ES2780948T3

ES2780948T3 - Proteínas de fusión de inmunoglobulinas en hélice enrollada y composiciones de las mismas

Info

Publication number: ES2780948T3
Application number: ES14823623T
Authority: ES
Inventors: Feng Wang; Yong Zhang; Ying Wang; Yan Liu; Peter Schultz
Original assignee: Scripps Research Institute
Current assignee: Scripps Research Institute
Priority date: 2013-07-11
Filing date: 2014-07-11
Publication date: 2020-08-27
Anticipated expiration: 2034-07-11
Also published as: CN105593242A; EP3019531A1; CA2917814A1; US20160159920A1; JP6952221B2; US20200270353A1; HK1224309A1; EP3019531A4; PT3019533T; CA2917814C; EP3019533B1; KR20160055133A; DK3019533T3; US20230365695A1; WO2015006744A1; WO2015006736A3; AU2014286998A1; CN105593242B; KR102361237B1; US11673959B2

Abstract

Una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región no anticuerpo insertada en una región de determinación de complementariedad(CDR) de una primera región de anticuerpo, en donde la región sin anticuerpo comprende un primer agente terapéutico, un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor y el primer péptido de extensor y el segundo péptido de extensor forman una espiral enrollada antiparalela.

Description

DESCRIPCIÓN

Proteínas de fusión de inmunoglobulinas en hélice enrollada y composiciones de las mismas ANTECEDENTES

[0001] Los anticuerpos son proteínas naturales que forma el sistema inmune de los vertebrados en respuesta a sustancias extrañas (antígenos), principalmente para la defensa contra la infección. Durante más de un siglo, se han inducido anticuerpos en animales en condiciones artificiales y se han cosechado para su uso en terapia o diagnóstico de enfermedades, o para investigación biológica. Cada célula productora de anticuerpos individual produce un solo tipo de anticuerpo con una composición químicamente definida, sin embargo, los anticuerpos obtenidos directamente del suero animal en respuesta a la inoculación de antígeno en realidad comprenden un conjunto de moléculas no idénticas (por ejemplo, anticuerpos policlonales) hechos de un conjunto de células productoras de anticuerpos individuales.

[0002] Las construcciones de fusión de anticuerpos se pueden usar para mejorar la administración de medicamentos u otros agentes a células, tejidos y tumores. Las construcciones de fusión de anticuerpos pueden comprender un conector químico para unir un fármaco u otro agente al anticuerpo. Se describen ejemplos de construcciones de fusión de anticuerpos y métodos para producir construcciones de fusión de anticuerpos en las solicitudes de patente de EE.UU. Números 2006/0182751, 2007/0160617 y la patente de EE.UU. Número 7,736.652.

[0003] En el presente documento se describen nuevas proteínas de fusión de inmunoglobulina y métodos para producir tales proteínas de fusión de inmunoglobulina. Además se describen en el presente documento usos de las proteínas de fusión de inmunoglobulina para el tratamiento de diversas enfermedades y afecciones. Los métodos para extender la vida media de un agente terapéutico también se describen aquí.

SUMARIO

[0004] La invención es como se define en las reivindicaciones.

[0005] La invención proporciona una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región no anticuerpo insertada en una región determinante de complementariedad (CDR) de una primera región de anticuerpo, en donde la región de no anticuerpo comprende un primer agente terapéutico, un primer péptido de extensor, y un segundo péptido de extensor y el primer péptido de extensor y el segundo péptido de extensor forman una espiral enrollada antiparalela.

[0006] En un aspecto de la descripción, proporcionada en este documento es una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende unaprimera región de anticuerpo, un primer agente terapéutico, y un primer péptidode conexión; en donde el primer agente terapéutico está unido a la primera región de anticuerpo por el péptido de conexión; y en donde el péptido de conexión no comprende una región que tiene estructura secundaria de cadena beta.

[0007] En un aspecto de la divulgación, el péptido de conexión comprende un primer péptido de extensor. El primer péptido de extensor puede comprender una o más regiones que tienen estructura secundaria alfa helicoidal. En un caso, el primer péptido de extensor no comprende más de 7 aminoácidos consecutivos que se basan o derivan de una secuencia de aminoácidos CDR3 ultra larga de bovino.

[0008] En un aspecto de la divulgación, el péptido de conexión comprende un primer péptido de unión. El primer péptido de enlace puede no comprender una estructura secundaria de cadena alfa helicoidal o beta. El primer péptido de enlace puede comprender de aproximadamente 0 a aproximadamente 50 aminoácidos.

[0009] En un aspecto de la divulgación, el péptido de unión comprende de aproximadamente 0 a aproximadamente 50 aminoácidos. El péptido de conexión puede comprender de aproximadamente 4 a aproximadamente 100 aminoácidos.

[0010] En un aspecto de la divulgación, el primer péptido de conexión está unido a una CDR de la primera región del anticuerpo. En un aspecto de la divulgación, el primer péptido terapéutico reemplaza una o más regiones de la primera región de anticuerpo. En otro aspecto de la divulgación, el primer péptido de conexión reemplaza una o más regiones de la primera región de anticuerpo.

[0011] En un aspecto de la divulgación, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende además un segundo péptido de conexión. En un aspecto de la descripción, el segundo péptido de conexión no comprende una región que tiene estructura secundaria de cadena beta, el segundo péptido de conexión puede comprender un segundo péptido de extensor. El segundo péptido de extensor puede comprender una o más regiones que tienen estructura secundaria alfa helicoidal, el segundo péptido puede comprender un segundo péptido de enlace, el segundo péptido de enlace puede no comprender una estructura secundaria de cadena beta o helicoidal alfa.

[0012] En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende además un segundo agente terapéutico.

[0013] En una realización, la primera región del anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que se basa en o se deriva de una cualquiera de SEQ ID NOs: 19-36 y 271-273. En una realización, la primera región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. En una realización, la primera región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273.

[0014] En una realización, la primera región del anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que se basa en o se deriva de una inmunoglobulina trastuzumab. En una realización, la primera región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de inmunoglobulina de trastuzumab. En una realización, la primera región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de inmunoglobulina de trastuzumab.

[0015] En una realización, la primera región del anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que se basa en o se deriva de una inmunoglobulina palivizumab. En una realización, la primera región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de inmunoglobulina de palivizumab. En una realización, la primera región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/o homóloga a una secuencia de aminoácidos de inmunoglobulina de palivizumab.

[0016] En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende además una segunda región de anticuerpos. En un caso, la primera región de anticuerpo comprende una región de una cadena ligera de anticuerpo y la segunda región de anticuerpo comprende una región de una cadena pesada de anticuerpo. En un caso, la primera región de anticuerpo comprende una región de una cadena pesada de anticuerpo y la segunda región de anticuerpo comprende una región de una cadena ligera de anticuerpo. En un caso, la primera región de anticuerpo comprende una primera región de una cadena ligera de anticuerpo y la segunda región de anticuerpo comprende una segunda región de una cadena ligera de anticuerpo. En un caso, la primera región de anticuerpo comprende una primera región de una cadena pesada de anticuerpo y la segunda región de anticuerpo comprende una segunda región de una cadena pesada de anticuerpo. En una realización, la segunda región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que se basa o se deriva de una cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. En una realización, la segunda región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 19 36 y 271-273. En una realización, la segunda región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273.

[0017] En una realización, la segunda región del anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que se basa en o se deriva de una inmunoglobulina trastuzumab. En una realización, la segunda región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de inmunoglobulina de trastuzumab. En una realización, la segunda región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de inmunoglobulina de trastuzumab. En una realización, la segunda región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que se basa o se deriva de una inmunoglobulina de palivizumab. En una realización, la segunda región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de inmunoglobulina de palivizumab. En una realización, la segunda región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de inmunoglobulina de palivizumab.

[0018] En un aspecto de la divulgación, el primer péptido de conexión comprende una secuencia de aminoácidos que se basa en o se deriva de una cualquiera de SEQ ID NOs: 144-185. En un aspecto de la divulgación, el primer péptido de conexión comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de una de las SEQ ID NO: 144-185. En un aspecto de la divulgación, el primer péptido de conexión comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de una de las SEQ ID NO: 144-185.

[0019] En un aspecto de la divulgación, el segundo péptido de conexión comprende una secuencia de aminoácidos que se basa en o se deriva de una cualquiera de SEQ ID NOs: 144-185. En un aspecto de la divulgación, el segundo péptido de conexión comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-185. En un aspecto de la divulgación, el segundo péptido de conexión comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homologa a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-185.

[0020] En un aspecto de la divulgación, el primer péptido deconexión comprende unsitio de escisión de proteasa. En un aspecto de la divulgación, el segundo péptido de conexión comprende un sitio de escisión de proteasa. En un caso, el primer agente terapéutico comprende una secuencia de aminoácidos configurada para el reconocimiento por una proteasa. En un caso, el segundo agente terapéutico comprende una secuencia de aminoácidos configurada para reconocimiento por una proteasa.

[0021] En una realización, el primer péptido de conexión comprende uno o más péptidos diluyentes y uno o más péptidos enlazadores. En una realización, el primer péptido de conexión comprende uno o más péptidos extensores, uno o más péptidos enlazadores, y uno o más sitios de escisión de proteasas. En una realización, el primer péptido de conexión comprende uno o más péptidos extensores y uno o más sitios de escisión de proteasas. En un aspecto de la divulgación, el primer péptido de conexión comprende uno o más péptidos enlazadores y uno o más sitios de escisión de proteasas.

[0022] En una realización, el segundo péptido de conexión comprende uno o más péptidos diluyentes y uno o más péptidos enlazadores. En una realización, el segundo péptido de conexión comprende uno o más péptidos extensores, uno o más péptidos enlazadores, y uno o más sitios de escisión de proteasas. En una realización, el segundo péptido de conexión comprende uno o más péptidos extensores y uno o más sitios de escisión de proteasas. En un aspecto de la divulgación, el segundo péptido de conexión comprende uno o más péptidos enlazadores y uno o más sitios de escisión de proteasas.

[0023] En una realización, el primer agente terapéutico comprende una secuencia de aminoácidos que se basa en o se deriva de una cualquiera de SEQ ID NOs: 227-267. En una realización, el primer agente terapéutico comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de una de las SEQ ID NO: 227-267. En una realización, el primer agente terapéutico comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de una de las SEQ ID NO: 227-267. En una realización, el primer agente terapéutico comprende de aproximadamente 5 a aproximadamente 1.000 aminoácidos que comprende de aproximadamente 5 a aproximadamente 350 aminoácidosidénticos y/u homólogos a cualquier uno de los SEQ ID NOs: 227-267.

[0024] En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una secuencia de aminoácidos que se basa en o se deriva de una cualquiera de SEQ ID NOs: 68-99. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende de aproximadamente 5 a aproximadamente 3.000 aminoácidos que comprenden de aproximadamente 50 a aproximadamente 700 aminoácidos idénticos y/u homólogos a cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99.

[0025] En otro aspecto, se proporciona aquí una primera construcción genética que comprende ácidos nucleicos que codifican la proteína de fusión de inmunoglobulina de cualquiera de las SEQ ID NOs: 68-99. En un aspecto de la divulgación, una primera construcción genética comprende ácidos nucleicos derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67. En un aspecto de la divulgación, una primera construcción genética comprende una secuencia de ácido nucleico que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67. En un aspecto de la divulgación, una primera construcción genética comprende una secuencia de ácido nucleico que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67.

[0026] En otro aspecto, se proporciona aquí un vector de expresión que comprende una primera construcción genética que comprende ácidos nucleicos que codifican la proteína de fusión de inmunoglobulina de cualquiera de las SEQ ID NOs: 68-99. En un aspecto de la divulgación, se proporciona aquí un primer vector de expresión que comprende una primera construcción genética que comprende ácidos nucleicos derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67. En un aspecto de la divulgación, se proporciona aquí un primer vector de expresión que comprende una primera construcción genética que comprende una secuencia de ácido nucleico que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67. En un aspecto de la divulgación, se proporciona aquí un primer vector de expresión que comprende una primera construcción genética que comprende una secuencia de ácido nucleico que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67. En un caso, se proporciona aquí un huésped de expresión de mamífero que comprende un primer vector de expresión. En un aspecto de la divulgación, se proporciona aquí un método para producir una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende (a) transfectar transitoriamente un primer vector de expresión en un cultivo de células de mamífero, (b) hacer crecer el cultivo de células en un medio de expresión a una temperatura controlada y porcentaje de CO2, (c) y recolección de la proteína de fusión de inmunoglobulina secretada. En un aspecto de la divulgación, el método para producir una proteína de fusión de inmunoglobulina comprende además purificar la proteína de fusión de inmunoglobulina.

[0027] En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar una enfermedad o afección en un sujeto en necesidad del mismo, comprendiendo el método administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos derivada de uno cualquiera de SEQ ID NO 68-99. En otro aspecto, se proporciona en el presente documento un método para tratar una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita, comprendiendo el método administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO 68-99. En otro aspecto, se proporciona en el presente documento un método para tratar una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita, comprendiendo el método administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO 68-99.

[0028] En otro aspecto de la descripción, proporcionada en este documento es una composición farmacéutica que comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina derivada de una cualquiera de SEQ ID NOs: 68-99. En otro aspecto de la divulgación, se proporciona en el presente documento una composición farmacéutica que comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99. En otro aspecto de la divulgación, se proporciona en el presente documento una composición farmacéutica que comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente un 80% idéntica y/u homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99. En un aspecto de la divulgación, la composición farmacéutica comprende además un excipiente farmacéuticamente aceptable.

[0029] En un aspecto de la divulgación, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una secuencia de amino ácido que se basa en o se deriva de una cualquiera de SEQ ID NOs: 122-143. En un aspecto de la divulgación, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de una de las SEQ ID NO: 122-143. En un aspecto de la divulgación, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de una de las SEQ ID NO: 122-143. En un aspecto de la divulgación, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende de aproximadamente 5 a aproximadamente 3.000 aminoácidos que comprenden de aproximadamente 50 a aproximadamente 700 aminoácidos idénticos y/u homólogos a cualquiera de las SEQ ID NO: 122-143.

[0030] En otro aspecto, se proporciona aquí una primera construcción genética que comprende ácidos nucleicos que codifican la proteína de fusión de inmunoglobulina de cualquiera de las SEQ ID NOs: 122-143. En un aspecto de la divulgación, una primera construcción genética comprende ácidos nucleicos derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 100-121. En un aspecto de la divulgación, una primera construcción genética comprende una secuencia de ácido nucleico que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID NO: 100-121. En un aspecto de la divulgación, una primera construcción genética comprende una secuencia de ácido nucleico que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a una secuencia de ácido nucleico de cualquiera deSEQ ID NO: 100-121.

[0031] En otro aspecto, se proporciona aquí un primer vector de expresión que comprende una primera construcción genética que comprende ácidos nucleicos que codifican la proteína de fusión de inmunoglobulina de cualquiera de las SEQ ID NOs: 122-143. En un aspecto de la divulgación, se proporciona aquí un primer vector de expresión que comprende una primera construcción genética que comprende ácidos nucleicos derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 100-121. En un aspecto de la divulgación, se proporciona aquí un primer vector de expresión que comprende una primera construcción genética que comprende una secuencia de ácido nucleico que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID NO: 100-121. En un aspecto de la divulgación, se proporciona aquí un primer vector de expresión que comprende una primera construcción genética que comprende una secuencia de ácido nucleico que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID NO: 100-121. En un aspecto de la divulgación, se proporciona aquí un huésped de expresión de mamífero que comprende un primer vector de expresión. En un aspecto de la divulgación, se proporciona aquí un método para producir una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende (a) transfectar transitoriamente un primer vector de expresión en un cultivo de células de mamífero, (b) hacer crecer el cultivo de células en un medio de expresión a una temperatura controlada y porcentaje de CO2, (c) y recolección de la proteína de fusión de inmunoglobulina secretada. En un aspecto de la divulgación, el método para producir una proteína de fusión de inmunoglobulina comprende además purificar la proteína de fusión de inmunoglobulina.

[0032] En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar una enfermedad o afección en un sujeto en necesidad del mismo, comprendiendo el método administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos derivada de uno cualquiera de SEQ ID NOs: 122-143. En otro aspecto, se proporciona en el presente documento un método para tratar una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita, comprendiendo el método administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 122 143. En otro aspecto, se proporciona en el presente documento un método para tratar una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita, comprendiendo el método administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica y/u homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 122-143.

[0033] En otro aspecto, se proporciona aquí una composición farmacéutica que comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina derivada de cualquiera de las s Eq ID NOs: 122-143. En otro aspecto, se proporciona en el presente documento una composición farmacéutica que comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica y/u homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 122-143. En otro aspecto, se proporciona en el presente documento una composición farmacéutica que comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente un 80% idéntica y/u homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 122 143. En un aspecto de la divulgación, la composición farmacéutica comprende además un excipiente farmacéuticamente aceptable.

[0034] En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para trataruna enfermedad relacionada con neutropenia y/o neutropenia. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar la diabetes y/o una enfermedad relacionada con la diabetes. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar la obesidad y/o una enfermedad relacionada con la obesidad. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar una enfermedad autoinmune y/o una enfermedad autoinmune relacionada. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar la anemia y/o una enfermedad relacionada con la anemia. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar la deficiencia de la hormona del crecimiento y/o una enfermedad relacionada con la hormona del crecimiento. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y/o una enfermedad relacionada con la EPOC. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar el dolor. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar el síndrome del intestino irritable (SII) y/o una enfermedad relacionada con el SII. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar la enfermedad de Crohn y/o una enfermedad relacionada con la enfermedad de Crohn. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar un trastorno metabólico y/o una enfermedad resultante de dicho trastorno metabólico. En una realización, el trastorno metabólico incluye lipodistrofia, diabetes e hipertrigliceridemia. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar el síndrome del intestino delgado y/o una enfermedad relacionada con el síndrome del intestino delgado. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar a un paciente con insuficiencia cardíaca. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar la fibrosis y/o una enfermedad relacionada con la fibrosis.

[0035] En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar una enfermedad relacionada con neutropenia y/o neutropenia. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar la diabetes y/o una enfermedad relacionada con la diabetes. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar la obesidad y/o una enfermedad relacionada con la obesidad. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar una enfermedad autoinmune y/o una enfermedad autoinmune relacionada. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar la anemia y/o una enfermedad relacionada con la anemia. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar la deficiencia de la hormona del crecimiento y/o una enfermedad relacionada con la hormona del crecimiento. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y/o una enfermedad relacionada con la EPOC. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar el dolor. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar el síndrome del intestino irritable (SII) y/o una enfermedad relacionada con el SII. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar la enfermedad de Crohn y/o una enfermedad relacionada con la enfermedad de Crohn. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar un trastorno metabólico y/o una enfermedad resultante de dicho trastorno metabólico. En una realización, el trastorno metabólico incluye lipodistrofia, diabetes e hipertrigliceridemia. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar el síndrome del intestino delgado y/o una enfermedad relacionada con el síndrome del intestino delgado. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar a un paciente con insuficiencia cardíaca. En una realización, la proteína de fusión de inmunoglobulina está configurada para tratar la fibrosis y/o una enfermedad relacionada con la fibrosis. En una realización, el primer péptido terapéutico está configurado para tratar la hipertensión arterial pulmonar, la lesión inducida por el ventilador del rechazo de pulmón inmaduro y/o el trasplante de pulmón.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

[0036] El resumen anterior, así como la siguiente descripción detallada de la divulgación, se entenderá mejor cuando se lea en conjunción con las figuras adjuntas. Con el fin de ilustrar la divulgación, se muestran en las figuras realizaciones que se prefieren actualmente. Sin embargo, debe entenderse que la divulgación no se limita a los arreglos, ejemplos e instrumentos precisos mostrados. Se enfatiza que, según la práctica común, las diversas características de los dibujos no están a escala. Por el contrario, las dimensiones de las diversas características se expanden o reducen arbitrariamente para mayor claridad.

[0037] En algunas figuras, trastuzumab se conoce como Herceptin. Debe entenderse que trastuzumab y Herceptin pueden usarse indistintamente a lo largo de esta descripción. En algunas figuras, se describe una proteína de fusión de inmunoglobulina en el siguiente orden: anticuerpo, espiral o directo, agente terapéutico y región de anticuerpo a la que está unido el agente terapéutico; por ejemplo, espiral de trastuzumab hEPO (CDRH3). La proteína de fusión de inmunoglobulina se puede describir de cualquier otra manera, por ejemplo, trastuzumab-CDRH3-espiral-hEPO es la misma fusión que espiral de trastuzumab hEPO (CDRH3). En algunos casos, un anticuerpo se abrevia en las figuras, por ejemplo, bAb y BLVH12 son abreviaturas para un anticuerpo bovino. PBS es una abreviatura de solución salina tamponada con fosfato. En algunos casos, hAb es una abreviatura de Herceptin o anticuerpo contra trastuzumab. En algunos casos, H2 es una abreviatura de CDRH2, H3 es una abreviatura de CDRH3 y L3 es una abreviatura de CDRL3. En algunos casos, CDRH3 y CDR3H indican una región determinante complementaria 3 de una cadena pesada, CDRH2 y CDR2H indican una región determinante complementaria 2 de una cadena pesada, y CDRL3 y CDR3L indican una región determinante complementaria 3 de una cadena ligera.

[0038] En el presente documento se proporcionan proteínas de fusión de inmunoglobulina que comprende el términoespiral, en donde en algunos casos, estas proteínas de fusión de inmunoglobulina que comprende al menos un péptido de extensorque comprende aminoácidos que tienen unaestructura alfa helicoidal secundaria. En el presente documento se proporcionan proteínas de fusión de inmunoglobulina que comprenden el término directo, en donde, en algunos casos, estas proteínas de fusión de inmunoglobulina no comprenden un péptido de extensor.

[0039] Se incluyen en los dibujos las siguientes figuras.

FIG. 1 representa un esquema de varias proteínas de fusión de inmunoglobulina con un péptido de extensor que comprende una estructura de hélice alfa (p. ej., espiral).

FIG. 2A-2G representan esquemas de varias regiones sin anticuerpos.

FIG. 3 representa un esquema de varias proteínas de fusión de inmunoglobulina con péptidos extensores. FIG. 4 representa un gel SDS-PAGE de IgG de espiral bovina, IgG de bGCSF de espiral bovina, IgG de trastuzumab y IgG de espiral de trastuzumab bGCSF.

FIG. 5 representa un esquema de varias proteínas de fusión de inmunoglobulina con un péptido terapéutico directamente insertado en una región de anticuerpo.

FIG. 6 representa un gráfico de la actividad in vitro de IgG de espiral bovina, IgG de bGCSF de espiral bovina, IgG de trastuzumab e IgG de bGCSF de espiral de trastuzumab en células NFS-60 de ratón.

FIG. 7 representa un gráfico de la afinidad de unión de una IgG bGCSF de espiral de trastuzumab a un receptor Her2.

FIG. 8 representa una transferencia Western de Espiral de BLV1H12betatrofina IgG, con y sin DTT.

FIG. 9 representa un esquema de varias proteínas de fusión de inmunoglobulina sin péptidos extensores. FIG. 10 representa una SDS-PAGE de proteínas de fusión de trastuzumab directoo bGCSF, con y sin DTT. FIG. 11 representa un gráfico de la actividad in vitro de la proteína de fusión bGCSF directa de trastuzumab y bGCSF en células NFS-60 de ratón en proliferación.

FIG. 12 representa un gel SDS-PAGE de proteína de fusión de espiral de trastuzumab-exendina-4 (CDRH3) y proteína de fusión de espiral de trastuzumab-exendina-4 escindida con Factor Xa para generar exeuzina-4 RN de espiral de trastuzumab.

FIG. 13 representa un cromatógrafo de una espectrometría de masas por ionización por electropulverización (ESI-MS) de proteína de fusión de espiral de trastuzumab-exendina-4 (CDRH3) tratada con péptido N-glucosidasa y DTT.

FIG. 14A-14B representa un cromatógrafo de un ESI-MS de proteína de fusión de espiral de trastuzumabexendina-4 RN (CDRH3) tratada con péptido N-glucosidasa y DTT, (A) fragmento de extremo N, (B) fragmento de extremo C.

FIG. 15 representa un gráfico de las actividades in vitro de exendina-4 (Ex-4), trastuzumab, espiral de trastuzumab-exendina-4 (CDRH3) y exendina-4 (CDRH3) de espiral de trastuzumab en células HEK 293 que sobreexpresanreceptor GLP-1R y reportero de elemento sensible a cAMP (CRE)-luciferasa (Luc). FIG. 16 representa un gráfico de las actividades in vitro de glucagón, Ex-4, trastuzumab, espiral de trastuzumab-exendina-4 (CDRH3) y espiral de trastuzumab-exendina-4 (CDRH3) RN en células HEK 293 que sobreexpresan el receptor de glucagón (GCGR) y Reportero de CRE-Luc.

FIG. 17A-17B representa un gráfico de la farmacocinética de la IgG de espiral de trastuzumab-exendina-4 (CDRH3) con (A) inyección intravenosa y (B) inyección subcutánea en ratones.

FIG. 18A-18R representa la farmacodinámica de la IgG de espiral de trastuzumab-exendina-4 (CDRH3) en ratones en diferentes momentos.

FIG. 19A-19N representa la farmacodinámica de diversas concentraciones de IgG de espiral de trastuzumab-exendina-4 (CDRH3) en ratones en diferentes momentos.

FIG. 20 representa un gel SDS-PAGE de IgG Moka de espiral de trastuzumab y IgG de espiral de trastuzumab Vm24, con y sin DTT.

FIG. 21 representa un gráfico de las actividades in vitro de IgG Moka de espiral de trastuzumab y IgG de espiral de trastuzumab Vm24 sobre la activación de células T en células mononucleadas de sangre periférica humana (PBMC).

FIG. 22 representa una SDS-PAGE de espiral de trastuzumab hGCSF (CDRH2) y espiral de trastuzumabhGCSF (CDRL3), con y sin DTT.

FIG. 23A-23B representa una ESI-MS de (A) espiral de trastuzumab hGCSF (CDRH2) tratada con péptido N-glucosidasa y DTT, y (B) espiral de trastuzumab hGCSF (CDRL3) tratada con péptido N-glucosidasa y DTT.

FIG. 24 representa un histograma de hGCSF de espiral de trastuzumab (CDRH2) y hGCSF de espiral de trastuzumab (CDRL3) al receptor HER2.

FIG. 25 representa un gráfico de la actividad in vitro de hGCSF de espirales de trastuzumab (CDRH2) y hGCSF de espirales de trastuzumab (CDRL3) en células NFS-60 de ratón en proliferación.

FIG. 26 muestra un gel SDS-PAGE de espiral de trastuzumab hEPO (CDRH3), con y sin DTT.

FIG. 27 representa una ESI-MS de IgG de espiral de trastuzumab hEPO (CDRH3) tratada con péptido N-glucosidasa y DTT.

FIG. 28 representa un histograma de la unión hEPO de espiral de trastuzumab (CDRH3) al receptor HER2.

FIG. 29 representa un gráfico de la actividad in vitro de la IgG de hEPO (CDRH3) de espiral de trastuzumab en células TF-1 humanas en proliferación.

FIG. 30 representa un gel ^sD^s-PAGE de IgG de doble fusión de espiral de trastuzumab hEPO (CDRH3)-espiral de trastuzumab hGCSF (CDRL3), con y sin DTT.

FIG. 31A-31B representa una ESI-MS de las cadenas ligera (A) y pesada (B) de la fusión dual de espiral de trastuzumab hEPO (CDRH3)-espiral de trastuzumab hGCSF (CDRl3) IgG tratada con péptido N-glucosidasa y DTT.

FIG. 32 representa un histograma de fusión dual de espiral de trastuzumab hEPO (CDRH3)-espiral de trastuzumab hGCSF (CDRL3) que se une al receptor HER2.

FIG. 33 representa un gráfico de la actividad in vitro de IgG de doble fusión espiral de trastuzumab hEPO (CDRH3)-espiral de trastuzumab hGCSF (CDRL3) en células proliferantes TF-1 humanas.

FIG. 34 representa un gráfico de la actividad in vitro de IgG de doble fusión espiral de trastuzumab hEPO (CDRH3)-espiral de trastuzumab hGCSF (CDRL3) en células proliferativas de ratón NFS-60.

FIG. 35 representa un gel SDS-PAGE de IgG de espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3) después de la purificación, IgG de trastuzumab de fusión directa hGH (CDRH2) y IgGs de espiral de hGH de trastuzumab (CDRH2), con y sin DTT.

FIG. 36A-36B representa la farmacocinética de la IgG de hGH de espiral de trastuzumab (CDRH3) en ratas mediante (A) inyección intravenosa e (B) inyección subcutánea.

FIG. 37 representa un gráfico que indica el porcentaje de cambio de peso corporal en ratas inyectadas con un vehículo, genotropina, trastuzumab e IgG de hGH (CDRH3) de la espiral de trastuzumab (denotado en la figura como Ab-GH).

FIG. 38 representa un gel SDS-PAGE de espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH2), espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH3) y espiral de trastuzumab hLeptina (CDRL3), con y sin DTT.

FIG. 39A-39A representa gráficos de la actividad in vitro de (A) hLeptin, espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH2), espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH3) y (B) hLeptin, espiral de trastuzumab hLeptina (CDRL3) en la activación del receptor de leptina humana (LepR).

FIG. 40A-40C representa histogramas de unión de células SKBR3 con trastuzumab de tipo silvestre (wt), espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH2) y espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH3).

FIG. 41 representa un gel SDS-PAGE de espiral de trastuzumab elafina (CDRH3), con y sin DTT.

FIG. 42A-42B representa gráficos de la actividad de inhibición in vitro de espiral de trastuzumab elafina (CDRH3).

FIG. 43 representa un gel SDS-PAGE de espiral de trastuzumab GLP2 (CDRH3), con y sin DTT.

FIG. 44 representa un gel SDS-PAGE de relaxina de espirales de trastuzumab (péptido c de insulina) (CDRH3), con y sin DTT.

FIG. 45 representa un gel SDS-PAGE de relaxina de espiral de trastuzumab (CDRH3) cotransfectado con la enzima de escisión prohormona convertasa 2 (PC2), con y sin DTT.

FIG. 46 representa un gel de SDS-PAGE de relaxina de espiral de trastuzumab (XTEN35) con 6x HIS (CDRH3) IgG cotransfectada con PC2, con y sin DTT.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

[0040] La invención es como se define en las reivindicaciones.

[0041] En el presente documento se describen proteínas de fusión de inmunoglobulina y métodos para producir tales proteínas de fusión de inmunoglobulina. En el presente documento se describen proteínas de fusión de inmunoglobulina que comprenden una región de anticuerpo y una región sin anticuerpo, en donde la región sin anticuerpo comprende: (a) un primer péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La estructura secundaria puede ser una hélice alfa. En algunas realizaciones, la hélice alfa está configurada para formar una espiral en bobina. Según la invención, el primer péptido de extensor y el segundo péptido de extensor forman una espiral enrollada antiparalela. El agente terapéutico puede ser un péptido terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender además un conector. El enlazador puede ser un enlazador peptídico. El enlazador peptídico puede no tener una estructura secundaria regular. La región no anticuerpo puede comprender además un sitio de escisión proteolítica. En algunas realizaciones, la región no anticuerpo reemplaza al menos una porción de la región anticuerpo. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor y el segundo péptido de extensor conectan el agente terapéutico con la región del anticuerpo. En algunas realizaciones, la región no anticuerpo está conectada a una CDR de un anticuerpo. El CDR puede ser CDR1, CDR2 o CDR3. El CDR puede ser parte de una cadena ligera o una cadena pesada. En una realización ejemplar, el primer péptido de extensor es un péptido de conexión o una porción de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, el enlazador peptídico es un péptido de conexión o una porción de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, el sitio de escisión de proteasa es un péptido de conexión o una porción de un péptido de conexión.

[0042] Se describen además en el presente documento proteínas de fusión de inmunoglobulina que comprenden una región de anticuerpo y una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende: (a) un primer péptido de extensor, en donde el primer péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa o estructura secundaria de la espiral en bobina, y (b) un agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender además un conector. El enlazador puede ser un enlazador peptídico. El enlazador peptídico puede no tener una estructura secundaria regular. La región de fusión del extensor puede comprender además un sitio de escisión proteolítica. En algunas realizaciones, la región de fusión del extensor comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela y la región de fusión del extensor reemplaza al menos una porción de la región del anticuerpo. En algunas realizaciones, el primer y el segundo péptido de extensor comprenden una estructura secundaria alfa helicoidal y conectan el agente terapéutico a la región del anticuerpo. En algunos casos, la región de fusión del extensor está conectada a una CDR de un anticuerpo. El CDR puede ser CDR1, CDR2 o CDR3. El CDR puede ser parte de una cadena ligera o una cadena pesada. En una realización ejemplar, el primer péptido de extensor comprende una estructura secundaria alfa helicoidal y es un péptido de conexión o una porción de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de fusión de extensor que comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y un enlazador peptídico que es un péptido de conexión o una porción de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de fusión de extensor que comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y un sitio de escisión de proteasa que es un péptido de conexión o una porción de un péptido de conexión.

[0043] Se describen además en el presente documento proteínas de fusión de inmunoglobulina que comprenden una región de anticuerpo unido directamente a una región de no anticuerpo, en donde la región de no anticuerpo comprende un agente terapéutico. Estas proteínas de fusión de inmunoglobulina, en algunos casos, pueden denominarse proteínas de fusión de inmunoglobulina directa. En algunos casos, el agente terapéutico es un péptido terapéutico. En algunos aspectos, el agente terapéutico está unido a la región del anticuerpo sin el uso de un péptido que comprende una estructura secundaria. En algunos aspectos, el agente terapéutico de la fusión directa de inmunoglobulina reemplaza al menos una porción de la región de anticuerpo a la que está unido el agente terapéutico. En algunos aspectos, el péptido terapéutico de la fusión directa de inmunoglobulina está unido a la región del anticuerpo por uno o más enlazadores que no comprenden una estructura secundaria regular (por ejemplo, sin hélices alfa o cadenas beta). En algunos aspectos, el conector de la fusión directa de inmunoglobulina es un enlazador peptídico. En algunos aspectos, la proteína de fusión de inmunoglobulina directa comprende además uno o más sitios de escisión de proteasa. En algunos aspectos, el agente terapéutico de la fusión directa de inmunoglobulina está unido a una CDR de un anticuerpo. El CDR puede ser CDR1, CDR2 o CDR3. El CDR puede ser parte de una cadena ligera o una cadena pesada. En algunos aspectos, el enlazador peptídico de la fusión directa de inmunoglobulina es un péptido de conexión o una porción de un péptido de conexión. En algunos aspectos, el sitio de escisión de proteasa de la fusión directa de inmunoglobulina es un péptido de conexión o una porción de un péptido de conexión.

[0044] También se describe en el presente documento proteínas de fusión de inmunoglobulina que comprenden una región de anticuerpo unido directamente a una región de fusión extensor, en donde la región de fusión extensor comprende un agente terapéutico. Estas proteínas de fusión de inmunoglobulina, en algunos casos, pueden denominarse proteínas de fusión de inmunoglobulina directa. En algunos casos, el agente terapéutico es un péptido terapéutico. En algunos aspectos, el agente terapéutico de la fusión directa de inmunoglobulina se une a la región del anticuerpo sin el uso de un péptido que comprende una estructura secundaria. En algunos aspectos, el agente terapéutico de la fusión directa de inmunoglobulina reemplaza al menos una porción de la región de anticuerpo a la que está unido el agente terapéutico. En algunos aspectos, el agente terapéutico de la fusión directa de inmunoglobulina se une a la región del anticuerpo mediante uno o más enlazadores que no comprenden una estructura secundaria regular (por ejemplo, sin hélices alfa o cadenas beta). En algunos aspectos, el conector de la fusión directa de inmunoglobulina es un enlazador peptídico. En algunos aspectos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende además uno o más sitios de escisión de proteasa. En algunos aspectos, el agente terapéuticode la fusión directa de inmunoglobulina se une a una CDR de un anticuerpo. El CDR puede ser CDR1, CDR2 o CDR3. El CDR puede ser parte de una cadena ligera o una cadena pesada. En algunos aspectos, el enlazador peptídico de la fusión directa de inmunoglobulina es un péptido de conexión o una porción de un péptido de conexión. En algunos aspectos, el sitio de escisión de proteasa de la fusión directa de inmunoglobulina es un péptido de conexión o una porción de un péptido de conexión.

[0045] Se describen además en el presente documento proteínas de fusión de inmunoglobulina que comprenden una primera región de anticuerpo, un primer agente terapéutico, y un primer péptido de conexión; en donde el primer agente terapéutico está unido a la primera región de anticuerpo por el péptido de conexión; y en donde el péptido de conexión no comprende una región que tiene estructura secundaria de cadena beta. En una realización ejemplar, el primer agente terapéutico y el primer péptido de conexión son componentes de una región sin anticuerpo, y la región sin anticuerpo comprende además un segundo péptido de conexión, y lospéptidos de conexión primero y segundo comprenden cada uno un péptido de extensor que se forma una espiral enrollada antiparalela. En una realización ejemplar, el primer agente terapéutico y el primer péptido de conexión son componentes de una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende además un segundo péptido de conexión, y los péptidos de conexión primero y segundo comprenden cada uno un péptido de extensor que forma un anti-espiral en bobina paralela. En algunas realizaciones, el péptido de conexión comprende uno o más péptidos extensores que comprenden una estructura secundaria alfa helicoidal para formar una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor. En algunas realizaciones, el péptido de conexión que comprende uno o más péptidos extensores comprende uno o más péptidos de unión. En algunas realizaciones, el péptido de conexión que comprende uno o más péptidos extensores comprende además uno o más sitios de escisión de proteasa. En algunas realizaciones, el primer péptido de conexión comprende uno o más péptidos extensores que comprenden una estructura secundaria alfa helicoidal para formar una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor y uno o más péptidos enlazadores. En algunas realizaciones, el primer péptido de conexión comprende uno o más péptidos extensores que comprenden una estructura secundaria alfa helicoidal para formar una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor, uno o más péptidos enlazadores y uno o más sitios de escisión de proteasas. En algunas realizaciones, el primer péptido de conexión comprende uno o más péptidos extensores que comprenden una estructura secundaria alfa helicoidal para formar una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor, y uno o más sitios de escisión de proteasa. En algunas realizaciones, el primer péptido de conexión comprende un primer péptido de extensor que comprende una estructura secundaria alfa helicoidal para formar una espiral enrollada antiparalela con un segundo péptido de extensor, uno o más péptidos enlazadores y uno o más sitios de escisión de proteasa.

[0046] Se describen además en el presente documento proteínas de fusión de inmunoglobulina que comprenden (a) una región no anticuerpo; y (b) una región de anticuerpo, en donde la región sin anticuerpo reemplaza al menos una porción de un anticuerpo en donde se basa o se deriva la región de anticuerpo. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una región determinante de complementariedad. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de un dominio variable. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de un dominio constante. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una cadena pesada. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una cadena ligera. La región no anticuerpo puede comprender un péptido terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión.

[0047] Se describen además en el presente documento proteínas de fusión de inmunoglobulina que comprende (a) una región de fusión extensor; y (b) una región de anticuerpo, en donde la región de fusión del extensor reemplaza al menos una porción de un anticuerpo en dondese basa o se deriva la región de anticuerpo. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos una porción de una región determinante de complementariedad. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos una porción de un dominio variable. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos una porción de un dominio constante. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos una porción de una cadena pesada. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos una porción de una cadena ligera. La fusión del extensor puede comprender un péptido terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión.

[0048] Se describen además en el presente documento proteínas de fusión dual que comprenden dos o más agentes terapéuticos unidos a una o más regiones de anticuerpos o fragmentos de las mismas. Al menos un agente terapéutico puede insertarse o unirse al anticuerpo o fragmento del mismo. Se pueden insertar o unir dos o más agentes terapéuticos en el anticuerpo o fragmento del mismo. Los agentes terapéuticos pueden reemplazar al menos una porción del anticuerpo o fragmento del mismo. En algunos casos, una proteína de fusión dual comprende dos agentes terapéuticos unidos a una cadena pesada. En algunos casos, una proteína de fusión dual comprende dos agentes terapéuticos unidos a una cadena ligera. En algunos casos, una proteína de fusión dual comprende un agente terapéutico unido a una cadena pesada y otro agente terapéutico unido a una cadena ligera.

[0049] En algunas realizaciones, la región de no anticuerpo es una región de fusión de extensor y comprende un primer extensor de péptido y segundo péptido de extensor que forman una espiral en bobina anti-paralela. En algunos casos, la región de fusión del extensor comprende (a) un primer péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria, y (b) un agente terapéutico. La estructura secundaria puede ser una hélice alfa.

La estructura secundaria puede configurarse para formar una espiral en bobina. El agente terapéutico puede ser un péptido terapéutico. En algunas realizaciones, la región no anticuerpo que comprende el primer y el segundo péptido de extensor comprende además un conector. El enlazador puede no tener una estructura secundaria regular. En algunas realizaciones, la región no anticuerpo que comprende el primer y el segundo péptido de extensor comprende además un sitio de escisión de proteasa.

[0050] En algunas realizaciones, una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende un primer péptido de extensor que forma una espiral en bobina con un segundo péptido de extensor se conoce como una proteína de fusión en espiral de la espiral de inmunoglobulina. En algunos aspectos, una proteína de fusión de inmunoglobulina que no comprende un péptido de extensor que tiene estructura secundaria se denomina como una proteína de fusión de inmunoglobulina directa.

[0051] El péptido de extensor puede estar basado en o derivado de una CDR3ultralarga. El péptido de extensor puede comprender 7 o menos aminoácidos de una secuencia de CDR3 ultra larga. Alternativamente, o adicionalmente, el péptido de extensor no comprende una secuencia de aminoácidos basada o derivada de una CDR3 ultra larga. El péptido de extensor puede comprender una o más estructuras secundarias. La una o más estructuras secundarias pueden ser una hélice alfa.

[0052] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina de ejemplo que comprenden dos péptidos extensores comprenden una estructura espiral de bobina (por ejemplo, cada péptido de extensor tiene una estructura secundaria de hélice alfa) se representan en la FIG. 1. Como se muestra en la FIG. 1, una región de anticuerpo (110) que comprende dos cadenas pesadas de inmunoglobulina (115, 120) y dos cadenas ligeras de inmunoglobulina (125, 130) está unida a una región sin anticuerpo (135) que comprende dos péptidos extensores (140, 145) y un agente terapéutico (150) para producir proteínas de fusión de inmunoglobulina (160, 170, 180). Como se muestra en la FIG. 1, la proteína de fusión de inmunoglobulina (160) comprende una región sin anticuerpo unida a una de las cadenas pesadas de inmunoglobulina de la región de anticuerpo. Como se muestra en la FIG. 1, la proteína de fusión de inmunoglobulina (170) comprende una región sin anticuerpo unida a una de las cadenas ligeras de inmunoglobulina de la región de anticuerpo. También se muestra en la FIG. 1, la proteína de fusión de inmunoglobulina (180) comprende dos regiones sin anticuerpo unidas a dos cadenas de inmunoglobulina de la región de anticuerpo. Los dos péptidos extensores pueden formar una espiral en bobina. De acuerdo con la invención, los dos péptidos extensores forman una espiral enrollada antiparalela.

[0053] También se describen proteínas de fusión de inmunoglobulina directa en las que la región de fusión que no es anticuerpo/región extensora (por ejemplo, agente terapéutico) se inserta directamente en el anticuerpo sin la ayuda de un péptido de extensor que tiene una estructura secundaria como se representa en la FIG. 5. Como se muestra en la FIG. 5, una región de anticuerpo (1010) que comprende dos cadenas pesadas de inmunoglobulina (1015, 1020) y dos cadenas ligeras de inmunoglobulina (1025, 1030) se une a una región sin anticuerpo (1050) para producir proteínas de fusión de inmunoglobulina (1060, 1070, 1080) Como se muestra en la FIG. 5, la proteína de fusión de inmunoglobulina (1060) comprende una región sin anticuerpo unida a una de las cadenas pesadas de inmunoglobulina de la región de anticuerpo. Como se muestra en la FIG. 5, la proteína de fusión de inmunoglobulina (1070) comprende una región sin anticuerpo unida a una de las cadenas ligeras de inmunoglobulina de la región de anticuerpo. También se muestra en la FIG. 5, la proteína de fusión de inmunoglobulina (1080) comprende dos regiones sin anticuerpo unidas a dos cadenas de inmunoglobulina de la región de anticuerpo.

[0054] Otros ejemplos de proteínas de fusión de inmunoglobulina de espiralenrollada se representan en la FIG. 3. La fórmula IA de la FIG. 3 representa una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo (A1) unida a una región de fusión de extensor que comprende un péptido de extensor(E1) unido a un agente terapéutico (T1).

[0055] La fórmula IIA de la FIG. 3 representa una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo (A1) unida a una región de fusión de extensor que comprende dos péptidos de extensor (E1 y E2) unidos a un agente terapéutico (T1).

[0056] La fórmula IIIA de la FIG. 3 representa una proteína de fusión dual de inmunoglobulina que comprende dos regiones de anticuerpos (A1 y A2) unidas entre sí. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera región de anticuerpo (A1) unida a una región de fusión de primer extensor que comprende dos péptidos extensor (E1 y E2) unidos a un primer agente terapéutico (T1); y (b) una segunda región de anticuerpo (A2) unida a una segunda región de fusión de extensor que comprende dos péptidos de extensor (E3 y E4) unidos a un segundo agente terapéutico (T2).

[0057] La fórmula IVA de la FIG. 3 representa una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo (A1) unida a una región de fusión de extensor que comprende un conector (L1) unido a un agente terapéutico (T1), con el conector y el agente terapéutico ubicados entre dos péptidos extensores (E1 y E2).

[0058] La fórmula VA de la FIG. 3 representa una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo (A1) unida a una región de fusión de extensor que comprende un sitio de escisión proteolítica (P1) unida a un agente terapéutico (T1), con el sitio de escisión proteolítica y el agente terapéutico ubicados entre dos péptidos extensores (E1 y E2). Fórmula VB de la FIG. 3 representa la versión recortada de Fórmula VA, en donde el sitio de escisión proteolítica es escindido por una proteasa, que da como resultado la liberación de un extremo del agente terapéutico. Una proteína de fusión de inmunoglobulina que puede escindirse para liberar el término amino de un agente terapéutico se denomina RN, para el extremo N liberado. Por ejemplo, espiral de hGH de trastuzumab RN indica que tras la escisión proteolítica, se libera el extremo extremo N de hGH.

[0059] La fórmula VIA de la FIG. 3 representa una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo (A1) unida a una región de fusión de extensor que comprende un agente terapéutico (T1) unido a un conector (L1) y un sitio de escisión proteolítica (P1), que el agente terapéutico, conector y sitio de escisión proteolítica ubicado entre dos péptidos extensores (E1 y E2). Fórmula VIB de la FIG. 3 representa la versión recortada de Fórmula VIA, en donde el sitio de escisión proteolítica es escindido por una proteasa, lo que da como resultado la liberación de un extremo del agente terapéutico. Una proteína de fusión de inmunoglobulina que puede escindirse para liberar el terminal carboxilo de un agente terapéutico se denomina RC, para el terminal C liberado. Por ejemplo, espiral de hGH de trastuzumab RC indica que tras la escisión proteolítica, se libera el extremo extremo C de hGH.

