KR101706831B1 - 메타크릴산 및/또는 그의 에스테르의 제조 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은, 재생 가능 원료 및/또는 상기 재생 가능 원료의 이용으로부터 발생하는 바이오매스로부터, 직접 단일 공정에서 효율적으로 메타크릴산을 생산하는 방법을 제공한다. 탄소원 및/또는 에너지원으로서의, 재생 가능 원료 및/또는 상기 재생 가능 원료의 이용으로부터 발생하는 바이오매스로부터, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물을 사용하여 메타크릴산을 제조하는 방법을 제공한다. 이 메타크릴산의 제조 방법에 의하면, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물을 이용함으로써, 석유 유래의 원료를 사용하지 않고, 바이오매스로부터 안전하면서도 또한 간편하게 메타크릴산을 생산할 수 있다.
Description
본 발명은, 메타크릴산 및/또는 그의 에스테르의 제조 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물을 사용한 메타크릴산 등의 제조 방법 및 해당 미생물 및 해당 제조 방법에 의해 얻어지는 메타크릴산 등에 관한 것이다.
메타크릴산은, 도료 및 수지 개질제 등의 원료로서 유용하고, 그의 에스테르는 아크릴 수지의 원료로서 공업적으로 매우 중요한 화합물이다.
메타크릴산 유도체를 화학적으로 제조하는 방법으로서는, 시안화수소산과 아세톤을 원료로 하여 아세톤 시안히드린을 경유하는 ACH법, 이소부틸렌 또는 tert-부탄올을 원료로 하는 C4 산화법 등이 실용화되어 있다. 이들 화학적인 제조 방법은, 화석 원료에 의존하고 있고, 또한 많은 에너지를 필요로 한다.
최근에는, 지구 온난화 방지 및 환경 보호의 관점에서, 종래의 화석 원료의 대체가 되는 탄소원으로서, 재생 가능한 생물 유래 자원(재생 가능 원료)을 사용하는 것이 주목받고 있다. 예를 들어, 천연에 존재하는 미생물을 이용하여, 당 등의 천연물로부터 메타크릴산의 전구체가 되는 2-히드록시이소부티르산 및 3-히드록시이소부티르산을 생산하는 방법이 제안되어 있다(특허문헌 1, 2 및 비특허문헌 1 참조). 그러나, 이들 방법은, 전구체를 탈수하여 메타크릴산을 생성하는 공정을, 여전히 화학적인 방법에 의존하고 있다.
또한, 복수의 효소 유전자를 도입한, 천연에 존재하지 않는 재조합 미생물을 사용하여 글루코오스로부터 메타크릴산을 생성하는 방법이 제안되어 있으나, 이들은 기지의 효소 반응 및 그것으로부터 유추되는 가상의 효소 반응을 간단히 조합하여 제안한 것에 지나지 않으며, 실증된 것이 아니다(특허문헌 3 내지 5 참조).
한편, 천연에 존재하는 미생물로, 메타크릴산을 생산하는 능력을 갖는 광합성 세균이 알려져 있다(비특허문헌 2). 그러나, 이 광합성 세균은, 3-머캅토이소부티르산이라는 천연에는 존재하지 않는 특수한 화합물을 메타크릴산으로 변환하는 것에 지나지 않는다.
또한, 특허문헌 6에는, 아크릴릴-CoA와 알코올의 존재 하, 가수 분해 효소를 작용시켜서, 아크릴산에스테르를 제조하는 방법이 개시되어 있다. 동 문헌에는 메타크릴산에스테르에 대해서도 마찬가지로 제조가 가능하다는 취지가 시사되어 있다. 그러나, 효소의 다양성, 기질 특이성을 고려하면, 일부의 가수 분해 효소로 아크릴산에스테르의 제조가 가능한 것을 나타낸 것에 지나지 않고, 구조가 상이한 메타크릴산에스테르가 마찬가지로 가수 분해 효소에 의해 제조 가능한지는 불분명하였다. 또한, 반응 기구가 상이한 다른 종류의 효소로 제조할 수 있는지 여부는 전혀 불분명하였다. 또한, 특허문헌 6에 기재된 가수 분해 효소에 의해 에스테르를 합성했을 경우, 생성된 에스테르가 애당초 가수 분해 활성으로 분해되어버릴 것이 예상되어, 효과적인 제조 방법이라고는 생각하기 어렵다.
한편, 알코올 아실트랜스페라아제(이하 AAT)는, 프루티 플레이버 합성 효소로서 알려져 있다. 특허문헌 7에는, 특정한 과실 중에 포함되는 동 효소 유전자를 동정하여, 과실 플레이버인 각종 에스테르의 합성 방법을 제안하고 있다. 그러나, 메타크릴산에스테르가 이러한 효소로 합성 가능한지 여부는 보고되어 있지 않아 전혀 불분명하였다.
이상과 같이, 몇 가지의 제안 또는 검토가 이루어져 있지만, 실제로 미생물에 의해 메타크릴산 유도체를 제조한 예는 없어, 유효한 제조 방법의 확립이 요망되고 있었다.
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종래의 화학적으로 제조하는 방법, 예를 들어 ACH법에서는, 산에 의한 아세톤 시안히드린의 산화 처리를 필요로 하여, 대량의 폐산이 발생한다. 또한, 각 스텝에서 분리나 정제가 필요해서, 에너지 소비가 커진다는 문제가 있었다. 그로 인해, 탄소원 및/또는 에너지원으로서의, 재생 가능 원료 및/또는 해당 재생 가능 원료의 이용으로부터 발생하는 바이오매스로부터, 직접 단일 공정에서 효율적으로 메타크릴산을 생산할 수 있는 미생물을 이용한 메타크릴산의 제조 방법이 요구되고 있었다.
상기 과제 해결을 위하여, 본 발명자들은, 미생물에 의한 메타크릴산 유도체의 생성 능력을 갖는 미생물에 대하여 널리 탐색을 행하여, 많은 미생물로 메타크릴산을 생성할 수 있음을 발견하였다.
또한, 이하에 기재한 바와 같이, 이들 메타크릴산 유도체의 생성 능력을 갖는 미생물은, 어떤 특정한 기능을 갖는 미생물군이며, 일정한 공통성을 갖는 것을 발견함과 함께, 그것들의 탐색 방법에 대해서도 발견하는 것에 성공하였다.
먼저, 본 발명자들은, 발린 대사 루트 상의 유전자(분지쇄 케토산탈수소 효소(이하 BCKAD) 및 이소부티릴-CoA 탈수소 효소(이하 ACD))를 도입한 대장균 재조합체를 제작하고, 균체 반응에 의해, 2-옥소이소발레르산으로부터, 발린 대사 경로의 중간체인 메타크릴산 유도체의 생성을 시도하였다. 그러나, 목적물인 메타크릴산 유도체의 생성은 보이지 않고, 이소부티르산의 생성이 보였다. 또한, 본 재조합체로부터 세포 추출액을 제조하고, 보인자 등을 첨가하여, BCKAD 및 ACD의 시험관내(in vitro)에서의 활성을 측정한 결과, 양쪽 활성이 나타났다. 이러한 점에서, 생체내(in vivo)에서는, BCKAD 반응은 진행되고 있지만, ACD 반응은 진행되지 않았다고 판단하였다.
포유류에 있어서는 분지쇄 아미노산의 대사 또는 지방산의 β-산화에서 알려져 있는 탈수소 반응에서는, 미토콘드리아 내에서 진행되고, 탈리된 전자는 전자 전달 플라빈단백질(electron transferring flavoprotein)을 거쳐서 호흡 쇄에 전달되는 것으로 알려져 있다. 즉, 이들과 동등한 기능을 갖지 않는 미생물에, 단순히 외래 ACD를 도입한 것만으로는, 본 반응은 진행되지 않는 것으로 추정하였다. 실제로, 상기와 같이 대장균 재조합체에 있어서 ACD 반응은 진행되지 않았다.
본 발명자들은, 이 새로운 과제를 해결하고자 미생물에 의한 메타크릴산 유도체의 생산 능력을 갖는 미생물에 대하여 널리 탐색을 행하여, 미생물로 메타크릴산을 생성할 수 있는 것, 및 또한 ACD의 기질인 이소부티릴-CoA를 대사할 수 있는 미생물을 사용함으로써 이 과제를 해결할 수 있음을 발견하였다. 이소부티릴-CoA를 대사할 수 있는 미생물이란, 발린 자화 생균 및 이소부티르산 자화 생균 등을 들 수 있다. 이 미생물은, 예를 들어 발린을 유일 탄소원 및/또는 질소원으로서, 또는 이소부티르산을 유일 탄소원으로서 생육시킴으로써, 자연계로부터 취득할 수 있다.
또한, 본 발명자들은, 상기 메타크릴산 생산 능력을 갖는 미생물에 AAT의 작용을 추가함으로써, 알코올 존재 하에서 메타크릴산에스테르가 제조 가능한 것을 발견하였다.
뿐만 아니라, 본 발명자들은, 상기 미생물 유래의 메타크릴산 합성에 관여하는 효소 및 그 효소를 코딩하는 유전자에 대하여 예의 검토한 결과, 메타크릴산 유도체의 생산에 유용한 효소가 존재하는 것을 밝히고, 그 효소 단백질을 특정하는 것에 성공하였다. 그리고, 이들 효소 단백질을 조합함으로써, 메타크릴산 유도체가 합성되는 것을 발견하였다. 이렇게 해서, 본 발명을 완성하기에 이르렀다. 즉, 본 발명은 이하와 같다.
(1) 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물을 사용하여, 메타크릴산 및/또는 그의 에스테르를 제조하는 방법.
(2) 메타크릴산 및/또는 그의 에스테르를 0.04ppm 이상 축적시키는, (1)의 제조 방법.
(3) 탄소원 및/또는 에너지원으로서의, 재생 가능 원료 및/또는 상기 재생 가능 원료의 이용으로부터 발생하는 바이오매스로부터, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물을 사용하여 메타크릴산 및/또는 그의 에스테르를 생성하는, (1) 또는 (2)의 제조 방법.
(4) 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물이, 이소부티르산 또는 발린을 포함하는 유기물로부터 메타크릴산을 생성 가능한 미생물인, (1) 내지 (3) 중 어느 하나의 제조 방법.
(5) 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물이, 서열 번호 1 내지 41에 기재된 염기 서열 중 어느 하나에 대하여 81% 이상의 동일성을 나타내는 염기 서열을 포함하는 16S rRNA 유전자를 갖는 미생물인, (1) 내지 (4) 중 어느 하나의 제조 방법.
(6) 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물이, 서열 번호 42 내지 49에 기재된 염기 서열 중 어느 하나에 대하여 81% 이상의 동일성을 나타내는 염기 서열을 포함하는 LSUrRNA 유전자를 갖는 미생물인, (1) 내지 (4) 중 어느 하나의 제조 방법.
(7) 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물이, 슈도모나스(Pseudomonas)속, 바실러스(Bacillus)속, 스핑고박테리움(Sphingobacterium)속, 코마모나스(Comamonas)속, 브레분디모나스(Brevundimonas)속, 스핑고모나스(Sphingomonas)속, 오크로박트럼(Ochrobactrum)속, 페도박터(Pedobacter)속, 패니바실러스(Paenibacillus)속, 아크로모박터(Achromobacter)속, 아시네토박터(Acinetobacter)속, 쉐와넬라(Shewanella)속, 리스토넬라(Listonella)속, 아그로박테리움(Agrobacterium)속, 메소리조비움(Mesorhizobium)속, 리조비움(Rhizobium)속, 파라코커스(Paracoccus)속, 크산토박터(Xanthobacter)속, 스트렙토마이세스(Streptomyces)속, 지오바실러스(Geobacillus)속, 로도코커스(Rhodococcus)속, 사카로마이세스(Saccharomyces)속, 칸디다(Candida)속 또는 아스퍼질러스(Aspergillus)속에 속하는 미생물인, (1) 내지 (6) 중 어느 하나의 제조 방법.
(8) AAT의 존재 하, 메타크릴릴-CoA에 알코올 또는 페놀류를 작용시켜서, 메타크릴산에스테르를 제조하는, (1) 내지 (7) 중 어느 하나의 제조 방법.
(9) AAT가 식물 유래인, (8)의 제조 방법.
(10) (7)의 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물.
(11) (10)의 미생물 유래의 메타크릴산 합성에 관여하는 효소.
(12) (11)의 효소를 코딩하는 유전자.
(13) 탄소원 및/또는 에너지원으로서의, 재생 가능 원료 및/또는 상기 재생 가능 원료의 이용으로부터 발생하는 바이오매스로부터, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물에 의해 생산된 메타크릴산 및/또는 그의 에스테르.
(14) 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물과, 메타크릴산 및/또는 그의 에스테르를 함유하는 상기 미생물의 배양물.
(15) 이하의 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군에서 선택되는 단백질을 포함하는, (11)에 기재된 효소.
(a) 서열 번호 50 또는 52에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 단백질.
(b) 서열 번호 50 또는 52에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 45% 이상의 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 ACD 활성을 갖는 단백질.
(c) 서열 번호 50 또는 52에 나타내는 아미노산 서열에 있어서 하나 또는 수개의 아미노산이 결실, 치환 및 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하고, 또한 ACD 활성을 갖는 단백질.
(16) (15)의 효소를 사용하는 것을 포함하는 메타크릴산 및/또는 그의 에스테르의 제조 방법.
(17) 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물이, 스핑고박테리움(Sphingobacterium)속, 코마모나스(Comamonas)속, 브레분디모나스(Brevundimonas)속, 스핑고모나스(Sphingomonas)속, 오크로박트럼(Ochrobactrum)속, 페도박터(Pedobacter)속, 패니바실러스(Paenibacillus)속, 아크로모박터(Achromobacter)속, 아시네토박터(Acinetobacter)속, 쉐와넬라(Shewanella)속, 리스토넬라(Listonella)속, 아그로박테리움(Agrobacterium)속, 메소리조비움(Mesorhizobium)속, 파라코커스(Paracoccus)속, 크산토박터(Xanthobacter)속, 지오바실러스(Geobacillus)속, 로도코커스(Rhodococcus)속 또는 칸디다(Candida)속에 속하는 미생물인, (1) 내지 (7) 중 어느 하나의 제조 방법.
또한, 본 발명자들은, AAT가 메타크릴산에스테르를 합성할 수 있는 활성을 갖는 것을 발견하였다. 즉, 본 발명은 다른 일측면에 있어서 이하와 같다.
(1A) AAT의 존재 하, 메타크릴릴-CoA에 알코올 또는 페놀류를 작용시켜서, 메타크릴산에스테르를 합성하는 공정을 포함하는 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
(2A) 메타크릴산에스테르를 0.001mM 이상 축적시키는, (1A)의 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
(3A) 이소부티릴-CoA 또는 3-히드록시이소부티릴-CoA로부터 메타크릴릴-CoA를 제조하는 공정을 더 포함하는, (1A) 또는 (2A)의 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
(4A) 이소부티릴-CoA가 2-옥소이소발레르산으로부터 제조되는 것을 특징으로 하는, (3A)의 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
(5A) AAT가 식물 유래인, (1A) 내지 (4A) 중 어느 한 항에 기재된 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
(6A) 식물이, 생강(Zingiberales)목, 장미(Rosales)목, 철쭉(Ericales)목, 박(Cucurbitales)목, 유채(Brassicales)목 및 녹나무(Laurales)목으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나의 목에 속하는 것인, (5A)의 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
(7A) 식물이, 파초(Musa)과, 장미(Rosales)과, 철쭉(Ericales)과, 다래나무(Actinidia)과, 박(Cucurbitales)과, 파파야(Carica)과 및 녹나무(Laurales)과로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나의 과에 속하는 것인, (5A)의 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
(8A) 식물이, 파초(Musa)속, 네덜란드 딸기(Fragaria)속, 사과(Malus)속, 살구(Armeniaca)속, 배나무(Pyrus)속, 산앵도나무(Vaccinium)속, 다래나무(Actinidia)속, 오이(Cucumis)속, 파파야(Carica)속 및 페르세아(Persea)속으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나의 속에 속하는 것인, (5A)의 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
(9A) 식물이, 바나나, 딸기, 사과, 매실, 서양배, 블루베리, 키위, 멜론, 파파야 및 아보카도로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나인, (5A)의 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
(10A) AAT를 발현하도록 유전자 도입된 유전자 조작 미생물을 사용하는, (1A) 내지 (9A) 중 어느 한 항에 기재된 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
(11A) 식물이, 파초속, 사과속, 벚꽃속, 배속, 산앵도나무속, 다래나무속, 오이속, 파파야속 또는 페르세아속에 속하는 식물에서 선택되는 어느 하나인, (5A)의 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
(12A) 식물이, 파초속, 사과속, 배속, 다래나무속, 오이속, 파파야속 또는 페르세아속에 속하는 식물에서 선택되는 어느 하나인, (5A)의 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
(13A) 식물이, 바나나, 사과, 매실, 서양배, 블루베리, 키위, 멜론, 파파야 및 아보카도로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나인, (5A)의 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
(14A) 식물이, 바나나, 사과, 서양배, 키위, 멜론, 파파야 및 아보카도로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나인, (5A)의 메타크릴산에스테르의 제조 방법.
또한, 본 발명자들은, 미생물 유래의, ACD의 기능을 갖는 특정한 단백질이, 고효율로 이소부티릴-CoA를 메타크릴릴-CoA로 변환하는 능력이 있음을 발견하였다. 또한, 1) 이소부티릴-CoA를 생성하는 효소인 BCKAD를 조합함으로써, 2-옥소이소발레르산으로부터 메타크릴릴-CoA가 합성되는 것, 2) AAT와 조합함으로써, 이소부티릴-CoA로부터 메타크릴산에스테르가 합성되는 것, 3) 메타크릴릴-CoA 가수 분해 활성을 갖는 효소와 조합함으로써, 이소부티릴-CoA로부터 메타크릴산이 합성되는 것을 발견하였다. 즉, 본 발명은 한층더 다른 일측면에 있어서 이하와 같다.
(1B) 하기 (a) 내지 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는 ACD 유전자가 도입된 형질전환체.
(a) 서열 번호 50 또는 52로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 코딩하는 유전자,
(b) 서열 번호 51 또는 53으로 나타내는 염기 서열을 포함하는 유전자,
(c) 서열 번호 50 또는 52로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 45% 이상의 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 ACD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자 및
(d) 서열 번호 50 또는 52로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 하나 또는 수개의 아미노산이 결실, 치환, 부가 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하고, ACD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
(2B) ACD 유전자 외에도, 또한 BCKAD 복합체 유전자가 도입된, (1B)의 형질전환체.
(3B) BCKAD 복합체 유전자가, 하기 (e) 내지 (h)로 이루어지는 군에서 선택되는 유전자인, (2B)의 형질전환체.
(e) 서열 번호 54, 56, 58 및 60으로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 4개의 폴리펩티드를 코딩하는 유전자.
(f) 서열 번호 55, 57, 59 및 61로 나타내는 염기 서열을 포함하는 유전자.
(g) 서열 번호 54, 56, 58 및 60으로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 4개의 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 상보쇄와 엄격한 조건에서 혼성화하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
(h) 서열 번호 54, 56, 58 및 60으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 하나 또는 수개의 아미노산이 결실, 치환, 부가 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
(4B) BCKAD 복합체 유전자가, 하기 (i) 내지 (l)로 이루어지는 군에서 선택되는 유전자인, (2B)의 형질전환체.
(i) 서열 번호 62, 64, 66 및 68로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 4개의 폴리펩티드를 코딩하는 유전자.
(j) 서열 번호 63, 65, 67 및 69로 나타내는 염기 서열을 포함하는 유전자.
(k) 서열 번호 62, 64, 66 및 68로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 4개의 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 상보쇄와 엄격한 조건에서 혼성화하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
(l) 서열 번호 62, 64, 66 및 68로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 하나 또는 수개의 아미노산이 결실, 치환, 부가 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
(5B) BCKAD 복합체 유전자가, 하기 (m) 내지 (p)로 이루어지는 군에서 선택되는 유전자인, (2B)의 형질전환체.
(m) 서열 번호 70, 72 및 74로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 3개의 폴리펩티드를 코딩하는 유전자.
(n) 서열 번호 71, 73 및 75로 나타내는 염기 서열을 포함하는 유전자.
(o) 서열 번호 70, 72 및 74로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 3개의 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 상보쇄와 엄격한 조건에서 혼성화하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
(p) 서열 번호 70, 72 및 74로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 하나 또는 수개의 아미노산이 결실, 치환, 부가 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
(6B) 형질전환체가, 글루코오스로부터 2-옥소이소발레르산의 대사 경로를 갖는 숙주에 유전자 도입된 것인, (1B) 내지 (5B) 중 어느 하나의 형질전환체.
(7B) 또한 AAT 활성을 갖는 효소 유전자가 도입된, (1B) 내지 (6B) 중 어느 하나의 형질전환체.
(8B) 또한 메타크릴릴-CoA를 가수 분해하는 활성을 갖는 효소 유전자가 도입된, (1B) 내지 (7B) 중 어느 하나의 형질전환체.
(9B) (1B)의 형질전환체를 사용하여, ACD 활성을 갖는 단백질을 발현시키고, 이것을 사용하는 것을 포함하는 메타크릴릴-CoA의 제조 방법.
(10B) (2B) 내지 (5B) 중 어느 하나의 형질전환체를 사용하여, ACD 활성과 이소발레르산 탈수소 효소 활성을 갖는 단백질을 발현시키고, 이들을 사용하는 것을 포함하는 메타크릴릴-CoA의 제조 방법.
(11B) (1B)의 (a) 내지 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는 ACD 유전자를 숙주에 도입하고, 상기 숙주와 동일 또는 상이한 숙주에, (3B) 내지 (5B)의 (e) 내지 (h), (i) 내지 (l) 및 (m) 내지 (p)로 이루어지는 군에서 선택되는 BCKAD 복합체 유전자를 도입하여, ACD 활성과 이소발레르산 탈수소 효소 활성을 갖는 단백질을 발현시키고, 이들을 사용하는 것을 포함하는 메타크릴릴-CoA의 제조 방법.
이하에, 본 발명에서의 용어에 대하여 설명한다.
「메타크릴산」 (IUPAC명: 2-메틸-2-프로펜산)은 화학식 CH2=C(CH3)COOH를 갖는 화합물을 의미하고, 그의 임의의 염 또는 이온화한 형태도 포함한다. 메타크릴산의 염으로서는, 예를 들어 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염 및 마그네슘염 등을 들 수 있다.
「메타크릴산에스테르」란, 식 1로 나타내는 화합물이다. 식 1에서, R은 직쇄 또는 분지의 탄소수 1 내지 20의 탄화수소기를 나타낸다. 탄화수소기는, 포화 또는 불포화의 비환식이어도 되고, 포화 또는 불포화의 환식이어도 된다. 바람직하게는 직쇄 또는 분지쇄의 탄소수 1 내지 10의 비치환 알킬기, 아르알킬기 또는 아릴기이다. 특히 바람직하게는 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 이소프로필기, n-부틸기, 이소부틸기, sec-부틸기, tert-부틸기, n-펜틸기, 이소펜틸기, tert-펜틸기, n-헥실기, 이소헥실기, 2-헥실기, 디메틸부틸기, 에틸부틸기, 헵틸기, 옥틸기 및 2-에틸헥실기의 탄소수 1 내지 8의 알킬기, 벤질기 또는 페닐기이다.
CH2=C(CH3)COO-R (식 1)
「메타크릴산 유도체」란, 상술한 메타크릴산 및 메타크릴산에스테르 외에도, 메타크릴로일기(CH2=CCH3COO-)를 포함하는 화합물의 총칭이다. 메타크릴로일기를 포함하는 화합물로서는, 메타크릴릴-CoA를 들 수 있다.
「메타크릴산 생성 능력」이란, 재생 가능 원료를 탄소원 및/또는 에너지원으로 하여 메타크릴산을 생성하는 능력을 의미한다. 「생성」이란, 생체에서의 메타크릴산의 합성과 분해의 총합(즉 밸런스)을 말하는 것이며, 합성에 한정되는 것은 아니다.
「재생 가능 원료」란, 천연 자원, 예를 들어 동물, 식물 또는 미생물 유래의 자원이며, 이 자원은 자연의 프로세스에 의해, 인간 등의 이용 속도 이상으로 재구축될 수 있는 것이다. 이 자원은, 이것이 소비되는 것과 동일한 정도의 속도로 그 자체 재생이 가능해야만 한다. 예를 들어, 식물성 물질은, 천연의 재료원에 두드러진 감소를 초래할 정도로 식물성 물질을 소비하지 않고 재배할 수 있다는 이점을 갖는다.
「바이오매스」란, 재생 가능한, 생물 유래의 유기성 에너지 등으로서 이용할 수 있는 자원 전반을 의미한다. 바이오매스에는, 식물성 재료, 동물성 재료 및 생분해성 폐기물 등이 포함된다.
「탄소원」이란, 미생물이 동화 가능하고, 새로운 세포를 만들어 내는데 사용할 수 있는 유기 화합물을 의미한다.
「에너지원」이란, 탄소원이 대사 중간체를 거쳐서 세포 구성 성분에 동화되기 위해 필요한 에너지 분자(ATP)를 생성하기 위한 화합물 전반을 의미한다. 미생물이, ATP를 생성하기 위한 대사, 즉 이화의 과정에 필요한 에너지원을 다양한 화합물의 산화 반응에서 구하는 경우, 이들 화합물은 「에너지원」이 된다.
「재생 가능 원료의 이용」이란, 재생 가능 원료로부터 연료 성분 및 각종 유기물 등을 얻기 위한, 가스화, 액화, 당화, 효소 처리, 발효, 발효 산물 증류, 가수 분해, 탈수, 농축 및 건조 등의 각종 처리 공정을 적어도 1개 포함하는, 재생 가능 원료의 통합적 이용 방법을 의미한다.
「미생물」이란, 일반적 정의에 따라서, 모든 종류의 세균, 고세균, 남조 등의 원핵생물, 효모, 사상균, 점균, 원생생물 등의 진핵생물 및 바이러스 등을 의미하고, 나아가 동물 및 식물의 분화되지 않은 세포, 및 조직 배양물도 포함된다. 본 발명에서의 「미생물」은, 특히 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물을 의미한다. 또한, 메타크릴산 생성 능력을 포함하는 것으로서, 배양물, 배지(배양물로부터 균체를 제거한 것), 균체(배양 균체 및 세정 균체 모두 포함함), 균체를 파쇄 또는 용균시킨 균체 처리물, 상기 배지 및/또는 세포를 정제 처리함으로써 얻어지는 메타크릴산 생성 활성을 갖는 조성물(조 효소액, 정제 효소) 등도 포함하는 개념으로서도 사용한다.
「유도주」란, 일반적으로, 어떤 미생물주로부터 천연으로 또는 화학적 또는 물리적 처리에 의해 유도되는 균주이다. 본 발명에서는 특히, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물주로부터 유도되어, 여전히 재생 가능 원료를 탄소원 및/또는 에너지원으로 하여 메타크릴산을 생성하는 능력을 유지하는 균주를 의미한다.
「접촉」이란, 미생물과 물질(재생 가능 원료)을 일정 시간 폭로 처리하는 것을 의미한다. 구체적으로는, 재생 가능 원료를 포함하는 수성 매체에 미생물을 첨가하여, 현탁 혼합하는 것을 의미한다. 그때, 미생물의 증식이 있어도 상관없다.
「수성 매체」란, 물, 또는 물을 주성분으로 하는 수용액 및 겔(한천)을 가리키며, 용해하지 않은 액체·고체가 분산된 것도 포함한다.
「기상」이란, 배양조(미생물을 배양하는 용기) 또는 반응조(반응을 행하는 용기)에 있어서 액체(배지 등)가 차지하는 부분을 제외한 기체나 수증기 등이 차지하는 부분을 말한다.
「배양」이란, 미생물 또는 다세포 생물의 세포를 인공적인 환경 하에서 증식시키는 것을 의미한다.
「배양물」이란, 균체, 배양액, 무세포 추출액, 세포막 등의 배양에 의해 얻어지는 것을 의미한다. 무세포 추출액은, 배양 후의 균체를, 예를 들어 인산나트륨 완충액을 가하여 호모게나이저 등으로 물리적으로 파쇄한 후, 원심(15,000rpm, 10min, 4℃)하여, 미파쇄 균이나 세포막이 제거된 상청을 회수함으로써 얻을 수 있다.
「에스테르화」란, 알코올과 지방산으로부터 탈수에 의해 에스테르를 생성하는 반응을 말한다. 또한, 다른 알코올과의 알코올 교환 반응에 의해 새로운 에스테르를 생성하는 경우의 에스테르나, 다가 알코올의 부분 에스테르를 생성하는 반응을 포함한다.
본 발명에 의해, 탄소원 및/또는 에너지원으로서의, 재생 가능 원료 및/또는 해당 재생 가능 원료의 이용으로부터 발생하는 바이오매스로부터, 직접 단일 공정으로 효율적으로 메타크릴산을 생산하는 방법이 제공된다.
도 1은 2-옥소이소발레르산으로부터 메타크릴산에스테르로의 제조 공정을 도시하는 도면이다.
도 2는 메타크릴 생산균의 배양액 내에 생산된 메타크릴산의 CG/MS 분석 결과를 나타내는 토탈 이온 크로마토그래프이다(실시예 2).
도 3은 메타크릴 생산균의 배양액 내에 생산된 메타크릴산의 CG/MS 분석 결과를 나타내는 매스 스펙트럼이다(실시예 2).
도 4는 LigD 호몰로그 유전자 결실용 플라스미드의 구조를 도시하는 도면이다.
도 5는 인 퓨전(In Fusion)법을 사용한 유전자 결실용 플라스미드의 제작 방법을 설명하는 도면이다.
도 6은 ACD-AAT 양쪽 발현용 플라스미드의 구조를 도시하는 도면이다.
도 7은 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동에 의한 재조합 단백질의 발현을 도시하는 도면이다. 화살표는 목적 단백질의 위치를 나타낸다. (A) 숙주를 대장균 JM109로 하고, 벡터로서 pTrc99A를 사용한, 표기의 유전자가 도입된 재조합체의 세포 추출액. (B) 숙주를 대장균 BL21(DE3)로 하고, 벡터로서 pET19b를 사용한, 표기의 유전자가 도입된 재조합체의 세포 추출액. (C) acdH 유전자가 도입된 재조합체의 세포 추출액.
도 2는 메타크릴 생산균의 배양액 내에 생산된 메타크릴산의 CG/MS 분석 결과를 나타내는 토탈 이온 크로마토그래프이다(실시예 2).
도 3은 메타크릴 생산균의 배양액 내에 생산된 메타크릴산의 CG/MS 분석 결과를 나타내는 매스 스펙트럼이다(실시예 2).
도 4는 LigD 호몰로그 유전자 결실용 플라스미드의 구조를 도시하는 도면이다.
도 5는 인 퓨전(In Fusion)법을 사용한 유전자 결실용 플라스미드의 제작 방법을 설명하는 도면이다.
도 6은 ACD-AAT 양쪽 발현용 플라스미드의 구조를 도시하는 도면이다.
도 7은 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동에 의한 재조합 단백질의 발현을 도시하는 도면이다. 화살표는 목적 단백질의 위치를 나타낸다. (A) 숙주를 대장균 JM109로 하고, 벡터로서 pTrc99A를 사용한, 표기의 유전자가 도입된 재조합체의 세포 추출액. (B) 숙주를 대장균 BL21(DE3)로 하고, 벡터로서 pET19b를 사용한, 표기의 유전자가 도입된 재조합체의 세포 추출액. (C) acdH 유전자가 도입된 재조합체의 세포 추출액.
이하, 본 발명을 실시하기 위한 적합한 형태에 대하여 설명한다. 또한, 이하에 설명하는 실시 형태는, 본 발명의 대표적인 실시 형태의 일례를 나타낸 것이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 좁게 해석되지는 않는다.
1. 메타크릴산 및/또는 그의 에스테르의 제조 방법
본 발명에 따른 메타크릴산 및/또는 그의 에스테르의 제조 방법(이하, 간단히 「메타크릴산의 제조 방법」이라고도 함)에서는, 탄소원 및/또는 에너지원으로서의, 재생 가능 원료 및/또는 해당 재생 가능 원료의 이용으로부터 발생하는 바이오매스로부터, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물을 사용하여 메타크릴산을 제조한다. 구체적으로는, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물을 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스와 접촉시키는 공정에 의해 메타크릴산을 제조한다. 보다 구체적으로는, 상기 미생물을 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 포함하는 수성 매체 중에서 배양함으로써 수성 매체 중에 메타크릴산을 얻는다.
(1) 미생물
본 발명에 따른 메타크릴산의 제조 방법에서 사용하는 미생물에는, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물이라면 특별히 한정되지 않는다. 미생물에는, 예를 들어 이하와 같은 미생물을 이용할 수 있다. 미생물에는, 이하의 미생물에서 선택되는 1종을 단독으로, 또는 2종 이상을 조합하여 사용할 수 있다.
[원핵생물의 바람직한 목]
본 발명에 적합한 원핵미생물로서, 구체적인 것으로서, 예를 들어 로도스피릴룸목(Rhodospirillales), 로도박터목(Rhodobacterales), 스핑고모나스목(Sphingomonadales), 카울로박터목(Caulobacterales), 리조비움목(Rhizobiales), 파르불라르쿨라목(Parvularculales), 버크홀데리아목(Burkholderiales), 히드로게노필러스목(Hydrogenophilales), 네이세리아목(Neisseriales), 니트로소모나스목(Nitrosomonadales), 로도사이클러스목(Rhodocyclales), 크로마티움목(Chromatiales), 아디시티오바실러스목(Acidithiobacillales), 크산토모나스목(Xanthomonadales), 티오트릭스목(Thiotrichales), 오세아노스피릴룸목(Oceanospirillales), 슈도모나스목(Pseudomonadales), 알테로모나스목(Alteromonadales), 비브리오목(Vibrionales), 애로모나스목(Aeromonadales), 살리니스패라목(Salinisphaerales), 레지오넬라목(Legionellales), 데술포박터목(Desulfobacterales), 데술파르쿨러스목(Desulfarculales), 데술프로모나스목(Desulfuromonadales), 신트로포박터목(Syntrophobacterales), 델로비브리오목(Bdellovibrionales), 믹소코커스목(Myxococcales), 아시도박테리움목(Acidobacteriales), 악티노박테리아목(Actinomycetales), 비피도박테리움목(Bifidobacteriales), 루브로박터목(Rubrobacterales), 솔리루브로박터목(Solirubrobacterales), 바실러스목(Bacillales), 락토바실러스목(Lactobacillales), 클로스트리듐목(Clostridiales), 써모아내로박터목(Thermoanaerobacterales), 나트라내로비우스목(Natranaerobiales), 스핑고박테리아목(Sphingobacteriales), 박테로이데스목(Bacteroidales), 사이토파가목(Cytophagales), 플라보박테리움목(Flavobacteriales), 데이노코커스목(Deinococcales), 써무스목(Thermales), 겜마티모나스목(Gemmatimonadales), 푸소박테리아목(Fusobacteriales), 클로로플렉사스목(Chloroflexales), 헤르페토시폰목(Herpetosiphonales), 써모미크로비아목(Thermomicrobiales), 써모토가목(Thermotogales), 데페리박터목(Deferribacterales), 술폴로버스목(Sulfolobales), 데술푸로코커스목(Desulfurococcales), 써모프로테우스목(Thermoproteales), 아시딜로버스목(Acidilobales), 할로박테리움목(Halobacteriales), 써모플라즈마목(Thermoplasmatales) 및 아르캐오글로버스목(Archaeoglobales)에 속하는 미생물을 들 수 있다.
그 중에서도 바람직한 미생물은, 로도스피릴룸목(Rhodospirillales), 로도박터목(Rhodobacterales), 스핑고모나스목(Sphingomonadales), 카울로박터목(Caulobacterales), 리조비움목(Rhizobiales), 파르불라르쿨라목(Parvularculales), 버크홀데리아목(Burkholderiales), 히드로게노필러스목(Hydrogenophilales), 네이세리아목(Neisseriales), 니트로소모나스목(Nitrosomonadales), 로도사이클러스목(Rhodocyclales), 크로마티움목(Chromatiales), 크산토모나스목(Xanthomonadales), 티오트릭스목(Thiotrichales), 오세아노스피릴룸목(Oceanospirillales), 슈도모나스목(Pseudomonadales), 알테로모나스목(Alteromonadales), 비브리오목(Vibrionales), 애로모나스목(Aeromonadales), 살리니스패라목(Salinisphaerales), 레지오넬라목(Legionellales), 데술포박터목(Desulfobacterales), 데술파르쿨러스목(Desulfarculales), 데술프로모나스목(Desulfuromonadales), 신트로포박터목(Syntrophobacterales), 델로비브리오목(Bdellovibrionales), 믹소코커스목(Myxococcales), 아시도박테리움목(Acidobacteriales), 악티노박테리아목(Actinomycetales), 루브로박터목(Rubrobacterales), 솔리루브로박터목(Solirubrobacterales), 바실러스목(Bacillales), 락토바실러스목(Lactobacillales), 클로스트리듐목(Clostridiales), 써모아내로박터목(Thermoanaerobacterales), 나트라내로비우스목(Natranaerobiales), 스핑고박테리아목(Sphingobacteriales), 박테로이데스목(Bacteroidales), 사이토파가목(Cytophagales), 플라보박테리움목(Flavobacteriales), 데이노코커스목(Deinococcales), 써무스목(Thermales), 겜마티모나스목(Gemmatimonadales), 푸소박테리아목(Fusobacteriales), 클로로플렉사스목(Chloroflexales), 헤르페토시폰목(Herpetosiphonales), 써모미크로비아목(Thermomicrobiales), 써모토가목(Thermotogales), 데페리박터목(Deferribacterales), 술폴로버스목(Sulfolobales), 데술푸로코커스목(Desulfurococcales), 써모프로테우스목(Thermoproteales), 아시딜로버스목(Acidilobales), 할로박테리움목(Halobacteriales), 써모플라즈마목(Thermoplasmatales) 및 아르캐오글로버스목(Archaeoglobales)에 속하는 미생물이다.
또한 실험적으로 메타크릴산 유도체의 생성을 확인할 수 있는 특히 바람직한 미생물로서는, 로도박터목(Rhodobacterales), 스핑고모나스목(Sphingomonadales), 카울로박터목(Caulobacterales), 리조비움목(Rhizobiales), 버크홀데리아목(Burkholderiales), 슈도모나스목(Pseudomonadales), 알테로모나스목(Alteromonadales), 비브리오목(Vibrionales), 악티노박테리아목(Actinomycetales), 바실러스목(Bacillales) 및 스핑고박테리아목(Sphingobacteriales)에 속하는 미생물이다.
