones físicas o invasión
para la defensa contra organismos infecciosos y de un agente infeccioso ante un estímulo
para la supervivencia de los individuos. antigénico en el sitio de la lesión, que culminan
La naturaleza exacta de cómo los leucocitos con el acopio de células fagocíticas en este
reciben una señal y la traducen en movimiento sitio.
direccional involucra varios eventos; aleatoria, • Proteínas desnaturalizadas: son producto del
quimiocinesis y quimiotaxis , la más destacada es daño tisular o celular.
la quimiotaxis,pues la migración de granulocitos, • Linfoquinas. liberadas por los linfocitos.
macrófagos y linfocitos en tejidos dañados o
inflamados es uno de los eventos principales en ella Al hablar de respuesta inflamatoria entendemos
ya que esta es aumentada y vectorial a lo largo de que es la reacción del organismo frente a lesiones
gradientes de concentración de una sustancia físicas o invasión de un agente infeccioso ante un
química o quimiotaxina. estímulo antigénico en el sitio de la lesión, que
Las sustancias quimiotácticas pueden ser de varios culminan con el acopio de células fagocíticas en el
tipos: lugar afectado.
• Sustancias derivadas del sistema del Los fagocitos son células presentes en la sangre y
complemento: son los factores quimiotácticos otros tejidos animales capaces de captar
endógenos más importantes , el más abundante microorganismos y restos celulares(partículas
es el C5a, fragmento resultante de la activación inútiles o nocivas para el organismo), e
del componente C5. introducirlos en su interior con el fin de
• Sustancias bacterianas: algunas producen FMLP eliminarlos" en un proceso conocido como
con actividad quimioatrayente directa para PMN fagocitosis. Existen muchos tipos de células
y monocitos. capaces de efectuar la fagocitosis los mas
• Leucotrienos. Son productos derivados del ácido conocidos son los neutrófilos, monocitos,
araquidónico, liberado por neutrófilos y otras macrófagos, células dendríticas y mastocitos.
células como respuesta a diversos estímulos.
DIAGRAMA DE FLUJO
PARA QUIMIOTAXIS PARA FAGOCITOCIS PARA AMBOS

Incubar
Extraer 5ml 24hrs a 4ºC En un portaobjeto Realizar la tinción
de sangre en cámara poner 50 μl de Hanks de Wright, se
húmeda. en un lado y en el tornará una película
otro lado solución de verde/morada.
Hanks con látex.
Poner a Agregar 5 μl de:

2,500rpm células obtenidas,
por 10’ control negativo
(PBS), suero humano,
medio de cultivo
bacteriano, Zimosan, Incubar a 37ºC Incubar 6
Recuperar el caseína. durante 20’. minutos.
paquete
globular y
colocar en Observar a
un tubo 10x, 40x y
cónico Agregar 3 gotas de en 100x con
sangre periférica sin aceite de
anticoagulante (tubo inmersión
En portaobjeto
rojo).
colocar 1ml de
Agregar solución de
agarosa al 0.9% en
lisis frío hasta 8ml y
PBS y dejar
mantener en hielo 5’.
solidificar.
Homogenizar 3 veces
durante esta Contar un mínimo
incubación. de 100 células
Resuspender el botón
de células en 0.5ml totales.
Centrifugar con Hank’s, y Incubar a 37ºC

5’a 3000rpm, mantener frío hasta su durante 20’.
decantar uso. Determinar la
sobrenadante. viabilidad celular.
Centrifugar a Se formará el
Lavar con cuidado las 2500rpm durante coagulo y se va a
células, 5’. Y decantar retirar con un
resuspendiendo el sobrenadante. aplicador.
botón celular con el
volumen remanente y
adicionar 5ml de
Hank’s.
RESULTADOS 𝑐𝑒𝑙 𝑁𝑜. 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑥 10 000 𝑥 𝑑𝑖𝑙
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 =
𝑚𝑙 𝑁𝑜. 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑧𝑎𝑑𝑎𝑠
No. De
Pozo 1 Pozo 2 Pozo 3
laminilla
Leucocito N° de células L1= 1
1 Suero PBS 1X
s
N° de células L3= 1
Leucocito
2 Bacterias PBS 1X
s N°de células L4= 1
Leucocito
3 Zimosan PBS 1X
s Media= 1 cels/ml en 0.1
Leucocito
4 Caseína PBS 1X
s
𝑐𝑒𝑙
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 1 𝑥 10 000 𝑥 10
𝑚𝑙
= 100,000 𝑐𝑒𝑙 𝑠 𝑚 𝑙
III. Calcula el IF del siguiente ejemplo, en base a la