[0060] La fórmula VIIA de la FIG. 3 representa una proteína de fusión dual de inmunoglobulina que comprende dos regiones de anticuerpos (A1 y A2). La primera región de anticuerpo (A1) está unida a una primera región de fusión de extensor que comprende un agente terapéutico (T1) con dos conectores (L1y L2) en cada extremo, con el agente terapéutico y los conectores ubicados entre dos péptidos extensor (E1 y E2). La segunda región de anticuerpos (A2) está unida a una segunda región de fusión de extensor que comprende un agente terapéutico (T2) unido a un sitio de escisión proteolítica (P1). El agente terapéutico y el sitio de escisión proteolítica en la región de fusión del segundo extensor están flanqueados por dos conectores (L3 y L4). El agente terapéutico, el sitio de escisión proteolítica y los dos enlazadores de la segunda región extensora están flanqueados por dos péptidos extensores (E1 y E2).

[0061] Fórmula VIIIA de la FIG. 3 representa una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo (A1) unida a una región de fusión de extensor que comprende dos péptidos de extensor (E1 y E2), dos conectores (L1y L2), dos sitios de escisión proteolítica (P1y P2) y un agente terapéutico (T1). Fórmula VIIIB de la FIG.

3 representa la versión recortada de la Fórmula VIIIA, en donde los sitios de escisión proteolítica ubicados en los extremos N y C del agente terapéutico son escindidos por una proteasa, que da como resultado la liberación del agente terapéutico de la proteína de fusión de inmunoglobulina.

[0062] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina adicionales sin péptidos extensores (proteínas de fusión de inmunoglobulina directa), y no ilustrativo de las proteínas de fusión de inmunoglobulina reivindicadas que comprenden péptidos extensores, se representan en la FIG. 9. Fórmula IXA de la FIG. 9 representa una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo (A1) unida a una región sin anticuerpo que comprende un agente terapéutico (T1).

[0063] La fórmula XA de la FIG. 9 representa una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo (A1) unida a una región no anticuerpo que comprende un conector (L1) unido a un agente terapéutico (T1). Fórmula XIA de la FIG. 9 representa una proteína de fusión dual de inmunoglobulina que comprende dos regiones de anticuerpos (A1 y A2) unidas entre sí. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera región de anticuerpo (A1) unida a una primera región sin anticuerpo que comprende un primer agente terapéutico (T1); y (b) una segunda región de anticuerpo (A2) unida a una segunda región sin anticuerpo que comprende un segundo agente terapéutico (T2).

[0064] La fórmula XIIA de la FIG. 9 representa una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo (A1) unida a una región sin anticuerpo que comprende un conector (L1), un sitio de escisión proteolítica (P1) y un agente terapéutico (T1), en dondeel sitio de escisión proteolítica está ubicado entre el enlazador y el agente terapéutico. El sitio de escisión proteolítica en la segunda región no anticuerpo ha sido escindido por una proteasa, dando como resultado la liberación de un extremo del segundo agente terapéutico.

[0065] La fórmula XIIIA de la FIG. 9 representa una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo (A1) unida a una región sin anticuerpo que comprende un sitio de escisión proteolítica (P1) unida a un agente terapéutico (T1). Fórmula XIIIB de la FIG. 9 representa la versión recortada de la Fórmula XIIIA, en donde el sitio de escisión proteolítica es escindido por una proteasa, lo que da como resultado la liberación de un extremo del agente terapéutico.

[0066] La fórmula XIVA de la FIG. 9 representa una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo (A1) unida a una región sin anticuerpo que comprende un conector (L1), un agente terapéutico (T1) y un sitio de escisión proteolítica (P1), en donde el agente terapéutico se encuentra entre el conector y el sitio de escisión proteolítica. Fórmula XIVB de la FIG. 9 representa la versión recortada de la Fórmula XIVA, en donde el sitio de escisión proteolítica es escindido por una proteasa, lo que da como resultado la liberación de un extremo del agente terapéutico.

[0067] La fórmula XVA de la FIG. 9 representa una proteína de fusión dual de inmunoglobulina que comprende dos regiones de anticuerpos (A1 y A2). La primera región de anticuerpos (A1) está unida a una primera región sin anticuerpos que comprende un agente terapéutico (T1) con dos conectores (L1y L2) en cada extremo. La segunda región de anticuerpos (A2) está unida a una segunda región sin anticuerpos que comprende un segundo agente terapéutico (T2) unido a un sitio de escisión proteolítica (P1). El agente terapéutico y el sitio de escisión proteolítica en la segunda región sin anticuerpos están flanqueados por dos conectores (L3 y L4). El sitio de escisión proteolítica en la segunda región no anticuerpo ha sido escindido por una proteasa, dando como resultado la liberación de un extremo del segundo agente terapéutico.

[0068] Lafórmula XVIA de la FIG. 9 representa una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo (A1) unida a una región sin anticuerpo que comprende dos conectores (L1y L2), dos sitios de escisión proteolítica (P1y P2) y un agente terapéutico (T1).La Fórmula XVIB de la FIG. 9 representa la versión acortada de la fórmula XVIA, en donde los sitios de escisión proteolítica situados en los extremos N- y extremo Ces del agente terapéutico son escindidos por una proteasa, que resulta en la liberación del agente terapéutico de la proteína de fusión de inmunoglobulina.

[0069] Además aquí se describen métodos para tratar una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita. El método puede comprender administrar al sujeto una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forman una espiral enrollada antiparalela, y (b) un agente terapéutico, y en donde el primer péptido de extensor no tiene una estructura secundaria que comprende una cadena beta. El método puede comprender administrar al sujeto una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región no inmunoglobulina, en donde la región no inmunoglobulina comprende (a) un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forman una espiral enrollada antiparalela, y (b) un agente terapéutico, y en donde el primer péptido de extensor no tiene una estructura secundaria que comprende una cadena beta. En un aspecto, el método comprende administrar al sujeto una proteína de fusión de inmunoglobulina directa que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende un agente terapéutico, y en donde el agente terapéutico está unido a la región de anticuerpo sin usar un péptido de extensor o péptido de enlace que tiene estructura secundaria. En un aspecto, el método comprende administrar al sujeto una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región no inmunoglobulina, en donde la región no inmunoglobulina comprende un agente terapéutico, y en donde el agente terapéutico está unido a la región del anticuerpo sin usar un péptido de extensor o péptido de enlace que tiene estructura secundaria. El método puede comprender administrar al sujeto una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a un péptido terapéutico a través de un péptido de conexión.

[0070] También se describe en este documento los métodos para extender la vida media de un agente terapéutico. El método puede comprender unir un agente terapéutico a una región de anticuerpo. El método puede comprender unir un agente terapéutico a una región de anticuerpo usando uno o más péptidos enlazadores que no tienen una estructura secundaria regular. El método puede comprender unir un agente terapéutico a una región de anticuerpo usando uno o más sitios de escisión de proteasa. El método puede comprender unir un agente terapéutico a un péptido de fusión extensor. El método puede comprender unir un agente terapéutico a una región de anticuerpo usando un péptido de fusión extensor. El método puede comprender unir un agente terapéutico a un péptido de conexión. El método puede comprender unir un agente terapéutico a una región de anticuerpo usando un péptido de conexión.

[0071] También se describe en este documento los métodos para extender la vida media de un agente terapéutico. El método puede comprender unir una región de anticuerpo al agente terapéutico para producir una proteína de fusión de inmunoglobulina. El método puede comprender además unir uno o más conectores o sitios de escisión proteolítica a la proteína de fusión de inmunoglobulina. El uno o más enlazadores pueden estar unidos a un extremo N y/o C del agente terapéutico. El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden estar unidos a un extremo N y/o C del agente terapéutico. El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden insertarse en el agente terapéutico.

[0072] También se describe en este documento los métodos para mejorar la administración de un agente terapéutico. El método puede comprender unir un péptido de extensor a un agente terapéutico. El método puede comprender además unir una región de anticuerpo al péptido de extensor, agente terapéutico o péptido de fusión extensor. El método puede comprender unir un péptido terapéutico directamente a una región de anticuerpo. El método puede comprender unir un péptido de conexión a un agente terapéutico. El método puede comprender además unir una región de anticuerpo al péptido de conexión y al agente terapéutico.

[0073] También se describe en este documento los métodos para mejorar la administración de un agente terapéutico. El método puede comprender unir una región de anticuerpo a un agente terapéutico para producir una proteína de fusión de inmunoglobulina. El método puede comprender además unir uno o más conectores o sitios de escisión proteolítica a la proteína de fusión de inmunoglobulina. El uno o más enlazadores pueden estar unidos a un extremo N y/o C del agente terapéutico. El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden estar unidos a un extremo N y/o C del agente terapéutico. El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden insertarse en el agente terapéutico.

[0074] Antes de describir los presentes procedimientos y composiciones, es de entenderse que esta invención no se limita a un método o composición particular descrita, como tal, puede, por supuesto, varíar. También debe entenderse que la terminología utilizada en el presente documento tiene el propósito de describir realizaciones particulares solamente, y no pretende ser limitante, ya que el alcance de la presente invención estará limitado solo por las reivindicaciones adjuntas. Se exponen ejemplos para proporcionar a los expertos en la materia una divulgación completa y una descripción de cómo hacer y usar la presente invención, y no pretenden limitar el alcance de lo que los inventores consideran su invención ni pretenden representar que los siguientes experimentos son todos o los únicos experimentos realizados. Se han realizado esfuerzos para garantizar la precisión con respecto a los números utilizados (por ejemplo, cantidades, temperatura, etc.) pero se deben tener en cuenta algunos errores y desviaciones experimentales. A menos que se indique lo contrario, las partes son partes en peso, el peso molecular es el peso molecular promedio en peso, la temperatura está en grados centígrados y la presión es igual o cercana a la atmosférica.

[0075] Los términos "homólogo", "homología" o "porcentaje de homología" cuando se usan en el presente documento para describir a un aminoácido de secuencia o una secuencia de ácido nucleico, con respecto a una secuencia de referencia, se puede determinar utilizando la fórmula descrita por Karlin y Altschul (Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 87: 2264-2268, 1990, modificado como en Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 90: 5873-5877, 1993). Dicha fórmula se incorpora a los programas básicos de herramientas de búsqueda de alineación local (BLAST) de Altschul et al. (J. Mol. Biol. 215: 403-410, 1990). El porcentaje de homología de secuencias se puede determinar utilizando la versión más reciente de BLAST, a partir de la fecha de presentación de esta solicitud.

[0076] Cuando se proporciona un intervalo de valores, se entiende que cada valor intermedio, hasta la décima de la unidad del límite inferior a menos que el contexto claramente dicte otra cosa, entre los límites superior e inferior de ese rango es también específicamente divulgado. Cada rango más pequeño entre cualquier valor establecido o valor intermedio en un rango establecido y cualquier otro valor establecido o intermedio en ese rango establecido está comprendido dentro de la invención. Los límites superior e inferior de estos intervalos más pequeños pueden incluirse o excluirse independientemente en el intervalo, y cada intervalo en donde cualquiera, ninguno o ambos límites están incluidos en los intervalos más pequeños también está incluido dentro de la invención, sujeto a cualquier límite específicamente excluido en el rango declarado. Cuando el rango establecido incluye uno o ambos límites, los rangos que excluyen uno o ambos de esos límites incluidos también se incluyen en la invención.

[0077] A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos usados en este documento tienen el mismo significado que comúnmente entendido por un experto ordinario en la técnica a la que pertenece esta invención. Aunque cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en este documento puede usarse en la práctica o prueba de la presente invención, ahora se describen algunos métodos y materiales potenciales y preferidos. Se entiende que la presente divulgación reemplaza cualquier divulgación de una publicación incorporada en la medida en que exista una contradicción.

[0078] Cualquier método reivindicado se puede llevar a cabo en el orden de eventos recitadas o en cualquier otro orden que es lógicamente posible.

[0079] Hay que señalar que, como se usa aquí y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares “un”, “una”, “el” y “ella” incluyen los referentes plurales a menos que el contexto claramente dicte otra cosa. Así, por ejemplo, la referencia a "una célula" incluye una pluralidad de tales células y la referencia a "el péptido" incluye referencia a uno o más péptidos y equivalentes de los mismos, por ejemplo, polipéptidos, conocidos por los expertos en la técnica, y así sucesivamente.

[0080] Como se usa en el presente documento, una secuencia de aminoácidos que se basa en otra secuencia de aminoácidos comprende una o más porciones consecutivasde aminoácidos de la otra secuencia de aminoácidos. Las porciones consecutivas de aminoácidos incluyen cualquier número de aminoácidos en la otra secuencia de aminoácidos. Los aminoácidos consecutivos pueden ser 1-10%, 1-20%, 10-20%, 10-30%, 20-30%, 20-40%, 30-40%, 40-50%, 50-60%, 50-100%, 60-70%, 60-100%, 70-100%, 80-100%, 80-90%, 90-95%, 90-100% o 1-100% idénticos a cualquier región consecutiva deaminoácidos en la otra secuencia de aminoácidos.

Proteínas de fusión de inmunoglobulina

[0081] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina según la invención puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo murino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo de primate no humano.

[0082] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en este documento pueden comprender un agente terapéutico, en dondeel agente terapéutico es un péptido funcional. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender un péptido funcional injertado en un armazón de anticuerpos. El péptido funcional puede ser un péptido lineal. El péptido funcional puede ser un péptido cíclico modificado. El péptido funcional puede comprender un péptido modificado para comprender una estructura de horquilla p. La estructura de horquilla ppuede estar bloqueada en una conformación de horquilla ppor uno o más enlaces entre dos o más residuos de aminoácidos de la estructura de horquillap. El extremo N y/o el extremo C del péptido funcional pueden injertarse en la región de fusión de extensor de la proteína de fusión de inmunoglobulina. El extremo N del péptido funcional puede injertarse en un primer péptido de extensor de la región de fusión del extensor y el extremo C del péptido funcional puede injertarse en un segundo péptido de extensor de la región de fusión del extensor. El péptido funcional puede comprender un péptido modificado para comprender un péptido conformacionalmente restringido. Un péptido conformacionalmente restringido puede tener una afinidad y/o especificidad de unión muy mejorada a un objetivo en relación con un compañero de unión endógeno o natural del objetivo. Un compañero de unión endógeno o natural del objetivo puede ser un ligando o sustrato del objetivo. Por ejemplo no limitativo, el péptido constreñido conformacionalmente puede ser un péptido que comprende una estructura de horquilla p. El péptido conformacionalmente limitado puede comprender una región que se une a un sitio de unión de un objetivo. El objetivo puede ser un receptor. El objetivo puede ser una enzima. El sitio de unión del objetivo puede ser una bolsa profunda de un dominio de unión a ligando o dominio de unión a sustrato. El péptido funcional o parte del mismo puede unirse a la bolsa profunda de un dominio de unión a ligando o dominio de unión a sustrato de manera que bloquea la unión de un ligando y/o sustrato diana. El péptido funcional o parte del mismo puede unirse a la bolsa profunda de un dominio de unión a ligando o dominio de unión a sustrato de manera que bloquea parcialmente la unión del ligando y/o sustrato diana. El péptido funcional o parte del mismo puede unirse a la bolsa profunda de un dominio de unión a ligando o dominio de unión a sustrato de modo que bloquea completamente la unión del ligando o sustrato diana. El péptido funcional o parte del mismo puede unirse a la superficie del dominio de unión al ligando o al dominio de unión al sustrato. El péptido funcional puede ser un agonista. El péptido funcional puede ser un antagonista. El péptido funcional puede ser un inhibidor. El péptido funcional puede ser un ligando. El péptido funcional puede ser un sustrato.

[0083] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácido que se basa en o se deriva de una cualquiera de SEQ ID NOs: 68-99, y 122-143. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99 y 122-143. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO : 68-99 y 122-143. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99 y 122-143. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99 y 122-143.

[0084] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más aminoácidos basados en o derivados de cualquiera de las SEQ ⁱD NOs: 68-99 y 122-143. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 450, 500 o más aminoácidos basados en o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99 y 122-143. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10 o más aminoácidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99 y 122-143. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99 y 122-143. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99 y 122-143. La proteína de fusión de inmunoglobulinapuede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99, y 122-143. Los aminoácidos pueden ser consecutivos. Alternativamente, o adicionalmente, los aminoácidos son no consecutivos.

[0085] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede ser codificada por una secuencia de nucleótidos que se basa en o se deriva de una cualquiera de SEQ ID NOs: 37-67, y 100-121. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67 y 100-121. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NOs: 37-67 y 100-121. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67 y 100-121. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67 y 100-121.

[0086] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede ser codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más nucleótidos basados en o derivados de cualquiera de las SEQ ID NOs: 37 -67 y 100-121. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 450, 500 o más nucleótidos basados en o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67 y 100-121. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000 o más nucleótidos basados en cualquiera de las SEQ ⁱD NO: 37-67 y 100 -121. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 1100, 1200, 1300, 1400, 1500 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ iD NO: 37-67 y 100-121. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 100 o más nucleótidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67 y 100-121. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 500 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67 y 100-121. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 1000 o más nucleótidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67 y 100-121. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 1300 o más nucleótidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 37-67 y 100-121. Los nucleótidos pueden ser consecutivos. Alternativamente, o adicionalmente, los nucleótidos son no consecutivos.

[0087] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender además una o más cadenas ligeras de inmunoglobulina. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender al menos dos cadenas ligeras de inmunoglobulina. La cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender una o más porciones de una cadena ligera de inmunoglobulina. La cadena ligera de inmunoglobulina puede ser una cadena ligera de fusión de inmunoglobulina. La cadena ligera de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo derivada de una cadena ligera de inmunoglobulina y un agente terapéutico. El agente terapéutico puede estar unido a la región del anticuerpo por uno o más péptidos de conexión. La cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que se basa o se deriva de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-21, 28, 36, 68, 80, 94, 98 y 122. La cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 19-21, 28, 36, 68, 80, 94, 98 y 122. La cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 19-21, 28, 36, 68, 80, 94, 98 y 122. La cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 19-21, 28, 36, 68, 80, 94, 98, y 122. La cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 19-21, 28, 36, 68, 80, 94, 98 y 122.

[0088] La cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-21, 28, 36, 68, 80, 94, 98 y 122. La cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 450, 500 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-21, 28, 36, 68, 80, 94, 98 y 122. La cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-21, 28, 36, 68, 80, 94, 98 y 122. La cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-21, 28, 36, 68, 80, 94, 98 y 122. La cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 19-21, 28, 36, 68, 80, 94, 98 y 122. La cadena ligera de inmunoglobulina puede comp elevar una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-21, 28, 36, 68, 80, 94, 98 y 122. Los aminoácidos pueden ser consecutivos. Alternativamente, o adicionalmente, los aminoácidos son no consecutivos.

[0089] La cadena ligera de inmunoglobulina puede ser codificada por una secuencia de nucleótidos que se basa en o se deriva de una cualquiera de SEQ ID NOs: 1-3, 10, 18, 37, 49, 63, 67, y 100. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3, 10, 18, 37, 49, 63, 67 y 100. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3, 10, 18, 37, 49, 63, 67 y 100. La cadena ligera de inmunoglobulinapuede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3, 10, 18, 37, 49, 63, 67 y 100. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a cualquiera de SEQ ID NOs: 1-3, 10, 18, 37, 49, 63, 67, y 100.

[0090] La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3, 10, 18, 37, 49, 63, 67 y 100. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 450, 500 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3, 10, 18, 37, 49, 63, 67 y 100. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 13, 10, 18, 37, 49, 63, 67 y 100. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 1100, 1200, 1300, 1400, 1500 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3, 10, 18, 37, 49, 63, 67 y 100. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 100 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3, 10, 18, 37, 49, 63, 67 y 100. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 500 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3, 10, 18, 37, 49, 63, 67 y 100. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 1000 o más nucleótidos basados en o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1 3, 10, 18, 37, 49, 63, 67 y 100. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 1300 o más nucleótidos basados o derivados de cualquier uno de los SEQ ID NO: 1-3, 10, 18, 37, 49, 63, 67 y 100. Los nucleótidos pueden ser consecutivos. Alternativamente, o adicionalmente, los nucleótidos son no consecutivos.

[0091] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender además uno o más cadenas pesadas de inmunoglobulina. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender al menos dos cadenas pesadas de inmunoglobulina. La cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una o más porciones de una cadena pesada de inmunoglobulina. La cadena pesada de inmunoglobulina puede ser una cadena pesada de fusión de inmunoglobulina. La cadena pesada de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo derivada de una cadena pesada de inmunoglobulina y un agente terapéutico. El agente terapéutico puede estar unido a la región del anticuerpo por uno o más péptidos de conexión. La cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que se basa o se deriva de cualquiera de las SEQ ID NO: 22-27, 29-35, 69-79, 81-93, 95 97, 99 y 123-143. La cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 22-27, 29-35, 69-79, 81-93, 95-97, 99 y 123-143. La cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO : 22-27, 29-35, 69-79, 81-93, 95-97, 99 y 123-143. La cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 22 27, 29-35, 69-79, 81-93, 95-97, 99 y 123-143. La cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 22 27, 29-35, 69-79, 81-93, 95-97, 99 y 123-143.

[0092] Lacadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SeQ ID NO: 22-27, 29-35, 69-79, 81-93, 95-97, 99 y 123-143. La cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 450, 500 o más aminoácidos basados en o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 22-27, 29-35, 69-79, 81-93, 95-97, 99 y 123-143. La cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10 o más aminoácidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 22-27, 29-35, 69-79, 81-93, 95-97, 99, y 123-143. La cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos basados en cualquiera de las SeQ ID NO: 22-27, 29-35, 69-79, 81-93, 95-97, 99, y 123-143. La cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 22-27, 29-35, 69-79, 81 93, 95-97, 99, y 123-143. La cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 22-27, 29-35, 69-79, 81-93, 95 97, 99, y 123-143. Los aminoácidos pueden ser consecutivos. Alternativamente, o adicionalmente, los aminoácidos son no consecutivos.

[0093] La cadena pesada de inmunoglobulina puede ser codificada por una secuencia de nucleótidos que se basa en o se deriva de una cualquiera de SEQ ID ⁿO^s: 4-9, 11-17, 38-48, 50-62, 64-66, y 101-121. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 4-9, 11-17, 38-48, 50-62, 64-66 y 101-121. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a cualquiera de SEQ ID NO: 4-9, 11-17, 38-48, 50-62, 64 66 y 101-121. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 4-9, 11-17, 38-48, 50-62, 64-66 y 101-121) La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a cualquiera de las SEQ ID N^o: 4-9, 11-17, 38-48, 50-62, 64-66 y 101 121).

[0094] La cadena pesada de inmunoglobulina puede ser codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más nucleótidos basados en o derivados de cualquiera de las SEQ ID NOs: 4-9, 11-17, 38-48, 50-62, 64-66 y 101-121. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 125, 150,175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 450, 500 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 4-9, 11-17, 38-48, 50-62, 64-66 y 101-121) La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 4-9, 11- 17, 38-48, 50-62, 64-66 y 101-121. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 1100, 1200, 1300, 1400, 1500 o más nucleótidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 4-9, 11-17, 38-48, 50- 62, 64-66 y 101-121. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 100 o más nucleótidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 4-9, 11-17, 38-48, 50-62, 64-66 y 101-121. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 500 o más nucleótidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 4-9, 11-17, 38-48, 50-62, 64-66 y 101-121. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 1000 o más nucleótidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 4-9, 11-17, 38-48, 50-62, 64-66 y 101-121. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 1300 o más nucleótidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 4-9, 11-17, 38-48, 50-62, 64-66 y 101-121. Los nucleótidos pueden ser consecutivos. Alternativamente, o adicionalmente, los nucleótidos son no consecutivos.

[0095] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera cadena pesada de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que se basa en o se deriva de SEQ ID NOs: 69-79, 81-93, 95-97, 99, y 123-143; y (b) una primera cadena ligera de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que se basa o se deriva de SEQ ID NOs: 19-21, 28 y 36. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera cadena pesada de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica a las SEQ ID NO: 69-79, 81-93, 95-97, 99 y 123-143; y (b) una primera cadena ligera de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica a las SEQ ID NO: 19-21, 28 y 36. La primera cadena pesada de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% o 97% idéntica a las SEQ ID NO: 69-79, 81-93, 95-97, 99 y 123-143. La primera cadena ligera de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% o 97% idéntica a las SEQ ID NO: 19-21, 28 y 36.

[0096] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera cadena pesada de fusión de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NOs: 38-48, 50-62, 64-66, y 101-121; y (b) una primera cadena ligera de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1-3, 10 y 18. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera cadena pesada de fusión de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos que está en al menos 50% o más homóloga a una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 38-48, 50-62, 64-66 y 101-121; y (b) una primera cadena ligera de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos 50% o más homóloga a una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NOs: 1-3, 10 y 18. La primera cadena pesada de fusión de inmunoglobulinas codificada por unasecuencia de nucleótidos que es al menos 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% o 97% o más homóloga a una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NOs: 38-48, 50-62, 64-66, y 101-121. La primera cadena ligera de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% o 97% o más homóloga a una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NOs: 1-3, 10 y 18.

[0097] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera cadena de inmunoglobulina pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que se basa en o se deriva de SEQ ID NOs: 22-27, y 29-35; y (b) una primera cadena ligera de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que se basa o se deriva de SEQ ID NOs: 68, 80, 94, 98 y 122. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera inmunoglobulina pesada cadena que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica a las SEQ ID NO: 22-27 y 29-35; y (b) una primera cadena ligera de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica a las SEQ ID NO: 68, 80, 94, 98 y 122. La primera cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos eso es al menos aproximadamente 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% o 97% idéntica a los SEQ ID NO: 22-27 y 29-35. La primera cadena ligera de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% o 97% idéntica a las SEQ ID NO: 68, 80, 94, 98, y 122.

[0098] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera cadena de inmunoglobulina pesada codificada por una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NOs: 4-9 y 11-17; y (b) una primera cadena ligera de fusión de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NOs: 37, 49, 63, 67 y 100. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera cadena pesada de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos 50% o más homóloga a una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NOs: 4-9 y 11-17; y (b) una primera cadena ligera de fusión de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos 50% o más homóloga a una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 37, 49, 63, 67 y 100. La primera cadena pesada de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% o 97% o más homóloga a una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NOs: 4-9 y 11-17. La primera cadena ligera de fusión de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% o 97% o más homóloga a una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 37, 49, 63, 67, y 100.

[0099] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera cadena de fusión de inmunoglobulina pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que se basa en o se deriva de SEQ ID NOs: 69-79, 81-93, 95-97, 99 y 123-143; y (b) una primera cadena ligera de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que se basa o se deriva de SEQ ID NOs: 68, 80, 94, 98 y 122. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera fusión de inmunoglobulina cadena pesadaque comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica a las SEQ ID NO: 69-79, 81-93, 95-97, 99, y 123 a 143; y (b) una primera cadena ligera de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica a las SEQ ID NO: 68, 80, 94, 98 y 122. La primera cadena pesada de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% o 97% idéntica a las SEQ ID NO: 69-79, 81-93, 95-97, 99 y 123- 143) La primera cadena ligera de fusión de inmunoglobulina que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% o 97% idéntica a las SEQ ID NO: 68, 80, 94, 98 y 122.

[0100] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera cadena pesada de fusión de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 38-48, 50-62, 64-66 y 101-121; y (b) una primera cadena ligera de fusión de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NOs: 37, 49, 63, 67 y 100. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera cadena pesada de fusión de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos 50% o más homóloga a una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NOs: 38-48, 50-62, 64-66 y 101-121; y (b) una primera cadena ligera de fusión de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos 50% o más homóloga a una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 37, 49, 63, 67 y 100. La primera cadena pesada de fusión de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% o 97% o más homóloga a una secuencia de nucleótidos de SEQ ⁱD NOs: 38-48, 50-62, 64-66 y 101-121. La primera cadena ligera de fusión de inmunoglobulina codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% o 97% o más homóloga a una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 37, 49, 63, 67 y 100.

[0101] Se describen adicionalmente en el presente documento proteínas de fusión dual de inmunoglobulina que comprenden (a) una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo, en donde la región sin anticuerpo comprende (i) un primer péptido de extensor, en donde el primer péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de alfa hélice y en donde el primer péptido de extensor no comprende una CDR3 ultra larga, y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) un segundo agente terapéutico. La unión de la región de anticuerpo a la región sin anticuerpo puede comprender la inserción de la región sin anticuerpo en la región de anticuerpo. El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser iguales. El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser diferentes. La proteína de fusión dual puede comprender además una segunda región de anticuerpo.Losagentes terapéuticos primero y segundo pueden estar unidos a una primera región de anticuerpo. Losagentes terapéuticos primero y segundo pueden estar unidos a una primera región de anticuerpo y una segunda región de anticuerpo. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden estar conectadas. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden estar conectadas por uno o más enlaces disulfuro. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden ser parte de una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos extensores adicionales. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos enlazadores. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa.

[0102] Alternativamente, la proteína de fusión dual de inmunoglobulina comprende (a) una región de anticuerpo unida a una región no anticuerpo, en donde la región no anticuerpo comprende (i) un primer péptido de extensor, en donde el primer péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de alfa hélice y en donde el péptido de extensor comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga; y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) un segundo agente terapéutico. La unión de la región de anticuerpo a la región sin anticuerpo puede comprender la inserción de la región sin anticuerpo en la región de anticuerpo. El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser iguales. El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser diferentes. La proteína de fusión dual puede comprender además una segunda región de anticuerpo. Los agentes terapéuticos primer y segundo pueden estar unidos a una primera región de anticuerpo.Los agentes terapéuticos primer y segundo pueden estar unidos a una primera región de anticuerpo y una segunda región de anticuerpo.Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden estar conectadas. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden estar conectadas por uno o más enlaces disulfuro. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden ser parte de una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos extensores adicionales. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos enlazadores. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa.

[0103] Alternativamente, la proteína de fusión dual de inmunoglobulina comprende (a) una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (i) un primer péptido de extensor, en donde el primer péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de alfa hélice y en donde el primer péptido de extensor no comprende una CDR3 ultra larga, y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) un segundo agente terapéutico. La unión de la región del anticuerpo a la región de fusión del extensor puede comprender la inserción de la región de fusión del extensor en la región del anticuerpo. El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser iguales. El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser diferentes. La proteína de fusión dual puede comprender además una segunda región de anticuerpo. Los agentes terapéuticos primer y segundo pueden estar unidos a una primera región de anticuerpo. Los agentes terapéuticos primer y segundo pueden estar unidos a una primera región de anticuerpo y una segunda región de anticuerpo. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden estar conectadas. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden estar conectadas por uno o más enlaces disulfuro. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden ser parte de una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos extensores adicionales. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos enlazadores. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa.

[0104] Alternativamente, la proteína de fusión dual de inmunoglobulina comprende (a) una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (i) un primer péptido de extensor, en donde el primer péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de alfa hélice y en donde el péptido de extensor comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga; y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) un segundo agente terapéutico. La unión de la región del anticuerpo a la región de fusión del extensor puede comprender la inserción de la región de fusión del extensor en la región del anticuerpo. El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser iguales. El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser diferentes. La proteína de fusión dual puede comprender además una segunda región de anticuerpo. Los agentes terapéuticos primer y segundo pueden estar unidos a una primera región de anticuerpo.Los agentes terapéuticos primer y segundo pueden estar unidos a una primera región de anticuerpo y una segunda región de anticuerpo.Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden estar conectadas. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden estar conectadas por uno o más enlaces disulfuro. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden ser parte de una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos extensores adicionales. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos enlazadores. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa.

[0105] Alternativamente, la proteína de fusión dual de inmunoglobulina comprende (a) una región de anticuerpo unida a una región no anticuerpo, en donde la región no anticuerpo comprende (i) un primer péptido de enlace, en donde el primer péptido de enlace no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) un segundo agente terapéutico. La unión de la región de anticuerpo a la región sin anticuerpo puede comprender la inserción de la región sin anticuerpo en la región de anticuerpo. El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser iguales. El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser diferentes. La proteína de fusión dual puede comprender además una segunda región de anticuerpo. Los agentes terapéuticos primer y segundo pueden estar unidos a una primera región de anticuerpo. Los agentes terapéuticos primer y segundo pueden estar unidos a una primera región de anticuerpo y una segunda región de anticuerpo. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden estar conectadas. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden estar conectadas por uno o más enlaces disulfuro. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden ser parte de una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos enlazadores adicionales. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa.

[0106] Alternativamente, la proteína de fusión dual de inmunoglobulina comprende (a) una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (i) un primer péptido de enlace, en donde el primer péptido de enlace no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta; y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) un segundo agente terapéutico. La unión de la región del anticuerpo a la región de fusión del extensor puede comprender la inserción de la región de fusión del extensor en la región del anticuerpo. El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser iguales. El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser diferentes. La proteína de fusión dual puede comprender además una segunda región de anticuerpo. Los agentes terapéuticos primer y segundo pueden estar unidos a una primera región de anticuerpo. Los agentes terapéuticos primer y segundo pueden estar unidos a una primera región de anticuerpo y una segunda región de anticuerpo. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden estar conectadas. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden estar conectadas por uno o más enlaces disulfuro. Las regiones primera y segunda de anticuerpos pueden ser parte de una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos enlazadores adicionales. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa.

[0107] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende un primera región de anticuerpo unida a una primera región de no anticuerpo, en donde la primera región comprende que no son anticuerpos (i) un primer péptido de extensor, en dondeel primer péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de alfa hélice y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una segunda región sin anticuerpo, en donde la segunda región sin anticuerpo comprende (i) un segundo péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria y (ii) un segundo agente terapéutico En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la primera región sin anticuerpo, y el primer péptido de extensor es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor y el segundo péptido de extensor de la primera región no anticuerpo forman una espiral enrollada antiparalela, y el segundo péptido de extensor es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la primera región sin anticuerpo, y el primer péptido de extensor no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor de la primera región no anticuerpo forman una espiral enrollada antiparalela, y el segundo péptido de extensor no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más conectores peptídicos. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa.

[0108] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una primera región de anticuerpo unida a una primera región no anticuerpo, en donde la primera región no anticuerpo comprende (i) un primer péptido de extensor, en donde el primer el péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfay (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (i) un segundo péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la primera región no anticuerpo, y es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor de la primera región no anticuerpo forman una espiral enrollada antiparalela, y el segundo péptido de extensor es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más conectores peptídicos. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la primera región sin anticuerpo, y el primer péptido de extensor no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor y el segundo péptido de extensor de la primera región no anticuerpo forman una espiral enrollada antiparalela, y el segundo péptido de extensor no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta.

[0109] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende un primera región de anticuerpo unida a una primera región de fusión extensor, donde la región de primera fusión extensor comprende (i) un primer extensor de péptido, en donde el primer péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de alfa hélice y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo, en donde la región sin anticuerpo comprende (i) un segundo péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la región de fusión del primer extensor, y el primer péptido de extensor es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor de la región de fusión del primer extensor forman una espiral enrollada antiparalela, y el segundo péptido de extensor es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más conectores peptídicos. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la región de fusión del primer extensor, y el primer péptido de extensor no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor de la región de fusión del primer extensor forman una espiral enrollada antiparalela, y el segundo péptido de extensor no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta.

[0110] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una primera región de anticuerpo unida a una primera región de fusión de extensor, en donde la primera región de fusión de extensor comprende (i) un primer péptido de extensor, en donde el primer péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de alfa hélice y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una segunda región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (i) un segundo péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la región de fusión del primer extensor, y el primer péptido de extensor es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor de la región de fusión del primer extensor forman una espiral enrollada antiparalela, y el segundo péptido de extensor es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más conectores peptídicos. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además una o más proteasas sitios de escisión. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la primera región sin anticuerpo, y el primer péptido de extensor no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor de la región de fusión del primer extensor forman una espiral enrollada antiparalela, y el segundo péptido de extensor no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta.

[0111] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende unaprimera región de anticuerpo unida a una primera región de no anticuerpo, en donde la primera región comprende que no son anticuerpos (i) un primer enlazador peptídico, en dondeel primer enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una segunda región sin anticuerpo, en donde la segunda región sin anticuerpo comprende (i) un segundo enlazador peptídico, en donde el segundo enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el primer péptido de conexión es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el segundo péptido de conexión es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa.

[0112] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una primera región de anticuerpo unida a una primera región no anticuerpo, en donde la primera región no anticuerpo comprende (i) un primer enlazador peptídico,en donde el primer enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (i) un segundo enlazador peptídico, en donde el segundo enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el primer péptido de conexión es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el segundo péptido de conexión es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa.

[0113] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende un primera región de anticuerpo unida a una primera región de fusión de extensor, donde la región de primera fusión extensora comprende (i) un primer péptido enlazador, en dondeel primer enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo, en donde la región sin anticuerpo comprende (i) un segundo enlazador peptídico, en donde el segundo enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el primer péptido de conexión es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el segundo péptido de conexión es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa.

[0114] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una primera región de anticuerpo unida a una primera región de fusión de extensor, donde la región de primera fusión extensora comprende (i) un primer péptido enlazador, en dondeel primer enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una segunda región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (i) un segundo enlazador peptídico, en donde el segundo enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el primer péptido de conexión es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el segundo péptido de conexión es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa.

[0115] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una primera región de anticuerpo unida a una primera región de no anticuerpo, en donde la primera región no de anticuerposcomprende (i) un primer enlazador peptídico, en dondeel primer enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una segunda región sin anticuerpo, en donde la segunda región sin anticuerpo comprende (i) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el péptido de extensor de la segunda región no anticuerpo comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de hélice alfa. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el péptido de extensor de la segunda región no anticuerpo no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el péptido de extensor de la segunda región no anticuerpo es un péptido de conexión o es parte de una conexión péptido. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el enlazador peptídico es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más enlazadores adicionales. La segunda región no anticuerpo de la segunda proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos extensores adicionales.

[0116] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una primera región de anticuerpo unida a una primera región de no anticuerpo, en donde la primera región comprende que no son anticuerpos (i) un primer enlazador peptídico, en dondeel primer enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (i) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forman una espiral enrollada antiparalela, y el péptido de extensor de la segunda proteína de fusión de inmunoglobulina comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de alfa hélice. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el péptido de extensor de la segunda proteína de fusión de inmunoglobulina no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el péptido de extensor de la segunda proteína de fusión de inmunoglobulina es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el enlazador peptídico es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más enlazadores adicionales. La región de fusión del extensor de la segunda proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos extensores adicionales.

[0117] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una primera región de anticuerpo unida a una primera región de fusión de extensor, en donde la primera región de fusión de extensor comprende (i) un primer enlazador peptídico, en donde el primer enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo, en donde la región sin anticuerpo comprende (i) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el péptido de extensor de la segunda proteína de fusión de inmunoglobulina comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de alfa hélice. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el péptido de extensor de la segunda proteína de fusión de inmunoglobulina no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el péptido de extensor de la segunda proteína de fusión de inmunoglobulina es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el enlazador peptídico es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más enlazadores adicionales. La región no anticuerpo de la segunda proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos extensores adicionales.

[0118] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una primera región de anticuerpo unida a una primera región de fusión de extensor, donde la región de primera fusión extensora comprende (i) un primer péptido enlazador, en dondeel primer enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una segunda región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (i) un segundo péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el péptido de extensor de la segunda proteína de fusión de inmunoglobulina comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de alfa hélice. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el péptido de extensor de la segunda proteína de fusión de inmunoglobulina no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el péptido de extensor de la segunda proteína de fusión de inmunoglobulina es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, la primera proteína de fusión de inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el enlazador peptídico es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más enlazadores adicionales. La segunda región de fusión de extensor de la segunda proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos de extensor adicionales.

[0119] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una primera región de anticuerpo unida a una primera región de no anticuerpo, en donde la primera región comprende que no son anticuerpos (i) un primer péptido de extensor, en dondeel primer péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de alfa hélice y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una segunda región sin anticuerpo, en donde la segunda región sin anticuerpo comprende (i) un enlazador peptídico, en donde el enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa o cadena beta y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la primera región no anticuerpo, y el primer péptido de extensor no comprendeaminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la primera región sin anticuerpo, y el primer péptido de extensor es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la primera región sin anticuerpo, y el enlazador peptídico es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más enlazadores adicionales. La primera región no anticuerpo de la primera proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos extensores adicionales.

[0120] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una primera región de anticuerpo unida a una primera región no anticuerpo, en donde la primera región no anticuerpo comprende (i) un primer péptido de extensor, en donde el primer el péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de alfa hélice y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (i) un enlazador peptídico, en donde el segundo enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa o estructura secundaria de la cadena beta y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la primera región sin anticuerpo, y el primer péptido de extensor no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la primera región sin anticuerpo, y el primer péptido de extensor es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la primera región sin anticuerpo, y el enlazador peptídico es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más enlazadores adicionales. La primera región no anticuerpo de la primera proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos extensores adicionales.

[0121] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una primera región de anticuerpo unida a una primera región de fusión de extensor, en donde la primera región de fusión de extensor comprende (i) un primer péptido de extensor, en donde el primer péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de alfa hélice y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo, en donde la región sin anticuerpo comprende (i) un enlazador peptídico, en donde el enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende un alfa estructura secundaria de hélice o cadena beta y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la región de fusión del primer extensor, y el primer péptido de extensor no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la región de fusión del primer extensor, y el primer péptido de extensor es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la primera región sin anticuerpo, y el enlazador peptídico es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más enlazadores adicionales. La primera región de fusión de extensor de la primera proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos de extensor adicionales.

[0122] El anticuerpo de fusión dual puede comprender (a) una primera proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una primera región de anticuerpo unida a una primera región de fusión de extensor, en donde la primera región de fusión de extensor comprende (i) un primer péptido de extensor, en donde el primer péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de alfa hélice y (ii) un primer agente terapéutico; y (b) una segunda proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una segunda región de anticuerpo unida a una segunda región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (i) un enlazador peptídico, en donde el enlazador peptídico no comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa o estructura secundaria de la cadena beta y (ii) un segundo agente terapéutico. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la región de fusión del primer extensor, y el primer péptido de extensor no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la región de fusión del primer extensor, y el primer péptido de extensor es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. En algunas realizaciones, el primer péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la región de fusión del primer extensor, y el enlazador peptídico es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más sitios de escisión de proteasa. El anticuerpo de fusión dual puede comprender además uno o más enlazadores adicionales. La primera región de fusión de extensor de la primera proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos de extensor adicionales.

[0123] El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser iguales. El primer agente terapéutico y el segundo agente terapéutico pueden ser diferentes. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más agentes terapéuticos adicionales. Los dos o más agentes terapéuticos pueden ser iguales. Alternativamente, o adicionalmente, los dos o más agentes terapéuticos pueden ser diferentes. El primer agente terapéutico puede ser un péptido terapéutico. El segundo agente terapéutico puede ser un péptido terapéutico. Uno o más de los agentes terapéuticos adicionales pueden ser un péptido terapéutico. El primer agente terapéutico puede comprender un péptido terapéutico. El segundo agente terapéutico puedecomprender un péptido terapéutico. Uno o más de los agentes terapéuticos adicionales pueden comprender uno o más péptidos terapéuticos. Un agente terapéutico puede comprender uno o más péptidos terapéuticos o regiones de péptidos terapéuticos. Un agente terapéutico puede comprender, por ejemplo, un primer péptido terapéutico o porción del mismo, un péptido interno y un segundo péptido terapéutico o porción del mismo. El péptido interno puede incluir, por ejemplo, un sitio de escisión de proteasa o una etiqueta de afinidad, tal como una etiqueta de histidina (6X HIS). El péptido interno puede incluir, por ejemplo, otro péptido terapéutico o una porción del mismo. Por ejemplo, un agente terapéutico puede comprender una primera porción de un primer péptido terapéutico, una primera porción de un segundo péptido terapéutico y una segunda porción de un primer péptido terapéutico.

[0124] La primera región de anticuerpo y la segunda región de anticuerpo puede ser la misma. Por ejemplo, la primera región de anticuerpos y la segunda región de anticuerpos comprenden una cadena pesada de inmunoglobulina. Alternativamente, la primera región de anticuerpo y la segunda región de anticuerpo pueden comprender una cadena ligera de inmunoglobulina. La primera región de anticuerpos y la segunda región de anticuerpos pueden ser diferentes. Por ejemplo, la primera región de anticuerpo comprende una cadena pesada de inmunoglobulina y la segunda región de anticuerpo comprende una cadena ligera de inmunoglobulina o viceversa. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además una o más regiones de anticuerpos adicionales. Las dos o más regiones de anticuerpos pueden ser iguales. Alternativamente, o adicionalmente, las dos o más regiones de anticuerpos pueden ser diferentes.

[0125] La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más péptidos extensores. El uno o más péptidos extensores pueden ser iguales. Alternativamente, o adicionalmente, el uno o más péptidos extensores son diferentes. En algunas realizaciones, el péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor, y comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga.

[0126] La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además una o más regiones de anticuerpo adicionales. Las dos o más regiones de anticuerpos pueden ser iguales. Alternativamente, o adicionalmente, las dos o más regiones de anticuerpos son diferentes.

[0127] La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más enlazadores. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además dos o más enlazadores. Los dos o más enlazadores pueden ser iguales. Alternativamente, o adicionalmente, los dos o más enlazadores son diferentes.

[0128] La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más sitios de escisión proteolítica. La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además dos o más sitios de escisión proteolítica. Los dos o más sitios de escisión proteolítica pueden ser iguales. Alternativamente, o adicionalmente, los dos o más sitios de escisión proteolítica son diferentes.

[0129] La proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender además uno o más agentes terapéuticos que comprenden péptidos internos. Un péptido interno puede comprender una etiqueta o etiqueta de afinidad, tal como una etiqueta de histidina HHHHHH (6X). Un péptido interno puede comprender una porción de un péptido terapéutico.

[0130] Las proteínas de fusión dual de inmunoglobulina ejemplares se representan en la FIG. 3, Fórmula IIIA y Fórmula VIIA. Como se muestra en la Fórmula IIIA de la Figura 8, la proteína de fusión dual de inmunoglobulina puede comprender (a) una primera región de anticuerpo (A1) unida a una primera región de fusión de extensor que comprende un primer agente terapéutico (T1) unido a dos péptidos de extensor (E1, E2); y (b) una segunda región de anticuerpo (A2) unida a una segunda región de fusión de extensor que comprende un segundo agente terapéutico (T2) unido a dos péptidos de extensor (E3, E4). Las proteínas de fusión dual de inmunoglobulina pueden comprender además uno o más enlazadores y uno o más sitios de escisión proteolítica. El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden estar unidos al extremo N y/o extremo C de un agente terapéutico. La escisión proteolítica del sitio de escisión proteolítica puede liberar el extremo N y/o C del agente terapéutico de la proteína de fusión de inmunoglobulina. Fórmula VIIA de la FIG. 3 representa una proteína de fusión dual de inmunoglobulina ejemplar en donde el extremo N del segundo agente terapéutico (T2) ha sido liberado.

Región de anticuerpos

[0131] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento comprenden una o más regiones de anticuerpos. La región del anticuerpo puede comprender una inmunoglobulina o un fragmento de la misma. La región de anticuerpo puede comprender al menos una porción de una cadena pesada de inmunoglobulina, cadena ligera de inmunoglobulina o una combinación de las mismas. La región del anticuerpo puede comprender dos o más cadenas de inmunoglobulina o porciones de las mismas. La región del anticuerpo puede comprender tres o más cadenas de inmunoglobulina o porciones de las mismas. La región del anticuerpo puede comprender cuatro o más cadenas de inmunoglobulina o porciones de las mismas. La región del anticuerpo puede comprender cinco o más cadenas de inmunoglobulina o porciones de las mismas. La región del anticuerpo puede comprender dos cadenas pesadas de inmunoglobulina y dos cadenas ligeras de inmunoglobulina.