[원핵생물의 바람직한 과]
로도스피릴룸목(Rhodospirillales)에 속하는 것으로서는 로도스피릴룸과(Rhodospirillaceae) 및 아세토박테리아과(Acetobacteraceae), 로도박터목(Rhodobacterales)에 속하는 것으로서는 로도박터과(Rhodobacteraceae) 및 히포모나스과(Hyphomonadaceae), 스핑고모나스목(Sphingomonadales)에 속하는 것으로서는 스핑고모나스과(Sphingomonadaceae) 및 에리트로박터과(Erythrobacteraceae), 카울로박터목(Caulobacterales)에 속하는 것으로서는 카울로박터과(Caulobacteraceae), 리조비움목(Rhizobiales)에 속하는 것으로서는 리조비움과(Rhizobiaceae), 크산토박터과(Xanthobacteraceae), 브루셀라과(Brucellaceae), 필로박테리움과(Phyllobacteriaceae), 아우란티모나스과(Aurantimonadaceae), 브라디리조비움과(Bradyrhizobiaceae), 메틸로박테리움과(Methylobacteriaceae), 히포미크로비움과(Hyphomicrobiaceae), 로도비움과(Rhodobiaceae) 및 메틸로시스티스과(Methylocystaceae), 파르불라르쿨라목(Parvularculales)에 속하는 것으로서는 파르불라르쿨라과(Parvularculaceae), 버크홀데리아목(Burkholderiales)에 속하는 것으로서는 버크홀데리아과(Burkholderiaceae), 알칼리게네스과(Alcaligenaceae), 코마모나스과(Comamonadaceae) 및 옥살로박터과(Oxalobacteraceae), 히드로게노필러스목(Hydrogenophilales)에 속하는 것으로서는 히드로게노필러스과(Hydrogenophilaceae), 네이세리아목(Neisseriales)에 속하는 것으로서는 네이세리아과(Neisseriaceae), 니트로소모나스목(Nitrosomonadales)에 속하는 것으로서는 니트로소모나스과(Nitrosomonadaceae), 로도사이클러스목(Rhodocyclales)에 속하는 것으로서는 로도사이클러스과(Rhodocyclaceae), 크로마티움목(Chromatiales)에 속하는 것으로서는 크로마티움과(Chromatiaceae) 및 엑토티오로도스피라과(Ectothiorhodospiraceae), 아시디티오바실러스목(Acidithiobacillales)에 속하는 것으로서는 아시디티오바실러스과(Acidithiobacillaceae), 크산토모나스목(Xanthomonadales)에 속하는 것으로서는 크산토모나스과(Xanthomonadaceae), 티오트릭스목(Thiotrichales)에 속하는 것으로서는 프란시셀라과(Francisellaceae) 및 피스키리케티아과(Piscirickettsiaceae), 오세아노스피릴룸목(Oceanospirillales)에 속하는 것으로서는 오세아노스피릴룸과(Oceanospirillaceae), 하헬라과(Hahellaceae), 할로모나스과(Halomonadaceae) 및 알카니보락스과(Alcanivoracaceae), 슈도모나스목(Pseudomonadales)에 속하는 것으로서는 슈도모나스과(Pseudomonadaceae) 및 모락셀라과(Moraxellaceae), 알테로모나스목(Alteromonadales)에 속하는 것으로서는 알테로모나스과(Alteromonadaceae), 쉐와넬라과(Shewanellaceae), 페리모나스과(Ferrimonadaceae), 이디오마리나과(Idiomarinaceae), 콜웰리아과(Colwelliaceae) 및 슈도알테로모나스과(Pseudoalteromonadaceae), 비브리오목(Vibrionales)에 속하는 것으로서는 비브리오과(Vibrionaceae), 애로모나스목(Aeromonadales)에 속하는 것으로서는 애로모나스과(Aeromonadaceae), 살리니스패라목(Salinisphaerales)에 속하는 것으로서는 살리니스패라과(Salinisphaeraceae), 레지오넬라목(Legionellales)에 속하는 것으로서는 레지오넬라과(Legionellaceae) 및 콕시엘라과(Coxiellaceae), 데술포박터목(Desulfobacterales)에 속하는 것으로서는 데술포불부스과(Desulfobulbaceae), 데술파르쿨러스목(Desulfarculales)에 속하는 것으로서는 데술파르쿨러스과(Desulfarculaceae), 데술프로모나스목(Desulfuromonadales)에 속하는 것으로서는 지오박터과(Geobacteraceae), 신트로포박터목(Syntrophobacterales)에 속하는 것으로서는 신트로포박터과(Syntrophobacteraceae) 및 신트로퍼스과(Syntrophaceae), 델로비브리오목(Bdellovibrionales)에 속하는 것으로서는 델로비브리오과(Bdellovibrionaceae) 및 박테리오보락스과(Bacteriovoracaceae), 믹소코커스목(Myxococcales)에 속하는 것으로서는 시스토박터과(Cystobacteraceae), 믹소코커스과(Myxococcaceae), 폴리앙기움과(Polyangiaceae) 및 코플레리아과(Kofleriaceae), 아시도박테리움목(Acidobacteriales)에 속하는 것으로서는 아시도박테리움과(Acidobacteriaceae), 아시디미크로비움목(Acidimicrobiales)에 속하는 것으로서는 아시디미크로비움과(Acidimicrobiaceae), 악티노박테리아목(Actinomycetales)에 속하는 것으로서는 스트렙토스포랑기움과(Streptosporangiaceae), 노카르디옵시스과(Nocardiopsaceae), 써모모노스포라과(Thermomonosporaceae), 슈도노카르디아과(Pseudonocardiaceae), 악티노신네마과(Actinosynnemataceae), 미크로모노스포라과(Micromonosporaceae), 악티노폴리스포라과(Actinopolysporaceae), 프로피오니박테리움과(Propionibacteriaceae), 노카르디오이데스과(Nocardioidaceae), 코리네박테리움과(Corynebacteriaceae), 노카르디아과(Nocardiaceae), 고르도니아과(Gordoniaceae), 디에치아과(Dietziaceae), 마이코박테리움과(Mycobacteriaceae), 츠카무렐라과(Tsukamurellaceae), 세그닐리파러스과(Segniliparaceae), 미크로박테리움과(Microbacteriaceae), 미크로코커스과(Micrococcaceae), 데르마박터과(Dermabacteraceae), 데르마토필러스과(Dermatophilaceae), 브레비박테리움과(Brevibacteriaceae), 셀룰로모나스과(Cellulomonadaceae), 인트라스포랑기움과(Intrasporangiaceae), 조네시아과(Jonesiaceae), 라로박터과(Rarobacteraceae), 프랑키아과(Frankiaceae), 아시도써무스과(Acidothermaceae), 나카무렐라(Nakamurellaceae), 크립토스포랑기움과(Cryptosporangiaceae), 지오데르마토필러스과(Geodermatophilaceae), 글리코마이세스과(Glycomycetaceae), 악티노마이세스과(Actinomycetaceae), 스트렙토마이세스과(Streptomycetaceae), 카테눌리스포라과(Catenulisporaceae) 및 키네오스포리아과(Kineosporiaceae), 비피도박테리움목(Bifidobacteriales)에 속하는 것으로서는 비피도박테리움과(Bifidobacteriaceae), 루브로박터목(Rubrobacterales)에 속하는 것으로서는 루브로박터과(Rubrobacteraceae), 솔리루브로박터목(Solirubrobacterales)에 속하는 것으로서는 코넥시박터과(Conexibacteraceae), 바실러스목(Bacillales)에 속하는 것으로서는 바실러스과(Bacillaceae), 알리사이클로바실러스과(Alicyclobacillaceae), 패니바실러스과(Paenibacillaceae), 플라노코커스과(Planococcaceae), 스포로락토바실러스과(Sporolactobacillaceae) 및 써모악티노마이세스과(Thermoactinomycetaceae), 락토바실러스목(Lactobacillales)에 속하는 것으로서는 락토바실러스과(Lactobacillaceae), 류코노스톡과(Leuconostocaceae), 애로코커스과(Aerococcaceae), 카르노박테리움과(Carnobacteriaceae) 및 스트렙토코커스과(Streptococcaceae), 클로스트리듐목(Clostridiales)에 속하는 것으로서는 클로스트리듐과(Clostridiaceae), 신트로포모나스과(Syntrophomonadaceae), 유박테리움과(Eubacteriaceae), 펩토코커스과(Peptococcaceae), 펩토스트렙토코커스과(Peptostreptococcaceae), 라크노스피라과(Lachnospiraceae) 및 오실로스피라과(Oscillospiraceae), 써모아내로박터목(Thermoanaerobacterales)에 속하는 것으로서는 써모아내로박터과(Thermoanaerobacteraceae), 나트라내로비우스목(Natranaerobiales)에 속하는 것으로서는 나트라내로비우스과(Natranaerobiaceae), 스핑고박테리아목(Sphingobacteriales)에 속하는 것으로서는 스핑고박테리움과(Sphingobacteriaceae) 및 사프로스피라과(Saprospiraceae), 박테로이데스목(Bacteroidales)에 속하는 것으로서는 박테로이데스과(Bacteroidaceae), 마리닐라빌리아과(Marinilabiliaceae), 프레보텔라과(Prevotellaceae) 및 포르피로모나스과(Porphyromonadaceae), 사이토파가목(Cytophagales)에 속하는 것으로서는 사이토파가과(Cytophagaceae) 및 플라메오비르가과(Flammeovirgaceae), 플라보박테리움목(Flavobacteriales)에 속하는 것으로서는 플라보박테리움과(Flavobacteriaceae), 데이노코커스목(Deinococcales)에 속하는 것으로서는 데이노코커스과(Deinococcaceae), 써무스목(Thermales)에 속하는 것으로서는 써무스과(Thermaceae), 겜마티모나스목(Gemmatimonadales)에 속하는 것으로서는 겜마티모나스과(Gemmatimonadaceae), 푸소박테리아목(Fusobacteriales)에 속하는 것으로서는 푸소박테리아과(Fusobacteriaceae), 클로로플렉사스목(Chloroflexales)에 속하는 것으로서는 클로로플렉사스과(Chloroflexaceae), 헤르페토시폰목(Herpetosiphonales)에 속하는 것으로서는 헤르페토시폰과(Herpetosiphonaceae), 써모미크로비아목(Thermomicrobiales)에 속하는 것으로서는 써모미크로비아과(Thermomicrobiaceae), 써모토가목(Thermotogales)에 속하는 것으로서는 써모토가과(Thermotogaceae), 데페리박터목(Deferribacterales)에 속하는 것으로서는 데페리박터과(Deferribacteraceae), 술폴로버스목(Sulfolobales)에 속하는 것으로서는 술폴로버스과(Sulfolobaceae), 데술푸로코커스목(Desulfurococcales)에 속하는 것으로서는 데술푸로코커스과(Desulfurococcaceae), 써모프로테우스목(Thermoproteales)에 속하는 것으로서는 써모프로테우스과(Thermoproteaceae), 아시딜로버스목(Acidilobales)에 속하는 것으로서는 아시딜로버스과(Acidilobaceae), 할로박테리움목(Halobacteriales)에 속하는 것으로서는 할로박테리움과(Halobacteriaceae), 써모플라즈마목(Thermoplasmatales)에 속하는 것으로서는 써모플라즈마과(Thermoplasmataceae), 피크로필러스과(Picrophilaceae) 및 페로플라즈마과(Ferroplasmaceae), 아르캐오글로버스목(Archaeoglobales)에 속하는 것으로서는 아르캐오글로버스과(Archaeoglobaceae)를 들 수 있다.
그 중에서도 바람직한 미생물은, 로도스피릴룸과(Rhodospirillaceae), 아세토박터과(Acetobacteraceae), 로도박터과(Rhodobacteraceae), 히포모나스과(Hyphomonadaceae), 스핑고모나스과(Sphingomonadaceae), 에리트로박터과(Erythrobacteraceae), 카울로박터과(Caulobacteraceae), 리조비움과(Rhizobiaceae), 크산토박터과(Xanthobacteraceae), 브루셀라과(Brucellaceae), 필로박테리움과(Phyllobacteriaceae), 아우란티모나스과(Aurantimonadaceae), 브라디리조비움과(Bradyrhizobiaceae), 메틸로박테리움과(Methylobacteriaceae), 히포미크로비움과(Hyphomicrobiaceae), 로도비움과(Rhodobiaceae), 메틸로시스티스과(Methylocystaceae), 파르불라르쿨라과(Parvularculaceae), 버크홀데리아과(Burkholderiaceae), 알칼리게네스과(Alcaligenaceae), 코마모나스과(Comamonadaceae), 옥살로박터과(Oxalobacteraceae), 네이세리아과(Neisseriaceae), 니트로소모나스과(Nitrosomonadaceae), 로도사이클러스과(Rhodocyclaceae), 크로마티움과(Chromatiaceae), 엑토티오로도스피라과(Ectothiorhodospiraceae), 크산토모나스과(Xanthomonadaceae), 프란시셀라과(Francisellaceae), 피스키리케티아과(Piscirickettsiaceae), 오세아노스피릴룸과(Oceanospirillaceae), 하헬라과(Hahellaceae), 할로모나스과(Halomonadaceae), 알카니보락스과(Alcanivoracaceae), 슈도모나스과(Pseudomonadaceae), 모락셀라과(Moraxellaceae), 알테로모나스과(Alteromonadaceae), 쉐와넬라과(Shewanellaceae), 페리모나스과(Ferrimonadaceae), 이디오마리나과(Idiomarinaceae), 콜웰리아과(Colwelliaceae), 슈도알테로모나스과(Pseudoalteromonadaceae), 비브리오과(Vibrionaceae), 애로모나스과(Aeromonadaceae), 살리니스패라과(Salinisphaeraceae), 레지오넬라과(Legionellaceae), 콕시엘라과(Coxiellaceae), 데술포불부스과(Desulfobulbaceae), 데술파르쿨러스과(Desulfarculaceae), 지오박터과(Geobacteraceae), 신트로포박터과(Syntrophobacteraceae), 신트로퍼스과(Syntrophaceae), 델로비브리오과(Bdellovibrionaceae), 박테리오보락스과(Bacteriovoracaceae), 시스토박터과(Cystobacteraceae), 믹소코커스과(Myxococcaceae), 폴리앙기움과(Polyangiaceae), 코플레리아과(Kofleriaceae), 아시도박테리움과(Acidobacteriaceae), 아시디미크로비움과(Acidimicrobiaceae), 스트렙토스포랑기움과(Streptosporangiaceae), 노카르디옵시스과(Nocardiopsaceae), 써모모노스포라과(Thermomonosporaceae), 슈도노카르디아과(Pseudonocardiaceae), 악티노신네마과(Actinosynnemataceae), 미크로모노스포라과(Micromonosporaceae), 노카르디오이데스과(Nocardioidaceae), 코리네박테리움과(Corynebacteriaceae), 노카르디아과(Nocardiaceae), 고르도니아과(Gordoniaceae), 디에치아과(Dietziaceae), 마이코박테리움과(Mycobacteriaceae), 츠카무렐라과(Tsukamurellaceae), 세그닐리파러스과(Segniliparaceae), 미크로박테리움과(Microbacteriaceae), 미크로코커스과(Micrococcaceae), 데르마박터과(Dermabacteraceae), 셀룰로모나스과(Cellulomonadaceae), 인트라스포랑기움과(Intrasporangiaceae), 프랑키아과(Frankiaceae), 아시도써무스과(Acidothermaceae), 나카무렐라(Nakamurellaceae), 지오데르마토필러스과(Geodermatophilaceae), 글리코마이세스과(Glycomycetaceae), 스트렙토마이세스과(Streptomycetaceae), 카테눌리스포라과(Catenulisporaceae), 루브로박터과(Rubrobacteraceae), 코넥시박터과(Conexibacteraceae), 바실러스과(Bacillaceae), 알리사이클로바실러스과(Alicyclobacillaceae), 패니바실러스과(Paenibacillaceae), 락토바실러스과(Lactobacillaceae), 카르노박테리움과(Carnobacteriaceae), 클로스트리듐과(Clostridiaceae), 신트로포모나스과(Syntrophomonadaceae), 유박테리움과(Eubacteriaceae), 펩토코커스과(Peptococcaceae), 라크노스피라과(Lachnospiraceae), 오실로스피라과(Oscillospiraceae), 써모아내로박터과(Thermoanaerobacteraceae), 나트라내로비우스과(Natranaerobiaceae), 스핑고박테리움과(Sphingobacteriaceae), 사프로스피라과(Saprospiraceae), 포르피로모나스과(Porphyromonadaceae), 사이토파가과(Cytophagaceae), 플라보박테리움과(Flavobacteriaceae), 데이노코커스과(Deinococcaceae), 써무스과(Thermaceae), 겜마티모나스과(Gemmatimonadaceae), 푸소박테리아과(Fusobacteriaceae), 클로로플렉사스과(Chloroflexaceae), 헤르페토시폰과(Herpetosiphonaceae), 써모미크로비아과(Thermomicrobiaceae), 써모토가과(Thermotogaceae), 데페리박터과(Deferribacteraceae), 술폴로버스과(Sulfolobaceae), 데술푸로코커스과(Desulfurococcaceae), 써모프로테우스과(Thermoproteaceae), 아시딜로버스과(Acidilobaceae), 할로박테리움과(Halobacteriaceae), 써모플라즈마과(Thermoplasmataceae), 피크로필러스과(Picrophilaceae), 페로플라즈마과(Ferroplasmaceae) 및 아르캐오글로버스과(Archaeoglobaceae)에 속하는 미생물이다.
또한 실험적으로 메타크릴산 유도체의 생성을 확인할 수 있는 특히 바람직한 미생물로서는, 로도박터과(Rhodobacteraceae), 스핑고모나스과(Sphingomonadaceae), 카울로박터과(Caulobacteraceae), 리조비움과(Rhizobiaceae), 크산토박터과(Xanthobacteraceae), 브루셀라과(Brucellaceae), 필로박테리움과(Phyllobacteriaceae), 알칼리게네스과(Alcaligenaceae), 코마모나스과(Comamonadaceae), 슈도모나스과(Pseudomonadaceae), 모락셀라과(Moraxellaceae), 쉐와넬라과(Shewanellaceae), 비브리오과(Vibrionaceae), 노카르디아과(Nocardiaceae), 스트렙토마이세스과(Streptomycetaceae), 바실러스과(Bacillaceae), 패니바실러스과(Paenibacillaceae) 및 스핑고박테리움과(Sphingobacteriaceae)에 속하는 미생물이다.
[원핵생물의 바람직한 속]
로도스피릴룸과(Rhodospirillaceae)에 속하는 것으로서는 마그네토스피릴룸(Magnetospirillum)속, 로도스피릴룸(Rhodospirillum)속, 아조스피릴룸(Azospirillum)속 및 티스트렐라(Tistrella)속, 아세토박터과(Acetobacteraceae)에 속하는 것으로서는 아세토박터(Acetobacter)속, 아시디필리움(Acidiphilium)속 및 글루코나세토박터(Gluconacetobacter)속, 로도박터과(Rhodobacteraceae)에 속하는 것으로서는 로도박터(Rhodobacter)속, 파라코커스(Paracoccus)속, 루에게리아(Ruegeria)속, 잔나스키아(Jannaschia)속, 로세오박터(Roseobacter)속, 디노로세오박터(Dinoroseobacter)속, 슈도비브리오(Pseudovibrio)속, 패오박터(Phaeobacter)속, 옥타데카박터(Octadecabacter)속 및 아렌시아(Ahrensia)속, 히포모나스과(Hyphomonadaceae)에 속하는 것으로서는 히포모나스(Hyphomonas)속, 마리카울리스(Maricaulis)속, 히르스키아(Hirschia)속, 스핑고모나스과(Sphingomonadaceae)에 속하는 것으로서는 스핑고모나스(Sphingomonas)속, 노보스핑고비움(Novosphingobium)속, 스핑고픽시스(Sphingopyxis)속, 스핑고비움(Sphingobium)속, 루티박테리움(Lutibacterium)속 및 자이모모나스(Zymomonas)속, 에리트로박터과(Erythrobacteraceae)에 속하는 것으로서는 에리트로박터(Erythrobacter)속, 카울로박터과(Caulobacteraceae)에 속하는 것으로서는 브레분디모나스(Brevundimonas)속, 카울로박터(Caulobacter)속, 페닐로박테리움(Phenylobacterium)속 및 아스티카카울리스(Asticcacaulis)속, 리조비움과(Rhizobiaceae)에 속하는 것으로서는 아그로박테리움(Agrobacterium)속, 리조비움(Rhizobium)속 및 시노리조비움(Sinorhizobium)속, 크산토박터과(Xanthobacteraceae)에 속하는 것으로서는 크산토박터(Xanthobacter)속 및 아조리조비움(Azorhizobium)속, 브루셀라과(Brucellaceae)에 속하는 것으로서는 브루셀라(Brucella)속 및 오크로박트럼(Ochrobactrum)속, 필로박테리움과(Phyllobacteriaceae)에 속하는 것으로서는 메소리조비움(Mesorhizobium)속 및 켈라티보란스(Chelativorans)속, 아우란티모나스과(Aurantimonadaceae)에 속하는 것으로서는 아우란티모나스(Aurantimonas)속, 브라디리조비움과(Bradyrhizobiaceae)에 속하는 것으로서는 브라디리조비움(Bradyrhizobium)속, 아그로모나스(Agromonas)속, 로도슈도모나스(Rhodopseudomonas)속 및 니트로박터(Nitrobacter)속, 메틸로박테리움과(Methylobacteriaceae)에 속하는 것으로서는 메틸로박테리움(Methylobacterium)속, 히포미크로비움과(Hyphomicrobiaceae)에 속하는 것으로서는 히포미크로비움(Hyphomicrobium)속, 로도미크로비움(Rhodomicrobium)속 및 펠라기박테리움(Pelagibacterium)속, 로도비움과(Rhodobiaceae)에 속하는 것으로서는 파르비바쿨럼(Parvibaculum)속, 메틸로시스티스과(Methylocystaceae)에 속하는 것으로서는 메틸로시스티스(Methylocystis)속, 파르불라르쿨라과(Parvularculaceae)에 속하는 것으로서는 파르불라르쿨라(Parvularcula)속, 버크홀데리아과(Burkholderiaceae)에 속하는 것으로서는 버크홀데리아(Burkholderia)속, 랄스토니아(Ralstonia)속, 쿠프리아비두스(Cupriavidus)속, 및 폴리뉴클레오박터(Polynucleobacter)속, 알칼리게네스과(Alcaligenaceae)에 속하는 것으로서는 아크로모박터(Achromobacter)속, 알칼리게네스(Alcaligenes)속, 보르데텔라(Bordetella)속, 테일로렐라(Taylorella)속, 푸실리모나스(Pusillimonas)속 및 올리겔라(Oligella)속, 코마모나스과(Comamonadaceae)에 속하는 것으로서는 코마모나스(Comamonas)속, 알리사이클리필러스(Alicycliphilus)속, 델프티아(Delftia)속, 람리박터(Ramlibacter)속, 로도페락스(Rhodoferax)속, 바리오보락스(Variovorax)속, 폴라로모나스(Polaromonas)속, 아시도보락스(Acidovorax)속 및 베르미네프로박터(Verminephrobacter)속, 옥살로박터과(Oxalobacteraceae)에 속하는 것으로서는 헤르미니이모나스(Herminiimonas)속, 헤르바스피릴룸(Herbaspirillum)속 및 콜리모나스(Collimonas)속, 히드로게노필러스과(Hydrogenophilaceae)에 속하는 것으로서는 히드로게노필러스(Hydrogenophilus)속 및 티오바실러스(Thiobacillus)속, 네이세리아과(Neisseriaceae)에 속하는 것으로서는 크로모박테리움(Chromobacterium)속, 라리박터(Laribacter)속 및 슈도굴벵키아니아(Pseudogulbenkiania)속, 니트로소모나스과(Nitrosomonadaceae)에 속하는 것으로서는 니트로소모나스(Nitrosomonas)속 및 니트로소스피라(Nitrosospira)속, 로도사이클러스과(Rhodocyclaceae)에 속하는 것으로서는 아로마톨레움(Aromatoleum)속, 아조아르커스(Azoarcus)속, 데클로로모나스(Dechloromonas)속, 타우에라(Thauera)속 및 아조스피라(Azospira)(데클로로소마(Dechlorosoma))속, 크로마티움과(Chromatiaceae)에 속하는 것으로서는 레인헤이메라(Rheinheimera)속, 티오스패라(Thiosphaera)속 및 니트로소코커스(Nitrosococcus)속, 엑토티오로도스피라과(Ectothiorhodospiraceae)에 속하는 것으로서는 할로로도스피라(Halorhodospira)속, 아시디티오바실러스과(Acidithiobacillaceae)에 속하는 것으로서는 아시디티오바실러스(Acidithiobacillus)속, 크산토모나스과에 속하는 것으로서는 크산토모나스(Xanthomonas)속, 스테노트로포모나스(Stenotrophomonas)속, 슈도크산토모나스(Pseudoxanthomonas)속 및 로다노박터(Rhodanobacter)속, 프란시셀라과(Francisellaceae)에 속하는 것으로서는 프란시셀라(Francisella)속, 피스키리케티아과(Piscirickettsiaceae)에 속하는 것으로서는 사이클로클라스티커스(Cycloclasticus)속, 오세아노스피릴룸과(Oceanospirillaceae)에 속하는 것으로서는 오세아노스피릴룸(Oceanospirillum)속 및 마리노스피릴룸(Marinospirillum)속, 하헬라과(Hahellaceae)에 속하는 것으로서는 하헬라(Hahella)속, 할로모나스과(Halomonadaceae)에 속하는 것으로서는 할로모나스(Halomonas)속, 알카니보락스과(Alcanivoracaceae)에 속하는 것으로서는 알카니보락스(Alcanivorax)속 및 캉기엘라(Kangiella)속, 슈도모나스과(Pseudomonadaceae)에 속하는 것으로서는 슈도모나스(Pseudomonas)속 및 아조토박터(Azotobacter)속, 모락셀라과(Moraxellaceae)에 속하는 것으로서는 아시네토박터(Acinetobacter)속 및 시크로박터(Psychrobacter)속, 알테로모나스과(Alteromonadaceae)에 속하는 것으로서는 알리쉐와넬라(Alishewanella)속, 알테로모나스(Alteromonas)속, 글라시에콜라(Glaciecola)속, 마리노박터(Marinobacter)속, 마리노박테리움(Marinobacterium)속 및 사카로파거스(Saccharophagus)속, 쉐와넬라과(Shewanellaceae)에 속하는 것으로서는 쉐와넬라(Shewanella)속, 페리모나스과(Ferrimonadaceae)에 속하는 것으로서는 페리모나스(Ferrimonas)속, 이디오마리나과(Idiomarinaceae)에 속하는 것으로서는 이디오마리나(Idiomarina)속, 콜웰리아과(Colwelliaceae)에 속하는 것으로서는 콜웰리아(Colwellia)속, 슈도알테로모나스과(Pseudoalteromonadaceae)에 속하는 것으로서는 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas)속, 비브리오과(Vibrionaceae)에 속하는 것으로서는 리스토넬라(Listonella)속, 비브리오(Vibrio)속 및 포토박테리움(Photobacterium)속, 애로모나스과(Aeromonadaceae)에 속하는 것으로서는 애로모나스(Aeromonas)속 및 오세아니모나스(Oceanimonas)속, 살리니스패라과(Salinisphaeraceae)에 속하는 것으로서는 살리니스패라(Salinisphaera)속, 레지오넬라과(Legionellaceae)에 속하는 것으로서는 레지오넬라(Legionella)속, 콕시엘라과(Coxiellaceae)에 속하는 것으로서는 콕시엘라(Coxiella)속, 데술포불부스과(Desulfobulbaceae)에 속하는 것으로서는 데술포코커스(Desulfococcus)속, 데술포박테리움(Desulfobacterium)속 및 데술파티바실룸(Desulfatibacillum)속, 데술파르쿨러스과(Desulfarculaceae)에 속하는 것으로서는 데술포불버스(Desulfobulbus)속 및 데술파르쿨러스(Desulfarculus)속, 지오박터과(Geobacteraceae)에 속하는 것으로서는 지오박터(Geobacter)속, 신트로포박터과(Syntrophobacteraceae)에 속하는 것으로서는 신트로포박터(Syntrophobacter)속, 신트로퍼스과(Syntrophaceae)에 속하는 것으로서는 신트로퍼스(Syntrophus)속 및 데술포모닐레(Desulfomonile)속, 델로비브리오과(Bdellovibrionaceae)에 속하는 것으로서는 델로비브리오(Bdellovibrio)속, 박테리오보락스과(Bacteriovoracaceae)에 속하는 것으로서는 박테리오보락스(Bacteriovorax)속, 시스토박터과(Cystobacteraceae)에 속하는 것으로서는 스티그마텔라(Stigmatella)속, 믹소코커스과(Myxococcaceae)에 속하는 것으로서는 믹소코커스(Myxococcus)속 및 아내로믹소박터(Anaeromyxobacter)속, 폴리앙기움과(Polyangiaceae)에 속하는 것으로서는 소랑기움(Sorangium)속, 코플레리아과(Kofleriaceae)에 속하는 것으로서는 할리앙기움(Haliangium)속, 아시도박테리움과(Acidobacteriaceae)에 속하는 것으로서는 아시도박테리움(Acidobacterium)속 및 그라눌리셀라(Granulicella)속, 아시디미크로비움과(Acidimicrobiaceae)에 속하는 것으로서는 일루마토박터(Ilumatobacter)속, 스트렙토스포랑기움과(Streptosporangiaceae)에 속하는 것으로서는 스트렙토스포랑기움(Streptosporangium)속, 아크로카르포스포라(Acrocarpospora)속, 헤르비도스포라(Herbidospora)속, 미크로비스포라(Microbispora)속, 노노무래아(Nonomuraea)속, 플라노비스포라(Planobispora)속 및 플라노모노스포라(Planomonospora)속, 노카르디옵시스과(Nocardiopsaceae)에 속하는 것으로서는 노카르디옵시스(Nocardiopsis)속 및 써모비피다(Thermobifida)속, 써모모노스포라과(Thermomonosporaceae)에 속하는 것으로서는 악티노코랄리아(Actinocorallia)속, 악티노마두라(Actinomadura)속 및 써모모노스포라(Thermomonospora)속, 슈도노카르디아과(Pseudonocardiaceae)에 속하는 것으로서는 슈도노카르디아(Pseudonocardia)속, 악티노알로테이커스(Actinoalloteichus)속, 아미콜라톱시스(Amycolatopsis)속, 키브델로스포랑기움(Kibdelosporangium)속, 사카로모노스포라(Saccharomonospora)속, 사카로폴리스포라(Saccharopolyspora)속, 사카로트릭스(Saccharothrix)속, 스트렙토알로테이커스(Streptoalloteichus)속, 써모비스포라(Thermobispora)속 및 써모크리스품(Thermocrispum)속, 악티노신네마과(Actinosynnemataceae)에 속하는 것으로서는 악티노키네오스포라(Actinokineospora)속 및 악티노신네마(Actinosynnema)속, 미크로모노스포라과(Micromonosporaceae)에 속하는 것으로서는 미크로모노스포라(Micromonospora)속, 악티노플라네스(Actinoplanes)속, 카텔라토스포라(Catellatospora)속, 코우치오플라네스(Couchioplanes)속, 닥틸로스포랑기움(Dactylosporangium)속, 필리멜리아(Pilimelia)속, 살리니스포라(Salinispora)속 및 베루코시스포라(Verrucosispora)속, 악티노폴리스포라과(Actinopolysporaceae)에 속하는 것으로서는 악티노폴리스포라(Actinopolyspora)속, 프로피오니박테리움과(Propionibacteriaceae)에 속하는 것으로서는 프로피오니박테리움(Propionibacterium)속 및 루테오코커스(Luteococcus)속, 노카르디오이데스과(Nocardioidaceae)에 속하는 것으로서는 노카르디오이데스(Nocardioides)속, 애로미크로비움(Aeromicrobium)속, 크리벨라(Kribbella)속 및 피멜로박터(Pimelobacter)속, 코리네박테리움과(Corynebacteriaceae)에 속하는 것으로서는 코리네박테리움(Corynebacterium)속, 노카르디아과(Nocardiaceae)에 속하는 것으로서는 노카르디아(Nocardia)속 및 로도코커스(Rhodococcus)속, 고르도니아과(Gordoniaceae)에 속하는 것으로서는 고르도니아(Gordonia)속, 디에치아과(Dietziaceae)에 속하는 것으로서는 디에치아(Dietzia)속, 마이코박테리움과(Mycobacteriaceae)에 속하는 것으로서는 마이코박테리움(Mycobacterium)속 및 아미콜리시코커스(Amycolicicoccus)속, 츠카무렐라과(Tsukamurellaceae)에 속하는 것으로서는 츠카무렐라(Tsukamurella)속, 세그닐리파러스과(Segniliparaceae)에 속하는 것으로서는 세그닐리파러스(Segniliparus)속, 미크로박테리움과(Microbacteriaceae)에 속하는 것으로서는 미크로박테리움(Microbacterium)속, 아그로마이세스(Agromyces)속, 클라비박터(Clavibacter)속, 쿠르토박테리움(Curtobacterium)속 및 라테이박터(Rathayibacter)속, 미크로코커스과(Micrococcaceae)에 속하는 것으로서는 미크로코커스(Micrococcus)속, 아르트로박터(Arthrobacter)속, 시트리코커스(Citricoccus)속, 레니박테리움(Renibacterium)속, 코쿠리아(Kocuria)속 및 로티아(Rothia)속, 데르마박터과(Dermabacteraceae)에 속하는 것으로서는 브라키박테리움(Brachybacterium)속, 데르마코커스(Dermacoccus)속, 데메트리아(Demetria)속 및 키토코커스(Kytococcus)속, 데르마토필러스과(Dermatophilaceae)에 속하는 것으로서는 데르마토필러스(Dermatophilus)속, 브레비박테리움과(Brevibacteriaceae)에 속하는 것으로서는 브레비박테리움(Brevibacterium)속, 셀룰로모나스과(Cellulomonadaceae)에 속하는 것으로서는 셀룰로모나스(Cellulomonas)속 및 오에르스코비아(Oerskovia)속, 인트라스포랑기움과(Intrasporangiaceae)에 속하는 것으로서는 인트라스포랑기움(Intrasporangium)속, 자니박터(Janibacter)속, 테라박터(Terrabacter)속 및 세리니코커스(Serinicoccus)속, 조네시아과(Jonesiaceae)에 속하는 것으로서는 조네시아(Jonesia)속, 라로박터과(Rarobacteraceae)에 속하는 것으로서는 라로박터(Rarobacter)속, 프랑키아과(Frankiaceae)에 속하는 것으로서는 프랑키아(Frankia)속, 아시도써무스과(Acidothermaceae)에 속하는 것으로서는 아시도써무스(Acidothermus)속, 나카무렐라(Nakamurellaceae)에 속하는 것으로서는 나카무렐라(Nakamurella)속, 크립토스포랑기움과(Cryptosporangiaceae)에 속하는 것으로서는 크립토스포랑기움(Cryptosporangium)속, 지오데르마토필러스과(Geodermatophilaceae)에 속하는 것으로서는 지오데르마토필러스(Geodermatophilus)속, 글리코마이세스과(Glycomycetaceae)에 속하는 것으로서는 글리코마이세스(Glycomyces)속 및 스타케브란드티아(Stackebrandtia)속, 악티노마이세스과(Actinomycetaceae)에 속하는 것으로서는 아르카노박테리움(Arcanobacterium)속, 스트렙토마이세스과(Streptomycetaceae)에 속하는 것으로서는 스트렙토마이세스(Streptomyces)속 및 키타사토스포라(Kitasatospora)속, 카테눌리스포라과(Catenulisporaceae)에 속하는 것으로서는 카테눌리스포라(Catenulispora)속, 키네오스포리아과(Kineosporiaceae)에 속하는 것으로서는 키네오스포리아(Kineosporia)속 및 키네오코커스(Kineococcus)속, 비피도박테리움과(Bifidobacteriaceae)에 속하는 것으로서는 비피도박테리움(Bifidobacterium)속, 루브로박터과(Rubrobacteraceae)에 속하는 것으로서는 루브로박터(Rubrobacter)속, 코넥시박터과(Conexibacteraceae)에 속하는 것으로서는 코넥시박터(Conexibacter)속, 바실러스과(Bacillaceae)에 속하는 것으로서는 바실러스(Bacillus)속, 지오바실러스(Geobacillus)속, 오세아노바실러스(Oceanobacillus)속, 리시니바실러스(Lysinibacillus)속 및 할로바실러스(Halobacillus)속, 알리사이클로바실러스과(Alicyclobacillaceae)에 속하는 것으로서는 알리사이클로바실러스(Alicyclobacillus)속 키르피디아(Kyrpidia)속, 패니바실러스과(Paenibacillaceae)에 속하는 것으로서는 패니바실러스(Paenibacillus)속 및 브레비바실러스(Brevibacillus)속, 플라노코커스과(Planococcaceae)에 속하는 것으로서는 플라노코커스(Planococcus)속 및 쿠르티아(Kurthia)속, 스포로락토바실러스과(Sporolactobacillaceae)에 속하는 것으로서는 스포로락토바실러스(Sporolactobacillus)속, 써모악티노마이세스과(Thermoactinomycetaceae)에 속하는 것으로서는 써모악티노마이세스(Thermoactinomyces)속, 락토바실러스과(Lactobacillaceae)에 속하는 것으로서는 락토바실러스(Lactobacillus)속 및 페디오코커스(Pediococcus)속, 류코노스톡과(Leuconostocaceae)에 속하는 것으로서는 류코노스톡(Leuconostoc)속 및 웨이셀라(Weissella)속, 애로코커스과(Aerococcaceae)에 속하는 것으로서는 애로코커스(Aerococcus)속 및 글로비카텔라(Globicatella)속, 카르노박테리움과(Carnobacteriaceae)에 속하는 것으로서는 알로이오코커스(Alloiococcus)속 및 카르노박테리움(Carnobacterium)속, 스트렙토코커스과(Streptococcaceae)에 속하는 것으로서는 스트렙토코커스(Streptococcus)속, 클로스트리듐과(Clostridiaceae)에 속하는 것으로서는 클로스트리듐(Clostridium)속 및 알칼리필러스(Alkaliphilus)속, 신트로포모나스과(Syntrophomonadaceae)에 속하는 것으로서는 신트로포모나스(Syntrophomonas)속 및 신트로포써무스(Syntrophothermus)속, 유박테리움과(Eubacteriaceae)에 속하는 것으로서는 유박테리움(Eubacterium)속, 펩토코커스과(Peptococcaceae)에 속하는 것으로서는 펩토코커스(Peptococcus)속, 데술피토박테리움(Desulfitobacterium)속, 데술포토마쿨럼(Desulfotomaculum)속 및 펠로토마쿨럼(Pelotomaculum)속, 펩토스트렙토코커스과(Peptostreptococcaceae)에 속하는 것으로서는 펩토스트렙토코커스(Peptostreptococcus)속, 라크노스피라과(Lachnospiraceae)에 속하는 것으로서는 부티리비브리오(Butyrivibrio)속 및 로세부리아(Roseburia)속, 오실로스피라과(Oscillospiraceae)에 속하는 것으로서는 오실리박터(Oscillibacter)속, 써모아내로박터과(Thermoanaerobacteraceae)에 속하는 것으로서는 써모아내로박터(Thermoanaerobacter)속 및 카르복시도써무스(Carboxydothermus)속, 나트라내로비우스과(Natranaerobiaceae)에 속하는 것으로서는 나트라내로비우스(Natranaerobius)속, 스핑고박테리움과(Sphingobacteriaceae)에 속하는 것으로서는 스핑고박테리움(Sphingobacterium)속, 페도박터(Pedobacter)속 및 무실라기니박터(Mucilaginibacter)속, 사프로스피라과(Saprospiraceae)에 속하는 것으로서는 할리스코메노박터(Haliscomenobacter)속, 박테로이데스과(Bacteroidaceae)에 속하는 것으로서는 박테로이데스(Bacteroides)속, 마리닐라빌리아과(Marinilabiliaceae)에 속하는 것으로서는 마리닐라빌리아(Marinilabilia)속, 프레보텔라과(Prevotellaceae)에 속하는 것으로서는 프레보텔라(Prevotella) 속, 포르피로모나스과(Porphyromonadaceae)에 속하는 것으로서는 포르피로모나스(Porphyromonas)속 및 오도리박터(Odoribacter)속, 사이토파가과(Cytophagaceae)에 속하는 것으로서는 플렉시박터(Flexibacter)속, 스피로소마(Spirosoma)속 및 루넬라(Runella)속, 플라메오비르가과(Flammeovirgaceae)에 속하는 것으로서는 플라메오비르가(Flammeovirga)속, 플라보박테리움과(Flavobacteriaceae)에 속하는 것으로서는 플라보박테리움(Flavobacterium)속, 크리세오박테리움(Chryseobacterium)속 및 마리박터(Maribacter)속, 데이노코커스과(Deinococcaceae)에 속하는 것으로서는 데이노코커스(Deinococcus)속, 써무스과(Thermaceae)에 속하는 것으로서는 써무스(Thermus)속, 메이오써무스(Meiothermus)속, 오세아니써무스(Oceanithermus)속 및 마리니써무스(Marinithermus)속, 겜마티모나스과(Gemmatimonadaceae)에 속하는 것으로서는 겜마티모나스(Gemmatimonas)속, 푸소박테리아과(Fusobacteriaceae)에 속하는 것으로서는 푸소박테리움(Fusobacterium)속 및 일리오박터(Ilyobacter)속, 클로로플렉사스과(Chloroflexaceae)에 속하는 것으로서는 로세이플렉서스(Roseiflexus)속, 헤르페토시폰과(Herpetosiphonaceae)에 속하는 것으로서는 헤르페토시폰(Herpetosiphon)속, 써모미크로비아과(Thermomicrobiaceae)에 속하는 것으로서는 써모미크로비움(Thermomicrobium)속, 써모토가과(Thermotogaceae)에 속하는 것으로서는 써모토가(Thermotoga)속, 써모시포(Thermosipho)속 및 페르비도박테리움(Fervidobacterium)속, 데페리박터과(Deferribacteraceae)에 속하는 것으로서는 데페리박터(Deferribacter)속, 칼디테리비브리오(Calditerrivibrio)속 및 플렉시스티페스(Flexistipes)속, 술폴로버스과(Sulfolobaceae)에 속하는 것으로서는 메탈로스패라(Metallosphaera)속 및 아시디아너스(Acidianus)속, 데술푸로코커스과(Desulfurococcaceae)에 속하는 것으로서는 애로피럼(Aeropyrum)속, 써모프로테우스과(Thermoproteaceae)에 속하는 것으로서는 피로바쿨럼(Pyrobaculum)속, 칼디비르가(Caldivirga)속 및 불카니새타(Vulcanisaeta)속, 아시딜로버스과(Acidilobaceae)에 속하는 것으로서는 아시딜로버스(Acidilobus)속, 할로박테리움과(Halobacteriaceae)에 속하는 것으로서는 할로박테리움(Halobacterium)속, 할로코커스(Halococcus)속, 할로아르쿨라(Haloarcula)속, 할로쿠아드라텀(Haloquadratum)속, 나트로노모나스(Natronomonas)속, 할로루브럼(Halorubrum)속, 할로테리게나(Haloterrigena)속, 나트리알바(Natrialba)속, 할랄칼리코커스(Halalkalicoccus)속 및 할로게오메트리컴(Halogeometricum)속, 써모플라즈마과(Thermoplasmataceae)에 속하는 것으로서는 써모플라즈마(Thermoplasma)속, 피크로필러스과(Picrophilaceae)에 속하는 것으로서는 피크로필러스(Picrophilus)속, 페로플라즈마과(Ferroplasmaceae)에 속하는 것으로서는 페로플라즈마(Ferroplasma)속, 아르캐오글로버스과(Archaeoglobaceae)에 속하는 것으로서는 아르캐오글로버스(Archaeoglobus)속 및 페로글로버스(Ferroglobus)속을 들 수 있다. 또한, 분류 상의 목이 정해지지 않은 미생물로서 폴리모르품(Polymorphum)속, 미카비브리오(Micavibrio)속, 시미두이아(Simiduia)속, 렙토트릭스(Leptothrix)속, 티오모나스(Thiomonas)속, 루브리비박스(Rubrivivax)속 및 메틸리비움(Methylibium)속을, 바실러스목(Bacillales)에 속하고, 분류 상의 과가 정해지지 않은 미생물로서 엑시구오박테리움(Exiguobacterium)속, 클로스트리듐목(Clostridiales)에 속하고 분류 상의 과가 정해지지 않은 미생물로서 아내로코커스(Anaerococcus)속을 들 수 있다.
