RESUMEN

La utilización de marcadores genéticos de tipo microsatélite es una herramienta importante para vigilar la pureza genética en las cepas consanguíneas de ratón. El primer paso para realizar este estudio es disponer de muestras de ADN con calidad y cantidad que permita su análisis mediante métodos de Biología Molecular. En este trabajo se ensayaron dos métodos de extracción de ADN, uno de ellos a partir de tejido de oreja mediante la Técnica HotSHOT y el otro utilizando muestras sanguíneas y basado en una precipitación salina. Se determinó la calidad y la cantidad de ADN obtenido por ambos métodos, mediante electroforesis en gel de agarosa y espectrofotometría de luz ultravioleta respectivamente; también se probó la capacidad del ADN para ser digerido por la enzima de restricción Sal I y de ser amplificado mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Con el método de HotSHOT, se obtienen muestras de ADN, cuya cantidad promedio es de 51,56 [micrón]g, con un índice [A.sub.260]/[A.sub.280] de 1,2 y no son digeribles pe la enzima Sal I. Las muestras de ADN obtenidas por el método de precipitación salina, tienen una cantidad promedio de 13,50 [micrón]g, con un índice [A.sub.260]/[A.sub.280]- de 1,7; son digeribles por la enzima Sal I, lo cual las hace aptas para estudios donde se requiera hacer Southern blot. Dado que por ambos métodos se obtienen muestras amplificables por PCR, se seleccionó el método de HotSHOT, para el análisis de microsatélites, por ser un método rápido y económico. Los resultados obtenidos son fundamentales para iniciar los estudios de control genético a nivel molecular, en las líneas consanguíneas de ratones que se producen actualmente en cuatro bioterios del país.

Palabras clave: PCR, Extracción de ADN, microsatélite, ratón.

ABSTRACT

Microsatellite genetic markers are an important tool for the screening of genetic purity in inbred strains of mice.The first step to carry out this study is to obtain DNA samples of a quality and quantity that make analysis with molecular biology methods possible. In this investigation we assayed two methods of DNA extraction: one of them using samples taken from ear tissue and applying the HotSHOT technique; the second method used blood samples and the saline precipitation. Agarose gel electrophoresis and ultraviolet light spectrophotometry were used to determine the quality and quantity of DNA obtained by both methods. Also we tried the capacity of DNA to be digested for the restriction enzyme Sal I and to be amplified by Polimerase Chain Reaction (PCR). With HotSHOT the average quantity of DNA samples was 51.56 [micro]g, with an [A.sub.260]/[A.sub.280] index of 1.2 and they were not digested by the Sal I enzyme. The DNA obtained from blood with saline precipitation averaged 13.50 [micro]g with an [A.sub.260]/[A.sub.280] index of 1.7 and were digested by the Sal I enzyme, making them suitable to carry out Southern blot studies. Although the samples obtained by both methods were suitable for PCR, the HotSHOT method was chosen for microsatellite analysis by PCR, since it was rapid and economic. The results obtained are...