[0132] La región de anticuerpo puede comprender toda una molécula de inmunoglobulina o cualquier polipéptido que comprende un fragmento de una inmunoglobulina, incluyendo, pero no limitado a, la cadena pesada, cadena ligera, dominio variable, dominio constante, región determinante de complementariedad (CDR), región de entramado, región de unión a fragmento de antígeno (Fab), Fab', F(ab')2, F(ab')3, Fab', región de fragmento cristalizable (Fc), fragmento variable de cadena sencilla (scFV), di-scFv, inmunoglobulina de dominio único, inmunoglobulina trifuncional, F(ab')2 ligado químicamente, y cualquier combinación de los mismos. La región de inmunoglobulina puede comprender una o más mutaciones. La región Fc puede ser una región Fc mutada. La región Fc mutada puede comprender una o más mutaciones que eliminan un efecto de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) de una región Fc. La región Fc mutada puede comprender aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5, aproximadamente 6, aproximadamente 7, aproximadamente 8, aproximadamente 9, aproximadamente 10, aproximadamentel a aproximadamente 10, aproximadamente 1 a aproximadamente 20, o aproximadamente 1 a aproximadamente 30 mutaciones.

[0133] En algunas realizaciones, una cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una cadena pesada completa o una porción de una cadena pesada. Por ejemplo, un dominio variable o región del mismo derivado de una cadena pesada puede denominarse cadena pesada o región de una cadena pesada. En algunas realizaciones, una cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender una cadena ligera completa o una porción de una cadena ligera. Por ejemplo, un dominio variable o región del mismo derivado de una cadena ligera puede denominarse una cadena ligera o una región de una cadena ligera. Una inmunoglobulina de dominio único incluye, pero no se limita a, un dominio de inmunoglobulina variable monomérico único, por ejemplo, un nuevo fragmento de inmunoglobulina de receptor de antígeno variable (VNAR).

[0134] La inmunoglobulina puede derivarse de cualquier tipo conocido por un experto en la técnica que incluye, pero no se limita a, IgA, IgD, IgE, IgG, IgM, IgY, IgW. La región de anticuerpo puede comprender una o más unidades, que incluyen pero no se limitan a, 1, 2, 3, 4 y 5 unidades. Las unidades funcionales pueden incluir, entre otras, regiones sin anticuerpos, cadena pesada, cadena ligera, dominio variable, dominio constante, región determinante de complementariedad (CDR), región marco, región de unión a antígeno de fragmento (Fab), Fab', F(ab')2, F(ab')3, Fab', fragmento de región cristalizable (Fc), fragmento variable de cadena simple (scFV), di-scFv, inmunoglobulina de dominio único, inmunoglobulina trifuncional, F(ab')2 unida químicamente, y cualquier combinación o fragmentos de los mismos. Las regiones sin anticuerpos incluyen, pero no se limitan a, carbohidratos, lípidos, moléculas pequeñas y péptidos terapéuticos. La región del anticuerpo puede comprender una o más unidades conectadas por uno o más enlaces disulfuro. La región del anticuerpo puede comprender una o más unidades conectadas por un enlazador peptídico, por ejemplo, una inmunoglobulina scFv. La inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina recombinante que incluye inmunoglobulinas con mutaciones, sustituciones y/o deleciones de aminoácidos. La inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina recombinante que comprende modificaciones químicas. La inmunoglobulina puede comprender una parte o la totalidad de un conjugado de inmunoglobulina-fármaco.

[0135] La región de anticuerpo puede comprender al menos una porción de una cadena pesada de inmunoglobulina. La región del anticuerpo puede comprender una o más cadenas pesadas de inmunoglobulina o una porción de la misma. La región del anticuerpo puede comprender dos o más cadenas pesadas de inmunoglobulina o una porción de las mismas. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a una cadena pesada de inmunoglobulina. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homóloga a una inmunoglobulina cadena pesada. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a una cadena pesada de inmunoglobulina. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a una cadena pesada de inmunoglobulina. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 90% homóloga a una cadena pesada de inmunoglobulina. La cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 22-27 y 29-35. En algunas realizaciones, la región de anticuerpos comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 22-27 y 29-35. En algunas realizaciones, la región de anticuerpos comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% idéntica a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 22-27 y 29-35.

[0136] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos de una cadena de inmunoglobulina pesada. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900 o más aminoácidos de una cadena pesada de inmunoglobulina. Los aminoácidos pueden ser consecutivos. Alternativamente, o adicionalmente, los aminoácidos no son consecutivos.

[0137] La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos basada o derivada de SEQ ID NOs: 4-9 y 11-17. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a las SEQ ID NO: 4-9 y 11-17. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homóloga a SEQ ID NOs: 4-9 y 11-17. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 75% homóloga a las SEQ ID NO: 4-9 y 11-17. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 85% homóloga a las SEQ ID NO: 4-9 y 11-17. En algunas realizaciones, la región del anticuerpo está codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97 % homóloga a una secuencia de nucleótidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 4-9 y 11-17. En algunas realizaciones, la región del anticuerpo está codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97 % idéntica a una secuencia de nucleótidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 4-9 y 11-17.

[0138] La región de anticuerpo puede comprender al menos una porción de una cadena ligera de inmunoglobulina. La región del anticuerpo puede comprender una o más cadenas ligeras de inmunoglobulina o una porción de la misma. La región del anticuerpo puede comprender dos o más cadenas ligeras de inmunoglobulina o una porción de la misma. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a una cadena ligera de inmunoglobulina. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homóloga a unacadena de luz de inmunoglobulina. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a una cadena ligera de inmunoglobulina. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a una cadena ligera de inmunoglobulina. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidosque es al menos aproximadamente 90% homóloga a una cadena ligera de inmunoglobulina. La cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-21, 28 y 36. En algunas realizaciones, la región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-21, 28 y 36. En algunas realizaciones, la región del anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% idéntica a una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NOs: 19-21, 28, y 36.

[0139] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos de una cadena ligera de inmunoglobulina. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900 o más aminoácidos de una cadena ligera de inmunoglobulina. Los aminoácidos pueden ser consecutivos. Alternativamente, o adicionalmente, los aminoácidos son no consecutivos.

[0140] La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos basada o derivada de SEQ ID NOs: 1-3, 10 y 18. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a SEQ ID NOs: 1-3, 10 y 18. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homólogos a las SEQ ID NO: 1 3, 10 y 18. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 75% homóloga a la SEQ ID NO: 1-3, 10 y 18. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 85% homóloga a las SEQ ID NO: 1-3, 10 y 18. En algunas realizaciones, el anticuerpo la región está codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a una secuencia de nucleótidos de cualquiera de los SEQ ID NOs: 1-3, 10 y 18. En algunas realizaciones, la región del anticuerpo está codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% a una secuencia de nucleótidos de una cualquiera de SEQ ID NOs: 1 3, 10 y 18.

[0141] La región de anticuerpo puede comprender al menos una porción de un dominio variable. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios variables o porciones de los mismos. La región del anticuerpo puede comprender 2, 3, 4, 5 o más dominios variables o porciones de los mismos. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 225, 250, 275, 300, 350, 400, 500 o más aminoácidos basados o derivados de una secuencia de aminoácidos de uno o más dominios variables. Los aminoácidos pueden ser consecutivos. Los aminoácidos pueden ser no consecutivos.

[0142] La región de anticuerpo puede comprender al menos una porción de un dominio constante. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios constantes o porciones de los mismos. La región del anticuerpo puede comprender 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más dominios constantes o porciones de los mismos. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 225, 250, 275, 300, 350, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1200, 1400 o más aminoácidos basados o derivados de una secuencia de aminoácidos de uno o más dominios constantes. Los aminoácidos pueden ser consecutivos. Los aminoácidos pueden ser no consecutivos.

[0143] La región de anticuerpo puede comprender al menos una porción de una región determinante de complementariedad (CDR), en donde una región no de anticuerpo que comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor de la formación de una espiral anti-paralela de la espiral se inserta en el CDR y puede reemplazar una parte de la CDR. La región de anticuerpo puede comprender una o más regiones determinantes de complementariedad (CDR) o porciones de la misma. La región de anticuerpo puede comprender 2, 3, 4, 5 o más regiones determinantes de complementariedad (CDR) o porciones de las mismas. La región de anticuerpo puede comprender 6, 7, 8 o más regiones determinantes de complementariedad (CDR) o porciones de las mismas. La región de anticuerpo puede comprender cuatro o más regiones determinantes de complementariedad (CDR) o porciones de las mismas. La región de anticuerpo puede comprender 9, 10, 11 o más regiones determinantes de complementariedad (CDR) o porciones de las mismas. La una o más CDR pueden ser CDR1, CDR2, CDR3 o una combinación de las mismas. La una o más CDR pueden ser CDR1. La una o más CDR pueden ser CDR2. La una o más CDR pueden ser CDR3. La CDR puede ser una CDR de cadena pesada. La una o más CDR pueden ser una CDR de cadena ligera.

[0144] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más aminoácidos basados en o derivados de una secuencia de aminoácidos de una CDR. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 3 o más aminoácidos basados en o derivados de una secuencia de aminoácidos de una CDR. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 5 o más aminoácidos basados en o derivados de una secuencia de aminoácidos de una CDR. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10 o más aminoácidos basados en o derivados de una secuencia de aminoácidos de una CDR. Los aminoácidos pueden ser consecutivos. Los aminoácidos pueden ser no consecutivos.

[0145] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de al menos una porción de una inmunoglobulina del receptor de células anti-T. La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de al menos una porción de una inmunoglobulina anti-receptor de células B.

[0146] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de al menos una porción de una inmunoglobulina de células co-receptor anti-T. La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de al menos una porción de una inmunoglobulina anti-CD3. La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de una inmunoglobulina anti-CD3. La inmunoglobulina anti-CD3 puede ser UCHT1. La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de al menos una porción de un fragmento Fab de una inmunoglobulina anti-CD3. La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de un fragmento de inmunoglobulina de una inmunoglobulinaanti-CD3.

[0147] La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de una inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina que se une a al menos una porción de un receptor en una célula. La región del anticuerpo puede estar basada o derivada de una inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina que se une a al menos una porción de un correceptor en una célula. La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de una inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina que se une a al menos una porción de un antígeno o marcador de superficie celular en una célula. La célula puede ser una célula hematopoyética. La célula hematopoyética puede ser una célula mieloide. La célula mieloide puede ser un eritrocito, trombocito, neutrófilo, monocito, macrófago, eosinófilo, basófilo o mastocito. La célula hematopoyética puede ser una célula linfoide. La célula linfoide puede ser una célula B, una célula T o una célula NK. La célula hematopoyética puede ser un leucocito. La célula hematopoyética puede ser un linfocito.

[0148] La región de anticuerpo puede basarse en o derivarse de un fragmento de inmunoglobulina o de inmunoglobulina que se une a al menos una parte de un receptor en una célula T. El receptor puede ser un receptor de células T (TCR). El TCR puede comprender TCR alfa, TCR beta, TCR gamma y/o TCR delta. El receptor puede ser un receptor zeta de células T.

[0149] La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de una inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina que se une a al menos una porción de un receptor en un linfocito, célula B, macrófago, monocitos, neutrófilos y/o células NK. El receptor puede ser un receptor Fc. El receptor Fc puede ser un receptor Fc-gamma, un receptor Fcalfa y/o un receptor de Fc-epsilon. Los receptores Fc-gamma incluyen, entre otros, FcyRI (CD64), FcyRIIIA (CD32), FcyRiIIB (CD32), FcyRIIIIA (CD16a) y FcyRIIIIB (CD16b). Los receptores Fc-alfa incluyen, pero no se limitan a, FcaRI. Los receptores de Fc-épsilon incluyen, pero no se limitan a, FcsRI y FcsRII. El receptor puede ser CD89 (fragmento Fc del receptor de IgA o FCAR).

[0150] La región de anticuerpo puede basarse o derivarse de una inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina que se une al menos a una porción de un correceptor en una célula T. El correceptor puede ser un CD3, CD4 y/o CD8. La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de un fragmento de inmunoglobulina que se une a un correceptor CD3. El coreceptor CD3 puede comprender CD3-gamma, CD3-delta y/o CD3-epsilon. CD8 puede comprender cadenas CD8-alfa y/o CD8-beta.

[0151] En algunas realizaciones, la región de anticuerpo no es específica para un objetivo mamífero. En algunas realizaciones, la inmunoglobulina es una inmunoglobulina antiviral. En algunas realizaciones, la inmunoglobulina es una inmunoglobulina antibacteriana. En algunas realizaciones, la inmunoglobulina es una inmunoglobulina antiparasitaria. En algunas realizaciones, la inmunoglobulina es una inmunoglobulina antifúngica. En algunas realizaciones, la región del anticuerpo se deriva de una vacuna de inmunoglobulina.

[0152] En algunas realizaciones, la región de anticuerpos se basa o se deriva de inmunoglobulinas que incluyen, pero no se limitan a, actoxumab, bezlotoxumab, CR6261, edobacomab, efungumab, exbivirumab, felvizumab, foravirumab, ibalizumab (TMB-355, TNX-355), libivirumab, motavizumab, nebacumab, pagibaximab, palivizumab, panobacumab, rafivirumab, raxibacumab, regavirumab, sevirumab (MSL-109), suvizumab, tefibazumab, tuvirumab y urtoxazumab.

[0153] En algunas realizaciones, la región de anticuerpos se basa o se deriva de inmunoglobulinas dirigidas a Clostridium difficile, Ortomixovirus (Influenzavirus A, Influenzavirus B, Influenzavirus C, Isavirus, Thogotovirus), Escherichia coli, Candida, Rabia, Virus de Inmunodeficiencia Humana, Hepatitis Staphylococcus, Virus sincitial respiratorio, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus anthracis, Citomegalovirus o Staphylococcus aureus.

[0154] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de una inmunoglobulina anti-viral. La inmunoglobulina antiviral se puede dirigir contra un epítopo de una proteína viral. La inmunoglobulina antibacteriana puede atacar a uno o más virus, incluidos, entre otros, adenovirus, herpesvirus, poxvirus, parvovirus, reovirus, picornavirus, togavirus, ortomixovirus, rabdovirus, retrovirus y hepadnavirus. La proteína viral puede ser de un virus sincitial respiratorio. La proteína viral puede ser una proteína F del virus sincitral respiratorio. El epítopo puede estar en el sitio antigénico A de la proteína F. La inmunoglobulina antiviral puede basarse o derivarse de palivizumab. La inmunoglobulina puede basarse o derivarse de una vacuna antiviral. La inmunoglobulina antiviral puede estar basada o derivada de exbivirumab, foravirumab, libivirumab, rafivirumab, regavirumab, sevirumab, tuvirumab, felvizumab, motavizumab, palivizumab y/o suvizumab.

[0155] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de una inmunoglobulina anti-viral G. La región de anticuerpo puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina anti-viral G. La región de anticuerpo puede comprender un aminoácido de secuencia que es al menos aproximadamente 50% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G antiviral. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homólogos a al menos una porción de una inmunoglobulina Gantiviral. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina antiviral G. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G antiviral. En algunas realizaciones, la región del anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una inmunoglobulina antiviral M.

[0156] La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antiviral. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antiviral. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antiviral. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antiviral. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antiviral.

[0157] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de una inmunoglobulina palivizumab. La región de anticuerpos puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina de palivizumab. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina de palivizumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina palivizumab. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina de palivizumab. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina de palivizumab.

[0158] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de palivizumab. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de palivizumab. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de palivizumab. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de palivizumab. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de palivizumab.

[0159] La región de anticuerpos puede basarse o derivarse de inmunoglobulina de exbivirumab, foravirumab, libivirumab, rafivirumab, regavirumab, sevirumab, tuvirumab, felvizumab, motavizumab, palivizumab y/o suvizumab. La región de anticuerpos puede comprender al menos una porción deinmunoglobulina de exbivirumab, foravirumab, libivirumab, rafivirumab, regavirumab, sevirumab, tuvirumab, felvizumab, motavizumab, palivizumab y/o suvizumab. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a al menos una porción de un exbivirumab, foravirumab, libivirumab, rafivirumab, regavirumab, sevirumab, tuvirumab, felvizumab, motavizumab, palivizumab y/o suvbulinumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homologa a al menos una porción de inmunoglobulina de exbivirumab, foravirumab, libivirumab, rafivirumab, regavirumab, sevirumab, tuvirumab, felvizumab, motavizumab, palivizumab y/o suvizumab. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a al menos una porción de un exbivirumab, foravirumab, libivirumab, rafivirumab, regavirumab, sevirumab, tuvirumab, felvizumab, motavizumab, palivizumab y/o suvbulinumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a al menos una porción de un exbivirumab, foravirumab, libivirumab, rafivirumab, regavirumab, sevirumab, tuvirumab, felvizumab, motavizumab, palivizumab y/o suvbulinumab.

[0160] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende de 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de exbivirumab, foravirumab, libivirumab, rafivirumab, regavirumab, sevirumab, tuvirumab, felvizumab, motavizumab, palivizumab y/o suvizumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o más aminoácidos de un exbivirumab, foravirumab, libivirumab, rafivirumab, regavirumab, sevirumab, tuvirumab, felvizumab, secuencia de inmunoglobulina motavizumab, palivizumab y/o suvizumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de exbivirumab, foravirumab, libivirumab, rafivirumab, regavirumab, sevirumab, tuvirumab, felvizumab, motavizumab, palivizumab y/o suvizumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de exbivirumab, foravirumab, libivirumab, rafivirumab, regavirumab, sevirumab, tuvirumab, felvizumab, motavizumab, palivizumab y/o suvizumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de exbivirumab, foravirumab, libivirumab, rafivirumab, regavirumab, sevirumab, tuvirumab, felvizumab, motavizumab, palivizumab y/o suvizumab.

[0161] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de una inmunoglobulina anti-bacteriana. La inmunoglobulina antibacteriana puede dirigirse contra un epítopo de una proteína bacteriana. La inmunoglobulina antibacteriana puede atacar bacterias que incluyen, entre otras, Acetobacter aurantius, Agrobacterium radiobacter, Anaplasma phagocytophilum,Azorhizobium caulinodans, Bacillus anthracis, Bacillus brevis, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,Bacteroides gingivalis, Bacteroides melaninogenicus, Bartonella quintana, Bordetella bronchiseptica, Bordetella pertussis, Borrelia burgdorferi, Brucella abortus, Brucella melitensis, Brucella suis, Burkholderia mallei, Burkholderia pseudomallei, Burkholderia cepacia, Calymmatobacterium granulomatis, Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Campylobacter pylori, Chlamydia trachomatis, Chlamydophila pneumoniae, Chlamydophila psittaci,Clostridium botulinum, Clostridium difficile, Corynebacterium diphtheriae, Corynebacterium fusiforme, Coxiella burnetii,Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Enterococcus galllinarum, Enterococcus maloratus, Escherichia coli, Francisella tularensis, Fusobacterium nucleatum, Gardnerella vaginalis, Haemophilus influenzae,Haemophilus parainfluenzae, Haemophilus pertussis, Haemophilus vaginalis, Helicobacter pylori, Klebsiella pneumoniae, Lactobacillus acidophilus, Lactococcus lactis, Legionella pneumophila, Listeria monocytogenes, Methanobacteriumextroquens, Microbacterium multiforme, Micrococcus luteus, Moraxella catarrhalis, Mycobacterium phlei, Mycobacteriumsmegmatis, Mycobacterium tuberculosis, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Mycoplasma pneumonie, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, Pasteurella multocida, Pasteurella tularensis, Peptostreptococcus, Porphyromonas gingivalis, Prevotella melaninogenica, Pseudomonas aeruginosa, Rhizobium radiobacter, Rickettsia rickettsii,Rothia dentocariosa, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Shigella dysenteriae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Stenotrophomonas maltophilia, Streptococcus pneumoniae, Streptococcuspyogenes, Treponema pallidum, Treponema denticola, Vibrio cholerae, Vibrio comma, Vibrio parahaemolyticus, Vibriovulnificus, Yersinia enterocolitica yYersinia pseudotuberculosis. La inmunoglobulina puede basarse o derivarse de una vacuna bacteriana. La inmunoglobulina antiviral puede estar basada o derivada de nebacumab, panobacumab, raxibacumab, edobacomab, pagibaximab y/o tefibazumab.

[0162] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de una inmunoglobulina anti-bacteriana G. La región de anticuerpo puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina anti-bacteriana G. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G antibacteriana. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homólogos a al menos una porción de una inmunoglobulina G antibacteriana. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina antibacteriana G. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G antibacteriana. En algunas realizaciones, la región del anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una inmunoglobulina antiviral M.

[0163] La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antibacteriana. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antibacteriana. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antibacteriana. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antibacteriana. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antibacteriana.

[0164] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de unainmunoglobulina de Nebacumab, Panobacumab, Raxibacumab, Edobacomab, Pagibaximab, y/o Tefibazumab. La región de anticuerpos puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina de nebacumab, panobacumab, raxibacumab, edobacomab, pagibaximab y/o tefibazumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina de nebacumab, panobacumab, raxibacumab, edobacomab, pagibaximab y/o tefibazumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homóloga a al menos una porción de nebacumab, panobacumab, raxibacumab, edobacomab, pagibaximab y/o inmunoglobulina tefibazumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina de nebacumab, panobacumab, raxibacumab, edobacomab, pagibaximab y/o tefibazumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina de nebacumab, panobacumab, raxibacumab, edobacomab, pagibaximab y/o tefibazumab.

[0165] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende de 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de nebacumab, panobacumab, raxibacumab, edobacomab, pagibaximab, y/o tefibazumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de nebacumab, panobacumab, raxibacumab, edobacomab, pagibaximab y/o tefibazumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de nebacumab, panobacumab, raxibacumab, edobacomab, pagibaximab y/o tefibazumab. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de nebacumab, panobacumab, raxibacumab, edobacomab, pagibaximab y/o tefibazumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de nebacumab, panobacumab, raxibacumab, edobacomab, pagibaximab y/o tefibazumab.

[0166] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de una inmunoglobulina antiparasitaria. La inmunoglobulina antiparasitaria se puede dirigir contra un epítopo de una proteína parasitaria. La inmunoglobulina antiparasitaria puede atacar a parásitos o proteínas de parásitos, incluidos, entre otros, los parásitos Acanthamoeba, Balamuthia mandrillaris, Babesia (B. divergens, B. bigemina, B. equi, B. microfti, B. duncani), Balantidium coli, Blastocystis, Cryptosporidium, Dientamoeba fragilis, Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, belli Isospora, Leishmania, Naegleria fowleri, Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale curtisi, Plasmodium ovale wallikeri, Plasmodium malariae, Plasmodium knowlesi, Rhinosporidium seeberi, Sarcocystis bovihominis, suihominis Sarcocystis, Toxoplasma gondii, Trichomonas vaginalis, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Cestoda, Taenia multiceps, Diphyllobothrium latum, Echinococcus granulosus, Echinococcus multilocularis, Echinococcus vogeli, Echinococcus oligarthrus, Hymenolepis nana, Hymenolepisdiminuta, Taenia saginata, Taenia solium, Bertiella mucronata, Bertiella studeri, Spirometra erinaceieuropaei, Clonorchissinensis; Clonorchis viverrini, Dicrocoelium dendriticum, Fasciola hepatica, Fasciola gigantica, Fasciolopsis buski, Gnathostoma spinigerum, Gnathostoma hispidum, Metagonimus yokogawai, Opisthorchis viverrini, Opisthorchis felineus,Clonorchis sinensis, Paragonimus westermani; Paragonimus africanus; Paragonimus caliensis; Paragonimus kellicotti;Paragonimus skrjabini; Paragonimus uterobilateralis, Schistosoma sp., Schistosoma mansoni, Schistosoma haematobium, Schistosoma j aponicum, Schistosoma mekongi, Echinostoma echinatum, Trichobilharzia regenti, Schistosomatidae, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Angiostrongylus costaricensis, Anisakis, Ascaris sp. Ascaris lumbricoides, Baylisascaris procyonis, Brugia malayi, Brugia timori, Dioctophyme renale, Dracunculus medinensis, Enterobius vermicularis, Enterobius gregorii, Halicephalobus gingivalis, Loa filaria, Mansonella streptocerca, Onchocercavolvulus, Strongyloides stercoralis, Thelazia californiensis, Thelazia callipaeda, Toxocara canis, Toxocara cati, Trichinella spiralis, Trichinella britovi, Trichinella nelsoni, Trichinella nativa, Trichuris trichiura, Trichuris vulpis, Wuchereria bancrofti, Archiacanthocephala, Moniliformis moniliformis, Linguatula serrata, Oestroidea, Calliphoridae, Sarcophagidae,Tunga penetrans, Dermatobia hominis, Ixodidae, Argasidae, Cimex lectularius, Pediculus humanus, Pediculus humanuscorporis, Pthirus pubis, Demodex folliculorum/brevis/canis, Sarcoptes scabiei, Cochliomyia hominivorax y Pulex irritans.

[0167] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de una inmunoglobulina antiparasitaria G. La región de anticuerpo puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina antiparasitaria G. La región de anticuerpo puede comprender un aminoácido de secuencia que es al menos aproximadamente 50% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G antiparasitaria. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homólogos a al menos una porción de una inmunoglobulina G antiparasitaria. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G antiparasitaria. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G antiparasitaria. En algunas realizaciones, la región del anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una inmunoglobulina M antiparasitaria.

[0168] La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antiparasitaria. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antiparasitaria. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antiparasitaria. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antiparasitaria. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antiparasitaria.

[0169] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de una inmunoglobulina anti-hongos. La inmunoglobulina antibacteriana puede dirigirse contra un epítopo de una proteína fúngica. La inmunoglobulina antifúngica puede atacar hongos o proteínas fúngicas que incluyen, pero no se limitan a, Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii, Candida albicans, Candidatropicalis, Candida stellatoidea, Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candidaviswanathii, Candida lusitaniae, Rhodotorula mucilaginosa, Schizosaccharomyces pombe, Saccharomyces cerevisiae,Brettanomyces bruxellensis, Candida stellata, Schizosaccharomyces pombe, Torulaspora delbrueckii, Zygosaccharomyces bailii, Yarrowia lipolytica, Saccharomyces exiguus yPichia pastoris. La inmunoglobulina antifúngica puede basarse o derivarse de efungumab.

[0170] La región de anticuerpo puede basarse o derivarse de una inmunoglobulina G. antifúngica. La región de anticuerpo puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina G antifúngica. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G antifúngica. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homólogos a al menos una porción de una inmunoglobulina G antifúngica. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G antifúngica. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G antifúngica. En algunas realizaciones, la región del anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una inmunoglobulina M antifúngica.

[0171] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antifúngica. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antifúngica. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antifúngica. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antifúngica. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G antifúngica.

[0172] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de una inmunoglobulina de efungumab. La región de anticuerpo puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina de efungumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidosque es al menos aproximadamente 50% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina de efungumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina de efungumab. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina de efungumab. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina de efungumab.

[0173] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de efungumab. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de efungumab. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de efungumab. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de efungumab. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina de efungumab.

[0174] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de unainmunoglobulina G de trastuzumab. La región del anticuerpo puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina G de trastuzumab. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G de trastuzumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G de trastuzumab. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G de trastuzumab. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina G de trastuzumab. La región de anticuerpo puede comprender un anticuerpo de trastuzumab mutado. La región de anticuerpos puede comprender un anticuerpo contra trastuzumab que comprende una mutación heptada en la cadena pesada de IgG1. La región de anticuerpos puede comprender un anticuerpo contra trastuzumab que comprende una mutación triple en la cadena pesada de IgG4.

[0175] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G de trastuzumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G de trastuzumab. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G de trastuzumab. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G de trastuzumab. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina G de trastuzumab.

[0176] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de una inmunoglobulina anti-Her2. La región del anticuerpo puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina anti-Her2. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina anti-Her2. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina anti-Her2. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina anti-Her2. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina antiHer2.

[0177] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina anti-Her2. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina anti-Her2. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina anti-Her2. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina anti-Her2. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina anti-Her2.

[0178] La región de anticuerpo puede estar basada en o derivada de una inmunoglobulina anti-CD47. La región del anticuerpo puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina anti-CD47. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina anti-CD47. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% o 97% o más homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina anti-CD47. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina anti-CD47. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a al menos una porción de una inmunoglobulina antiCD47.

[0179] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina anti-CD47. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o más aminoácidos de unasecuencia de inmunoglobulina anti-CD47. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina anti-CD47. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina anti-CD47. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos de una secuencia de inmunoglobulina anti-CD47.

[0180] La región de anticuerpo puede basarse o derivarse de una inmunoglobulina anticancerígena. Los ejemplos de anti-cáncer de inmunoglobulina incluyen, pero no se limitan a, abciximab, adalimumab, alemtuzumab, basiliximab, belimumab, bevacizumab, brentuximab, canakinumab, certolizumab, cetuximab, daclizumab, denosumab, eculizumab, efalizumab, gemtuzumab, golimumab, ibritumomab, infliximab, ipilimumab, muromonab-cd3, natalizumab, ofatumumab, omalizumab, palivizumab, panitumumab, ranibizumab, rituximab, tocilizumab, tositumomab, trastuzumab.

[0181] La región de anticuerpo puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina humana. La región del anticuerpo puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina humanizada. La región del anticuerpo puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina quimérica. La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de una inmunoglobulina humana. La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de una inmunoglobulina humanizada. La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de una inmunoglobulina quimérica. La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de una inmunoglobulina monoclonal. La región del anticuerpo puede basarse o derivarse de una inmunoglobulina policlonal. La región de anticuerpos puede comprender al menos una porción de una inmunoglobulina de un mamífero, ave, reptil, anfibio o una combinación de los mismos. El mamífero puede ser un humano. El mamífero puede ser un primate no humano. El mamífero puede ser un perro, gato, oveja, cabra, vaca, conejo o ratón.

[0182] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia basada en o derivada de una o más de inmunoglobulina y/o secuencias de fragmentos de inmunoglobulina. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia que es al menos aproximadamente 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% o más homólogos a una secuencia basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia que es al menos aproximadamente 70% homóloga a una secuencia basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia que es al menos aproximadamente 80% homóloga a una secuencia basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia que es al menos aproximadamente 90% homóloga a una secuencia basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia que es al menos aproximadamente 95% homóloga a una secuencia basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina. La secuencia puede ser una secuencia peptídica. La secuencia puede ser una secuencia de nucleótidos.

[0183] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de péptidos que difiere de una secuencia de péptidos basados en o derivados de uno o más de inmunoglobulina y/o fragmentos de inmunoglobulina por menos de o igual a aproximadamente 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 17, 15, 12, 10, 8, 6, 5, 4 o menos aminoácidos. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia peptídica que difiere de una secuencia peptídica basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de o igual a aproximadamente 4 o menos aminoácidos. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia peptídica que difiere de una secuencia peptídica basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de o igual a aproximadamente 3 o menos aminoácidos. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia peptídica que difiere de una secuencia peptídica basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de o igual a aproximadamente 2 o menos aminoácidos. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia peptídica que difiere de una secuencia peptídica basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de o igual a aproximadamente 1 o menos aminoácidos. Los aminoácidos pueden ser consecutivos, no consecutivos o una combinación de los mismos. Por ejemplo, la región del anticuerpo puede comprender una secuencia peptídica que difiere de una secuencia peptídica basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de aproximadamente 3 aminoácidos consecutivos. Alternativamente, o adicionalmente, la región del anticuerpo puede comprender una secuencia peptídica que difiere de una secuencia peptídica basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de aproximadamente 2 aminoácidos no consecutivos. En otro ejemplo, la región de anticuerpo puede comprender una secuencia peptídica que difiere de una secuencia peptídica basada o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de aproximadamente 5 aminoácidos, en donde 2 de los aminoácidos son consecutivos y 2 de los aminoácidos no son consecutivos.

[0184] La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de nucleótidos que difiere de una secuencia de nucleótidos basada en o derivada de uno o más anticuerpos y/o fragmentos de inmunoglobulina en menos de o igual a aproximadamente 500, 400, 300, 200, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 o menos nucleótidos o pares de bases. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de nucleótidos que difiere de una secuencia de nucleótidos basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de o igual a aproximadamente 15 o menos nucleótidos o pares de bases. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de nucleótidos que difiere de una secuencia de nucleótidos basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de o igual a aproximadamente 12 o menos nucleótidos o pares de bases. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de nucleótidos que difiere de una secuencia de nucleótidos basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de o igual a aproximadamente 9 o menos nucleótidos o pares de bases. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de nucleótidosque difiere de una secuencia de nucleótidos basada o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos o igual a aproximadamente 6 o menos nucleótidos o pares de bases. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de nucleótidos que difiere de una secuencia de nucleótidos basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de o igual a aproximadamente 4 o menos nucleótidos o pares de bases. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de nucleótidos que difiere de una secuencia de nucleótidos basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de o igual a aproximadamente 3 o menos nucleótidos o pares de bases. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de nucleótidos que difiere de una secuencia de nucleótidos basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de o igual a aproximadamente 2 o menos nucleótidos o pares de bases. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de nucleótidos que difiere de una secuencia de nucleótidos basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de o igual a aproximadamente 1 o menos nucleótidos o pares de bases. Los nucleótidos o pares de bases pueden ser consecutivos, no consecutivos o una combinación de los mismos. Por ejemplo, la región de anticuerpos puede comprender una secuencia de nucleótidos que difiere de una secuencia de nucleótidos basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de aproximadamente 3 nucleótidos consecutivos o pares de bases. Alternativamente, o adicionalmente, la región del anticuerpo puede comprender una secuencia de nucleótidos que difiere de una secuencia de nucleótidos basada en o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de aproximadamente 2 nucleótidos o pares de bases no consecutivos. En otro ejemplo, la región de anticuerpos puede comprender una secuencia de nucleótidos que difiere de una secuencia de nucleótidos basada o derivada de uno o más fragmentos de inmunoglobulina y/o inmunoglobulina en menos de aproximadamente 5 nucleótidos o pares de bases, en donde 2 de los nucleótidos o pares de bases son consecutivos y 2 de los nucleótidos o pares de bases no son consecutivos.

[0185] La secuencia del péptido de la región de anticuerpo puede diferir de la secuencia peptídica de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina que se basa en y/o se deriva de una o más sustituciones de aminoácidos. La secuencia peptídica de la región del anticuerpo puede diferir de la secuencia peptídica de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de dos o más sustituciones de aminoácidos. La secuencia peptídica de la región del anticuerpo puede diferir de la secuencia peptídica de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de tres o más sustituciones de aminoácidos. La secuencia peptídica de la región del anticuerpo puede diferir de la secuencia peptídica de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de cuatro o más sustituciones de aminoácidos. La secuencia peptídica de la región del anticuerpo puede diferir de la secuencia peptídica de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de cinco o más sustituciones de aminoácidos. La secuencia peptídica de la región del anticuerpo puede diferir de la secuencia peptídica de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de seis o más sustituciones de aminoácidos. La secuencia peptídica de la región del anticuerpo puede diferir de la secuencia peptídica de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 15, 17, 20, 25 o más sustituciones de aminoácidos. La secuencia peptídica de la región del anticuerpo puede diferir de la secuencia peptídica de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva en aproximadamente 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 80-90, 90-100, 100-150, 150-200, 200-300 o más sustituciones de aminoácidos.

[0186] La secuencia de nucleótidos de la región de anticuerpos puede diferir de la secuencia de nucleótidos de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de uno o más sustituciones de nucleótidos y/o pares de bases. La secuencia de nucleótidos de la región del anticuerpo puede diferir de la secuencia de nucleótidos de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de dos o más sustituciones de nucleótidos y/o pares de bases. La secuencia de nucleótidos de la región de anticuerpos puede diferir de la secuencia de nucleótidos de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de tres o más sustituciones de nucleótidos y/o pares de bases. La secuencia de nucleótidos de la región de anticuerpos puede diferir de la secuencia de nucleótidos de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de cuatro o más sustituciones de nucleótidos y/o pares de bases. La secuencia de nucleótidos de la región de anticuerpos puede diferir de la secuencia de nucleótidos de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de cinco o más sustituciones de nucleótidos y/o pares de bases. La secuencia de nucleótidos de la región del anticuerpo puede diferir de la secuencia de nucleótidos de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de seis o más sustituciones de nucleótidos y/o pares de bases. La secuencia de nucleótidos de la región de anticuerpos puede diferir de la secuencia de nucleótidos de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de nueve o más sustituciones de nucleótidos y/o pares de bases. La secuencia de nucleótidos de la región del anticuerpo puede diferir de la secuencia de nucleótidos de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de doce o más sustituciones de nucleótidos y/o pares de bases. La secuencia de nucleótidos de la región del anticuerpo puede diferir de la secuencia de nucleótidos de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de quince o más sustituciones de nucleótidos y/o pares de bases. La secuencia de nucleótidos de la región del anticuerpo puede diferir de la secuencia de nucleótidos de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de dieciocho o más sustituciones de nucleótidos y/o pares de bases. La secuencia de nucleótidos de la región de anticuerpos puede diferir de la secuencia de nucleótidos de la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva de 20, 22, 24, 25, 27, 30 o más sustituciones de nucleótidos y/o pares de bases. La secuencia de nucleótidos de la región de anticuerpos puede diferir de la secuencia de nucleótidosde la inmunoglobulina o fragmento de inmunoglobulina en donde se basa y/o deriva en aproximadamente 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 90-100, 100-200, 200-300, 300-400 o más sustituciones de nucleótidos y/o pares de bases.

[0187] La región de anticuerpo puede comprender al menos aproximadamente 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más aminoácidos. La región de anticuerpos puede comprender al menos aproximadamente 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, 625, 650, 675, 700 o más aminoácidos. La región del anticuerpo puede comprender al menos aproximadamente 100 aminoácidos. La región del anticuerpo puede comprender al menos aproximadamente 200 aminoácidos. La región del anticuerpo puede comprender al menos aproximadamente 400 aminoácidos. La región del anticuerpo puede comprender al menos aproximadamente 500 aminoácidos. La región del anticuerpo puede comprender al menos aproximadamente 600 aminoácidos.

[0188] La región de anticuerpo puede comprender menos de aproximadamente 2000, 1900, 1800, 1700, 1600, 1500, 1400, 1300, 1200 u 1100 aminoácidos. La región del anticuerpo puede comprender menos de aproximadamente 1000, 950, 900, 850, 800, 750 o 700 aminoácidos. La región del anticuerpo puede comprender menos de aproximadamente 1500 aminoácidos. La región del anticuerpo puede comprender menos de aproximadamente 1000 aminoácidos. La región del anticuerpo puede comprender menos de aproximadamente 800 aminoácidos. La región del anticuerpo puede comprender menos de aproximadamente 700 aminoácidos.

[0189] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender además una región de anticuerpo que comprende 30 o menos aminoácidos consecutivos de una región determinante de complementariedad 3 (CDR3). La región de anticuerpos puede comprender 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 15 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región de anticuerpo puede comprender 14 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 13 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 12 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 11 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 10 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 9 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 8 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 7 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 6 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 5 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 4 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 3 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 2 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La región del anticuerpo puede comprender 1 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. En algunos casos, la región del anticuerpo no contiene una CDR3.

[0190] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una primera región de anticuerpo que comprende 6 o menos aminoácidos consecutivos de una región determinante de complementariedad 3 (CDR3). La primera región de anticuerpo puede comprender 5 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La primera región de anticuerpo puede comprender 4 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La primera región de anticuerpo puede comprender 3 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La primera región de anticuerpo puede comprender 2 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La primera región de anticuerpo puede comprender 1 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. En algunos casos, la primera región de anticuerpos no contiene una CDR3.

[0191] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender además una segunda región de anticuerpo que comprende 30 o menos aminoácidos consecutivos de una región determinante de complementariedad 3 (CDR3). La segunda región de anticuerpos puede comprender 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender

menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender 9 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender 8 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender 7 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender 6 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender 5 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender 4 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender 3 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender 2 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. La segunda región de anticuerpo puede comprender 1 o menos aminoácidos consecutivos de una CDR3. En algunos casos, la segunda región de anticuerpos no contiene una CDR3.

[0192] La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácido que se basa en o se deriva de una cualquiera de SEQ ID NOs: 19-36 y 271-273. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO 19 -36 y 271-273. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. La región de anticuerpospuede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO 19-36 y 271-273. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que es 100% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. En algunas realizaciones, la región de anticuerpos comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. En algunas realizaciones, la región de anticuerpos comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% idéntica a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273.

[0193] La región del anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 450, 500 o más aminoácidos basados en o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. La región de anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. La región de anticuerpos puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos basados en cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. Los aminoácidos pueden ser consecutivos. Alternativamente, o adicionalmente, los aminoácidos son no consecutivos. En algunas realizaciones, la región de anticuerpos puede comprender aminoácidos derivados de una cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273 y aminoácidos no derivados de una cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273. En algunas realizaciones, la región de anticuerpo puede comprender aminoácidos derivados de uno o más de SEQ ID NO: 19-36 y 271-273 y aminoácidos no derivados de cualquiera de SEQ ID NO: 19-36 y 271 273. En algunas realizaciones, la región del anticuerpo comprende aminoácidos derivados de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273.

[0194] La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que se basa o se deriva de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO : 1-18 y 268-270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 1 18 y 268-270. La región de anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 70% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es 100% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270.

[0195] La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1- 18 y 268 270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 450, 500 o más nucleótidos basados en o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. La región de anticuerpos puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 1100, 1200, 1300, 1400, 1500 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 100 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 500 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 1000 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. La región del anticuerpo puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende 1300 o más nucleótidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. Los nucleótidos pueden ser consecutivos. En algunas realizaciones, la región del anticuerpo está codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende nucleótidos derivados de una cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270 y nucleótidos no derivados de una cualquiera de las SEQ ID NO: 1-18 y 268-270. En algunas realizaciones, la región de anticuerpos está codificada por una secuencia de nucleótidos que comprende nucleótidos derivados de uno o más de SEQ ID NO: 1-18 y 268-270 y nucleótidos no derivados de cualquiera de SEQ ID NO: 1-18 y 268- 270. En algunas realizaciones, la región del anticuerpo está codificada por una secuencia de nucleótidos derivada de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más de SEQ ID NO: 1-18 y 268-270.

Región sin anticuerpo

[0196] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender una o más regiones sin anticuerpo. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender dos o más regiones sin anticuerpos. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más regiones sin anticuerpos.

[0197] Las dos o más regiones sin anticuerpos pueden estar unidas a una o más regiones de anticuerpos. Las dos o más regiones no anticuerpos pueden estar unidas a dos o más regiones de anticuerpos. Las dos o más regiones sin anticuerpos pueden estar unidas a una o más cadenas de inmunoglobulina. Las dos o más regiones sin anticuerpos pueden estar unidas a dos o más cadenas de inmunoglobulina. Las dos o más regiones sin anticuerpos pueden estar unidas a una o más subunidades dentro de una o más regiones de anticuerpos. Las dos o más regiones sin anticuerpos pueden estar unidas a dos o más subunidades dentro de una o más regiones de anticuerpos.

[0198] Las regiones que no son anticuerpos pueden comprender uno o más agentes terapéuticos. Las regiones sin anticuerpos pueden comprender dos o más agentes terapéuticos. Las regiones sin anticuerpos pueden comprender 3, 4, 5, 6, 7 o más agentes terapéuticos. Los agentes terapéuticos pueden ser diferentes. Los agentes terapéuticos pueden ser los mismos.

[0199] Las regiones que no son anticuerpos pueden comprender uno o más péptidos extendedores. Las regiones que no son anticuerpos pueden comprender dos o más péptidos extensores. Las regiones sin anticuerpos pueden comprender 3, 4, 5, 6, 7 o más péptidos extensores. Los péptidos extensores pueden ser diferentes. Los péptidos extensores pueden ser iguales. En algunas realizaciones, el péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una estructura secundaria alfa helicoidal, y el péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la región no anticuerpo. En algunas realizaciones, el péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la región no anticuerpo, y el péptido de extensor no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, la región de fusión de extensor comprende dos péptidos de extensor que forman una espiral enrollada. En algunos casos, la región no anticuerpo no comprende un péptido de extensor. El péptido de extensor puede conectar directamente un péptido terapéutico a una región de anticuerpo.

[0200] Las regiones sin anticuerpos pueden comprender uno o más enlazadores. Las regiones que no son anticuerpos pueden comprender dos o más enlazadores. Las regiones que no son anticuerpos pueden comprender 3, 4, 5, 6, 7 o más enlazadores. Los enlazadores pueden ser diferentes. Los enlazadores pueden ser iguales. El conector puede conectar directamente el agente terapéutico a la región del anticuerpo. El conector puede conectar el péptido terapéutico a un péptido de extensor. En algunos casos, la región no anticuerpo no comprende un conector. En algunas realizaciones, el péptido de conexión no comprende aminoácidos que tienen estructura secundaria de cadena alfa helicoidal o beta.

[0201] Las regiones que no son anticuerpos pueden comprender uno o más sitios de escisión de proteasa. Las regiones que no son anticuerpos pueden comprender dos o más sitios de escisión de proteasa. Los sitios de escisión pueden ser diferentes. Los sitios de escisión pueden ser los mismos. El sitio de escisión puede estar conectado directamente al agente terapéutico a la región del anticuerpo. El sitio de escisión puede conectar el agente terapéutico a un péptido de conexión. El sitio de escisión puede conectar el agente terapéutico a un péptido de extensor. En algunas realizaciones, el agente terapéutico comprende un sitio de escisión de proteasa. En algunos casos, la región sin anticuerpos no comprende un sitio de escisión de proteasa.

[0202] Las regiones de fusión de extensor pueden comprender uno o más péptidos de conexión. Un péptido de conexión puede comprender un péptido de extensor. Un péptido de conexión puede comprender un péptido de conexión. Un péptido de conexión puede comprender un sitio de escisión de proteasa. Un péptido de conexión puede comprender cualquier secuencia de aminoácidos que estén configurados para conectar un agente terapéutico a una región de anticuerpo.

[0203] La región no anticuerpo puede insertarse en la región de anticuerpo. La inserción de la región sin anticuerpo en la región del anticuerpo puede comprender la eliminación o eliminación de una porción del anticuerpo en donde se basa o se deriva la región del anticuerpo. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una cadena pesada. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una cadena ligera. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una región V. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una región D. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una región J. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una región variable. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una región constante. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una región determinante de complementariedad (CDR). La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una CDR1. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una CDR2. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos una porción de una CDR3. La región sin anticuerpos puede reemplazar al menos aproximadamente 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más del anticuerpo o parte del mismo. Por ejemplo, la región no anticuerpo puede reemplazar al menos aproximadamente el 50% de una CDR. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos aproximadamente el 70% de una CDR. La región sin anticuerpos puede reemplazar al menos aproximadamente el 80% de una CDR. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos aproximadamente el 90% de una CDR. La región no anticuerpo puede reemplazar al menos aproximadamente el 95% de una CDR.

[0204] Las regiones no anticuerpo puede comprender (a) uno o más péptidos extensores; (b) uno o más agentes terapéuticos; (c) opcionalmente, uno o más enlazadores; y (d) opcionalmente, uno o más sitios de escisión proteolítica. En algunas realizaciones, el uno o más péptidos extensores comprenden secuencias de aminoácidos que tienen estructuras secundarias alfa helicoidales. En algunos casos, una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo y una región sin anticuerpo, en donde la región no anticuerpo comprende uno o más péptidos extensores que comprenden aminoácidos que tienen estructuras secundarias alfa helicoidales se denominan proteína de fusión de inmunoglobulina en espiral.