그 중에서도 바람직한 미생물은, 분지쇄 아미노산의 대사 경로 중의 효소를 갖는 것으로 시사되는 마그네토스피릴룸(Magnetospirillum)속, 로도스피릴룸(Rhodospirillum)속, 아조스피릴룸(Azospirillum)속, 티스트렐라(Tistrella)속, 아시디필리움(Acidiphilium)속, 로도박터(Rhodobacter)속, 파라코커스(Paracoccus)속, 루에게리아(Ruegeria)속, 잔나스키아(Jannaschia)속, 로세오박터(Roseobacter)속, 디노로세오박터(Dinoroseobacter)속, 슈도비브리오(Pseudovibrio)속, 패오박터(Phaeobacter)속, 옥타데카박터(Octadecabacter)속, 히포모나스(Hyphomonas)속, 마리카울리스(Maricaulis)속, 히르스키아(Hirschia)속, 스핑고모나스(Sphingomonas)속, 노보스핑고비움(Novosphingobium)속, 스핑고픽시스(Sphingopyxis)속, 스핑고비움(Sphingobium)속, 에리트로박터(Erythrobacter)속, 브레분디모나스(Brevundimonas)속, 카울로박터(Caulobacter)속, 페닐로박테리움(Phenylobacterium)속, 아스티카카울리스(Asticcacaulis)속, 아그로박테리움(Agrobacterium)속, 리조비움(Rhizobium)속, 시노리조비움(Sinorhizobium)속, 크산토박터(Xanthobacter)속, 아조리조비움(Azorhizobium)속, 브루셀라(Brucella)속, 오크로박트럼(Ochrobactrum)속, 메소리조비움(Mesorhizobium)속, 켈라티보란스(Chelativorans)속, 아우란티모나스(Aurantimonas)속, 브라디리조비움(Bradyrhizobium)속, 아그로모나스(Agromonas)속, 로도슈도모나스(Rhodopseudomonas)속, 니트로박터(Nitrobacter)속, 메틸로박테리움(Methylobacterium)속, 로도미크로비움(Rhodomicrobium)속, 펠라기박테리움(Pelagibacterium)속, 파르비바쿨럼(Parvibaculum)속, 메틸로시스티스(Methylocystis)속, 파르불라르쿨라(Parvularcula)속, 버크홀데리아(Burkholderia)속, 랄스토니아(Ralstonia)속, 쿠프리아비두스(Cupriavidus)속, 폴리뉴클레오박터(Polynucleobacter)속, 아크로모박터(Achromobacter)속, 보르데텔라(Bordetella)속, 테일로렐라(Taylorella)속, 푸실리모나스(Pusillimonas)속, 코마모나스(Comamonas)속, 알리시클리필러스(Alicycliphilus)속, 델프티아(Delftia)속, 람리박터(Ramlibacter)속, 로도페락스(Rhodoferax)속, 바리오보락스(Variovorax)속, 폴라로모나스(Polaromonas)속, 아시도보락스(Acidovorax)속, 베르미네프로박터(Verminephrobacter)속, 헤르미니이모나스(Herminiimonas)속, 헤르바스피릴룸(Herbaspirillum)속, 콜리모나스(Collimonas)속, 크로모박테리움(Chromobacterium)속, 라리박터(Laribacter)속, 슈도굴벵키아니아(Pseudogulbenkiania)속, 니트로소모나스(Nitrosomonas)속, 니트로소스피라(Nitrosospira)속, 아로마톨레움(Aromatoleum)속, 아조아르커스(Azoarcus)속, 데클로로모나스(Dechloromonas)속, 타우에라(Thauera)속, 아조스피라(Azospira)(데클로로소마(Dechlorosoma))속, 레인헤이메라(Rheinheimera)속, 니트로소코커스(Nitrosococcus)속, 할로로도스피라(Halorhodospira)속, 크산토모나스(Xanthomonas)속, 스테노트로포모나스(Stenotrophomonas)속, 슈도크산토모나스(Pseudoxanthomonas)속, 로다노박터(Rhodanobacter)속, 프란시셀라(Francisella)속, 사이클로클라스티커스(Cycloclasticus)속, 오세아노스피릴룸(Oceanospirillum)속, 하헬라(Hahella)속, 할로모나스(Halomonas)속, 알카니보락스(Alcanivorax)속, 캉기엘라(Kangiella)속, 슈도모나스(Pseudomonas)속, 아조토박터(Azotobacter)속, 아시네토박터(Acinetobacter)속, 시크로박터(Psychrobacter)속, 알리쉐와넬라(Alishewanella)속, 알테로모나스(Alteromonas)속, 글라시에콜라(Glaciecola)속, 마리노박터(Marinobacter)속, 마리노박테리움(Marinobacterium)속, 사카로파거스(Saccharophagus)속, 쉐와넬라(Shewanella)속, 페리모나스(Ferrimonas)속, 이디오마리나(Idiomarina)속, 콜웰리아(Colwellia)속, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas)속, 리스토넬라(Listonella)속, 비브리오(Vibrio)속, 포토박테리움(Photobacterium)속, 애로모나스(Aeromonas)속, 오세아니모나스(Oceanimonas)속, 살리니스패라(Salinisphaera)속, 레지오넬라(Legionella)속, 콕시엘라(Coxiella)속, 데술포코커스(Desulfococcus)속, 데술포박테리움(Desulfobacterium)속, 데술파티바실룸(Desulfatibacillum)속, 데술포불버스(Desulfobulbus)속, 데술파르쿨러스(Desulfarculus)속, 지오박터(Geobacter)속, 신트로포박터(Syntrophobacter)속, 신트로퍼스(Syntrophus)속, 데술포모닐레(Desulfomonile)속, 델로비브리오(Bdellovibrio)속, 박테리오보락스(Bacteriovorax)속, 스티그마텔라(Stigmatella)속, 믹소코커스(Myxococcus)속, 아내로믹소박터(Anaeromyxobacter)속, 소랑기움(Sorangium)속, 할리앙기움(Haliangium)속, 아시도박테리움(Acidobacterium)속, 그라눌리셀라(Granulicella)속, 일루마토박터(Ilumatobacter)속, 스트렙토스포랑기움(Streptosporangium)속, 노카르디옵시스(Nocardiopsis)속, 써모비피다(Thermobifida)속, 써모모노스포라(Thermomonospora)속, 슈도노카르디아(Pseudonocardia)속, 아미콜라톱시스(Amycolatopsis)속, 사카로모노스포라(Saccharomonospora)속, 사카로폴리스포라(Saccharopolyspora)속, 써모비스포라(Thermobispora)속, 악티노신네마(Actinosynnema)속, 미크로모노스포라(Micromonospora)속, 살리니스포라(Salinispora)속, 베루코시스포라(Verrucosispora)속, 노카르디오이데스(Nocardioides)속, 크리벨라(Kribbella)속, 코리네박테리움(Corynebacterium)속, 노카르디아(Nocardia)속, 로도코커스(Rhodococcus)속, 고르도니아(Gordonia)속, 디에치아(Dietzia)속, 미코박테리움(Mycobacterium)속, 아미콜리시코커스(Amycolicicoccus)속, 츠카무렐라(Tsukamurella)속, 세그닐리파러스(Segniliparus)속, 미크로박테리움(Microbacterium)속, 미크로코커스(Micrococcus)속, 아르트로박터(Arthrobacter)속, 시트리코커스(Citricoccus)속, 레니박테리움(Renibacterium)속, 코쿠리아(Kocuria)속, 키토코커스(Kytococcus)속, 셀룰로모나스(Cellulomonas)속, 인트라스포랑기움(Intrasporangium)속, 세리니코커스(Serinicoccus)속, 프랑키아(Frankia)속, 아시도써무스(Acidothermus)속, 나카무렐라(Nakamurella)속, 지오데르마토필러스(Geodermatophilus)속, 스타케브란드티아(Stackebrandtia)속, 스트렙토마이세스(Streptomyces)속, 카테눌리스포라(Catenulispora)속, 루브로박터(Rubrobacter)속, 코넥시박터(Conexibacter)속, 바실러스(Bacillus)속, 지오바실러스(Geobacillus)속, 오세아노바실러스(Oceanobacillus)속, 리시니바실러스(Lysinibacillus)속, 할로바실러스(Halobacillus)속, 알리사이클로바실러스(Alicyclobacillus)속, 키르피디아(Kyrpidia)속, 패니바실러스(Paenibacillus)속, 락토바실러스(Lactobacillus)속, 카르노박테리움(Carnobacterium)속, 클로스티리듐(Clostridium)속, 알칼리필러스(Alkaliphilus)속, 신트로포모나스(Syntrophomonas)속, 신트로포써무스(Syntrophothermus)속, 유박테리움(Eubacterium)속, 데술피토박테리움(Desulfitobacterium)속, 데술포토마쿨럼(Desulfotomaculum)속, 펠로토마쿨럼(Pelotomaculum)속, 부티리비브리오(Butyrivibrio)속, 로세부리아(Roseburia)속, 오실리박터(Oscillibacter)속, 써모아내로박터(Thermoanaerobacter)속, 카르복시도써무스(Carboxydothermus)속, 나트라내로비우스(Natranaerobius)속, 스핑고박테리움(Sphingobacterium)속, 페도박터(Pedobacter)속, 할리스코메노박터(Haliscomenobacter)속, 포르피로모나스(Porphyromonas)속, 오도리박터(Odoribacter)속, 스피로소마(Spirosoma)속, 루넬라(Runella)속, 마리박터(Maribacter)속, 데이노코커스(Deinococcus)속, 써무스(Thermus)속, 메이오써무스(Meiothermus)속, 오세아니써무스(Oceanithermus)속, 마리니써무스(Marinithermus)속, 겜마티모나스(Gemmatimonas)속, 푸소박테리움(Fusobacterium)속, 일리오박터(Ilyobacter)속, 로세이플렉서스(Roseiflexus)속, 헤르페토시폰(Herpetosiphon)속, 써모미크로비움(Thermomicrobium)속, 써모토가(Thermotoga)속, 써모시포(Thermosipho)속, 페르비도박테리움(Fervidobacterium)속, 데페리박터(Deferribacter)속, 칼디테리비브리오(Calditerrivibrio)속, 플렉시스티페스(Flexistipes)속, 메탈로스패라(Metallosphaera)속, 애로피럼(Aeropyrum)속, 피로바쿨럼(Pyrobaculum)속, 칼디비르가(Caldivirga)속, 불카니새타(Vulcanisaeta)속, 아시딜로버스(Acidilobus)속, 할로아르쿨라(Haloarcula)속, 할로쿠아드라텀(Haloquadratum)속, 나트로노모나스(Natronomonas)속, 할로루브럼(Halorubrum)속, 할로테리게나(Haloterrigena)속, 나트리알바(Natrialba)속, 할랄칼리코커스(Halalkalicoccus)속, 할로게오메트리컴(Halogeometricum)속, 써모플라즈마(Thermoplasma)속, 피크로필러스(Picrophilus)속, 페로플라즈마(Ferroplasma)속, 아르캐오글로버스(Archaeoglobus)속, 페로글로버스(Ferroglobus)속, 폴리모르품(Polymorphum)속, 미카비브리오(Micavibrio)속, 시미두이아(Simiduia)속, 렙토트릭스(Leptothrix)속, 티오모나스(Thiomonas)속, 루브리비박스(Rubrivivax)속, 메틸리비움(Methylibium)속, 엑시구오박테리움(Exiguobacterium)속 및 아내로코커스(Anaerococcus)속에 속하는 미생물이다.
또한 실험적으로 메타크릴산 유도체의 생성을 확인할 수 있는 특히 바람직한 미생물로서는, 파라코커스(Paracoccus)속, 스핑고모나스(Sphingomonas)속, 브레분디모나스(Brevundimonas)속, 아그로박테리움(Agrobacterium)속, 리조비움(Rhizobium)속, 크산토박터(Xanthobacter)속, 오크로박트럼(Ochrobactrum)속, 메소리조비움(Mesorhizobium)속, 아크로모박터(Achromobacter)속, 코마모나스(Comamonas)속, 슈도모나스(Pseudomonas)속, 아시네토박터(Acinetobacter)속, 쉐와넬라(Shewanella)속, 리스토넬라(Listonella)속, 로도코커스(Rhodococcus)속, 스트렙토마이세스(Streptomyces)속, 바실러스(Bacillus)속, 지오바실러스(Geobacillus)속, 패니바실러스(Paenibacillus)속, 스핑고박테리움(Sphingobacterium)속 및 페도박터(Pedobacter)속에 속하는 미생물이다.
[원핵생물의 바람직한 종]
〔슈도모나스속〕
슈도모나스(Pseudomonas)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici), 슈도모나스 알칼리게네스(Pseudomonas alcaligenes), 슈도모나스 아미그달레(Pseudomonas amygdale), 슈도모나스 앙귈리셉티카(Pseudomonas anguiliseptica), 슈도모나스 안티미크로비카(Pseudomonas antimicrobica), 슈도모나스 아스플레니(Pseudomonas aspleni), 슈도모나스 아우란티아카(Pseudomonas aurantiaca), 슈도모나스 아우레오파시엔스(Pseudomonas aureofaciens), 슈도모나스 아벨라나에(Pseudomonas avellanae), 슈도모나스 아조토포르만스(Pseudomonas azotoformans), 슈도모나스 발레아리카(Pseudomonas balearica), 슈도모나스 베이제린스키이(Pseudomonas beijerinsckii), 슈도모나스 베텔리(Pseudomonas beteli), 슈도모나스 보레오폴리스(Pseudomonas boreopolis), 슈도모나스 카르복시히드로게나(Pseudomonas carboxyhydrogena), 슈도모나스 카리카파파야에(Pseudomonas caricapapayae), 슈도모나스 시콜리이(Pseudomonas cichorii), 슈도모나스 시시콜라(Pseudomonas cissicola), 슈도모나스 시트로넬롤리스(Pseudomonas citronellolis), 슈도모나스 코로나파시엔스(Pseudomonas coronafaciens), 슈도모나스 코루가테(Pseudomonas corrugate), 슈도모나스 도우도로피이(Pseudomonas doudoroffii), 슈도모나스 에키노이드스(Pseudomonas echinoids), 슈도모나스 엘론가테(Pseudomonas elongate), 슈도모나스 피쿠세렉타에(Pseudomonas ficuserectae), 슈도모나스 플라베센스(Pseudomonas flavescens), 슈도모나스 플렉텐스(Pseudomonas flectens), 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 슈도모나스 프라기(Pseudomonas fragi), 슈도모나스 풀바(Pseudomonas fulva), 슈도모나스 푸스코바기나에(Pseudomonas fuscovaginae), 슈도모나스 겔리디콜라(Pseudomonas gelidicola), 슈도모나스 게니쿨라타(Pseudomonas geniculata), 슈도모나스 글라테이(Pseudomonas glathei), 슈도모나스 할로필라(Pseudomonas halophila), 슈도모나스 히비스키콜라(Pseudomonas hibiscicola), 슈도모나스 후티엔시스(Pseudomonas huttiensis), 슈도모나스 이네르스(Pseudomonas iners), 슈도모나스 란셀로타(Pseudomonas lancelota), 슈도모나스 레모이그네이(Pseudomonas lemoignei), 슈도모나스 룬덴시스(Pseudomonas lundensis), 슈도모나스 루테올라(Pseudomonas luteola), 슈도모나스 마르기날리스(Pseudomonas marginalis), 슈도모나스 멜리아에(Pseudomonas meliae), 슈도모나스 멘도시나(Pseudomonas mendocina), 슈도모나스 무시돌렌스(Pseudomonas mucidolens), 슈도모나스 몬테일리(Pseudomonas monteilli), 슈도모나스 나우티카(Pseudomonas nautica), 슈도모나스 니트로레두센스(Pseudomonas nitroreducens), 슈도모나스 올레오보란스(Pseudomonas oleovorans), 슈도모나스 오리지하비탄스(Pseudomonas oryzihabitans), 슈도모나스 페르투시노게나(Pseudomonas pertucinogena), 슈도모나스 페나지니움(Pseudomonas phenazinium), 슈도모나스 픽토럼(Pseudomonas pictorum), 슈도모나스 슈도알칼리게네스(Pseudomonas pseudoalcaligenes), 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida), 슈도모나스 피로시니아(Pseudomonas pyrrocinia), 슈도모나스 레시노보란스(Pseudomonas resinovorans), 슈도모나스 로데시아에(Pseudomonas rhodesiae), 슈도모나스 사카로필라(Pseudomonas saccharophila), 슈도모나스 사바스타노이(Pseudomonas savastanoi), 슈도모나스 스피노사(Pseudomonas spinosa), 슈도모나스 스타니에리(Pseudomonas stanieri), 슈도모나스 스트라미나에(Pseudomonas straminae), 슈도모나스 스투체리(Pseudomonas stutzeri), 슈도모나스 싱크산타(Pseudomonas synxantha), 슈도모나스 시링가에(Pseudomonas syringae), 슈도모나스 시지기이(Pseudomonas syzygii), 슈도모나스 타에트롤렌스(Pseudomonas taetrolens), 슈도모나스 톨라아시이(Pseudomonas tolaasii), 슈도모나스 베로니이(Pseudomonas veronii), 슈도모나스 비리디플라바(Pseudomonas viridiflava), 슈도모나스 불가리스(Pseudomonas vulgaris), 슈도모나스 위스콘시넨시스(Pseudomonas wisconsinensis) 등을 들 수 있다.
〔바실러스속〕
바실러스속(Bacillus)으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 바실러스 투링기엔시스(Bacillus thuringiensis), 바실러스 아시디셀러(Bacillus acidiceler), 바실러스 아시디콜라(Bacillus acidicola), 바실러스 애올리우스(Bacillus aeolius), 바실러스 애리우스(Bacillus aerius), 바실러스 애로필러스(Bacillus aerophilus), 바실러스 아가라드해렌스(Bacillus agaradhaerens), 바실러스 아키바이(Bacillus akibai), 바실러스 알칼로필러스(Bacillus alcalophilus), 바실러스 알기콜라(Bacillus algicola), 바실러스 알칼리디아조트로피커스(Bacillus alkalidiazotrophicus), 바실러스 알칼리텔루리스(Bacillus alkalitelluris), 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis), 바실러스 알베아유엔시스(Bacillus alveayuensis), 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens), 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 바실러스 아퀴마리스(Bacillus aquimaris), 바실러스 아레노시(Bacillus arenosi), 바실러스 아르세니시셀레나티스(Bacillus arseniciselenatis), 바실러스 아르세니커스(Bacillus arsenicus), 바실러스 아르비(Bacillus arvi), 바실러스 아사히이(Bacillus asahii), 바실러스 아트로패우스(Bacillus atrophaeus), 바실러스 아우란티아커스(Bacillus aurantiacus), 바실러스 악사르퀴엔시스(Bacillus axarquiensis), 바실러스 아조토포르만스(Bacillus azotoformans), 바실러스 바디우스(Bacillus badius), 바실러스 바르바리커스(Bacillus barbaricus), 바실러스 바타비엔시스(Bacillus bataviensis), 바실러스 벤조에보란스(Bacillus benzoevorans), 바실러스 보고리엔시스(Bacillus bogoriensis), 바실러스 보로니필러스(Bacillus boroniphilus), 바실러스 부타놀리보란스(Bacillus butanolivorans), 바실러스 카르보니필러스(Bacillus carboniphilus), 바실러스 세셈벤시스(Bacillus cecembensis), 바실러스 셀룰로실리티커스(Bacillus cellulosilyticus), 바실러스 차간노렌시스(Bacillus chagannorensis), 바실러스 시비(Bacillus cibi), 바실러스 시르쿨란스(Bacillus circulans), 바실러스 클라르키이(Bacillus clarkii), 바실러스 클라우시이(Bacillus clausii), 바실러스 코아굴란스(Bacillus coagulans), 바실러스 코아후일렌시스(Bacillus coahuilensis), 바실러스 코니이(Bacillus cohnii), 바실러스 데시시프론디스(Bacillus decisifrondis), 바실러스 데콜로라티오니스(Bacillus decolorationis), 바실러스 드렌텐시스(Bacillus drentensis), 바실러스 에다피커스(Bacillus edaphicus), 바실러스 엔도피티커스(Bacillus endophyticus), 바실러스 파라기니스(Bacillus farraginis), 바실러스 파스티디오서스(Bacillus fastidiosus), 바실러스 피르무스(Bacillus firmus), 바실러스 플렉서스(Bacillus flexus), 바실러스 포라미니스(Bacillus foraminis), 바실러스 포르디이(Bacillus fordii), 바실러스 포르티스(Bacillus fortis), 바실러스 푸마리올리(Bacillus fumarioli), 바실러스 푸니쿨러스(Bacillus funiculus), 바실러스 갈락토시딜리티커스(Bacillus galactosidilyticus), 바실러스 겔라티니(Bacillus gelatini), 바실러스 깁소니이(Bacillus gibsonii), 바실러스 할마팔러스(Bacillus halmapalus), 바실러스 할로두란스(Bacillus halodurans), 바실러스 할로필러스(Bacillus halophilus), 바실러스 헤미셀룰로실리티커스(Bacillus hemicellulosilyticus), 바실러스 허버스테이넨시스(Bacillus herbersteinensis), 바실러스 호리코시이(Bacillus horikoshii), 바실러스 호르티(Bacillus horti), 바실러스 후미(Bacillus humi), 바실러스 화진포엔시스(Bacillus hwajinpoensis), 바실러스 이드리엔시스(Bacillus idriensis), 바실러스 인디커스(Bacillus indicus), 바실러스 인판티스(Bacillus infantis), 바실러스 인페르너스(Bacillus infernus), 바실러스 인솔리터스(Bacillus insolitus), 바실러스 이사벨리아에(Bacillus isabeliae), 바실러스 제오트갈리(Bacillus jeotgali), 바실러스 코리엔시스(Bacillus koreensis), 바실러스 크룰위치아에(Bacillus krulwichiae), 바실러스 레헨시스(Bacillus lehensis), 바실러스 렌터스(Bacillus lentus), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실러스 리토랄리스(Bacillus litoralis), 바실러스 루시페렌시스(Bacillus luciferensis), 바실러스 마카우엔시스(Bacillus macauensis), 바실러스 마키아에(Bacillus macyae), 바실러스 말라시텐시스(Bacillus malacitensis), 바실러스 만나닐리티커스(Bacillus mannanilyticus), 바실러스 마리너스(Bacillus marinus), 바실러스 마리스플라비(Bacillus marisflavi), 바실러스 마실리엔시스(Bacillus massiliensis), 바실러스 메가테리움(Bacillus megaterium), 바실러스 메타놀리커스(Bacillus methanolicus), 바실러스 모자벤시스(Bacillus mojavensis), 바실러스 무실라기노서스(Bacillus mucilaginosus), 바실러스 무랄리스(Bacillus muralis), 바실러스 무리마르티니(Bacillus murimartini), 바실러스 미코이데스(Bacillus mycoides), 바실러스 넬소니이(Bacillus nealsonii), 바실러스 니아벤시스(Bacillus niabensis), 바실러스 니아시니(Bacillus niacini), 바실러스 노발리스(Bacillus novalis), 바실러스 오딧세이(Bacillus odysseyi), 바실러스 오크헨시스(Bacillus okhensis), 바실러스 오쿠히덴시스(Bacillus okuhidensis), 바실러스 올레로니우스(Bacillus oleronius), 바실러스 오시멘시스(Bacillus oshimensis), 바실러스 팔리더스(Bacillus pallidus), 바실러스 파나시테라에(Bacillus panaciterrae), 바실러스 파타고니엔시스(Bacillus patagoniensis), 바실러스 플라코르티디스(Bacillus plakortidis), 바실러스 포체오넨시스(Bacillus pocheonensis), 바실러스 폴리고니(Bacillus polygoni), 바실러스 슈달칼리필러스(Bacillus pseudalcaliphilus), 바실러스 슈도피르머스(Bacillus pseudofirmus), 바실러스 슈도미코이데스(Bacillus pseudomycoides), 바실러스 시크로두란스(Bacillus psychrodurans), 바실러스 피크로사카롤리티커스(Bacillus psychrosaccharolyticus), 바실러스 피크로톨레란스(Bacillus psychrotolerans), 바실러스 푸밀러스(Bacillus pumilus), 바실러스 피크너스(Bacillus pycnus), 바실러스 킹다오넨시스(Bacillus qingdaonensis), 바실러스 루리스(Bacillus ruris), 바실러스 사펜시스(Bacillus safensis), 바실러스 살라리우스(Bacillus salarius), 바실러스 살리필러스(Bacillus saliphilus), 바실러스 슈레겔리(Bacillus schlegelii), 바실러스 셀레나타르세나티스(Bacillus selenatarsenatis), 바실러스 셀레니티레두센스(Bacillus selenitireducens), 바실러스 서해아넨시스(Bacillus seohaeanensis), 바실러스 샤클레토니이(Bacillus shackletonii), 바실러스 실베스트리스(Bacillus silvestris), 바실러스 심플렉스(Bacillus simplex), 바실러스 시랄리스(Bacillus siralis), 바실러스 스미티이(Bacillus smithii), 바실러스 솔리(Bacillus soli), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis), 바실러스 스패리커스(Bacillus sphaericus), 바실러스 스포로써모두란스(Bacillus sporothermodurans), 바실러스 스트라토스페리커스(Bacillus stratosphericus), 바실러스 서브테라네우스(Bacillus subterraneus), 바실러스 태안엔시스(Bacillus taeanensis), 바실러스 테퀼렌시스(Bacillus tequilensis), 바실러스 써만타르크티커스(Bacillus thermantarcticus), 바실러스 써모아밀로보란스(Bacillus thermoamylovorans), 바실러스 써모클로아카에(Bacillus thermocloacae), 바실러스 티오파란스(Bacillus thioparans), 바실러스 투스시아에(Bacillus tusciae), 바실러스 발리스모르티스(Bacillus vallismortis), 바실러스 베데리(Bacillus vedderi), 바실러스 벨레젠시스(Bacillus velezensis), 바실러스 비에트나멘시스(Bacillus vietnamensis), 바실러스 비레티(Bacillus vireti), 바실러스 와코엔시스(Bacillus wakoensis), 바실러스 웨이헨스테파넨시스(Bacillus weihenstephanensis) 등을 들 수 있다.
〔스핑고박테리움속〕
스핑고박테리움(Sphingobacterium)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 스핑고박테리움 멀티보럼(Sphingobacterium multivorum), 스핑고박테리움 스피리티보럼(Sphingobacterium spiritivorum), 스핑고박테리움 알리멘타리움(Sphingobacterium alimentarium), 스핑고박테리움 안후이엔스(Sphingobacterium anhuiense), 스핑고박테리움 안타르크티컴(Sphingobacterium antarcticum), 스핑고박테리움 밤부사에(Sphingobacterium bambusae), 스핑고박테리움 카나덴스(Sphingobacterium canadense), 스핑고박테리움 콤포스티(Sphingobacterium composti), 스핑고박테리움 대전엔스(Sphingobacterium daejeonense), 스핑고박테리움 패시움(Sphingobacterium faecium), 스핑고박테리움 헤파리넘(Sphingobacterium heparinum), 스핑고박테리움 키타히로시마엔스(Sphingobacterium kitahiroshimense), 스핑고박테리움 락티스(Sphingobacterium lactis), 스핑고박테리움 미즈타이이(Sphingobacterium mizutaii), 스핑고박테리움 네마토시다(Sphingobacterium nematocida), 스핑고박테리움 피스시움(Sphingobacterium piscium), 스핑고박테리움 샤이엔스(Sphingobacterium shayense), 스핑고박테리움 시양겐스(Sphingobacterium siyangense), 스핑고박테리움 탈포필럼(Sphingobacterium thalpophilum), 스핑고박테리움 웬크시니아에(Sphingobacterium wenxiniae) 등을 들 수 있다.
〔코마모나스속〕
코마모나스(Comamonas)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 코마모나스 아시도보란스(Comamonas acidovorans), 코마모나스 아쿠아티카(Comamonas aquatica), 코마모나스 바디아(Comamonas badia), 코마모나스 콤포스티(Comamonas composti), 코마모나스 데니트리피칸스(Comamonas denitrificans), 코마모나스 그라눌리(Comamonas granuli), 코마모나스 커스테리시이(Comamonas kerstersii), 코마모나스 코리엔시스(Comamonas koreensis), 코마모나스 니트라티보란스(Comamonas nitrativorans), 코마모나스 오돈토테르미테스(Comamonas odontotermites), 코마모나스 테라에(Comamonas terrae), 코마모나스 테리게나(Comamonas terrigena), 코마모나스 테스토스테로니(Comamonas testosteroni), 코마모나스 티오옥시단스(Comamonas thiooxydans), 코마모나스 종글리아니이(Comamonas zonglianii) 등을 들 수 있다.
〔브레분디모나스속〕
브레분디모나스(Brevundimonas)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 브레분디모나스 알바(Brevundimonas alba), 브레분디모나스 아우란티아카(Brevundimonas aurantiaca), 브레분디모나스 박테로이데스(Brevundimonas bacteroides), 브레분디모나스 바살티스(Brevundimonas basaltis), 브레분디모나스 불라타(Brevundimonas bullata), 브레분디모나스 디미누타(Brevundimonas diminuta), 브레분디모나스 인터메디아(Brevundimonas intermedia), 브레분디모나스 광천엔시스(Brevundimonas kwangchunensis), 브레분디모나스 렌타(Brevundimonas lenta), 브레분디모나스 메디테라네아(Brevundimonas mediterranea), 브레분디모나스 나스다에(Brevundimonas nasdae), 브레분디모나스 올레이(Brevundimonas olei), 브레분디모나스 서브비브리오이데스(Brevundimonas subvibrioides), 브레분디모나스 테라에(Brevundimonas terrae), 브레분디모나스 반칸네이티이(Brevundimonas vancanneytii), 브레분디모나스 바리아빌리스(Brevundimonas variabilis), 브레분디모나스 베시쿨라리스(Brevundimonas vesicularis), 브레분디모나스 비스코사(Brevundimonas viscosa) 등을 들 수 있다.
〔스핑고모나스속〕
스핑고모나스(Sphingomonas)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 스핑고모나스 아바시(Sphingomonas abaci), 스핑고모나스 아드해시바(Sphingomonas adhaesiva), 스핑고모나스 애롤라타(Sphingomonas aerolata), 스핑고모나스 아쿠아틸리스(Sphingomonas aquatilis), 스핑고모나스 아사카롤리티카(Sphingomonas asaccharolytica), 스핑고모나스 아스탁산티니파시엔스(Sphingomonas astaxanthinifaciens), 스핑고모나스 아우란티아카(Sphingomonas aurantiaca), 스핑고모나스 아조티피겐스(Sphingomonas azotifigens), 스핑고모나스 아조토포르난스(Sphingomonas azotofornans), 스핑고모나스 캅술라타(Sphingomonas capsulata), 스핑고모나스 창바이엔시스(Sphingomonas changbaiensis), 스핑고모나스 클로로페놀리카(Sphingomonas chlorophenolica), 스핑고모나스 사이나라에(Sphingomonas cynarae), 스핑고모나스 데시카빌리스(Sphingomonas desiccabilis), 스핑고모나스 독도넨시스(Sphingomonas dokdonensis), 스핑고모나스 에키노이데스(Sphingomonas echinoides), 스핑고모나스 엔도피티카(Sphingomonas endophytica), 스핑고모나스 파에니(Sphingomonas faeni), 스핑고모나스 페니카(Sphingomonas fennica), 스핑고모나스 긴세노시디무탄스(Sphingomonas ginsenosidimutans), 스핑고모나스 할로아로마티카만스(Sphingomonas haloaromaticamans), 스핑고모나스 헤르비시도보란스(Sphingomonas herbicidovorans), 스핑고모나스 후미(Sphingomonas humi), 스핑고모나스 인술라에(Sphingomonas insulae), 스핑고모나스 자포니카(Sphingomonas japonica), 스핑고모나스 자스프시(Sphingomonas jaspsi), 스핑고모나스 제주엔시스(Sphingomonas jejuensis), 스핑고모나스 코리엔시스(Sphingomonas koreensis), 스핑고모나스 마크로골타비더스(Sphingomonas macrogoltabidus), 스핑고모나스 말리(Sphingomonas mali), 스핑고모나스 멜로니스(Sphingomonas melonis), 스핑고모나스 몰루스코럼(Sphingomonas molluscorum), 스핑고모나스 뮤코시시마(Sphingomonas mucosissima), 스핑고모나스 나타토리아(Sphingomonas natatoria), 스핑고모나스 올리고페놀리카(Sphingomonas oligophenolica), 스핑고모나스 파니(Sphingomonas panni), 스핑고모나스 파라파우시모빌리스(Sphingomonas parapaucimobilis), 스핑고모나스 파우시모빌리스(Sphingomonas paucimobilis), 스핑고모나스 필로스패라에(Sphingomonas phyllosphaerae), 스핑고모나스 피투이토사(Sphingomonas pituitosa), 스핑고모나스 폴리아로마티시보란스(Sphingomonas polyaromaticivorans), 스핑고모나스 프루니(Sphingomonas pruni), 스핑고모나스 로사(Sphingomonas rosa), 스핑고모나스 로세이플라바(Sphingomonas roseiflava), 스핑고모나스 루브라(Sphingomonas rubra), 스핑고모나스 상귀니스(Sphingomonas sanguinis), 스핑고모나스 솔리(Sphingomonas soli), 스핑고모나스 수베리파시엔스(Sphingomonas suberifaciens), 스핑고모나스 서브테라네아(Sphingomonas subterranea), 스핑고모나스 테라에(Sphingomonas terrae), 스핑고모나스 트루에페리(Sphingomonas trueperi), 스핑고모나스 우르신콜라(Sphingomonas ursincola), 스핑고모나스 윗치이(Sphingomonas wittichii), 스핑고모나스 야부우치아에(Sphingomonas yabuuchiae), 스핑고모나스 야노이쿠야에(Sphingomonas yanoikuyae), 스핑고모나스 윈난엔시스(sphingomonas yunnanensis) 등을 들 수 있다.
〔오크로박트럼속〕
오크로박트럼(Ochrobactrum)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 오크로박트럼 안트로피(Ochrobactrum anthropi), 오크로박트럼 사이티시(Ochrobactrum cytisi), 오크로박트럼 대전엔스(Ochrobactrum daejeonense), 오크로박트럼 갈리니패시스(Ochrobactrum gallinifaecis), 오크로박트럼 그리그노넨스(Ochrobactrum grignonense), 오크로박트럼 해모필럼(Ochrobactrum haemophilum), 오크로박트럼 인터메디움(Ochrobactrum intermedium), 오크로박트럼 루피니(Ochrobactrum lupini), 오크로박트럼 오리제(Ochrobactrum oryzae), 오크로박트럼 슈딩테르메디움(Ochrobactrum pseudintermedium), 오크로박트럼 슈도그리그노넨스(Ochrobactrum pseudogrignonense), 오크로박트럼 티오페니보란스(Ochrobactrum thiophenivorans), 오크로박트럼 트리티시(Ochrobactrum tritici) 등을 들 수 있다.
〔페도박터속〕
페도박터(Pedobacter)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 페도박터 아프리카너스(Pedobacter africanus), 페도박터 아그리(Pedobacter agri), 페도박터 알루비우스(Pedobacter alluvius), 페도박터 아쿠아틸리스(Pedobacter aquatilis), 페도박터 보리알리스(Pedobacter borealis), 페도박터 카에니(Pedobacter caeni), 페도박터 콤포스티(Pedobacter composti), 페도박터 크리오코니티스(Pedobacter cryoconitis), 페도박터 대청엔시스(Pedobacter daechungensis), 페도박터 두라쿠아에(Pedobacter duraquae), 페도박터 진셍기솔리(Pedobacter ginsengisoli), 페도박터 하르토니우스(Pedobacter hartonius), 페도박터 헤파리너스(Pedobacter heparinus), 페도박터 히말라이엔시스(Pedobacter himalayensis), 페도박터 정능엔시스(Pedobacter jeongneungensis), 페도박터 코리엔시스(Pedobacter koreensis), 페도박터 렌터스(Pedobacter lentus), 페도박터 메타볼리파우퍼(Pedobacter metabolipauper), 페도박터 니악켄시스(Pedobacter nyackensis), 페도박터 파나시테라에(Pedobacter panaciterrae), 페도박터 피스시움(Pedobacter piscium), 페도박터 로세우스(Pedobacter roseus), 페도박터 살탄스(Pedobacter saltans), 페도박터 스테이니이(Pedobacter steynii), 페도박터 수원엔시스(Pedobacter suwonensis), 페도박터 테리콜라(Pedobacter terricola) 등을 들 수 있다.
〔패니바실러스속〕
패니바실러스(Paenibacillus)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 패니바실러스 애스투아리이(Paenibacillus aestuarii), 패니바실러스 알기놀리티커스(Paenibacillus alginolyticus), 패니바실러스 알고리폰티콜라(Paenibacillus algorifonticola), 패니바실러스 알베이(Paenibacillus alvei), 패니바실러스 아밀롤리티커스(Paenibacillus amylolyticus), 패니바실러스 아피아리우스(Paenibacillus apiarius), 패니바실러스 아사멘시스(Paenibacillus assamensis), 패니바실러스 아조리두센스(Paenibacillus azoreducens), 패니바실러스 아조토픽산스(Paenibacillus azotofixans), 패니바실러스 바시노넨시스(Paenibacillus barcinonensis), 패니바실러스 바렌골트지이(Paenibacillus barengoltzii), 패니바실러스 캄피나센시스(Paenibacillus campinasensis), 패니바실러스 셀룰로실리티커스(Paenibacillus cellulosilyticus), 패니바실러스 치벤시스(Paenibacillus chibensis), 패니바실러스 치티놀리티커스(Paenibacillus chitinolyticus), 패니바실러스 콘드로이티너스(Paenibacillus chondroitinus), 패니바실러스 커들라놀리티커스(Paenibacillus curdlanolyticus), 패니바실러스 대전엔시스(Paenibacillus daejeonensis), 패니바실러스 듀러스(Paenibacillus durus), 패니바실러스 에히멘시스(Paenibacillus ehimensis), 패니바실러스 엘기이(Paenibacillus elgii), 패니바실러스 필리시스(Paenibacillus filicis), 패니바실러스 프리고리레시스텐스(Paenibacillus frigoriresistens), 패니바실러스 간수엔시스(Paenibacillus gansuensis), 패니바실러스 진셍기후미(Paenibacillus ginsengihumi), 패니바실러스 글루카놀리티커스(Paenibacillus glucanolyticus), 패니바실러스 클리카닐리티커스(Paenibacillus glycanilyticus), 패니바실러스 그라미니스(Paenibacillus graminis), 패니바실러스 호도가이엔시스(Paenibacillus hodogayensis), 패니바실러스 호르데이(Paenibacillus hordei), 패니바실러스 휴미커스(Paenibacillus humicus), 패니바실러스 일리노이센시스(Paenibacillus illinoisensis), 패니바실러스 자밀라에(Paenibacillus jamilae), 패니바실러스 코벤시스(Paenibacillus kobensis), 패니바실러스 콜레오보란스(Paenibacillus koleovorans), 패니바실러스 콘시덴시스(Paenibacillus konsidensis), 패니바실러스 크리벤시스(Paenibacillus kribbensis), 패니바실러스 라바에 아종 라바에(Paenibacillus larvae subsp. larvae), 패니바실러스 라바에 아종 풀비파시엔스(Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens), 패니바실러스 라우터스(Paenibacillus lautus), 패니바실러스 마세란스(Paenibacillus macerans), 패니바실러스 맥쿠아리엔시스 아종 데펜서(Paenibacillus macquariensis subsp. defensor), 패니바실러스 멘델리(Paenibacillus mendelii), 패니바실러스 모토부엔시스(Paenibacillus motobuensis), 패니바실러스 나프탈레노보란스(Paenibacillus naphthalenovorans), 패니바실러스 네마토필러스(Paenibacillus nematophilus), 패니바실러스 오세아니세디미니스(Paenibacillus oceanisediminis), 패니바실러스 오도리퍼(Paenibacillus odorifer), 패니바실러스 파불리(Paenibacillus pabuli), 패니바실러스 파사데넨시스(Paenibacillus pasadenensis), 패니바실러스 페오리아에(Paenibacillus peoriae), 패니바실러스 포에니시스(Paenibacillus phoenicis), 패니바실러스 피니(Paenibacillus pini), 패니바실러스 피니후미(Paenibacillus pinihumi), 패니바실러스 폴리믹사(Paenibacillus polymyxa), 패니바실러스 푸에리(Paenibacillus pueri), 패니바실러스 리구이(Paenibacillus rigui), 패니바실러스 스텔리퍼(Paenibacillus stellifer), 패니바실러스 타이완엔시스(Paenibacillus taiwanensis), 패니바실러스 테라에(Paenibacillus terrae), 패니바실러스 테리게나(Paenibacillus terrigena), 패니바실러스 써모필러스(Paenibacillus thermophilus), 패니바실러스 티아미놀리티커스(Paenibacillus thiaminolyticus), 패니바실러스 툰드라에(Paenibacillus tundrae), 패니바실러스 발리더스(Paenibacillus validus), 패니바실러스 불네리스(Paenibacillus vulneris), 패니바실러스 우포넨시스(Paenibacillus wooponensis), 패니바실러스 크실라니클라스티커스(Paenibacillus xylaniclasticus) 등을 들 수 있다.
〔아크로모박터속〕
아크로모박터(Achromobacter)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 아크로모박터 아세니톡시단스(Achromobacter arsenitoxydans), 아크로모박터 콜리노파검(Achromobacter cholinophagum), 아크로모박터 사이클로클라스테스(Achromobacter cycloclastes), 아크로모박터 데니트리피칸스(Achromobacter denitrificans), 아크로모박터 피스케리(Achromobacter fischeri), 아크로모박터 하틀레비이(Achromobacter hartlebii), 아크로모박터 이모빌리스(Achromobacter immobilis), 아크로모박터 인솔리터스(Achromobacter insolitus), 아크로모박터 락톨리티커스(Achromobacter lactolyticus), 아크로모박터 라이티커스(Achromobacter lyticus), 아크로모박터 메타놀로필라(Achromobacter methanolophila), 아크로모박터 페스티퍼(Achromobacter pestifer), 아크로모박터 파이차우디이(Achromobacter piechaudii), 아크로모박터 루할란디이(Achromobacter ruhlandii), 아크로모박터 스파니오스(Achromobacter spanios), 아크로모박터 비스코서스(Achromobacter viscosus), 아크로모박터 크세로시스(Achromobacter xerosis), 아크로모박터 크실로속시단스(Achromobacter xylosoxidans), 아크로모박터 크실로속시단스 아종 데니트리피칸스(Achromobacter xylosoxidans subsp. denitrificans), 아크로모박터 크실로속시단스 아종 크실로속시단스(Achromobacter xylosoxidans subsp. xylosoxidans) 등을 들 수 있다.
〔아시네토박터속〕
아시네토박터(Acinetobacter)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 아시네토박터 바우마니이(Acinetobacter baumannii), 아시네토박터 아일리이(Acinetobacter aylyi), 아시네토박터 바이제링키이(Acinetobacter beijerinckii), 아시네토박터 베레지니아에(Acinetobacter bereziniae), 아시네토박터 보우베티이(Acinetobacter boubetii), 아시네토박터 칼코아세티커스(Acinetobacter calcoaceticus), 아시네토박터 게르네리(Acinetobacter gerneri), 아시네토박터 그리몬티이(Acinetobacter grimontii), 아시네토박터 길로우이아에(Acinetobacter guilouiae), 아시네토박터 길렌베르기이(Acinetobacter gyllenbergii), 아시네토박터 해몰리티커스(Acinetobacter haemolyticus), 아시네토박터 존소니이(Acinetobacter johnsonii), 아시네토박터 주니이(Acinetobacter junii), 아시네토박터 경기엔시스(Acinetobacter kyonggiensis), 아시네토박터 루피이(Acinetobacter lwoffii), 아시네토박터 올레이보란스(Acinetobacter oleivorans), 아시네토박터 파르버스(Acinetobacter parvus), 아시네토박터 사이크로톨레란스(Acinetobacter psychrotolerans), 아시네토박터 라디오레시스텐스(Acinetobacter radioresistens), 아시네토박터 쉰들레리(Acinetobacter schindleri), 아시네토박터 솔리(Acinetobacter soli), 아시네토박터 탄도이이(Acinetobacter tandoii), 아시네토박터 타타로게네스(Acinetobacter tartarogenes), 아시네토박터 티전베르기아에(Acinetobacter tjernbergiae), 아시네토박터 토우네리(Acinetobacter towneri), 아시네토박터 우르싱기이(Acinetobacter ursingii), 아시네토박터 베네티아너스(Acinetobacter venetianus) 등을 들 수 있다.
〔쉐와넬라속〕
쉐와넬라(Shewanella)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 쉐와넬라 피에조톨레란스(Shewanella piezotolerans), 쉐와넬라 아비시(Shewanella abyssi), 쉐와넬라 아피니스(Shewanella affinis), 쉐와넬라 알가에(Shewanella algae), 쉐와넬라 알기디피시콜라(Shewanella algidipiscicola), 쉐와넬라 아마존엔시스(Shewanella amazonensis), 쉐와넬라 아퀴마리나(Shewanella aquimarina), 쉐와넬라 아르크티카(Shewanella arctica), 쉐와넬라 아틀란티카(Shewanella atlantica), 쉐와넬라 발티카(Shewanella baltica), 쉐와넬라 바살티스(Shewanella basaltis), 쉐와넬라 벤티카(Shewanella benthica), 쉐와넬라 칸다덴시스(Shewanella candadensis), 쉐와넬라 칠리켄시스(Shewanella chilikensis), 쉐와넬라 콜웰리아나(Shewanella colwelliana), 쉐와넬라 코랄리이(Shewanella corallii), 쉐와넬라 데콜콜라티오니스(Shewanella decolorationis), 쉐와넬라 데니트리피칸스(Shewanella denitrificans), 쉐와넬라 동해엔시스(Shewanella donghaensis), 쉐와넬라 피델리스(Shewanella fidelis), 쉐와넬라 포디나에(Shewanella fodinae), 쉐와넬라 프리기디마리나(Shewanella frigidimarina), 쉐와넬라 개트불리(Shewanella gaetbuli), 쉐와넬라 겔리디마리나(Shewanella gelidimarina), 쉐와넬라 글라시알리피시콜라(Shewanella glacialipiscicola), 쉐와넬라 고페리이(Shewanella gopherii), 쉐와넬라 하프니엔시스(Shewanella hafniensis), 쉐와넬라 할리팍센시스(Shewanella halifaxensis), 쉐와넬라 할리오티스(Shewanella haliotis), 쉐와넬라 하네다이(Shewanella hanedai), 쉐와넬라 자포니카(Shewanella japonica), 쉐와넬라 카이레이티카(Shewanella kaireitica), 쉐와넬라 리빙스톤엔시스(Shewanella ivingstonensis), 쉐와넬라 로이히카(Shewanella loihica), 쉐와넬라 마리나(Shewanella marina), 쉐와넬라 마리닌테스티나(Shewanella marinintestina), 쉐와넬라 마리스플라비(Shewanella marisflavi), 쉐와넬라 모르후아에(Shewanella morhuae), 쉐와넬라 올레야나(Shewanella olleyana), 쉐와넬라 오네이덴시스(Shewanella oneidensis), 쉐와넬라 파시피카(Shewanella pacifica), 쉐와넬라 페알레아나(Shewanella pealeana), 쉐와넬라 뉴마토포리(Shewanella pneumatophori), 쉐와넬라 프로푼다(Shewanella profunda), 쉐와넬라 푸트레파시엔스(Shewanella putrefaciens), 쉐와넬라 사이라에(Shewanella sairae), 쉐와넬라 슈레겔리아나(Shewanella schlegeliana), 쉐와넬라 세디미니스(Shewanella sediminis), 쉐와넬라 수루겐시스(Shewanella surugensis), 쉐와넬라 베시쿨로사(Shewanella vesiculosa), 쉐와넬라 비올라세아(Shewanella violacea), 쉐와넬라 왁스마니이(Shewanella waksmanii), 쉐와넬라 우디이(Shewanella woodyi), 쉐와넬라 크시아메넨시스(Shewanella xiamenensis) 등을 들 수 있다.