siguiente fórmula:
IF= Porcentaje de fagocitos X promedio de partículas

fagocitadas/ No. total de células
Los mejores quimioatrayentes son el Zimosan el
cual es un glucano que se encuentra ligado a la Dentro de un laboratorio clínico se observó por
superficie de los hongos como la levadura, así microscopia de luz macrófagos fagocitando
como el medio de cultivo bacteriano de E. coli, partículas de látex, dentro del recuento se obtuvieron
mientras que la caseína no es un agente los siguientes resultados:
quimioatrayente, por eso en la imagen no se Campo 1: 38 células totales
muestra movimiento aparente de los leucocitos. Campo 1: 26 células no fagocíticas
Campo 1: 12 células fagocíticas
Campo 1: De las células fagocíticas, tenían un
promedio de 8 partículas de látex
38 células totales -----------100%

12 fagocíticas ------------31.5%
% 𝑑𝑒 𝑓𝑎𝑔𝑜𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠 𝑋 𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑓𝑎𝑔𝑜𝑐𝑖𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠

En la figura 3 de Kulkarni et al, 2018 se presenta 𝑁𝑜. 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
Imagen confocal de macrófagos de las vías
respiratorias de niños con asma grave cultivados
con perlas de látex algunas de las perlas externas 31.5 𝑋 8
fueron digeridas con xileno. Las perlas = 𝟔. 𝟔 𝒄é𝒍𝒖𝒍𝒂𝒔
38
internalizadas se conservan, que es lo que se ve
como puntos blancos.
DISCUSIÓN
Analizamos que es de vital importancia utilizar

la punta de pipeta correcta para llenar el
portaobjetos de quimiotaxis. Una punta de
pipeta biselada se encaja en la parte superior del
puerto, mientras que las puntas de pipeta
puntiagudas de uso común se pueden insertar
más profundamente en el puerto de llenado y
pueden aumentar en gran medida la resistencia
al flujo de fluido lo cual puede estropear los
resultados de la práctica. La suspensión se
puede pipetear directamente en un área de
observación seca, pero las burbujas de aire no
deseadas no se pueden expulsar posteriormente.
CONCLUSIÓN
En conclusión, desarrollamos y visualizamos el
mecanismo de quimiotaxis en tiempo real que
permite la visualización de células que navegan
en un gradiente quimiotáctico durante un
período de 6 o más horas. Aquí nos centramos
en los macrófagos, que desempeñan un papel
importante en las enfermedades inflamatorias,
también nos permitió saber identificar las
células de los neutrófilos. Además se calculó el
IF, obteniendo un resultado de 6.6 células.
REFERENCIAS
• Van den Bos Esther et. al. Journal of
Visualized Experiments. Time-lapse Imaging
of Mouse Macrophage Chemotaxis.
Doi:10.3791/60750. 2020.
• Kulkarni Neeta et. al. Macrophage
Phagocyrosis and Allergen Avoidance in
Children With Asthma. 2018. Doi:10.3389
• Rojas -Dotor S. Pérez-Ramos J. Rico-Rosillo
MG. (2006). Quimiotaxis y enfermedad. Rev
Med Inst Mex Seguro Soc 2009, 47(1), 1–6.
• J Harris . Recuperado (14-oct-2021).
Fagocitosis. British society for immunology.pp
1-3.

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5 QUIMIOTAXIS Y FAGOCITOSIS DE PARTÍCULAS DE LÁTEX

PALABRAS CLAVE: Quimiotaxis, movimiento, fagocitosis, conteo.

INTRODUCCIÓN La respuesta inflamatoria es la reacción del

PARA QUIMIOTAXIS PARA FAGOCITOCIS PARA AMBOS

Poner a Agregar 5 μl de:

Centrifugar con Hank’s, y Incubar a 37ºC

III. Calcula el IF del siguiente ejemplo, en base a la

IF= Porcentaje de fagocitos X promedio de partículas

38 células totales -----------100%

% 𝑑𝑒 𝑓𝑎𝑔𝑜𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠 𝑋 𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑓𝑎𝑔𝑜𝑐𝑖𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠

Analizamos que es de vital importancia utilizar

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