[0205] Las regiones no anticuerpo pueden comprender (a) uno o más enlazadores péptidos; (b) uno o más agentes terapéuticos; y (c) opcionalmente, uno o más sitios de escisión proteolítica. En algunas realizaciones, una región sin anticuerpos comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forman una espiral enrollada antiparalela, y el uno o más péptidos enlazadores no comprenden secuencias de aminoácidos que tienen estructuras secundarias de cadena alfa o helicoidal alfa. En algunos casos, una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo y una región que no es de anticuerpo, en donde uno o más péptidos enlazadores no comprenden secuencias de aminoácidos que tienen estructura secundaria de cadena alfa helicoidal o beta, se denomina proteína de fusión de inmunoglobulina directa.

[0206] En algunas realizaciones, una región sin anticuerpo comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y la región sin anticuerpo es una región de fusión de extensor.

Región de fusión de extensor

[0207] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender una o más regiones de fusión de extensor. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina pueden comprender dos o más regiones de fusión de extensor. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina pueden comprender 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más regiones de fusión de extensor.

[0208] Las dos o más regiones de fusión de extensor pueden unirse a una o más regiones de anticuerpo. Las dos o más regiones de fusión de extensor pueden estar unidas a dos o más regiones de anticuerpos. Las dos o más regiones de fusión de extensor pueden estar unidas a una o más cadenas de inmunoglobulina. Las dos o más regiones de fusión de extensor pueden estar unidas a dos o más cadenas de inmunoglobulina. Las dos o más regiones de fusión de extensor pueden estar unidas a una o más subunidades dentro de una o más regiones de anticuerpos. Las dos o más regiones de fusión de extensor pueden estar unidas a dos o más subunidades dentro de una o más regiones de anticuerpos.

[0209] Las regiones de fusión de extensor pueden comprender uno o más péptidos extensores. Las regiones de fusión de extensor pueden comprender dos o más péptidos de extensor. Las regiones de fusión de extensor pueden comprender 3, 4, 5, 6 o más péptidos de extensor. Los péptidos extensores pueden ser diferentes. Los péptidos extensores pueden ser iguales. En algunas realizaciones, el péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una estructura secundaria alfa helicoidal, y el péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la región de fusión del extensor. En algunas realizaciones, el péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor de la región de fusión del extensor, y el péptido de extensor no comprende aminoácidos que tienen una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, la región de fusión de extensor comprende dos péptidos de extensor que forman una espiral enrollada. En algunos casos, la región de fusión del extensor no comprende un péptido de extensor. En algunas realizaciones, el péptido de extensor conecta directamente un agente terapéutico a una región de anticuerpo.

[0210] Las regiones de fusión de extensor pueden comprender uno o más agentes terapéuticos. Las regiones de fusión del extensor pueden comprender dos o más agentes terapéuticos. Las regiones de fusión del extensor pueden comprender 3, 4, 5, 6, 7 o más agentes terapéuticos. Los agentes terapéuticos pueden ser diferentes. Los agentes terapéuticos pueden ser los mismos.

[0211] Las regiones de fusión de extensor pueden comprender uno o más enlazadores. Las regiones de fusión del extensor pueden comprender dos o más enlazadores. Las regiones de fusión del extensor pueden comprender 3, 4, 5, 6, 7 o más enlazadores. Los enlazadores pueden ser diferentes. Los enlazadores pueden ser iguales. El conector puede conectar un agente terapéutico a un péptido de extensor. El conector puede conectar un agente terapéutico directamente a una región de anticuerpo. En algunos casos, la región de fusión del extensor no comprende un conector. En algunas realizaciones, el péptido de conexión no comprende aminoácidos que tienen estructura secundaria de cadena alfa helicoidal o beta.

[0212] Las regiones de fusión de extensor pueden comprender uno o más sitios de escisión de proteasa. Las regiones de fusión del extensor pueden comprender dos o más sitios de escisión de proteasa. Los sitios de escisión pueden ser diferentes. Los sitios de escisión pueden ser los mismos. El sitio de escisión puede estar conectado directamente al agente terapéutico a la región del anticuerpo. El sitio de escisión puede conectar un agente terapéutico a un péptido de extensor. El sitio de escisión puede conectar un agente terapéutico a un péptido de conexión. En algunos casos, la región de fusión del extensor no comprende un sitio de escisión de proteasa.

[0213] Las regiones de fusión de extensor pueden comprender uno o más péptidos de conexión. Un péptido de conexión puede comprender un péptido de extensor. Un péptido de conexión puede comprender un péptido de conexión. Un péptido de conexión puede comprender un sitio de escisión de proteasa. Un péptido de conexión puede comprender cualquier secuencia de aminoácidos que estén configurados para conectar un agente terapéutico a una región de anticuerpo.

[0214] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede estar unida al extremo N, al extremo C o al extremo N y C de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede estar directamente unida a la región de fusión del extensor. Alternativamente, o adicionalmente, la región de anticuerpo puede estar unida indirectamente a la secuencia que no es de anticuerpo. La unión de la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo puede comprender la unión covalente. La unión puede comprender la fusión de la región de fusión del extensor con la región del anticuerpo. La conexión puede comprender la conjugación química.

[0215] Alternativamente, o adicionalmente, de fijación comprende la inserción de la región de fusión de extensoren el anticuerpo región. La región de fusión del extensor puede insertarse en una cadena pesada de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse en una cadena ligera de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse en un dominio variable de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse en un dominio constante de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse en una región determinante de complementariedad (CDR) de la región del anticuerpo.

[0216] La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos una porción de un anticuerpo del cual se basa o se deriva la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos una porción de una cadena pesada de un anticuerpo a partir del cual se puede basar o derivar la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos una porción de una cadena ligera de un anticuerpo del cual puede basarse o derivarse la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos una porción de un dominio variable de un anticuerpo del cual puede basarse o derivarse la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos una porción de un dominio variable de un anticuerpo del cual puede basarse o derivarse la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos una porción de una región determinante de la complementariedad (CDR) de un anticuerpo del cual puede basarse o derivarse la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos una porción de una CDR1, CDR2, CDR3, o una combinación de los mismos de un anticuerpo del cual el anticuerpo o fragmento del mismo puede estar basado o derivado. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos una porción de una CDR3 de un anticuerpo del que puede basarse o derivarse la región del anticuerpo.

[0217] La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o más aminoácidos de un anticuerpo del cual se basa o se deriva la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos aproximadamente 1 o más aminoácidos de un anticuerpo a partir del cual se basa o se deriva la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos aproximadamente 3 o más aminoácidos de un anticuerpo del cual se basa o se deriva la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede reemplazar al menos aproximadamente 5 o más aminoácidos de un anticuerpo en dondese basa o se deriva la región del anticuerpo.

[0218] La región de fusión del extensor puede comprender al menos aproximadamente 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 o más aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender al menos aproximadamente 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000 o más aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender al menos aproximadamente 10 o más aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender al menos aproximadamente 25 o más aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender al menos aproximadamente 50 o más aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender al menos aproximadamente 75 o más aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender al menos aproximadamente 100 o más aminoácidos.

[0219] La región de fusión del extensor puede comprender menos de aproximadamente 2000, 1500, 1000, 900, 800, 700, 600 o 500 aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender menos de aproximadamente 450, 400, 350, 300, 275, 250, 225, 200, 175, 150, 125, 100, 90, 80, 70, 60, 50 aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender menos de aproximadamente 400 aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender menos de aproximadamente 300 aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender menos de aproximadamente 250 aminoácidos.

[0220] La región de fusión del extensor puede comprender entre aproximadamente 10 y aproximadamente 1000 aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender entre aproximadamente 10 y aproximadamente 500 aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender entre aproximadamente 10 y aproximadamente 400 aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender entre aproximadamente 10 y aproximadamente 300 aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender entre aproximadamente 10 y aproximadamente 250 aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender entre aproximadamente 20 y aproximadamente 500 aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender entre aproximadamente 20 y aproximadamente 400 aminoácidos. La región de fusión del extensor puede comprender entre aproximadamente 20 y aproximadamente 300 aminoácidos.

[0221] Las regiones de fusión de extensor pueden comprender (a) uno o más péptidos de extensor; (b) uno o más agentes terapéuticos; (c) opcionalmente, uno o más enlazadores; y (d) opcionalmente, uno o más sitios de escisión proteolítica. Ejemplos de regiones de fusión de extensor se representan en la FIG. 2A-G. Por ejemplo, como se muestra en la FIG. 2A, una región de fusión de extensor comprende un péptido de extensor (210) y un agente terapéutico (220). Como se muestra en la FIG. 2B, una región de fusión de extensor comprende dos péptidos de extensor (210, 230) y un agente terapéutico (220). Como se muestra en la FIG. 2C, una región de fusión de extensor comprende un péptido de extensor (210) y un agente terapéutico (220) conectado por un conector (240). Como se muestra en la FIG. 2D, una región de fusión de extensor comprende un péptido de extensor (210) y un agente terapéutico (220) flanqueado por dos conectores (240, 250). Como se muestra en la FIG. 2E, una región de fusión de extensor comprende un péptido de extensor (210), un agente terapéutico (220) y un sitio de escisión proteolítica (260), en donde el sitio de escisión proteolítica (260) se inserta entre el péptido de extensor y el agente terapéutico. Como se muestra en la FIG. 2F, una región de fusión de extensor comprende dos péptidos de extensor (210, 230), dos conectores (240, 250) y un agente terapéutico (220). Como se muestra en la FIG. 2G, una región de fusión de extensor comprende dos péptidos de extensor (210, 230), dos conectores (240, 250), un sitio de escisión proteolítica (260) y un agente terapéutico (220).

[0222] Las regiones de fusión de extensor pueden comprender (a) un primer péptido de extensor, en donde el primer péptido de extensor comprende (i) una secuencia de aminoácidos que comprende una estructura secundaria de hélice alfa; y (ii) 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. Las regiones de fusión de extensor pueden comprender además uno o más péptidos de extensor adicionales que comprenden al menos una estructura secundaria. Las regiones de fusión del extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. Las regiones de fusión del extensor pueden comprender además uno o más sitios de escisión proteolítica.

[0223] Las regiones de fusión de extensor pueden comprender (a) un primer péptido de extensor, en donde el primer péptido de extensor comprende (i) una secuencia de aminoácidos que comprende un alfa estructura secundaria de hélice; y (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un primer agente terapéutico. Las regiones de fusión de extensor pueden comprender además uno o más péptidos de extensor adicionales que comprenden al menos una estructura secundaria. Las regiones de fusión del extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. Las regiones de fusión del extensor pueden comprender además uno o más sitios de escisión proteolítica.

[0224] Las regiones de fusión de extensor pueden comprender (a) uno o más péptidos de extensor; (b) uno o más agentes terapéuticos; (c) opcionalmente, uno o más enlazadores; y (d) opcionalmente, uno o más sitios de escisión proteolítica. En algunas realizaciones, el uno o más péptidos extensores comprenden secuencias de aminoácidos que tienen estructuras secundarias alfa helicoidales, y dos de uno o más péptidos extensores forman una espiral enrollada antiparalela. En algunos casos, una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo y una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende uno o más péptidos de extensor que comprenden aminoácidos que tienen estructuras secundarias alfa helicoidales, se denomina proteína de fusión de inmunoglobulina en espiral.

[0225] Las regiones de fusión de extensor pueden comprender (a) uno o más péptidos enlazadores; (b) uno o más agentes terapéuticos; y (c) opcionalmente, uno o más sitios de escisión proteolítica. En algunas realizaciones, la región de fusión del extensor comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y el uno o más péptidos enlazadores no comprenden secuencias de aminoácidos que tienen estructuras secundarias de cadena alfa helicoidal o beta. En algunos casos, una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo y una región de fusión de extensor, en donde el uno o más péptidos enlazadores no comprenden secuencias de aminoácidos que tienen estructura secundaria de cadena alfa helicoidal o beta, se denomina proteína de fusión de inmunoglobulina directa.

[0226] En algunas realizaciones, una región de fusión de extensor comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y la región de fusión de extensor no comprende aminoácidos basados o derivados de un anticuerpo. En algunos casos, una región de fusión de extensor es una región sin anticuerpos.

Péptido de extensor

[0227] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender uno o más péptidos extensores. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender dos o más péptidos extensores. El uno o más péptidos extensores pueden estar unidos al extremo N, al extremo C o los extremos N y C de un agente terapéutico. El uno o más péptidos extensores pueden estar unidos a cada extremo de un agente terapéutico. El uno o más péptidos extensores pueden estar unidos a diferentes extremos de un agente terapéutico.

[0228] La región de fusión de extensorde las proteínas de fusión de inmunoglobulina descrita en este documento puede comprender uno o más péptidos extendedores. La región de fusión del extensor puede comprender 2 o más péptidos extensores. La región de fusión del extensor puede comprender 3 o más péptidos extensores. La región de fusión del extensor puede comprender 4 o más péptidos extensores. La región de fusión del extensor puede comprender 5 o más péptidos extensores. La región de fusión del extensor puede comprender un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor.

[0229] El péptido de extensor puede comprender una o más estructuras secundarias. El péptido de extensor puede comprender dos o más estructuras secundarias. El péptido de extensor puede comprender 3, 4, 5, 6, 7 o más estructuras secundarias. Los dos o más péptidos extensores pueden comprender una o más estructuras secundarias. Los dos o más péptidos extensores pueden comprender dos o más estructuras secundarias. Los dos o más péptidos extensores pueden comprender 3, 4, 5, 6, 7 o más estructuras secundarias. Cada péptido de extensor puede comprender al menos una estructura secundaria. Las estructuras secundarias de los dos o más péptidos extensores pueden ser las mismas. Alternativamente, las estructuras secundarias de los dos o más péptidos extensores pueden ser diferentes.

[0230] Alternativamente, o adicionalmente, la una o más estructuras secundarias pueden comprender una o más hélices alfa. Los péptidos extensores pueden comprender dos o más hélices alfa. Por ejemplo, el primer péptido de extensor comprende una primera hélice alfa y el segundo péptido de extensor comprende una segunda hélice alfa. Los péptidos extensores pueden comprender 3, 4, 5, 6, 7 o más hélices alfa. Las dos o más hélices alfa pueden ser antiparalelas. Las dos o más hélices alfa pueden ser paralelas. Las dos o más hélices alfa pueden formar uno o más dominios en espiral.

[0231] El uno o más péptidos extensores pueden comprender al menos aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más aminoácidos. El uno o más péptidos extensores pueden comprender al menos aproximadamente 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, o 30 o más aminoácidos. El uno o más péptidos extensores pueden comprender al menos aproximadamente 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más aminoácidos.

[0232] El uno o más péptidos extensores pueden comprender menos de aproximadamente 100 aminoácidos. El uno o más péptidos extensores pueden comprender menos de aproximadamente 95, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55 o 50 aminoácidos. El uno o más péptidos extensores pueden comprender menos de aproximadamente 90 aminoácidos. El uno o más péptidos extensores pueden comprender menos de aproximadamente 80 aminoácidos. El uno o más péptidos extensores pueden comprender menos de aproximadamente 70 aminoácidos.

[0233] Los dos o más péptidos extensores pueden tener la misma longitud. Por ejemplo, el primer péptido de extensor y el segundo péptido de extensor tienen la misma longitud. Alternativamente, los dos o más péptidos extensores son de diferentes longitudes. En otro ejemplo, el primer péptido de extensor y el segundo péptido de extensor son de diferentes longitudes. Los dos o más péptidos extensores pueden diferir en longitud al menos aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más aminoácidos. Los dos o más péptidos extensores pueden diferir en longitud en al menos aproximadamente 1 o más aminoácidos. Los dos o más péptidos extensores pueden diferir en longitud en al menos aproximadamente 3 o más aminoácidos. Los dos o más péptidos extensores pueden diferir en longitud en al menos aproximadamente 5 o más aminoácidos.

[0234] El péptido de extensor puede ser adyacente a una región de anticuerpo. El péptido de extensor puede estar unido al extremo N, extremo C o N y extremo C de la región del anticuerpo. El péptido de extensor puede ser adyacente a una región no anticuerpo. El péptido de extensor puede estar unido al extremo N, extremo C o N y extremo C de la región no anticuerpo. El péptido de extensor puede ser adyacente a un agente terapéutico. El péptido de extensor puede estar unido al extremo N, al extremo C o al extremo N y C del agente terapéutico. El péptido de extensor puede ser adyacente a un conector. El péptido de extensor puede estar unido al extremo N, al extremo C o al extremo N y C del conector. El péptido de extensor puede ser adyacente a un sitio de escisión proteolítica. El péptido de extensor puede estar unido al extremo N, al extremo C o a los extremos N y C del sitio de escisión proteolítica.

[0235] El péptido de extensor puede conectar el agente terapéutico a la región del anticuerpo. El péptido de extensor puede estar entre la región del anticuerpo y el agente terapéutico, conector y/o sitio de escisión proteolítica. El péptido de extensor puede estar entre dos o más regiones de anticuerpos, agentes terapéuticos, enlazadores, sitios de escisión proteolítica o una combinación de los mismos. El péptido de extensor puede ser extremo N a la región del anticuerpo, agente terapéutico, el conector, el sitio de escisión proteolítica, o una combinación de los mismos. El péptido de extensor puede ser extremo C a la región del anticuerpo, agente terapéutico, el conector, el sitio de escisión proteolítica, o una combinación de los mismos.

[0236] El péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que se basa o se deriva de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175. El péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175. El péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% o más homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175. El péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada o derivada de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175. El péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175. El péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 85% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175.

[0237] El primer péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que se basa o se deriva de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175. El primer péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175. El primer péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% o más homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175. El primer péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 75% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada o derivada de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175. El primer péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175.

[0238] El primer péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que se basa o se deriva de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-153. El primer péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada o derivada de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-153. El primer péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% o más homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-153. El primer péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 75% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada o derivada de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-153. El primer péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada o derivada de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-153.

[0239] El segundo péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que se basa o se deriva de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175. El segundo péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada o derivada de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175. El segundo péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% o más homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175. El segundo péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175. El segundo péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada o derivada de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-175.

[0240] El segundo péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que se basa o se deriva de cualquiera de las SEQ ID NO: 154-163. El segundo péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente50% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en cualquiera de SEQ ID NO: 154-163. El segundo péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% o más homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de cualquiera de las SEQ ID NO: 154-163. El segundo péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en cualquiera de las SEQ ID NO: 154-163. El segundo péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a una secuencia de aminoácidos basada en cualquiera de las SEQ ID NO: 154-163.

[0241] Los péptidos extensores descritos en el presente documento pueden basarse o derivarse de una CDR3. La CDR3 puede ser una CDR3 ultra larga. Una "CDR3 ultra larga" o una "secuencia CDR3 ultra larga", usada indistintamente en el presente documento, puede comprender una CDR3 que no se deriva de una secuencia de anticuerpos humanos. Una CDR3 ultra larga puede tener 35 aminoácidos de longitud o más, por ejemplo, 40 aminoácidos de longitud o más, 45 aminoácidos de longitud o más, 50 aminoácidos de longitud o más, 55 aminoácidos de longitud o más, o 60 aminoácidos de longitud o más largos. La CDR3 ultra larga puede ser una CDR3 de cadena pesada (CDR-H3 o CDRH3). La CDR3 ultra larga puede comprender una secuencia derivada o basada en una secuencia de rumiante (por ejemplo, bovina). Una CDR3 ultra larga puede comprender uno o más motivos de cisteína. Una CDR3 ultra larga puede comprender al menos 3 o más residuos de cisteína, por ejemplo, 4 o más residuos de cisteína, 6 o más residuos de cisteína u 8 o más residuos de cisteína. Se pueden encontrar detalles adicionales sobre secuencias CDR3 ultra largas en Saini SS, et al. (Exceptionally long CDR3H region with multiple cysteine residues in functional bovine IgM antibodies, European Journal of Immunology, 1999), Zhang Y, et al. (Functional antibody CDR3 fusion proteins with enhanced pharmacological properties, Angew Chem Int Ed Engl, 2013, vol,52, pp,8295-8298), Wang F, et al. (Reshaping antibody diversity, Cell, 2013) y la patente de los Estados Unidos número 6,740,747.

[0242] Los péptidos extensores pueden comprender 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR. Los péptidos extensores pueden comprender 6, 5, 4, 3, 2, 1 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR. Los aminoácidos pueden ser consecutivos. Los aminoácidos pueden ser no consecutivos. La CDR puede ser CDR1. El CDR puede ser CDR2. La CDR puede ser CDR3. La CDR puede ser una CDR ultra larga.

[0243] Los péptidos extensores pueden estar basados en o derivados de una CDR, en donde la CDR no es una CDR3 ultra larga. Los péptidos extensores pueden comprender 10 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3. Los péptidos extensores pueden comprender 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3. Los péptidos extensores pueden comprender 8 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3. Los péptidos extensores pueden comprender 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3. Los péptidos extensores pueden comprender 5 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3.

[0244] Los péptidos extensores pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es menor que aproximadamente 50% idéntica a una secuencia de aminoácidos que comprende una CDR3 ultra larga. Los péptidos extensores pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es inferior a aproximadamente 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 25% o 10% idéntica a una secuencia de aminoácidos que comprende una CDR3 ultra larga. Los péptidos extensores pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es menos de aproximadamente 30% idéntica a una secuencia de aminoácidos que comprende una CDR3 ultra larga. Los péptidos extensores pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es menos de aproximadamente un 25% idéntica a una secuencia de aminoácidos que comprende una CDR3 ultra larga. Los péptidos extensores pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es menos de aproximadamente un 20% idéntica a una secuencia de aminoácidos que comprende una CDR3 ultra larga.

[0245] El péptido de extensor puede comprender 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o más aminoácidos unidos o insertados en una CDR3 ultra larga. porción basada del péptido de extensor. El péptido de extensor puede comprender 1 o más aminoácidos unidos o insertados en una porción del péptido de extensor basado en CDR3 ultralarga. El péptido de extensor puede comprender 3 o más aminoácidos unidos o insertados en una porción del péptido de extensor basado en c DR3 ultra larga. El péptido de extensor puede comprender 5 o más aminoácidos unidos o insertados en una porción del péptido de extensor basada en CDR3 ultra larga. Los dos o más aminoácidos unidos o insertados en el CDR3 ultra larga pueden ser contiguos. Alternativamente, o adicionalmente, los dos o más aminoácidos unidos o insertados en el CDR3 ultra larga no son contiguos.

[0246] El péptido de extensor puede comprender 30, 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10 o menos aminoácidos unidos o insertados en una porción de CDR3 ultra larga basada en péptido de extensor. El péptido de extensor puede comprender 20 o menos aminoácidos unidos o insertados en una porción del péptido de extensor basado en CDR3 ultra larga. El péptido de extensor puede comprender 15 o menos aminoácidos unidos o insertados en una porción del péptido de extensor basada en CDR3 ultra larga. El péptido de extensor puede comprender 10 o menos aminoácidos unidos o insertados en una porción del péptido de extensor basado en CDR3 ultra larga. Los aminoácidos unidos o insertados en el CDR3 ultra larga pueden ser contiguos. Alternativamente, o adicionalmente, los aminoácidos unidos o insertados en el CDR3 ultra larga no son contiguos.

[0247] El péptido de extensor puede comprender la secuencia X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14(SEQ ID NO: 144). En algunas realizaciones, un primer péptido de extensor comprende la secuencia X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14(SEQ ID NO: 144). Un primer péptido de extensor, en algunos casos, se encuentra entre el extremo amino de un agente terapéutico y una región de anticuerpos. X1-X14se puede seleccionar independientemente de un aminoácido cargado positivamente o unhidrófobo.X1-X14puede seleccionarse independientemente del grupo que comprende alanina (A), asparagina (N), isoleucina (I) leucina (L), valina (V), glutamina (Q), ácido glutámico (E) y lisina (K) X1-X14puede seleccionarse independientemente del grupo que comprende alanina (A), leucina (L) y lisina (K). La alanina puede comprender al menos aproximadamente el 30% de la composición total de aminoácidos. La alanina puede comprender menos de aproximadamente el 70% de la composición total de aminoácidos. La leucina puede comprender al menos aproximadamente el 20% de la composición total de aminoácidos. La leucina puede comprender menos de aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. La lisina puede comprender al menos aproximadamente el 20% de la composición total de aminoácidos. La lisina puede comprender menos de aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender al menos aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender al menos aproximadamente el 60% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrofóbicos pueden comprender al menos aproximadamente el 70% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender menos de aproximadamente el 90% de la composición total de aminoácidos.

[0248] El péptido de extensor puede comprender la secuencia (X1X2X3X4X5X6X7)n (SEQ ID NO. 145). En algunas realizaciones, un primer péptido de extensor comprende la secuencia (X1X2X3X4X5X6X7)n (SEQ ID NO. 145). Un primer péptido de extensor, en algunos casos, se encuentra entre el extremo amino de un agente terapéutico y una región de anticuerpos. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5. En algunas realizaciones, n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más. N puede ser de aproximadamente 1 a aproximadamente 3. X1-X7puede seleccionarse independientemente de un aminoácido cargado positivamente o un aminoácido hidrófobo. X1-X7puede seleccionarse independientemente del grupo que comprende alanina (A), asparagina (N), isoleucina, (I), leucina (L), valina (V), glutamina (Q), ácido glutámico (E) y lisina (K). La alanina (A) puede comprender al menos aproximadamente el 30% de la composición total de aminoácidos. La alanina (A) puede comprender menos de aproximadamente el 70% de la composición total de aminoácidos. La leucina puede comprender al menos aproximadamente el 20% de la composición total de aminoácidos. La leucina puede comprender menos de aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. La lisina puede comprender al menos aproximadamente el 20% de la composición total de aminoácidos. La lisina puede comprender menos de aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. La asparagina puede comprender aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. La isoleucina puede comprender aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. La valina puede comprender aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. La glutamina puede comprender aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. El ácido glutámico puede comprender aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender al menos aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender al menos aproximadamente el 60% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrofóbicos pueden comprender al menos aproximadamente el 70% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender menos de aproximadamente el 90% de la composición total de aminoácidos.

[0249] El péptido de extensor puede comprender la secuencia de XaXbXcXd(X1X2X3X4X5X6X7)n (SEQ ID NO: 146). En algunas realizaciones, un primer péptido de extensor comprende la secuencia XaXbXcXd(X1X2X3X4X5X6X7)n (SEQ ID NO: 146). Un primer péptido de extensor, en algunos casos, se encuentra entre el extremo amino de un agente terapéutico y una región de anticuerpos. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5. En algunas realizaciones, n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más. N puede ser de aproximadamente 1 a aproximadamente 3. Xa, Xb y Xd pueden seleccionarse independientemente de un aminoácido hidrófobo. Xc puede ser un aminoácido polar sin carga. Xa, Xb y Xd pueden ser el mismo aminoácido. Xa, Xb y Xd pueden ser aminoácidos diferentes. X1-X7puede seleccionarse independientemente de un aminoácido cargado positivamente o un aminoácido hidrófobo. X1-X7puede seleccionarse independientemente del grupo que comprende alanina (A), asparagina (N), isoleucina, (I), leucina (L), valina (V), glutamina (Q), ácido glutámico (E) y lisina (K). X1-X7puede seleccionarse independientemente del grupo que comprende A, L y K. A puede comprender al menos aproximadamente el 30% de la composición total de aminoácidos. A puede comprender menos de aproximadamente el 70% de la composición total de aminoácidos. L puede comprender al menos aproximadamente el 20% de la composición total de aminoácidos. L puede comprender menos de aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. K puede comprender al menos aproximadamente el 20% de la composición total de aminoácidos. K puede comprender menos de aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender al menos aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender al menos aproximadamente el 60% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrofóbicos pueden comprender al menos aproximadamente el 70% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender menos de aproximadamente el 90% de la composición total de aminoácidos. En algunas realizaciones, Xaes glicina (G). En algunas realizaciones, Xbes G. En algunas realizaciones, Xdes glicina. Xa, Xb y Xdpueden ser glicina (G). Xcpuede ser serina (S).

[0250] El péptido de extensor puede comprender la secuencia XaXbXcXd(AKLAALK)n(SEQ ID NO. 147). En algunas realizaciones, un primer péptido de extensor comprende la secuencia XaXbXcXd(AKLAALK)n(SEQ ID NO. 147). Un primer péptido de extensor, en algunos casos, se encuentra entre el extremo amino de un agente terapéutico y una región de anticuerpos. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5. En algunas realizaciones, n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más. N puede ser de aproximadamente 1 a aproximadamente 3. Xa, Xb y Xdpueden seleccionarse independientemente de un aminoácido hidrófobo. Xcpuede ser un aminoácido polar sin carga. Xa, Xb y Xdpueden ser el mismo aminoácido. Xa, Xb y Xdpueden ser aminoácidos diferentes. En algunas realizaciones, Xaes glicina (G). En algunas realizaciones, Xbes glicina. En algunas realizaciones, Xdes glicina. Xa, Xb y Xdpueden ser glicina (G). Xcpuede ser serina (S).

[0251] El péptido de extensor puede comprender la secuencia (AKLAALK)n(SEQ ID NO: 148). En algunas realizaciones, un primer péptido de extensor comprende la secuencia (AKLAALK)n(SEQ ID NO. 148). Un primer péptido de extensor, en algunos casos, se encuentra entre el extremo amino de un agente terapéutico y una región de anticuerpos. En algunas realizaciones, n está entreaproximadamente 1 y aproximadamente 10. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5. En algunas realizaciones, n es 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más. N puede ser de aproximadamente 1 a aproximadamente 3.

[0252] El péptido de extensor puede comprender la secuencia GGSG(AKLAALK)n(SEQ ID NO: 149). En algunas realizaciones, un primer péptido de extensor comprende la secuencia GGSG(AKLAALK)n(SEQ ID NO: 149). Un primer péptido de extensor, en algunos casos, se encuentra entre el extremo amino de un agente terapéutico y una región de anticuerpos. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5. En algunas realizaciones, n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más. N puede ser de aproximadamente 1 a aproximadamente 3.

[0253] El péptido de extensor puede comprender la secuencia X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14(SEQ ID NO: 154) ; en donde en X1-X14se seleccionan independientemente de un aminoácido cargado negativamente o un aminoácido hidrófobo. En algunas realizaciones, un segundo péptido de extensor comprende la secuencia X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14(SEQ ID NO: 154); en donde en X1-X14se seleccionan independientemente de un aminoácido cargado negativamente o un aminoácido hidrófobo. Un segundo péptido de extensor, en algunos casos, se encuentra entre el terminal carboxilo de un agente terapéutico y una región de anticuerpos. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5. En algunas realizaciones, n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más. N puede ser de aproximadamente 1 a aproximadamente 3. En algunas realizaciones, X1-X14se seleccionan independientemente del grupo que comprende alanina (A), leucina (L) y ácido glutámico (E). En una realización, A comprende al menos aproximadamente el 30% de la composición total de aminoácidos. En una realización, A comprende menos de aproximadamente el 70% de la composición total de aminoácidos. En una realización, L comprende al menos aproximadamente el 20% de la composición total de aminoácidos. En una realización, L comprende menos de aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. En una realización, E comprende al menos aproximadamente el 20% de la composición total de aminoácidos. En una realización, E comprende menos de aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. En una realización, los aminoácidos hidrófobos comprenden al menos aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. En una realización, los aminoácidos hidrófobos comprenden al menos aproximadamente el 60% de la composición total de aminoácidos. En una realización, los aminoácidos hidrófobos comprenden al menos aproximadamente el 70% de la composición total de aminoácidos. En una realización, los aminoácidos hidrófobos comprenden menos de aproximadamente el 90% de la composición total de aminoácidos.

[0254] El segundo péptido de extensor puede comprender la secuencia (X1X2X3X4X5X6X7)n (SEQ ID NO: 155). En algunas realizaciones, un segundo péptido de extensor comprende la secuencia (X1X2X3X4X5X6X7)n (SEQ ID NO: 155) . Un segundo péptido de extensor, en algunos casos, se encuentra entre el terminal carboxilo de un agente terapéutico y una región de anticuerpos. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5. En algunas realizaciones, n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más. N puede ser de aproximadamente 1 a aproximadamente 3. X1-X7puede seleccionarse independientemente de un aminoácido cargado positivamente o un aminoácido hidrófobo. X1-X7puede seleccionarse independientemente del grupo que comprende alanina (A), asparagina (N), isoleucina, (I), leucina (L), valina (V), glutamina (Q), ácido glutámico (E) y lisina (K). La alanina (A) puede comprender al menos aproximadamente el 30% de la composición total de aminoácidos. La alanina (A) puede comprender menos de aproximadamente el 70% de la composición total de aminoácidos. La leucina puede comprender al menos aproximadamente el 20% de la composición total de aminoácidos. La leucina puede comprender menos de aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. La lisina puede comprender al menos aproximadamente el 20% de la composición total de aminoácidos. La lisina puede comprender menos de aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. La asparagina puede comprender aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. La isoleucina puede comprender aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. La valina puede comprender aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. La glutamina puede comprender aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. El ácido glutámico puede comprender aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender al menos aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender al menos aproximadamente el 60% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrofóbicos pueden comprender al menos aproximadamente el 70% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender menos de aproximadamente el 90% de la composición total de aminoácidos.

[0255] El péptido de extensor puede comprender la secuencia (X1X2X3X4X5X6X7)nXaXbXcXd(SEQ ID NO: 156). En algunas realizaciones, un segundo péptido de extensor comprende la secuencia (X1X2X3X4X5X6X7)nXaXbXcXd(SEQ ID NO: 156). Un segundo péptido de extensor, en algunos casos, se encuentra entre el terminal carboxilo de un agente terapéutico y una región de anticuerpos. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5. En algunas realizaciones, n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más. N puede ser de aproximadamente 1 a aproximadamente 3. X1-X7puede seleccionarse independientemente de un aminoácido cargado positivamente o un aminoácido hidrófobo. X1-X7puede seleccionarse independientemente del grupo que comprende alanina (A), leucina (L) y lisina (K). A puede comprender al menos aproximadamente el 30% de la composición total de aminoácidos. A puede comprender menos de aproximadamente el 70% de la composición total de aminoácidos. L puede comprender al menos aproximadamente el 20% de la composición total de aminoácidos. L puede comprender menos de aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. K puede comprender al menos aproximadamente el 20% de la composición total de aminoácidos. K puede comprender menos de aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender al menos aproximadamente el 50% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender al menos aproximadamente el 60% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrofóbicos pueden comprender al menos aproximadamente el 70% de la composición total de aminoácidos. Los aminoácidos hidrófobos pueden comprender menos de aproximadamente el 90% de la composición total de aminoácidos. Xa, Xb y Xdpueden seleccionarse independientemente de un aminoácido hidrófobo. Xcpuede ser un aminoácido polar sin carga. Xa, Xb y Xdpueden ser el mismo aminoácido. Xa, Xb y Xdpueden tener diferentes aminoácidos. En algunas realizaciones, Xaes glicina (G). En algunas realizaciones del documento,Xbes glicina. En algunas realizaciones, Xdes glicina. Xa, Xb y Xdpueden ser glicina (G). Xcpuede ser serina (S).

[0256] El péptido de extensor puede comprender la secuencia (ELAALEA)nXaXbXcXd (SEQ ID NO: 157). En algunas realizaciones, un segundo péptido de extensor comprende la secuencia (ELAALEA)nXaXbXcXd (SEQ ID NO: 157). Un segundo péptido de extensor, en algunos casos, se encuentra entre el terminal carboxilo de un agente terapéutico y una región de anticuerpos. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5. En algunas realizaciones, n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más. N puede ser de aproximadamente 1 a aproximadamente 3. Xa, Xb y Xdpueden seleccionarse independientemente de un aminoácido hidrófobo. Xcpuede ser un aminoácido polar sin carga. Xa, Xb y Xdpueden ser el mismo aminoácido. Xa, Xb y Xdpueden ser aminoácidos diferentes. En algunas realizaciones, Xaes glicina (G). En algunas realizaciones, Xbes glicina. En algunas realizaciones, Xdes glicina. Xa, Xb y Xdpueden ser glicina (G). Xcpuede ser serina (S).

[0257] El péptido de extensor puede comprender la secuencia (ELAALEA)n(SEQ ID NO: 158). En algunas realizaciones, un segundo péptido de extensor comprende la secuencia (ELAALEA)n(SEQ ID NO: 158). Un segundo péptido de extensor, en algunos casos, se encuentra entre el terminal carboxilo de un agente terapéutico y una región de anticuerpos. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5. En algunas realizaciones, n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más. N puede ser de aproximadamente 1 a aproximadamente 3.

[0258] El péptido de extensor puede comprender la secuencia (ELAALEA)n GGSG(SEQ ID NO: 159). En algunas realizaciones, un segundo péptido de extensor comprende la secuencia (ELAALEA)nGGSG (SEQ ID NO: 159). Un segundo péptido de extensor, en algunos casos, se encuentra entre el terminal carboxilo de un agente terapéutico y una región de anticuerpos. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10. En algunas realizaciones, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5. En algunas realizaciones, n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más. N puede ser de aproximadamente 1 a aproximadamente 3.

[0259] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) un primer péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de SEQ ID NO: 151; y (b) un segundo péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de SEQ ID NO: 161. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender (a) un primer péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 151; y (b) un segundo péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 161. El primer péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más homóloga a una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 151. El segundo péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más homóloga a una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 161. El primer péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 3, 4, 5, 6, 7 o más aminoácidos basados o derivados de una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 151. El primer péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 5 o más aminoácidos basados o derivados de una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 151. El segundo péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 3, 4, 5, 6, 7 o más aminoácidos basados en o derivados de una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 161. El segundo péptido de extensor puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 5 o más aminoácidos basados o derivados de una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 161.

[0260] Los aminoácidos alifáticos pueden comprender al menos aproximadamente el 20% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos alifáticos pueden comprender al menos aproximadamente 22%, 25%, 27%, 30%, 32%, 35%, 37%, 40%, 42%, 45% o más de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos alifáticos pueden comprender al menos aproximadamente el 22% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos alifáticos pueden comprender al menos aproximadamente el 27% del total de aminoácidos de los péptidos extensores.

[0261] Los aminoácidos alifáticos pueden comprender menos de aproximadamente 50% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos alifáticos pueden comprender menos de aproximadamente 47%, 45%, 43%, 40%, 38%, 35%, 33% o 30% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores.

[0262] Los aminoácidos alifáticos pueden comprender entre aproximadamente 20% a aproximadamente 45% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos alifáticos pueden comprender entre aproximadamente el 23% y aproximadamente el 45% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos alifáticos pueden comprender entre aproximadamente el 23% y aproximadamente el 40% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores.

[0263] Los aminoácidos aromáticos pueden comprender menos de aproximadamente 20% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos aromáticos pueden comprender menos de aproximadamente 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11% o 10% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos aromáticos pueden comprender entre 0% y aproximadamente 20% del total de aminoácidos de los péptidos extensores.

[0264] Los aminoácidos no polares pueden comprender al menos aproximadamente el 30% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos no polares pueden comprender al menos aproximadamente 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39% o 40% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos no polares pueden comprender al menos aproximadamente el 32% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores.

[0265] Los aminoácidos no polares pueden comprender menos de aproximadamente el 80% del total de aminoácidos de los péptidos extensores. Los aminoácidos no polares pueden comprender menos de aproximadamente 77%, 75%, 72%, 70%, 69% o 68% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores.

[0266] Los aminoácidos no polares pueden comprender entre aproximadamente 35% a aproximadamente 80% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos no polares pueden comprender entre aproximadamente 38% y aproximadamente 80% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos no polares pueden comprender entre aproximadamente 38% y aproximadamente 75% del total de aminoácidos de los péptidos extensores. Los aminoácidos no polares pueden comprender entre aproximadamente el 35% y aproximadamente el 70% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores.

[0267] Los aminoácidos polares pueden comprender al menos aproximadamente 20% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos polares pueden comprender al menos aproximadamente 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 35% o más de aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos polares pueden comprender al menos aproximadamente el 23% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores.

[0268] Los aminoácidos polares pueden comprender menos de aproximadamente el 80% del total de aminoácidos de los péptidos extensores. Los aminoácidos polares pueden comprender menos de aproximadamente 77%, 75%, 72%, 70%, 69% o 68% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos polares pueden comprender menos de aproximadamente el 77% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos polares pueden comprender menos de aproximadamente el 75% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores. Los aminoácidos polares pueden comprender menos de aproximadamente el 72% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores.

[0269] Los aminoácidos polares pueden comprender entre aproximadamente 25% a aproximadamente 70% de los aminoácidos totales del extensor de péptidos. Los aminoácidos polares pueden comprender entre aproximadamente el 27% y aproximadamente el 70% del total de aminoácidos de los péptidos extensores. Los aminoácidos polares pueden comprender entre aproximadamente el 30% y aproximadamente el 70% de los aminoácidos totales de los péptidos extensores.

[0270] Alternativamente, las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento no comprenden un péptido de extensor.

Agente terapéutico

[0271] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender uno o más agentes terapéuticos. El agente terapéutico puede ser un péptido. El agente terapéutico puede ser una molécula pequeña. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender dos o más agentes terapéuticos. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender 3, 4, 5, 6 o más agentes terapéuticos. Los dos o más agentes terapéuticos pueden ser iguales. Los dos o más agentes terapéuticos pueden ser diferentes.

[0272] El agente terapéutico puede comprender cualquier estructura secundaria, por ejemplo, hélice alfa o cadena beta o no comprender estructura secundaria regular. El agente terapéutico puede comprender aminoácidos con una o más modificaciones que incluyen, pero no se limitan a, miristoilación, palmitoilación, isoprenilación, glipiación, lipoilación, acilación, acetilación, acilación, metilación, glicosilación, malonilación, hidroxilación, yodación, adición de nucleótidos, oxidación, fosforilación, adenilación, propionilación, succinilación, sulfatación, selenoilación, biotinilación, pegilación, desiminación, desamidación, eliminación y carbamilación. El agente terapéutico puede comprender uno o más aminoácidos conjugados con una o más moléculas pequeñas, por ejemplo un fármaco. En algunas realizaciones, el agente terapéutico comprende uno o más aminoácidos no naturales. En algunas realizaciones, el agente terapéutico comprende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50 o más aminoácidos no naturales. En algunas realizaciones, el agente terapéutico comprende una o más sustituciones de aminoácidos. En algunas realizaciones, el agente terapéutico comprende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50 o más sustituciones de aminoácidos.

[0273] El agente terapéutico puede insertarse en la región de inmunoglobulina. La inserción del agente terapéutico en la región de inmunoglobulina puede comprender la eliminación o retirada de una porción de la inmunoglobulina a partir de la cual se basa o se deriva la región de inmunoglobulina. El agente terapéutico puede reemplazar al menos una porción de una cadena pesada. El agente terapéutico puede reemplazar al menos una porción de una cadena ligera. El agente terapéutico puede reemplazar al menos una porción de un dominio variable. El agente terapéutico puede reemplazar al menos una porción de un dominio constante. El agente terapéutico puede reemplazar al menos una porción de una región determinante de complementariedad (CDR). El agente terapéutico puede reemplazar al menos una porción de una CDR1. El agente terapéutico puede reemplazar al menos una porción de una CDR2. El agente terapéutico puede reemplazar al menos una porción de una CDR3. El agente terapéutico puede reemplazar al menos aproximadamente 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más de la inmunoglobulina o una porción de la misma.

[0274] El uno o más agentes terapéuticos pueden basarse o derivarse de una proteína. La proteína puede ser un factor de crecimiento, citocina, hormona o toxina. El factor de crecimiento puede ser GCSF, GMCSf , GDF11 o FGF21. El GCSF puede ser un GCSF bovino. El GCSF puede ser un GCSF humano. El GMCSF puede ser un GMCSF bovino o un GMCSF humano. El FGF21 puede ser un FGF21 bovino. El FGF21 puede ser un FGF21 humano. La proteína puede ser elafina. La proteína puede ser un inhibidor de peptidasa. La proteína puede ser una antileucoproteasa derivada de la piel (SKALP).

[0275] La citocina puede ser un interferón o interleucina. La citocina puede ser el factor 1 derivado de células estromales (SDF-1). El interferón puede ser interferón beta. El interferón puede ser interferón alfa. La interleucina puede ser interleucina 11 (IL-11). La interleucina puede ser interleucina 8 (IL-8) o interleucina 21 (IL-21).

[0276] La hormona puede ser exendina-4, GLP-1, relaxina, oxintomodulina, hLeptina, betatrofina, hormona de crecimiento bovina (bGH), hormona de crecimiento humana (hGH), eritropoyetina (EPO) u hormona paratiroidea. La hormona puede ser la somatostatina. La hormona paratiroidea puede ser una hormona paratiroidea humana. La eritropoyetina puede ser una eritropoyetina humana.

[0277] La toxina puede ser Moka1, VM24 o Mamba1. La toxina puede ser ziconotida o clorotoxina. En una realización, la toxina es mu-SLPTX-Ssm6a (Ssam6).

[0278] La proteína puede ser angiopoyetina-como 3 (ANGPTL3). Tipo angiopoyetina 3 puede ser un tipo angiopoyetina 3 humana.

[0279] El agente terapéutico puede ser el péptido 2 similar al glucagon (GLP2).

[0280] En algunas realizaciones, el agente terapéutico es un análogo de glucagón.

[0281] En algunas realizaciones, el agente terapéutico es un agonista dual.

[0282] En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar diabetes y/o afecciones relacionadas con diabetes. En algunas realizaciones, 2, 3, 4, 5 o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar diabetes y/o afecciones relacionadas con diabetes. La diabetes puede incluir diabetes tipo I, diabetes tipo 2, diabetes gestacional y prediabetes. En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar la obesidad y/o afecciones relacionadas con la obesidad. En algunas realizaciones, 2, 3, 4, 5 o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar la obesidad y/o afecciones relacionadas con la obesidad. Las condiciones pueden incluir complicaciones y enfermedades. Los ejemplos de afecciones relacionadas con la diabetes incluyen, entre otros, retinopatía diabética, nefropatía diabética, enfermedad cardíaca diabética, trastornos del pie diabético, neuropatía diabética, enfermedad macrovascular, miocardiopatía diabética, infección y cetoacidosis diabética. La neuropatía diabética puede incluir, pero no se limita a, polineuropatía simétrica, neuropatía autonómica, radiculopatía, neuropatía craneal y mononeuropatía. Las condiciones relacionadas con la obesidad incluyen, entre otras, enfermedades del corazón, derrames cerebrales, presión arterial alta, diabetes, osteoartritis, gota, apnea del sueño, asma, enfermedad de la vesícula biliar, cálculos biliares, grasas anormales en la sangre (p. ej., niveles anormales de colesterol LDL y HDL), síndrome de hipoventilación por obesidad, problemas reproductivos, esteatosis hepática y afecciones de salud mental.

[0283] En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico es un agonista del receptor de la proteína-1 similar al glucagón (GLP-1) o una formulación del mismo. En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico es un mimético incretino. En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico comprenden una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una secuencia de aminoácidos de exendina-4, exenatida o sintética de la misma. En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico es un análogo de glucagón o una formulación del mismo. En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico comprenden una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una secuencia de aminoácidos de insulina. En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico son de doble especificidad. En algunas realizaciones, el agente terapéutico tiene especificidad para un receptor GLP-1 y un receptor de glucagón. En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico comprenden una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una secuencia de aminoácidos de oxintomodulina.