〔리스토넬라속〕
리스토넬라(Listonella)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 리스토넬라 앙귈라라(Listonella anguillara), 리스토넬라 앙귈라럼(Listonella anguillarum), 리스토넬라 펠라지아(Listonella pelagia) 등을 들 수 있다.
〔아그로박테리움속〕
아그로박테리움(Agrobacterium)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 아그로박테리움 아길레(Agrobacterium agile), 아그로박테리움 아우레움(Agrobacterium aureum), 아그로박테리움 아조토필럼(Agrobacterium azotophilum), 아그로박테리움 깁소필라에(Agrobacterium gypsophilae), 아그로박테리움 루테움(Agrobacterium luteum), 아그로박테리움 슈도츠가에(Agrobacterium pseudotsugae), 아그로박테리움 리조게네스(Agrobacterium rhizogenes), 아그로박테리움 페루기네움(Agrobacterium ferrugineum), 아그로박테리움 산귀네움(Agrobacterium sanguineum), 아그로박테리움 투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens), 아그로박테리움 비스코섬(Agrobacterium viscosum), 아그로박테리움 비티스(Agrobacterium vitis) 등을 들 수 있다.
〔메소리조비움속〕
메소리조비움(Mesorhizobium)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 메소리조비움 알비지아에(Mesorhizobium albiziae), 메소리조비움 아모르파에(Mesorhizobium amorphae), 메소리조비움 오스트랄리컴(Mesorhizobium australicum), 메소리조비움 카라가나에(Mesorhizobium caraganae), 메소리조비움 차코엔스(Mesorhizobium chacoense), 메소리조비움 시세리(Mesorhizobium ciceri), 메소리조비움 고비엔스(Mesorhizobium gobiense), 메소리조비움 로티(Mesorhizobium loti), 메소리조비움 메디테라네움(Mesorhizobium mediterraneum), 메소리조비움 메탈리두란스(Mesorhizobium metallidurans), 메소리조비움 오포르투니스텀(Mesorhizobium opportunistum), 메소리조비움 플루리파리움(Mesorhizobium plurifarium), 메소리조비움 화쿠이이(Mesorhizobium huakuii), 메소리조비움 셉텐트리오날레(Mesorhizobium septentrionale), 메소리조비움 샹그릴렌스(Mesorhizobium shangrilense), 메소리조비움 타리멘스(Mesorhizobium tarimense), 메소리조비움 템퍼라텀(Mesorhizobium temperatum), 메소리조비움 티오강게티컴(Mesorhizobium thiogangeticum), 메소리조비움 티안샤넨스(Mesorhizobium tianshanense) 등을 들 수 있다.
〔리조비움속〕
리조비움(Rhizobium)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 리조비움 알라미이(Rhizobium alamii), 리조비움 알칼리솔리(Rhizobium alkalisoli), 리조비움 셀룰로실리티컴(Rhizobium cellulosilyticum), 리조비움 대전엔스(Rhizobium daejeonense), 리조비움 엔도피티컴(Rhizobium endophyticum), 리조비움 에틀리(Rhizobium etli), 리조비움 파바에(Rhizobium fabae), 리조비움 갈리컴(Rhizobium gallicum), 리조비움 기아르디니이(Rhizobium giardinii), 리조비움 그라하미이(Rhizobium grahamii), 리조비움 하이난엔스(Rhizobium hainanense), 리조비움 후아우틀렌스(Rhizobium huautlense), 리조비움 갈레가에(Rhizobium galegae), 리조비움 인디카(Rhizobium indica), 리조비움 인디커스(Rhizobium indicus), 리조비움 인디고페라에(Rhizobium indigoferae), 리조비움 라리무레이(Rhizobium larrymoorei), 리조비움 레구미노사럼(Rhizobium leguminosarum), 리조비움 로이카에나에(Rhizobium leucaenae), 리조비움 로에센스(Rhizobium loessense), 리조비움 루피니(Rhizobium lupini), 리조비움 루시타넘(Rhizobium lusitanum), 리조비움 메소시니컴(Rhizobium mesosinicum), 리조비움 밀루오넨스(Rhizobium miluonense), 리조비움 몽골엔스(Rhizobium mongolense), 리조비움 멀티호스피티움(Rhizobium multihospitium), 리조비움 나가쥬나 나가렌시스(Rhizobium nagarjuna nagarensis), 리조비움 오리제(Rhizobium oryzae), 리조비움 파세올리(Rhizobium phaseoli), 리조비움 피시(Rhizobium pisi), 리조비움 푸센스(Rhizobium pusense), 리조비움 라디오박터(Rhizobium radiobacter), 리조비움 리조겐스(Rhizobium rhizogenes), 리조비움 루비(Rhizobium rubi), 리조비움 셀레니티레두센스(Rhizobium selenitireducens), 리조비움 솔리(Rhizobium soli), 리조비움 술라에(Rhizobium sullae), 리조비움 티베티컴(Rhizobium tibeticum), 리조비움 트리폴리이(Rhizobium trifolii), 리조비움 트로피시(Rhizobium tropici), 리조비움 툭스틀렌스(Rhizobium tuxtlense), 리조비움 운디콜라(Rhizobium undicola), 리조비움 발리덤(Rhizobium validum), 리조비움 비티스(Rhizobium vitis) 등을 들 수 있다.
〔파라코커스속〕
파라코커스(Paracoccus)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 파라코커스 애스투아리이(Paracoccus aestuarii), 파라코커스 알칼리필러스(Paracoccus alcaliphilus), 파라코커스 알케니퍼(Paracoccus alkenifer), 파라코커스 아미노필러스(Paracoccus aminophilus), 파라코커스 아미노보란스(Paracoccus aminovorans), 파라코커스 베이부엔시스(Paracoccus beibuensis), 파라코커스 벵갈엔시스(Paracoccus bengalensis), 파라코커스 치넨시스(Paracoccus chinensis), 파라코커스 데니트리피칸스(Paracoccus denitrificans), 파라코커스 할로필러스(Paracoccus halophilus), 파라코커스 호미엔시스(Paracoccus homiensis), 파라코커스 코쿠리이(Paracoccus kocurii), 파라코커스 카에니(Paracoccus caeni), 파라코커스 콘드라티바에(Paracoccus kondratievae), 파라코커스 코리엔시스(Paracoccus koreensis), 파라코커스 마리너스(Paracoccus marinus), 파라코커스 메틸루텐스(Paracoccus methylutens), 파라코커스 오세아넨스(Paracoccus oceanense), 파라코커스 판토트로퍼스(Paracoccus pantotrophus), 파라코커스 세리니필러스(Paracoccus seriniphilus), 파라코커스 솔벤티보란스(Paracoccus solventivorans), 파라코커스 술푸록시단스(Paracoccus sulfuroxidans), 파라코커스 티오시아나터스(Paracoccus thiocyanatus), 파라코커스 베르수터스(Paracoccus versutus), 파라코커스 이에이(Paracoccus yeei), 파라코커스 제아크산티니파시엔스(Paracoccus zeaxanthinifaciens) 등을 들 수 있다.
〔크산토박터속〕
크산토박터(Xanthobacter)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 크산토박터 아길리스(Xanthobacter agilis), 크산토박터 아미녹시단스(Xanthobacter aminoxidans), 크산토박터 아우토트로피커스(Xanthobacter autotrophicus), 크산토박터 플라버스(Xanthobacter flavus), 크산토박터 타게티디스(Xanthobacter tagetidis), 크산토박터 비스코서스(Xanthobacter viscosus) 등을 들 수 있다.
〔스트렙토마이세스속〕
스트렙토마이세스(Streptomyces)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 스트렙토마이세스 아비코엔시스(Streptomyces abikoensis), 스트렙토마이세스 아부라비엔시스(Streptomyces aburaviensis), 스트렙토마이세스 아부라비엔시스 아종 투프트포르미스(Streptomyces aburaviensis subsp. tuftformis), 스트렙토마이세스 아크로모게네스(Streptomyces achromogenes), 스트렙토마이세스 아크로모게네스 아종 아크로모게네스(Streptomyces achromogenes subsp. achromogenes), 스트렙토마이세스 아크로모게네스 아종 루브라디리스(Streptomyces achromogenes subsp. rubradiris), 스트렙토마이세스 아크로모게네스 아종 스트렙토조티커스(Streptomyces achromogenes subsp. streptozoticus), 스트렙토마이세스 아크로모게네스 아종 토메이마이세티커스(Streptomyces achromogenes subsp. tomaymyceticus), 스트렙토마이세스 아시디스카비에스(Streptomyces acidiscabies), 스트렙토마이세스 아시도레시스탄스(Streptomyces acidoresistans), 스트렙토마이세스 아크리미시니(Streptomyces acrimycini), 스트렙토마이세스 악투오서스(Streptomyces actuosus), 스트렙토마이세스 아쿨레올라터스(Streptomyces aculeolatus), 스트렙토마이세스 아데포스폴리티커스(Streptomyces adephospholyticus), 스트렙토마이세스 아프가니엔시스(Streptomyces afghaniensis), 스트렙토마이세스 아프리카너스(Streptomyces africanus), 스트렙토마이세스 아글로메라터스(Streptomyces agglomeratus), 스트렙토마이세스 아히그로스코피커스(Streptomyces ahygroscopicus), 스트렙토마이세스 아키요시엔시스(Streptomyces akiyoshiensis), 스트렙토마이세스 알라노시니커스(Streptomyces alanosinicus), 스트렙토마이세스 알바둔커스(Streptomyces albaduncus), 스트렙토마이세스 알비악시알리스(Streptomyces albiaxialis), 스트렙토마이세스 알비도크로모게네스(Streptomyces albidochromogenes), 스트렙토마이세스 알비도플라버스(Streptomyces albidoflavus), 스트렙토마이세스 알비더스(Streptomyces albidus), 스트렙토마이세스 알비레티쿨리(Streptomyces albireticuli), 스트렙토마이세스 알보크로모게네스(Streptomyces albochromogenes), 스트렙토마이세스 알보시네레센스(Streptomyces albocinerescens), 스트렙토마이세스 알보파시엔스(Streptomyces albofaciens), 스트렙토마이세스 알보플라버스(Streptomyces alboflavus), 스트렙토마이세스 알보그리세올러스(Streptomyces albogriseolus), 스트렙토마이세스 알보헬바터스(Streptomyces albohelvatus), 스트렙토마이세스 알보롱거스(Streptomyces albolongus), 스트렙토마이세스 알보니거(Streptomyces alboniger), 스트렙토마이세스 알보피너스(Streptomyces albospinus), 스트렙토마이세스 알보스포레우스(Streptomyces albosporeus), 스트렙토마이세스 알보스포레우스 아종 라빌로마이세티커스(Streptomyces albosporeus subsp. labilomyceticus), 스트렙토마이세스 알보비나세우스(Streptomyces albovinaceus), 스트렙토마이세스 알보비리디스(Streptomyces alboviridis), 스트렙토마이세스 알불러스(Streptomyces albulus), 스트렙토마이세스 알버스(Streptomyces albus), 스트렙토마이세스 알버스 아종 알버스(Streptomyces albus subsp. albus), 스트렙토마이세스 알버스 아종 콜레이마이세티커스(Streptomyces albus subsp. coleimyceticus), 스트렙토마이세스 알버스 아종 파토시디커스(Streptomyces albus subsp. pathocidicus), 스트렙토마이세스 알칼로필러스(Streptomyces alcalophilus), 스트렙토마이세스 알름퀴스티이(Streptomyces almquistii), 스트렙토마이세스 알니(Streptomyces alni), 스트렙토마이세스 알티오티커스(Streptomyces althioticus), 스트렙토마이세스 아마가사켄시스(Streptomyces amagasakensis), 스트렙토마이세스 아마쿠사엔시스(Streptomyces amakusaensis), 스트렙토마이세스 암보파시엔스(Streptomyces ambofaciens), 스트렙토마이세스 아미노필러스(Streptomyces aminophilus), 스트렙토마이세스 아난디이(Streptomyces anandii), 스트렙토마이세스 앙구스트마이세티커스(Streptomyces angustmyceticus), 스트렙토마이세스 안소크로모게네스 아종 안소크로모게네스(Streptomyces ansochromogenes subsp. ansochromogenes), 스트렙토마이세스 안토시아니커스(Streptomyces anthocyanicus), 스트렙토마이세스 안티바이오티커스(Streptomyces antibioticus), 스트렙토마이세스 안티피브리놀리티커스(Streptomyces antifibrinolyticus), 스트렙토마이세스 안티마이코티커스(Streptomyces antimycoticus), 스트렙토마이세스 애뉼라터스(Streptomyces anulatus), 스트렙토마이세스 아오미엔시스(Streptomyces aomiensis), 스트렙토마이세스 아라비커스(Streptomyces arabicus), 스트렙토마이세스 아르더스(Streptomyces ardus), 스트렙토마이세스 아레나에(Streptomyces arenae), 스트렙토마이세스 아르겐테올러스(Streptomyces argenteolus), 스트렙토마이세스 아르겐테올러스 아종 토요나켄시스(Streptomyces argenteolus subsp. toyonakensis), 스트렙토마이세스 아르길라세우스(Streptomyces argillaceus), 스트렙토마이세스 아르메니아커스(Streptomyces armeniacus), 스트렙토마이세스 아르멘토서스(Streptomyces armentosus), 스트렙토마이세스 아르시티엔시스(Streptomyces arsitiensis), 스트렙토마이세스 아스코미시니커스(Streptomyces ascomycinicus), 스트렙토마이세스 아시아티커스(Streptomyces asiaticus), 스트렙토마이세스 아스테로스포러스(Streptomyces asterosporus), 스트렙토마이세스 아트라터스(Streptomyces atratus), 스트렙토마이세스 아트로아우란티아커스(Streptomyces atroaurantiacus), 스트렙토마이세스 아트로시아네우스(Streptomyces atrocyaneus), 스트렙토마이세스 아트로파시엔스(Streptomyces atrofaciens), 스트렙토마이세스 아트롤라커스(Streptomyces atrolaccus), 스트렙토마이세스 아트로올리바세우스(Streptomyces atroolivaceus), 스트렙토마이세스 아트로비올라세우스(Streptomyces atroviolaceus), 스트렙토마이세스 아트로비렌스(Streptomyces atrovirens), 스트렙토마이세스 아우란티아코그리세우스(Streptomyces aurantiacogriseus), 스트렙토마이세스 아우란티아커스(Streptomyces aurantiacus), 스트렙토마이세스 아우란티오그리세우스(Streptomyces aurantiogriseus), 스트렙토마이세스 아우라터스(Streptomyces auratus), 스트렙토마이세스 아우레오서쿨라터스(Streptomyces aureocirculatus), 스트렙토마이세스 아우레오파시엔스(Streptomyces aureofaciens), 스트렙토마이세스 아우레오모노포디알레스(Streptomyces aureomonopodiales), 스트렙토마이세스 아우레오렉터스(Streptomyces aureorectus), 스트렙토마이세스 아우레오버티실라터스(Streptomyces aureoverticillatus), 스트렙토마이세스 아우레우스(Streptomyces aureus), 스트렙토마이세스 아우리기네우스(Streptomyces aurigineus), 스트렙토마이세스 아벨라네우스(Streptomyces avellaneus), 스트렙토마이세스 아베르멕티니우스(Streptomyces avermectinius), 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis), 스트렙토마이세스 아비세니에(Streptomyces avicenniae), 스트렙토마이세스 아비디니이(Streptomyces avidinii), 스트렙토마이세스 아크시넬라에(Streptomyces axinellae), 스트렙토마이세스 아주레우스(Streptomyces azureus), 스트렙토마이세스 바아르넨시스(Streptomyces baarnensis), 스트렙토마이세스 바실라리스(Streptomyces bacillaris), 스트렙토마이세스 바디우스(Streptomyces badius), 스트렙토마이세스 발리엔시스(Streptomyces baliensis), 스트렙토마이세스 밤베르기엔시스(Streptomyces bambergiensis), 스트렙토마이세스 방글라데시엔시스(Streptomyces bangladeshensis), 스트렙토마이세스 방글라데시엔시스(Streptomyces bangladeshiensis), 스트렙토마이세스 베이지앙엔시스(Streptomyces beijiangensis), 스트렙토마이세스 벨루스(Streptomyces bellus), 스트렙토마이세스 벨루스 아종 시롤레로서스(Streptomyces bellus subsp. cirolerosus), 스트렙토마이세스 버넨시스(Streptomyces bernensis), 스트렙토마이세스 비콜로르(Streptomyces bicolor), 스트렙토마이세스 비푸르커스(Streptomyces bifurcus), 스트렙토마이세스 비키니엔시스(Streptomyces bikiniensis), 스트렙토마이세스 비키니엔시스 아종 조르보넨시스(Streptomyces bikiniensis subsp. zorbonensis), 스트렙토마이세스 블라스트마이세티커스(Streptomyces blastmyceticus), 스트렙토마이세스 블루엔시스(Streptomyces bluensis), 스트렙토마이세스 보빌리(Streptomyces bobili), 스트렙토마이세스 보트로펜시스(Streptomyces bottropensis), 스트렙토마이세스 브라질리엔시스(Streptomyces brasiliensis), 스트렙토마이세스 브레비스프로러스(Streptomyces brevisprorus), 스트렙토마이세스 브루네오그리세우스(Streptomyces brunneogriseus), 스트렙토마이세스 분고엔시스(Streptomyces bungoensis), 스트렙토마이세스 카카오이(Streptomyces cacaoi), 스트렙토마이세스 카카오이 아종 아소엔시스(Streptomyces cacaoi subsp. asoensis), 스트렙토마이세스 카카오이 아종 카카오이(Streptomyces cacaoi subsp. cacaoi), 스트렙토마이세스 캘레스티스(Streptomyces caelestis), 스트렙토마이세스 캘리커스(Streptomyces caelicus), 스트렙토마이세스 캐룰레우스(Streptomyces caeruleus), 스트렙토마이세스 캐시우스(Streptomyces caesius), 스트렙토마이세스 칼리포르니커스(Streptomyces californicus), 스트렙토마이세스 칼버스(Streptomyces calvus), 스트렙토마이세스 카나디엔시스(Streptomyces canadiensis), 스트렙토마이세스 카나리우스(Streptomyces canarius), 스트렙토마이세스 칸디더스(Streptomyces candidus), 스트렙토마이세스 카네센스(Streptomyces canescens), 스트렙토마이세스 캉그링엔시스(Streptomyces cangkringensis), 스트렙토마이세스 카니페러스(Streptomyces caniferus), 스트렙토마이세스 카너스(Streptomyces canus), 스트렙토마이세스 카필리스피랄리스(Streptomyces capillispiralis), 스트렙토마이세스 카포아무스(Streptomyces capoamus), 스트렙토마이세스 카푸엔시스(Streptomyces capuensis), 스트렙토마이세스 카르노서스(Streptomyces carnosus), 스트렙토마이세스 카르파티커스(Streptomyces carpaticus), 스트렙토마이세스 카르피넨시스(Streptomyces carpinensis), 스트렙토마이세스 카스타네오글로비스포러스(Streptomyces castaneoglobisporus), 스트렙토마이세스 카스타네우스(Streptomyces castaneus), 스트렙토마이세스 카스텔라렌시스(Streptomyces castelarensis), 스트렙토마이세스 카테눌라에(Streptomyces catenulae), 스트렙토마이세스 카틀레야(Streptomyces cattleya), 스트렙토마이세스 카보렌시스(Streptomyces cavourensis), 스트렙토마이세스 카보렌시스 아종 카보렌시스(Streptomyces cavourensis subsp. cavourensis), 스트렙토마이세스 세비마렌시스(Streptomyces cebimarensis), 스트렙토마이세스 셀로스타티커스(Streptomyces cellostaticus), 스트렙토마이세스 셀룰로플라버스(Streptomyces celluloflavus), 스트렙토마이세스 셀룰로사에(Streptomyces cellulosae), 스트렙토마이세스 참파바티이(Streptomyces champavatii), 스트렙토마이세스 차르트레우시스(Streptomyces chartreusis), 스트렙토마이세스 채타누겐시스(Streptomyces chattanoogensis), 스트렙토마이세스 천안엔시스(Streptomyces cheonanensis), 스트렙토마이세스 치앙마이엔시스(Streptomyces chiangmaiensis), 스트렙토마이세스 치바엔시스(Streptomyces chibaensis), 스트렙토마이세스 클로로크로모게네스(Streptomyces chlorochromogenes), 스트렙토마이세스 크레스토마이세티커스(Streptomyces chrestomyceticus), 스트렙토마이세스 크레스토마이세티커스 아종 루베센스(Streptomyces chrestomyceticus subsp. rubescens), 스트렙토마이세스 크로모푸스커스(Streptomyces chromofuscus), 스트렙토마이세스 크로모게너스(Streptomyces chromogenus), 스트렙토마이세스 크리세우스(Streptomyces chryseus), 스트렙토마이세스 크리소말러스(Streptomyces chrysomallus), 스트렙토마이세스 크리소말러스 아종 푸미가터스(Streptomyces chrysomallus subsp. fumigatus), 스트렙토마이세스 충휀시스(Streptomyces chungwhensis), 스트렙토마이세스 시네레오렉터스(Streptomyces cinereorectus), 스트렙토마이세스 시네레오루버(Streptomyces cinereoruber), 스트렙토마이세스 시네레오루버 아종 시네레오루버(Streptomyces cinereoruber subsp.cinereoruber), 스트렙토마이세스 시네레오루버 아종 프룩토페르멘탄스(Streptomyces cinereoruber subsp. fructofermentans), 스트렙토마이세스 시네레오스피너스(Streptomyces cinereospinus), 스트렙토마이세스 시네레우스(Streptomyces cinereus), 스트렙토마이세스 시네로크로모게네스(Streptomyces cinerochromogenes), 스트렙토마이세스 신나바리너스(Streptomyces cinnabarinus), 스트렙토마이세스 신나모카스타네우스(Streptomyces cinnamocastaneus), 스트렙토마이세스 신나모넨시스(Streptomyces cinnamonensis), 스트렙토마이세스 신나모네우스(Streptomyces cinnamoneus), 스트렙토마이세스 신나모네우스 아종 알보스포러스(Bosporus)(Streptomyces cinnamoneus subsp. albosporus), 스트렙토마이세스 신나모네우스 아종 포르마 아자콜루타(Streptomyces cinnamoneus subsp. forma azacoluta), 스트렙토마이세스 신나모네우스 아종 라노서스(Streptomyces cinnamoneus subsp. lanosus), 스트렙토마이세스 신나모네우스 아종 스파르서스(Streptomyces cinnamoneus subsp. sparsus), 스트렙토마이세스 서쿨라터스(Streptomyces circulatus), 스트렙토마이세스 서라터스(Streptomyces cirratus), 스트렙토마이세스 시스카우카시커스(Streptomyces ciscaucasicus), 스트렙토마이세스 시트레오플루오레센스(Streptomyces citreofluorescens), 스트렙토마이세스 시트레우스(Streptomyces citreus), 스트렙토마이세스 시트리콜로르(Streptomyces citricolor), 스트렙토마이세스 클라비퍼(Streptomyces clavifer), 스트렙토마이세스 클라불리게러스(Streptomyces clavuligerus), 스트렙토마이세스 코아세르바터스(Streptomyces coacervatus), 스트렙토마이세스 콕클렌시스(Streptomyces cocklensis), 스트렙토마이세스 코엘레센스(Streptomyces coelescens), 스트렙토마이세스 코엘리아터스(Streptomyces coeliatus), 스트렙토마이세스 코엘리코플라버스(Streptomyces coelicoflavus), 스트렙토마이세스 코엘리콜로르(Streptomyces coelicolor), 스트렙토마이세스 코에룰레오아우란티아커스(Streptomyces coeruleoaurantiacus), 스트렙토마이세스 코에룰레오푸스커스(Streptomyces coeruleofuscus), 스트렙토마이세스 코에룰레오프루너스(Streptomyces coeruleoprunus), 스트렙토마이세스 코에룰레오루비더스(Streptomyces coeruleorubidus), 스트렙토마이세스 코에룰레센스(Streptomyces coerulescens), 스트렙토마이세스 콜리너스(Streptomyces collinus), 스트렙토마이세스 콜리너스 아종 알베센스(Streptomyces collinus subsp. albescens), 스트렙토마이세스 콜롬비엔시스(Streptomyces colombiensis), 스트렙토마이세스 코랄러스(Streptomyces coralus), 스트렙토마이세스 코르코루시이(Streptomyces corchorusii), 스트렙토마이세스 코리오파시엔스(Streptomyces coriofaciens), 스트렙토마이세스 코스타리카너스(Streptomyces costaricanus), 스트렙토마이세스 크레이테리퍼(Streptomyces craterifer), 스트렙토마이세스 크레메우스(Streptomyces cremeus), 스트렙토마이세스 크로세우스(Streptomyces croceus), 스트렙토마이세스 크리스탈리너스(Streptomyces crystallinus), 스트렙토마이세스 쿠라코이(Streptomyces curacoi), 스트렙토마이세스 쿠스피도스포러스(Streptomyces cuspidosporus), 스트렙토마이세스 시아네오푸스카터스(Streptomyces cyaneofuscatus), 스트렙토마이세스 시아네오그리세우스(Streptomyces cyaneogriseus), 스트렙토마이세스 시아네우스(Streptomyces cyaneus), 스트렙토마이세스 시아노알버스(Streptomyces cyanoalbus), 스트렙토마이세스 시아노콜로르(Streptomyces cyanocolor), 스트렙토마이세스 시아노게너스(Streptomyces cyanogenus), 스트렙토마이세스 시아노그리세우스(Streptomyces cyanogriseus), 스트렙토마이세스 시알린도스포러스(Streptomyces cylindosporus), 스트렙토마이세스 다게스타니커스(Streptomyces daghestanicus), 스트렙토마이세스 다바웬시스(Streptomyces davawensis), 스트렙토마이세스 데코이커스(Streptomyces decoyicus), 스트렙토마이세스 다마이니이(Streptomyces demainii), 스트렙토마이세스 디아스타티커스(Streptomyces diastaticus), 스트렙토마이세스 디아스타티커스 아종 아르데시아커스(Streptomyces diastaticus subsp. ardesiacus), 스트렙토마이세스 디아스타티커스 아종 디아스타티커스(Streptomyces diastaticus subsp. diastaticus), 스트렙토마이세스 디아스타토크로모게네스(Streptomyces diastatochromogenes), 스트렙토마이세스 디아스타토크로모게네스 아종 루테우스(Streptomyces diastatochromogenes subsp. luteus), 스트렙토마이세스 디스탈리커스(Streptomyces distallicus), 스트렙토마이세스 자카르텐시스(Streptomyces djakartensis), 스트렙토마이세스 드로즈도윅치이(Streptomyces drozdowiczii), 스트렙토마이세스 더라멘시스(Streptomyces durhamensis), 스트렙토마이세스 더미토렌시스(Streptomyces durmitorensis), 스트렙토마이세스 에부로스포레우스(Streptomyces eburosporeus), 스트렙토마이세스 에키나터스(Streptomyces echinatus), 스트렙토마이세스 에키노루버(Streptomyces echinoruber), 스트렙토마이세스 에데렌시스(Streptomyces ederensis), 스트렙토마이세스 엘그레테우스(Streptomyces elgreteus), 스트렙토마이세스 엘리자베티이(Streptomyces elizabethii), 스트렙토마이세스 에메이엔시스(Streptomyces emeiensis), 스트렙토마이세스 엔더스(Streptomyces endus), 스트렙토마이세스 에니소카에실리스(Streptomyces enissocaesilis), 스트렙토마이세스 에리다니(Streptomyces eridani), 스트렙토마이세스 에룸펜스(Streptomyces erumpens), 스트렙토마이세스 에리트로크로모게네스(Streptomyces erythrochromogenes), 스트렙토마이세스 에리트로그리세우스(Streptomyces erythrogriseus), 스트렙토마이세스 에스피노서스(Streptomyces espinosus), 스트렙토마이세스 유로시디커스(Streptomyces eurocidicus), 스트렙토마이세스 유로파에이스카비에이(Streptomyces europaeiscabiei), 스트렙토마이세스 유리써무스(Streptomyces eurythermus), 스트렙토마이세스 엑스폴리아터스(Streptomyces exfoliatus), 스트렙토마이세스 파시쿨라터스(Streptomyces fasiculatus), 스트렙토마이세스 펠레우스(Streptomyces felleus), 스트렙토마이세스 페랄리티스(Streptomyces ferralitis), 스트렙토마이세스 퍼벤스 아종 멜로스포러스(Streptomyces fervens subsp. melrosporus), 스트렙토마이세스 피셀러스(Streptomyces ficellus), 스트렙토마이세스 필라멘토서스(Streptomyces filamentosus), 스트렙토마이세스 필리피넨시스(Streptomyces filipinensis), 스트렙토마이세스 핌브리아터스(Streptomyces fimbriatus), 스트렙토마이세스 피미카리우스(Streptomyces fimicarius), 스트렙토마이세스 핀레이이(Streptomyces finlayi), 스트렙토마이세스 플라베올러스(Streptomyces flaveolus), 스트렙토마이세스 플라베우스(Streptomyces flaveus), 스트렙토마이세스 플라비도푸스커스(Streptomyces flavidofuscus), 스트렙토마이세스 플라비도비렌스(Streptomyces flavidovirens), 스트렙토마이세스 플라비도비렌스 아종 푸스커스(Streptomyces flavidovirens subsp. fuscus), 스트렙토마이세스 플라비스클레오티커스(Streptomyces flaviscleroticus), 스트렙토마이세스 플라보크로모게네스(Streptomyces flavochromogenes), 스트렙토마이세스 플라보푼기니(Streptomyces flavofungini), 스트렙토마이세스 플라보푸스커스(Streptomyces flavofuscus), 스트렙토마이세스 플라보그리세우스(Streptomyces flavogriseus), 스트렙토마이세스 플라보마크로스포러스(Streptomyces flavomacrosporus), 스트렙토마이세스 플라보렉터스(Streptomyces flavorectus), 스트렙토마이세스 플라보트리시니(Streptomyces flavotricini), 스트렙토마이세스 플라보트리시니 아종 슈도크로모게네스(Streptomyces flavotricini subsp. pseudochromogenes), 스트렙토마이세스 플라보바리아빌리스(Streptomyces flavovariabilis), 스트렙토마이세스 플라보비렌스(Streptomyces flavovirens), 스트렙토마이세스 플라보비리디스(Streptomyces flavoviridis), 스트렙토마이세스 플라버스(Streptomyces flavus), 스트렙토마이세스 플로쿨러스(Streptomyces flocculus), 스트렙토마이세스 플로리다에(Streptomyces floridae), 스트렙토마이세스 플루오레센스(Streptomyces fluorescens), 스트렙토마이세스 플라디아에(Streptomyces fradiae), 스트렙토마이세스 프라디아에 아종 아시니콜로르(Streptomyces fradiae subsp. acinicolor), 스트렙토마이세스 플라디아에 아종 이탈리커스(Streptomyces fradiae subsp. italicus), 스트렙토마이세스 프라길리스(Streptomyces fragilis), 스트렙토마이세스 프라그멘탄스(Streptomyces fragmentans), 스트렙토마이세스 프라그멘탄스 아종 아쿠아티카(Streptomyces fragmentans subsp. aquatica), 스트렙토마이세스 풀비시무스(Streptomyces fulvissimus), 스트렙토마이세스 풀보로베우스(Streptomyces fulvorobeus), 스트렙토마이세스 풀보비오라세우스(Streptomyces fulvoviolaceus), 스트렙토마이세스 풀보비리디스(Streptomyces fulvoviridis), 스트렙토마이세스 푸마너스(Streptomyces fumanus), 스트렙토마이세스 푸미가티스클레로티커스(Streptomyces fumigatiscleroticus), 스트렙토마이세스 푼기시디커스(Streptomyces fungicidicus), 스트렙토마이세스 퍼롱거스(Streptomyces furlongus), 스트렙토마이세스 퍼론거스 아종 퍼론거스(Streptomyces furlongus subsp. furlongus), 스트렙토마이세스 푸스코아트러스(Streptomyces fuscoatrus), 스트렙토마이세스 가보나에(Streptomyces gabonae), 스트렙토마이세스 갈버스(Streptomyces galbus), 스트렙토마이세스 갈릴라에우스(Streptomyces galilaeus), 스트렙토마이세스 갈리나리우스(Streptomyces gallinarius), 스트렙토마이세스 간시디커스(Streptomyces gancidicus), 스트렙토마이세스 강토켄시스(Streptomyces gangtokensis), 스트렙토마이세스 간마이시커스(Streptomyces gannmycicus), 스트렙토마이세스 가르덴(Streptomyces garden), 스트렙토마이세스 가르드네리(Streptomyces gardneri), 스트렙토마이세스 게다넨시스(Streptomyces gedanensis), 스트렙토마이세스 겔라티커스(Streptomyces gelaticus), 스트렙토마이세스 겔다나마이시니너스(Streptomyces geldanamycininus), 스트렙토마이세스 가이시리엔시스(Streptomyces geysiriensis), 스트렙토마이세스 가나엔시스(Streptomyces ghanaensis), 스트렙토마이세스 기브소니이(Streptomyces gibsonii), 스트렙토마이세스 진셍기솔리(Streptomyces ginsengisoli), 스트렙토마이세스 글라우세센스(Streptomyces glaucescens), 스트렙토마이세스 글라우시니거(Streptomyces glauciniger), 스트렙토마이세스 글라우코스포러스(Streptomyces glaucosporus), 스트렙토마이세스 글라우커스(Streptomyces glaucus), 스트렙토마이세스 글로비퍼(Streptomyces globifer), 스트렙토마이세스 글로비스포러스(Streptomyces globisporus), 스트렙토마이세스 글로비스포러스 아종 카우카시커스(Streptomyces globisporus subsp. caucasicus), 스트렙토마이세스 글로비스포러스 아종 글로비스포러스(Streptomyces globisporus subsp. globisporus), 스트렙토마이세스 글로보서스(Streptomyces globosus), 스트렙토마이세스 글로메라터스(Streptomyces glomeratus), 스트렙토마이세스 글로메로아우란티아커스(Streptomyces glomeroaurantiacus), 스트렙토마이세스 글로메로크로모게네스(Streptomyces glomerochromogenes), 스트렙토마이세스 고비트리시니(Streptomyces gobitricini), 스트렙토마이세스 고시키엔시스(Streptomyces goshikiensis), 스트렙토마이세스 고우게로티이(Streptomyces gougerotii), 스트렙토마이세스 그라미네아러스(Streptomyces graminearus), 스트렙토마이세스 그라미네우스(Streptomyces gramineus), 스트렙토마이세스 그라미노파시엔스(Streptomyces graminofaciens), 스트렙토마이세스 그리세이니거(Streptomyces griseiniger), 스트렙토마이세스 그리세이너스(Streptomyces griseinus), 스트렙토마이세스 그리세오아우란티아커스(Streptomyces griseoaurantiacus), 스트렙토마이세스 그리세오브루네우스(Streptomyces griseobrunneus), 스트렙토마이세스 그리세오카르네우스(Streptomyces griseocarneus), 스트렙토마이세스 그리세오크로모게네스(Streptomyces griseochromogenes), 스트렙토마이세스 그리세오크로모게네스 아종 수이타엔시스(Streptomyces griseochromogenes subsp. suitaensis), 스트렙토마이세스 그리세오파시엔스(Streptomyces griseofaciens), 스트렙토마이세스 그리세오플라버스(Streptomyces griseoflavus), 스트렙토마이세스 그리세오플라버스 아종 피린디커스(Streptomyces griseoflavus subsp. pyrindicus), 스트렙토마이세스 그리세오푸스커스(Streptomyces griseofuscus), 스트렙토마이세스 그리세오인카르나터스(Streptomyces griseoincarnatus), 스트렙토마이세스 그리세올로알버스(Streptomyces griseoloalbus), 스트렙토마이세스 그리세올로수푸스커스(Streptomyces griseolosuffuscus), 스트렙토마이세스 그리세올러스(Streptomyces griseolus), 스트렙토마이세스 그리세올루테우스(Streptomyces griseoluteus), 스트렙토마이세스 그리세오마이시니(Streptomyces griseomycini), 스트렙토마이세스 그리세오플라너스(Streptomyces griseoplanus), 스트렙토마이세스 그리세오루벤스(Streptomyces griseorubens), 스트렙토마이세스 그리세오루버(Streptomyces griseoruber), 스트렙토마이세스 그리세오루비기노서스(Streptomyces griseorubiginosus), 스트렙토마이세스 그리세오스피랄리스(Streptomyces griseospiralis), 스트렙토마이세스 그리세오스포레우스(Streptomyces griseosporeus), 스트렙토마이세스 그리세오스트라미네우스(Streptomyces griseostramineus), 스트렙토마이세스 그리세오버티실라터스(Streptomyces griseoverticillatus), 스트렙토마이세스 그리세오비리디스(Streptomyces griseoviridis), 스트렙토마이세스 그리세우스(Streptomyces griseus), 스트렙토마이세스 그리세우스 아종 브루네우스(Streptomyces griseus subsp. bruneus), 스트렙토마이세스 그리세우스 아종 데시데우스(Streptomyces griseussubsp. desideus), 스트렙토마이세스 그리세우스 아종 에리젠시스(Streptomyces griseus subsp. erizensis), 스트렙토마이세스 그리세우스 아종 포르미커스(Streptomyces griseus subsp. formicus), 스트렙토마이세스 그리세우스 아종 그리세우스(Streptomyces griseus subsp. griseus), 스트렙토마이세스 그리세우스 아종 푸르푸레우스(Streptomyces griseus subsp. purpureus), 스트렙토마이세스 그리세우스 아종 로도크로스(Streptomyces griseus subsp. rhodochrous), 스트렙토마이세스 그리세우스 아종 솔비파시엔스(Streptomyces griseus subsp. solvifaciens), 스트렙토마이세스 관두엔시스(Streptomyces guanduensis), 스트렙토마이세스 굴바겐시스(Streptomyces gulbargensis), 스트렙토마이세스 집세우스(Streptomyces gypseus), 스트렙토마이세스 하이난엔시스(Streptomyces hainanensis), 스트렙토마이세스 할리클로나에(Streptomyces haliclonae), 스트렙토마이세스 할로톨레란스(Streptomyces halotolerans), 스트렙토마이세스 할스테디이(Streptomyces halstedii), 스트렙토마이세스 하와이엔시스(Streptomyces hawaiiensis), 스트렙토마이세스 하젤리엔시스(Streptomyces hazeliensis), 스트렙토마이세스 헤베이엔시스(Streptomyces hebeiensis), 스트렙토마이세스 헤이미(Streptomyces heimi), 스트렙토마이세스 헬리오마이시니(Streptomyces heliomycini), 스트렙토마이세스 헬바티커스(Streptomyces helvaticus), 스트렙토마이세스 헤네터스(Streptomyces henetus), 스트렙토마이세스 허바리콜로르(Streptomyces herbaricolor), 스트렙토마이세스 헤테로모르퍼스(Streptomyces heteromorphus), 스트렙토마이세스 힘그리엔시스(Streptomyces himgriensis), 스트렙토마이세스 히로시멘시스(Streptomyces hiroshimensis), 스트렙토마이세스 히르수터스(Streptomyces hirsutus), 스트렙토마이세스 호르톤(Streptomyces horton), 스트렙토마이세스 후미더스(Streptomyces humidus), 스트렙토마이세스 후미더스 아종 안티투모리스(Streptomyces humidus subsp. antitumoris), 스트렙토마이세스 후미퍼(Streptomyces humifer), 스트렙토마이세스 후미페러스(Streptomyces humiferus), 스트렙토마이세스 훈둥겐시스(Streptomyces hundungensis), 스트렙토마이세스 히알리누스(Streptomyces hyalinus), 스트렙토마이세스 하이데라바덴시스(Streptomyces hyderabadensis), 스트렙토마이세스 하이드로게난스(Streptomyces hydrogenans), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스(Streptomyces hygroscopicus), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 아종 아보마이세티커스(Streptomyces hygroscopicus subsp. aabomyceticus), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 아종 앙구스트마이세티커스(Streptomyces hygroscopicus subsp. angustmyceticus), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 아종 아잘로마이세티커스(Streptomyces hygroscopicus subsp. azalomyceticus), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 아종 크리스탈로게네스(Streptomyces hygroscopicus subsp. crystallogenes), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 아종 데코이커스(Streptomyces hygroscopicus subsp. decoyicus), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 아종 두아마이세티커스(Streptomyces hygroscopicus subsp. duamyceticus), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 아종 겔다너스(Streptomyces hygroscopicus subsp. geldanus), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 아종 글레보서스(Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 아종 히알로마이세티커스(Streptomyces hygroscopicus subsp. hialomyceticus), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 아종 하이그로스코피커스(Streptomyces hygroscopicus subsp. hygroscopicus), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 아종 하이그로스코피우스(Streptomyces hygroscopicus subsp. hygroscopius), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 아종 리모네우스(Streptomyces hygroscopicus subsp. limoneus), 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 아종 오사마이세티커스(Streptomyces hygroscopicus subsp. ossamyceticus), 스트렙토마이세스 하이그로스피노서스(Streptomyces hygrospinosus), 스트렙토마이세스 이아키러스(Streptomyces iakyrus), 스트렙토마이세스 이나에콸리스(Streptomyces inaequalis), 스트렙토마이세스 인디아엔시스(Streptomyces indiaensis), 스트렙토마이세스 인디커스(Streptomyces indicus), 스트렙토마이세스 인디고콜로르(Streptomyces indigocolor), 스트렙토마이세스 인디고페러스(Streptomyces indigoferus), 스트렙토마이세스 인도네시엔시스(Streptomyces indonesiensis), 스트렙토마이세스 인시그니스(Streptomyces insignis), 스트렙토마이세스 인터메디우스(Streptomyces intermedius), 스트렙토마이세스 이누시타터스(Streptomyces inusitatus), 스트렙토마이세스 이포모에아에(Streptomyces ipomoeae), 스트렙토마이세스 이란엔시스(Streptomyces iranensis), 스트렙토마이세스 이시가키엔시스(Streptomyces ishigakiensis), 스트렙토마이세스 자마이센시스(Streptomyces jamaicensis), 스트렙토마이세스 잔티너스(Streptomyces janthinus), 스트렙토마이세스 자벤시스(Streptomyces javensis), 스트렙토마이세스 지에타이시엔시스(Streptomyces jietaisiensis), 스트렙토마이세스 주주이(Streptomyces jujuy), 스트렙토마이세스 주몬지넨시스(Streptomyces jumonjinensis), 스트렙토마이세스 카가와엔시스(Streptomyces kagawaensis), 스트렙토마이세스 카고시마너스(Streptomyces kagoshimanus), 스트렙토마이세스 카나마이세티커스(Streptomyces kanamyceticus), 스트렙토마이세스 카니하라엔시스(Streptomyces kaniharaensis), 스트렙토마이세스 카르나타켄시스(Streptomyces karnatakensis), 스트렙토마이세스 카수가엔시스(Streptomyces kasugaensis), 스트렙토마이세스 카수가스피너스(Streptomyces kasugaspinus), 스트렙토마이세스 카트라에(Streptomyces katrae), 스트렙토마이세스 켄투켄시스(Streptomyces kentuckensis), 스트렙토마이세스 콴달렌시스(Streptomyces khandalensis), 스트렙토마이세스 키타사토엔시스(Streptomyces kitasatoensis), 스트렙토마이세스 코벤엔시스(Streptomyces kobenensis), 스트렙토마이세스 코양엔시스(Streptomyces koyangensis), 스트렙토마이세스 크라인스키이(Streptomyces krainskii), 스트렙토마이세스 쿤밍엔시스(Streptomyces kunmingensis), 스트렙토마이세스 쿠르사노비이(Streptomyces kurssanovii), 스트렙토마이세스 쿠와이티엔시스(Streptomyces kuwaitiensis), 스트렙토마이세스 라베다에(Streptomyces labedae), 스트렙토마이세스 라세이이(Streptomyces laceyi), 스트렙토마이세스 라쿨라투스포러스(Streptomyces laculatusporus), 스트렙토마이세스 래테비올라세우스(Streptomyces laeteviolaceus), 스트렙토마이세스 라나터스(Streptomyces lanatus), 스트렙토마이세스 라넨시스(Streptomyces lannensis), 스트렙토마이세스 라살리엔시스(Streptomyces lasaliensis), 스트렙토마이세스 라테리티우스(Streptomyces lateritius), 스트렙토마이세스 라우렌티이(Streptomyces laurentii), 스트렙토마이세스 라벤도폴리아에(Streptomyces lavendofoliae), 스트렙토마이세스 라벤둘라에(Streptomyces lavendulae), 스트렙토마이세스 라벤둘라에 아종 푸스커스(Streptomyces lavendulae subsp. fuscus), 스트렙토마이세스 라벤둘라에 아종 그라세리우스(Streptomyces lavendulae subsp. grasserius), 스트렙토마이세스 라벤둘라에 아종 라벤둘라에(Streptomyces lavendulae subsp. lavendulae), 스트렙토마이세스 라벤둘라렉터스(Streptomyces lavendularectus), 스트렙토마이세스 라벤둘리그리세우스(Streptomyces lavenduligriseus), 스트렙토마이세스 라벤둘로콜로르(Streptomyces lavendulocolor), 스트렙토마이세스 라주레우스(Streptomyces lazureus), 스트렙토마이세스 레비스(Streptomyces levis), 스트렙토마이세스 레보리스(Streptomyces levoris), 스트렙토마이세스 리바니(Streptomyces libani), 스트렙토마이세스 리바니 아종 리바니(Streptomyces libani subsp. libani), 스트렙토마이세스 리바니 아종 루퍼스(Streptomyces libani subsp. rufus), 스트렙토마이세스 리에노마이시니(Streptomyces lienomycini), 스트렙토마이세스 리에스케이(Streptomyces lieskei), 스트렙토마이세스 릴라세우스(Streptomyces lilaceus), 스트렙토마이세스 릴라시노풀버스(Streptomyces lilacinofulvus), 스트렙토마이세스 릴라시너스(Streptomyces lilacinus), 스트렙토마이세스 리모서스(Streptomyces limosus), 스트렙토마이세스 린콜넨시스(Streptomyces lincolnensis), 스트렙토마이세스 리프마니이(Streptomyces lipmanii), 스트렙토마이세스 리산드리(Streptomyces lisandri), 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루테오스포레우스(Streptomyces luteosporeus), 스트렙토마이세스 루테오버티실라터스(Streptomyces luteoverticillatus), 스트렙토마이세스 라이디커스(Streptomyces lydicus), 스트렙토마이세스 마크로모마이세티커스(Streptomyces macromomyceticus), 스트렙토마이세스 마크로스포레우스(Streptomyces macrosporeus), 스트렙토마이세스 마크로스포러스(Streptomyces macrosporus), 스트렙토마이세스 마이제우스(Streptomyces maizeus), 스트렙토마이세스 말라키티커스(Streptomyces malachiticus), 스트렙토마이세스 말라키티커스 아종 그리세오스피노서스(Streptomyces malachiticus subsp. griseospinosus), 스트렙토마이세스 말라키토푸스커스(Streptomyces malachitofuscus), 스트렙토마이세스 말라키토렉터스(Streptomyces malachitorectus), 스트렙토마이세스 말라키토스피너스(Streptomyces malachitospinus), 스트렙토마이세스 말레이엔시스(Streptomyces malayensis), 스트렙토마이세스 말레이시엔시스(Streptomyces malaysiensis), 스트렙토마이세스 마니푸렌시스(Streptomyces manipurensis), 스트렙토마이세스 마리너스(Streptomyces marinus), 스트렙토마이세스 마리티머스(Streptomyces maritimus), 스트렙토마이세스 마록코넨시스(Streptomyces marokkonensis), 스트렙토마이세스 마슈엔시스(Streptomyces mashuensis), 스트렙토마이세스 마사스포레우스(Streptomyces massasporeus), 스트렙토마이세스 마텐시스(Streptomyces matensis), 스트렙토마이세스 마우베콜로르(Streptomyces mauvecolor), 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모르다르스키이(Streptomyces mordarskii), 스트렙토마이세스 모루카엔스(Streptomyces morookaense), 스트렙토마이세스 모루카엔시스(Streptomyces morookaensis), 스트렙토마이세스 무코플라버스(Streptomyces mucoflavus), 스트렙토마이세스 멀티스피랄리스(Streptomyces multispiralis), 스트렙토마이세스 무리너스(Streptomyces murinus), 스트렙토마이세스 무타빌리스(Streptomyces mutabilis), 스트렙토마이세스 무토마이시니(Streptomyces mutomycini), 스트렙토마이세스 마이카로파시엔스(Streptomyces mycarofaciens), 스트렙토마이세스 믹소게네스(Streptomyces myxogenes), 스트렙토마이세스 나가니시이(Streptomyces naganishii), 스트렙토마이세스 난닝엔시스(Streptomyces nanningensis), 스트렙토마이세스 난셴시스(Streptomyces nanshensis), 스트렙토마이세스 나라엔시스(Streptomyces naraensis), 스트렙토마이세스 나르보넨시스(Streptomyces narbonensis), 스트렙토마이세스 나쉬빌렌시스(Streptomyces nashvillensis), 스트렙토마이세스 나탈렌시스(Streptomyces natalensis), 스트렙토마이세스 네부로서스(Streptomyces neburosus), 스트렙토마이세스 네오칼리베리스(Streptomyces neocaliberis), 스트렙토마이세스 네트로프시스(Streptomyces netropsis), 스트렙토마이세스 네야가와엔시스(Streptomyces neyagawaensis), 스트렙토마이세스 니겔러스(Streptomyces nigellus), 스트렙토마이세스 니게르(Streptomyces niger), 스트렙토마이세스 니그레센스(Streptomyces nigrescens), 스트렙토마이세스 니그리파시엔스(Streptomyces nigrifaciens), 스트렙토마이세스 니그로그리세올러스(Streptomyces nigrogriseolus), 스트렙토마이세스 니그로비올렌스(Streptomyces nigroviolens), 스트렙토마이세스 니트로스포레우스(Streptomyces nitrosporeus), 스트렙토마이세스 니베오루버(Streptomyces niveoruber), 스트렙토마이세스 니베우스(Streptomyces niveus), 스트렙토마이세스 노빌리스(Streptomyces nobilis), 스트렙토마이세스 노보리토엔시스(Streptomyces noboritoensis), 스트렙토마이세스 노도서스(Streptomyces nodosus), 스트렙토마이세스 노도서스 아종 아스카엔시스(Streptomyces nodosus subsp. asukaensis), 스트렙토마이세스 노갈라터(Streptomyces nogalater), 스트렙토마이세스 노지리엔시스(Streptomyces nojiriensis), 스트렙토마이세스 노우르세이(Streptomyces noursei), 스트렙토마이세스 노바에카에사레아에(Streptomyces novaecaesareae), 스트렙토마이세스 노보베르티실러스(Streptomyces novoverticillus), 스트렙토마이세스 오크라세이스클레로티커스(Streptomyces ochraceiscleroticus), 스트렙토마이세스 오크로스포러스(Streptomyces ochrosporus), 스트렙토마이세스 오도리퍼(Streptomyces odorifer), 스트렙토마이세스 오가엔시스(Streptomyces ogaensis), 스트렙토마이세스 오이디오스포러스(Streptomyces oidiosporus), 스트렙토마이세스 올리바세이스클레로티커스(Streptomyces olivaceiscleroticus), 스트렙토마이세스 올리바세오비리디스(Streptomyces olivaceoviridis), 스트렙토마이세스 올리바세우스(Streptomyces olivaceus), 스트렙토마이세스 올리보크로모겐시스(Streptomyces olivochromogenes), 스트렙토마이세스 올리보크로모겐시스 아종 사이토비리너스(Streptomyces olivochromogenes subsp. cytovirinus), 스트렙토마이세스 올리보그리세우스(Streptomyces olivogriseus), 스트렙토마이세스 올리보베르티실라터스(Streptomyces olivoverticillatus), 스트렙토마이세스 올리보비리디스(Streptomyces olivoviridis), 스트렙토마이세스 오미야엔시스(Streptomyces omiyaensis), 스트렙토마이세스 오리노시(Streptomyces orinoci), 스트렙토마이세스 오르나터스(Streptomyces ornatus), 스트렙토마이세스 오스마니엔시스(Streptomyces osmaniensis), 스트렙토마이세스 오스트레오그리세우스(Streptomyces ostreogriseus), 스트렙토마이세스 오와시엔시스(Streptomyces owasiensis), 스트렙토마이세스 팍텀(Streptomyces pactum), 스트렙토마이세스 파다너스(Streptomyces padanus), 스트렙토마이세스 팔리더스(Streptomyces pallidus), 스트렙토마이세스 파나카그리(Streptomyces panacagri), 스트렙토마이세스 파나시테라에(Streptomyces panaciterrae), 스트렙토마이세스 파나이엔시스(Streptomyces panayensis), 스트렙토마이세스 파라독서스(Streptomyces paradoxus), 스트렙토마이세스 파라구아이엔시스(Streptomyces paraguayensis), 스트렙토마이세스 파르불러스(Streptomyces parvulus), 스트렙토마이세스 파르버스(Streptomyces parvus), 스트렙토마이세스 파우시디아스타티커스(Streptomyces 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piomogenus), 스트렙토마이세스 플라텐시스(Streptomyces platensis), 스트렙토마이세스 플라텐시스 아종 클라렌시스(Streptomyces platensis subsp. clarensis), 스트렙토마이세스 플라텐시스 아종 말비너스(Streptomyces platensis subsp. malvinus), 스트렙토마이세스 플라텐시스 아종 로비고시디커스(Streptomyces platensis subsp. robigocidicus), 스트렙토마이세스 플리카터스(Streptomyces plicatus), 스트렙토마이세스 플룸베우스(Streptomyces plumbeus), 스트렙토마이세스 플룸비레시스텐스(Streptomyces plumbiresistens), 스트렙토마이세스 플루리콜로레센스(Streptomyces pluricolorescens), 스트렙토마이세스 폴리안티비오티커스(Streptomyces polyantibioticus), 스트렙토마이세스 폴리크로모게네스(Streptomyces polychromogenes), 스트렙토마이세스 폴리크로모게네스 아종 아레니콜러스(Streptomyces polychromogenes subsp. arenicolus), 스트렙토마이세스 푸넨시스(Streptomyces poonensis), 스트렙토마이세스 프라에콕스(Streptomyces praecox), 스트렙토마이세스 프라시노필로서스(Streptomyces prasinopilosus), 스트렙토마이세스 프라시노스포러스(Streptomyces prasinosporus), 스트렙토마이세스 프라시누스(Streptomyces prasinus), 스트렙토마이세스 프리스티나에스피랄리스(Streptomyces pristinaespiralis), 스트렙토마이세스 프로푸르푸란터스(Streptomyces propurpuratus), 스트렙토마이세스 프루니콜로르(Streptomyces prunicolor), 스트렙토마이세스 프사모티커스(Streptomyces psammoticus), 스트렙토마이세스 슈도에키노스포레우스(Streptomyces pseudoechinosporeus), 스트렙토마이세스 슈도그리세올러스(Streptomyces pseudogriseolus), 스트렙토마이세스 슈도그리세올러스 아종 글루코페르멘탄스(Streptomyces pseudogriseolus subsp. glucofermentans), 스트렙토마이세스 슈도베네주엘라에(Streptomyces pseudovenezuelae), 스트렙토마이세스 풀처(Streptomyces pulcher), 스트렙토마이세스 풀베라세우스(Streptomyces pulveraceus), 스트렙토마이세스 푸니세우스(Streptomyces puniceus), 스트렙토마이세스 푸니세우스 아종 돌리세우스(Streptomyces puniceus subsp. doliceus), 스트렙토마이세스 푸니시스카비에이(Streptomyces puniciscabiei), 스트렙토마이세스 푸르페오크로모게네스(Streptomyces purpeochromogenes), 스트렙토마이세스 푸르페오푸스커스(Streptomyces purpeofuscus), 스트렙토마이세스 푸르푸라센스(Streptomyces purpurascens), 스트렙토마이세스 푸르푸레오푸스커스(Streptomyces purpureofuscus), 스트렙토마이세스 푸르푸레오푸스커스 아종 아코아굴란스(Streptomyces purpureofuscus subsp. acoagulans), 스트렙토마이세스 푸르푸레우스(Streptomyces purpureus), 스트렙토마이세스 푸르푸로게네이스클레로티커스(Streptomyces purpurogeneiscleroticus), 스트렙토마이세스 피리도마이세티커스(Streptomyces pyridomyceticus), 스트렙토마이세스 라세모크로모게네스(Streptomyces racemochromogenes), 스트렙토마이세스 라세모서스(Streptomyces racemosus), 스트렙토마이세스 라디오푸그난스(Streptomyces radiopugnans), 스트렙토마이세스 라피노서스(Streptomyces raffinosus), 스트렙토마이세스 라메우스(Streptomyces rameus), 스트렙토마이세스 라모시스시무스(Streptomyces ramosissimus), 스트렙토마이세스 라물로서스(Streptomyces ramulosus), 스트렙토마이세스 랑군(Streptomyces rangoon), 스트렙토마이세스 랑군엔시스(Streptomyces rangoonensis), 스트렙토마이세스 라파마이신커스(Streptomyces rapamycincus), 스트렙토마이세스 레시펜시스(Streptomyces recifensis), 스트렙토마이세스 렉티비올라세우스(Streptomyces rectiviolaceus), 스트렙토마이세스 레푸이네우스 아종 써모톨레란스(Streptomyces refuineus subsp. thermotolerans), 스트렙토마이세스 레갈리스(Streptomyces regalis), 스트렙토마이세스 레겐시스(Streptomyces regensis), 스트렙토마이세스 레시스토마이시피커스(Streptomyces resistomycificus), 스트렙토마이세스 레티쿨리 아종 프로토마이시커스(Streptomyces reticuli subsp. protomycicus), 스트렙토마이세스 레티쿨리스카비에이(Streptomyces reticuliscabiei), 스트렙토마이세스 리조스패리커스(Streptomyces rhizosphaericus), 스트렙토마이세스 리보시디피커스(Streptomyces ribosidificus), 스트렙토마이세스 리모파시엔스(Streptomyces rimofaciens), 스트렙토마이세스 리모서스(Streptomyces rimosus), 스트렙토마이세스 리모서스 아종 파로모마이시너스(Streptomyces rimosus subsp. paromomycinus), 스트렙토마이세스 리모서스 아종 리모서스(Streptomyces rimosus subsp. rimosus), 스트렙토마이세스 리시리엔시스(Streptomyces rishiriensis), 스트렙토마이세스 로베푸스커스(Streptomyces robefuscus), 스트렙토마이세스 로체이(Streptomyces rochei), 스트렙토마이세스 로사(Streptomyces rosa), 스트렙토마이세스 로사 아종 노토엔시스(Streptomyces rosa subsp. notoensis), 스트렙토마이세스 로세이스클레로티커스(Streptomyces roseiscleroticus), 스트렙토마이세스 로세오알버스(Streptomyces roseoalbus), 스트렙토마이세스 로세오아우란티우스(Streptomyces roseoaurantius), 스트렙토마이세스 로세오크로모게네스(Streptomyces roseochromogenes), 스트렙토마이세스 로세오크로모게나스(Streptomyces roseochromogenus), 스트렙토마이세스 로세오크로모게나스 아종 알보사이클리니(Streptomyces roseochromogenus subsp. albocyclini), 스트렙토마이세스 로세오시네레우스(Streptomyces roseocinereus), 스트렙토마이세스 로세오디아스타티커스(Streptomyces roseodiastaticus), 스트렙토마이세스 로세오플라버스(Streptomyces roseoflavus), 스트렙토마이세스 로세오플루버스(Streptomyces roseofulvus), 스트렙토마이세스 로세오그리세우스(Streptomyces roseogriseus), 스트렙토마이세스 로세오릴라시너스(Streptomyces roseolilacinus), 스트렙토마이세스 로제올러스(Streptomyces roseolus), 스트렙토마이세스 로세오루테우스(Streptomyces roseoluteus), 스트렙토마이세스 로세오플라터스(Streptomyces roseoplatus), 스트렙토마이세스 로세오루벤스(Streptomyces roseorubens), 스트렙토마이세스 로세오스포러스(Streptomyces roseosporus), 스트렙토마이세스 로세오버티실라터스(Streptomyces roseoverticillatus), 스트렙토마이세스 로세오비올라세우스(Streptomyces roseoviolaceus), 스트렙토마이세스 로세오비올라센스(Streptomyces roseoviolascens), 스트렙토마이세스 로세오비리디스(Streptomyces roseoviridis), 스트렙토마이세스 로제우스(Streptomyces roseus), 스트렙토마이세스 루버(Streptomyces ruber), 스트렙토마이세스 루비콜로르(Streptomyces rubicolor), 스트렙토마이세스 루비더스(Streptomyces rubidus), 스트렙토마이세스 루비기노소헬볼러스(Streptomyces rubiginosohelvolus), 스트렙토마이세스 루비기노서스(Streptomyces rubiginosus), 스트렙토마이세스 루브리레티쿨리(Streptomyces rubrireticuli), 스트렙토마이세스 루브로시아노디아스타티커스 아종 피거(Streptomyces rubrocyanodiastaticus subsp. piger), 스트렙토마이세스 루브로그리세우스(Streptomyces rubrogriseus), 스트렙토마이세스 루브로라벤둘라에(Streptomyces rubrolavendulae), 스트렙토마이세스 루브로베루코서스(Streptomyces rubroverrucosus), 스트렙토마이세스 루브러스(Streptomyces rubrus), 스트렙토마이세스 루포크로모게네스(Streptomyces rufochromogenes), 스트렙토마이세스 루트거센시스(Streptomyces rutgersensis), 스트렙토마이세스 리엔시스(Streptomyces ryensis), 스트렙토마이세스 사하치로이(Streptomyces sahachiroi), 스트렙토마이세스 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sporoverrucosus), 스트렙토마이세스 스테피스부르겐시스(Streptomyces steffisburgensis), 스트렙토마이세스 스테피스부르겐시스 아종 스테피스부르겐시스(Streptomyces steffisburgensis subsp. steffisburgensis), 스트렙토마이세스 스텔리스카비에이(Streptomyces stelliscabiei), 스트렙토마이세스 스트라미네우스(Streptomyces stramineus), 스트렙토마이세스 서브루틸러스(Streptomyces subrutilus), 스트렙토마이세스 수단엔시스(Streptomyces sudanensis), 스트렙토마이세스 술포노파시엔스(Streptomyces sulfonofaciens), 스트렙토마이세스 술푸레우스(Streptomyces sulphureus), 스트렙토마이세스 스비세우스(Streptomyces sviceus), 스트렙토마이세스 신네마토포르만스(Streptomyces synnematoformans), 스트렙토마이세스 타나시엔시스(Streptomyces tanashiensis), 스트렙토마이세스 타나시엔시스 아종 세팔로마이세티커스(Streptomyces tanashiensis subsp. cephalomyceticus), 스트렙토마이세스 타테야멘시스(Streptomyces tateyamensis), 스트렙토마이세스 타우리커스(Streptomyces tauricus), 스트렙토마이세스 텐다에(Streptomyces tendae), 스트렙토마이세스 테네브라리우스(Streptomyces tenebrarius), 스트렙토마이세스 텐지마리엔시스(Streptomyces tenjimariensis), 스트렙토마이세스 터미텀(Streptomyces termitum), 스트렙토마이세스 테스타세우스(Streptomyces testaceus), 스트렙토마이세스 테타누세무스(Streptomyces tetanusemus), 스트렙토마이세스 써모알칼리톨레란스(Streptomyces thermoalcalitolerans), 스트렙토마이세스 써모아트로비리디스(Streptomyces thermoatroviridis), 스트렙토마이세스 써모카르복시도보란스(Streptomyces thermocarboxydovorans), 스트렙토마이세스 써모카르복시더스(Streptomyces thermocarboxydus), 스트렙토마이세스 써모카스타네우스(Streptomyces thermocastaneus), 스트렙토마이세스 써모코에룰레센스(Streptomyces thermocoerulescens), 스트렙토마이세스 써모코프로필러스(Streptomyces thermocoprophilus), 스트렙토마이세스 써모시아네오마쿨라터스(Streptomyces thermocyaneomaculatus), 스트렙토마이세스 써모시아네오비올라세우스(Streptomyces thermocyaneoviolaceus), 스트렙토마이세스 써모디아스타티커스(Streptomyces thermodiastaticus), 스트렙토마이세스 써모플라버스(Streptomyces thermoflavus), 스트렙토마이세스 써모그리세오비올라세우스(Streptomyces thermogriseoviolaceus), 스트렙토마이세스 써모그리세우스(Streptomyces thermogriseus), 스트렙토마이세스 써모하이그로스코피커스 아종 루비기노서스(Streptomyces thermohygroscopicus subsp. rubiginosus), 스트렙토마이세스 써모릴라시너스(Streptomyces thermolilacinus), 스트렙토마이세스 써몰리네아터스(Streptomyces thermolineatus), 스트렙토마이세스 써몰루테우스(Streptomyces thermoluteus), 스트렙토마이세스 써몰루테우스 아종 푸스커스(Streptomyces thermoluteus subsp. fuscus), 스트렙토마이세스 써모니트리피칸스(Streptomyces thermonitrificans), 스트렙토마이세스 써모올리바세우스 아종 푸스커스(Streptomyces thermoolivaceus subsp. fuscus), 스트렙토마이세스 써모올리바세우스 아종 써모올리바세우스(Streptomyces thermoolivaceus subsp. thermoolivaceus), 스트렙토마이세스 써모필러스(Streptomyces thermophilus), 스트렙토마이세스 써모스피노시스포러스(Streptomyces thermospinosisporus), 스트렙토마이세스 써모톨레란스(Streptomyces thermotolerans), 스트렙토마이세스 써모비올라세우스(Streptomyces thermoviolaceus), 스트렙토마이세스 써모비올라세우스 아종 아핑겐스(Streptomyces thermoviolaceus subsp. apingens), 스트렙토마이세스 써모비올라세우스 아종 써모비올라세우스(Streptomyces thermoviolaceus subsp. thermoviolaceus), 스트렙토마이세스 써모불가리스(Streptomyces thermovulgaris), 스트렙토마이세스 팅그히렌시스(Streptomyces thinghirensis), 스트렙토마이세스 티올루테우스(Streptomyces thioluteus), 스트렙토마이세스 트레오마이세티커스(Streptomyces threomyceticus), 스트렙토마이세스 토룰로서스(Streptomyces torulosus), 스트렙토마이세스 토사엔시스(Streptomyces tosaensis), 스트렙토마이세스 톡시퍼틸리스(Streptomyces toxifertilis), 스트렙토마이세스 톡시트리시니(Streptomyces toxytricini), 스트렙토마이세스 토요카엔시스(Streptomyces toyocaensis), 스트렙토마이세스 트리앙굴라터스(Streptomyces triangulatus), 스트렙토마이세스 트리콜로르(Streptomyces tricolor), 스트렙토마이세스 트리쿨라미니커스(Streptomyces triculaminicus), 스트렙토마이세스 트리오스티니커스(Streptomyces triostinicus), 스트렙토마이세스 트리톨레란스(Streptomyces tritolerans), 스트렙토마이세스 츠키요넨시스(Streptomyces tsukiyonensis), 스트렙토마이세스 츠시마엔시스(Streptomyces tsusimaensis), 스트렙토마이세스 투베르시디커스(Streptomyces tubercidicus), 스트렙토마이세스 투이러스(Streptomyces tuirus), 스트렙토마이세스 투메마세란스(Streptomyces tumemacerans), 스트렙토마이세스 투물리(Streptomyces tumuli), 스트렙토마이세스 투르기디스카비에스(Streptomyces turgidiscabies), 스트렙토마이세스 움브리너스(Streptomyces umbrinus), 스트렙토마이세스 움브로서스(Streptomyces umbrosus), 스트렙토마이세스 바리아빌리스(Streptomyces variabilis), 스트렙토마이세스 바리에가터스(Streptomyces variegatus), 스트렙토마이세스 바리우스(Streptomyces varius), 스트렙토마이세스 바소비엔시스(Streptomyces varsoviensis), 스트렙토마이세스 바스터스(Streptomyces vastus), 스트렙토마이세스 벨로서스(Streptomyces vellosus), 스트렙토마이세스 벤다르겐시스(Streptomyces vendargensis), 스트렙토마이세스 베네주엘라에(Streptomyces venezuelae), 스트렙토마이세스 베르네(Streptomyces verne), 스트렙토마이세스 베르시펠리스(Streptomyces versipellis), 스트렙토마이세스 베르티실라터스(Streptomyces verticillatus), 스트렙토마이세스 베르티실러스(Streptomyces verticillus), 스트렙토마이세스 비에트남엔시스(Streptomyces vietnamensis), 스트렙토마이세스 비나세우스(Streptomyces vinaceus), 스트렙토마이세스 비나세우스드라퍼스(Streptomyces vinaceusdrappus), 스트렙토마이세스 비올라세오크로모게네스(Streptomyces violaceochromogenes), 스트렙토마이세스 비올라세올라터스(Streptomyces violaceolatus), 스트렙토마이세스 비올라세오렉터스(Streptomyces violaceorectus), 스트렙토마이세스 비올라세오루버(Streptomyces violaceoruber), 스트렙토마이세스 비올라세오루비더스(Streptomyces violaceorubidus), 스트렙토마이세스 비올라세우스(Streptomyces violaceus), 스트렙토마이세스 비올라세우스니거(Streptomyces violaceusniger), 스트렙토마이세스 비올라러스(Streptomyces violarus), 스트렙토마이세스 비올라센스(Streptomyces violascens), 스트렙토마이세스 비올렌스(Streptomyces violens), 스트렙토마이세스 비올로루벤스(Streptomyces violorubens), 스트렙토마이세스 비렌스(Streptomyces virens), 스트렙토마이세스 버지니아에(Streptomyces virginiae), 스트렙토마이세스 버지니아에 아종 리폭사에(Streptomyces virginiae subsp. lipoxae), 스트렙토마이세스 비리단스(Streptomyces viridans), 스트렙토마이세스 비리디파시엔스(Streptomyces viridifaciens), 스트렙토마이세스 비리디플라버스(Streptomyces viridiflavus), 스트렙토마이세스 비리디스(Streptomyces viridis), 스트렙토마이세스 비리디비올라세우스(Streptomyces viridiviolaceus), 스트렙토마이세스 비리도브룬네우스(Streptomyces viridobrunneus), 스트렙토마이세스 비리도크로모게네스(Streptomyces viridochromogenes), 스트렙토마이세스 비리도크로모게네스 아종 코마벤시스(Streptomyces viridochromogenes subsp. komabensis), 스트렙토마이세스 비리도크로모게네스 아종 술포마이시니(Streptomyces viridochromogenes subsp. sulfomycini), 스트렙토마이세스 비리도디아스타티커스(Streptomyces viridodiastaticus), 스트렙토마이세스 비리도게네스(Streptomyces viridogenes), 스트렙토마이세스 비리도스포러스(Streptomyces viridosporus), 스트렙토마이세스 비리도베루코서스(Streptomyces viridoverrucosus), 스트렙토마이세스 비타미노필러스(Streptomyces vitaminophilus), 스트렙토마이세스 불가리스(Streptomyces vulgaris), 스트렙토마이세스 웨드모렌시스(Streptomyces wedmorensis), 스트렙토마이세스 웰링토니아에(Streptomyces wellingtoniae), 스트렙토마이세스 웨라엔시스(Streptomyces werraensis), 스트렙토마이세스 윌모레이(Streptomyces willmorei), 스트렙토마이세스 위스타리옵시스(Streptomyces wistariopsis), 스트렙토마이세스 울렌시스(Streptomyces woolensis), 스트렙토마이세스 크산토크로모게네스(Streptomyces xanthochromogenes), 스트렙토마이세스 크산토시디커스(Streptomyces xanthocidicus), 스트렙토마이세스 크산톨리티커스(Streptomyces xantholiticus), 스트렙토마이세스 크산토파에우스(Streptomyces xanthophaeus), 스트렙토마이세스 시아멘시스(Streptomyces xiamenensis), 스트렙토마이세스 싱하이엔시스(Streptomyces xinghaiensis), 스트렙토마이세스 크실로파거스(Streptomyces xylophagus), 스트렙토마이세스 양글린엔시스(Streptomyces yanglinensis), 스트렙토마이세스 야니이(Streptomyces yanii), 스트렙토마이세스 야텐시스(Streptomyces yatensis), 스트렙토마이세스 여촌엔시스(Streptomyces yeochonensis), 스트렙토마이세스 예레반엔시스(Streptomyces yerevanensis), 스트렙토마이세스 자카르타엔시스(Streptomyces yogyakartensis), 스트렙토마이세스 요코스카넨시스(Streptomyces yokosukanensis), 스트렙토마이세스 유수피엔시스(Streptomyces youssoufiensis), 스트렙토마이세스 윈난엔시스(Streptomyces yunnanensis), 스트렙토마이세스 자오마이세티커스(Streptomyces zaomyceticus), 스트렙토마이세스 젤렌시스(Streptomyces zelensis), 스트렙토마이세스 징시레시스텐스(Streptomyces zinciresistens) 등을 들 수 있다.
〔지오바실러스속〕
지오바실러스(Geobacillus)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 지오바실러스 칼도프로테올라이티커스(Geobacillus caldoproteolyticus), 지오바실러스 칼독실로실라이티커스(Geobacillus caldoxylosilyticus), 지오바실러스 데빌리스(Geobacillus debilis), 지오바실러스 갈락토시다시우스(Geobacillus galactosidasius), 지오바실러스 가르겐시스(Geobacillus gargensis), 지오바실러스 주라시커스(Geobacillus jurassicus), 지오바실러스 카우스토필러스(Geobacillus kaustophilus), 지오바실러스 리투아니커스(Geobacillus lituanicus), 지오바실러스 팔리더스(Geobacillus pallidus), 지오바실러스 스테아로써모필러스(Geobacillus stearothermophilus), 지오바실러스 스트롬볼리엔시스(Geobacillus stromboliensis), 지오바실러스 서브테라네우스(Geobacillus subterraneus), 지오바실러스 테피다만스(Geobacillus tepidamans), 지오바실러스 써모카테눌라터스(Geobacillus thermocatenulatus), 지오바실러스 써모데니트리피칸스(Geobacillus thermodenitrificans), 지오바실러스 써모데니트리피칸스 아종 칼리더스(Geobacillus thermodenitrificans subsp. calidus), 지오바실러스 써모글루코시다시우스(Geobacillus thermoglucosidasius), 지오바실러스 써모레오보란스(Geobacillus thermoleovorans), 지오바실러스 토에비이(Geobacillus toebii), 지오바실러스 우젠시스(Geobacillus uzensis), 지오바실러스 불카니(Geobacillus vulcani), 지오바실러스 잘리하에(Geobacillus zalihae) 등을 들 수 있다.
〔로도코커스속〕
로도코커스(Rhodococcus)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 로도코커스 로도크로스(Rhodococcus rhodochrous), 로도코커스 에리트로폴리스(Rhodococcus erythropolis), 로도코커스 에쿠이(Rhodococcus equi), 로도코커스 로드니이(Rhodococcus rhodnii), 로도코커스 코랄리너스(Rhodococcus corallinus), 로도코커스 루브로페르팅크터스(Rhodococcus rubropertinctus), 로도코커스 코프로필러스(Rhodococcus coprophilus), 로도코커스 글로베룰러스(Rhodococcus globerulus), 로도코커스 클로로페놀리커스(Rhodococcus chlorophenolicus), 로도코커스 루테우스(Rhodococcus luteus), 로도코커스 아이치엔시스(Rhodococcus aichiensis), 로도코커스 추부엔시스(Rhodococcus chubuensis), 로도코커스 마리스(Rhodococcus maris), 로도코커스 파시엔스(Rhodococcus fascines) 등을 들 수 있다.