[0284] En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar el síndrome del intestino delgado y/o afecciones relacionadas con el síndrome del intestino delgado. En algunas realizaciones, 2, 3, 4, 5 o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar el síndrome del intestino delgado y/o afecciones relacionadas con el síndrome del intestino delgado. Las afecciones relacionadas con el síndrome del intestino delgado pueden incluir, entre otras, sobrecrecimiento bacteriano en el intestino delgado, acidosis metabólica, cálculos biliares, cálculos renales, desnutrición, osteomalacia, insuficiencia intestinal y pérdida de peso. En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar la enfermedad inflamatoria intestinal y/o afecciones inflamatorias relacionadas con el intestino. En algunas realizaciones, 2, 3, 4, 5 o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar la enfermedad inflamatoria intestinal y/o afecciones inflamatorias relacionadas con el intestino. Las enfermedades relacionadas con la enfermedad inflamatoria intestinal y/o la enfermedad inflamatoria intestinal pueden incluir, entre otras, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, colitis colágena, colitis linfocítica, colitis isquémica, colitis de derivación, enfermedad de Behcet, colitis intermedia, anemia, artritis, pioderma gangrenoso, colangitis esclerosante primaria, síndrome de enfermedad no tiroidea; y dolor abdominal, vómitos, diarrea, sangrado rectal, calambres internos o espasmos musculares, y pérdida de peso en personas con una enfermedad inflamatoria intestinal.

[0285] En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico comprenden una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una secuencia de aminoácidos de glucagón, análogo de glucagón, péptido similar a glucagón y/o un análogo de péptido similar a glucagón. En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico comprenden una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una secuencia de aminoácidos de un péptido 2 similar al glucagón (GLP2).

[0286] En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar una enfermedad autoinmune y/o afecciones relacionadas con la enfermedad autoinmune. En algunas realizaciones, 2, 3, 4, 5 o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar enfermedades autoinmunes y/o afecciones relacionadas con enfermedades autoinmunes. La enfermedad autoinmune y/o las enfermedades relacionadas con la enfermedad autoinmune pueden incluir, pero no se limitan a, encefalomielitis diseminada aguda, alopecia areata, síndrome antifosfolípido, cardiomiopatía autoinmune, anemia hemolítica autoinmune, hepatitis autoinmune, enfermedad autoinmune del oído interno, síndrome linfoproliferativo autoinmune, neuropatía periférica autoinmune, pancreatitis autoinmune, síndrome de poliendrocrina autoinmune, dermatitis de progesterona autoinmune, púrpura trombocitopénica autoinmune, urticaria autoinmune, uveitis autoinmune, enfermedad de Behcet, enfermedad celíaca, enfermedad de aglutinina fría, enfermedad de Crohn, dermatomiositis, diabetes mellitus tipo gastrointestinal, síndrome de einofis, diabetes mellitus tipo 1,enfermedad de Grave, síndrome de Guillain-Barré, encefalopatía de Hashimoto, tiroiditis de Hashimoto, púrpura trombocitopénica idiopática, lupus eritematoso, síndrome de Miller-Fisher, enfermedad mixta del tejido conectivo, esclerosis múltiple, miastenia gravis, narcolepsia, pemphigus vulgaris, anemia perniciosa, polimiositis, cirrosis biliarprimaria, psoriasis, artritis psoriásica, policondritis recurrente, artritis reumatoide, fiebre reumática, síndrome de Sjogren, arteritis temporal, transversa mielitis, colitis ulcerosa, enfermedad indiferenciada del tejido conectivo, vasculitis y granulomatosis de Wegener.

[0287] En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico comprenden una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una secuencia de aminoácidos que se une a los canales de potasio. En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico comprenden una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una secuencia de aminoácidos de una Mokatoxina-1 (Moka).

[0288] En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar el dolor. En algunas realizaciones, 2, 3, 4, 5 o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar el dolor.

[0289] En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico comprenden una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una secuencia de aminoácidos que es una neurotoxina. En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico comprenden una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una secuencia de aminoácidos de una neurotoxina mu-SLPTX-Ssm6a (Ssam6). En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico comprenden una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una secuencia de aminoácidos de mambalign-1.

[0290] En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar la insuficiencia cardíaca y/o la fibrosis. En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar la insuficiencia cardíaca y/o afecciones relacionadas con fibrosis. En algunas realizaciones, 2, 3, 4, 5 o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar la insuficiencia cardíaca y/o la fibrosis. En algunas realizaciones, 2, 3, 4, 5 o más regiones del agente terapéutico están configuradas para tratar insuficiencia cardíaca y/o afecciones relacionadas con fibrosis. Las afecciones relacionadas con la insuficiencia cardíaca pueden incluir enfermedad coronaria, presión arterial alta, diabetes, miocardiopatía, valvulopatía, arritmias, defectos cardíacos congénitos, apnea obstructiva del sueño, miocarditis, hipertiroidismo, hipotiroidismo, enfisema, hemocromatosis y amiloidosis. La insuficiencia cardíaca puede ser insuficiencia cardíaca izquierda, insuficiencia cardíaca derecha, insuficiencia cardíaca sistólica e insuficiencia cardíaca diastólica. La fibrosis puede incluir, entre otras, fibrosis pulmonar, fibrosis pulmonar idiopática, fibrosis quística, cirrosis, fibrosis endomiocárdica, infarto de miocardio, fibrosis auricular, fibrosis mediastínica, mielofibrosis, fibrosis retroperitoneal, fibrosis masiva progresiva, fibrosis sistémica nefrogénica, enfermedad de Crohn, queloide, esclerodermia/esclerosis sistémica, artrofibrosis, enfermedad de Peyronie, contractura de Dupuytren y capsulitis adhesiva.

[0291] En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico comprenden una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una secuencia de aminoácidos que pertenece a la superfamilia de insulina. En algunas realizaciones, una o más regiones del agente terapéutico comprenden una secuencia de aminoácidos basada en o derivada de una secuencia de aminoácidos de insulina.

[0292] En algunas realizaciones, los aminoácidos del agente terapéutico, en su totalidad o en parte, se basan o derivan de cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% idéntica a cualquiera de las S^eQ ID NO: 227 267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que es 100% idéntica a cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. En algunas realizaciones, el agente terapéutico comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. En algunas realizaciones, el agente terapéutico comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% idéntica a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. En algunas realizaciones, el agente terapéutico comprende una secuencia de aminoácidos que es 100% idéntica a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267.

[0293] El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 227- 267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 450, 500 o más aminoácidos basados en o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 10 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 50 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 100 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. El agente terapéutico puede comprender una secuencia de aminoácidos que comprende 200 o más aminoácidos basados o derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. Los aminoácidos pueden ser consecutivos. Alternativamente, o adicionalmente, los aminoácidos son no consecutivos.En algunas realizaciones, el agente terapéutico puede comprender aminoácidos derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267 y aminoácidos no derivados de cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. En algunas realizaciones, el agente terapéutico puede comprender aminoácidos derivados de uno o más de las SEQ ID NO: 227-267 y aminoácidos no derivados de una cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267. En algunas realizaciones, el agente terapéutico comprende aminoácidos derivados de 1, 2, 3 o 4 de SEQ ID NO: 227-267.

[0294] El agente terapéutico puede estar codificado por una secuencia de ácido nucleico basada o derivada de cualquiera de las SEQ ID NO: 186-226. El agente terapéutico puede estar codificado por una secuencia de ácido nucleico que puede ser al menos aproximadamente 50% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 186-226. El agente terapéutico puede estar codificado por una secuencia de ácido nucleico que puede ser al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 186-226. El agente terapéutico puede estar codificado por una secuencia de ácido nucleico que puede ser al menos aproximadamente el 70% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 186-226. El agente terapéutico puede estar codificado por una secuencia de ácido nucleico que puede ser al menos aproximadamente el 80% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 186-226.

[0295] El agente terapéutico puede comprender un sitio de escisión de la proteasa. El sitio de escisión de proteasa puede insertarse dentro del agente terapéutico. En algunas realizaciones, el agente terapéutico comprende una primera región de agente terapéutico y una segunda región de agente terapéutico. En algunas realizaciones, el agente terapéutico comprende un sitio de escisión de proteasa dispuesto entre la primera región del agente terapéutico y la segunda región del agente terapéutico. En algunas realizaciones, la primera región del agente terapéutico y la segunda región del agente terapéutico derivan de la misma proteína o conjunto de secuencias de aminoácidos. En algunas realizaciones, la primera región del agente terapéutico y las segundas regiones del agente terapéutico se derivan de diferentes proteínas o conjuntos de secuencias de aminoácidos. El uno o más sitios de escisión de proteasa pueden estar unidos al extremo N, al extremo C o tanto al extremo N como al C de una región de un agente terapéutico.

[0296] El agente terapéutico puede comprender uno o más péptidos de conexióninternos. El agente terapéutico puede comprender dos o más péptidos enlazadores internos. El agente terapéutico puede comprender 3, 4, 5, 6, 7 o más péptidos enlazadores internos. Los péptidos enlazadores pueden ser diferentes. Los péptidos enlazadores pueden ser iguales. El péptido de conexión puede insertarse dentro del agente terapéutico. En algunas realizaciones, el agente terapéutico comprende una primera región terapéutica, una segunda región terapéutica, uno o más péptidos enlazadores colocados entre la primera región terapéutica y la segunda región terapéutica. El uno o más péptidos enlazadores pueden estar unidos al extremo N, al extremo C o a los extremos N y C de una región de un agente terapéutico. En algunas realizaciones, el péptido de conexión es un sitio de escisión de proteasa. En algunas realizaciones, el péptido de conexión es una etiqueta, tal como una etiqueta de afinidad. Un ejemplo de una etiqueta de afinidad es una etiqueta de histidina 6X (HHHHHH). En algunas realizaciones, el conector interno comprende aminoácidos que tienen secuencias repetitivas. En algunas realizaciones, el enlazador interno tiene 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más secuencias repetitivas. En algunas realizaciones, el conector interno es poco inmunogénico. En algunas realizaciones, el enlazador interno es biodegradable.

[0297] Los agentes terapéuticos pueden insertarse en la región del anticuerpo. La inserción del agente terapéutico en la región del anticuerpo puede comprender la eliminación o eliminación de uno o más aminoácidos de la región del anticuerpo.

[0298] En algunas realizaciones, una proteína de fusión de inmunoglobulina comprende uno o más péptidos extensores. El uno o más péptidos extensores pueden estar unidos al extremo N, al extremo C o tanto al extremo N como al C de un agente terapéutico.

[0299] En algunas realizaciones, una proteína de fusión de inmunoglobulina comprende uno o más péptidos enlazadores. El uno o más enlazadores pueden estar unidos al extremo N, al extremo C o tanto al extremo N como al C de un agente terapéutico.

[0300] En algunas realizaciones, una proteína de fusión de inmunoglobulina comprende uno o más sitios de escisión proteolítica. El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden estar unidos al extremo N, extremo C o tanto al extremo N como al C de un agente terapéutico.

[0301] En algunos aspectos, el agente terapéutico puede estar conectado a la región del anticuerpo sin la ayuda de un péptido de extensor. El agente terapéutico puede estar conectado al anticuerpo a través de uno o más enlazadores.

Enlazadores

[0302] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina, regiones de anticuerpos, regiones sin anticuerpos y/o regiones de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina, las regiones de anticuerpos, las regiones sin anticuerpos y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más conectores. La región de fusión del extensor puede comprender además uno o más enlazadores. La región de fusión del extensor puede comprender además 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más conectores.

[0303] El uno o más enlazadores están unidos al extremo N, extremo C o tanto al extremo N como al C de un agente terapéutico. El uno o más enlazadores están unidos al extremo N, al extremo C o tanto al extremo N como al C del péptido de extensor. El uno o más enlazadores están unidos al extremo N, al extremo C o tanto al extremoN como al C de un sitio de escisión proteolítica. El uno o más enlazadores pueden estar unidos a un agente terapéutico, péptido de extensor, sitio de escisión proteolítica,región de fusión de extensor, región de anticuerpo o una combinación de los mismos.

[0304] En algunas realizaciones, el péptido de conexión es un péptido de conexión o parte de un péptido de conexión.

[0305] El uno o más enlazadores pueden comprender la secuencia (XeXfXgXh)n(SEQ ID NO: 176). En una realización, n esentre aproximadamente 1 y aproximadamente 20. En una realización, n es cualquiera de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20. En una realización, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10. En una realización, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5. En una realización, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 3. En una realización, Xe, Xfy Xgse seleccionan independientemente de un aminoácido hidrófobo. Xhpuede ser un aminoácido polar sin carga. La secuencia enlazadora puede comprender además uno o más residuos de cisteína (C). El uno o más residuos de cisteína están en el extremo N, extremo C o una combinación de los mismos. El péptido de conexión puede comprender la secuencia CXeXfXgXh(SEQ ID NO: 177). En una realización, Xe, Xfy Xgse seleccionan independientemente de un aminoácido hidrófobo. Xhpuede ser un aminoácido polar sin carga. El péptido de conexión puede comprender la secuencia XeXfXgXhC (SEQ ID NO: 178). En una realización, Xe, Xfy Xgse seleccionan independientemente de un aminoácido hidrófobo. Xhpuede ser un aminoácido polar sin carga.

[0306] El uno o más enlazadores pueden comprender la secuencia (GGGGS)n(SEQ ID NO: 179). En una realización, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20. En una realización, n es cualquiera de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20. En una realización, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10. En una realización, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5. En una realización, n está entre aproximadamente 1 y aproximadamente 3.

[0307] El uno o más enlazadores pueden comprender una secuencia de aminoácidos seleccionada de una cualquiera de las SEQ ID NOs: 176-181. El uno o más enlazadores pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 176-181. El uno o más enlazadores pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 176-181. El uno o más enlazadores pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 176-181. El uno o más enlazadores pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 176-181.

Sitio de escisión proteolítica

[0308] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender además uno o más sitios escisión proteolítica. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender además 2 o más sitios de escisión proteolítica. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender además 3 o más sitios de escisión proteolítica. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden comprender además 4, 5, 6, 7 o más sitios de escisión proteolítica. Los agentes terapéuticos descritos en el presente documento pueden comprender además uno o más sitios de escisión proteolítica.

[0309] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina pueden comprender una secuencia con uno o más sitios de escisión entre la región de anticuerpo y la región sin anticuerpo. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina pueden comprender una secuencia con uno o más sitios de escisión entre la región del anticuerpo y la región de fusión del extensor. En algunas realizaciones, el sitio de escisión proteolítica es un péptido de conexión o es parte de un péptido de conexión.

[0310] El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden estar unidos al extremo N, extremo C o tanto al extremo N como al C de un péptido terapéutico. El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden unirse al extremo N, extremo C o tanto al extremo N como al C de un péptido de extensor. El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden unirse al extremo N, al extremo C o tanto al extremo N como al C de un péptido de conexión. El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden estar unidos a un péptido terapéutico, péptido de extensor, enlazador, región de fusión de extensor, región de inmunoglobulina, región de no inmunoglobulina o una combinación de los mismos.

[0311] La digestión del sitio de escisión proteolítica puede dar como resultado la liberación del extremo N o C del agente terapéutico de la proteína de fusión de inmunoglobulina. El sitio de escisión proteolítica puede estar en los extremos N y C del agente terapéutico. La digestión del sitio de escisión proteolítica puede dar como resultado la liberación del agente terapéutico de la proteína de fusión de inmunoglobulina.

[0312] Alternativamente, o adicionalmente, el sitio de escisión proteolítica se encuentra dentro de la secuencia de aminoácidos del agente terapéutico, péptido de extensor, región de anticuerpo o una combinación de los mismos. El agente terapéutico puede comprender uno o más sitios de escisión proteolítica dentro de su secuencia de aminoácidos. Por ejemplo, la SEQ ID NO: 89 describe una proteína relaxina que comprende dos sitios de escisión proteolítica interna. La digestión de los sitios de escisión proteolítica dentro de la proteína relaxina puede provocar la liberación de un fragmento interno de la proteína relaxina.

[0313] Dos o más sitios de escisión proteolítica pueden rodear un agente terapéutico, péptido de extensor, conector, región de anticuerpo o combinación de los mismos. La digestión del sitio de escisión proteolítica puede dar como resultado la liberación de un fragmento de péptido ubicado entre los dos o más sitios de escisión proteolítica. Por ejemplo, los sitios de escisión proteolítica pueden flanquear un péptido ligador de agente terapéutico. La digestión de los sitios de escisión proteolítica puede dar como resultado la liberación del agente terapéutico enlazador.

[0314] El sitio de escisión proteolítica puede ser reconocido por una o más proteasas. La una o más proteasas pueden ser una serina proteasa, treonina proteasa, cisteína proteasa, aspartato proteasa, glutámico proteasa, metaloproteasa, exopeptidasas, endopeptidasas o una combinación de las mismas. Las proteasas pueden seleccionarse del grupo que comprende Factor VII o Factor Xa. Ejemplos adicionales de proteasas incluyen, pero no se limitan a, aminopeptidasas, carboxipeptidasas, tripsina, quimotripsina, pepsina, papaína y elastasa. La proteasa puede ser la prohormona convertasa 2 (PC2).

[0315] El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden comprender una secuencia de aminoácidos seleccionada de cualquiera deSEQ ID NO: 182-185. El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 50% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 182 185. El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 182-185. El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 70% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 182-185. El uno o más sitios de escisión proteolítica pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos aproximadamente 80% homóloga a cualquiera de las SEQ ⁱD NO: 182-185.

Vectores, células huésped y métodos recombinantes

[0316] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina, como se describe en el presente documento, pueden expresarse mediante métodos recombinantes. Generalmente, un ácido nucleico que codifica una proteína de fusión de inmunoglobulina puede aislarse e insertarse en un vector replicable para una clonación adicional (amplificación del ADN) o para la expresión. El ADN que codifica la proteína de fusión de inmunoglobulina puede prepararse mediante amplificación por PCR y secuenciarse usando procedimientos convencionales (por ejemplo, usando sondas de oligonucleótidos que son capaces de unirse específicamente a nucleótidos que codifican proteínas de fusión de inmunoglobulina). En una realización ejemplar, el ácido nucleico que codifica una proteína de fusión de inmunoglobulina se amplifica por PCR, se digiere la enzima de restricción y se purifica en gel. El ácido nucleico digerido puede insertarse en un vector replicable. El vector replicable que contiene la inserción de la proteína de fusión de inmunoglobulina digerida puede transformarse o transducirse en una célula huésped para su posterior clonación (amplificación del ADN) o para su expresión. Las células huésped pueden ser células procariotas o eucariotas.

[0317] Las secuencias de polinucleótidos que codifican los componentes del polipéptido (por ejemplo, región de anticuerpo, péptido de extensor, agente terapéutico) de las proteínas de fusión de inmunoglobulina pueden obtenerse mediante amplificación por PCR. Las secuencias de polinucleótidos pueden aislarse y secuenciarse a partir de células que contienen ácidos nucleicos que codifican los componentes del polipéptido. Alternativamente, o adicionalmente, los polinucleótidos pueden sintetizarse usando sintetizador de nucleótidos o técnicas de PCR. Una vez obtenidas, las secuencias que codifican los componentes del polipéptido pueden insertarse en un vector recombinante capaz de replicar y expresar polinucleótidos heterólogos en huéspedes procariotas y/o eucariotas.

[0318] Además, los vectores de fago que contienen replicón y secuencias de control que son compatibles con el microorganismo huésped pueden usarse como vectores transformantes en conexión con estos huéspedes. Por ejemplo, se puede utilizar bacteriófagos tales como AGEM™-11 para hacer un vector recombinante que se puede usar para transformar células huésped susceptibles tales como E. coli LE392.

[0319] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina pueden expresarse intracelularmente (por ejemplo, citoplasma) o extracelularmente (por ejemplo, secreción). Para la expresión extracelular, el vector puede comprender una señal de secreción que permite la translocación de las proteínas de fusión de inmunoglobulina al exterior de la célula.

[0320] Las células huésped adecuadas para la clonación o expresión de vectores que codifican proteínas de fusión de inmunoglobulina incluyen células procariotas o eucariotas. La célula huésped puede ser eucariota. Los ejemplos de células eucariotas incluyen, pero no se limitan a, células de riñón embrionario humano (HEK), células de ovario de hámster chino (CHO), hongos, levaduras, células de invertebrados (por ejemplo, células vegetales y células de insectos), células linfoides (por ejemplo, células YO, NSO, Sp20). Otros ejemplos de líneas celulares huésped de mamífero adecuadas son la línea CV1 de riñón de mono transformada por SV40 (COS-7); células de riñón de hámster bebé (BHK); células de sertoli de ratón; células de riñón de mono (CV1); Células de riñón de mono verde africano (VERO-76); células de carcinoma cervical humano (HELA); células de riñón canino (MDCK; células de hígado de rata de búfalo (BRL 3A); células de pulmón humano (W138); células de hígado humano (Hep G2); tumor mamario de ratón (MMT 060562); células TR1; células MRC 5; y células FS4. La célula huésped puede ser una célula procariota (por ejemplo, E. coli).

[0321] Las células huésped pueden transformarse con vectores que contienen nucleótidos que codifican proteínas de fusión de inmunoglobulina. Las células huésped transformadas pueden cultivarse en medios. Los medios pueden complementarse con uno o más agentes para inducir promotores, seleccionar transformantes o amplificar o expresar los genes que codifican las secuencias deseadas. Los métodos para transformar células huésped se conocen en la técnica y pueden incluir electroporación, cloruro de calcio o polietilenglicol/DMSO.

[0322] Alternativamente, las células huésped pueden transfectarse o transducirse con vectores que contienen nucleótidos que codifican proteínas de fusión de inmunoglobulina. Las células huésped transfectadas o transducidas pueden cultivarse en medios. Los medios pueden complementarse con uno o más agentes para inducir el promotor s, seleccionando células transfectadas o transducidas, o expresando genes que codifican las secuencias deseadas.

[0323] Las células huésped pueden transfectarse o transducirse con vectores que comprenden nucleótidos que codifican una o más proteasas. Los vectores que comprenden proteasa pueden cotransfectarse con vectores que codifican cualquier proteína de fusión de inmunoglobulina descrita en el presente documento. Las proteasas incluyen Factor Xa y PC2.

[0324] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina expresadas pueden secretarse y recuperarse del periplasma de las células huésped o transportarse a los medios de cultivo. La recuperación de proteínas del periplasma puede implicar la alteración de la célula huésped. La interrupción de la célula huésped puede comprender shock osmótico, sonicación o lisis. La centrifugación o filtración se puede utilizar para eliminar restos celulares o células enteras. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina pueden purificarse adicionalmente, por ejemplo, por cromatografía de resina de afinidad.

[0325] Alternativamente, las proteínas de fusión de inmunoglobulina que se secretan en los medios de cultivo pueden aislarse en ellas.Las células se pueden eliminar del cultivo y el sobrenadante del cultivo se puede filtrar y concentrar para una purificación adicional de las proteínas producidas. Los polipéptidos expresados pueden aislarse e identificarse adicionalmente usando métodos comúnmente conocidos tales como electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) y ensayo de transferencia Western.

[0326] La producción de proteínas de fusión de inmunoglobulina puede realizarse en gran cantidad mediante un proceso de fermentación. Varios procedimientos de fermentación en lotes alimentados a gran escala están disponibles para la producción de proteínas recombinantes. Las fermentaciones a gran escala tienen al menos 1000 litros de capacidad, preferiblemente de aproximadamente 1000 a 100.000 litros de capacidad. Estos fermentadores usan impulsores agitadores para distribuir oxígeno y nutrientes, especialmente glucosa (una fuente preferida de carbono/energía). La fermentación a pequeña escala se refiere generalmente a la fermentación en un fermentador que no tiene más de aproximadamente 100 litros de capacidad volumétrica, y puede variar de aproximadamente 1 litro a aproximadamente 100 litros.

[0327] En un proceso de fermentación, la inducción de la expresión de proteínas se inicia típicamente después de que las células se han cultivado en condiciones adecuadas a una densidad deseada, por ejemplo, un OD550 de aproximadamente 180-220, en cuya etapa las células están en la fase temprana de estado estacionario. Se puede usar una variedad de inductores, de acuerdo con la construcción del vector empleada, como se conoce en la técnica y se describe aquí. Las células pueden crecer durante períodos más cortos antes de la inducción. Las células generalmente se inducen durante aproximadamente 12-50 horas, aunque se puede usar un tiempo de inducción más largo o más corto.

[0328] Para mejorar el rendimiento de producción y la calidad de las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento, pueden modificarse diversas condiciones de fermentación. Por ejemplo, para mejorar el correcto ensamblaje y plegamiento de los polipéptidos de las proteínas de fusión de inmunoglobulina secretadas, vectores adicionales que sobreexpresan proteínas chaperonas, como las proteínas Dsb (DsbA, DsbB, DsbC, DsbD y DsbG) o FkpA (un peptidilprolilo cis,trans-isomerasa con actividad de chaperona) puede usarse para co-transformar las células procariotas del huésped. Se ha demostrado que las proteínas chaperonas facilitan el plegamiento y la solubilidad adecuados de las proteínas heterólogas producidas en las células huésped bacterianas.

[0329] Para minimizar la proteólisis de proteínas heterólogas expresadas (especialmente aquellas que son proteolíticamente sensibles), pueden usarse ciertas cepas huésped deficientes en enzimas proteolíticas para la presente descripción. Por ejemplo, las cepas de la célula huésped pueden modificarse para efectuar mutaciones genéticas en los genes que codifican proteasas bacterianas conocidas tales como Proteasa III, OmpT, DegP, Tsp, Proteasa I, Proteasa Mi, Proteasa V, Proteasa VI y combinaciones de las mismas. Se encuentran disponibles algunas cepas de E. coli proteasas deficientes.

[0330] Se pueden emplear métodos estándar de purificación de proteínas conocidos en la técnica. Los siguientes procedimientos son ejemplos de procedimientos de purificación adecuados: fraccionamiento en columnas de inmunoafinidad o intercambio iónico, precipitación con etanol, HPLC de fase inversa, cromatografía sobre sílice o sobre una resina de intercambio catiónico como DEAE, cromatofocalización, SDSPAGE, precipitación de sulfato de amonio, cromatografía de hidroxilapatita, gel electroforesis, diálisis y cromatografía de afinidad y filtración en gel utilizando, por ejemplo, Sephadex G-75.

[0331] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina pueden concentrarse usando un filtro de concentración de proteína disponible comercialmente,por ejemplo, una unidad de ultrafiltración Amicon o Millipore Pellicon®.

[0332] Los inhibidores de proteasa o cócteles inhibidores de proteasa pueden incluirse en cualquiera de los pasos anteriores para inhibir la proteólisis de las proteínas de fusión de inmunoglobulina.

[0333] En algunos casos, una proteína de fusión de inmunoglobulina puede no ser biológicamente activa tras el aislamiento. Se pueden usar varios métodos para "replegar" o convertir un polipéptido a su estructura terciaria y generar enlaces disulfuro, para restaurar la actividad biológica. Dichos métodos incluyen exponer el polipéptido solubilizado a un pH generalmente superior a 7 y en presencia de una concentración particular de un caótropo. La selección del caotropo es muy similar a las elecciones usadas para la solubilización del cuerpo de inclusión, pero generalmente el caotropo se usa en una concentración más baja y no es necesariamente lo mismo que los caotropos usados para la solubilización. En la mayoría de los casos, la solución de replegamiento/oxidación también contendrá un agente reductor o el agente reductor más su forma oxidada en una proporción específica para generar un potencial redox particular que permita la combinación de disulfuro en la formación de los puentes de cisteína de la proteína. Algunas de las parejas redox comúnmente utilizadas incluyen cisteína/cistamina, glutatión (GSH)/ditiobis GSH, cloruro cúprico, ditiotreitol (DTT)/ditiano DTT y 2-mercaptoetanol (bME)/di-tio-b(ME). En muchos casos, se puede usar un codisolvente para aumentar la eficiencia del replegamiento, y los reactivos comunes usados para este propósito incluyen glicerol, polietilenglicol de diversos pesos moleculares, arginina y similares.

Composiciones

[0334] Aquí se describen composiciones que comprenden una proteína de fusión de inmunoglobulina y/o un componente de una proteína de fusión de inmunoglobulina descrita en este documento. Las composiciones pueden comprender 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más proteínas de fusión de inmunoglobulina. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina pueden ser diferentes. Alternativamente, las proteínas de fusión de inmunoglobulina pueden ser iguales o similares. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina pueden comprender diferentes regiones de anticuerpos, regiones de fusión de extensor, péptidos de extensor, agentes terapéuticos o una combinación de los mismos.

[0335] Las composiciones pueden comprender además una o más sales, excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables. Las sales, excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables para usar en las presentes composiciones farmacéuticas incluyen vehículos, excipientes, diluyentes, antioxidantes, conservantes, colorantes, aromatizantes y diluyentes, agentes emulsionantes, agentes de suspensión, solventes, rellenos, agentes de carga, tampones, vehículos de entrega., agentes de tonicidad, codisolventes, agentes humectantes, agentes complejantes, agentes tamponantes, antimicrobianos y tensioactivos.

[0336] La solución salina tamponada neutra o la solución salina mezclada con albúmina de suero son portadores apropiados ejemplares. Las composiciones farmacéuticas pueden incluir antioxidantes tales como ácido ascórbico; polipéptidos de bajo peso molecular; proteínas, tales como albúmina sérica, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrófilos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina; monosacáridos, disacáridos y otros carbohidratos que incluyen glucosa, manosa o dextrinas; agentes quelantes como EDTA; alcoholes de azúcar tales como manitol o sorbitol; contra iones formadores de sal como el sodio; y/o tensioactivos no iónicos como Tween, pluronics o polietilenglicol (PEG). También a modo de ejemplo, los agentes potenciadores de la tonicidad adecuados incluyen haluros de metales alcalinos (preferiblemente cloruro de sodio o potasio), manitol, sorbitol y similares. Los conservantes adecuados incluyen cloruro de benzalconio, timerosal, alcohol fenetílico, metilparabeno, propilparabeno, clorhexidina, ácido sórbico y similares. El peróxido de hidrógeno también se puede usar como conservante. Los codisolventes adecuados incluyen glicerina, propilenglicol y PEG. Los agentes complejantes adecuados incluyen cafeína, polivinilpirrolidona, beta-ciclodextrina o hidroxipropil-betaciclodextrina. Los tensioactivos o agentes humectantes adecuados incluyen ésteres de sorbitán, polisorbatos tales como polisorbato 80, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal y similares. Los tampones pueden ser tampones convencionales tales como acetato, borato, citrato, fosfato, bicarbonato o Tris-HCl. El tampón de acetato puede tener un pH de aproximadamente 4-5,5, y el tampón Tris puede tener un pH de aproximadamente 7-8,5. Agentes farmacéuticos adicionales se exponen en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edición, AR Gennaro, ed., Mack Publishing Company, 1990.

[0337] La composición puede estar en forma líquida o en forma liofilizada o liofilizada y puede incluir uno o más lioprotectores, excipientes, tensioactivos, aditivos estructurales de alto peso molecular y/o agentes de carga (véanse, por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos Núms. 6.685.940, 6,566,329 y 6,372,716). En una realización, se incluye un lioprotector, que es un azúcar no reductor tal como sacarosa, lactosa o trehalosa. La cantidad de lioprotector generalmente incluida es tal que, después de la reconstitución, la formulación resultante será isotónica, aunque las formulaciones hipertónicas o ligeramente hipotónicas también pueden ser adecuadas. Además, la cantidad de lioprotector debería ser suficiente para evitar una cantidad inaceptable de degradación y/o agregación de la proteína tras la liofilización. Las concentraciones de lioprotectantes ejemplares para azúcares (por ejemplo, sacarosa, lactosa, trehalosa) en la formulación pre-liofilizada son de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 400 mM. En otra realización, se incluye un tensioactivo, tal como, por ejemplo, tensioactivos no iónicos y tensioactivos iónicos tales como polisorbatos (por ejemplo, polisorbato 20, polisorbato 80); poloxámeros (p. ej., poloxámero 188); éteres de poli(etilenglicol) fenilo (por ejemplo, Triton); dodecilo sulfato de sodio (SDS); laurel sulfato de sodio; octilglicósido de sodio; lauril, miristil, linoleil o estearil sulfobetaína; lauril, miristil, linoleil o estearil sarcosina; linoleilo, miristilo o cetilo-betaína; lauroamidopropilo, cocamidopropilo, linoleamidopropilo, miristamidopropilo, palmidopropilo o isostearamidopropilo-betaína (por ejemplo, lauroamidopropilo); miristamidopropilo-, palmidopropilo- o isostearamidopropilo-dimetilamina; metilo cocoílo-sodio o metilo disilo-taurato de disodio; la serie MONAQUAT™ (Mona Industries, Inc., Paterson, NJ), polietilenglicol, polipropilglicol y copolímeros de etileno y propilenglicol (p. ej., Pluronics, PF68, etc.). Cantidades ejemplares de tensioactivo que pueden estar presentes en la formulación pre-liofilizada son de aproximadamente 0,001-0,5%. Los aditivos estructurales de alto peso molecular (p. ej.,rellenos, aglutinantes) pueden incluir, por ejemplo, acacia, albúmina, ácido algínico, fosfato cálcico (dibásico), celulosa, carboximetilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, microcristalina celulosa, dextrano, dextrina, dextratos, sacarosa, tilosa, almidón pregelatinizado, sulfato de calcio, amilosa, glicina, bentonita, maltosa, sorbitol, etilcelulosa, hidrógeno fosfato disódico, fosfato disódico, pirosulfito disódico, alcohol polivinílico, gelatina, glucosa, goma guar, glucosa líquida, azúcar comprimible, silicato de aluminio y magnesio, maltodextrina, óxido de polietileno, polimetacrilatos, povidona, alginato de sodio, celulosa microcristalina de tragacanto, almidón y zeína. Las concentraciones ejemplares de aditivos estructurales de alto peso molecular son del 0,1% al 10% en peso. En otras realizaciones, se puede incluir un agente de carga (por ejemplo, manitol, glicina).

[0338] Las composiciones pueden ser adecuadas para administración parenteral. Las composiciones ejemplares son adecuadas para inyección o infusión en un animal por cualquier ruta disponible para el trabajador experto, tales como rutas intraarticular, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimatosa), intracerebroventricular, intramuscular, intraocular, intraarterial o intralesional. Una formulación parenteral típicamente será una solución acuosa isotónica estéril, libre de pirógenos, que opcionalmente contiene conservantes farmacéuticamente aceptables.

[0339] Ejemplos de disolventes no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales tales como aceite de oliva, y ésteres orgánicos inyectables tales como etilo oleato. Los portadores acuosos incluyen agua, soluciones alcohólicas/acuosas, emulsiones o suspensiones, que incluyen solución salina y medios tamponados. Los vehículos parenterales incluyen solución de cloruro de sodio, dextrosa de Ringers, dextrosa y cloruro de sodio, Ringer de lactato o aceites fijos. Los vehículos intravenosos incluyen reabastecedores de fluidos y nutrientes, reabastecedores de electrolitos, como los basados en la dextrosa de Ringer, y similares. También pueden estar presentes conservantes y otros aditivos, tales como, por ejemplo, antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes, gases inertes y similares. Ver generalmente, Remington's Pharmaceutical Science, 16a Ed., Mack Eds., 1980.

[0340] Las composiciones descritas en el presente documento pueden formularse para un suministro controlado o sostenido de una manera que proporcione concentración local del producto (por ejemplo, bolo, efecto de depósito) y/o mayor estabilidad o vida media en un entorno local particular. Las composiciones pueden comprender la formulación de proteínas de fusión de inmunoglobulinas, polipéptidos, ácidos nucleicos o vectores descritos en este documento con preparaciones particuladas de compuestos poliméricos tales como ácido poliláctico, ácido poliglicólico, etc., así como agentes tales como una matriz biodegradable, microesferas inyectables, partículas microcapsulares,microcápsulas, perlas de partículas bioerosionables, liposomas y dispositivos de suministro implantables que proporcionan la liberación controlada o sostenida del agente activo que luego puede administrarse como una inyección de depósito. Se conocen técnicas para formular tales medios de suministro sostenido o controlado y se han desarrollado y utilizado una variedad de polímeros para la liberación controlada y el suministro de fármacos. Tales polímeros son típicamente biodegradables y biocompatibles. Los hidrogeles de polímeros, incluidos los formados por la formación de complejos de segmentos de polímero o polipéptido enantioméricos, y los hidrogeles con propiedades sensibles a la temperatura o al pH, pueden ser deseables para proporcionar un efecto de depósito de fármacos debido a las condiciones leves y acuosas involucradas en la captura de agentes proteicos bioactivos. Véase, por ejemplo, la descripción de micropartículas poliméricas porosas de liberación controlada para el suministro de composiciones farmacéuticas en el documento w O 93/15722.

[0341] Los materiales adecuados para este propósito incluyen polilactidas (véase, por ejemplo, polímeros de, la Patente de Estados Unidos N° 3,773,919) poli-(ácidos a-hidroxicarboxílicos), tales como poli-D-(-)-ácido 3-hidroxibutírico (EP 133,988A), copolímeros de ácido L-glutámico y gamma-etilo-L-glutamato (Sidman et al., Biopolymers, 22: 547-556 (1983)), poli(2-hidroxietilo-metacrilato) (Langer et al., J. Biomed. Mater. Res., 15: 167-277 (1981), y Langer, Chem. Tech., 12: 98-105 (1982)), etileno acetato de vinilo o poli-D(-)-3-ácido hidroxibutírico. Otros polímeros biodegradables incluyen poli(lactonas), poli(acetales), poli(ortoésteres) y poli(ortocarbonatos). Las composiciones de liberación sostenida también pueden incluir liposomas, que pueden prepararse por cualquiera de varios métodos conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Eppstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 82: 3688 92 (1985).)). El portador en sí, o sus productos de degradación, no deben ser tóxicos en el tejido diana y no deben agravar aún más la afección. Esto puede determinarse mediante un examen de rutina en modelos animales del trastorno diana o, si dichos modelos no están disponibles, en animales normales.

[0342] Las proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento pueden estar microencapsuladas.

[0343] Una composición farmacéutica descrita en el presente documento se puede administrar a un sujeto por cualquier vía de administración adecuada, que incluye pero no se limita a, parenteral (intravenosa, subcutánea, intraperitoneal, intramuscular, intravascular, intratecal, intravítrea, infusión o local), tópica, administración oral o nasal.

[0344] Las formulaciones adecuadas para inyección intramuscular, subcutánea, peritumoral o intravenosa pueden incluir soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas estériles fisiológicamente aceptables, y polvos estériles para reconstituir en soluciones o dispersiones inyectables estériles. Ejemplos de vehículos, diluyentes, disolventes o vehículos acuosos y no acuosos adecuados que incluyen agua, etanol, polioles (propilenglicol, polietilenglicol, glicerol, cremóforo y similares), mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales (como el aceite de oliva) y ésteres orgánicos inyectables como el oleato de etilo. La fluidez adecuada se mantiene, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones, y mediante el uso de tensioactivos. Las formulaciones adecuadas para inyección subcutánea también contienen aditivos opcionales tales como agentes conservantes, humectantes, emulsionantes y dispensadores.

[0345] Para inyecciones intravenosas, un agente activo puede formularse opcionalmente en soluciones acuosas, preferiblemente en tampones fisiológicamente compatibles tales como la solución de Hank, la solución de Ringer o el tampón salino fisiológico.

[0346] Las inyecciones parenterales implican opcionalmente inyección en bolo o infusión continua. Las formulaciones para inyección se presentan opcionalmente en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o en envases multidosis, con un conservante añadido. La composición farmacéutica descrita en el presente documento puede estar en una forma adecuada para inyección parenteral como suspensiones, soluciones o emulsiones estériles en vehículos oleosos o acuosos, y contiene agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Las formulaciones farmacéuticas para administración parenteral incluyen soluciones acuosas de un agente activo en forma soluble en agua. Además, las suspensiones se preparan opcionalmente como suspensiones de inyección aceitosas apropiadas.

[0347] Alternativa o adicionalmente, las composiciones pueden administrarse localmente mediante implantación en el área afectada de una membrana, esponja u otro material apropiado sobre el que se ha absorbido o encapsulado una proteína de fusión de inmunoglobulina descrita en el presente documento. Cuando se usa un dispositivo de implantación, el dispositivo puede implantarse en cualquier tejido u órgano adecuado, y el suministro de una proteína de fusión de inmunoglobulina, ácido nucleico o vector divulgado en el presente documento puede realizarse directamente a través del dispositivo a través de un bolo, o mediante administración continua, o mediante catéter con infusión continua.

[0348] Una composición farmacéutica que comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina descrita en el presente documento puede formularse para inhalación, tal como, por ejemplo, como un polvo seco. Las soluciones de inhalación también pueden formularse en un propulsor licuado para la administración de aerosoles. En otra formulación más, las soluciones pueden ser nebulizadas. La composición farmacéutica adicional para la administración pulmonar incluye, las descritas, por ejemplo, en el documento WO 94/20069, que describe la administración pulmonar de proteínas modificadas químicamente. Para el suministro pulmonar, el tamaño de partícula debe ser adecuado para el suministro al pulmón distal. Por ejemplo, el tamaño de partícula puede ser de 1 pm a 5 pm; sin embargo, se pueden usar partículas más grandes, por ejemplo, si cada partícula es bastante porosa.

[0349] Ciertas formulaciones que comprenden una proteína de fusión de inmunoglobulina descrita en el presente documento pueden administrarse por vía oral. Las formulaciones administradas de esta manera pueden formularse con o sin los vehículos utilizados habitualmente en la composición de formas de dosificación sólidas tales como tabletas y cápsulas. Por ejemplo, una cápsula puede diseñarse para liberar la porción activa de la formulación en el punto del tracto gastrointestinal cuando se maximiza la biodisponibilidad y se minimiza la degradación presistémica. Se pueden incluir agentes adicionales para facilitar la absorción de un agente de unión selectiva. También se pueden emplear diluyentes, aromatizantes, ceras de bajo punto de fusión, aceites vegetales, lubricantes, agentes de suspensión, agentes desintegrantes de tabletas y aglutinantes.

[0350] Otra preparación puede implicar una cantidad efectiva de una proteína de fusión de inmunoglobulina en una mezcla con excipientes no tóxicos que son adecuados para la fabricación de tabletas. Al disolver las tabletas en agua estéril u otro vehículo apropiado, las soluciones se pueden preparar en forma de dosis unitaria. Los excipientes adecuados incluyen, pero no se limitan a, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato o bicarbonato de sodio, lactosa o fosfato de calcio; o agentes aglutinantes, tales como almidón, gelatina o acacia; o agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco.

[0351] Las formulaciones farmacéuticas adecuadas y/o preferidas pueden determinarse en vista de la presente descripción y el conocimiento general de la tecnología de la formulación, dependiendo de la vía de administración pretendida, el formato de administración y la dosificación deseada. Independientemente de la forma de administración, se puede calcular una dosis efectiva de acuerdo con el peso corporal del paciente, el área de superficie corporal o el tamaño del órgano.

[0352] El perfeccionamiento adicional de los cálculos para determinar la dosificación apropiada para el tratamiento que implica cada una de las formulaciones descritas en el presente documento se realiza habitualmente en la técnica y se encuentra dentro del ámbito de las tareas que se realizan habitualmente en la técnica. Se pueden determinar las dosis apropiadas mediante el uso de datos de dosis-respuesta apropiados.

[0353] Las composiciones según la invención puede ser útil para proporcionar pronóstico o proporcionar información de diagnóstico.

[0354] "Farmacéuticamente aceptable" puede referirse a aprobado o aprobable por una agencia reguladora del gobierno federal o estatal o enumerado en la Farmacopea de EE.UU.u otra farmacopea generalmente reconocida para su uso en animales, incluidos humanos.

[0355] "Sal farmacéuticamente aceptable" puede referirse a una sal de un compuesto que es farmacéuticamente aceptable y que posee la actividad farmacológica deseada del compuesto original.

[0356] "Excipiente, vehículo o adyuvante farmacéuticamente aceptable" puede referirse a un excipiente, vehículo o adyuvante que puede administrarse a un sujeto, junto con al menos un anticuerpo de la presente descripción, y que no destruye la actividad farmacológica del mismo y no es tóxico cuando se administra en dosis suficientes para administrar una cantidad terapéutica del compuesto.

[0357] "Vehículo farmacéuticamente aceptable" puede referirse a un diluyente, adyuvante, excipiente o vehículo con el que se administra al menos un anticuerpo de la presente descripción.

Kits

[0358] Se describen adicionalmente en el presente documento kits que comprenden una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina o componentes de las mismas. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina se pueden empaquetar de una manera que facilite su uso para practicar los métodos de la presente descripción. Por ejemplo, un kit comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina descrita en este documento empacada en un recipiente con una etiqueta pegada al recipiente o un inserto de paquete que describe el uso de la proteína de fusión de inmunoglobulina en la práctica del método. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, botellas, viales, jeringas, etc. Los recipientes pueden formarse a partir de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico. El contenedor puede tener un puerto de acceso estéril (por ejemplo, el contenedor puede ser una bolsa de solución intravenosa o un vial que tiene un tapón perforable con una aguja de inyección hipodérmica). El kit puede comprender un recipiente con una proteína de fusión de inmunoglobulina contenida en el mismo. El kit puede comprender un recipiente con (a) una región de anticuerpo de una proteína de fusión de inmunoglobulina; (b) una región de fusión de extensor de una proteína de fusión de inmunoglobulina; (c) un péptido de extensor de la región de fusión del extensor; (d) un agente terapéutico de la región de fusión del extensor; o (e) una combinación de a-d. El kit puede comprender además un prospecto que indica que las composiciones primera y segunda pueden usarse para tratar una afección particular. Alternativamente, o adicionalmente, el kit puede comprender además un segundo (o tercer) recipiente que comprende un tampón farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, agua bacteriostática para inyección (BWFI), solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa). Puede comprender además otros materiales deseables desde el punto de vista comercial y del usuario, que incluyen, entre otros, tampones, diluyentes, filtros, agujas y jeringas. La proteína de fusión de inmunoglobulina se puede empaquetar en una forma de dosificación unitaria. El kit puede comprender además un dispositivo adecuado para administrar la proteína de fusión de inmunoglobulina de acuerdo con una ruta específica de administración o para practicar un ensayo de detección. El kit puede contener una etiqueta que describe el uso de la composición de proteína de fusión de inmunoglobulina.

[0359] La composición que comprende la proteína de fusión de inmunoglobulina puede formularse de acuerdo con procedimientos rutinarios como una composición farmacéutica adaptada para administración intravenosa a mamíferos, tales como humanos, bovinos, felinos, caninos y murinos. Típicamente, las composiciones para administración intravenosa comprenden soluciones en tampón acuoso isotónico estéril. Cuando sea necesario, la composición también puede incluir un agente solubilizante y/o un anestésico local tal como lignocaína para aliviar el dolor en el sitio de la inyección. En general, los ingredientes se pueden suministrar por separado o mezclados en forma de dosificación unitaria. Por ejemplo, la proteína de fusión de inmunoglobulina se puede suministrar como un polvo liofilizado seco o concentrado libre de agua en un recipiente sellado herméticamente, como una ampolla o bolsita que indica la cantidad de proteína de fusión de inmunoglobulina. Cuando la composición se va a administrar por infusión, se puede dispensar con una botella de infusión que contiene agua o solución salina estéril de grado farmacéutico. Cuando la composición se administra por inyección, se puede proporcionar una ampolla de agua estéril para inyección o solución salina para que los ingredientes se puedan mezclar antes de la administración.