〔원핵생물의 바람직한 기타 종〕
또한, 마그네토스피릴룸(Magnetospirillum)속으로 분류되는 미생물로서는 마그네토스피릴룸 마그네티컴(Magnetospirillum magneticum), 로도스피릴룸(Rhodospirillum)속으로 분류되는 미생물로서는 로도스피릴룸 루브럼(Rhodospirillum rubrum), 로도스피릴룸 센테넘(Rhodospirillum centenum) 및 로도스피릴룸 포토메트리컴(Rhodospirillum photometricum), 아조스피릴룸(Azospirillum)속으로 분류되는 미생물로서는, 아조스피릴룸 리포페럼(Azospirillum lipoferum) 및 아조스피릴룸 브라질렌스(Azospirillum brasilense), 티스트렐라(Tistrella)속으로 분류되는 미생물로서는 티스트렐라 모빌리스(Tistrella mobilis), 아시디필룸(Acidiphilium)속으로 분류되는 미생물로서는 아시디필룸 크립텀(Acidiphilium cryptum) 및 아시디필룸 멀티보럼(Acidiphilium multivorum), 로도박터(Rhodobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 로도박터 스패로이데스(Rhodobacter sphaeroides) 및 로도박터 캅술라터스(Rhodobacter capsulatus), 루에게리아(Ruegeria)속으로 분류되는 미생물로서는 루에게리아 포메로이이(Ruegeria pomeroyi), 로세오박터(Roseobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 로세오박터 데니트리피칸스(Roseobacter denitrificans) 및 로세오박터 리토랄리스(Roseobacter litoralis), 디노로세오박터(Dinoroseobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 디노로세오박터 쉬바에(Dinoroseobacter shibae), 패오박터(Phaeobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 패오박터 갈래시엔시스(Phaeobacter gallaeciensis), 옥타데카박터(Octadecabacter)속으로 분류되는 미생물로서는 옥타데카박터 안타르크티커스(Octadecabacter antarcticus) 및 옥타데카박터 아르크티커스(Octadecabacter arcticus), 히포모나스(Hyphomonas)속으로 분류되는 미생물로서는 히포모나스 넵투니엄(Hyphomonas neptunium), 마리카울리스(Maricaulis)속으로 분류되는 미생물로서는 마리카울리스 마리스(Maricaulis maris), 히르스키아(Hirschia)속으로 분류되는 미생물로서는 히르스키아 발티카(Hirschia baltica), 노보스핑고비움(Novosphingobium)속으로 분류되는 미생물로서는 노보스핑고비움 아로마티시보란스(Novosphingobium aromaticivorans), 스핑고픽시스(Sphingopyxis)속으로 분류되는 미생물로서는 스핑고픽시스 알라스켄시스(Sphingopyxis alaskensis), 스핑고비움(Sphingobium)속으로 분류되는 미생물로서는 스핑고비움 자포니컴(Sphingobium japonicum) 및 스핑고비움 클로로페놀리컴(Sphingobium chlorophenolicum), 에리트로박터(Erythrobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 에리트로박터 리토랄리스(Erythrobacter litoralis), 카울로박터(Caulobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 카울로박터 크레스켄터스(Caulobacter crescentus) 및 카울로박터 세그니스(Caulobacter segnis), 페닐로박테리움(Phenylobacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 페닐로박테리움 주시네움(Phenylobacterium zucineum), 아스티카카울리스(Asticcacaulis)속으로 분류되는 미생물로서는 아스티카카울리스 엑센트리커스(Asticcacaulis excentricus), 시노리조비움(Sinorhizobium)속으로 분류되는 미생물로서는 시노리조비움 멜릴로티(Sinorhizobium meliloti), 시노리조비움 메디카에(Sinorhizobium medicae) 및 시노리조비움 프레디이(Sinorhizobium fredii), 아조리조비움(Azorhizobium)속으로 분류되는 미생물로서는 아조리조비움 카울리노단스(Azorhizobium caulinodans), 브루셀라(Brucella)속으로 분류되는 미생물로서는 브루셀라 멜리텐시스(Brucella melitensis), 브루셀라 아보르터스(Brucella abortus), 브루셀라 수이스(Brucella suis), 브루셀라 오비스(Brucella ovis), 브루셀라 카니스(Brucella canis), 브루셀라 미크로티(Brucella microti), 브루셀라 피니페디알리스(Brucella pinnipedialis) 및 브루셀라 세티(Brucella ceti), 아우란티모나스(Aurantimonas)속으로 분류되는 미생물로서는 아우란티모나스 망가녹시단스(Aurantimonas manganoxydans), 브라디리조비움(Bradyrhizobium)속으로 분류되는 미생물로서는 브라디리조비움 자포니컴(Bradyrhizobium japonicum), 아그로모나스(Agromonas)속으로 분류되는 미생물로서는 아그로모나스 올리고트로피카(Agromonas oligotrophica), 로도슈도모나스(Rhodopseudomonas)속으로 분류되는 미생물로서는 로도슈도모나스 팔루스트리스(Rhodopseudomonas palustris), 니트로박터(Nitrobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 니트로박터 위노그라드스키이(Nitrobacter winogradskyi) 및 니트로박터 함부르겐시스(Nitrobacter hamburgensis), 메틸로박테리움(Methylobacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 메틸로박테리움 엑스토르쿠엔스(Methylobacterium extorquens), 메틸로박테리움 라디오톨레란스(Methylobacterium radiotolerans) 및 메틸로박테리움 노둘란스(Methylobacterium nodulans), 로도미크로박테리움(Rhodomicrobium)속으로 분류되는 미생물로서는 로도미크로박테리움 바니엘리이(Rhodomicrobium vannielii), 펠라기박테리움(Pelagibacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 펠라기박테리움 할로톨레란스(Pelagibacterium halotolerans), 파르비바쿨럼(Parvibaculum)속으로 분류되는 미생물로서는 파르비바쿨럼 라바멘티보란스(Parvibaculum lavamentivorans), 파르불라르쿨라(Parvularcula)속으로 분류되는 미생물로서는 파르불라르쿨라 베르무덴시스(Parvularcula bermudensis), 버크홀데리아(Burkholderia)속으로 분류되는 미생물로서는 버크홀데리아 말레이(Burkholderia mallei), 버크홀데리아 슈도말레이(Burkholderia pseudomallei), 버크홀데리아 타일란덴시스(Burkholderia thailandensis), 버크홀데리아 비에트나미엔시스(Burkholderia vietnamiensis), 버크홀데리아 세노세파시아(Burkholderia cenocepacia), 버크홀데리아 암비파리아(Burkholderia ambifaria), 버크홀데리아 멀티보란스(Burkholderia multivorans), 버크홀데리아 세파시아(Burkholderia cepacia), 버크홀데리아 크세노보란스(Burkholderia xenovorans), 버크홀데리아 피마텀(Burkholderia phymatum), 버크홀데리아 피토피르만스(Burkholderia phytofirmans), 버크홀데리아 글루마에(Burkholderia glumae), 버크홀데리아 리족시니카(Burkholderia rhizoxinica), 버크홀데리아 글라디올리(Burkholderia gladioli), 버크홀데리아 페놀리루프트릭스(Burkholderia phenoliruptrix) 및 버크홀데리아 오클라호멘시스(Burkholderia oklahomensis), 랄스토니아(Ralstonia)속으로 분류되는 미생물로서는 랄스토니아 솔라니세아럼(Ralstonia solanacearum), 랄스토니아 피케티이(Ralstonia pickettii) 및 랄스토니아 유트로파(Ralstonia eutropha), 쿠프리아비두스(Cupriavidus)속으로 분류되는 미생물로서는 쿠프리아비두스 메탈리두란스(Cupriavidus metallidurans), 쿠프리아비두스 타이완엔시스(Cupriavidus taiwanensis) 및 쿠프리아비두스 네카토르(Cupriavidus necator), 폴리뉴클레오박터(Polynucleobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 폴리뉴클레오박터 네세사리우스(Polynucleobacter necessarius), 보르데텔라(Bordetella)속으로 분류되는 미생물로서는 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis), 보르데텔라 파라페르투시스(Bordetella parapertussis), 보르데텔라 페트리이(Bordetella petrii) 및 보르데텔라 아비움(Bordetella avium), 테일로렐라(Taylorella)속으로 분류되는 미생물로서는 테일로렐라 에퀴게니탈리스(Taylorella equigenitalis), 알리시클리필러스(Alicycliphilus)속으로 분류되는 미생물로서는 알리시클리필러스 데니트리피칸스(Alicycliphilus denitrificans), 델프티아(Delftia)속으로 분류되는 미생물로서는 델프티아 아시도보란스(Delftia acidovorans), 람리박터(Ramlibacter)속으로 분류되는 미생물로서는 람리박터 타타오우이넨시스(Ramlibacter tataouinensis), 로도페락스(Rhodoferax)속으로 분류되는 미생물로서는 로도페락스 페리레두센스(Rhodoferax ferrireducens), 바리오보락스(Variovorax)속으로 분류되는 미생물로서는 바리오보락스 파라독서스(Variovorax paradoxus), 폴라로모나스(Polaromonas)속으로 분류되는 미생물로서는 폴라로모나스 나프탈레니보란스(Polaromonas naphthalenivorans), 아시도보락스(Acidovorax)속으로 분류되는 미생물로서는 아시도보락스 시트룰리(Acidovorax citrulli), 아시도보락스 에브레우스(Acidovorax ebreus) 및 아시도보락스 아베나에(Acidovorax avenae), 베르미네프로박터(Verminephrobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 베르미네프로박터 에이세니아에(Verminephrobacter eiseniae), 헤르미니이모나스(Herminiimonas)속으로 분류되는 미생물로서는 헤르미니이모나스 아르세니콕시단스(Herminiimonas arsenicoxydans), 헤르바스피릴룸(Herbaspirillum)속으로 분류되는 미생물로서는 헤르바스피릴룸 세로페디카에(Herbaspirillum seropedicae), 콜리모나스(Collimonas)속으로 분류되는 미생물로서는 콜리모나스 풍기보란스(Collimonas fungivorans), 크로모박테리움(Chromobacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 크로모박테리움 비올라세움(Chromobacterium violaceum), 라리박터(Laribacter)속으로 분류되는 미생물로서는 라리박터 홍콩엔시스(Laribacter hongkongensis), 슈도굴벵키아니아(Pseudogulbenkiania)속으로 분류되는 미생물로서는 슈도굴벵키아니아 페로옥시단스(Pseudogulbenkiania ferrooxidans), 니트로소모나스(Nitrosomonas)속으로 분류되는 미생물로서는 니트로소모나스 유로파에아(Nitrosomonas europaea), 니트로소스피라(Nitrosospira)속으로 분류되는 미생물로서는 니트로소스피라 멀티포르미스(Nitrosospira multiformis), 아로마톨레움(Aromatoleum)속으로 분류되는 미생물로서는 아로마톨레움 아로마티컴(Aromatoleum aromaticum), 데클로로모나스(Dechloromonas)속으로 분류되는 미생물로서는 데클로로모나스 아로마티카(Dechloromonas aromatica), 아조스피라(Azospira)(데클로로소마(Dechlorosoma))속으로 분류되는 미생물로서는 아조스피라 오리제(Azospira oryzae)(데클로로소마 수일럼(Dechlorosoma suillum)), 레인헤이메라(Rheinheimera)속으로 분류되는 미생물로서는 레인헤이메라 난하이엔시스(Rheinheimera nanhaiensis), 니트로소코커스(Nitrosococcus)속으로 분류되는 미생물로서는 니트로소코커스 오세아니(Nitrosococcus oceani), 할로로도스피라(Halorhodospira)속으로 분류되는 미생물로서는 할로로도스피라 할로필라(Halorhodospira halophila), 크산토모나스(Xanthomonas)속으로 분류되는 미생물로서는 크산토모나스 캄페스트리스(Xanthomonas campestris), 크산토모나스 악소노포디스(Xanthomonas axonopodis), 크산토모나스 오리제(Xanthomonas oryzae), 크산토모나스 알빌리네안스(Xanthomonas albilineans) 및 크산토모나스 시트리(Xanthomonas citri), 스테노트로포모나스(Stenotrophomonas)속으로 분류되는 미생물로서는 스테노트로포모나스 말토필리아(Stenotrophomonas maltophilia), 슈도크산토모나스(Pseudoxanthomonas)속으로 분류되는 미생물로서는 슈도크산토모나스 수원엔시스(Pseudoxanthomonas suwonensis) 및 슈도크산토모나스 스파딕스(Pseudoxanthomonas spadix), 프란시셀라(Francisella)속으로 분류되는 미생물로서는 프란시셀라 툴라렌시스(Francisella tularensis) 및 프란시셀라 노비시다(Francisella novicida), 사이클로클라스티커스(Cycloclasticus)속으로 분류되는 미생물로서는 사이클로클라스티커스 잔클레스(Cycloclasticus zancles), 하헬라(Hahella)속으로 분류되는 미생물로서는 하헬라 제주엔시스(Hahella chejuensis), 할로모나스(Halomonas)속으로 분류되는 미생물로서는 할로모나스 엘롱가타(Halomonas elongata), 알카니보락스(Alcanivorax)속으로 분류되는 미생물로서는 알카니보락스 보르쿠멘시스(Alcanivorax borkumensis) 및 알카니보락스 디에셀롤레이(Alcanivorax dieselolei), 캉기엘라(Kangiella)속으로 분류되는 미생물로서는 캉기엘라 코리엔시스(Kangiella koreensis), 아조토박터(Azotobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 아조토박터 비넬란디이(Azotobacter vinelandii), 시크로박터(Psychrobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 시크로박터 아르크티커스(Psychrobacter arcticus) 및 시크로박터 크리오할롤렌티스(Psychrobacter cryohalolentis), 알리쉐와넬라(Alishewanella)속으로 분류되는 미생물로서는 알리쉐와넬라 제오트갈리(Alishewanella jeotgali), 알테로모나스(Alteromonas)속으로 분류되는 미생물로서는 알테로모나스 마클레오디이(Alteromonas macleodii), 글라시에콜라(Glaciecola)속으로 분류되는 미생물로서는 글라시에콜라 니트라티레두센스(Glaciecola nitratireducens), 글라시에콜라 시크로필라(Glaciecola psychrophila) 및 글라시에콜라 푸니세아(Glaciecola punicea), 마리노박터(Marinobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 마리노박터 아쿠아에올레이(Marinobacter aquaeolei), 마리노박터 히드로카르보노클라스티커스(Marinobacter hydrocarbonoclasticus), 마리노박터 아드해렌스(Marinobacter adhaerens), 마리노박터 알기콜라(Marinobacter algicola) 및 마리노박터 망가녹시단스(Marinobacter manganoxydans), 마리노박테리움(Marinobacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 마리노박테리움 스타니에리(Marinobacterium stanieri), 사카로파거스(Saccharophagus)속으로 분류되는 미생물로서는 사카로파거스 데그라단스(Saccharophagus degradans), 페리모나스(Ferrimonas)속으로 분류되는 미생물로서는 페리모나스 발레아리카(Ferrimonas balearica), 이디오마리나(Idiomarina)속으로 분류되는 미생물로서는 이디오마리나 로이히엔시스(Idiomarina loihiensis) 및 이디오마리나 발티카(Idiomarina baltica), 콜웰리아(Colwellia)속으로 분류되는 미생물로서는 콜웰리아 시크레리트라에아(Colwellia psychrerythraea), 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas)속으로 분류되는 미생물로서는 슈도알테로모나스 할로플랑크티스(Pseudoalteromonas haloplanktis), 슈도알테로모나스 아틀란티카(Pseudoalteromonas atlantica) 및 슈도알테로모나스 투니카타(Pseudoalteromonas tunicata), 비브리오(Vibrio)속으로 분류되는 미생물로서는 비브리오 파라해몰리티커스(Vibrio parahaemolyticus), 비브리오 불니피커스(Vibrio vulnificus), 비브리오 하르베이이(Vibrio harveyi), 비브리오 푸르니시이(Vibrio furnissii), 비브리오 투비아쉬이(Vibrio tubiashii), 비브리오 시날로엔시스(Vibrio sinaloensis), 비브리오 로티페리아너스(Vibrio rotiferianus), 비브리오 오리엔탈리스(Vibrio orientalis), 비브리오 하르베이이(Vibrio harveyi), 비브리오 코랄리일리티커스(Vibrio coralliilyticus), 비브리오 카리벤티커스(Vibrio caribbenthicus), 비브리오 브라질리엔시스(Vibrio brasiliensis) 및 비브리오 알기놀리티커스(Vibrio alginolyticus), 포토박테리움(Photobacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 포토박테리움 프로푼덤(Photobacterium profundum), 애로모나스(Aeromonas)속으로 분류되는 미생물로서는 애로모나스 히드로필라(Aeromonas hydrophila), 애로모나스 살모니시다(Aeromonas salmonicida) 및 애로모나스 베로니이(Aeromonas veronii), 살리니스패라(Salinisphaera)속으로 분류되는 미생물로서는 살리니스패라 샤바넨시스(Salinisphaera shabanensis), 레지오넬라(Legionella)속으로 분류되는 미생물로서는 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila) 및 레지오넬라 롱베아카에(Legionella longbeachae), 콕시엘라(Coxiella)속으로 분류되는 미생물로서는 콕시엘라 부르네티이(Coxiella burnetii), 데술포코커스(Desulfococcus)속으로 분류되는 미생물로서는 데술포코커스 올레오보란스(Desulfococcus oleovorans), 데술포박테리움(Desulfobacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 데술포박테리움 오토트로피컴(Desulfobacterium autotrophicum), 데술파티바실룸(Desulfatibacillum)속으로 분류되는 미생물로서는 데술파티바실룸 알케니보란스(Desulfatibacillum alkenivorans), 데술포불버스(Desulfobulbus)속으로 분류되는 미생물로서는 데술포불버스 프로피오니커스(Desulfobulbus propionicus), 데술파르쿨러스(Desulfarculus)속으로 분류되는 미생물로서는 데술파르쿨러스 바아르시이(Desulfarculus baarsii), 지오박터(Geobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 지오박터 메탈리레두센스(Geobacter metallireducens), 지오박터 우라니이레두센스(Geobacter uraniireducens) 및 지오박터 베미드지엔시스(Geobacter bemidjiensis), 신트로포박터(Syntrophobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 신트로포박터 푸마록시단스(Syntrophobacter fumaroxidans), 신트로퍼스(Syntrophus)속으로 분류되는 미생물로서는 신트로퍼스 아시디트로피커스(Syntrophus aciditrophicus), 데술포모닐레(Desulfomonile)속으로 분류되는 미생물로서는 데술포모닐레 티에드제이(Desulfomonile tiedjei), 델로비브리오(Bdellovibrio)속으로 분류되는 미생물로서는 델로비브리오 박테리오보러스(Bdellovibrio bacteriovorus) 및 델로비브리오 옥소보러스(Bdellovibrio exovorus), 박테리오보락스(Bacteriovorax)속으로 분류되는 미생물로서는 박테리오보락스 마리너스(Bacteriovorax marinus), 스티그마텔라(Stigmatella)속으로 분류되는 미생물로서는 스티그마텔라 아우란티아카(Stigmatella aurantiaca), 믹소코커스(Myxococcus)속으로 분류되는 미생물로서는 믹소코커스 크산투스(Myxococcus xanthus) 및 믹소코커스 풀버스(Myxococcus fulvus), 아내로믹소박터(Anaeromyxobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 아내로믹소박터 데할로게난스(Anaeromyxobacter dehalogenans), 소랑기움(Sorangium)속으로 분류되는 미생물로서는 소랑기움 셀룰로섬(Sorangium cellulosum), 할리앙기움(Haliangium)속으로 분류되는 미생물로서는 할리앙기움 오크라세움(Haliangium ochraceum), 아시도박테리움(Acidobacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 아시도박테리움 캅술라텀(Acidobacterium capsulatum), 그라눌리셀라(Granulicella)속으로 분류되는 미생물로서는 그라눌리셀라 툰드리콜라(Granulicella tundricola), 일루마토박터(Ilumatobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 일루마토박터 코시네움(Ilumatobacter coccineum), 스트렙토스포랑기움(Streptosporangium)속으로 분류되는 미생물로서는 스트렙토스포랑기움 로세움(Streptosporangium roseum), 노카르디옵시스(Nocardiopsis)속으로 분류되는 미생물로서는 노카르디옵시스 다손빌레이(Nocardiopsis dassonvillei), 써모비피다(Thermobifida)속으로 분류되는 미생물로서는 써모비피다 푸스카(Thermobifida fusca), 써모모노스포라(Thermomonospora)속으로 분류되는 미생물로서는 써모모노스포라 쿠르바타(Thermomonospora curvata), 슈도노카르디아(Pseudonocardia)속으로 분류되는 미생물로서는 슈도노카르디아 디옥사니보란스(Pseudonocardia dioxanivorans), 아미콜라톱시스(Amycolatopsis)속으로 분류되는 미생물로서는 아미콜라톱시스 메디테라네이(Amycolatopsis mediterranei), 사카로모노스포라(Saccharomonospora)속으로 분류되는 미생물로서는 사카로모노스포라 비리디스(Saccharomonospora viridis) 및 사카로모노스포라 크신지앙겐시스(Saccharomonospora xinjiangensis), 사카로폴리스포라(Saccharopolyspora)속으로 분류되는 미생물로서는 사카로폴리스포라 에리트라에아(Saccharopolyspora erythraea) 및 사카로폴리스포라 스피노사(Saccharopolyspora spinosa), 써모비스포라(Thermobispora)속으로 분류되는 미생물로서는 써모비스포라 비스포라(Thermobispora bispora), 악티노신네마(Actinosynnema)속으로 분류되는 미생물로서는 악티노신네마 미룸(Actinosynnema mirum), 미크로모노스포라(Micromonospora)속으로 분류되는 미생물로서는 미크로모노스포라 아우란티아카(Micromonospora aurantiaca), 살리니스포라(Salinispora)속으로 분류되는 미생물로서는 살리니스포라 트로피카(Salinispora tropica) 및 살리니스포라 아레니콜라(Salinispora arenicola), 베루코시스포라(Verrucosispora)속으로 분류되는 미생물로서는 베루코시스포라 마리스(Verrucosispora maris), 크리벨라(Kribbella)속으로 분류되는 미생물로서는 크리벨라 플라비다(Kribbella flavida), 코리네박테리움(Corynebacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 코리네박테리움 제이케이움(Corynebacterium jeikeium), 코리네박테리움 우레알리티컴(Corynebacterium urealyticum), 코리네박테리움 글루타미컴(Corynebacterium glutamicum), 코리네박테리움 암모니아게네스(Corynebacterium ammoniagenes) 및 코리네박테리움 크롭펜스테드티이(Corynebacterium kroppenstedtii), 노카르디아(Nocardia)속으로 분류되는 미생물로서는 노카르디아 파르시니카(Nocardia farcinica), 노카르디아 브라질리엔시스(Nocardia brasiliensis) 및 노카르디아 시리아시게오르기카(Nocardia cyriacigeorgica), 고르도니아(Gordonia)속으로 분류되는 미생물로서는 고르도니아 브론키알리스(Gordonia bronchialis), 고르도니아 네오펠리패시스(Gordonia neofelifaecis) 및 고르도니아 테라에(Gordonia terrae), 디에치아(Dietzia)속으로 분류되는 미생물로서는 디에치아 신나메아(Dietzia cinnamea), 미코박테리움(Mycobacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 미코박테리움 투베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 미코박테리움 보비스(Mycobacterium bovis), 미코박테리움 레프라에(Mycobacterium leprae), 미코박테리움 아비움(Mycobacterium avium), 미코박테리움 스메그마티스(Mycobacterium smegmatis), 미코박테리움 울세란스(Mycobacterium ulcerans), 미코박테리움 반바알레니이(Mycobacterium vanbaalenii), 미코박테리움 길붐(Mycobacterium gilvum), 미코박테리움 아브스케서스(Mycobacterium abscessus), 미코박테리움 미리누(Mycobacterium marinu), 미코박테리움 마실리엔스(Mycobacterium massiliense), 미코박테리움 플레이(Mycobacterium phlei), 미코박테리움 써모레시스티빌레(Mycobacterium thermoresistibile), 미코박테리움 투시아에(Mycobacterium tusciae), 미코박테리움 크세노피(Mycobacterium xenopi) 및 미코박테리움 로데시아에(Mycobacterium rhodesiae), 아미콜리시코커스(Amycolicicoccus)속으로 분류되는 미생물로서는 아미콜리시코커스 서브플라버스(Amycolicicoccus subflavus), 츠카무렐라(Tsukamurella)속으로 분류되는 미생물로서는 츠카무렐라 파우로메타볼라(Tsukamurella paurometabola), 세그닐리파러스(Segniliparus)속으로 분류되는 미생물로서는 세그닐리파러스 로툰더스(Segniliparus rotundus), 미크로박테리움(Microbacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 미크로박테리움 테스타세움(Microbacterium testaceum), 미크로코커스(Micrococcus)속으로 분류되는 미생물로서는 미크로코커스 루테우스(Micrococcus luteus), 아르트로박터(Arthrobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 아르트로박터 아릴라이텐시스(Arthrobacter arilaitensis), 아르트로박터 클로로페놀리커스(Arthrobacter chlorophenolicus), 아르트로박터 글로비포르미스(Arthrobacter globiformis) 및 아르트로박터 페난트레니보란스(Arthrobacter phenanthrenivorans), 레니박테리움(Renibacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 레니박테리움 살모니나럼(Renibacterium salmoninarum), 코쿠리아(Kocuria)속으로 분류되는 미생물로서는 코쿠리아 리조필라(Kocuria rhizophila), 키토코커스(Kytococcus)속으로 분류되는 미생물로서는 키토코커스 세덴타리우스(Kytococcus sedentarius), 셀룰로모나스(Cellulomonas)속으로 분류되는 미생물로서는 셀룰로모나스 피미(Cellulomonas fimi), 인트라스포랑기움(Intrasporangium)속으로 분류되는 미생물로서는 인트라스포랑기움 칼붐(Intrasporangium calvum), 세리니코커스(Serinicoccus)속으로 분류되는 미생물로서는 세리니코커스 프로푼디(Serinicoccus profundi), 프랑키아(Frankia)속으로 분류되는 미생물로서는 프랑키아 알니(Frankia alni), 아시도써무스(Acidothermus)속으로 분류되는 미생물로서는 아시도써무스 셀룰롤리티커스(Acidothermus cellulolyticus), 나카무렐라(Nakamurella)속으로 분류되는 미생물로서는 나카무렐라 멀티파르티타(Nakamurella multipartita), 지오데르마토필러스(Geodermatophilus)속으로 분류되는 미생물로서는 지오데르마토필러스 오브스쿠러스(Geodermatophilus obscurus), 스타케브란드티아(Stackebrandtia)속으로 분류되는 미생물로서는 스타케브란드티아 나사우엔시스(Stackebrandtia nassauensis), 카테눌리스포라(Catenulispora)속으로 분류되는 미생물로서는 카테눌리스포라 아시디필라(Catenulispora acidiphila), 루브로박터(Rubrobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 루브로박터 크실라노필러스(Rubrobacter xylanophilus), 코넥시박터(Conexibacter)속으로 분류되는 미생물로서는 코넥시박터 우에세이(Conexibacter woesei), 오세아노바실러스(Oceanobacillus)속으로 분류되는 미생물로서는 오세아노바실러스 이헤이엔시스(Oceanobacillus iheyensis), 리시니바실러스(Lysinibacillus)속으로 분류되는 미생물로서는 리시니바실러스 스패리커스(Lysinibacillus sphaericus), 할로바실러스(Halobacillus)속으로 분류되는 미생물로서는 할로바실러스 할로필러스(Halobacillus halophilus), 알리사이클로바실러스(Alicyclobacillus)속으로 분류되는 미생물로서는 알리사이클로바실러스 아시도칼다리우스(Alicyclobacillus acidocaldarius), 키르피디아(Kyrpidia)속으로 분류되는 미생물로서는 키르피디아 투스키(Kyrpidia tusci), 브레비바실러스(Brevibacillus)속으로 분류되는 미생물로서는 브레비바실러스 초시넨시스(Brevibacillus choshinensis), 락토바실러스(Lactobacillus)속으로 분류되는 미생물로서는 락토바실러스 부취네리(Lactobacillus buchneri), 클로스트리듐(Clostridium)속으로 분류되는 미생물로서는 클로스트리듐 아세토부틸리컴(Clostridium acetobutylicum), 클로스트리듐 페르프링겐스(Clostridium perfringens), 클로스트리듐 클루이베리(Clostridium kluyveri), 클로스트리듐 셀룰로보란스(Clostridium cellulovorans), 클로스트리듐 디피실레(Clostridium difficile) 및 클로스트리듐 스티클란디이(Clostridium sticklandii), 알칼리필러스(Alkaliphilus)속으로 분류되는 미생물로서는 알칼리필러스 메탈리레디겐스(Alkaliphilus metalliredigens) 및 알칼리필러스 오렘란디이(Alkaliphilus oremlandii), 신트로포모나스(Syntrophomonas)속으로 분류되는 미생물로서는 신트로포모나스 울페이(Syntrophomonas wolfei), 신트로포써무스(Syntrophothermus)속으로 분류되는 미생물로서는 신트로포써무스 리포칼리더스(Syntrophothermus lipocalidus), 유박테리움(Eubacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 유박테리움 락탈레(Eubacterium rectale) 및 유박테리움 리모섬(Eubacterium limosum), 데술피토박테리움(Desulfitobacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 데술피토박테리움 하프니엔스(Desulfitobacterium hafniense), 데술포토마쿨럼(Desulfotomaculum)속으로 분류되는 미생물로서는 데술포토마쿨럼 레두센스(Desulfotomaculum reducens), 펠로토마쿨럼(Pelotomaculum)속으로 분류되는 미생물로서는 펠로토마쿨럼 써모프로피오니컴(Pelotomaculum thermopropionicum), 부티리비브리오(Butyrivibrio)속으로 분류되는 미생물로서는 부티리비브리오 프로테오클라스티커스(Butyrivibrio proteoclasticus), 로세부리아(Roseburia)속으로 분류되는 미생물로서는 로세부리아 호미니스(Roseburia hominis), 오실리박터(Oscillibacter)속으로 분류되는 미생물로서는 오실리박터 발레리시게네스(Oscillibacter valericigenes), 써모아내로박터(Thermoanaerobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 써모아내로박터 텡콩엔시스(Thermoanaerobacter tengcongensis), 카르복시도써무스(Carboxydothermus)속으로 분류되는 미생물로서는 카르복시도써무스 히드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans), 나트라내로비우스(Natranaerobius)속으로 분류되는 미생물로서는 나트라내로비우스 써모필러스(Natranaerobius thermophilus), 할리스코메노박터(Haliscomenobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 할리스코메노박터 히드로시스(Haliscomenobacter hydrossis), 포르피로모나스(Porphyromonas)속으로 분류되는 미생물로서는 포르피로모나스 깅기발리스(Porphyromonas gingivalis) 및 포르피로모나스 아사카롤리티카(Porphyromonas asaccharolytica), 오도리박터(Odoribacter)속으로 분류되는 미생물로서는 오도리박터 스플란치니커스(Odoribacter splanchnicus), 스피로소마(Spirosoma)속으로 분류되는 미생물로서는 스피로소마 링구알레(Spirosoma linguale), 루넬라(Runella)속으로 분류되는 미생물로서는 루넬라 슬리티포르미스(Runella slithyformis), 데이노코커스(Deinococcus)속으로 분류되는 미생물로서는 데이노코커스 라디오두란스(Deinococcus radiodurans), 데이노코커스 게오테르말리스(Deinococcus geothermalis), 데이노코커스 데세르티(Deinococcus deserti), 디이노코커스 마리코펜시스(Deinococcus maricopensis), 데이노코커스 프로테올리티커스(Deinococcus proteolyticus) 및 데이노코커스 고비엔시스(Deinococcus gobiensis), 써무스(Thermus)속으로 분류되는 미생물로서는 써무스 써모필러스(Thermus thermophilus), 써무스 아그나티커스(Thermus agnaticus), 써무스 플라버스(Thermus flavus), 써무스 칼도필러스(Thermus caldophilus), 써무스 루더(Thermus ruder) 및 써무스 스코토둑터스(Thermus scotoductus), 메이오써무스(Meiothermus)속으로 분류되는 미생물로서는 메이오써무스 루버(Meiothermus ruber) 및 메이오써무스 실바너스(Meiothermus silvanus), 오세아니써무스(Oceanithermus)속으로 분류되는 미생물로서는 오세아니써무스 프로푼더스(Oceanithermus profundus), 마리니써무스(Marinithermus)속으로 분류되는 미생물로서는 마리니써무스 히드로테르말리스(Marinithermus hydrothermalis), 겜마티모나스(Gemmatimonas)속으로 분류되는 미생물로서는 겜마티모나스 아우란티아카(Gemmatimonas aurantiaca), 푸소박테리움(Fusobacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 푸소박테리움 뉴클레아텀(Fusobacterium nucleatum), 일리오박터(Ilyobacter)속으로 분류되는 미생물로서는 일리오박터 폴리트로퍼스(Ilyobacter polytropus), 로세이플렉서스(Roseiflexus)속으로 분류되는 미생물로서는 로세이플렉서스 카스텐홀지이(Roseiflexus castenholzii), 헤르페토시폰(Herpetosiphon)속으로 분류되는 미생물로서는 헤르페토시폰 아우란티아커스(Herpetosiphon aurantiacus), 써모미크로비움(Thermomicrobium)속으로 분류되는 미생물로서는 써모미크로비움 로세움(Thermomicrobium roseum), 써모토가(Thermotoga)속으로 분류되는 미생물로서는 써모토가 레팅가에(Thermotoga lettingae), 써모시포(Thermosipho)속으로 분류되는 미생물로서는 써모시포 멜라네시엔시스(Thermosipho melanesiensis) 및 써모시포 아프리카너스(Thermosipho africanus), 페르비도박테리움(Fervidobacterium)속으로 분류되는 미생물로서는 페르비도박테리움 노도섬(Fervidobacterium nodosum), 데페리박터(Deferribacter)속으로 분류되는 미생물로서는 데페리박터 데술푸리칸스(Deferribacter desulfuricans), 칼디테리비브리오(Calditerrivibrio)속으로 분류되는 미생물로서는 칼디테리비브리오 니트로레두센스(Calditerrivibrio nitroreducens), 플렉시스티페스(Flexistipes)속으로 분류되는 미생물로서는 플렉시스티페스 시누사라비시(Flexistipes sinusarabici), 메탈로스패라(Metallosphaera)속으로 분류되는 미생물로서는 메탈리스패라 세둘라(Metallosphaera sedula), 애로피럼(Aeropyrum)속으로 분류되는 미생물로서는 애로피럼 페르닉스(Aeropyrum pernix), 피로바쿨럼(Pyrobaculum)속으로 분류되는 미생물로서는 피로바쿨럼 애로필럼(Pyrobaculum aerophilum), 피로바쿨럼 이슬란디컴(Pyrobaculum islandicum), 피로바쿨럼 칼리디폰티스(Pyrobaculum calidifontis) 및 피로바쿨럼 뉴트로필럼(Pyrobaculum neutrophilum), 칼디비르가(Caldivirga)속으로 분류되는 미생물로서는 칼디비르가 마퀼링겐시스(Caldivirga maquilingensis), 불카니새타(Vulcanisaeta)속으로 분류되는 미생물로서는 불카티새타 디스트리부타(Vulcanisaeta distributa), 아시딜로버스(Acidilobus)속으로 분류되는 미생물로서는 아시딜로버스 사카로보란스(Acidilobus saccharovorans), 할로아르쿨라(Haloarcula)속으로 분류되는 미생물로서는 할로아르쿨라 마리스모르투이(Haloarcula marismortui), 할로쿠아드라텀(Haloquadratum)속으로 분류되는 미생물로서는 할로쿠아드라텀 왈스비이(Haloquadratum walsbyi), 나트로노모나스(Natronomonas)속으로 분류되는 미생물로서는 나트로노모나스 파라오니스(Natronomonas pharaonis), 할로루브럼(Halorubrum)속으로 분류되는 미생물로서는 할로루브럼 라쿠스프로푼디(Halorubrum lacusprofundi), 할로테리게나(Haloterrigena)속으로 분류되는 미생물로서는 할로테리게나 투르크메니카(Haloterrigena turkmenica), 니트리알바(Natrialba)속으로 분류되는 미생물로서는 나트리알바 마가디이(Natrialba magadii), 할랄칼리코커스(Halalkalicoccus)속으로 분류되는 미생물로서는 할랄칼리코커스 제오트갈리(Halalkalicoccus jeotgali), 할로게오메트리컴(Halogeometricum)속으로 분류되는 미생물로서는 할로게오메트리컴 보링쿠엔스(Halogeometricum borinquense), 써모플라즈마(Thermoplasma)속으로 분류되는 미생물로서는 써모플라즈마 아시도필럼(Thermoplasma acidophilum) 및 써모플라즈마 볼카니움(Thermoplasma volcanium), 피크로필러스(Picrophilus)속으로 분류되는 미생물로서는 피크로필러스 토리더스(Picrophilus torridus), 페로플라즈마(Ferroplasma)속으로 분류되는 미생물로서는 페로플라즈마 아시다르마너스(Ferroplasma acidarmanus), 아르캐오글로버스(Archaeoglobus)속으로 분류되는 미생물로서는 아르캐오블로버스 풀기더스(Archaeoglobus fulgidus) 및 아르캐오글로버스 베네피커스(Archaeoglobus veneficus), 페로글로버스(Ferroglobus)속으로 분류되는 미생물로서는 페로글로버스 플라시더스(Ferroglobus placidus), 폴리모르품(Polymorphum)속으로 분류되는 미생물로서는 폴리모르품 길붐(Polymorphum gilvum), 미카비브리오(Micavibrio)속으로 분류되는 미생물로서는 미카비브리오 애루기노사보러스(Micavibrio aeruginosavorus), 시미두이아(Simiduia)속으로 분류되는 미생물로서는 시미두이아 아가리보란스(Simiduia agarivorans), 렙토트릭스(Leptothrix)속으로 분류되는 미생물로서는 렙토트릭스 콜로드니이(Leptothrix cholodnii), 티오모나스(Thiomonas)속으로 분류되는 미생물로서는 티오모나스 인터메디아(Thiomonas intermedia), 루브리보락스(Rubrivivax)속으로 분류되는 미생물로서는 루브리보락스 겔라티노서스(Rubrivivax gelatinosus), 메틸리비움(Methylibium)속으로 분류되는 미생물로서는 메틸리비움 페트롤레이필럼(Methylibium petroleiphilum), 아내로코커스(Anaerococcus)속으로 분류되는 미생물로서는 아내로코커스 프레보티이(Anaerococcus prevotii)가 특히 바람직하다.
[진핵생물의 바람직한 목]
진핵생물에 속하는 미생물로서는, 유로티움목(Eurotiales), 효모균목(Saccharomycetales), 카프노디움목(Capnodiales), 플레오스포라목(Pleosporales), 깜부기균목(Ustilaginales), 흰목이목(Tremellales), 시스토필로바시디움목(Cystofilobasidiales), 고무버섯목(Helotiales), 주발버섯목(Pezizales), 구멍장이버섯목(Polyporales), 주름버섯목(Agaricales), 푸크시니아목(Pucciniales), 마그나포르테목(Magnaporthales), 구멍공버섯목(Sordariales), 미크로아스커스목(Microascales), 육좌균목(Hypocreales), 스포리디오볼루스목(Sporidiobolales), 떡병균목(Exobasidiales), 말라세지아목(Malasseziales), 뼈버섯목(Onygenales), 라불베니아목(Laboulbeniales) 및 털곰팡이목(Mucorales)에 속하는 미생물을 들 수 있다.
또한 실험적으로 메타크릴산 유도체의 생성을 확인할 수 있는 특히 바람직한 미생물로서는 유로티움목(Eurotiales) 및 효모균목(Saccharomycetales)에 속하는 미생물이다.
[진핵생물의 바람직한 과 및 속]
카프노디움목(Capnodiales)으로 분류되는 미생물로서는 미코스패렐라(Mycosphaerella)속, 지고피알라(Zygophiala)속, 지모셉토리아(Zymoseptoria)속, 클라도스포리움(Cladosporium)속 및 카프노디움(Capnodium)속, 플레오스포라목(Pleosporales)으로 분류되는 미생물로서는 프레우시아(Preussia)속, 브라키클라디움(Brachycladium)속, 코클리오볼러스(Cochliobolus)속, 플레오스포라(Pleospora)속, 플레오스포라(Pleospora)속, 렙토스패리아(Leptosphaeria)속, 렙토스패룰리나(Leptosphaerulina)속, 패오스패리아(Phaeosphaeria)속 및 피레노포라(Pyrenophora)속, 깜부기균목(Ustilaginales)으로 분류되는 미생물로서는 슈도지마(Pseudozyma)속, 톨리포스포리움(Tolyposporium)속 및 우스틸라고(Ustilago)속, 흰목이목(Tremellales)으로 분류되는 미생물로서는 불레로마이세스(Bulleromyces)속, 필로바시디엘라(Filobasidiella)(크립토코커스(Cryptococcus))속, 불레라(Bullera)속, 펠로마이세스(Fellomyces)속, 코코바엘라(Kockovaella)속 및 트리코스포론(Trichosporon)속, 시스토필로바시디움목(Cystofilobasidiales)으로 분류되는 미생물로서는 므라키아(Mrakia)속, 크산토필로마이세스(Xanthophyllomyces)속 및 우데니오마이세스(Udeniomyces)속, 고무버섯목(Helotiales)으로 분류되는 미생물로서는 보트리오티니아(Botryotinia)속, 모닐리아(Monilia)속, 모닐리니아(Monilinia)속 및 스클레로티니아(Sclerotinia)속, 주발버섯목(Pezizales)으로 분류되는 미생물로서는 페지자(Peziza)속, 모르첼라(Morchella)속, 헬벨라(Helvella)속, 아스코데스미스(Ascodesmis)속, 아스코볼러스(Ascobolus)속 및 투베르(Tuber)속, 구멍장이버섯목(Polyporales)으로 분류되는 미생물로서는 미콜렙토도노이데스(Mycoleptodonoides)속, 미코아시엘라(Mycoaciella)속, 파르마스토마이세스(Parmastomyces)속 및 포스티아(Postia)속, 주름버섯목(Agaricales)으로 분류되는 미생물로서는 아르트로마이세스(Arthromyces)속, 미세노포렐라(Mycenoporella)속, 라크사리아(Laccaria)속, 모닐로프토라(Moniliophthora)속, 코프리놉시스(Coprinopsis)속 및 스키조필럼(Schizophyllum)속, 푸크시니아목(Pucciniales)으로 분류되는 미생물로서는 푸크시니아(Puccinia)속, 멜람프소라(Melampsora)속, 크로나르티움(Cronartium)속, 시타리아(Cyttaria)속, 콜레오스포리움(Coleosporium)속, 블라스토스포라(Blastospora)속 및 라베넬리아(Ravenelia)속, 마그나포르테목(Magnaporthales)으로 분류되는 미생물로서는 마그나포르테(Magnaporthe)속, 구멍공버섯목(Sordariales)으로 분류되는 미생물로서는 포도스포라(Podospora)속, 뉴로스포라(Neurospora)속, 소르다리아(Sordaria)속, 캐토미움(Chaetomium)속, 티엘라비아(Thielavia)속, 미셀리오프토라(Myceliophthora) 속 및 모노토스포렐라(Monotosporella)속, 미크로아스커스목(Microascales)으로 분류되는 미생물로서는 미크로아스커스(Microascus)속, 노둘로스패리아(Nodulosphaeria)속, 오케아노마이세스(Okeanomyces)속 및 세라토시스티스(Ceratocystis)속, 육좌균목(Hypocreales)으로 분류되는 미생물로서는 푸사리움(Fusarium)속, 넥트리아(Nectria)속, 히포크레아(Hypocrea)속, 히포마이세스(Hypomyces)속, 트리코데르마(Trichoderma)속, 코르디셉스(Cordyceps)속, 클라비셉스(Claviceps)속 및 아크레모니움(Acremonium)속, 스포리디오볼루스목(Sporidiobolales)으로 분류되는 미생물로서는 로도스포리디움(Rhodosporidium)속, 로도토룰라(Rhodotorula)속, 스포리디오볼러스(Sporidiobolus)속 및 스포로볼로마이세스(Sporobolomyces)속, 떡병균목(Exobasidiales)으로 분류되는 미생물로서는 그리피올라(Graphiola)속, 엑소바시디움(Exobasidium)속 및 디셀로마이세스(Dicellomyces)속, 말라세지아목(Malasseziales)으로 분류되는 미생물로서는 말라세지아(Malassezia)속, 뼈버섯목(Onygenales)으로 분류되는 미생물로서는 김노아스커스(Gymnoascus)속, 에레마스커스(Eremascus)속, 아르트로데르마(Arthroderma)속, 코크시디오이데스(Coccidioides)속, 파라코크시디오이데스(Paracoccidioides)속, 운시노카르퍼스(Uncinocarpus)속, 트리코피톤(Trichophyton)속 및 아젤로마이세스(Ajellomyces)속, 라불베니아목(Laboulbeniales)으로 분류되는 미생물로서는 라코마이세스(Rhachomyces)속, 리키아(Rickia)속, 스티그마토마이세스(Stigmatomyces)속 및 세라토마이세스(Ceratomyces)속, 털곰팡이목(Mucorales)으로 분류되는 미생물로서는 아브시디아(Absidia)속, 무코르(Mucor)속, 리조무코르(Rhizomucor)속 및 리조퍼스(Rhizopus)속에 속하는 미생물을 들 수 있다.
유로티움목(Eurotiales)으로 분류되는 미생물로서는 네오페트로마이세스(Neopetromyces)속, 아스퍼질러스(Aspergillus)속, 네오사르토리아(Neosartorya)속, 비소클라미스(Byssochlamys)속, 에메리셀라(Emericella)속, 유페니실리움(Eupenicillium)속, 유로티움(Eurotium)속, 헤미카르펜텔레스(Hemicarpenteles)속, 페니실리움(Penicillium)속, 탈라로마이세스(Talaromyces)속 및 모나스커스(Monascus)속을 들 수 있다.
효모균목(Saccharomycetales)으로 분류되는 미생물로서는 아르트로아스커스(Arthroascus)속, 귈리에르몬델라(Guilliermondella)속, 클라비스포라(Clavispora)속, 메트스크니코위아(Metschnikowia)속, 리포마이세스(Lipomyces)속, 엔도마이세스(Endomyces)속, 아스코이데아(Ascoidea)속, 세팔로아스커스(Cephaloascus)속, 위커하미엘라(Wickerhamiella)속, 지고아스커스(Zygoascus)속, 트리코모나스커스(Trichomonascus)속, 아시쿨로코니디움(Aciculoconidium)속, 암브로시오지마(Ambrosiozyma)속, 블라스토보트리스(Blastobotrys)속, 보트리오자미(Botryozyma)속, 브레타노마이세스(Brettanomyces)속, 믹소지마(Myxozyma)속, 오가타에아(Ogataea)속, 코마가타엘라(Komagataella)속, 트리고놉시스(Trigonopsis)속, 시조블라스토스포리온(Schizoblastosporion)속 및 시모디오마이세스(Sympodiomyces)속을 들 수 있다. 또한, 효모균목(Saccharomycetales)에 속하는 미생물로, 바람직한 미생물로서는, 사카로미케스과(Saccharomycodaceae), 피치아과(Pichiaceae), 디포드아스쿠스과(Dipodascaceae) 및 미토스포릭 사카로마이스과(mitosporic Saccharomycetales)로 분류되는 미생물을 들 수 있다. 그 과에 속하는 미생물로서는 한세니아스포라(Hanseniaspora)속, 클로에케라(Kloeckera)속, 사카로마이코데스(Saccharomycodes)속, 나드소니아(Nadsonia)속, 아쉬비아(Ashbya)속, 시테로마이세스(Citeromyces)속, 데케라(Dekkera)속, 이사트켄키아(Issatchenkia)속, 클루이베로마이세스(Kluyveromyces)속, 파키솔렌(Pachysolen)속, 사카로마이세스(Saccharomyces)속, 사투르니스포라(Saturnispora)속, 테트라피시스포라(Tetrapisispora)속, 토룰라스포라(Torulaspora)속, 지고사카로마이세스(Zygosaccharomyces)속, 지고토룰라스포라(Zygotorulaspora)속, 에레모테시움(Eremothecium)속, 라찬케아(Lachancea)속, 반데르왈토지마(Vanderwaltozyma)속, 나우모보지마(Naumovozyma)속, 카자크스타니아(Kazachstania)속, 에레모테시움(Eremothecium)속, 윌리옵시스(Williopsis)속, 피치아(Pichia)속, 야로위아(Yarrowia)속, 디포다스커스(Dipodascus)속, 아륵술라(Arxula)속, 갈락토마이세스(Galactomyces)속, 게오트리컴(Geotrichum)속, 바브제비아(Babjevia)속, 데바리오마이세스(Debaryomyces)속, 스크완니오마이세스(Schwanniomyces)속, 프리세오마이세스(Priceomyces)속, 야마다지마(Yamadazyma)속, 스케페르소마이세스(Scheffersomyces)속, 메이에로지마(Meyerozyma)속, 로데로마이세스(Lodderomyces)속, 스포로파키데르미아(Sporopachydermia)속 및 칸디다(Candida)속을 들 수 있다.
진핵생물에 속하는 것 중에서, 기타 속으로서는, 보트리오스패리아(Botryosphaeria)속, 헬리코마이세스(Helicomyces)속, 아우레오바시디움(Aureobasidium)속, 셀레노포마(Selenophoma)속, 멜라노태니움(Melanotaenium)속, 오토스포라(Otospora)속, 글로머스(Glomus)속, 알로마이세스(Allomyces)속, 리지디오마이세스(Rhizidiomyces)속, 히포키트리움(Hyphochytrium)속, 시조사카로마이세스(Schizosaccharomyces)속, 필로바시디움(Filobasidium)속, 로도데르미움(Lophodermium)속, 도티데아(Dothidea)속, 오이디움(Oidium)속, 아모르포테카(Amorphotheca)속, 스키탈리디움(Scytalidium)속, 타프리나(Taphrina)속, 스트랑고스포라(Strangospora)속, 키트리디움(Chytridium)속, 뉴모시스티스(Pneumocystis)속, 스클레로티움(Sclerotium)속, 네올렉타(Neolecta)속, 셉토바시디움(Septobasidium)속, 크실라리아(Xylaria)속, 페스탈로티옵시스(Pestalotiopsis)속, 포몹시스(Phomopsis)속, 시도위엘라(Sydowiella)속, 코니오캐티디움(Coniochaetidium)속, 스포로트릭스(Sporothrix)속, 몰레오스포라(Moleospora)속, 베르티실리움(Verticillium)속, 미크로아스칼레스(Microascales)속, 류코스포리디움(Leucosporidium)속, 미크로스트로마(Microstroma)속 및 트라우스토키트리움(Thraustochytrium)속을 들 수 있다.
그 중에서도 바람직한 미생물은, 분지쇄 아미노산의 대사 경로 중의 효소를 갖는 것으로 시사되는 지모셉토리아(Zymoseptoria)속, 패오스패리아(Phaeosphaeria)속, 피레노포라(Pyrenophora)속, 우스틸라고(Ustilago)속, 아쉬비아(Ashbya)속, 클루이베로마이세스(Kluyveromyces)속, 사카로마이세스(Saccharomyces)속, 야로위아(Yarrowia)속, 데바리오마이세스(Debaryomyces)속, 스케페르소마이세스(Scheffersomyces)속, 메이에로지마(Meyerozyma)속, 로데로마이세스(Lodderomyces)속, 칸디다(Candida)속, 필로바시디엘라(Filobasidiella)(크립토코커스(Cryptococcus))속, 보트리오티니아(Botryotinia)속, 스클레로티니아(Sclerotinia)속, 투베르(Tuber)속, 포스티아(Postia)속, 라크사리아(Laccaria)속, 모닐리오프토라(Moniliophthora)속, 코프리놉시스(Coprinopsis)속, 스키조필럼(Schizophyllum)속, 푸크시니아(Puccinia)속, 마그나포르테(Magnaporthe)속, 포도스포라(Podospora)속, 뉴로스포라(Neurospora)속, 소르다리아(Sordaria)속, 티엘라비아(Thielavia)속, 미셀리오프토라(Myceliophthora)속, 푸사리움(Fusarium)속, 넥트리아(Nectria)속, 말라세지아(Malassezia)속, 아스퍼질러스(Aspergillus)속, 네오사르토리아(Neosartorya)속, 아르트로데르마(Arthroderma)속, 코크시디오이데스(Coccidioides)속, 파라코크시디오이데스(Paracoccidioides)속, 운시노카르퍼스(Uncinocarpus)속, 트리코피톤(Trichophyton)속 및 아젤로마이세스(Ajellomyces)속으로 분류되는 미생물이다.
또한 실험적으로 메타크릴산 유도체의 생성을 확인할 수 있는 특히 바람직한 미생물로서는, 사카로마이세스(Saccharomyces)속, 칸디다(Candida)속 및 아스퍼질러스(Aspergillus)속으로 분류되는 미생물이다.