[0360] La cantidad de la composición descrita en el presente documento que será eficaz en el tratamiento, inhibición y/o prevención de una enfermedad o trastorno asociado con la expresión y/o actividad aberrante de un agente terapéutico puede serdeterminado por técnicas clínicas estándar. Además, los ensayos in vitro pueden emplearse opcionalmente para ayudar a identificar rangos de dosificación óptimos. La dosis precisa a emplear en la formulación también puede depender de la vía de administración y la gravedad de la enfermedad o trastorno, y debe decidirse de acuerdo con el criterio del profesional y las circunstancias de cada paciente. Las dosis efectivas pueden extrapolarse a partir de curvas de dosis-respuesta derivadas de sistemas de prueba de modelos animales o ensayos clínicos in vitro.

Uso terapéutico

[0361] Se describen adicionalmente en el presente documento proteínas de fusión de inmunoglobulina y métodos para tratar, aliviar, inhibir y/o prevenir una o más enfermedades y/o afecciones. El método puede comprender administrar a un sujeto que lo necesite una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región no anticuerpo comprende uno o más agentes terapéuticos. La región de fusión del extensor comprende uno o más agentes terapéuticos. En algunas realizaciones, la región no inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela. En algunas realizaciones, la región de fusión del extensor comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela. En una realización, el péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una estructura secundaria de hélice alfa y forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor. En una realización, el péptido de extensor forma una espiral enrollada antiparalela con otro péptido de extensor, y el péptido de extensor no comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una estructura secundaria de cadena beta. En algunas realizaciones, la región no inmunoglobulina comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forma una espiral enrollada antiparalela, y uno o más péptidos enlazadores. En algunas realizaciones, la región de fusión del extensor comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forman una espiral enrollada antiparalela, y uno o más péptidos enlazadores. En una realización, la región sin anticuerpo o la región de fusión del extensor comprende un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor que forman una espiral enrollada antiparalela, y el péptido de conexión no comprende una secuencia de aminoácidos que tiene unaestructura secundaria de hélice alfa o cepa beta.

[0362] La composición puede comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El sujeto puede ser un mamífero. El mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero es un bovino. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. El agente terapéutico puede ser GCSF, GCSF bovino, GCSF humano, Moka1, Vm24, Mamba1, GLP-1 humano, exendina-4, EpO humano, FGF21 humano, GMCSF humano, interferón beta humano, interferón alfa humano, relaxina, oxintomodulina, hLeptina, betatrofina, factor de diferenciación de crecimiento 11 (GDF11), hormona paratiroidea, angiopoyetina 3 (ANGPTL3), IL-11, hormona de crecimiento humano (hGH), elafina o derivado o variante de la misma. Alternativamente, o adicionalmente, el agente terapéutico es interleucina 8 (IL-8), IL-21, ziconotida, somatostatina, clorotoxina, SDF1 alfa o derivado o variación de los mismos. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. La enfermedad o afección puede ser una enfermedad autoinmune, enfermedad o afección heteroinmune, enfermedad inflamatoria, infección patógena, trastorno tromboembólico, enfermedad o afección respiratoria, enfermedad metabólica, trastorno del sistema nervioso central (SNC), enfermedad ósea o cáncer. En otros casos, la enfermedad o afección es un trastorno sanguíneo. En algunos casos, la enfermedad o afección es obesidad, diabetes, osteoporosis, anemia o dolor. El agente terapéutico puede ser hGCSF y la enfermedad o afección puede ser neutropenia. El agente terapéutico puede ser hLeptina y la enfermedad o afección puede ser diabetes. El agente terapéutico puede ser hGH y la enfermedad o afección puede ser un trastorno del crecimiento. El agente terapéutico puede ser IFN-alfa y la enfermedad o afección puede ser una infección viral. El agente terapéutico puede ser Mamba1 y la enfermedad o afección puede ser dolor. El agente terapéutico puede ser elafina y la enfermedad o afección puede ser inflamación. El agente terapéutico puede ser IFN-alfa y la enfermedad o afección puede ser un péptido inhibidor de elastasa y la enfermedad o afección puede ser enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC).

[0363] La enfermedad y/o afección puede ser una enfermedad o afección crónica. Alternativamente, la enfermedad y/o afección es una enfermedad o afección aguda. La enfermedad o afección puede ser recurrente, refractaria, acelerada o en remisión. La enfermedad o afección puede afectar uno o más tipos de células. La una o más enfermedades y/o afecciones pueden ser una enfermedad autoinmune, enfermedad inflamatoria, enfermedad cardiovascular, trastorno metabólico, embarazo y trastorno proliferativo celular.

[0364] La enfermedad o afección puede ser una enfermedad autoinmune. En algunos casos, la enfermedad autoinmune puede ser esclerodermia, esclerodermia difusa o esclerodermia sistémica.

[0365] La enfermedad o afección puede ser una enfermedad inflamatoria. En algunos casos, la enfermedad inflamatoria puede ser hepatitis, fibromialgia o psoriasis.

[0366] La enfermedad o afección puede ser una enfermedad reumática. En algunos casos, la enfermedad reumática puede ser espondilitis anquilosante, dolor de espalda, bursitis, tendinitis, dolor de hombro, dolor de muñeca, dolor de bíceps, dolor de piernas, dolor de rodilla, dolor de tobillo, dolor de cadera, dolor de Aquiles, capsulitis, dolor de cuello, osteoartritis, lupus sistémico, eritematoso, artritis reumatoide, artritis juvenil, síndrome de Sjogren, polimiositis, enfermedad de Behcet, síndrome de Reiter o artritis psoriásica. La enfermedad reumática puede ser crónica. Alternativamente, la enfermedad reumática es aguda.

[0367] La enfermedad o afección puede ser una enfermedad cardiovascular. En algunos casos, la enfermedad cardiovascular puede ser insuficiencia cardíaca aguda, insuficiencia cardíaca congestiva, insuficiencia cardíaca compensada, insuficiencia cardíaca descompensada, hipercolesterolemia, aterosclerosis, enfermedad cardíaca coronaria o accidente cerebrovascular isquémico. La enfermedad cardiovascular puede ser hipertrofia cardíaca.

[0368] La enfermedad o condición puede ser un trastorno metabólico. En algunos casos, el trastorno metabólico puede ser hipercolesterolemia, hipobetalipoproteinemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, dislipidemia, cetosis, hipolipidemia, anemia refractaria, control del apetito, vaciamiento gástrico, enfermedad del hígado graso no alcohólico, obesidad, diabetes mellitus tipo I, diabetes mellitus tipo II, diabetes mellitus gestacional, síndrome metabólico. El trastorno metabólico puede ser diabetes tipo I. El trastorno metabólico puede ser diabetes tipo II.

[0369] La enfermedad o afección puede ser el embarazo. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina pueden usarse para tratar la preeclampsia o inducir el parto.

[0370] La enfermedad o afección puede ser un trastorno proliferativo celular. El trastorno de proliferación celular puede ser una leucemia, linfoma, carcinoma, sarcoma o una combinación de los mismos. El trastorno de proliferación celular puede ser una leucemia mielógena, leucemia linfoblástica, leucemia mieloide, leucemia mielomonocítica, leucemia neutrófila, síndrome mielodisplásico, linfoma de células B, linfoma de Burkitt, linfoma de células grandes, linfoma de células mixtas, linfoma folicular, linfoma de células del manto,linfoma de hodgkin, linfoma linfocítico recurrente pequeño, leucemia de células pilosas, mieloma múltiple, leucemia basófila, leucemia eosinofílica, leucemia megacarioblástica, leucemia monoblástica, leucemia monocítica, eritroleucemia, leucemia eritroide, carcinoma hepatocelular, tumores sólidos, leucocitos, metástasis, leucocitos, metástasis, tumores sólidos, liposomas, liposomas, liposomas, tumores sólidos, linfoma, leucemias, liposarcoma (avanzado/metastático), malignidad mieloide, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer uterino, cáncer de riñón, cáncer de páncreas y glioma maligno del cerebro.

[0371] Se describen en el presente documento métodos para tratar una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita, comprendiendo el método administrar al sujeto una composición que comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina descrita en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo que comprende un agente terapéutico. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor que comprende un agente terapéutico. En una realización, el agente terapéutico es oxintomodulina. La enfermedad o afección puede ser un trastorno metabólico. El trastorno metabólico puede ser diabetes. La diabetes puede ser diabetes mellitus tipo II. La diabetes puede ser diabetes tipo I. El trastorno metabólico puede ser la obesidad. Los trastornos metabólicos adicionales incluyen, entre otros, síndrome metabólico, control del apetito o vaciamiento gástrico.

[0372] Se describen en el presente documento métodos para tratar una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita, comprendiendo el método administrar al sujeto una composición que comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina descrita en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo que comprende un agente terapéutico. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor que comprende un agente terapéutico. En una realización, el agente terapéutico es relaxina. La enfermedad o afección puede ser una enfermedad cardiovascular. La enfermedad cardiovascular puede ser insuficiencia cardíaca aguda. Las enfermedades cardiovasculares adicionales incluyen, entre otras, insuficiencia cardíaca congestiva, insuficiencia cardíaca compensada o insuficiencia cardíaca descompensada. La enfermedad o afección puede ser un trastorno autoinmune. El trastorno autoinmune puede ser esclerodermia, esclerodermia difusa o esclerodermia sistémica. La enfermedad o afección puede ser una enfermedad inflamatoria. La enfermedad inflamatoria puede ser fibromialgia. La enfermedad o afección puede ser fibrosis. Alternativamente, la enfermedad o afección es el embarazo. La proteína de fusión de inmunoglobulina se puede usar para tratar la preeclampsia o inducir el parto.

[0373] Se describen en el presente documento métodos para tratar una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita, comprendiendo el método administrar al sujeto una composición que comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina descrita en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo que comprende un agente terapéutico. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor que comprende un agente terapéutico. En una realización, el agente terapéutico es beta-trofina. La enfermedad o afecciónpuede ser un trastorno metabólico. El trastorno metabólico puede ser la obesidad. Alternativamente, el trastorno metabólico es la diabetes. La diabetes puede ser diabetes mellitus tipo I o diabetes mellitus tipo II.

[0374] Se describen en elpresente documento métodos para tratar una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita, comprendiendo el método administrar al sujeto una composición que comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina descrita en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo que comprende un agente terapéutico. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor que comprende un agente terapéutico. En una realización, el agente terapéutico es FGF 21. La enfermedad o afección puede ser un trastorno metabólico. El trastorno metabólico puede ser la obesidad. El trastorno metabólico puede ser diabetes. La diabetes puede ser diabetes mellitus tipo 2, diabetes mellitus tipo I o diabetes mellitus gestacional. Los trastornos metabólicos adicionales incluyen, entre otros, control del apetito y enfermedad del hígado graso no alcohólico. La enfermedad o afección puede ser un trastorno proliferativo celular. El trastorno proliferativo celular puede ser cáncer de seno.

[0375] En este documento se describenmétodos para tratar una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita, comprendiendo el método administrar al sujeto una composición que comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina descrita en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo que comprende un agente terapéutico. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor que comprende un agente terapéutico. En una realización, el agente terapéutico es GDF11. La enfermedad o afección puede ser un trastorno proliferativo celular. El trastorno proliferativo celular puede ser agudo, crónico, recurrente, refractario, acelerado, en remisión, etapa I, etapa II, etapa III, etapa IV, juvenil o adulto. El trastorno de proliferación celular puede ser una leucemia mielógena, leucemia linfoblástica, leucemia mieloide, leucemia mielomonocítica, leucemia neutrófila, síndrome mielodisplásico, linfoma de células B, linfoma de Burkitt, linfoma de células grandes, linfoma de células mixtas, linfoma folicular, linfoma de células del manto, linfoma de hidgkin, linfoma linfocítico recurrente pequeño, leucemia de células pilosas, mieloma múltiple, leucemia basófila, leucemia eosinofílica, leucemia megacarioblástica, leucemia monoblástica, leucemia monocítica, eritroleucemia, leucemia eritroide, carcinoma hepatocelular, tumores sólidos, linfoma, leucemias, liposarcoma (avanzado/metastático), malignidad mieloide, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer uterino, cáncer de riñón, cáncer de páncreas y glioma maligno del cerebro. La enfermedad o afección puede ser una enfermedad cardiovascular. La enfermedad cardiovascular puede ser una enfermedad cardíaca relacionada con la edad. La enfermedad o afección puede ser hipertrofia cardíaca.

[0376] Se describen en el presente documento métodos para tratar una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita, comprendiendo el método administrar al sujeto una composición que comprende una proteína de fusión de inmunoglobulina descrita en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo que comprende un agente terapéutico. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor que comprende un agente terapéutico. En una realización, el agente terapéutico es similar a la angiopoyetina 3. El trastorno metabólico puede ser hipercolesterolemia, hipobetalipoproteinemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, dislipidemia, hipolipidemia o cetosis. La enfermedad o afección puede ser una enfermedad cardiovascular. La enfermedad cardiovascular puede ser aterosclerosis, enfermedad coronaria o accidente cerebrovascular isquémico. La enfermedad o afección puede ser una enfermedad reumática. La enfermedad reumática puede ser espondilitis anquilosante, dolor de espalda, bursitis, tendinitis, dolor de hombro, dolor de muñeca, dolor de bíceps, dolor de piernas, dolor de rodilla (patelar), dolor de tobillo, dolor de cadera, dolor de Aquiles, capsulitis, dolor de cuello, osteoartritis, sistémico lupus, eritematoso, artritis reumatoide, artritis juvenil, síndrome de Sjogren, esclerodermia, polimiositis, enfermedad de Behcet, síndrome de Reiter, artritis psoriásica. En algunos casos, la enfermedad o afección puede ser un trastorno proliferativo celular. El trastorno de proliferación celular puede ser carcinoma hepatocelular o cáncer de ovario. La enfermedad o afección puede ser una enfermedad inflamatoria. La enfermedad inflamatoria puede ser hepatitis.

[0377] Se describen en elpresente documento métodos para prevenir o tratar una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una o más cadenas pesadas de inmunoglobulina, cadenas ligeras o una combinación de las mismas.

[0378] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia que comparte 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% o más identidad de secuencia de aminoácidos con una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99 y 122-143. La secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia que comparte 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% o más identidad de secuencia de nucleótidos con una secuencia de nucleótidos de cualquiera de los SEQ ID NOs: 37-67 y 100-121.

[0379] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia que comparte 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% o más identidad de secuencia de aminoácidos con unasecuencia de cadena pesada proporcionada por SEQ ID NO: 69-79, 81-93, 95-97, 99 y 123-143. La región del anticuerpo puede comprender una cadena pesada de inmunoglobulina. El polipéptido de cadena pesada de inmunoglobulina puede comprender una secuencia que comparte 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% o más identidad de secuencia de aminoácidos con una secuencia de cadena pesada proporcionada por SEQ ID NO: 22-27 y 29-35. La región de anticuerpo puede comprender una cadena ligera de inmunoglobulina.

[0380] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una secuencia que comparte 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% o más identidad de secuencia de aminoácidos con una secuencia de cadena ligera proporcionada por SEQ ID NO: 68, 80, 94,98 y 122. La región del anticuerpo puede comprender una cadena ligera de inmunoglobulina. El polipéptido de la cadena ligera de inmunoglobulina puede comprender una secuencia que comparte 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% o más identidad de secuencia de aminoácidos con una secuencia de cadena ligera proporcionada por SEQ ID NO: 19-21, 28 y 36. La región del anticuerpo puede comprender una cadena pesada de inmunoglobulina.

[0381] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% o más homóloga a una secuencia de nucleótidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 68-99 y 122-143. La cadena pesada de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% o más homóloga a las SEQ ID NOs: 22-27, 29-35, 69-79, 81-93, 95-97, 99 y 123-143. La cadena ligera de inmunoglobulina puede estar codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos aproximadamente 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% o más homóloga a las SEQ ID NOs: 19-21, 28, 36, 68, 80, 94, 98 y 122.

[0382] La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender uno o más péptidos extensores. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender uno o más enlazadores. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender uno o más sitios de escisión proteolítica. La enfermedad o afección puede ser una enfermedad autoinmune, enfermedad o afección heteroinmune, enfermedad inflamatoria, infección patógena, trastorno tromboembólico, enfermedad o afección respiratoria, enfermedad metabólica, trastorno del sistema nervioso central (SNC), enfermedad ósea o cáncer. La enfermedad o afección puede ser un trastorno sanguíneo. En algunos casos, la enfermedad o afección puede ser obesidad, diabetes, osteoporosis, anemia o dolor.

[0383] Se describe en el presente documento un método para prevenir o tratar una enfermedad autoinmune en un sujeto que lo necesita que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. La composición puede comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El sujeto puede ser un mamífero. El mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser Moka1 o un derivado o variante del mismo. El agente terapéutico puede ser VM24 o un derivado o variante del mismo. El agente terapéutico puede ser interferón beta o un derivado o variante del mismo. La región de proteína o anticuerpo de fusión de inmunoglobulina puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo murino. El anticuerpo, la región de anticuerpo o la región de fusión de extensor pueden comprender además un conector. El conector puede unir Moka1, VM24, interferón beta, o un derivado o variante del mismo al péptido de extensor. El conector puede unir la región del anticuerpo a la región de fusión del extensor. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. La enfermedad autoinmune puede ser una enfermedad autoinmune mediada por células T. Las enfermedades autoinmunes mediadas por células T incluyen, entre otras, esclerosis múltiple, diabetes tipo 1 y psoriasis. En otros casos, la enfermedad autoinmune lupus, el síndrome de Sjogren, la esclerodermia, la artritis reumatoide, la dermatomiositis, la tiroiditis de Hasmimoto, la enfermedad de Addison, la enfermedad celíaca, la enfermedad de Crohn, la anemia perniciosa, el pénfigo vulgar, el vitiligo, la anemia hemolítica autoinmune, la trombopenia idiopática, la trombopatía epidopática, la trombopatía epidopática, la tromboembolia idiopática Tiroiditis de Ord, enfermedad de Graves, síndrome de Guillain Barre, encefalomielitis diseminada aguda, síndrome opsoclono-mioclono, síndrome de anticuerpos anquilosantes, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, anemia aplásica, hepatitis autoinmune, síndrome de Goodpasture, síndrome de Reiter, arteritis de Takayasu, arteritis temporal, granulomatosis, alopecia universalis, Enfermedad de Behcet, fatiga crónica, disautonomía, endometriosis, cistitis intersticial, neuromiotonía, esclerodermia y vulvodinia. El lupus puede incluir, pero no se limita a, lupus eritematoso cutáneo agudo, lupus eritematoso cutáneo subagudo, lupus eritematoso cutáneo crónico, lupus eritematoso discoide, lupus eritematoso discoide infantil, lupus eritematosodiscoide generalizado, lupus eritematoso discoide localizado, lupus eritematoso de sabañones (hutchinson), síndrome de solapamiento delupus eritematoso-lichen planus, lupus eritematoso panniculitis (lupus eritematoso profundus), lupus eritematoso túmido, lupus eritematosoverrugoso (lupus eritematoso hipertrófico), síndromes de deficiencia de complemento, lupus eritematoso inducido por fármacos, lupus eritematoso neonatal, y lupus eritematoso sistémico. La enfermedad o afección puede ser esclerosis múltiple. La enfermedad o afección puede ser diabetes.

[0384] Se describe adicionalmente en el presente documento un método para prevenir o tratar una enfermedad o afección que se beneficiaría de la modulación de un canal dependiente de voltaje de potasio en un sujeto necesitando esto que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. La composición puede comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El canal dependiente de voltaje de potasio puede ser un canal KCNA3 o Kv1,3. El sujeto puede ser un mamífero. El mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser Mokalor, un derivado o variante del mismo. El agente terapéutico puede ser VM24 o un derivado o variante del mismo. La región de proteína o anticuerpo de fusión de inmunoglobulina puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El enlazador puede unir Moka1, VM24, o un derivado o variante del mismo al péptido de extensor. El conector puede unir la región del anticuerpo a la región de fusión del extensor. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. La enfermedad o afección puede ser una enfermedad autoinmune. La enfermedad autoinmune puede ser una enfermedad autoinmune mediada por células. La enfermedad o afección puede ser ataxia episódica, convulsiones o neuromiotonía. La modulación de un canal dependiente de voltaje de potasio puede comprender inhibir o bloquear un canal dependiente de voltaje de potasio. La modulación de un canal dependiente de voltaje de potasio puede comprender activar un canal dependiente de voltaje de potasio.

[0385] Se proporciona en el presente documento un método para prevenir o tratar una enfermedad o afección metabólica en un sujeto que lo necesite que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. La composición puede comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El sujeto puede ser un mamífero. El mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser GLP-1, exendina-4, FGF21 o un derivado o variante del mismo. El GLP-1 puede ser un GLP-1 humano. El FGF21 puede ser un FGF21 humano. El anticuerpo o región de anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir GLP-1, exendina-4, FGF21, o un derivado o variante del mismo al péptido de extensor. El conector puede unir la región del anticuerpo a la región de fusión del extensor. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. Las enfermedades y/o afecciones metabólicas pueden incluir trastornos del metabolismo de carbohidratos, metabolismo de aminoácidos, metabolismo de ácidos orgánicos(acidurias orgánicas), oxidación de ácidos grasos y metabolismo mitocondrial, metabolismo de porfirina, metabolismo de purina o pirimidina, metabolismo de esteroides, función mitocondrial, función peroxisomal, trastorno del ciclo de la urea, defectos del ciclo de la urea o trastornos del almacenamiento lisosómico. La enfermedad o afección metabólica puede ser diabetes. En otros casos, la enfermedad o condición metabólica puede ser la enfermedad de almacenamiento de glucógeno, fenilcetonuria, enfermedad de orina de jarabe de arce, acidemia glutárica tipo 1, deficiencia de carbamoílo fosfato sintetasa I, alcaptonuria, deficiencia de acilo-coenzima A deshidrogenasa de cadena media (MCADD), porfiria intermitente aguda, síndrome de Lesch-Nyhan, hiperplasia suprarrenal congénita lipoide, hiperplasia suprarrenal congénita, síndrome de Kearns-Sayre, síndrome de Zellweger, enfermedad de Gaucher o enfermedad de Niemann Pick.

[0386] Se proporciona en el presente documento un método para prevenir o tratar un trastorno del sistema nervioso central (SNC) en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región no anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. La composición puede comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El sujeto puede ser un mamífero. El mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser GLP-1, exendina-4 o un derivado o variante del mismo. El GLP-1 puede ser un GLP-1 humano. El anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir GLP-1, exendina-4, o un derivado o variante del mismo al dominio de inmunoglobulina o fragmento del mismo. El conector puede unir la región del anticuerpo a la región de fusión del extensor. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El trastorno del SNC puede ser la enfermedad de Alzheimer (EA). Los trastornos adicionales del SNC incluyen, entre otros, encefalitis, meningitis, paraparesia espástica tropical, quistes aracnoideos, enfermedad de Huntington, síndrome de bloqueo, enfermedad de Parkinson, Tourette y esclerosis múltiple.

[0387] En este documento se proporciona un método para prevenir o tratar una enfermedad o afección que se beneficia de un agonista de GLP-1R y/o receptor de glucagón (GCGR) en un sujeto que lo necesita que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o másproteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. La composición puede comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El sujeto puede ser un mamífero. El mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser GLP-1, exendina-4 o un derivado o variante del mismo. El GLP-1 puede ser un GLP-1 humano. La región de proteína o anticuerpo de fusión de inmunoglobulina puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. Enotros casos, el anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir G^lP-1, exendina-4, o un derivado o variante del mismo al péptido de extensor. En otros casos, el conector une la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. La enfermedad o afección puede ser una enfermedad o trastorno metabólico. La enfermedad o afección puede ser diabetes. En otros casos, la enfermedad o afección puede ser obesidad. Las enfermedades y/o afecciones adicionales que se benefician de un agonista de GLP-1R y/o GCGR incluyen, pero no se limitan a, dislipidemia, enfermedades cardiovasculares y del hígado graso.

[0388] Se proporciona en el presente documento un método para prevenir o tratar un trastorno de la sangre en un sujeto que lo necesita que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. La composición puede comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El sujeto puede ser un mamífero. El mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser eritropoyetina, GMCSF o un derivado o variante del mismo. La eritropoyetina puede ser una eritropoyetina humana. El GMCSF puede ser un GMCSF humano. El anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El enlazador puede unir eritropoyetina, GMCSF o un derivado o variante del mismo al péptido de extensor. El conector puede unir la región del anticuerpo a la región de fusión del extensor. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El trastorno sanguíneo puede ser anemia. Los ejemplos de anemia incluyen, pero no se limitan a, xerocitosis hereditaria, anemia diseritropoyética congénita, enfermedad Rh null, anemia relacionada con la mononucleosis infecciosa, anemia relacionada con medicamentos, anemia aplásica, anemia microcítica, anemia macrocítica, anemia normocítica, anemia hemolítica, anemia poiquilocítica, anemia esferocítica, anemia drepanocítica, anemia normocrómica, anemia hipercrómica, anemia hipocrómica, anemia macrocítica-normocrómica, anemia microcítica-hipocrómica, anemia normocítica-normocrómica, anemia por deficiencia de hierro, anemia perniciosa, anemia por deficiencia de folato, talasemia, anemia sideroblástica, anemia post-hemorrágica, anemia falciforme, anemia crónica, anemia acrestica, anemia hemolítica autoinmune, anemia de Cooley, anemia hemolítica inmune inducida por fármacos, anemia eritroblástica, anemia hipoplásica, anemia de Diamond-Blackfan, anemia de Pearson, anemia transitoria, anemia de Fanconi, anemia de Lederer, anemia mielopática, anemia nutricional, anemia de células espurias, anemia de Von Jaksh, anemiasideroblática, anemia sideropénica, talasemia alfa, talasemia beta, enfermedad de hemoglobina h, anemia hemolítica aguda adquirida, anemia hemolítica autoinmune cálida, anemia hemolítica autoinmune en frío, anemia hemolítica autoinmune en frío primario, anemia hemolítica autoinmune en frío secundaria, anemia hemolítica autoinmune secundaria,anemia hemolítica autoinmune primaria, anemia sideroblástica ligada al cromosoma X, anemia sensible a piridoxina, anemia sideroblástica nutricional, anemia sideroblástica inducida por deficiencia de piridoxina, anemia sideroblástica inducida por deficiencia de cobre, anemia sideroblástica inducida por cicloserina, anemia sideroblástica inducida por cloranfenicol, anemia sideroblástica inducida por etanol, anemia sideroblástica inducida por isoniazida, anemia sideroblástica inducida por fármacos, anemia sideroblástica inducida por toxinas, anemia hipercrómica microcítica, anemia hipercrómica macrocítica, anemia megalocítica-normocrómica, anemia hemolítica inmune inducida por fármacos, anemia esferocítica no hereditaria, anemia esferocítica hereditaria y anemia congénita herocítica sp. En otros casos, el trastorno sanguíneo puede ser malaria. Alternativamente, el trastorno sanguíneo puede ser linfoma, leucemia, mieloma múltiple o síndrome mielodisplásico. El trastorno sanguíneo puede ser neutropenia, síndrome de Shwachmann-Diamond, síndrome de Kostmann, enfermedad granulomatosa crónica, deficiencia de adhesión de leucocitos, deficiencia de meiloperoxidasa o síndrome de Chediak Higashi.

[0389] Se proporciona en el presente documento un método para prevenir o tratar una enfermedad o trastorno que se beneficia de estimular o aumentar la producción de glóbulos blancos en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede conteneruna región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. La composición puede comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El sujeto puede ser un mamífero. El mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser GMCSF o un derivado o variante del mismo. El GMCSF puede ser un GMCSF humano. La región de proteína o anticuerpo de fusión de inmunoglobulina puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir la región del anticuerpo a la región de fusión del extensor. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. La enfermedad o trastorno puede ser neutropenia, síndrome de Shwachmann-Diamond, síndrome de Kostmann, enfermedad granulomatosa crónica, deficiencia de adhesión de leucocitos, deficiencia de meiloperoxidasa o síndrome de Chediak Higashi.

[0390] Se proporciona en el presente documento un método para prevenir o tratar una enfermedad o trastorno que se beneficia de estimular o aumentar la producción de glóbulos rojos en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. La composición puede comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El sujeto puede ser un mamífero. El mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser eritropoyetina o un derivado o variante de la misma. La eritropoyetina puede ser una eritropoyetina humana. El anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El enlazador puede unir eritropoyetina, o un derivado o variante de la misma al péptido de extensor. El conector puede unir la región del anticuerpo a la región de fusión del extensor. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. La enfermedad o trastorno puede ser anemia.

[0391] Se proporciona en el presente documento un método para prevenir o tratar la obesidad en un sujeto que lo necesita que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprenderque comprende un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. La composición puede comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El sujeto puede ser un mamífero. El mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser GLP-1 o un derivado o variante del mismo. El GLP-1 puede ser un GLP-1 humano. El agente terapéutico puede ser FGF21 o un derivado o variante del mismo. El FGF21 puede ser un FGF21 humano. El agente terapéutico puede ser exendina-4 o un derivado o variante del mismo. El anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir GLP-1, exendina-4, FGF21, o un derivado o variante del mismo al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico.

[0392] Se proporciona en el presente documento un método para prevenir o tratar un dolor en un sujeto que lo necesita que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. El sujeto puede ser un mamífero. En ciertos casos, el mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser un Mamba1 o un derivado o variante del mismo. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina, las regiones de anticuerpos y/o las regiones de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir el Mamba1 o un derivado o variante del mismo al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico.

[0393] En este documento se proporciona un método para prevenir o tratar una enfermedad o afección que se beneficia de la modulación de un canal de iones de sodio en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. El sujeto puede ser un mamífero. En ciertos casos, el mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El uno o más anticuerpos, fragmentos de anticuerpos o construcciones de inmunoglobulina comprenden además un conector. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico.

[0394] En este documento se proporciona un método para prevenir o tratar una enfermedad o afección que se beneficia de la modulación de un canal iónico sensor de ácido (ASIC) en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar al sujeto una composiciónquecomprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. El sujeto puede ser un mamífero. En ciertos casos, el mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser Mamba 1 o un derivado o variante del mismo. El agente terapéutico puede ser un inhibidor de elastasa de neutrófilos o un derivado o variante del mismo. El uno o más anticuerpos, fragmentos de anticuerpos o construcciones de inmunoglobulina comprenden además un conector. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. La modulación de un ASIC puede comprender inhibir o bloquear el ASIC. La modulación de un ASIC puede comprender la activación del ASIC. La enfermedad o afección puede ser un trastorno del sistema nervioso central. En otros casos, la enfermedad o condición es dolor.

[0395] Se proporciona en el presente documento un método para prevenir o tratar una infección patogénica en un sujeto que lo necesita que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. La composición puede comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El sujeto puede ser un mamífero. El mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser un interferónalfa o un derivado o variante del mismo. El agente terapéutico puede ser interferón beta o un derivado o variante del mismo. El anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir interferón alfa, interferón beta, o un derivado o variante del mismo al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. La infección patogénica puede ser una infección bacteriana. La infección patogénica puede ser una infección micótica. La infección patogénica puede ser una infección parasitaria. La infección patogénica puede ser una infección viral. La infección viral puede ser un virus herpes.

[0396] Se proporciona en el presente documento un método para prevenir o tratar un cáncer en un sujeto que lo necesita que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de unCDR3 o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. La composición puede comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El sujeto puede ser un mamífero. El mamífero puede ser un humano. Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser interferón beta o un derivado o variante del mismo. El anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir un agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El cáncer puede ser un tumor maligno hematológico. La neoplasia maligna hematológica puede ser una leucemia o un linfoma. La neoplasia hematológica puede ser un linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma folicular, linfoma de zona marginal, leucemia de células pilosas, leucemia mieloide crónica, linfoma de células del manto, linfoma nodular, linfoma de Burkitt, linfoma cutáneo de células T, leucemia linfocítica crónica o leucemia linfocítica pequeña.

[0397] Se proporciona en el presente documento un método para prevenir o tratar una enfermedad o afección que se beneficiaría de la modulación de un receptor en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto una composición descrita en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina que comprenden una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados en o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. El sujeto puede ser un mamífero. En ciertos casos, el mamífero puede ser un humano.

Alternativamente, el mamífero puede ser un bovino. El agente terapéutico puede ser hGCSF o un derivado o variante del mismo y el receptor puede ser GCSFR. El agente terapéutico puede ser eritropoyetina o un derivado o variante de la misma y el receptor puede ser EPOR. El agente terapéutico puede ser exendina-4 o un derivado o variante del mismo y el receptor puede ser GLP1R. El agente terapéutico puede ser GLP-1 o un derivado o variante del mismo y el receptor puede ser GLP1R. El agente terapéutico puede ser hLeptina o un derivado o variante del mismo y el receptor puede ser LepR. El agente terapéutico puede ser hGH o un derivado o variante del mismo y el receptor puede ser GHR. El agente terapéutico puede ser interferón alfa o un derivado o variante del mismo y el receptor puede ser IFNR. El agente terapéutico puede ser interferón beta o un derivado o variante del mismo y el receptor puede ser IFNR. El agente terapéutico puede ser relaxina o un derivado o variante de la misma y el receptor puede ser LGR7. El agente terapéutico puede ser GMCSF o un derivado o variante del mismo y el receptor puede ser GMCSFR. El uno o más anticuerpos, fragmentos de anticuerpos o construcciones de inmunoglobulina comprenden además un conector. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. La enfermedad o afección puede ser una enfermedad autoinmune. La enfermedad autoinmune puede ser una enfermedad autoinmune mediada por células T. La enfermedad o afección puede ser un trastorno metabólico. El trastorno metabólico puede ser diabetes. La enfermedad o afección puede ser un trastorno inflamatorio. El trastorno inflamatorio puede ser esclerosis múltiple. La enfermedad o afección puede ser un trastorno proliferativo celular. La enfermedad o afección puede ser un trastorno sanguíneo. El trastorno de la sangre puede ser neutropenia. El trastorno sanguíneo puede ser anemia. La enfermedad o afección puede ser una infección patogénica. La infección patogénica puede ser una infección viral. La enfermedad o afección puede ser un trastorno del crecimiento. La enfermedad o afección puede ser una afección cardiovascular. La condición cardiovascular puede ser insuficiencia cardíaca aguda. La modulación del receptor puede comprender inhibir o bloquear el receptor. La modulación del receptor puede comprender activar el receptor. El agente terapéutico puede actuar como un agonista del receptor. El agente terapéutico puede actuar como un antagonista del receptor.

[0398] Se proporciona en el presente documento un método para prevenir o tratar una enfermedad en un mamífero que lo necesita que comprende administrar una composición farmacéutica descrita en el presente documento a dicho mamífero. En algunas realizaciones, la enfermedad puede ser una enfermedad infecciosa. En ciertas realizaciones, la enfermedad infecciosa puede ser mastitis. En algunas realizaciones, la enfermedad infecciosa puede ser una enfermedad respiratoria. En ciertas realizaciones, la enfermedad respiratoria puede ser enfermedad respiratoria bovina de fiebre de envío. En ciertas realizaciones, el mamífero que lo necesita puede ser un animal lechero seleccionado de una lista que comprende vaca, camello, burro, cabra, caballo, reno, oveja, búfalo de agua, alce y yak. En algunas realizaciones, el mamífero necesitado puede ser bovino.

[0399] Se puede proporcionar un método para prevenir o tratar la mastitis en un animal lechero, que comprende proporcionar a dicho animal lechero una cantidad eficaz de una composición que comprende una o más proteínas de fusión de inmunoglobulina descritas en el presente documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende una hélice alfa y (i) una secuencia de aminoácidos que comprende 7 o menos aminoácidos basados o derivados de una CDR3 ultra larga o (ii) una secuencia de aminoácidos que no comprende una CDR3 ultra larga; y (b) un agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser GCSF. El GCSF puede ser un GCSF bovino. El GCSF puede ser un GCSF humano. En algunas realizaciones, el animal lechero puede ser una vaca o un búfalo de agua.

[0400] Se proporcionan métodos de tratamiento, inhibición y prevención de una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita mediante la administración al sujeto de una cantidad eficaz de una proteína de fusión de inmunoglobulina o composición farmacéutica descrita en este documento. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede estar sustancialmente purificada (por ejemplo, sustancialmente libre de sustancias que limitan su efecto o producen efectos secundarios no deseados). El sujeto puede ser un animal, incluidos, entre otros, animales como vacas, cerdos, ovejas, cabras, conejos, caballos, gallinas, gatos, perros, ratones, etc. El sujeto puede ser un mamífero. El sujeto puede ser un humano. El sujeto puede ser un primate no humano. Alternativamente, el sujeto puede ser un bovino. El sujeto puede ser un ave, reptil o anfibio.

Usos adicionales

[0401] Se describen adicionalmente en el presente documento los usos de una proteína de fusión de inmunoglobulina (IFP) en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. En el presente documento se describe el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. Además se describe en el presente documento el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección, el IFP comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región no anticuerpo puede insertarse dentro de la región de anticuerpo. La región no anticuerpo puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región de anticuerpo. La región no anticuerpo puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región de anticuerpo. La región no anticuerpo puede conjugarse con la región de anticuerpo. El no anticuerpo puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede comprender GCSF. El GCSF puede ser un GCSF humano. El agente terapéutico puede ser Moka1. El agente terapéutico puede ser VM24. El agente terapéutico puede ser exendina-4. El agente terapéutico puede ser eritropoyetina. La eritropoyetina puede ser una eritropoyetina humana. El agente terapéutico puede ser hLeptin. El agente terapéutico puede ser una hormona del crecimiento (GH). La hormona del crecimiento puede ser una hormona del crecimiento humano (hGH). El agente terapéutico puede ser interferón alfa. El agente terapéutico puede ser interferón beta. El agente terapéutico puede ser GLP-1. El agente terapéutico puede ser un inhibidor de elastasa de neutrófilos. El agente terapéutico puede ser relaxina. El agente terapéuticopuede ser Mamba1. El agente terapéutico puede ser elafina. El agente terapéutico puede ser betatrofina. El agente terapéutico puede ser GDF11. El agente terapéutico puede ser GMCSF. La enfermedad o afección puede ser una enfermedad autoinmune, enfermedad o afección heteroinmune, enfermedad inflamatoria, infección patógena, trastorno tromboembólico, enfermedad o afección respiratoria, enfermedad metabólica, trastorno del sistema nervioso central (SNC), enfermedad ósea o cáncer. En otros casos, la enfermedad o afección es un trastorno sanguíneo. En algunos casos, la enfermedad o afección es obesidad, diabetes, osteoporosis, anemia o dolor. La enfermedad o afección puede ser un trastorno del crecimiento.

[0402] En este documento se describe el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno proliferativo celular. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. El trastorno proliferativo celular puede ser cáncer. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región no anticuerpo puede insertarse dentro de la región de anticuerpo. La región no anticuerpo puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región de anticuerpo. La región no anticuerpo puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región de anticuerpo. La región no anticuerpo puede conjugarse con la región de anticuerpo. La región no anticuerpo puede conjugarse en una posición dentro de la región de anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña.

[0403] En el presente documento se describe el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno metabólico. El trastorno metabólico puede ser diabetes. La diabetes puede ser diabetes tipo I. La diabetes puede ser diabetes tipo II. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero.Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser exendina-4. El agente terapéutico puede ser GLP-1. El agente terapéutico puede ser hLeptin. El agente terapéutico puede ser betatrofina.

[0404] Se describe en el presente documento el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección autoinmunitaria. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser Moka1. El agente terapéutico puede ser VM24.

[0405] En este documento se describe el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección inflamatoria. La enfermedad o afección inflamatoria puede ser esclerosis múltiple. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser unaregión deinmunoglobulina de la cadena pesada o fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser elafina. El agente terapéutico puede ser interferón beta.

[0406] En el presente documento se describe el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección del sistema nervioso central. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La enfermedad o afección del sistema nervioso central puede ser dolor. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser Mamba1.

[0407] En el presente documento se describe el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección cardiovascular. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La enfermedad o afección cardiovascular puede ser insuficiencia cardíaca aguda. La enfermedad o afección cardiovascular puede ser hipertrofia cardíaca. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, unainmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser unaregión de inmunoglobulina de la cadena pesada o fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser relaxina. El agente terapéutico puede ser GDF11.

[0408] Se describe en el presente documento el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección hematológica. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La enfermedad o afección hematológica puede ser anemia. La enfermedad o afección hematológica puede ser neutropenia. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región no anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser GCSF. El GCSF puede ser un GCSF humano. El agente terapéutico puede ser eritropoyetina. La eritropoyetina puede ser una eritropoyetina humana. El agente terapéutico puede ser GMCSF.

[0409] En el presente documento se describe el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección patogénica. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La infección patogénica puede ser una infección viral. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensorpuede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser interferón alfa.

[0410] En este documento se describe el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno del crecimiento. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. Los ejemplos de trastornos del crecimiento incluyen, pero no se limitan a, acondroplasia, acondroplasia en niños, acromegalia, distrofia adiposogenital, enanismo, gigantismo, Brooke Greenberg, hemihipertrofia, hipocondroplasia, condrodisplasia metafisaria de Jansen, síndrome de Kowarski,discondrosteosis de Leri-Weill, gigantismo local, macrodistrofia lipomatosa, síndrome de polidactilia de Majewski, enanismo primordial osteodisplásico microcefálico tipo II, enano, síndrome de sobrecrecimiento, enanismo parastremático, enanismo primordial, pseudoacondroplasia, estatura psicosocial corta, síndrome de Seckel, síndrome de costilla corta -polidactilia y síndrome de Silver-Russell. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser una hormona del crecimiento. La hormona del crecimiento puede ser una hormona del crecimiento humano (hGH).

[0411] Se describen adicionalmente en el presente documento los usos de una proteína de fusión de inmunoglobulina para el tratamiento de una enfermedad o afección. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpounida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede comprender GCSF. El GCSF puede ser un GCSF humano. El agente terapéutico puede ser Moka1. El agente terapéutico puede ser VM24. El agente terapéutico puede ser exendina-4. El agente terapéutico puede ser eritropoyetina. La eritropoyetina puede ser una eritropoyetina humana. El agente terapéutico puede ser hLeptina. El agente terapéutico puede ser una hormona del crecimiento (GH). La hormona del crecimiento puede ser una hormona del crecimiento humano (hGH). El agente terapéutico puede ser interferón alfa. El agente terapéutico puede ser interferón beta. El agente terapéutico puede ser GLP-1. El agente terapéutico puede ser relaxina. El agente terapéutico puede ser un inhibidor de elastasa de neutrófilos. El agente terapéutico puede ser Mamba1. El agente terapéutico puede ser elafina. El agente terapéutico puede ser betatrofina. El agente terapéutico puede ser GDF11. El agente terapéutico puede ser GMCSF. La enfermedad o afección puede ser una enfermedad autoinmune, enfermedad o afección heteroinmune, enfermedad inflamatoria, infección patógena, trastorno tromboembólico, enfermedad o afección respiratoria, enfermedad metabólica, trastorno del sistema nervioso central (SNC), enfermedad ósea o cáncer. En otros casos, la enfermedad o afección es un trastorno sanguíneo. En algunos casos, la enfermedad o afección es obesidad, diabetes, osteoporosis, anemia o dolor. La enfermedad o afección puede ser un trastorno del crecimiento.

[0412] En el presente documento se describe el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina para el tratamiento de un trastorno proliferativo celular en un sujeto que lo necesita. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. El trastorno proliferativo celular puede ser cáncer. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña.

[0413] Se describe en el presente documento el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina para el tratamiento de un trastorno metabólico en un sujetoque lonecesite. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. El trastorno metabólico puede ser diabetes. La diabetes puede ser diabetes tipo I. La diabetes puede ser diabetes tipo II. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser exendina-4. El agente terapéutico puede ser GLP-1. El agente terapéutico puede ser hLeptina. El agente terapéutico puede ser betatrofina.

[0414] Se describe en el presente documento el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina para el tratamiento de una enfermedad o afección autoinmunitaria en un sujeto que lo necesita. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser Moka1. El agente terapéutico puede ser VM24.

[0415] Se describe en el presente documento el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina para el tratamiento de una enfermedad inflamatoriao afección en un sujeto que lo necesita. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La enfermedad o afección inflamatoria puede ser esclerosis múltiple. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser elafina. El agente terapéutico puede ser interferón beta.

[0416] En este documento se describe el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina para el tratamiento de una enfermedad o afección del sistema nervioso central en un sujeto que lo necesita. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La enfermedad o afección del sistema nervioso central puede ser dolor. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser Mamba1.

[0417] Se describe en el presente documento el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina para el tratamiento de una enfermedad cardiovascularo afección en un sujeto que lo necesita. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La enfermedad o afección cardiovascular puede ser insuficiencia cardíaca aguda. La enfermedad o afección cardiovascular puede ser hipertrofia cardíaca. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El ⁱF^ppuede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser relaxina. El agente terapéutico puede ser GDF11.

[0418] En el presente documento se describe el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina para el tratamiento de una enfermedad o afección hematológica en un sujeto que lo necesita. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La enfermedad o afección hematológica puede ser anemia. La enfermedad o afección hematológica puede ser neutropenia. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser GCSF. El GCSF puede ser un GCSf humano. El agente terapéuticopuede ser eritropoyetina. La eritropoyetina puede ser una eritropoyetina humana. El agente terapéutico puede ser GMCSF.

[0419] En el presente documento se describe el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina para el tratamiento de una infección patogénica en un sujeto que la necesita. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La infección patogénica puede ser una infección viral. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El ⁱF^ppuede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpo y/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser interferón alfa.

[0420] Se describe en el presente documento el uso de una proteína de fusión de inmunoglobulina para el tratamiento de un trastorno del crecimiento en un sujeto que lo necesita. Los ejemplos de trastornos del crecimiento incluyen, pero no se limitan a, acondroplasia, acondroplasia en niños, acromegalia, distrofia adiposogenital, enanismo, gigantismo, Brooke Greenberg, hemihipertrofia, hipocondroplasia, condrodisplasia metafisaria de Jansen, síndrome de Kowarski, síndrome de Leri-Weill, gigantismo local, macrodistrofia lipomatosa, síndrome de polidactilia de Majewski, enanismo primordial osteodisplásico microcefálico tipo II, enano, síndrome de sobrecrecimiento, enanismo parastremático, enanismo primordial, pseudoacondroplasia, estatura psicosocial corta, síndrome de Seckel, síndrome de polidactilia de costilla corta y síndrome de Silver-Russell. El IFP puede ser cualquiera de los IFP descritos aquí. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región sin anticuerpo. La región no anticuerpo puede comprender un agente terapéutico. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de extensor. La región no anticuerpo puede comprender un péptido de conexión. La región no anticuerpo puede comprender un sitio de escisión proteolítica. La proteína de fusión de inmunoglobulina puede comprender una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de extensor. La región de fusión del extensor puede comprender un péptido de conexión. La región de fusión del extensor puede comprender un sitio de escisión proteolítica. El IFP puede comprender una región sin anticuerpo unida a una región de anticuerpo, en donde la región de anticuerpo comprende 6 o menos aminoácidos de una CDR3 ultra larga. La región no anticuerpo puede comprender uno o más agentes terapéuticos. En algunos casos, la proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región de anticuerpo unida a una región de fusión de extensor, en donde la región de fusión de extensor comprende (a) un péptido de extensor que comprende al menos una estructura secundaria; y (b) un agente terapéutico. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena pesada de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede insertarse dentro de una cadena ligera de inmunoglobulina de la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse con la región del anticuerpo. La región de fusión del extensor puede conjugarse en una posición dentro de la región del anticuerpo. La región del anticuerpo puede comprender uno o más dominios de inmunoglobulina. El dominio de inmunoglobulina puede ser una inmunoglobulina A, una inmunoglobulina D, una inmunoglobulina E, una inmunoglobulina G o una inmunoglobulina M. El dominio de inmunoglobulina puede ser una región de cadena pesada de inmunoglobulina o un fragmento de la misma. En algunos casos, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo de mamífero. Alternativamente, el dominio de inmunoglobulina es de un anticuerpo quimérico. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo modificado o anticuerpo recombinante. El dominio de inmunoglobulina puede ser de un anticuerpo humanizado, modificado por ingeniería humana o completamente humano. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo bovino. El anticuerpo de mamífero puede ser un anticuerpo humano. En otros casos, el anticuerpo de mamífero es un anticuerpo murino. La proteína de fusión de inmunoglobulina, la región de anticuerpoy/o la región de fusión de extensor pueden comprender además uno o más enlazadores. El conector puede unir agente terapéutico al péptido de extensor. El conector puede unir la región de fusión del extensor a la región del anticuerpo. El conector puede unir un sitio de escisión proteolítica a la región del anticuerpo, la región de fusión del extensor, el péptido de extensor o el agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser un péptido o derivado o variante del mismo. Alternativamente, el agente terapéutico es una molécula pequeña. El agente terapéutico puede ser una hormona del crecimiento. La hormona del crecimiento puede ser una hormona del crecimiento humano (hGH).