[진핵생물의 바람직한 종]
〔사카로마이세스속〕
사카로마이세스(Saccharomyces)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 사카로마이세스 바르네티이(Saccharomyces barnettii), 사카로마이세스 바이아너스(Saccharomyces bayanus), 사카로마이세스 바이아너스 변종 우바럼(Saccharomyces bayanus var. uvarum), 사카로마이세스 보울라르디이(Saccharomyces boulardii), 사카로마이세스 불데리(Saccharomyces bulderi), 사카로마이세스 카리오카너스(Saccharomyces cariocanus), 사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 카스텔리이(Saccharomyces castellii), 사카로마이세스 다이레넨시스(Saccharomyces dairenensis), 사카로마이세스 디아스타티커스(Saccharomyces diastaticus), 사카로마이세스 도우글라시이(Saccharomyces douglasii), 사카로마이세스 엑시구스(Saccharomyces exiguus), 사카로마이세스 휴마티커스(Saccharomyces humaticus), 사카로마이세스 클루이베리(Saccharomyces kluyveri), 사카로마이세스 쿠드리아브제비이(Saccharomyces kudriavzevii), 사카로마이세스 쿠나시르엔시스(Saccharomyces kunashirensis), 사카로마이세스 마르티니아에(Saccharomyces martiniae), 사카로마이세스 미카타에(Saccharomyces mikatae), 사카로마이세스 나가니시이(Saccharomyces naganishii), 사카로마이세스 노발바리에타티스(Saccharomyces novalvarietatis), 사카로마이세스 파라독서스(Saccharomyces paradoxus), 사카로마이세스 파스토리아너스(Saccharomyces pastorianus), 사카로마이세스 로시니이(Saccharomyces rosinii), 사카로마이세스 로욱시이(Saccharomyces rouxii), 사카로마이세스 스텔라터스(Saccharomyces stellatus), 사카로마이세스 세르바지이(Saccharomyces servazzii), 사카로마이세스 스펜세로럼(Saccharomyces spencerorum), 사카로마이세스 트란스바알렌시스(Saccharomyces transvaalensis), 사카로마이세스 투리센시스(Saccharomyces turicensis), 사카로마이세스 야쿠시마엔시스 변종 야쿠시마엔시스(Saccharomyces yakushimaensis var. yakushimaensis), 사카로마이세스 유니스포러스(Saccharomyces unisporus), 사카로마이세스 우바럼(Saccharomyces uvarum) 등을 들 수 있다.
〔칸디다속〕
칸디다(Candida)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 칸디다 아아세리(Candida aaseri), 칸디다 아프리카나(Candida africana), 칸디다 아글립티니아(Candida aglyptinia), 칸디다 아그레스티스(Candida agrestis), 칸디다 아카바넨시스(Candida akabanensis), 칸디다 알라이(Candida alai), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 칸디다 알리샤니카(Candida alishanica), 칸디다 알로시페리이(Candida allociferrii), 칸디다 아마파에(Candida amapae), 칸디다 암브로시아에(Candida ambrosiae), 칸디다 암픽시아에(Candida amphixiae), 칸디다 아나토미아에(Candida anatomiae), 칸디다 안쿠덴시스(Candida ancudensis), 칸디다 안다만엔시스(Candida andamanensis), 칸디다 앙글리카(Candida anglica), 칸디다 안넬리세아에(Candida anneliseae), 칸디다 안틸란카에(Candida antillancae), 칸디다 아누타에(Candida anutae), 칸디다 아피콜라(Candida apicola), 칸디다 아피스(Candida apis), 칸디다 아피스 변종 아피스(Candida apis var. apis), 칸디다 아쿠아에텍스토리스(Candida aquaetextoris), 칸디다 아라비노페르멘탄스(Candida arabinofermentans), 칸디다 아르카나(Candida arcana), 칸디다 아스칼라피다럼(Candida ascalaphidarum), 칸디다 아시아티카(Candida asiatica), 칸디다 아트비(Candida atbi), 칸디다 아타카포럼(Candida atakaporum), 칸디다 아텐센시스(Candida athensensis), 칸디다 아틀란티카(Candida atlantica), 칸디다 아트모스파에리카(Candida atmosphaerica), 칸디다 아우링기엔시스(Candida auringiensis), 칸디다 아우리스(Candida auris), 칸디다 아우리타(Candida aurita), 칸디다 아우스트로마리나(Candida austromarina), 칸디다 아지마(Candida azyma), 칸디다 바로콜로라덴시스(Candida barrocoloradensis), 칸디다 바티스타에(Candida batistae), 칸디다 비치이(Candida beechii), 칸디다 베르타에(Candida bertae), 칸디다 베르테티이(Candida berthetii), 칸디다 비투미니필라(Candida bituminiphila), 칸디다 블락웰라에(Candida blackwellae), 칸디다 블랑키이(Candida blankii), 칸디다 블라타에(Candida blattae), 칸디다 블라타리아에(Candida blattariae), 칸디다 보히엔시스(Candida bohiensis), 칸디다 보이디니이(Candida boidinii), 칸디다 보카토럼(Candida bokatorum), 칸디다 볼레티콜라(Candida boleticola), 칸디다 볼리토테리(Candida bolitotheri), 칸디다 봄비(Candida bombi), 칸디다 봄비콜라(Candida bombicola), 칸디다 본다제위아에(Candida bondarzewiae), 칸디다 보비나(Candida bovina), 칸디다 브리브로럼(Candida bribrorum), 칸디다 브룸프티(Candida brumptii), 칸디다 부에나비스타엔시스(Candida buenavistaensis), 칸디다 부인엔시스(Candida buinensis), 칸디다 불룬엔시스(Candida bullrunensis), 칸디다 부티리(Candida butyri), 칸디다 카카오이(Candida cacaoi), 칸디다 칸베라엔시스(Candida canberraensis), 칸디다 칸타렐리(Candida cantarellii), 칸디다 카리오실리그니콜라(Candida cariosilignicola), 칸디다 카르포필라(Candida carpophila), 칸디다 카리이콜라(Candida caryicola), 칸디다 카세이놀리티카(Candida caseinolytica), 칸디다 카스텔리이(Candida castellii), 칸디다 카스트렌시스(Candida castrensis), 칸디다 카테눌라타(Candida catenulata), 칸디다 셀룰롤리티카(Candida cellulolytica), 칸디다 세람비시다럼(Candida cerambycidarum), 칸디다 카울리오데스(Candida chauliodes), 칸디다 치카사워럼(Candida chickasaworum), 칸디다 칠렌시스(Candida chilensis), 칸디다 치롭테로럼(Candida chiropterorum), 칸디다 촉타워럼(Candida choctaworum), 칸디다 치리소멜리다럼(Candida chrysomelidarum), 칸디다 시드리(Candida cidri), 칸디다 시페리이(Candida ciferrii), 칸디다 클레리다럼(Candida cleridarum), 칸디다 코이포멘시스(Candida coipomensis), 칸디다 콜리쿨로사(Candida colliculosa), 칸디다 콩글로바타(Candida conglobata), 칸디다 코리달리(Candida corydali), 칸디다 실린드라세아(Candida cylindracea), 칸디다 다지아엔시스(Candida dajiaensis), 칸디다 다니엘리아에(Candida danieliae), 칸디다 다벤포르티이(Candida davenportii), 칸디다 다비시아나(Candida davisiana), 칸디다 데포르만스(Candida deformans), 칸디다 덴드리카(Candida dendrica), 칸디다 덴드로네마(Candida dendronema), 칸디다 데로돈티(Candida derodonti), 칸디다 데세르티콜라(Candida deserticola), 칸디다 디덴시아에(Candida diddensiae), 칸디다 디그보이엔시스(Candida digboiensis), 칸디다 디베르사(Candida diversa), 칸디다 도세이이(Candida dosseyi), 칸디다 드리마이디스(Candida drimydis), 칸디다 드로소필라에(Candida drosophilae), 칸디다 두블리니엔시스(Candida dubliniensis), 칸디다 아산엔시스(Can dida easanensis), 칸디다 에닥스(Candida edax), 칸디다 엘라테리다럼(Candida elateridarum), 칸디다 엘레강스(Candida elegans), 칸디다 엠베로럼(Candida emberorum), 칸디다 엔도마이치다럼(Candida endomychidarum), 칸디다 엔토모필라(Candida entomophila), 칸디다 에핑기아에(Candida eppingiae), 칸디다 에레모플리아(Candida eremophlia), 칸디다 에르가텐시스(Candida ergatensis), 칸디다 에르노비이(Candida ernobii), 칸디다 에첼시이(Candida etchellsii), 칸디다 에타놀리카(Candida ethanolica), 칸디다 파마타(Candida famata), 칸디다 파마타 변종 파마타(Candida famata var. famata), 칸디다 페니카(Candida fennica), 칸디다 페르멘타티(Candida fermentati), 칸디다 페르멘티카렌스(Candida fermenticarens), 칸디다 플로리콜라(Candida floricola), 칸디다 플루비아틸리스(Candida fluviatilis), 칸디다 프라기(Candida fragi), 칸디다 프라기콜라(Candida fragicola), 칸디다 프레이슈시이(Candida freyschussii), 칸디다 프리에드리치이(Candida friedrichii), 칸디다 프리졸렌센시스(Candida frijolensensis), 칸디다 프룩터스(Candida fructus), 칸디다 후카자와에(Candida fukazawae), 칸디다 후쿠야마넨시스(Candida fukuyamanensis), 칸디다 푼기콜라(Candida fungicola), 칸디다 푸시포르마타(Candida fusiformata), 칸디다 갈락타(Candida galacta), 칸디다 갈리스(Candida galis), 칸디다 가투넨시스(Candida gatunensis), 칸디다 게오차레스(Candida geochares), 칸디다 게르마니카(Candida germanica), 칸디다 가나엔시스(Candida ghanaensis), 칸디다 기간텐시스(Candida gigantensis), 칸디다 글라브라타(Candida glabrata), 칸디다 글라에보사(Candida glaebosa), 칸디다 글로보사(Candida globosa), 칸디다 글루코소필라(Candida glucosophila), 칸디다 골루베비이(Candida golubevii), 칸디다 고르가시이(Candida gorgasii), 칸디다 고싱기카(Candida gosingica), 칸디다 고토이(Candida gotoi), 칸디다 그로펜지에세리(Candida gropengiesseri), 칸디다 구아이모럼(Candida guaymorum), 칸디다 귈리에르몬디이(Candida guilliermondii), 칸디다 하에물로니이(Candida haemulonii), 칸디다 할로니트라토필라(Candida halonitratophila), 칸디다 할로필라(Candida halophila), 칸디다 하세가와에(Candida hasegawae), 칸디다 헬레니카(Candida hellenica), 칸디다 홀미(Candida holmii), 칸디다 호밀렌토마(Candida homilentoma), 칸디다 호르데이(Candida hordei), 칸디다 히신치부엔시스(Candida hsintzibuensis), 칸디다 후밀리스(Candida humilis), 칸디다 헝가리카(Candida hungarica), 칸디다 헝추나나(Candida hungchunana), 칸디다 인코무니스(Candida incommunis), 칸디다 인콘스피쿠아(Candida inconspicua), 칸디다 인겐스(Candida ingens), 칸디다 인섹탈렌스(Candida insectalens), 칸디다 인섹타만스(Candida insectamans), 칸디다 인섹토럼(Candida insectorum), 칸디다 인섹토사(Candida insectosa), 칸디다 인터메디아(Candida intermedia), 칸디다 인터메디아 변종 인터메디아(Candida intermedia var. intermedia), 칸디다 이포모에아에(Candida ipomoeae), 칸디다 이시와다에(Candida ishiwadae), 칸디다 자포니카(Candida japonica), 칸디다 자루니이(Candida jaroonii), 칸디다 제프리에시이(Candida jeffriesii), 칸디다 지안시헨시스(Candida jianshihensis), 칸디다 지우펭겐시스(Candida jiufengensis), 칸디다 칸차나부리엔시스(Candida kanchanaburiensis), 칸디다 카오시웅겐시스(Candida kaohsiungensis), 칸디다 카라와이에위이(Candida karawaiewii), 칸디다 카시나가콜라(Candida kashinagacola), 칸디다 카즈오이(Candida kazuoi), 칸디다 케피르(Candida kefyr), 칸디다 카오야이엔시스(Candida khaoyaiensis), 칸디다 크메렌시스(Candida khmerensis), 칸디다 코후엔시스(Candida kofuensis), 칸디다 크라비엔시스(Candida krabiensis), 칸디다 크리시이(Candida krissii), 칸디다 크루이시이(Candida kruisii), 칸디다 크루세이(Candida krusei), 칸디다 크루소이데스(Candida krusoides), 칸디다 쿠노럼(Candida kunorum), 칸디다 군위엔시스(Candida kunwiensis), 칸디다 라비두리다럼(Candida labiduridarum), 칸디다 락티스콘덴시(Candida lactis-condensi), 칸디다 램소넨시스(Candida laemsonensis), 칸디다 람비카(Candida lambica), 칸디다 라세넨시스(Candida lassenensis), 칸디다 라우렐리아에(Candida laureliae), 칸디다 레안드라에(Candida leandrae), 칸디다 레셉시이(Candida lessepsii), 칸디다 레반티나(Candida levantina), 칸디다 리동샤니카(Candida lidongshanica), 칸디다 리그니콜라(Candida lignicola), 칸디다 리그노하비탄스(Candida lignohabitans), 칸디다 리그노필라(Candida lignophila), 칸디다 리그노사(Candida lignosa), 칸디다 리폴리티카(Candida lipolytica), 칸디다 리트사에아에(Candida litsaeae), 칸디다 일랑퀴후엔시스(Candida llanquihuensis), 칸디다 로데라에(Candida lodderae), 칸디다 룬디아나(Candida lundiana), 칸디다 루시타니아에(Candida lusitaniae), 칸디다 리코페르디나에(Candida lycoperdinae), 칸디다 릭소소필라(Candida lyxosophila), 칸디다 마에사(Candida maesa), 칸디다 마그놀리아에(Candida magnoliae), 칸디다 말토사(Candida maltosa), 칸디다 만니토파시엔스(Candida mannitofaciens), 칸디다 마리스(Candida maris), 칸디다 마리티마(Candida maritima), 칸디다 막시이(Candida maxii), 칸디다 멜리비오시카(Candida melibiosica), 칸디다 멜리니이(Candida melinii), 칸디다 멤브레니파시엔스(Candida membranifaciens), 칸디다 메센테리카(Candida mesenterica), 칸디다 메탑실로시스(Candida metapsilosis), 칸디다 메타놀로베센스(Candida methanolovescens), 칸디다 메타노소르보사(Candida methanosorbosa), 칸디다 메틸리카(Candida methylica), 칸디다 미카엘리(Candida michaelii), 칸디다 밀레리(Candida milleri), 칸디다 모기이(Candida mogii), 칸디다 모코에나이이(Candida mokoenaii), 칸디다 몰리시아나(Candida molischiana), 칸디다 몬타나(Candida montana), 칸디다 모라코티아에(Candida morakotiae), 칸디다 무시페라(Candida mucifera), 칸디다 멀티게미스(Candida multigemmis), 칸디다 무사에(Candida musae), 칸디다 마이세탕기이(Candida mycetangii), 칸디다 내오덴드라(Candida naeodendra), 칸디다 나콘라차시멘시스(Candida nakhonratchasimensis), 칸디다 나나스포라(Candida nanaspora), 칸디다 나탈렌시스(Candida natalensis), 칸디다 니르란디카(Candida neerlandica), 칸디다 네모덴드라(Candida nemodendra), 칸디다 뉴스토넨시스(Candida neustonensis), 칸디다 니트라티보란스(Candida nitrativorans), 칸디다 니트라토필라(Candida nitratophila), 칸디다 노다엔시스(Candida nodaensis), 칸디다 논소르보필라(Candida nonsorbophila), 칸디다 노르베겐시스(Candida norvegensis), 칸디다 노르베기카(Candida norvegica), 칸디다 노바키이(Candida novakii), 칸디다 옵투사 변종 옵투사(Candida obtusa var. obtusa), 칸디다 오딘트소바에(Candida odintsovae), 칸디다 올레오필라(Candida oleophila), 칸디다 올리바에(Candida olivae), 칸디다 온타리오엔시스(Candida ontarioensis), 칸디다 오이텐시스(Candida ooitensis), 칸디다 오르바(Candida orba), 칸디다 오레고넨시스(Candida oregonensis), 칸디다 오르소프실로시스(Candida orthopsilosis), 칸디다 오르토니이(Candida ortonii), 칸디다 오발리스(Candida ovalis), 칸디다 옥시센토니아에(Candida oxycentoniae), 칸디다 팔로데스(Candida pallodes), 칸디다 팔미올레오필라(Candida palmioleophila), 칸디다 팔마이렌시스(Candida palmyrensis), 칸디다 팔루디게나(Candida paludigena), 칸디다 파나멘시스(Candida panamensis), 칸디다 파나메리카나(Candida panamericana), 칸디다 파라폴리모르파(Candida parapolymorpha), 칸디다 파라프실로시스(Candida parapsilosis), 칸디다 파라프실로시스 변종 파라프실로시스(Candida parapsilosis var. parapsilosis), 칸디다 파라루고사(Candida pararugosa), 칸디다 파타니엔시스(Candida pattaniensis), 칸디다 펠타타(Candida peltata), 칸디다 페오리아엔시스(Candida peoriaensis), 칸디다 페트로후엔시스(Candida petrohuensis), 칸디다 팡군겐시스(Candida phangngensis), 칸디다 피카초엔시스(Candida picachoensis), 칸디다 피세아에(Candida piceae), 칸디다 피그날리아에(Candida pignaliae), 칸디다 피멘시스(Candida pimensis), 칸디다 피니(Candida pini), 칸디다 핀톨로페시이(Candida pintolopesii), 칸디다 핀톨로페시이 변종 핀톨로페시이(Candida pintolopesii var. pintolopesii), 칸디다 핀톨로페시이 변종 슬루피아에(Candida pintolopesii var. sloofiae), 칸디다 피너스(Candida pinus), 칸디다 플루테이(Candida plutei), 칸디다 폴리모르파(Candida polymorpha), 칸디다 포미필라(Candida pomiphila), 칸디다 폰데로사에(Candida ponderosae), 칸디다 포풀리(Candida populi), 칸디다 포웰리이(Candida powellii), 칸디다 프라추아펜시스(Candida prachuapensis), 칸디다 프루니콜라(Candida prunicola), 칸디다 슈도플로스쿨로럼(Candida pseudoflosculorum), 칸디다 슈도글라에보사(Candida pseudoglaebosa), 칸디다 슈도해물로니이(Candida pseudohaemulonii), 칸디다 슈도인터메디아(Candida pseudointermedia), 칸디다 슈도지우펭겐시스(Candida pseudojiufengensis), 칸디다 슈도람비카(Candida pseudolambica), 칸디다 슈도반데르클리프티이(Candida pseudovanderkliftii), 칸디다 피지크로필라(Candida psychrophila), 칸디다 풀체리마(Candida pulcherrima), 칸디다 피랄리다에(Candida pyralidae), 칸디다 퀘르시트루사(Candida quercitrusa), 칸디다 퀘르컴(Candida quercuum), 칸디다 레일레넨시스(Candida railenensis), 칸디다 랄루넨시스(Candida ralunensis), 칸디다 라농겐시스(Candida ranongensis), 칸디다 라차시멘시스(Candida ratchasimensis), 칸디다 레스팅가에(Candida restingae), 칸디다 레베르사(Candida reversa), 칸디다 르하기이(Candida rhagii), 칸디다 로브네티아에(Candida robnettiae), 칸디다 루고펠리쿨로사(Candida rugopelliculosa), 칸디다 루고사(Candida rugosa), 칸디다 루고사 변종 루고사(Candida rugosa var. rugosa), 칸디다 사가미나(Candida sagamina), 칸디다 사이토아나(Candida saitoana), 칸디다 사케(Candida sake), 칸디다 살만티센시스(Candida salmanticensis), 칸디다 사니티이(Candida sanitii), 칸디다 산타마리아에(Candida santamariae), 칸디다 산타마리아에 변종 멤브라니파시엔스(Candida santamariae var. membranifaciens), 칸디다 산타마리아에 변종 산타마리아에(Candida santamariae var. santamariae), 칸디다 산트자코벤시스(Candida santjacobensis), 칸디다 사니이엔시스(Candida sanyiensis), 칸디다 사라부리엔시스(Candida saraburiensis), 칸디다 사보니카(Candida savonica), 칸디다 샤타비이(Candida schatavii), 칸디다 세키이(Candida sekii), 칸디다 세콴엔시스(Candida sequanensis), 칸디다 세르기펜시스(Candida sergipensis), 칸디다 쉐하타에(Candida shehatae), 칸디다 쉐하타에 변종 이섹토사(Candida shehatae var. insectosa), 칸디다 쉐하타에 변종 리그노사(Candida shehatae var. lignosa), 칸디다 쉐하타에 변종 쉐하타에(Candida shehatae var. shehatae), 칸디다 시아멘시스(Candida siamensis), 칸디다 실바에(Candida silvae), 칸디다 실바노럼(Candida silvanorum), 칸디다 실바티카(Candida silvatica), 칸디다 실비쿨트릭스(Candida silvicultrix), 칸디다 시노라보란티움(Candida sinolaborantium), 칸디다 시테펜시스(Candida sithepensis), 칸디다 슬루피아에(Candida slooffiae), 칸디다 스마구사(Candida smagusa), 칸디다 스미스소니이(Candida smithsonii), 칸디다 소자에(Candida sojae), 칸디다 솔라니(Candida solani), 칸디다 솔리콜라(Candida solicola), 칸디다 손크키이(Candida sonckii), 칸디다 송클라엔시스(Candida songkhlaensis), 칸디다 소노렌시스(Candida sonorensis), 칸디다 소피아에레기나에(Candida sophiaereginae), 칸디다 소르보필라(Candida sorbophila), 칸디다 소르보사(Candida sorbosa), 칸디다 소르보시보란스(Candida sorbosivorans), 칸디다 소르복실로사(Candida sorboxylosa), 칸디다 스판도벤시스(Candida spandovensis), 칸디다 스파에리카(Candida sphaerica), 칸디다 스타운토니카(Candida stauntonica), 칸디다 스텔라타(Candida stellata), 칸디다 스텔리말리콜라(Candida stellimalicola), 칸디다 스트리(Candida stri), 칸디다 수시필라(Candida succiphila), 칸디다 수에시카(Candida suecica), 칸디다 수테펜시스(Candida suthepensis), 칸디다 수와나리티이(Candida suwanaritii), 칸디다 스즈키이(Candida suzukii), 칸디다 타카마츠즈켄시스(Candida takamatsuzukensis), 칸디다 타카타(Candida takata), 칸디다 탈리아에(Candida taliae), 칸디다 탐마니엔시스(Candida tammaniensis), 칸디다 탄노톨레란스(Candida tannotolerans), 칸디다 탄티차로에니아에(Candida tanticharoeniae), 칸디다 탄자와엔시스(Candida tanzawaensis), 칸디다 타오유아니카(Candida taoyuanica), 칸디다 타르타리보란스(Candida tartarivorans), 칸디다 템노칠라에(Candida temnochilae), 칸디다 테누이스(Candida tenuis), 칸디다 테파에(Candida tepae), 칸디다 테레브라(Candida terebra), 칸디다 테라보럼(Candida terraborum), 칸디다 테트리기다럼(Candida tetrigidarum), 칸디다 타일란디카(Candida thailandica), 칸디다 타이뮤앙겐시스(Candida thaimueangensis), 칸디다 테아에(Candida theae), 칸디다 써모필라(Candida thermophila), 칸디다 틸니이(Candida tilneyi), 칸디다 톨레란스(Candida tolerans), 칸디다 토레시이(Candida torresii), 칸디다 트리토마에(Candida tritomae), 칸디다 트로피칼리스(Candida tropicalis), 칸디다 트로피칼리스 변종 트로피칼리스(Candida tropicalis var. tropicalis), 칸디다 트리포덴드로니(Candida trypodendroni), 칸디다 츠치야에(Candida tsuchiyae), 칸디다 츠쿠바엔시스(Candida tsukubaensis), 칸디다 투물리콜라(Candida tumulicola), 칸디다 울미(Candida ulmi), 칸디다 유틸리스(Candida utilis), 칸디다 바시니이(Candida vaccinii), 칸디다 발디비아나(Candida valdiviana), 칸디다 발리다(Candida valida), 칸디다 반데르왈티이(Candida vanderwaltii), 칸디다 바리아빌리스(Candida variabilis), 칸디다 바티오바라에(Candida vartiovaarae), 칸디다 베로나에(Candida veronae), 칸디다 베르사틸리스(Candida versatilis), 칸디다 비나리아(Candida vinaria), 칸디다 비니(Candida vini), 칸디다 비스와나티이(Candida viswanathii), 칸디다 완체르니아에(Candida wancherniae), 칸디다 위케르하미이(Candida wickerhamii), 칸디다 워나노럼(Candida wounanorum), 칸디다 와이오밍겐시스(Candida wyomingensis), 칸디다 크세스토비이(Candida xestobii), 칸디다 크실로테리니(Candida xyloterini), 칸디다 유안샤니커스(Candida yuanshanicus), 칸디다 유코럼(Candida yuchorum), 칸디다 젬플리니나(Candida zemplinina), 칸디다 제일라노이데스(Candida zeylanoides), 칸디다 제일라노이데스 변종 제일라노이데스(Candida zeylanoides var. zeylanoides) 등을 들 수 있다.
〔아스퍼질러스속〕
아스퍼질러스(Aspergillus)속으로 분류되는 미생물로서는, 예를 들어 아스퍼질러스 아칸소스포러스(Aspergillus acanthosporus), 아스퍼질러스 아콜룸나리스(Aspergillus acolumnaris), 아스퍼질러스 아쿨레아터스(Aspergillus aculeatus), 아스퍼질러스 아에네우스(Aspergillus aeneus), 아스퍼질러스 아피니스(Aspergillus affinis), 아스퍼질러스 알라하바디이(Aspergillus allahabadii), 아스퍼질러스 알리아세우스(Aspergillus alliaceus), 아스퍼질러스 알루타세우스(Aspergillus alutaceus), 아스퍼질러스 암비구스(Aspergillus ambiguus), 아스퍼질러스 암스텔로다미(Aspergillus amstelodami), 아스퍼질러스 아밀로보러스(Aspergillus amylovorus), 아스퍼질러스 아노말러스(Aspergillus anomalus), 아스퍼질러스 안토데스미스(Aspergillus anthodesmis), 아스퍼질러스 아피카(Aspergillus apica), 아스퍼질러스 아펜디쿨라터스(Aspergillus appendiculatus), 아스퍼질러스 아레나리우스(Aspergillus arenarius), 아스퍼질러스 아스퍼레센스(Aspergillus asperescens), 아스퍼질러스 아테시우스(Aspergillus athecius), 아스퍼질러스 아우란티오브루네우스(Aspergillus aurantiobrunneus), 아스퍼질러스 아우라터스(Aspergillus auratus), 아스퍼질러스 아우레우스 변종 아시더스(Aspergillus aureus var. acidus), 아스퍼질러스 아우레우스 변종 미노르(Aspergillus aureus var. minor), 아스퍼질러스 아우레오풀겐스(Aspergillus aureofulgens), 아스퍼질러스 아우레오라터스(Aspergillus aureolatus), 아스퍼질러스 아우레올러스(Aspergillus aureolus), 아스퍼질러스 아우리코머스(Aspergillus auricomus), 아스퍼질러스 아베나세우스(Aspergillus avenaceus), 아스퍼질러스 아와모리(Aspergillus awamori), 아스퍼질러스 아와모리 변종 푸메우스(Aspergillus awamori var. fumeus), 아스퍼질러스 아와모리 변종 푸스커스(Aspergillus awamori var. fuscus), 아스퍼질러스 아와모리 변종 미니머스(Aspergillus awamori var. minimus), 아스퍼질러스 아와모리 변종 피세우스(Aspergillus awamori var. piceus), 아스퍼질러스 바타타스(Aspergillus batatas), 아스퍼질러스 비콜로르(Aspergillus bicolor), 아스퍼질러스 비플라너스(Aspergillus biplanus), 아스퍼질러스 비스포러스(Aspergillus bisporus), 아스퍼질러스 봄비시스(Aspergillus bombycis), 아스퍼질러스 브라질리엔시스(Aspergillus brasiliensis), 아스퍼질러스 브레비페스(Aspergillus brevipes), 아스퍼질러스 브리드게리(Aspergillus bridgeri), 아스퍼질러스 브루네오유니세리아터스(Aspergillus brunneo-uniseriatus), 아스퍼질러스 브루네오유니세리아터스 변종 나너스(Aspergillus brunneo-uniseriatus var. nanus), 아스퍼질러스 카엘라터스(Aspergillus caelatus), 아스퍼질러스 카에시엘러스(Aspergillus caesiellus), 아스퍼질러스 카에스피토서스(Aspergillus caespitosus), 아스퍼질러스 캄페스트리스(Aspergillus campestris), 아스퍼질러스 칸디더스(Aspergillus candidus), 아스퍼질러스 카르보나리우스(Aspergillus carbonarius), 아스퍼질러스 카르네우스(Aspergillus carneus), 아스퍼질러스 카르노이이(Aspergillus carnoyi), 아스퍼질러스 셀룰로사에(Aspergillus cellulosae), 아스퍼질러스 서비너스(Aspergillus cervinus), 아스퍼질러스 체발리에리(Aspergillus chevalieri), 아스퍼질러스 체발리에리 변종 인터메디우스(Aspergillus chevalieri var. intermedius), 아스퍼질러스 크리셀러스(Aspergillus chrysellus), 아스퍼질러스 시나모메우스(Aspergillus cinnamomeus), 아스퍼질러스 시트리스포러스(Aspergillus citrisporus), 아스퍼질러스 클라바토플라버스(Aspergillus clavatoflavus), 아스퍼질러스 클라바토나니카(Aspergillus clavatonanica), 아스퍼질러스 클라바토나니커스(Aspergillus clavatonanicus), 아스퍼질러스 클라바터스(Aspergillus clavatus), 아스퍼질러스 클레이스토미누터스(Aspergillus cleistominutus), 아스퍼질러스 코니커스(Aspergillus conicus), 아스퍼질러스 콘정크터스(Aspergillus conjunctus), 아스퍼질러스 코레미포르미스(Aspergillus coremiiformis), 아스퍼질러스 코루가터스(Aspergillus corrugatus), 아스퍼질러스 크라시하이파에(Aspergillus crassihyphae), 아스퍼질러스 크레메우스(Aspergillus cremeus), 아스퍼질러스 크리스타터스(Aspergillus cristatus), 아스퍼질러스 크루스토서스(Aspergillus crustosus), 아스퍼질러스 크리스탈리너스(Aspergillus crystallinus), 아스퍼질러스 데플렉터스(Aspergillus deflectus), 아스퍼질러스 디모르피커스(Aspergillus dimorphicus), 아스퍼질러스 디버서스(Aspergillus diversus), 아스퍼질러스 도로티커스(Aspergillus dorothicus), 아스퍼질러스 두리카울리스(Aspergillus duricaulis), 아스퍼질러스 에부르네오크레메우스(Aspergillus eburneocremeus), 아스퍼질러스 에키눌라터스(Aspergillus echinulatus), 아스퍼질러스 에집티아커스(Aspergillus egyptiacus), 아스퍼질러스 엘레강스(Aspergillus elegans), 아스퍼질러스 엘립티커스(Aspergillus ellipticus), 아스퍼질러스 엘롱가터스(Aspergillus elongatus), 아스퍼질러스 페넬리아에(Aspergillus fennelliae), 아스퍼질러스 피큠(Aspergillus ficuum), 아스퍼질러스 피스케리(Aspergillus fischeri), 아스퍼질러스 피스케리 변종 브라질리엔시스(Aspergillus fischeri var. brasiliensis), 아스퍼질러스 피스케리 변종 글라버(Aspergillus fischeri var. glaber), 아스퍼질러스 피스케리 변종 스피노서스(Aspergillus fischeri var. spinosus), 아스퍼질러스 플라셴트라에게리(Aspergillus flaschentraegeri), 아스퍼질러스 플라비페스(Aspergillus flavipes), 아스퍼질러스 플라보푸르카터스(Aspergillus flavofurcatus), 아스퍼질러스 플라버스(Aspergillus flavus), 아스퍼질러스 플라버스 변종 콜럼나리스(Aspergillus flavus var. columnaris), 아스퍼질러스 플라버스 변종 플라버스(Aspergillus flavus var. flavus), 아스퍼질러스 플라버스 변종 소자에(Aspergillus flavus var. sojae), 아스퍼질러스 플로쿨로서스(Aspergillus flocculosus), 아스퍼질러스 플로리포르미스(Aspergillus floriformis), 아스퍼질러스 포에티더스(Aspergillus foetidus), 아스퍼질러스 포에티더스 변종 아시더스(Aspergillus foetidus var. acidus), 아스퍼질러스 포에티더스 변종 팔리더스(Aspergillus foetidus var. pallidus), 아스퍼질러스 포베올라터스(Aspergillus foveolatus), 아스퍼질러스 프레세니이(Aspergillus fresenii), 아스퍼질러스 프루티쿨로서스(Aspergillus fruticulosus), 아스퍼질러스 푸마리커스(Aspergillus fumaricus), 아스퍼질러스 푸미가터스(Aspergillus fumigatus), 아스퍼질러스 푸미가터스 변종 아콜룸나리스(Aspergillus fumigatus var. acolumnaris), 아스퍼질러스 푸미가터스 변종 엘립티커스(Aspergillus fumigatus var. ellipticus), 아스퍼질러스 푸미가터스 변종 푸미가터스(Aspergillus fumigatus var. fumigatus), 아스퍼질러스 푸미가터스 변종 헬볼러스(Aspergillus fumigatus var. helvolus), 아스퍼질러스 푸니쿨로서스(Aspergillus funiculosus), 아스퍼질러스 기간테우스(Aspergillus giganteus), 아스퍼질러스 글라버(Aspergillus glaber), 아스퍼질러스 글라우커스(Aspergillus glaucus), 아스퍼질러스 고라크푸렌시스(Aspergillus gorakhpurensis), 아스퍼질러스 그라실리스(Aspergillus gracilis), 아스퍼질러스 그라눌라터스(Aspergillus granulatus), 아스퍼질러스 그라눌로서스(Aspergillus granulosus), 아스퍼질러스 짐노사다에(Aspergillus gymnosardae), 아스퍼질러스 할로필리커스(Aspergillus halophilicus), 아스퍼질러스 헬리코트릭스(Aspergillus helicothrix), 아스퍼질러스 헤네버기이(Aspergillus hennebergii), 아스퍼질러스 헤테로카르요티커스(Aspergillus heterocaryoticus), 아스퍼질러스 헤테로모르퍼스(Aspergillus heteromorphus), 아스퍼질러스 헤테로탈리커스(Aspergillus heterothallicus), 아스퍼질러스 이이즈카에(Aspergillus iizukae), 아스퍼질러스 임플리카터스(Aspergillus implicatus), 아스퍼질러스 인수에터스(Aspergillus insuetus), 아스퍼질러스 인술리콜라(Aspergillus insulicola), 아스퍼질러스 이누이이(Aspergillus inuii), 아스퍼질러스 이타코니커스(Aspergillus itaconicus), 아스퍼질러스 이보리엔시스(Aspergillus ivoriensis), 아스퍼질러스 자너스(Aspergillus janus), 아스퍼질러스 자너스 변종 브레비스(Aspergillus janus var. brevis), 아스퍼질러스 자너스 변종 자너스(Aspergillus janus var. janus), 아스퍼질러스 자포니커스(Aspergillus japonicus), 아스퍼질러스 자포니커스 변종 아트로푸스커스(Aspergillus japonicus var. atrofuscus), 아스퍼질러스 자포니커스 변종 비리디플라버스(Aspergillus japonicus var. viridiflavus), 아스퍼질러스 캄바렌시스(Aspergillus kambarensis), 아스퍼질러스 카나가와엔시스(Aspergillus kanagawaensis), 아스퍼질러스 카와치이(Aspergillus kawachii), 아스퍼질러스 라노서스(Aspergillus lanosus), 아스퍼질러스 렌툴러스(Aspergillus lentulus), 아스퍼질러스 레포리스(Aspergillus leporis), 아스퍼질러스 로이코카르퍼스(Aspergillus leucocarpus), 아스퍼질러스 롱기베시카(Aspergillus longivesica), 아스퍼질러스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis), 아스퍼질러스 루크노웬시스(Aspergillus lucknowensis), 아스퍼질러스 루테오니게르(Aspergillus luteo-niger), 아스퍼질러스 말리그너스(Aspergillus malignus), 아스퍼질러스 말로도라터스(Aspergillus malodoratus), 아스퍼질러스 만기니이(Aspergillus manginii), 아스퍼질러스 메디우스(Aspergillus medius), 아스퍼질러스 멜레우스(Aspergillus melleus), 아스퍼질러스 미크로세팔러스(Aspergillus microcephalus), 아스퍼질러스 미크로비리디시트리너스(Aspergillus microviridicitrinus), 아스퍼질러스 미크로사이스티커스(Aspergillus microcysticus), 아스퍼질러스 미니머스(Aspergillus minimus), 아스퍼질러스 미요코엔시스(Aspergillus miyokoensis), 아스퍼질러스 몬테비덴시스(Aspergillus montevidensis), 아스퍼질러스 멀티콜로르(Aspergillus multicolor), 아스퍼질러스 무타빌리스(Aspergillus mutabilis), 아스퍼질러스 니둘란스(Aspergillus nidulans), 아스퍼질러스 니둘란스 변종 아크리스타터스(Aspergillus nidulans var. acristatus), 아스퍼질러스 니둘란스 변종 덴타터스(Aspergillus nidulans var. dentatus), 아스퍼질러스 니둘란스 변종 에키눌라터스(Aspergillus nidulans var. echinulatus), 아스퍼질러스 니둘란스 변종 라터스(Aspergillus nidulans var. latus), 아스퍼질러스 니둘란스 변종 로세우스(Aspergillus nidulans var. roseus), 아스퍼질러스 니게르(Aspergillus niger), 아스퍼질러스 니게르 무트 시나모메우스(Aspergillus niger mut. cinnamomeus), 아스퍼질러스 니게르 변종 인터메디우스(Aspergillus niger var. intermedius), 아스퍼질러스 니게르 변종 마크로스포러스(Aspergillus niger var. macrosporus), 아스퍼질러스 니게르 변종 나누스(Aspergillus niger var. nanus), 아스퍼질러스 니게르 변종 니게르(Aspergillus niger var. niger), 아스퍼질러스 니게르 변종 니게르 에프. 헤네베르기이(Aspergillus niger var. niger f. hennebergii), 아스퍼질러스 니게르 변종 포에니시스(Aspergillus niger var. phoenicis), 아스퍼질러스 니게르 무트 시에마니(Aspergillus niger mut. schiemanni), 아스퍼질러스 니베오글라우커스(Aspergillus niveoglaucus), 아스퍼질러스 니베우스(Aspergillus niveus), 아스퍼질러스 니베우스 변종 인디카(Aspergillus niveus ver. indica), 아스퍼질러스 노미우스(Aspergillus nomius), 아스퍼질러스 누탄스(Aspergillus nutans), 아스퍼질러스 오크라세오로세우스(Aspergillus ochraceoroseus), 아스퍼질러스 오크라세우스(Aspergillus ochraceus), 아스퍼질러스 오르나터스(Aspergillus ornatus), 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae), 아스퍼질러스 오리제 변종 브루네우스(Aspergillus oryzae var. brunneus), 아스퍼질러스 오리제 변종 에푸서스(Aspergillus oryzae var. effusus), 아스퍼질러스 오리제 변종 마그나스포러스(Aspergillus oryzae var. magnasporus), 아스퍼질러스 오리제 변종 오리제(Aspergillus oryzae var. oryzae), 아스퍼질러스 오리제 변종 스포로플라버스(Aspergillus oryzae var. sporoflavus), 아스퍼질러스 오리제 변종 바리아빌리스(Aspergillus oryzae var. variabilis), 아스퍼질러스 오리제 변종 비리디스(Aspergillus oryzae var. viridis), 아스퍼질러스 오스티아너스(Aspergillus ostianus), 아스퍼질러스 팔리더스(Aspergillus pallidus), 아스퍼질러스 파나멘시스(Aspergillus panamensis), 아스퍼질러스 파라독서스(Aspergillus paradoxus), 아스퍼질러스 파라시티커스(Aspergillus parasiticus), 아스퍼질러스 파라시티커스 변종 글로보서스(Aspergillus parasiticus var. globosus), 아스퍼질러스 파르바테시우스(Aspergillus parvathecius), 아스퍼질러스 파르불러스(Aspergillus parvulus), 아스퍼질러스 페니실리오포르미스(Aspergillus penicillioformis), 아스퍼질러스 페니실리오이데스(Aspergillus penicillioides), 아스퍼질러스 페르시이(Aspergillus persii), 아스퍼질러스 페트라키이(Aspergillus petrakii), 아스퍼질러스 페이로넬리이(Aspergillus peyronelii), 아스퍼질러스 피알리셉터스(Aspergillus phialiseptus), 아스퍼질러스 포에니시스(Aspergillus phoenicis), 아스퍼질러스 푸롤리페란스(Aspergillus proliferans), 아스퍼질러스 프로투베러스(Aspergillus protuberus), 아스퍼질러스 슈도데플렉터스(Aspergillus pseudodeflectus), 아스퍼질러스 슈도글라우커스(Aspergillus pseudoglaucus), 아스퍼질러스 슈도타마리이(Aspergillus pseudotamarii), 아스퍼질러스 풀베룰렌터스(Aspergillus pulverulentus), 아스퍼질러스 풀비너스(Aspergillus pulvinus), 아스퍼질러스 푸니세우스(Aspergillus puniceus), 아스퍼질러스 콰드리싱크터스(Aspergillus quadricinctus), 아스퍼질러스 콰드릴리네아터스(Aspergillus quadrilineatus), 아스퍼질러스 퀘르시너스(Aspergillus quercinus), 아스퍼질러스 퀘르시너스 변종 페트라키이(Aspergillus quercinus var. petrakii), 아스퍼질러스 라페리(Aspergillus raperi), 아스퍼질러스 레쿠르바터스(Aspergillus recurvatus), 아스퍼질러스 레펜스(Aspergillus repens), 아스퍼질러스 레스트릭터스(Aspergillus restrictus), 아스퍼질러스 리조포더스(Aspergillus rhizopodus), 아스퍼질러스 로부스터스(Aspergillus robustus), 아스퍼질러스 루버(Aspergillus ruber), 아스퍼질러스 루굴로서스(Aspergillus rugulosus), 아스퍼질러스 사이토이 변종 카고시마엔시스(Aspergillus saitoi var. kagoshimaensis), 아스퍼질러스 살비이콜라(Aspergillus salviicola), 아스퍼질러스 스클레로티오럼(Aspergillus sclerotiorum), 아스퍼질러스 세풀터스(Aspergillus sepultus), 아스퍼질러스 실바티커스(Aspergillus silvaticus), 아스퍼질러스 소자에(Aspergillus sojae), 아스퍼질러스 스파르서스(Aspergillus sparsus), 아스퍼질러스 스파툴라터스(Aspergillus spathulatus), 아스퍼질러스 스펙타빌리스(Aspergillus spectabilis), 아스퍼질러스 스펠룬세우스(Aspergillus spelunceus), 아스퍼질러스 스펠루네우스(Aspergillus speluneus), 아스퍼질러스 스피눌로서스(Aspergillus spinulosus), 아스퍼질러스 스텔라터스(Aspergillus stellatus), 아스퍼질러스 스텔라터스 변종 아스텔라터스(Aspergillus stellatus var. astellatus), 아스퍼질러스 스트라메니우스(Aspergillus stramenius), 아스퍼질러스 스트리아터스(Aspergillus striatus), 아스퍼질러스 스트로마토이데스(Aspergillus stromatoides), 아스퍼질러스 서볼리바세우스(Aspergillus subolivaceus), 아스퍼질러스 서브세실리스(Aspergillus subsessilis), 아스퍼질러스 술푸레우스(Aspergillus sulphureus), 아스퍼질러스 술푸레우스 변종 미니머스(Aspergillus sulphureus var. minimus), 아스퍼질러스 순데르바니이(Aspergillus sunderbanii), 아스퍼질러스 사이도위이(Aspergillus sydowii), 아스퍼질러스 타마리이(Aspergillus tamarii), 아스퍼질러스 타르더스(Aspergillus tardus), 아스퍼질러스 테레우스(Aspergillus terreus), 아스퍼질러스 테레우스 변종 아프리카너스(Aspergillus terreus var. africanus), 아스퍼질러스 테레우스 변종 아우레우스(Aspergillus terreus var. aureus), 아스퍼질러스 테레우스 변종 바에디지니이(Aspergillus terreus var. baedijnii), 아스퍼질러스 테레우스 변종 글로보서스(Aspergillus terreus var. globosus), 아스퍼질러스 테레우스 변종 테레우스(Aspergillus terreus var. terreus), 아스퍼질러스 테리콜라(Aspergillus terricola), 아스퍼질러스 테리콜라 변종 아메리카나(Aspergillus terricola var. americana), 아스퍼질러스 테리콜라 변종 인디커스(Aspergillus terricola var. indicus), 아스퍼질러스 테스타세오콜로란스(Aspergillus testaceocolorans), 아스퍼질러스 써모무타터스(Aspergillus thermomutatus), 아스퍼질러스 토미이(Aspergillus thomii), 아스퍼질러스 토고엔시스(Aspergillus togoensis), 아스퍼질러스 토노필러스(Aspergillus tonophilus), 아스퍼질러스 톡시카리우스(Aspergillus toxicarius), 아스퍼질러스 투빙겐시스(Aspergillus tubingensis), 아스퍼질러스 움브로서스(Aspergillus umbrosus), 아스퍼질러스 웅구이스(Aspergillus unguis), 아스퍼질러스 유닐라테랄리스(Aspergillus unilateralis), 아스퍼질러스 우사미이 무트 시로우사미이(Aspergillus usamii mut. shirousamii), 아스퍼질러스 우사미이 변종 시로우사미이(Aspergillus usamii var. shiro-usamii), 아스퍼질러스 우스터스(Aspergillus ustus), 아스퍼질러스 우바럼(Aspergillus uvarum), 아스퍼질러스 바덴시스(Aspergillus vadensis), 아스퍼질러스 바리안스(Aspergillus varians), 아스퍼질러스 버시컬러(Aspergillus versicolor), 아스퍼질러스 비올라세오푸스커스(Aspergillus violaceofuscus), 아스퍼질러스 비올라세우스(Aspergillus violaceus), 아스퍼질러스 비리디누탄스(Aspergillus viridinutans), 아스퍼질러스 비티스(Aspergillus vitis), 아스퍼질러스 비티스 변종 몬테비덴시스(Aspergillus vitis var. montevidensis), 아스퍼질러스 웬티이(Aspergillus wentii), 아스퍼질러스 웬티이 변종 미니머스(Aspergillus wentii var. minimus), 아스퍼질러스 자오킹겐시스(Aspergillus zhaoqingensis), 아스퍼질러스 조나터스(Aspergillus zonatus) 등을 들 수 있다.