Propiedades farmacológicas

[0421] Además se describen en el presente documento métodos para mejorar una o más propiedades farmacológicas de un agente terapéutico. El método puede comprender producir una proteína de fusión de inmunoglobulina descrita aquí. Los ejemplos de propiedades farmacológicas pueden incluir, entre otros, semivida, estabilidad, solubilidad, inmunogenicidad, toxicidad, biodisponibilidad, absorción, liberación, distribución, metabolización y excreción. La liberación puede referirse al proceso de liberación de un agente terapéutico de la formulación farmacéutica. La absorción puede referirse al proceso de una sustancia que ingresa a la circulación sanguínea. La distribución puede referirse a la dispersión o diseminación de sustancias a través de los fluidos y tejidos del cuerpo. La metabolización (o biotransformación o inactivación) puede referirse al reconocimiento por parte de un organismo de que hay una sustancia extraña y a la transformación irreversible de los compuestos parentales en metabolitos hijos. La excreción puede referirse a la eliminación de las sustancias del cuerpo.

[0422] La vida media de un agente terapéutico puede ser mayor que la vida media del agente terapéutico no conjugado. La vida media del agente terapéutico puede ser mayor de 4 horas, mayor de 6 horas, mayor de 12 horas, mayor de 24 horas, mayor de 36 horas, mayor de 2 días, mayor de 3 días, mayor de 4 días, mayor de 5 días, mayor de 6 días, mayor de 7 días, mayor de 8 días, mayor de 9 días, mayor de 10 días, mayor de 11 días, mayor de 12 días, mayor de 13 días o mayor de 14 días cuando se administra a un sujeto. La vida media del agente terapéutico puede ser mayor de 4 horas cuando se administra a un sujeto. La vida media del agente terapéutico puede ser mayor de 6 horas cuando se administra a un sujeto.

[0423] La vida media del agente terapéutico puede aumentar en al menos aproximadamente 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, o 20 o más horas. La vida media del agente terapéutico puede aumentar al menos aproximadamente 2 horas. La vida media del agente terapéutico puede aumentar al menos aproximadamente 4 horas. La vida media del agente terapéutico puede aumentar al menos aproximadamente 6 horas. La vida media del agente terapéutico puede aumentar al menos aproximadamente 8 horas.

[0424] La vida media de un agente terapéutico puede ser al menos aproximadamente 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, o 10 veces mayor que la vida media del péptido terapéutico no conjugado. La vida media de un agente terapéutico de un anticuerpo descrito en el presente documento puede ser al menos aproximadamente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 50 veces mayor que la vida media del péptido terapéutico no conjugado. La vida media de un agente terapéutico de un anticuerpo descrito en este documento puede ser al menos aproximadamente 2 veces mayor que la vida media del péptido terapéutico no conjugado. La vida media de un agente terapéutico de un anticuerpo descrito en la presente memoria puede ser al menos aproximadamente 5 veces mayor que la vida media del péptido terapéutico no conjugado. La vida media de un agente terapéutico de un anticuerpo descrito en el presente documento puede ser al menos aproximadamente 10 veces mayor que la vida media del péptido terapéutico no conjugado.

[0425] La vida media de un agente terapéutico un anticuerpo descrito en el presente documento puede ser al menos aproximadamente 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 97% mayor que la vida media del péptido terapéutico no conjugado. La vida media de un agente terapéutico de un anticuerpo descrito en el presente documento puede ser al menos aproximadamente un 10% mayor que la vida media del péptido terapéutico no conjugado. La vida media de un agente terapéutico de un anticuerpo descrito en este documento puede ser al menos aproximadamente un 20% mayor que la vida media del péptido terapéutico no conjugado. La vida media de un agente terapéutico de un anticuerpo descrito en este documento puede ser al menos aproximadamente 30% mayor que la vida media del péptido terapéutico no conjugado. La vida media de un agente terapéutico de un anticuerpo descrito en la presente memoria puede ser al menos aproximadamente un 40% mayor que la vida media del péptido terapéutico no conjugado. La vida media de un agente terapéutico de un anticuerpo descrito en la presente memoria puede ser al menos aproximadamente un 50% mayor que la vida media del péptido terapéutico no conjugado. Los siguientes ejemplos que describen o dependen de una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende todas las características de la reivindicación independiente son ilustrativos de la invención; Los otros ejemplos no son ilustrativos de la invención.

EJEMPLOS

Ejemplo 1: Construcción de vectores de proteína de fusión de espiral de trastuzumab bGCSF para expresión en células de mamífero

[0426] Se sintetizó un gen que codifica GCSF bovino (bGCSF) (SEQ ID NO: 186) por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Para optimizar el plegamiento y la estabilidad de la proteína de fusión de inmunoglobulina, se agregaron conectores flexibles de GGGGS (SEQ ID NO: 179, n = 1) en ambos extremos de los fragmentos de bGCSF. Luego, las secuencias que codifican los péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales enrolladas antiparalelas, se agregaron en los extremos de los terminales N y C del fragmento conector de bGCSF.Posteriormente, se injertaron fragmentos de PCR que codifican el gen bGCSF con los péptidos y conectores extensores en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) del anticuerpo IgG trastuzumab explotando la superposición de PCR de extensión, para reemplazar el bucle Trp99-Metl07. La proteína de fusión bGCSF basada en la espiral trastuzumab se modificó adicionalmente para reemplazar la región constante CH1-CH3 hIgG1 de trastuzumab con la región constante CH1-CH3 hIgG4 que contiene mutantes triples (S228P, F234A y L235A) para generar bGCSF HC de espiral trastuzumab (SEQ ID NO: 38). Los vectores de expresión de las proteínas de fusión basadas en espirales de trastuzumab se generaron mediante la ligadura en marco de los genes de fusión amplificados al vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA). De forma similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo IgG trastuzumab (SEQ ID NO: 1) se clonó en el vector de esqueletopFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 2: Construcción de vectores de proteína de fusión de espiral de bGCSF para expresión en células de mamífero

[0427] Se sintetizó un gen que codifica GCSF bovino (bGCSF) (SEQ ID NO: 186) por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Para optimizar el plegamiento y la estabilidad de la proteína de fusión de inmunoglobulina, se agregaron conectores flexibles de GGGGS (SEQ ID NO: 179, n = 1) en ambos extremos de los fragmentos de bGCSF. Luego, las secuencias que codifican los péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales enrolladas antiparalelas, se agregaron en los extremos de los terminales N y C del fragmento conector de bGCSF. Posteriormente, los fragmentos de PCR que codifican el gen bGCSF con los péptidos extensores y los enlazadores se injertaron en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) del anticuerpo IgG bovino (BLV1H12) explotando la PCR de extensión de solapamiento para generar bGCSF HC de espiral bovina (SEQ ID NO: 39). Los vectores de expresión de las proteínas de fusión basadas en la espiral bovina se generaron mediante ligadura en marco de los genes de fusión amplificados al vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA). De manera similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo IgG bovino (SEQ ID NO: 18) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 3: Expresión y purificación de proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumabbGCSF y espiral de bovinabGCSF

[0428] Las proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab bGCSF se expresaron a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican cadena pesada de proteína de fusión de espiral de trastuzumab bGCSF (SEQ ID NO: 38) y la cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID NO: 1). Las proteínas de fusión basadas en espiral bGCSF se expresaron a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican la cadena pesada de proteína de fusión de espiralbGCSF (SEQ ID NO: 39) y la cadena ligera bovina (SEQ ID NO: 18). Las proteínas de fusión expresadas se secretaron en el medio de cultivo y se cosecharon a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purificaron mediante cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL) y se analizaron mediante gel SDS-PAGE. Como se muestra en la FIG. 4, Carril 1 representa la escala de proteínas, Carril 2 representa la IgG de espiral bovina, Carril 3 representa la IgG de espiral tratada con DTT, Carril 4 representa la IgG de espiral de espiral de bGCSF, Carril 5 representa la espiral bovina de bGCSF IgG tratada con DTT, Carril 6 representa espiral de trastuzumab bGCSF IgG, Carril 7 representa espiral de trastuzumab bGCSF IgG tratado con DTT, Carril 8 representa trastuzumab IgG y Carril 9 representa trastuzumab IgG tratado con DTT.

Ejemplo 4: Estudio in vitro de la proteína de fusión de espiral de trastuzumab bGCSF y la actividad proliferativa de la proteína de fusión bGCSF espiral en bobina en células NFS-60 de ratón

[0429] Se obtuvieron células NFS-60 de ratón de American Type Culture Collection (ATCC), VA, y se cultivaron en medio RPMI-1640 suplementado con 10% de suero fetal bovino (FBS), 0,05 mM de 2-mercapoetanol y 62 ng/ml de factor estimulante de colonias de macrófagos humanos (M-CSF). Para los ensayos de proliferación, las células NFS-60 de ratón se lavaron tres veces con medio RPMI-1640 y se resuspendieron en medio RPMI-1640 con FBS al 10% y 2-mercapoetanol 0,05 mM a una densidad de 1,5 x 105células/ml. En placas de 96 pocillos, se añadieron 100plde suspensión celular a cada pocillo, seguido de la adición de concentraciones variadas de trastuzumab IgG (SEQ ID NO: 22 y 19), espiral de trastuzumab bGCSF IgG (SEQ ID NO: 69 y 19), IgG de espiral bovina (SEQ ID NOs: 36 y 271), IgG de espiral en bobinabGCSF (SEQ ID NOs: 70 y 36) y bGCSF (SEQ ID NO: 227). Las placas se incubaron a 37°C en un incubador al5% de CO2durante 72 horas. Las células se trataron luego con AlamarBlue (Invitrogen) (1/10 volumen de suspensión celular) durante 4 horas a 37°C. La fluorescencia a 595 nm para cada pocillo se leyó para indicar la viabilidad celular y se muestra en la Tabla 13. La FIG. 6 representa una representación gráfica de los datos. La CE50de la IgG de espiral de trastuzumab bGCSF fue 2,49 0,26 ng/ml. La CE50de espiral bovina bGCSF IgG era 2,55 0,38 ng/ml. La CE50de bGCSF fue 4,87 0,29 ng/ml.

Ejemplo 5: Unión de espiral de trastuzumab bGCSF al receptor Her2

[0430] La afinidad de unión de las proteínas de fusión de espiral de trastuzumab bGCSF al receptor Her2 se examinó mediante ELISA. La quimera Her2-Fc humana (5 ug/mL) (R&D Systems) se revistió en una placa ELISA de 96 pocillos durante la noche a 4°C, seguido de bloqueo con BSA al 1% en PBS (pH 7,4) durante 2 horas a 37°C. Después de lavar con Tween-20 al 0,05% en PBS (pH 7,4), se agregaron concentraciones variadas de trastuzumab IgG (SEQ ID NOs: 22 y 19) y proteínas de fusión de espiral de trastuzumab bGCSF (SEQ ID NOs: 69 y 19) a cada pocillo y se incubaron durante 2 horas a 37°C. Posteriormente, se añadió el anticuerpo policlonal de cabra anti humano kappa de cadena ligera con conjugado HRP (Sigma) y se incubó durante 2 horas a 37°C. Los pocillos se lavaron posteriormente y afinidades de unión fueron examinadas sobre la base de la intensidad de fluorescencia a 425 nm mediante la adición de sustrato de peroxidasa fluoregénico a cada pocillo. La Tabla 2 muestra la intensidad de fluorescencia a 425 nm de la IgG de trastuzumab y la IgG de espiral de trastuzumab bGCSF. FIG. 7 representa una representación gráfica de los datos en la Tabla 14. Como se muestra en la FIG. 7, la línea 1 representa trastuzumab IgG y la línea 2 representa espiral de trastuzumab bGCSF IgG. La CE50de trastuzumab IgG fue de 110+14 pM.

Ejemplo 6: Construcción de vectores de proteína de fusión basados en betatrofina BLV1H12 para la expresión en células de mamífero

[0431] Se sintetizó un gen que codifica betatrofina (SEQ ID NO: 198) por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Para optimizar el plegamiento y la estabilidad de las proteínas de fusión, se agregaron conectores flexibles de GGGGS (SEQ ID NO: 179, n = 1) en ambos extremos del fragmento de betatrofina. Posteriormente, fragmentos de PCR que codifican genes de interés se injertan en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) de un anticuerpo IgG bovino (BLV1H12) explotando la PCR de extensión de solapamiento para generarfusión directa de betatrofina BLV1H12 (SEQ ID NO: 118). Para generar una proteína de fusión basada en betatrofina de espiral BLV1H12, se agregan secuencias que codifican péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales en bobina antiparalelas, en los extremos de los terminales N y C del fragmento enlazador betatrofina. Posteriormente, el fragmento de PCR que comprende betatrofina, enlazadores y péptidos extensores se injertan en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) de un anticuerpo BLV1H12 explotando la PCR de extensión solapada para generar betatrofina de espirales de trastuzumab (CDRH3) HC (SEQ ID NO: 66). Los vectores de expresión de proteínas de fusión basadas en betatrofina BLV1H12 se generaron mediante ligadura por infrarrojos de los genes de fusión amplificados al vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA). De manera similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo BLV1H12 (SEQ ID NO: 18) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 7: Expresión y purificación de proteínas de fusión de betatrofina BLV1H12

[0432] Las proteínas de fusión de betatrofina directa BLV1H12 se expresaron mediante transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican la cadena pesada de proteína de fusión de betatrofina directa BLV1H12 (SEQ ID NO: 140) y la cadena ligera BLV1H12 (SEQ ID NO: 36). Las proteínas de fusión de betatrofina de espiral BLV1H12 se expresaron a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican la cadena pesada de la proteína de fusión de betatrofina de espiral BLV1H12 (SEQ ID NO: 97) y la cadena ligera BLV1H12 (SEQ ID NO: 36). Las proteínas de fusión expresadas se secretaron en el medio de cultivo y se cosecharon a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purificaron por cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL), y se analizaron por transferencia Western (FIG. 8). Como se muestra en la FIG. 8, Carril 1 contiene la escalera de proteínas;Carril 2 contiene proteína de fusión de betatrofina de espiral BLV1H12 (SEQ ID NO: 97 y 36) tratada con DTT; y Carril 3 contiene proteína de fusión de betatrofina de espiral BLV1H12 (SEQ ID NO: 97 y 36).

Ejemplo 8: Construcción de vectores de proteína bGCSF directa de trastuzumab para expresión en células de mamífero

[0433] Se sintetizó un gen que codifica bGCSF (SEQ ID NO: 186) por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Para optimizar el plegamiento y la estabilidad de las proteínas de fusión, se agregaron enlazadores flexibles de GGGGS (SEQ ID NO: 179, n = 1) en ambos extremos del fragmento bGCSF. Posteriormente, los fragmentos de PCR que codifican genes de interés se injertan en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) de un anticuerpo IgG de trastuzumab mediante la explotación de la PCR de extensión solapada para generar la fusión directa de bGCSF de trastuzumab (SEQ ID NO: 101). Los vectores de expresión de las proteínas de fusión basadas en trastuzumab bGCSF se generaron mediante la ligadura en marco de los genes de fusión amplificados al vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA). De manera similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo trastuzumab (SEQ ID NO: 1) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 9: Expresión y purificación de la proteína de fusión bGCSF directa de trastuzumab

[0434] Las proteínas de fusión bGCSF directa de trastuzumab se expresaron mediante transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican la cadena pesada de la proteína de fusión bGCSF directa de trastuzumab (SEQ ID NO: 123) y la cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID NO: 19). Las proteínas de fusión expresadas se secretaron en el medio de cultivo y se cosecharon a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purificaron mediante cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL), y se analizaron mediante gel SDS-PAGE (FIG. 10). Como se muestra en la FIG. 10, Carril 1 contiene la escalera de proteínas; Carril 2 contiene proteína de fusión de trastuzumab bGCSF directo (SEQ ID NOs: 123 y 19); y Carril 3 contiene proteína de fusión bGCSF directa de trastuzumab (SEQ ID NOs: 123 y 19) tratada con DTT.

Ejemplo 10: Estudio in vitro de la actividad proliferativa de la proteína de fusión bGCSF directa de trastuzumab en células NFS-60 de ratón

[0435] Se obtuvieron células NFS-60 de ratón de American Type Culture Collection (ATCC), VA, lavadas tres veces con medio RPMI-1640 y resuspendidas en medio RPMI-1640 suplementado con suero bovino fetal al 10% (FBS) y 2-mercapoetanol 0,05 mM a una densidad de 1,5 x 105células/ml. En placas de 96 pocillos, se añadieron 100plde suspensión celular a cada pocillo, seguido de la adición de concentraciones variadas de IgG de bGCSF directa de trastuzumab (SEQ ID NO: 123 y 19) y bGCSF (SEQ ID NO: 227). Las placas se incubaron a 37°C en un incubador al 5% de CO2durante 72 horas. Las células se trataron luego con AlamarBlue (Invitrogen) (1/10 volumen de suspensión celular) durante 4 horas a 37°C. Se leyó fluorescencia a 595 nm para cada pocillo para indicar la viabilidad celular. FIG. 11 representa una representación gráfica de los datos. La CEsüde IgG debGCSF directa de trastuzumab fue de 1,8 0,4 ng/mL. La CE50de bGCSF fue 1,3 0,2 ng/mL.

Ejemplo 11: Construcción de vectores de proteínas de fusión de espiral de trastuzumab-exendina-4 para expresión en células de mamífero

[0436] Un gen que codifica exendina-4 (Ex-4) (SEQ ID NO: 188) se sintetizó por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se colocó un sitio de escisión del Factor Xa (SEQ ID NO: 182) frente al terminal N de Ex-4. Se agregó un conector CGGGGS flexible inmediatamente antes del sitio de escisión de la proteasa del Factor Xa y se agregó un conector GGGGSC al final del fragmentode extremo C del gen Ex-4 para aumentar el plegamiento y la estabilidad de la proteína de fusión. Luego, las secuencias que codifican los péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales enrolladas antiparalelas, se agregaron en los extremos de los terminales N y C del fragmento conector de exendina-4. Posteriormente, los fragmentos de PCR que codifican genes de interés se injertaron en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) del anticuerpo IgG de trastuzumab explotando la PCR de extensión de solapamiento, para reemplazar el bucle Trp99-Met107. La proteína de fusión basada en espiral de trastuzumab-exendina-4 se modificó con la región constante hIgG1 CH1-CH3 humana que contiene siete mutaciones (E233P, L234V, L235A,AG236, A327G, A330S y P331S) para generar fusión de espiral de trastuzumab-Ex4 HC (SEQ ID NO: 40). Los vectores de expresión de las proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-exendina-4 se generaron mediante ligadura en marco de los genes de fusión amplificados al vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA). De forma similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo IgG trastuzumab (SEQ ID NO: 1) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 12: Expresión y purificación de proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-exendina-4

[0437] Lasproteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-exendina-4 se expresaron mediante transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican cadena pesada de proteína de fusión de espiral de trastuzumab-exendina-4 (SEQ ID NO: 71) y la cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID NO: 19). Las proteínas de fusión expresadas se secretaron en el medio de cultivo y se cosecharon a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purificaron mediante cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL) y se analizaron mediante gel SDS-PAGE. La proteína de fusión Ex-4 basada en la espiral trastuzumab se trató adicionalmente con proteasa del Factor Xa (GE Healthcare) siguiendo el protocolo del fabricante para liberar el extremo N del péptido fusionado. Después del tratamiento, las proteínas de fusión se volvieron a purificar mediante la columna de afinidad Proteína A/G para eliminar la proteasa y se analizaron mediante gel SDSPAGE como se muestra en la FIG. 12. Carril 1 es un marcador de proteína. Carril 2 es espiral de trastuzumab-Ex-4 IgG (SEQ ID NOs: 71 y 19). Carril 3 es espiral de trastuzumab-Ex-4 IgG (SEQ ID NOs: 71 y 19) tratado con DTT. Carril 4 es un marcador de proteína. Carril 5 es espiral de trastuzumab-Ex-4 IgG (SEQ ID NOs: 71 y 19) después de la escisión con Factor Xa, liberando el extremo N del péptido Ex-4 para generar IgG de espiral de trastuzumab-Ex-4 RN, en donde RN es una abreviatura para extremo N liberado. Carril 6 es espiral de trastuzumab-Ex-4 RN IgG tratado con DTT.

Ejemplo 13: Espectrometría de masas por ionización por electropulverización (ESI-MS) de espiral de trastuzumabexendina-4 IgG

[0438] 10 pg de fusión purificada de espiral de trastuzumab-exendina-4 de cadena pesada (HC) (SEQ ID NOs: 71 y 19), en ^pB^s(pH 7,4) se trató durante la noche a 37°C con 1pl(500 unidades) de péptido-N-glucosidasa (NEB), seguido de la adición de DTT 50 mM. La proteína de fusión se analizó por ESI-MS usando un 6520 Q-TOF LC/MS de Agilent Technology. El cromatógrafo se muestra en la FIG. 13. El peso molecular esperado para espiral de trastuzumab-exendina-4 HC es 56.880 Da. El peso molecular observado para espiral de trastuzumab-exendina-4 HC fue de 56.748 Da. El peso molecular observado se correlaciona con el peso molecular esperado sin el primer aminoácido ácido glutámico (E).

Ejemplo 14: Espectrometría de masas por ionización por electropulverización (ESI-MS) de espiral de trastuzumabexendina-4 RN IgG

[0439] 10 pg de fusión de cadena pesada purificada de espiral de trastuzumab-exendina-4 de factor Xa (SEQ ID NOs): 71 y 19) en PBS (pH 7,4) se trató durante la noche a 37°C con 1pl(500 unidades) de péptido-N-glucosidasa (NEB), seguido de la adición de DTT 50 mM. Los fragmentos de proteína de fusión escindida se analizaron por ESI-MS usando un 6520 Q-TOF LC/MS de Agilent Technology. El cromatógrafo del fragmento de extremo N se muestra en la FIG. 14 (A) y el cromatógrafo del fragmento de extremo C se muestra en la FIG. 14 (B). El peso molecular esperado para el fragmentode extremo N de espiral de trastuzumab-exendina-4 HC RN es 13.309 Da. El peso molecular observado para el fragmentode extremo N de espiral de trastuzumab-exendina-4 HC RN fue de 13.307 Da. El peso molecular esperado para el fragmento de extremo C de espiral de trastuzumab-exendina-4 HC RN es 43.589 Da. El peso molecular observado para el fragmento de extremo C de espiral de trastuzumab-exendina-4 HC RN fue 43.458 Da.

Ejemplo 15: Estudio in vitro de las actividades de activación de la proteína de fusión exendina-4 de espiral de trastuzumab en el receptor GLP-1 (GLP-1R)

[0440] Las células HEK293 que sobreexpresan la superficie GLP-1R y el gen indicador de luciferasa sensible a AMPc se sembraron en placas de 384 pocillos en una densidad de 5.000 células por pozo. Después de 24 h de incubación a 37°C con 5% de CO2, las células se trataron con diversas concentraciones de péptido exendina-4 (SEQ ID NO: 228), trastuzumab (SEQ ID NO: 19 y 22), espiral de trastuzumab-exendina-4 (SEC. Id NO: 71 y 19), y espiral de trastuzumab-exendina-4 (SEQ ID NO: 71 y 19) RN; yincubada durante otras 24 h. Posteriormente, se realizó un ensayo de luciferasa utilizando el reactivo de luciferasa One-Glo de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Promega). FIG. 15 representa una representación gráfica de los datos. La CE50de exendina-4 fue 0,03 0,004 nM. La CE50de la trastinumab-espiral exendina-4 fue 3,8 0,2 nM. La CE50de espiral de trastuzumab-exendina-4 RN fue 0,01 0,001 nM.

Ejemplo 16: Estudio in vitro del ensayo de activación del receptor de glucagón de proteína de fusión de espiral de trastuzumab-exendina-4

[0441] Las células HEK 293 que sobreexpresan el receptor de glucagón (GCGR) y el indicador CRE-Luc se cultivaron en DMEM con FBS al 10% a 37°C con 5% de CO2. Las células se sembraron en placas de 384 pocillos a una densidad de 5.000 células por pocillo y se trataron con diversas concentraciones de proteínas de fusión RN de glucagón, péptido exendina-4 (SEQ ID NO: 228), trastuzumab (SEQ ID NO: 19 y 22), espiralde trastuzumabexendina-4 (SEQ ID NO: 71 y 19), y espiral de trastuzumab-exendina-4 (SEQ ID NO: 71 y 19) durante 24 horas a 37°C con 5% de CO2. Las intensidades de luminiscencia se midieron utilizando el reactivo de luciferasa One-Glo (Promega, WI) siguiendo las instrucciones del fabricante. La Fig. 16 representa una representación gráfica de los datos.

Ejemplo 17: Farmacocinética de la proteína de fusión RN de espiral de trastuzumab-Ex-4 en ratones

[0442] Las proteínas de fusiónRN (2,8 mg/kg) Ex-4 (SEQ ID NO: 228) (1,6 mg/kg) y espiral de trastuzumab-Ex-4 (SEQ ID NOs: 71 y 19) se administraron por inyección intravenosa (i.v.) o subcutánea (s.c.) en ratones CD1 (N = 3). Se recogieron muestras de sangre del día 0 al día 8 para el péptido Ex-4 y del día 0 al día 14 para la proteína de fusión de espiral de trastuzumab-Ex-4 RN. Las actividades restantes se analizaron usando células HEK 293-GLP-1R-CRE-Luc. Los datos se normalizaron tomando la concentración máxima en el primer punto de tiempo (30 minutos) para la inyección intravenosa. Los datos se normalizaron tomando la concentración máxima en el segundo punto de tiempo (1 día) para la inyección subcutánea. Los porcentajes de la concentración máxima se trazaron frente a los puntos de tiempo de la recolección de muestras de sangre, y las vidas medias se determinaron ajustando los datos en la ecuación de primer orden, A = A0e-kt, donde A0 es la concentración inicial, t es el tiempo y k es la constante de tasa de primer orden. La Figura 17 representa una representación gráfica de los datos. La Figura 17 (A) representa la inyección intravenosa. La Figura 17 (B) representa la inyección subcutánea. La t1/2de exendina-4 (i.v.) fue de 1,5 0,2 horas. La t1/2de espiral de trastuzumab-exendina-4 Rn (i.v.) fue de 2,4 0,1 días. La t1/2de espiral de trastuzumab-exendina-4 RN (s.c.) fue 3,9+ 1,2 días.

Ejemplo 18: Farmacodinamia de la proteína de fusión RN de espiral de trastuzumab-Ex-4 en ratones

[0443] Dosis únicas de Ex-4 (SEQ ID NO: 228) (20 pg/kg), trastuzumab (SEQ ID NOs: 19 y 22) (8 mg/kg), y se administraron concentraciones variadas de proteína de fusión de espiral de trastuzumab-Ex-4 RN (SEQ ID NOs: 71 y 19) mediante inyección subcutánea (s.c.) en ratones CD1 (N = 5). Se administró glucosa (3 g/kg, po) a los 30 minutos, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168 y 216 horas después de los tratamientos de dosis única, seguido de mediciones de glucosa en sangre inmediatamente antes y a los 15, 30, 45, 60 y 120 minutos después de la carga de glucosa. La Figura 18 representa una representación gráfica de los datos a los 30 minutos, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168 y 216 horas después de los tratamientos de dosis única.

Ejemplo 19: Farmacodinamia de la proteína de fusión de espiral de trastuzumab-Ex-4 en ratones

[0444] Dosis únicas de Ex-4 (SEQ ID NO: 228) (20 pg/kg), trastuzumab (SEQ ID NOs: 19 y 22) (8 mg/kg) y se administraron concentraciones variadas de proteína de fusión de espiral de trastuzumab-Ex-4 (SEQ ID NOs: 71 y 19) mediante inyección subcutánea (s.c.) en ratones CD1 (N = 5). Se administró glucosa (3 g/kg, po) a las 2, 24, 48, 72, 96, 120 y 144 horas después de los tratamientos de dosis única, seguido de mediciones de glucosa en sangre inmediatamente antes y a las 15, 30, 45, 60 y 120 minutos después de la carga de glucosa. La Figura 19 representa una representación gráfica de los datos a las 2, 24, 48, 72, 144, 168 y 216 horas después de los tratamientos de dosis única.

Ejemplo 20: Unión de espiral de trastuzumab-exendina-4 al receptor Her2

[0445] La afinidad de unión de las proteínas de fusión de espiral de trastuzumab-exendina-4 al receptor Her2 se examina mediante ELISA. La quimera Her2-Fc humana (5 ug/mL) (R&D Systems) se reviste en una placa ELISA de 96 pocillos durante la noche a 4°C, seguido del bloqueo con BSA al 1% en PBS (pH7,4) durante 2 horas a 37°C. Después de lavar con Tween-20 al 0,05% en PBS (pH 7,4), las proteínas de fusión de concentraciones de trastuzumab IgG (SEQ ID NO: 19 y 22) y espiral de trastuzumab-exendina-4 (SEQ ID NO: 71 y 19) son variadas se añaden a incubar durante 2 horas a 37°C. Posteriormente, se agrega el anticuerpo de cadena ligera kappa anti humana policlonal de cabra con conjugado HRP (Sigma) y se incuba durante 2 horas a 37°C. Los pocillos se lavan posteriormente y se examinan las afinidades de unión en función de la intensidad de fluorescencia a 425 nm añadiendo sustrato de peroxidasa fluorogénica a cada pocillo.

Ejemplo 21: Análisis de citometría de flujo de la unión de espiral de trastuzumab-exendina-4 al receptor HER2

[0446] Las células SKBR3 que sobreexpresan HER2 se cultivan en DMEM con 10% de FBS y 1% de penicilina y estreptomicina. Las células se lavan con PBS frío tres veces, se bloquean con BSA al 2% en p Bs , y se incuban con 10 o 100 nM de trastuzumab (SEQ ID NO: 19 y 22) y proteínas de fusión trastuzumab-CDR (SEQ ID NO: 71 y 19) durante 2 horas a 4°C con mezcla suave. El anticuerpo no unido se elimina lavando con BSA al 2% en PBS. Luego, las células se tiñen con FITC anti-IgG humana Fc (KPL, Inc., MD) durante 1 hora a 4°C con mezcla suave, seguido de lavado con PBS y análisis por citometría de flujo.

Ejemplo 22: Construcción de vectores de proteína de fusión de espiral de trastuzumab-Moka para expresión en células de mamífero

[0447] Se sintetizó un gen que codifica Moka (SEQ ID NO: 189) por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Para optimizar el plegamiento y la estabilidad de las proteínas de fusión, se añadieron engarces flexibles de GGGGS (SEQ ID NO: 179, n = 1) en ambos extremos del fragmento Moka. Luego, las secuencias que codifican los péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales en espiral antiparalelas, se agregaron en los extremos de los terminales N y C del fragmento Moka-Linker. Posteriormente, los fragmentos de PCR que codifican el gen Moka con los péptidos y conectores extensores se injertaron en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) del anticuerpo IgG de trastuzumab mediante la explotación de la PCR de extensión solapada, para reemplazar el bucle Trp99-Met107. La proteína de fusión basada en espiral de trastuzumab-Moka se modificó aún más para reemplazar la región constante de trastuzumab hIgG1 CH1-CH3 con la región constante hIgG4 CH1-CH3 que contiene mutantes triples (S228P, F234A y L235A) para generar IgG de espiral de trastuzumab-Moka (SEQ ID NO: 41). Los vectores de expresión de las proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-Moka se generaron mediante la ligadura en marco de los genes de fusión amplificados al vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA). De forma similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo IgG trastuzumab (SEQ ID NO: 1) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 23: Expresión y purificación de proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-Moka

[0448] Las proteínas de fusión basadas enespiral de trastuzumab-Moka se expresan a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican la cadena pesada de la proteína de fusión de espiral de trastuzumab-Moka (SEQ ID NO: 72) y la cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID NO: 19). Las proteínas de fusión expresadas se secretan en el medio de cultivo y se cosechan a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purifican por cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL), y se analizan por gel SDS-PAGE como se muestra en la Fig. 20. Carril 1 muestra un marcador de peso molecular de proteína. Carril 2 muestra IgG de espiral de trastuzumab-Moka purificada. Carril 3 muestra IgG de espiral de trastuzumab-Moka purificada tratada con DTT.

Ejemplo 24: Construcción de vectores de proteína de fusión de espiral de trastuzumab-VM24 para la expresión en células de mamífero

[0449] Un gen que codifica VM24 (SEQ ID NO: 190) se sintetizó por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Para optimizar el plegamiento y la estabilidad de las proteínas de fusión, se añadieron engarces flexibles de GGGGS (SEQ ID NO: 179, n = 1) en ambos extremos de los fragmentos VM24. Luego, las secuencias que codifican los péptidos extensores codificadores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales en bobina antiparalelas, se agregaron en los extremos de los terminales N y C de los fragmentos del enlazador VM24. Posteriormente, los fragmentos de PCR que codifican genes de interés se injertaron en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) del anticuerpo IgG de trastuzumab explotando la PCR de extensión de solapamiento, para reemplazar el bucle Trp99-Met107. La proteína de fusión basada en espiral trastuzumab-VM24 se modificó adicionalmente para reemplazar la región constante de h1gG1 CH1-CH3 de trastuzumab con la región constante de hIgG4 CH1-CH3 que contiene mutantes triples (S228P, F234A y L235A) para generar la SEQ ID NO: 42. Los vectores de expresión de las proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-VM24 se generaron mediante ligadura en marco de los genes de fusión amplificados al vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA). De forma similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo IgG trastuzumab (SEQ ID NO: 1) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 25: Expresión y purificación de proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-VM24

[0450] Lasproteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-VM24 se expresan a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican la cadena pesada de la proteína de fusión de espiral de trastuzumab-VM24 (SEQ ID NO: 73) y la cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID NO: 19). Las proteínas de fusión expresadas se secretan en el medio de cultivo y se cosechan a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purifican por cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL), y se analizan por gel SDS-PAGE como se muestra en la Fig. 20. Carril 1 muestra un marcador de peso molecular de proteína. Carril 4 muestra IgG de espiral de trastuzumab-Vm24 purificada. Carril 5 muestra IgG de espiral de trastuzumab-Vm24 purificada tratada con DTT.

Ejemplo 26: Estudio in vitro de la proteína de fusión de espiral de trastuzumab-Moka y las actividades inhibidoras de la proteína de fusión de espiral de trastuzumab-Vm24 en células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC)/Activación de células T

[0451] Se aislaron PBMC humanas de sangre venosa fresca de donantes sanos mediante centrifugación en gradiente de ficoll, seguido de resuspensión en medio RPMI1640 con FBS al 10% y placas en placas de 96 pocillos a una densidad de 1 x 106células/mL. Las células T humanas se purificaron de las PBMC aisladas usando un kit de enriquecimiento de células T. Las PBMC y las células T purificadas se pretrataron durante 1 hora a 37°C con 5% de CO2con diversas concentraciones de proteínas de fusión de espiral de trastuzumabMoka purificada (SEQ ID NOs: 72 y 19) y espiral de trastuzumab Vm24 (SEQ ID NOs: 73 y 19) y luego activadas por anticuerpos anti-CD3 y CD28. Después de 24 h de tratamiento, se recogió el sobrenadante para medir los niveles de TNF-asecretado usando el kit ELISA. La Fig. 21 representa una representación gráfica de la inhibición in vitro en los datos de activación de células T. La CE50de espiral de trastuzumab Moka IgG (SEQ ID NOs: 72 y 19) fue 269+46 nM. La CE50de la IgG Vm24 de espiral de trastuzumab (SEQ ID NOs: 73 y 19) fue 178 104 nM.

Ejemplo 27: Construcción de vectores de proteína de fusión de espiral de trastuzumab-hGCSF para expresión en células de mamífero

[0452] Se sintetizó un gen que codifica GCSF humano (hGCSF) (SEQ ID NO: 187) por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Para optimizar el plegamiento y la estabilidad de las proteínas de fusión, se agregaron enlazadores flexibles de GGGGS (SEQ ID NO: 179, n = 1) en ambos extremos de los fragmentos de hGCSF. Luego, las secuencias que codifican péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales enrolladas antiparalelas, se agregaron en los extremos de los terminales N y C de los fragmentos enlazadores hGCSF. Para generar una fusión de CDRH3, se injertaron fragmentos de PCR que codifican genes de interés en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDRH3) del anticuerpo IgG de trastuzumab explotando la PCR de extensión solapada, para reemplazar el bucle Trp99-Met107. Para generar una fusión de CDRH2, se injertaron fragmentos de PCR que codifican genes de interés en la región determinante complementaria 2 de la cadena pesada (CDRH2) del anticuerpo IgG de trastuzumab explotando la PCR de extensión de solapamiento, para reemplazar Thr54-Asn55. Para generar una fusión CDRL3, se injertaron fragmentos de PCR que codifican genes de interés en la región determinante complementaria 3 de la cadena ligera (CDRL3) del anticuerpo IgG trastuzumab mediante la explotación de la PCR de extensión de solapamiento, para reemplazar Thr93-Pro95. Las proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-hGCSF se modificaron con la región constante de hIgG1 CH1-CH3 humana que contiene siete mutaciones (E233P, L234V, L235A, AG236, A327G, A330S y P331S). Los vectores de expresión de proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-hGCSF se generaron mediante ligadura en marco de los genes de fusión amplificados al vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA). De forma similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo IgG trastuzumab (SEQ ID NO: 1) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 28: Expresión y purificación de proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-hGCSF

[0453] Las proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-hGCSF se expresan a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican la proteína de fusión de cadena pesada deespiral de trastuzumab-hGCSF (CDRH3) (SEQ ID NO: 74) y la cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID ⁿO: 9), la cadena pesada de la proteína de fusión de espiral de trastuzumab-hGCSF (CDRH2) y la cadena ligera de trastuzumab, y la proteína de fusión de cadena ligera de espiral de trastuzumab-hGCSF (CDRL3) y cadena pesada de trastuzumab. Las proteínas de fusión expresadas se secretan en el medio de cultivo y se cosechan a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purifican por cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL) y se analizan por gel SDSPAGE. La Fig. 22 representa proteínas de fusión purificadas basadas en espiral de trastuzumab-hGCSF. Carril 1 muestra IgG de espiral de trastuzumab hGCSF (CDRH2) purificada. Carril 2 muestra IgG purificada con espiral de trastuzumab hGCSF (CDRH2) tratada con DTT. Carril 3 muestra un marcador de peso molecular proteico. Carril 4 muestra IgG purificada de espiral de trastuzumab hGCSF (CDRL3). Carril 5 muestra la IgG de espiral de trastuzumab purificada hGCSF (CDRL3) tratada con DTT.

Ejemplo 29: La espectrometría de masas por ionización por electropulverización (ESI-MS) de proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-hGCSF

[0454] 10 pg de espiral de trastuzumab-hGCSF purificado (CDRH2), en PBS (pH 7,4) se trató durante la noche a 37°CC con 1pL (500 unidades) de péptido-N-glucosidasa (NEB), seguido de la adición de 50 mM DTT. La proteína de fusión se analizó por ESI-MS usando un 6520 Q-TOF LC/MS de Agilent Technology. El cromatógrafo se muestra en la Fig. 23 (A). El peso molecular esperado para espiral de trastuzumab-hGCSF (CDRH2) HC es 71.472 Da. El peso molecular observado para espiral de trastuzumab-hGCSF (CDRH2) HC fue de 72.300 Da. El peso molecular observado se correlaciona con la O-glicosilación en hGCSF. 10 pg de espiral de trastuzumab-hGCSF purificado (CDRL3), en PBS (pH 7,4) se trató durante la noche a 37°C con 1 pL (500 unidades) de péptido-N-glucosidasa (NEB), seguido de la adición de DTT 50 mM. La proteína de fusión se analizó por ESI-MS usando un 6520 Q-TOF LC/MS de Agilent Technology. El cromatógrafo se muestra en la Fig. 23 (B). El peso molecular esperado para espiral de trastuzumab-hGCSF (CDRL3) LC es 45.746 Da. El peso molecular observado para LC de espiral de trastuzumab-hGCSF (CDRL3) fue de 46.692 Da. El peso molecular observado se correlaciona con la O-glicosilación enhGCSF.

Ejemplo 30: Unión de proteínas de fusión basadas en hGCSF de espiral de trastuzumab al receptor HER2

[0455] Se hicieron crecer células SKBR3 que sobreexpresan HER2 en DMEM con FBS al 10% y penicilina y estreptomicina al 1%. Las células se lavaron con PBS frío tres veces, se bloquearon con BSA al 2% en PBS, y se incubaron con 10 o 100 nM de proteínas de fusión trastuzumab y trastuzumab-CDR, espiral de trastuzumab-hGCSF (CDRH2) y espiral de trastuzumab-hGCSF (CDRL3), durante 2 horas a 4°C con mezcla suave. El anticuerpo no unido se eliminó lavando con BSA al 2% en PBS. Luego, las células se tiñeron con FITC anti-IgG humana Fc (KPL, Inc., MD) durante 1 hora a 4°C con mezcla suave, seguido de lavado con PBS y análisis por citometría de flujo. Fig. 24 representa el histograma de citometría de flujo.

Ejemplo 31: Estudio in vitro de la actividad proliferativa de la proteína de fusión hGCSF de espirales de trastuzumab en células NFS-60 de ratón

[0456] Se cultivaron células NFS-60 de ratón en medio RPMI-1640 suplementado con 10% de FBS, 0,05 mM de 2-mercapoetanol y 62 ng/ml de factor estimulante de colonias de macrófagos humanos (M-CSF). Para examinar la actividad proliferativa de las proteínas de fusión trastuzumab-hGCSF, las células se lavaron tres veces con medio RPMI-1640 con FBS al 10%, se resuspendieron en medio RPMI-1640 con FBS al 10% y 2-mercapoetanol 0,05 mM a una densidad de 1,5 x 105células/ml, sembradas en placas de 96 pocillos (1,5 x 104 células por pocillo) con diversas concentraciones de hGCSF, trastuzumab, espiral de trastuzumab-hGCSF (CDRH2) y espiral de trastuzumab-hGCSF (CDRL3), y se incubaron durante 72 horas a 37°C con 5% de CO2. Las células se trataron luego con AlamarBlue (Life Technologies, CA) durante 4 horas a 37°C. La intensidad de fluorescencia medida a 595 nm es proporcional a la viabilidad celular. FIG. 25 representa una representación gráfica de los datos. La CE50de hGCSF fue 1,7+0,3 ng/ml. La CE50de espiral de trastuzumab hGCSF (CDRH2) fue de 0,4+0,1 ng/mL. La CE50de espiral de trastuzumab hGCSF (CDRL3) fue de 0,9 0,1 ng/mL.

Ejemplo 32: Construcción de vectores de proteína de fusión de espiral de trastuzumab-hEPO para la expresión en células de mamífero

[0457] Se sintetizó un gen que codifica hEPO (SEQ ID NO: 192) por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Para optimizar el plegamiento y la estabilidad de la proteína de fusión de inmunoglobulina, se agregaron enlazadores flexibles de GGGGS (SEQ ID NO: 179, n = 1) en ambos extremos de los fragmentos de hEPO. Luego, las secuencias que codifican los péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales en espiral antiparalelas, se agregaron en los extremos de los terminales N y C del fragmento conector de hEPO. Posteriormente, los fragmentos de PCR que codifican el gen hEPO con los péptidos extensores y los conectores se injertaron en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) del anticuerpo IgG trastuzumab mediante la explotación de la PCR de extensión solapada, para reemplazar el bucle Trp99 - Met107. Las regiones constantes CH1-CH3 de la cadena pesada hEPO (CDRH3) de la espiral de trastuzumab se reemplazaron con la región constante CH1-CH3 de IgG4 humana que contiene mutaciones triples (S228P, F234A y L235A) para generar HC de la hEPO (CDRH3) de trastuzumab. Los vectores de expresión de las proteínas de fusión basadas en espirales de trastuzumab se generaron mediante la ligadura en marco de los genes de fusión amplificados al vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA). De forma similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo IgG trastuzumab (SEQ ID NO: 1) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 33: Expresión y purificación de proteínas de fusión de espiral de trastuzumab-hEPO

[0458] Las proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-hEPO se expresaron a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican la cadena pesada de proteína de fusión de espiral de trastuzumab-hEPO y cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID NO: 1). Las proteínas de fusión expresadas se secretaron en el medio de cultivo y se cosecharon a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purificaron mediante cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL) y se analizaron mediante gel SDS-PAGE. Como se muestra en la FIG. 26, Carril 1 representa una escalera de proteínas, Carril 2 representa espiral de trastuzumab-hEPO (CDRH3) y trastuzumab LC purificados, y Carril 3 representa espiral de trastuzumab-hEPO (CDRH3) y trastuzumab LC tratados con DTT.

Ejemplo 34: Espectrometría de masas por ionización por electropulverización (ESI-MS) de proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-hEPO

[0459] Se trataron10 pg de espiral de trastuzumab-hEPO (CDRH3) purificado, en PBS (pH 7,4) durante la noche a 37°C C con 1 pL (500 unidades) de péptido-N-glucosidasa (NEB), seguido de la adición de 50 mM DTT.

[0460] La proteína de fusión se analizó por ESI-MS usando un 6520 Q-TOF LC/MS de Agilent Technology. El cromatógrafo se muestra en la Fig. 27. El peso molecular esperado para espiral de trastuzumab-hEPO (CDRH3) HC es 70,307 Da. El peso molecular observado para espiral de trastuzumab-hEPO (CDRH3) HC fue de 70.177 Da. El peso molecular observado se correlaciona con la O-glicosilación en hEPO y la ausencia del primer aminoácido ácido glutámico (E).

Ejemplo 35: Unión de proteínas de fusión basadas en hEPO de espiral de trastuzumab al receptor HER2

[0461] Se hicieron crecer células SKBR3 que sobreexpresan HER2 en DMEM con FBS al 10% y penicilina al 1% y estreptomicina. Las células se lavaron con PBS frío tres veces, se bloquearon con BSA al 2% en PBS, y se incubaron con 10 o 100 nM de trastuzumab y espiral de trastuzumab-hEPO (CDRH3), durante 2 horas a 4°C con mezcla suave. El anticuerpo no unido se eliminó lavando con BSA al 2% en PBS. Luego, las células se tiñeron con FITC anti-IgG humana Fc (KPL, Inc., MD) durante 1 hora a 4°C con mezcla suave, seguido de lavado con PBS y análisis por citometría de flujo. Fig. 28 representa el histograma de citometría de flujo.

Ejemplo 36: Ensayo de actividad proliferativa in vitro de proteína de fusión de espiral de trastuzumab-hEPO en células TF-1

[0462] Se cultivaron células TF-1 humanas a 37°C con 5% de CO2 en medio RPMI-1640 que contenía suero bovino fetal al 10% (FBS), penicilina y estreptomicina (50 U/ml) y factor estimulante de colonias de macrófagos de granulocitos humanos 2 ng/ml (GM-CSF). Para examinar la actividad proliferativa de las proteínas de fusión trastuzumab-hEPO, las células se lavaron tres veces con medio RPMI-1640 con FBS al 10%, se resuspendieron en medio RPMI-1640 con FBS al 10% a una densidad de 1,5 x 105células/ml, en placa en placas de 96 pocillos (1,5 x 104células por pocillo) con diversas concentraciones de proteína de fusión hEPO, trastuzumab y espiral de trastuzumab hEPO (CDRH3), y luego se incubaron durante 72 horas a 37°C con 5% de CO2. Las células se trataron luego con Alamar Blue (Life Technologies, CA) durante 4 horas a 37°C. La intensidad de fluorescencia medida a 595 nm es proporcional a la viabilidad celular. Los valores de CE50se determinaron ajustando los datos en una función sigmoidal logística: y = A2 (A1-A2)/(1 (x/x0) p), donde A1 es el valor inicial, A2 es el valor final, x0 es el punto de inflexión de la curva, y p es la potencia. FIG. 29 representa una representación gráfica de los datos. La CE50de hEPO fue 0,1 0,02 nM. La CE50de espiral de trastuzumab hEPO (CDRH3) fue de 0,1 0,01 nM.

Ejemplo 37: Construcción de proteína de fusión dual trastuzumab hGCSF/EPO

[0463] Se sintetizó un gen que codifica hEPO (SEQ ID NO: 192) por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Para optimizar el plegamiento y la estabilidad de la proteína de fusión de inmunoglobulina, se agregaron enlazadores flexibles de GGGGS (SEQ ID NO: 179, n = 1) en ambos extremos de los fragmentos de hEPO. Luego, las secuencias que codifican los péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales en espiral antiparalelas, se agregaron en los extremos de los terminales N y C del fragmento conector de hEPO. Posteriormente, los fragmentos de PCR que codifican el gen hEPO con los péptidos extensor y los conectores se injertaron en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) del anticuerpo IgG trastuzumab mediante la explotación de la PCR de extensión solapada, para reemplazar el bucle Trp99 - Met107. Las regiones constantes CH1-CH3 de la cadena pesada hEPO (CDRH3) de la espiral de trastuzumab se reemplazaron con la región constante CH1-CH3 de IgG4 humana que contiene mutaciones triples (S228P, F234A y L235A) para generar HC de la hEPO (CDRH3) de espiral de trastuzumab (SEQ ID NO: 62).

[0464] Un gen que codifica GCSF humano (hGCSF) (SEQ ID NO: 187) fue sintetizado por Genscript o IDT, y amplificado por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Para optimizar el plegamiento y la estabilidad de las proteínas de fusión, se agregaron enlazadores flexibles de GGGGS (SEQ ID NO: 179, n = 1) en ambos extremos de los fragmentos de hGCSF. Luego, las secuencias que codifican péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales enrolladas antiparalelas, se agregaron en los extremos de los terminales N y C de los fragmentos enlazadores hGCSF. El fragmento de PCR que codifica el extensor enlazador hGCSF se injertó en la región determinante complementaria 3 de la cadena ligera (CDRL3) del anticuerpo IgG de trastuzumab explotando la PCR de extensión de solapamiento, para reemplazar Thr93-Pro95. La proteína de fusión basada en espiral de trastuzumab-hGCSF se modificó con la región constante de hIgG1 CH1-CH3 humana que contiene siete mutaciones (E233P, L234V, L235A, AG236, A327G, A330S y P331S) para generar hGCSF de espiral de trastuzumab (CDRL3) LC (SEQ ID NO: 63). Los vectores de expresión de las proteínas de fusión basadas en espirales de trastuzumab se generaron mediante la ligadura en marco de los genes de fusión amplificados al vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA).

Ejemplo 38: Expresión y purificación de la proteína de fusión dual trastuzumab hGCSF/EPO

[0465] La proteína de fusión dual de espiral de trastuzumab-hGCSF/EPO se expresó a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con un vector que codifica espiral de trastuzumab hEPO (CDRH3) HC (SEQ ID NO: 62) y espiral de trastuzumab hGCSF (CDR^l3) LC (SEQ ⁱD NO: 63). Las proteínas de fusión dual expresadas se secretaron en el medio de cultivo y se cosecharon a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purificaron mediante cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL) y se analizaron mediante gel SDS-PAGE. Como se muestra en la FIG. 30, Carril 1 representa la escala de proteínas, Carril 2 representa la proteína de fusión dual espiral de trastuzumab-hGCSF/EPO, y Carril 3 representa la proteína de fusión dual espiral de trastuzumab-hGCSF/EPO tratada con DTT.

Ejemplo 39: Espectrometría de masas por ionización por electroaspersión (ESI-MS) de proteínas de fusión basadas en trastuzumab hGCSF/hEPO

[0466] 10 |jg de proteína de fusión dual purificada deespiral de trastuzumab-hGCSF/EPO (SEQ ID NOs: 62, 63), en PBS (pH 7,4) se trató durante la noche a 37°C con 1 j l (500 unidades) de péptido-N-glucosidasa (NEB), seguido de la adición de 50 mM DTT. La proteína de fusión se analizó por ESI-MS usando un 6520 Q-TOF LC/MS de Agilent Technology. El cromatógrafo se muestra en la Fig. 31 (A). El peso molecular esperado para LC de espiral de trastuzumab hGCSF (CDRL3) es de 45.746 Da. El peso molecular observado para LC de espiral de trastuzumab hGCSF (CDRL3) fue de 46.690 Da. Los pesos moleculares observados se correlacionan con la O-glucosilación en hGCSF.

[0467] Se trataron10 jg de proteína de fusión dual purificada de espiral de trastuzumab-hGCSF/EPO (SEQ ID NOs: 62, 63), en PBS (pH 7,4) durante la noche a 37°C con 1 jL (500 unidades) de péptido-N-glucosidasa (N^eB), seguido de la adición de DTT 50 mM. La proteína de fusión se analizó por ESI-MS usando un 6520 Q-TOF LC/MS de Agilent Technology. El cromatógrafo se muestra en la Fig. 31 (B). El peso molecular esperado para la hEPO (CDRH3) HC de espiral de trastuzumab es 70,307 Da. Los pesos moleculares observados para espiral de trastuzumab-hEPO (CDRH3) HC fueron 70,179 Da (correlacionado con la masa de espiral de trastuzumab hEPO (CDRH3) HC sin el primer aminoácido ácido glutámico) y 71.126 Da (correlacionado con O-glicosilación en hEPO).

Ejemplo 40: Unión de proteínas de fusión basadas en trastuzumab hGCSF/hEPO al receptor HER2

[0468] Se cultivaron células SKBR3 que sobreexpresan HER2 en DMEM con FBS al 10% y penicilina y estreptomicina al 1%. Las células se lavaron con PBS frío tres veces, se bloquearon con BSA al 2% en PBS y se incubaron con 10 o 100 nM de proteína de fusión dual trastuzumab y espiral de trastuzumab-hGCSF/EPO (SEQ ID NO: 62, 63) durante 2 horas. a 4°C con mezcla suave. El anticuerpo no unido se eliminó lavando con BSA al 2% en PBS. Luego, las células se tiñeron con FITC anti-IgG humana Fc (KPL, Inc., MD) durante 1 hora a 4°C con mezcla suave, seguido de lavado con PBS y análisis por citometría de flujo. Fig. 32 representa el histograma de citometría de flujo.

Ejemplo 41: Ensayo de actividad proliferativa in vitro de proteína de fusión trastuzumab hGCSF/hEPO en células TF- i

[0469] Se cultivaron células TF-1 humanas a 37°C con 5% de CO2 en medio RPMI-1640 que contenía suero bovino fetal al 10% (FBS), penicilina y estreptomicina (50 U/ml) y factor estimulante de colonias de macrófagos de granulocitos humanos 2 ng/ml (GM-CSF). Para examinar la actividad proliferativa de las proteínas de fusión trastuzumab hGCSF/hEPO, las células se lavaron tres veces con medio RPMI-1640 con 10% de FBS, se resuspendieron en medio RPMI-1640 con 10% de FBS a una densidad de 1,5 x 105células/ml, plateado en placas de 96 pocillos (1,5 x 104células por pocillo) con diversas concentraciones de proteína de fusión hEPO, trastuzumab y trastuzumab hGCSF/hEPO (CDRH3) (SEQ ID NOs: 62, 63), y luego se incubaron durante 72 horas a 37°C con 5% de CO2. Las células se trataron luego con Alamar Blue (Life Technologies, CA) durante 4 horas a 37°C. La intensidad de fluorescencia medida a 595 nm es proporcional a la viabilidad celular. FIG. 33 representa una representación gráfica de los datos. La CE50de hEPO fue 0,1+0,02 nM. La CE50de espiral de trastuzumab hGCSF/hEPO fue de 0,2+0,03 nM.

Ejemplo 42: Estudio in vitro de la actividad proliferativa de proteína de fusión hGCSF/hEPO de espiral de trastuzumab en células NFS-60 de ratón

[0470] Se cultivaron células NFS-60 de ratón en medio RPMI-1640 suplementado con FBS al 10%, 2-mercapoetanol 0,05 mM y 62 ng/ml factor de estimulante de colonias de macrófagos humanos (M-CSF). Para examinar la actividad proliferativa de las proteínas de fusión trastuzumab hGCSF/hEPO, las células se lavaron tres veces con medio RPMI-1640 con FBS al 10%, se resuspendieron en medio RPMI-1640 con FBS al 10% y 2-mercapoetanol 0,05 mM a una densidad de 1,5 x 105 células/ml, sembradas en placas de 96 pocillos (1,5 x 104 células por pocillo) con diversas concentraciones de proteína de fusión hGCSF, trastuzumab y trastuzumab hGCSF/hEPO (CDRH3) (SEQ ID NOs: 62, 63), y se incubaron para 72 horas a 37°C con 5% de CO2. Las células se trataron luego con AlamarBlue (Life Technologies, CA) durante 4 horas a 37°C. La intensidad de fluorescencia medida a 595 nm es proporcional a la viabilidad celular. FIG. 34 representa una representación gráfica de los datos. La CE50de hGCSF fue 1,7+0,3 nM. LaCE50de espiral de trastuzumab hGCSF/hEPO fue 3,1 0,1 nM.

Ejemplo 43: Construcción de vectores de proteína de fusión Herceptin hGH para expresión en células de mamífero

[0471] Se sintetizó un gen que codifica hGH (SEQ ID NO: 201) por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Para optimizar el plegamiento y la estabilidad de la proteína de fusión de inmunoglobulina, se agregaron enlazadores flexibles de GGGGS (SEQ ID NO: 179, n = 1) en ambos extremos de los fragmentos de hGH. Para generar las proteínas de fusión hGH de la espiral Herceptin, se agregaron secuencias que codifican péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales en espiral antiparalelas, en los extremos de los terminales N y C del fragmento de enlazador hGH. Para generar una proteína de fusión directa dehGH de trastuzumab (CDRH2) (SEQ ID NO: 128), se injertó un fragmento de PCR que codifica el gen hGH con los enlazadores en la región determinante de complementariedad 2 de la cadena pesada(CDRH2) del anticuerpo Herceptin IgG explotando la PCR de extensión de solapamiento. Para generar una proteína de fusión de espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3) (SEQ ID NO: 75), se injertó un fragmento de PCR que codifica el gen hGH con los péptidos y conectores extensores en la región determinante complementaria 3 de la cadena pesada (CDRH3) de anticuerpo de Herceptin IgG mediante la explotación de la extensión de superposición PCR. Para generar una proteína de fusión de espiral de hGH de trastuzumab (CDRH2) (SEQ ID NO: 76), se injertó un fragmento de PCR que codifica el gen hGH con los péptidos y conectores extensores en la región determinante complementaria 2 de la cadena pesada (CDRH2) de anticuerpo de Herceptin IgG mediante la explotación de la extensión de superposición PCR. Los vectores de expresión de las proteínas de fusión basadas en hGH de trastuzumab se generaron mediante la ligadura en marco de los genes de fusión amplificados al vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA). Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 44: Expresión y purificación de proteínas de fusión basadas en hGH de trastuzumab

[0472] Las proteínas de fusión basadas en hGH de trastuzumab directo se expresaron a través de transfecciones transitorias de células HEK293 deestilo libre con los vectores que codifican hGH de trastuzumab directo (CDRH2) HC (SEQ ID NO: 128) y la cadena ligera de trastuzumab (SeQ ID NO: 19). Las proteínas de fusión basadas en espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3) se expresaron a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3) HC (SEQ ID NO: 75), y la cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID NO: 19) Las proteínas de fusión basadas en hGH de espiral de trastuzumab (CDRH2) se expresaron a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican HC de hGH de espiral de trastuzumab (CDRH2) (SEQ ID NO: 76), y la cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID NO: 19) Las proteínas de fusión expresadas se secretaron en el medio de cultivo y se cosecharon a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purificaron mediante cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL) y se analizaron mediante gel SDS-PAGE. Como se muestra en la FIG. 35, el 1 representa una escalera de proteínas, Carril 2 representa hGH de la espiral de trastuzumab (CDRH3) (SEQ ID NOs: 75, 19), Carril 3 representa la hGH de la espiral de trastuzumab (CDRH3) (SEQ ID NOs: 75, 19) tratado con DTT, Carril 4 representa una escalera de proteínas, Carril 5 representa hGH de trastuzumab directo (CDRH2) (SEQ ID NOs: 128 y 19), Carril 6 representa hGH de trastuzumab directo (CDRH2) (SEQ ID NOs: 128 y 19) tratados con DTT, Carril 7 representa hGH de espiral de trastuzumab (CDRH2) (SEQ ID NOs: 76, 19), y Carril 8 representa hGH de espiral de trastuzumab (CDRH2) (SEQ ID NOs: 76, 19) tratados con DTT.

Ejemplo 45: Ensayos de actividad de la proteína de fusión basada en hGH de trastuzumab

[0473] Ensayo de proliferación de hGHR-Ba/F3: Las líneas de células murinas Ba/F3 fueron transducidas de forma estable con el receptor de hGH (hGHR) bajo un promotor EF1a. Los hGHR-Ba/F3 seleccionados clonalmente se mantuvieron en FBS al 10%, RPMI1640 y 50 ng/ml de hGH. El ensayo de proliferación se realizó en placas de cultivo de 96 pocillos que comprenden 20.000 células en medio de ensayo de 200pl(FBS al 10% en RPMI1640) por pocillo. Concentraciones crecientes de hGH, espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3), espiral de hGH de trastuzumab (CDRH2) y trastuzumabdirecto (CDRH2) se incubaron con las células durante 72 horas. Al final del período de incubación, se añadieron 20plde Prestoblue a cada pocillo, y la señal fluorescente se registró en un lector de placa de fluorescencia Spectramax a 590 nm con 550 nm de excitación. Los valores CE50 para fusiones de hGH y hGH de trastuzumab se muestran en la Tabla 15.

[0474] Ensayo de proliferación deNB2: las líneas celulares de rata Nb2-11 (Sigma) se mantuvieron en 10% de FBS, 10% de suero de caballo (HS) en RPMI con 55 pmp-ME. El ensayo de proliferación se realizó en placas de cultivo de 96 pocillos que comprenden 50.000 células en medio de ensayo de 200 ml (10% HS en RPMI con 55 pM de p-ME) por pocillo. Se incubaron concentraciones crecientes de hGH, espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3), espiral de hGH de trastuzumab (CDRH2) y trastuzumab directo (CDRH2) con las células durante 72 horas. Al final del período de incubación, se añadieron 20plde Prestoblue a cada pocillo, y la señal fluorescente se registró en un lector de placa de fluorescencia Spectramax a 590 nm con 550 nm de excitación. Los valores CE50 parafusiones de hGH y trastuzumab de hGH se muestran en la Tabla 15.

[0475] Ensayo de fosforilación Stat5: las células IM9 humanas (ATCC) se mantuvieron en FBS al 10% en RPMI1640. La noche anterior al ensayo de fosforilación, se sembraron 2 x 10e5células IM9 en placas de 96 pocillos con fondo en V en medio de ensayo de 200pl(FBS despojado de carbón al 1% en RPMI) y se dejaron pasar hambre durante la noche. El día del experimento de fosforilación, las células hambrientas fueron estimuladas con hGH, espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3), espiral de hGH de trastuzumab (CDRH2) y trastuzumab directo (CDRH2) a varias concentraciones durante 10 minutos a 37°C. Después de la estimulación, las células se fijaron con formaldehído al 4% a 37°C durante 10 minutos, y luego se permeabilizaron con metanol al 90%. Luego, las células se bloquearon con BSA al 5% a temperatura ambiente durante 10 minutos y se tiñeron con mAb de conejo conjugado con anti-pStat5 (Tyr694) (C71E5) Alexa Fluor® 488 (Cell Signaling Technology, Inc.) siguiendo el protocolo sugerido por el fabricante. Las células se lavaron con PBS y se analizaron mediante un citómetro de flujo.Los valores CE50 parafusiones de hGH y hGH de trastuzumab se muestran en la Tabla 15. ND = No determinado.

Ejemplo 46: Estudios de farmacocinética de espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3)

[0476] Espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3) y genotropina se inyectaron por vía intravenosa (i.v.) o subcutáneamente (s.c.) en dos grupos de experimentos separados a 2 mg/kg en PBS en ratas hembra SD con tres ratas por tratamiento. Se recogieron muestras de plasma en los siguientes puntos de tiempo: 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 24 h, 48 h, 3 días, 4 días, 7 días, 10 días y 14 días. La cantidad de genotropina se cuantificó mediante el kit hGH Human Direct ELISA (Life Technologies). Espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3) se cuantificó utilizando un ensayo ELISA sandwich. Brevemente, las placas de maxisorb ELISA se revistieron con IgG de cabra anti-IgG humana (Abcam, ab98616) durante 1 hora a 37°C, y luego se bloquearon con BSA al 5%. Se añadió una dilución adecuada de plasma a los pocillos bloqueados y los pocillos se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de lavar los pocillos, se aplicaron anticuerpos policlonales anti-hGH biotinilados (sistemas de I D, BAF1067) a los pocillos durante 1 hora. Las placas se lavaron e incubaron con conjugado de estreptavidina-HRP de alta sensibilidad (Pierce, 21130) durante 1 hora a temperatura ambiente. El sustrato de ELISA fluorogénico QuantaBlu se aplicó después de un lavado exhaustivo, y las señales se obtuvieron con el lector de placa de fluorescencia Spectramax. La cantidad de fusión de espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3) en muestras de plasma se cuantificó extrapolando la señal en un rango lineal (señal frente a concentración) de una curva estándar. Las concentraciones de genotropina y espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3) en cada punto de tiempo de recolección se representaron gráficamente y se mostraron en la Fig. 36. La Fig. 36 A muestra la farmacocinética por inyección intravenosa. La Fig. 36 B muestra la farmacocinética por inyección subcutánea.

Ejemplo 47: Estudios de farmacodinámica de espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3).

[0477] Se evaluó el rendimiento farmacodinámico de la fusión de espiral de hGH de trastuzumab (CDRH3) en un ensayo de rata hipofisectomizado estándar. Se compraron ratas machos hipofisectomizadas de Harlan y se sometieron a un cribado previo durante varios días antes del estudio para controlar la normalización del peso corporal después de la cirugía/viaje. Las ratas combinadas con los pesos iniciales se trataron con una de varias terapias: inyección subcutánea diaria de genotropina durante 14 días (0,1 mg/kg); o administración quincenal de genotropina (0,3 mg/kg) o hGH de espiral de trastuzumab (CDRH3) (1,0 mg/kg). Los animales fueron pesados diariamente. Al final del período de tratamiento, se sacrificaron los animales y se midió el espesor de las epífisis. El porcentaje de cambio en el peso corporal desde el día 1 se trazó por día y se muestra en la Fig. 37.

Ejemplo 48: Construcción de vectores de proteína de fusión basados en hLeptina de espiral de trastuzumab para la expresión en células de mamífero

[0478] Un gen que codifica hLeptina (SEQ ID NO: 197) fue sintetizado por Genscript o IDT, y amplificado por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Para optimizar el plegamiento y la estabilidad de la proteína de fusión de inmunoglobulina, se agregaron enlazadores flexibles de GGGGS (SEQ ID NO: 179, n = 1) en ambos extremos de los fragmentos de hLeptina. Luego, las secuencias que codifican péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales enrolladas antiparalelas, se agregaron en los extremos de los terminales N y C del fragmento conector hLeptina. El fragmento de PCR que codifica el gen hLeptina con los péptidos extensores y los enlazadores se injertó en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDRH3) del anticuerpo IgG de trastuzumab mediante la explotación de la PCR de extensión solapada. Las regiones constantes de trastuzumab se modificaron con la región constante de IgG1 CH1-CH3 humana que contiene siete mutaciones (E233P, L234V, L235A, 0 G236, A327G, A330S y P331S) para generar HC de hLeptina (CDRH3) de espiral de trastuzumab (CDRH3) HC (SEQ ID NO: 78) Para generar una fusión de CDRL3, el fragmento de PCR que codifica el gen hLeptina con los péptidos y conectores extensores se injertó en la región determinante complementaria 3 de la cadena ligera (CDRL3) del anticuerpo IgG trastuzumab mediante la explotación de la PCR de extensión de solapamiento, para reemplazar Thr93-Pro95 y generar espiral de trastuzumab hLeptina (CDRL3) (SEQ ID NO: 49). El fragmento de PCR que codifica el gen hLeptina con los péptidos extensores y los conectores se injertó en laregión que determina la complementariedad2 de la cadena pesada (CDRH2) del anticuerpo IgG trastuzumab mediante la explotación de la pCr de extensión de solapamiento para generar hLeptina (CDRH2) HC (SEQ ID NO: 79). Los vectores de expresión de las proteínas de fusión basadas en hLeptina de espiral de trastuzumab se generaron mediante ligadura en marco de los genes de fusión amplificados al vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA). De forma similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo IgG trastuzumab (SEQ ID NO: 1) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 49: Expresión y purificación de proteínas de fusión basadas en hLeptina de espiraldetrastuzumab [0479] Las proteínas de fusión basadas en hLeptina de espiral de trastuzumab (CDRH3) se expresaron mediante transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican hLeptina de espiral de trastuzumab (CDRH3) HC (SEQ ID NO: 78) y la cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID NO: 19). Las proteínas de fusión basadas en hLeptina de espiral de trastuzumab (CDRH2) se expresaron a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican hLeptina de HC de espiral de trastuzumab (CDRH2) (SEQ ID NO: 79) y la cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID NO: 19). Las proteínas de fusión basadas en hLeptina de espiral de trastuzumab (CDRL3) se expresaron a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican LC de hLeptina de trastuzumab (CDRL3) LC (SEQ ID NO: 49) y la cadena pesada de trastuzumab (SEQ ID NO: 4). Las proteínas de fusión expresadas se secretaron en el medio de cultivo y se cosecharon a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purificaron mediante cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL) y se analizaron mediante gel SDS-PAGE. Como se muestra en la FIG. 38, Carril 1 representa hLeptina de espiral de trastuzumab (CDRH2) (SEQ ID NOs: 79, 19), Carril 2 representa hLeptina de espiral de trastuzumab (Cd Rh2) (SEQ ID NOs: 79, 19) tratados con DTT, Carriles 3, 4 y 7 representan marcadores de peso molecular de proteínas, Carril 5 representa hLeptina de espiral de trastuzumab (CDRH3) (SEQ ID NOs: 78, 19), Carril 6 representa hLeptina de espiral de trastuzumab (CDRH3) (SEQ ID NOs: 78, 19) tratados con DTT, Carril 8 representa hLeptina de espiral de trastuzumab (CDRL3) (SEQ iD NOs: 49, 4), y Carril 9 representa hLeptina de espiral de trastuzumab (CDRL3) (SEQ ID NOs: 49, 4) tratados con DTT. Ejemplo 50: Actividad in vitro de proteínas de fusión basadas en hLeptina de espiral de trastuzumab en la activación del receptor de leptina humana (LepR)

[0480] Se sembraron células estables Baf3 que sobreexpresan el receptor de leptina humana (LepR) en una placa de 96 pocilios, tratada con diferentes dosis de hLeptina (SEQ ID NO: 238), espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH2) (SEQ ID NOs: 79, 19) y espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH3) (SEQ ID NOs: 78, 19) durante 72 horas. El reactivo AlamarBlue se añadió a 1/10 de volumen, se incubó durante 2 horas y el fluorescente se midió a 590 nm bajo excitación a 560 nm. Los datos se analizaron usando GraphPad Prism 6. La Fig. 39 representa una representación gráfica de los datos. La CE50de hLeptina fue 129,4+46,09 pM (Fig. 39 A). La CE50de espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH3) fue 55,38 14,04 pM. La CE50de espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH2) fue 99,41 18,91 pM. La CEsüde hLeptina fue 58,19 10,88 pM (Fig. 39 B). La CE50de espiral de trastuzumab hLeptina (CDRL3) fue 665,1 62,70 pM.

Ejemplo 51: Unión por SKBR3 de proteínas de fusión basadas en hLeptina de espiral de trastuzumab

[0481] Se cultivaron células SKBR3 en DMEM con FBS al 10% y penicilina y estreptomicina al 1%. Las células se lavaron con PBS frío tres veces, se bloquearon con BSA al 2% en PBS, y se incubaron con trastuzumab 10 o 100 nM de trastuzumab, espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH2) (SEQ ID NOs: 79, 19) y espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH3) (SEQ ID NOs: 78, 19) durante 2 horas a 4°C con mezcla suave. El anticuerpo no unido se eliminó lavando con BSA al 2% en PBS. Luego, las células se tiñeron con FITC anti-IgG humana Fc (KPL, Inc., MD) durante 1 hora a 4°C con mezcla suave, seguido de lavado con PBS y análisis por citometría de flujo. La Fig. 40 representa el histograma de citometría de flujo de (A) trastuzumab, (B) espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH2) y (C) espiral de trastuzumab hLeptina (CDRH3).

Ejemplo 52: Construcción de vectores de proteína de fusión de espiral de trastuzumab-elafina para expresión en células de mamífero

[0482] Se sintetizó un gen que codifica elafina (SEQ ID NO: 217) por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se añadió un conector GGg Gs flexible (SEQ ID NO: 179) al extremo N y al extremo C del fragmento del gen elafina para aumentar el plegamiento y la estabilidad de la proteína de fusión. Luego, las secuencias que codifican los péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales en espiral antiparalelas, se agregaron en los extremos de los terminales N y C del fragmento de conector de elafina. Posteriormente, el fragmento de PCR que codifica elafina con los fragmentos enlazador y extensor se injertó en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) del anticuerpo IgG de trastuzumab explotando la PCR de extensión solapada, para reemplazar el bucle Trp99-Met107. La proteína de fusión basada en espiral de trastuzumab-elafina se modificó con la región constante hIgG1 CH1-CH3 humana que contiene siete mutaciones (E233P, L234V, L235A, AG236, A327G, A330S y P331S) para generar fusión HC de espiral de trastuzumab-elafina (SEQ ID NO: 54). El vector de expresión de espiral de trastuzumab-elafina (CDRH3) se generó mediante la ligadura por infrarrojos del gen de fusión amplificado con el vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA). De forma similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo IgG trastuzumab (SEQ ID NO: 1) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresiónobtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 53: Expresión y purificación de proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-elafinas

[0483] Las proteínas de fusión basadas en espiral de trastuzumab-elafina (CDRH3) se expresaron a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican la cadena pesada de proteína de fusión de elastina espiral de trastuzumab (SEQ ID NO: 54) y la cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID NO: 19). Las proteínas de fusión expresadas se secretaron en el medio de cultivo y se cosecharon a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purificaron mediante cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL), y se analizaron mediante gel SDS-PAGE como se muestra en la Fig. 41. Carril 1 es un marcador de proteína. Carril 2 es espiral de trastuzumab-elafina (CDRH3) IgG (SEQ ID NOs: 85 y 19). Carril 3 es espiral de trastuzumab-elafina (CDRH3) IgG (SEQ ID NOs: 85 y 19) tratados con DTT.

Ejemplo 54: Ensayo de inhibición de la elastasa

[0484] La elastasa humana se adquirió de Elastin Products Company, Inc. Se incrementaron las concentraciones de elafina (SEQ ID NO: 258) y IgG de espiral de trastuzumab elamina (CDRH3) (SEQ ID NO: 85 y 19) incubados con elastasa a temperatura ambiente, se analizó la actividad de residuos de elastasa mediante la adición de sustrato fluorógeno de elastasa MeOSucAAPV-AMC (EMD Millipore). La pendiente de las reacciones se obtuvo monitorizando a una longitud de onda de 420 nm con excitación de 325 nm en un lector de placa de fluorescencia Spectramax. Cada punto de datos se triplicó y se ajustó a la ecuación:

Q=(Ki*( 1 (S/Km))). Y=Vo*(1-((((Et+X+Q)-(((Et+X+Q)A2)-4*Et*X)A0.5))/(2*Et))).

Figura 42 muestra la inhibición de la elastasa por la elafina (A) y la IgG (B) de espiral de trastuzumabelafina (CDRH3).

Ejemplo 55: Construcción de vectores de proteína de fusión GLP2 de espiral de trastuzumab para expresión en células de mamífero

[0485] Se sintetizó un gen que codifica GLP2 (SEQ ID NO: 222) por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se añadió un enlazador CGGGGS flexible al extremo N de GLP2 y se añadió un GGGGSC flexible al extremo C de GLP2. Luego, las secuencias que codifican los péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales en espiral antiparalelas, se agregaron en los extremos de los terminales N y C del fragmento conector GLP2. Posteriormente, el fragmento de PCR que codifica GLP2 con los fragmentos enlazador y extensor se injertó en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) del anticuerpo IgG trastuzumab explotando la PCR de extensión solapada, para reemplazar el bucle Trp99-Met107. La proteína de fusión basada en espiral de trastuzumab GLP2 se modificó con la región constante humana hIgG1 CH1-CH3 que contiene siete mutaciones (E233P, L234V, L235A, AG236, A327G, A330S y P331S) para generar fusión HC de espiral de trastuzumab GLP2 (CDRH3) (SEQ ID NO: 65). El vector de expresión de espiral de trastuzumab GLP2 (CDRH3) se generó mediante la ligadura en marco del gen de fusión amplificado al vector de esqueleto pFuse (InvivoGen, CA). De forma similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo IgG trastuzumab (SEQ ID NO: 1) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN. Ejemplo 56: Expresión y purificación de proteínas de fusión basadas en GLP2 de espiral de trastuzumab [0486] Las proteínas de fusión basadas en GLP2 deespiral de trastuzumab (CDRH3) se expresaron a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican la cadena pesada de proteína de fusión GLP2 de espiral de trastuzumab (SEQ ID NO: 65) y la cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID NO: 19). Las proteínas de fusión expresadas se secretaron en el medio de cultivo y se cosecharon a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purificaron mediante cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL), y se analizaron mediante gel SDS-PAGE como se muestra en la figura 43. Carril 1 es un marcador de proteína. Carril 2 es IgG de espiral de trastuzumab GLP2 (CDRH3) (SEQ ID NOs: 96 y 19). Carril 3 es IgG de espiral de trastuzumab GLP2 (CDRH3) (SEQ ID NOs: 96 y 19) tratado con DTT.

Ejemplo 57: Construcción de vectores de proteína de fusión de relaxina de espiral de trastuzumab (péptido c de insulina) para la expresión en células de mamífero

[0487] Se sintetizó un gen que codifica relaxina (péptido c de insulina) (SEQ ID NO: 225) mediante Genscript o IDT, y amplificado por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se añadió un conector GGGGS flexible (SEQ ID NO: 179) al extremo N de relaxina y se añadió un GGGGS flexible (SEQ ID NO: 179) al extremo C de relaxina. Luego, se agregaron secuencias que codifican péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161),que forman espirales en espiral antiparalelas. los extremos de los terminales N y C del fragmento conector de relaxina. Posteriormente, el fragmento de PCR que codifica la relaxina (péptido c de insulina) con los fragmentos enlazador y extensor se injertó en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) del anticuerpo IgG de trastuzumab explotando la PCR de extensión solapada, para reemplazar el Trp99-Met107 lazo. La proteína de fusión basada en relaxina de espiral de trastuzumab (péptido c de insulina) se modificó con la región constante de hIgG1 CH1-CH3 humano que contiene siete mutaciones (E233P, L234V, L235A, AG236, A327G, A330S y P331S) para generar relaxina de espiral de trastuzumab (péptido c de insulina) (CDRH3) fusión HC. El vector de expresión de la relaxina de la espiral de trastuzumab (péptido c de insulina) (CDRH3) se generó mediante ligadura en marco del gen de fusión amplificado al vector de la columna vertebral pFuse (InvivoGen, CA). De forma similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo IgG trastuzumab (SEQ ID NO: 1) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 58: Expresión y purificación de proteínas de fusión basadas en relaxina de espiral de trastuzumab (péptido C de insulina)

[0488] Las proteínas de fusión basadas enrelaxina de espiral de trastuzumab (péptido C de insulina) (CDRH3) se expresaron a través de transfecciones de célulastransitorias HEK293 de estilo libre con vectores que codifican la cadena pesada de la proteína de fusión derelaxina de espiral de trastuzumab (péptido c deinsulina) y la cadena ligera de trastuzumab. Las proteínas de fusión expresadas se secretaron en el medio de cultivo y se cosecharon a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purificaron mediante cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL), y se analizaron mediante gel SDS-PAGE como se muestra en la Fig. 44. Carril 1 es relaxina de espiral de trastuzumab (péptido c de insulina) (CDRH3) IgG tratado con DTT. Carril 2 es relaxina de espiral de trastuzumab (péptido c de insulina) (CDRH3) IgG. Carril 3 es un marcador de proteínas.

Ejemplo 59: Construcción de vectores de proteína de fusión de relaxina de espiral de trastuzumab para expresión en células de mamífero

[0489] Un gen que codifica la relaxina que comprende sitios de escisión de proteasa interna para Factor Xa y PC2 (IEGRKKR) se sintetizó por Genscript o IDT, y se amplificó por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se añadió un conector GGGGS flexible (SEQ ID NO: 179) al extremo N de relaxina y se añadió un GGGGS flexible (SEQ ID NO: 179) al extremo C de relaxina. Luego, las secuencias que codifican péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales enrolladas antiparalelas, se agregaron en los extremos delos terminales N y Cdel fragmento conector de relaxina. Posteriormente, el fragmento de PCR que codifica la relaxina con los sitios de escisión de la proteasa, los enlazadores y los fragmentos de extensión se injertaron en la región determinante de complementariedad 3 de la cadena pesada (CDR3H) del anticuerpo IgG de trastuzumab explotando la PCR de extensión de solapamiento, para reemplazar el bucle Trp99-Met107. La proteína de fusión basada en relaxina de la espiral de trastuzumab se modificó con la región constante de hIgG1 CH1-CH3 humano que contiene siete mutaciones (E233P, L234V, L235A, AG236, A327G, A330S y P331S) para generar una fusión HC de espiralde relaxuzumab (CDRH3). El vector de expresión de la relaxina de la espiral de trastuzumab (CDRH3) se generó mediante la ligadura en marco del gen de fusión amplificado al vector de la columna vertebral pFuse (InvivoGen, CA). De forma similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo IgG trastuzumab (SEQ ID NO: 1) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 60: Expresión y purificación de proteínas de fusión basadas en relaxina de espirales de trastuzumab [0490] Las proteínas de fusión basadas en relaxina de espirales de trastuzumab (CDRH3) se expresaron a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican la cadena pesada de la proteína de fusión de relaxina de espirales de trastuzumab (SEQ ID NO: 90) y la cadena ligera de trastuzumab (SEQ ID NO: 18). Las proteínas de fusión expresadas se secretaron en el medio de cultivo y se cosecharon a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purificaron mediante cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL) y se analizaron mediante gel SDS-PAGE como se muestra en la Fig. 45. Carril 1 es un marcador de proteína. Carril 2 es IgG de relaxina de espiral de trastuzumab (CDRH3). Carril 3 es IgG de relaxina de espiral de trastuzumab (CDRH3) tratado con DTT. Carril 4 es IgG de relaxina de espiral de trastuzumab (CDRH3) coexpresada con la proteasa PC2. Carril 5 es IgG de relaxina de espiral de trastuzumab (CDRH3) coexpresado con PC2 y tratado con DTT.

Ejemplo 61: Construcción de vectores de proteína de fusión de relaxina de espiral de trastuzumab (XTEN35) para la expresión en células de mamífero

[0491] Un gen que codifica relaxina (XTEN35) (SEQ ID NO: 224) que comprende un HIS interno 6x y un sitio de escisión de proteasa para PC2 (RKKR) fue sintetizado por Genscript o IDT, y amplificado por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se añadió un conector GGGGS flexible (SEQ ID NO: 179) al extremo N de relaxina (XTEN35) y se añadió un GGGGS flexible (SEQ ID NO: 179) al extremo C de relaxina (XTEN35). Luego, las secuencias que codifican péptidos extensores GGSGAKLAALKAKLAALK (SEQ ID NO: 151) y ELAALEAELAALEAGGSG (SEQ ID NO: 161), que forman espirales enrolladas antiparalelas, se agregaron en los extremos de los terminales N y C del conector de relaxina (XTEN35) fragmento. Posteriormente, el fragmento de PCR que codifica la relaxina (XTEN35) con los enlazadores y los fragmentos de extensión se injertaron en la región que determina la complementariedad3 de la cadena pesada (CDR3H) delanticuerpo de trastuzumab IgG explotando la PCR de extensión de superposición, para reemplazar el bucle Trp99-Met107. La proteína de fusión basada en relaxina de la espiral de trastuzumab (XTEN35) se modificó con la región constante humana hIgG1 CH1-CH3 que contiene siete mutaciones (E233P, L234V, L235A, AG236, A327G, A330S y P331S) para generar una fusión HC de relaxina de espiral de trastuzumab (CDRH3). El vector de expresión de la relaxina de la espiral de trastuzumab (CDRH3) se generó mediante la ligadura en marco del gen de fusión amplificado al vector de la columna vertebral pFuse (InvivoGen, CA). De forma similar, el gen que codifica la cadena ligera del anticuerpo IgG trastuzumab (SEQ ID NO: 1) se clonó en el vector de esqueleto pFuse. Los vectores de expresión obtenidos se confirmaron mediante secuenciación de ADN.

Ejemplo 62: Expresión y purificación de proteínas de fusión basadas en relaxina de espiral de trastuzumab (XTEN35)

[0492] Las proteínas de fusión basadas en relaxina de espiral de trastuzumab (XTEN35) (CDRH3) se expresaron a través de transfecciones transitorias de células HEK293 de estilo libre con vectores que codifican cadena pesada de proteína de fusión de relaxina de espiral de trastuzumab (XTEN35) y cadena ligera de trastuzumab. Las proteínas de fusión expresadas se secretaron en el medio de cultivo y se cosecharon a las 48 y 96 horas después de la transfección. Las proteínas de fusión se purificaron por cromatografía de proteína A/G (Thermo Fisher Scientific, IL), se escindieron con la proteasa PC2 y se analizaron con gel SDS-PAGE como se muestra en la Fig. 46. Carril 1 es relaxina de espiral de trastuzumab (XTEN35) (CDRH3) IgG tratado con DTT. Carril 2 es relaxina de espiral de trastuzumab (XTEN35) (CDRH3) IgG. Carril 3 es la IgG de relaxina de espiral de trastuzumab (XTEN35) (CDRH3) coexpresada con PC2 y tratada con DTT. Carril 4 es relaxina de espiral de trastuzumab (XTEN35) (CDRH3) IgG coexpresada con PC2. Carril 5 es un marcador de peso molecular proteico.

Ejemplo 63: Unión de la proteína de espiral de trastuzumab-hGCSF al receptor Her2

[0493] La ELISA examina la afinidad de unión de las proteínas de fusión de espiral de trastuzumab-hGCSF al receptor Her2. La quimera Her2-Fc humana (5 pg/ml) (R&D Systems) se reviste en una placa ELISA de 96 pocillos durante la noche a 4°C, seguido del bloqueo con BSA al 1% en PBS (pH 7,4) durante 2 horas a 37°C. Después de lavar con Tween-20 al 0,05% en PBS (pH 7,4), se añaden a la placa varias concentraciones de proteínas de fusión trastuzumab IgG y espiral de trastuzumab-hGCSF durante 2 horas de incubación a 37°C. Posteriormente, se agrega a la placa el anticuerpo policlonal de cabra anti-humano kappa de cadena ligera con conjugado HRP (Sigma) y la placa se incuba durante 2 horas a 37°C. Los pocillos se lavan posteriormente y se examinan las afinidades de unión en función de la intensidad de fluorescencia a 425 nm añadiendo sustrato de peroxidasa fluorogénica a cada pocillo. Ejemplo 64: Unión de espiral de trastuzumab-VM24 al receptor Her2

[0494] La afinidad de unión de las proteínas de fusión de espiral de trastuzumab-VM24 al receptor Her2 se examina mediante ELISA. La quimera Her2-Fc humana (5 pg/ml) (R&D Systems) se reviste en una placa ELISA de 96 pocillos durante la noche a 4°C, seguido del bloqueo con BSA al 1% en PBS (pH 7,4) durante 2 horas a 37°C. Después de lavar con Tween-20 al 0,05% en PBS (pH 7,4), se añaden a la placa varias concentraciones de proteínas de fusión trastuzumab IgG y espiral de trastuzumab-VM24 durante 2 horas a 37°C. Posteriormente, se agrega a la placa el anticuerpo policlonal de cabra anti-humano kappa de cadena ligera con conjugado HRP (Sigma) y la placa se incuba durante 2 horas a 37°C. Los pocillos se lavan posteriormente y se examinan las afinidades de unión en función de la intensidad de fluorescencia a 425 nm añadiendo sustrato de peroxidasa fluorogénica a cada pocillo.

Ejemplo 65: Construcción de 4 hLeptina-exendina-proteína de fusión de espiral de trastuzumab dual

[0495] La leptina y la exendina-4 se fusionan a las regiones CDR-3H y CDR-3L en la cadena principal trastuzumab con untallo de ingeniería en espiral en bobina. Las proteínas de fusión biológicamente activas humanizadas generadas pueden mejorar las propiedades farmacológicas para el tratamiento de enfermedades relevantes. Además, la combinación de hLeptina y Ex-4 puede tener efectos sinérgicos. Las fusiones hLeptina/Ex4 de espiral de trastuzumab contienen conectores GGGGS en cada terminal de los fragmentos hLeptina y Ex-4 fusionados y un conector GGSG para conectar las espirales enrolladas a la base del anticuerpo.

Ejemplo 66: Unión de IgG de espiral de trastuzumab-Moka al receptor Her2

[0496] La unión de la proteína de fusión de espiral de trastuzumab-Moka al receptor Her2 se examina mediante ELISA. La quimera Her2-Fc humana (5 pg/ml) (R&D Systems) se reviste en una placa ELISA de 96 pocillos durante la noche a 4°C, seguido del bloqueo con BSA al 1% en PBS (pH 7,4) durante 2 horas a 37°C. Después de lavar con Tween-20 al 0,05% en PBS (pH 7,4), se añaden varias concentraciones de proteínas de fusión trastuzumab IgG y espiral de trastuzumab-Moka a cada pocillo y la placa se incuba durante 2 horas a 37°C. Posteriormente, se agrega a la placa el anticuerpo policlonal de cabra anti-humano kappa de cadena ligera con conjugado HRP (Sigma) y la placa se incuba durante 2 horas a 37°C. Los pocillos se lavan posteriormente y se examinan las afinidades de unión en función de la intensidad de fluorescencia a 425 nm añadiendo sustrato de peroxidasa fluorogénica a cada pocillo.

[0497] Lo anterior simplemente ilustra los principios de la invención. Se apreciará que los expertos en la materia podrán idear diversas disposiciones que, aunque no se describen o muestran explícitamente en el presente documento, incorporan los principios del documentocomo se define en las reivindicaciones.

[0498] Si bien las realizaciones preferidas de la presente invención se han mostrado y descrito en el presente documento, será obvio para los expertos en la materia que tales realizaciones se proporcionan solo a modo de ejemplo. Ahora se les ocurrirán numerosas variaciones, cambios y sustituciones a los expertos en la técnica sin apartarse de la invención, que se define en las reivindicaciones. Debe entenderse que pueden emplearse diversas alternativas a las realizaciones de la invención descritas en la presente memoria en la práctica de la invención. Se pretende que las siguientes reivindicaciones definan el alcance de la invención y que los métodos y estructuras dentro del alcance de estas reivindicaciones estén cubiertos de ese modo.

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Claims

REIVINDICACIONES

1. Una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende una región no anticuerpo insertada en una región de determinación de complementariedad(CDR) de una primera región de anticuerpo, en donde la región sin anticuerpo comprende un primer agente terapéutico, un primer péptido de extensor y un segundo péptido de extensor y el primer péptido de extensor y el segundo péptido de extensor forman una espiral enrollada antiparalela.

2. La proteína de fusión de inmunoglobulina de la reivindicación 1, en donde la región no anticuerpo reemplaza una porción de una cadena ligera de un anticuerpo del que deriva la primera región de anticuerpo o una porción de una cadena pesada de un anticuerpo del cual se deriva la primera región de anticuerpo.

3. La proteína de fusión de inmunoglobulina de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, que comprende además un segundo agente terapéutico.

4. La proteína de fusión de inmunoglobulina de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde la primera región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos al menos 90% homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 19-36 y 271-273.

5. La proteína de fusión de inmunoglobulina de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde la primera región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 90% homóloga a una secuencia de aminoácidos de un anticuerpo contra trastuzumab o fragmento de unión a antígeno del mismo.

6. La proteína de fusión de inmunoglobulina de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde la primera región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 90% homóloga a una secuencia de aminoácidos de un anticuerpo de palivizumab o fragmento de unión a antígeno del mismo.

7. La proteína de fusión de inmunoglobulina de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, que comprende además una segunda región de anticuerpo.

8. La proteína de fusión de inmunoglobulina de la reivindicación 1, en donde la primera región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 90% homóloga a una secuencia de aminoácidos de un anticuerpo de trastuzumab o fragmento de unión a antígeno del mismo, y el primer agente terapéutico comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 80% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267.

9. La proteína de fusión de inmunogloblulina de la reivindicación 8, en donde el agente terapéutico reemplaza al menos una porción del anticuerpo contra trastuzumab o fragmento de unión a antígeno del mismo.

10. La proteína de fusión de inmunoglobulina de la reivindicación 1, en donde la primera región de anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 90% homóloga a una secuencia de aminoácidos de un anticuerpo de palivizumab o fragmento de unión a antígeno del mismo, y el primer agente terapéutico comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 90% homóloga a cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267.

11. La proteína de fusión de inmunoglobulina de la reivindicación 10, en donde el agente terapéutico reemplaza al menos una porción del anticuerpo de palivizumab o fragmento de unión a antígeno del mismo.

12. La proteína de fusión de inmunoglobulina de cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde el primer péptido de extensor comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 80% homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 144-185.

13. La proteína de fusión de inmunoglobulina de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde el primer agente terapéutico comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 90% homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 227-267.

14. La proteína de fusión de inmunoglobulina de la reivindicación 1, en donde la proteína de fusión de inmunoglobulina comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 90% homóloga a una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NO: 68-9.