〔진핵생물의 바람직한 기타 종〕
또한, 지모셉토리아(Zymoseptoria)속으로 분류되는 미생물로서는 지모셉토리아 트리티시(Zymoseptoria tritici), 패오스패리아(Phaeosphaeria)속으로 분류되는 미생물로서는 패오스패리아 노도럼(Phaeosphaeria nodorum), 피레노포라(Pyrenophora)속으로 분류되는 미생물로서는 피레노포라 테레스(Pyrenophora teres), 우스틸라고(Ustilago)속으로 분류되는 미생물로서는 우스틸라고 마이디스(Ustilago maydis), 아쉬비아(Ashbya)속으로 분류되는 미생물로서는 아쉬비아 고시피이(Ashbya gossypii)(에레모테시움 고시피이(Eremothecium gossypii)), 클루이베로마이세스(Kluyveromyces)속으로 분류되는 미생물로서는 클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 야로위아(Yarrowia)속으로 분류되는 미생물로서는 야로위아 리폴리티카(Yarrowia lipolytica), 데바리오마이세스(Debaryomyces)속으로 분류되는 미생물로서는 데바리오마이세스 한세니이(Debaryomyces hansenii), 스케페로소마이세스(Scheffersomyces)속으로 분류되는 미생물로서는 스케페로소마이세스 스티피티스(Scheffersomyces stipitis), 메이에로지마(Meyerozyma)속으로 분류되는 미생물로서는 메이에로지마 귈리에르몬디이(Meyerozyma guilliermondii), 로데로마이세스(Lodderomyces)속으로 분류되는 미생물로서는 로데로마이세스 엘롱기스포러스(Lodderomyces elongisporus), 필로바시디엘라(Filobasidiella)(크립토코커스(Cryptococcus))속으로 분류되는 미생물로서는 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 크립토코커스 가티이(Cryptococcus gattii) 및 크립토코커스 아밀롤렌터스(Cryptococcus amylolentus), 보트리오티니아(Botryotinia)속으로 분류되는 미생물로서는 보트리오티니아 푸켈리아나(Botryotinia fuckeliana), 스클레로티니아(Sclerotinia)속으로 분류되는 미생물로서는 스클레로티니아 스클레로티오럼(Sclerotinia sclerotiorum), 투베르(Tuber)속으로 분류되는 미생물로서는 투베르 멜라노스포럼(Tuber melanosporum), 포스티아(Postia)속으로 분류되는 미생물로서는 포스티아 플라센타(Postia placenta), 라크사리아(Laccaria)속으로 분류되는 미생물로서는 라크사리아 비콜로르(Laccaria bicolor), 모닐리오프토라(Moniliophthora)속으로 분류되는 미생물로서는 모닐리오프토라 페르니시오사(Moniliophthora perniciosa), 코프리놉시스(Coprinopsis)속으로 분류되는 미생물로서는 코프리놉시스 시네레아(Coprinopsis cinerea), 스키조필럼(Schizophyllum)속으로 분류되는 미생물로서는 스키조필럼 콤무네(Schizophyllum commune), 푸크시니아(Puccinia)속으로 분류되는 미생물로서는 푸크시니아 그라미니스(Puccinia graminis), 마그나포르테(Magnaporthe)속으로 분류되는 미생물로서는 마그나포르테 오리제(Magnaporthe oryzae), 포도스포라(Podospora) 속으로 분류되는 미생물로서는 포도스포라 안세리나(Podospora anserina), 뉴로스포라(Neurospora)속으로 분류되는 미생물로서는 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa), 소르다리아(Sordaria)속으로 분류되는 미생물로서는 소르다리아 마크로스포라(Sordaria macrospora), 티엘라비아(Thielavia)속으로 분류되는 미생물로서는 티엘라비아 테레스트리스(Thielavia terrestris), 미셀리오프토라(Myceliophthora)속으로 분류되는 미생물로서는 미셀리오프토라 써모필라(Myceliophthora thermophila), 푸사리움(Fusarium)속으로 분류되는 미생물로서는 푸사리움 그라미네아럼(Fusarium graminearum), 넥트리아(Nectria)속으로 분류되는 미생물로서는 넥트리아 해마토코카(Nectria haematococca), 말라세지아(Malassezia)속으로 분류되는 미생물로서는 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa), 네오사르토리아(Neosartorya)속으로 분류되는 미생물로서는 네오사르토리아 피스케리(Neosartorya fischeri), 아르트로데르마(Arthroderma)속으로 분류되는 미생물로서는 아르트로데르마 벤하미아에(Arthroderma benhamiae), 코크시디오이데스(Coccidioides)속으로 분류되는 미생물로서는 코크시디오이데스 임미티스(Coccidioides immitis) 및 코크시디오이데스 포사다시이(Coccidioides posadasii), 파라코크시디오이데스(Paracoccidioides)속으로 분류되는 미생물로서는 파라코크시디이오이데스 브라질리엔시스(Paracoccidioides brasiliensis), 운시노카르퍼스(Uncinocarpus)속으로 분류되는 미생물로서는 운시노카르퍼스 리시이(Uncinocarpus reesii), 트리코피톤(Trichophyton)속으로 분류되는 미생물로서는 트리코피톤 베루코섬(Trichophyton verrucosum), 아젤로마이세스(Ajellomyces)속으로 분류되는 미생물로서는 아젤로마이세스 캅술라터스(Ajellomyces capsulatus), 히포크레아(Hypocrea)속으로 분류되는 미생물로서는 히포크레아 루파(Hypocrea rufa), 아크레모니움(Acremonium)속으로 분류되는 미생물로서는 아크레모니움 크리소게넘(Acremonium chrysogenum), 페니실리움(Penicillium)속으로 분류되는 미생물로서는 페니실리움 카멤베르티이(Penicillium camembertii), 오가타에아(Ogataea)속으로 분류되는 미생물로서는 오가타에아 미누타(Ogataea minuta), 코마가타엘라(Komagataella)속으로 분류되는 미생물로서는 코마가타엘라 파스토리스(Komagataella pastoris), 트리고놉시스(Trigonopsis)속으로 분류되는 미생물로서는 트리고놉시스 바리아빌리스(Trigonopsis variabilis), 스키조사카로마이세스(Schizosaccharomyces)속으로 분류되는 미생물로서는 스키조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe), 스키탈리디움(Scytalidium)속으로 분류되는 미생물로서는 스키탈리디움 써모피럼(Scytalidium thermophirum)을 들 수 있다.
이상, 원핵 및 진핵 미생물로 실험적으로 메타크릴산 유도체의 생성을 확인할 수 있는 특히 바람직한 속은 이하에 나타내는 바와 같다. 슈도모나스(Pseudomonas)속, 바실러스(Bacillus)속, 스핑고박테리움(Sphingobacterium)속, 코마모나스(Comamonas)속, 브레분디모나스(Brevundimonas)속, 스핑고모나스(Sphingomonas)속, 오크로박트럼(Ochrobactrum)속, 페도박터(Pedobacter)속, 패니바실러스(Paenibacillus)속, 아크로모박터(Achromobacter)속, 아시네토박터(Acinetobacter)속, 쉐와넬라(Shewanella)속, 리스토넬라(Listonella)속, 아그로박테리움(Agrobacterium)속, 메소리조비움(Mesorhizobium)속, 리조비움(Rhizobium)속, 파라코커스(Paracoccus)속, 크산토박터(Xanthobacter)속, 스트렙토마이세스(Streptomyces)속, 지오바실러스(Geobacillus)속, 로도코커스(Rhodococcus)속, 사카로마이세스(Saccharomyces)속, 칸디다(Candida)속 또는 아스퍼질러스(Aspergillus)속에 속하는 미생물이다.
그 중에서도 보다 바람직하게는, 스핑고박테리움(Sphingobacterium)속, 코마모나스(Comamonas)속, 브레분디모나스(Brevundimonas)속, 스핑고모나스(Sphingomonas)속, 오크로박트럼(Ochrobactrum)속, 페도박터(Pedobacter)속, 패니바실러스(Paenibacillus)속, 아크로모박터(Achromobacter)속, 아시네토박터(Acinetobacter)속, 쉐와넬라(Shewanella)속, 리스토넬라(Listonella)속, 아그로박테리움(Agrobacterium)속, 메소리조비움(Mesorhizobium)속, 파라코커스(Paracoccus)속, 크산토박터(Xanthobacter)속, 지오바실러스(Geobacillus)속, 로도코커스(Rhodococcus)속 또는 칸디다(Candida)속에 속하는 미생물이다.
[바람직한 균주]
본 발명에 따른 메타크릴산의 제조 방법에서 사용하는 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물의 특히 바람직한 예로서는, 이하의 높은 메타크릴산 생성 능력을 갖는 균주를 들 수 있다(후술하는 실시예 참조).
(i) 슈도모나스(Pseudomonas)속에 속하는, B25-2주(독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구(NITE), 특허 미생물 기탁 센터(우편번호 292-0818, 일본 치바껭 기사라즈시 가즈사카마타리 2-5-8), 수탁 번호: NITE BP-1451), D22-1주(수탁 번호: NITE BP-1452), D43-1주(수탁 번호: NITE BP-1453), D25주(수탁 번호: NITE BP-1454), D26주(수탁 번호: NITE BP-1455), D29주(수탁 번호: NITE BP-1456), D41-2주(수탁 번호: NITE BP-1457) 또는 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida) NBRC12996.
(ii) 바실러스(Bacillus)속에 속하는, G1주(수탁 번호: NITE BP-1458), G2(수탁 번호: NITE BP-1459)주, R1주(수탁 번호: NITE BP-1460), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) NBRC12210, 바실러스 바디우스(Bacillus badius) ATCC14574, 바실러스 메가테리움(Bacillus megaterium) NBRC15308 또는 바실러스 심플렉스(Bacillus simplex) ATCC49097.
(iii) 스핑고박테리움(Sphingobacterium)속에 속하는, B13주(수탁 번호: NITE BP-1461).
(iv) 코마모나스(Comamonas)속에 속하는, 코마모나스 테리게나(Comamonas terrigena) NBRC13299.
(V) 브레분디모나스(Brevundimonas)속에 속하는, 브레분디모나스 디미누타(Brevundimonas diminuta) ATCC11568, 브레분디모나스 베시쿨라리스(Brevundimonas vesicularis) ATCC11426 또는 브레분디모나스 서브비브리오이데스(Brevundimonas subvibrioides) NBRC16000.
(vi) 스핑고모나스(Sphingomonas)속에 속하는, 스핑고모나스 파우시모빌리스(Sphingomonas paucimobilis) NBRC 13935.
(vii) 오크로박트럼(Ochrobactrum)속에 속하는, 오크로박트럼 종(Ochrobactrum sp.) NBRC12951, 오크로박트럼 인터메디움(Ochrobactrum intermedium) NBRC15820, 오크로박트럼 인터메디움(Ochrobactrum intermedium) NBRC13694, 오크로박트럼 안트로픽(Ochrobactrum anthropic) ATCC49237, 오크로박트럼 그리그노넨스(Ochrobactrum grignonense) NBRC 102586 또는 오크로박트럼 루피니(Ochrobactrum lupini) NBRC 102587.
(viii) 페도박터(Pedobacter)속에 속하는, 페도박터 헤파리너스(Pedobacter heparinus) NBRC12017.
(ix) 패니바실러스(Paenibacillus)속에 속하는, 패니바실러스 종(Paenibacillus sp.) NBRC13157.
(x) 아크로모박터(Achromobacter)속에 속하는, 아크로모박터 데니트리피칸스(Achromobacter denitrificans) NBRC12669.
(xi) 아시네토박터(Acinetobacter)속에 속하는, 아시네토박터 해몰리티커스(Acinetobacter haemolyticus) ATCC17906 또는 아시네토박터 주니이(Acinetobacter junii) ATCC17908.
(xii) 쉐와넬라(Shewanella)속에 속하는, 쉐와넬라 포디나에(Shewanella fodinae) NBRC105216.
(xiii) 리스토넬라(Listonella)속에 속하는, 리스토넬라 앙귈라럼(Listonella anguillarum) ATCC19264.
(xiv) 아그로박테리움(Agrobacterium)속에 속하는, 아그로박테리움 루테움(Agrobacterium luteum) NBRC15768.
(xv) 메소리조비움(Mesorhizobium)속에 속하는, 메소리조비움 로티(Mesorhizobium loti) ATCC700743.
(xvi) 리조비움(Rhizobium)속에 속하는, 리조비움 레구미노사럼(Rhizobium leguminosarum) ATCC10004.
(xvii) 파라코커스(Paracoccus)속에 속하는, 파라코커스 아미노필러스(Paracoccus aminophilus) NBRC16710.
(xviii) 크산토박터(Xanthobacter)속에 속하는, 크산토박터 아우토트로피커스(Xanthobacter autotrophicus) ATCC35674.
(xix) 스트렙토마이세스(Streptomyces)속에 속하는, 스트렙토마이세스 그리세우스(Streptomyces griseus) NBRC13350.
(xx) 지오바실러스(Geobacillus)속에 속하는, 지오바실러스 스테아로써모필러스(Geobacillus stearothermophilus) NBRC12983.
(xxi) 로도코커스 에리트로폴리스를 들 수 있다. 더 바람직한 주로서는, 로도코커스 에리트로폴리스 PR-4주, 로도코커스 에리트로폴리스 KA2-5-1주, 로도코커스 에리트로폴리스 IGTS8주, 로도코커스 에리트로폴리스 D-1주, 로도코커스 에리트로폴리스 H-2주, 로도코커스 에리트로폴리스 N1-36주, 로도코커스 에리트로폴리스 I-19주, 로도코커스 에리트로폴리스 ECRD-1주, 로도코커스 에리트로폴리스 B1주, 로도코커스 에리트로폴리스 SY-1주, 로도코커스 에리트로폴리스 UM3주, 로도코커스 에리트로폴리스 UM9주 또는 로도코커스 SPT09주 등을 들 수 있고, 특히 바람직하게는 로도코커스 에리트로폴리스 PR-4주를 들 수 있다.
(xxii) 사카로마이세스(Saccharomyces)속에 속하는, 사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae) NBRC1136, 사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae) NBRC2347 또는 사카로마이세스 파라독서스(Saccharomyces paradoxus) NBRC10609.
(xxiii) 칸디다(Candida)속에 속하는, 칸디다 유틸리스(Candida utilis) NBRC1086 또는 칸디다 파라프실로시스(Candida parapsilosis) ATCC22019.
(xxiv) 아스퍼질러스(Aspergillus)속에 속하는, 아스퍼질러스 니게르(Aspergillus niger) ATCC6275, 아스퍼질러스 플라버스(Aspergillus flavus) NBRC8558 또는 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae) NBRC4255.
[스크리닝 등에 의한 미생물의 선택 방법]
메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물은, 토양, 하천수, 호소(湖沼)수, 해수, 진흙, 동물, 식물, 곤충 등으로부터, 아미노산 또는 지방산의 자화성을 지표로 평판 분리법이나 집적 배양법 등의 스크리닝에 의해 발견할 수 있다.
구체적으로는 발린 및 이소부티르산의 자화성, 및/또는 메타크릴산 생성 능력을 평가하는 것으로부터, 본 발명에 적합한 미생물을 선택할 수 있다. 발린 또는 이소부티르산의 자화성은, 예를 들어 0.1 내지 1%의 발린 또는 이소부티르산을 탄소원으로 하는 합성 배양지에서의 생육을 관찰함으로써 평가할 수 있다. 메타크릴산 생성 능력은, 예를 들어 동일 배양액 내에 메타크릴산의 생성을 분석함으로써 평가할 수 있다. 또는 동일 배양에서 얻어진 균체를 발린 또는 이소부티르산을 0.1 내지 1% 포함하는 용액과 접촉시켜, 동일 반응액 내의 메타크릴산의 생성을 분석함으로써 평가할 수 있다. 반응은 30℃에서 5 내지 120시간 진탕하면 된다. 바람직하게는, 상기 평가에 의해 메타크릴산 유도체를 0.04ppm 이상 생성하는 능력을 갖는 미생물인 것이 바람직하다.
또는, 미생물의 균학적 성질(배양적 성질, 형태적 성질, 생리학적 성질, 화학 분류학적 성질 및 유전학적 성질)에 의해, 본 발명에 적합한 미생물을 선택할 수 있다. 예를 들어, 미생물의 rRNA 유전자의 동일성으로부터 본 발명의 미생물을 선택할 수 있다. 구체적으로는, 서열 번호 1 내지 49에 기재된 염기 서열 중 어느 하나에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 rRNA 유전자를 갖는 미생물에서 선택할 수 있다.
또한, 본 발명에 적합한 미생물은 상술한 분류학상의 목, 과 또는 속에 속하는 미생물 중에서 선택하여, rRNA 유전자 정보를 조합함으로써 효율적으로 압축할 수 있다.
또한, rRNA 유전자의 해석 및 동정 방법은, 예를 들어 「유전자 해석법 16SrRNA 유전자의 염기 서열 결정법(일본 방선균 학회편 방선균의 분류와 동정, pp88-117 2001)」, 「Bulletin of Japanese Society of Microbial Ecology Vol.10, 31-42, 1995」 및 「제16 개정 일본 약방; 유전자 해석에 의한 미생물의 신속 동정법」 등을 참조할 수 있다. 바람직하게는, 이 균학적 성질과, 발린 또는 이소부티르산의 자화성 및 메타크릴산 생성 능력의 지표를 조합하여, 본 발명에 적합한 미생물을 선택한다. 그렇게 함으로써 기존의 타입 컬처에서 선택하는 것도 가능하다.
[유도주]
미생물로서, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물(예를 들어 상기 (i) 내지 (xxiv)의 균주)로부터 천연으로 또는 화학적 또는 물리적 처리에 의해 유도되고, 여전히 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 탄소원 및/또는 에너지원으로 하여 메타크릴산을 생성하는 능력을 유지하는 유도주를 사용해도 된다. 유도주에는 이하에 나타내는 「변이주」나 「유전자 개변주」가 포함된다.
[변이주]
변이주는, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물에, 화학적 또는 물리적 처리(예를 들어 γ선 조사 등)에 의해, 유전자 변이를 유발하여 얻을 수 있다.
[유전자 개변주]
유전자 개변주는, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물에, 하기와 같이 하여 활성이 강화된, 또는 활성을 결손 또는 저하시킨 주이다.
활성의 강화란, 균체외로부터 미생물에 도입된 유전자에 기초하여 당해 미생물에서의 효소 유전자(유래에 상관없음)의 발현량이 증대하는 것을 의미하며, 효소를 코딩하는 유전자를 미생물의 균체외로부터 균체 내에 도입하는 것 외에, 미생물이 게놈상에 보유하는 효소 유전자의 프로모터 활성을 강화하는 것 또는 다른 프로모터와 치환함으로써 효소 유전자를 강 발현시킨 것, 또는 당해 효소 유전자의 리프레서 활성을 저감화 또는 불활성화하는 것의 결과로서 당해 효소 활성을 강화시키는 것을 포함한다. 또한, 유전자 도입이나 게놈상의 유전자의 치환 등은 통상법에 의해 행할 수 있다.
유전자 개변주는, 메타크릴산 합성 반응을 저해하는 효소의 활성을 결손 또는 저하시킨 유전자 개변을 행한 개변주이어도 된다. 활성의 「결손」 또는 「저하」란, 당해 미생물에서의 당해 효소 유전자의 발현이 완전히 없어지거나 감소하는 것을 의미하고, 당해 효소 유전자에 치환, 결실 또는 삽입이 일어나는 것 외에, 미생물이 게놈상에 보유하는 효소 유전자의 프로모터 활성을 저하시키는 것 또는 다른 프로모터와 치환함으로써 효소 유전자의 발현을 억제시킨 것, 또는 당해 효소 유전자의 리프레서 활성을 강화 또는 활성화하는 것의 결과로서 당해 효소 활성을 저감시키는 것을 포함한다. 또한, 이 유전자 개변은, 통상법에 따라서 행하면 된다.
바람직한 개변주로서는, 이하에 나타낸 (a) 또는 (b) 중 적어도 한쪽의 특징을 갖는 개변주를 들 수 있다.
(a) BCKAD 유전자 및/또는 ACD 유전자가 도입됨으로써, 메타크릴산 생성 활성이 강화되어 있다.
(b) 에노일 CoA 히드라타제 유전자, 3-히드록시 이소부티릴 CoA 히드로라제 유전자 및/또는 3-히드록시이소부티르산 데히드로게나제 유전자의 결손 또는 불활성화에 의해, 메타크릴산 생성 활성이 강화되어 있다. 결손 또는 불활성화는, 유전자 모두 또는 염기 서열의 일부에 치환, 결실 또는 삽입에 의해 행한다.
[유전자 재조합주]
뿐만 아니라, 미생물로서, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물로부터 동정되는 메타크릴산 합성에 관여하는 효소를, 메타크릴산 생성 능력을 갖지 않는 미생물에 유전자 도입함으로써, 새롭게 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 탄소원 및/또는 에너지원으로 하여 메타크릴산을 생성하는 능력을 부여한 주를 사용할 수도 있다. 유전자 재조합주의 제작에 있어서는, 상기의 유전자 개변주의 제작과 마찬가지의 방법에 의해 행할 수 있다.
[근연주]
또한, 미생물로서, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물(예를 들어 상기 (i) 내지 (xxiv)의 균주)의 근연종이며, 마찬가지로 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 탄소원 및/또는 에너지원으로 하여 메타크릴산을 생성하는 능력을 유지하는 주를 사용할 수도 있다. 근연종은, 예를 들어 핵산의 염기 서열 정보를 바탕으로 분자 계통 해석을 행하여 얻을 수 있다. 근연종은, 구체적으로는, 리보좀 RNA 유전자(rRNA 유전자; 이하 rDNA)의 염기 서열의 상동성 해석에 의해 얻을 수 있다.
바람직한 근연종으로서 이하를 들 수 있다.
(1) 슈도모나스(Pseudomonas)속에 속하고, 상기 (i)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 1 내지 8) 중 어느 하나에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(2) 바실러스(Bacillus)속에 속하고, 상기 (ii)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 9 내지 15) 중 어느 하나에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(3) 스핑고박테리움(Sphingobacterium)속에 속하고, 상기 (iii)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 16)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(4) 코마모나스(Comamonas)속에 속하고, 상기 (iv)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 17)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(5) 브레분디모나스(Brevundimonas)속에 속하고, 상기 (V)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 18 내지 20) 중 어느 하나에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(6) 스핑고모나스(Sphingomonas)속에 속하고, 상기 (vi)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 21)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(7) 오크로박트럼(Ochrobactrum)속에 속하고, 상기 (vii)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 22 내지 26) 중 어느 하나에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(8) 페도박터(Pedobacter)속에 속하고, 상기 (viii)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 27)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(9) 패니바실러스(Paenibacillus)속에 속하고, 상기 (ix)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 28)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(10) 아크로모박터(Achromobacter)속에 속하고, 상기 (x)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 29)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(11) 아시네토박터(Acinetobacter)속에 속하고, 상기 (xi)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 30 내지 31) 중 어느 하나에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(12) 쉐와넬라(Shewanella)속에 속하고, 상기 (xii)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 32)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(13) 리스토넬라(Listonella)속에 속하고, 상기 (xiii)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 33)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(14) 아그로박테리움(Agrobacterium)속에 속하고, 상기 (xiv)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 34)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(15) 메소리조비움(Mesorhizobium)속에 속하고, 상기 (xv)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 35)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(16) 리조비움(Rhizobium)속에 속하고, 상기 (xvi)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 36)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(17) 파라코커스(Paracoccus)속에 속하고, 상기 (xvii)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 37)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(18) 크산토박터(Xanthobacter)속에 속하고, 상기 (xviii)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 38)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(19) 스트렙토마이세스(Streptomyces)속에 속하고, 상기 (xix)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 39)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(20) 지오바실러스(Geobacillus)속에 속하고, 상기 (xx)의 균주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 40)에 나타내는 부분 염기 서열에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물.
(21) 로도코커스 에리트로폴리스 PR-4주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 41)에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 미생물을 들 수 있다.
(22) 사카로마이세스(Saccharomyces)속에 속하고, 상기 (xxii)의 균주의 LSUrDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 42 내지 44) 중 어느 하나에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 LSUrDNA를 갖는 미생물.
(23) 칸디다(Candida)속에 속하고, 상기 (xxiii)의 균주의 LSUrDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 45 내지 46) 중 어느 하나에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 LSUrDNA를 갖는 미생물.
(24) 아스퍼질러스(Aspergillus)속에 속하고, 상기 (xxiv)의 균주의 LSUrDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 47 내지 49) 중 어느 하나에 대하여 81% 이상, 바람직하게는 88% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99.5% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하는 LSUrDNA를 갖는 미생물.
또한, 근연종은, 균학적 성질을 적절히 조합한 정보를 바탕으로 기존의 타입 컬처에서 선택하는 것도 가능하다.
여기서, 서열의 「동일성」이란, 염기 서열의 경우라면, 비교해야 할 2개의 염기 서열의 염기가 가능한 한 많이 일치하도록 양쪽 염기 서열을 정렬시켜, 일치한 염기 수를, 전체 염기 수로 나눈 것을 백분율로 나타낸 것이다. 상기 정렬 시에는, 필요에 따라, 비교하는 2개의 서열의 한쪽 또는 양쪽에 적절히 갭을 삽입한다. 이러한 서열의 정렬화는, 예를 들어 BLAST, FASTA, CLUSTALW 등의 주지의 프로그램을 사용하여 행할 수 있다. 갭이 삽입되는 경우, 상기 전체 염기 수는, 1개의 갭을 1개의 염기로서 센 염기 수가 된다. 이와 같이 하여 센 전체 염기 수가, 비교하는 2개의 서열간에서 상이한 경우에는, 동일성(%)은 긴 것의 서열의 전체 염기 수로, 일치한 염기 수를 나누어 산출된다. 아미노산 서열의 동일성에 대해서도 마찬가지이다.
또한, 본 발명에 따른 메타크릴산 및/또는 메타크릴산에스테르의 제조 방법에서는, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물에 AAT 유전자 및/또는 ACD 유전자를 도입한 재조합 미생물을 사용하여, 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스와 접촉시키는 공정에 의해, 메타크릴산 및/또는 메타크릴산에스테르를 제조할 수도 있다.
[메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물에 AAT 유전자를 도입한 재조합 미생물의 제작]
〔AAT〕
AAT는, 알코올 또는 페놀류에 아실-CoA의 아실기를 전이시켜서 에스테르를 합성하는 촉매 작용을 갖는 효소이다. AAT는, 다양한 과일에서의 에스테르의 생성에 관여하고 있다고 알려져 있다. AAT는 생강목(바나나), 장미목(딸기, 사과, 배, 복숭아), 박목(멜론), 철쭉목(키위), 꿀풀목(올리브), 가지목(토마토), 무환자나무목(레몬, 망고) 등의 식물에 존재하는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 사용하는 AAT는, 메타크릴릴-CoA와 알코올 또는 페놀류를 원료로, 메타크릴산에스테르를 제조하는 능력을 갖는 생체 유래의 촉매라면, 특별히 한정되지 않고 그 종류 및 기원을 묻지 않는다. 효소원으로서는 식물 유래의 것이 바람직하고, 그 중에서도 피자 식물로 분류되는 것이 바람직하다.
본 발명에 적합한 AAT는 이하의 방법에 의해, 상기 식물에서 선택하는 것이 가능하다. 조직의 적당한 부위를 필요에 따라서 재단함으로써 취득한다. 그 재단 부위에 메타크릴릴-CoA와 알코올 또는 페놀류를 포함하는 용액을 첨가하고, 진탕 하여 일정 시간 반응시킨다. 그 반응액 내의 메타크릴산에스테르의 유무를 GC(가스 크로마토그래피)에 의해 확인함으로써, 합성 활성을 확인 가능하다. 구체적으로는, 예를 들어 과육 또는 과피를 재단하고, 거기에 1 내지 10mM의 메타크릴릴-CoA, 0.35M KCl 및 5 내지 50배 몰량의 n-부탄올을 포함하는 용액을 첨가하고, 30℃에서 1 내지 10시간 진탕한다. 반응 종료 후, GC에 의해 메타크릴산에스테르의 유무를 확인함으로써, 본 발명에 응용 가능한 AAT를 선택할 수 있다.
알코올 또는 페놀류는 이하의 식 「R-OH」로 나타내는 화합물이다. 알코올 또는 페놀류의 구조는, 메타크릴산에스테르에 대응하므로, 그 구조는, 상기 식 1의 R과 동일한 정의이며, 직쇄 또는 분지의 탄소수 1 내지 20의 탄화수소기를 나타낸다. 탄화수소기는, 포화 또는 불포화의 비환식이어도 되고, 포화 또는 불포화의 환식이어도 된다. 바람직하게는 직쇄 또는 분지의 탄소수 1 내지 10의 비치환 알코올, 아르알킬알코올 또는 페놀류이며, 특히 바람직하게는 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 이소프로필기, n-부틸기, 이소부틸기, sec-부틸기, tert-부틸기, n-펜틸알코올, 이소펜틸알코올, tert-펜틸알코올, n-헥실알코올, 이소헥실알코올, 2-헥실알코올, 디메틸부틸알코올, 에틸부틸알코올, 헵틸알코올, 옥틸알코올, 2-에틸헥실알코올의 탄소수 1 내지 8의 알킬알코올, 벤질알코올 또는 페놀이다.
본 발명에 적합한 AAT의 효소원으로서, 구체적인 것으로서, 예를 들어 생강목(Zingiberales), 장미목(Rosales), 철쭉목(Ericales), 박목(Cucurbitales), 유채목(Brassicales), 녹나무목(Laurales), 벼목(Poales), 야자목(Arecales), 아스파라거스목(Asparagales), 범의귀목(Saxifragales), 석죽목(Caryophyllales), 포도목(Vitales), 말피기목(Malpighiales), 괭이밥목(Oxalidales), 콩목(Fabales), 무환자나무목(Sapindales), 아욱목(Malvales), 도금양목(Myrtales), 미나리아재비목(Ranunculales), 가지목(Solanales), 꿀풀목(Lamiales), 용담목(Gentianales) 및 국화목(Asterales)으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나의 목에 속하는 것이다. 이들 중에서, 바람직하게는 생강목(Zingiberales), 장미목(Rosales), 철쭉목(Ericales), 박목(Cucurbitales), 유채목(Brassicales) 및 녹나무목(Laurales)으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나의 목에 속하는 것이다.
생강목에 속하는 것으로서는 파초과(Musaceae) 및 생강과(Zingiberaceae), 장미목에 속하는 것으로서는 장미과(Rosaceae) 및 뽕나무과(Moraceae), 철쭉목에 속하는 것으로서는 철쭉과(Ericaceae), 다래나무과(Actinidiaceae), 감나무과(Ebenaceae) 및 동백과(Theaceae), 박목에 속하는 것으로서는 박과(Cucurbitaceae), 유채목에 속하는 것으로서는 파파야과(Caricaceae) 및 유채과(Brassicaceae), 녹나무목에 속하는 것으로서는 녹나무과(Lauraceae), 벼목에 속하는 것으로서는 파인애플과(Bromeliaceae) 및 벼과(Poaceae), 야자목에 속하는 것으로서는 야자과(Arecaceae), 아스파라거스목에 속하는 것으로서는 난초과(Orchidaceae) 및 붓꽃과(Iridaceae), 범의귀목에 속하는 것으로서는 까치밥나무과(Grossulariaceae), 석죽목에 속하는 것으로서는 석죽과(Caryophyllaceae), 포도목에 속하는 것으로서는 포도과(Vitaceae), 말피기아목에 속하는 것으로서는 말피기아과(Malpighiaceae), 시계꽃과(Passifloraceae), 대극과(Euphorbiaceae) 및 버드나무과(Salicaceae), 괭이밥목에 속하는 것으로서는 괭이밥과(Oxalidaceae), 콩목에 속하는 것으로서는 콩과(Fabaceae), 무환자나무목에 속하는 것으로서는 운향과(Rutaceae), 무환자나무과(Sapindaceae) 및 옻나무과(Anacardiaceae), 아욱목에 속하는 것으로서는 아욱과(Malvaceae), 도금양목에 속하는 것으로서는 부처꽃과(Lythraceae), 바늘꽃과(Onagraceae) 및 도금양과(Myrtaceae), 미나리아재비목에 속하는 것으로서는 미나리아재비과(Ranunculaceae) 및 양귀비과(Papaveraceae), 가지목에 속하는 것으로서는 가지과(Solanaceae), 꿀풀목에 속하는 것으로서는 물푸레나무과(Oleaceae), 마편초과(Verbenaceae) 및 꿀풀과(Lamiaceae), 용담목에 속하는 것으로서는 협죽도과(Apocynaceae), 국화목(Asterales)에 속하는 것으로서는 국화과(Asteraceae)의 식물이 바람직하다. 상기 식물의 근연종도 이용할 수 있다. 이들 중에서 더욱 바람직하게는, 파초과(Musaceae), 장미과(Rosaceae), 철쭉과(Ericaceae), 다래나무과(Actinidiaceae), 박과(Cucurbitaceae), 파파야과(Caricaceae) 및 녹나무과(Lauraceae)에 속하는 식물이다.
구체적으로는 파초과에 속하는 것으로서는 파초(Musa)속, 생강과(Zingiberaceae)에 속하는 것으로서는 생강속(Zingiber), 장미과에 속하는 것으로서는 네덜란드 딸기(Fragaria)속, 사과(Malus)속, 벚나무(Prunus)속, 배나무(Pyrus)속, 비파(Eriobotrya)속, 명자나무(Chaenomeles)속, 산딸기(Rubus)속 및 장미(Rosa)속, 뽕나무과(Moraceae)에 속하는 것으로서는 무화과나무(Ficus)속, 철쭉과에 속하는 것으로서는 산앵도나무(Vaccinium)속, 다래나무과에 속하는 것으로서는 다래나무(Actinidia)속, 감나무과에 속하는 것으로서는 감나무(Diospyros)속, 동백과에 속하는 것으로서는 동백나무(Camellia)속, 박과에 속하는 것으로서는 오이(Cucumis)속 및 수박(Citrullus)속, 파파야과에 속하는 것으로서는 파파야(Carica)속 및 바스콘셀레아(Vasconcellea)속, 유채과에 속하는 것으로서는 애기장대(Arabidopsis)속, 녹나무과에 속하는 것으로서는 페르세아(Persea)속, 파인애플과에 속하는 것으로서는 아나나스속(Ananas), 벼과에 속하는 것으로서는 벼(Oryza)속, 소맥(Triticum)속, 대맥(Hordeum)속, 옥수수(Zea)속, 수수(Sorghum)속 및 숲개밀(Brachypodium)속, 야자과에 속하는 것으로서는 코코스(Cocos)속, 난초과에 속하는 것으로서는 반다(Vanda)속, 붓꽃과에 속하는 것으로서는 붓꽃(Iris)속, 까치밥나무과에 속하는 것으로서는 까치밥나무(Ribes)속, 패랭이꽃과에 속하는 것으로서는 안개꽃속(Gypsophila), 포도과에 속하는 것으로서는 포도(Vitis)속, 말피기아과에 속하는 것으로서는 말피기아(Malpighia)속, 시계꽃과에 속하는 것으로서는 꽃시계덩굴(Passiflora)속, 대극과에 속하는 것으로서는 아주까리(Ricinus)속, 버드나무과에 속하는 것으로서는 사시나무(Populus)속, 괭이밥과에 속하는 것으로서는 괭이밥(Averrhoa)속, 콩과에 속하는 것으로서는 개자리(Medicago)속, 루피너스(Lupinus)속, 대두(Glycine)속 및 클리토리아(Clitoria)속, 운향과에 속하는 것으로서는 귤(Citrus)속 및 아에글레(Aegle)속, 무환자나무과에 속하는 것으로서는 여지(Litchi)속, 옻나무과에 속하는 것으로서는 망고(Mangifera)속, 아욱과에 속하는 것으로서는 두리안(Durio)속 및 카카오(Theobroma)속, 부처꽃과에 속하는 것으로서는 석류나무(Punica)속, 바늘꽃과에 속하는 것으로서는 클라르키이아(Clarkia)속, 도금양과에 속하는 것으로서는 프시디움(Psidium)속, 미나리아재비과에 속하는 것으로서는 노루삼(Actaea)속, 양귀비과에 속하는 것으로서는 양귀비(Papaver)속, 가지과에 속하는 것으로서는 가지(Solanum)속, 고추(Capsicum)속, 담배(Nicotiana)속 및 페튜니아(Petunia)속, 물푸레나무과에 속하는 것으로서는 올리브(Olea)속, 마편초과에 속하는 것으로서는 글란듈라리아(Glandularia)속, 꿀풀과에 속하는 것으로서는 배암차즈기(Salvia)속, 협죽도과에 속하는 것으로서는 라우볼피아(Rauvolfia)속 및 카타란투스(Catharanthus)속, 국화과에 속하는 것으로서는 카마에멜룸(Chamaemelum)속의 식물이 바람직하다. 그 중에서도, 파초속, 네덜란드 딸기속, 사과속, 벚꽃속, 배속, 산앵도나무속, 다래나무속, 오이속, 파파야속 또는 페르세아속에 속하는 식물이 보다 바람직하다. 파초속, 사과속, 벚꽃속, 배속, 산앵도나무속, 다래나무속, 오이속, 파파야속 또는 페르세아 속에 속하는 식물이 특히 바람직하다. 파초속, 사과속, 배속, 다래나무속, 오이속, 파파야속 또는 페르세아 속에 속하는 식물이 특히 바람직하다.
또한, 구체적으로는 파초속에 속하는 것으로서는 바나나(Musa x paradisiaca), 파초(Musa basjoo), 꽃바나나(Musa coccinea) 및 바나나(Musa acuminata), 생강속에 속하는 것으로서는 생강(Zingiber officinale), 네덜란드 딸기속에 속하는 것으로서는 딸기(Fragaria xananassa), 버지니아 딸기(Fragaria virginiana), 칠레 딸기(Fragaria chiloensis) 및 야생딸기(Fragaria vesca), 사과속에 속하는 것으로서는 사과(Malus pumila, Malus domestica, Malus baccata), 할리아나 꽃사과(Malus halliana), 꽃아그배나무(Malus floribunda) 및 꽃사과(Malus prunifolia), 벚꽃속에 속하는 것으로서는 매실(Prunus mume), 단양앵두(Prunus avium), 복숭아(Prunus persica), 살구(Prunus armeniaca), 아몬드(Prunus dulcis), 자두(Prunus salicina) 및 서양자두(Prunus domestica), 배속에 속하는 것으로서는 서양배(Pyrus communis), 배(Pyrus pyrifolia), 콩배나무(Pyrus calleryana) 및 야생 서양배(Pyrus pyraster), 비파속에 속하는 것으로서는 비파(Eriobotrya japonica), 명자나무속에 속하는 것으로서는 모과나무(Chaenomeles sinensis), 산딸기속에 속하는 것으로서는 래즈베리(Rubus idaeus) 및 블랙 래즈베리(Rubus fruticosus), 장미속에 속하는 것으로서는 해당화(Rosa rugosa), 무화과나무속에 속하는 것으로서는 무화과나무(Ficus carica), 산앵도나무속에 속하는 것으로서는 블루 베리(Vaccinium corymbosum, Vaccinium angustifolium), 빌 베리(Vaccinium myrtillus), 월귤(Vaccinium vitis-idaea) 및 애기월귤(Vaccinium oxycoccos), 다래나무속에 속하는 것으로서는 키위(Actinidia chinensis, Actinidia deliciosa), 다래나무(Actinidia arguta), 섬다래나무(Actinidia rufa) 및 개다래나무(Actinidia polygama), 감나무속에 속하는 것으로서는 감나무(Diospyros kaki), 동백속에 속하는 것으로서는 차나무(Camellia sinensis), 오이속에 속하는 것으로서는 오이(Cucumis sativus), 멜론(Cucumis melo), 게르킨(Cucumis anguria) 및 뿔참외(Cucumis metulifer), 수박속에 속하는 것으로서는 수박(Citrullus lanatus), 파파야속에 속하는 것으로서는 파파야(Carica papaya), 바스콘셀레아속에 속하는 것으로서는 마운틴 파파야(Vasconcellea cundinamarcensis), 애기장대속에 속하는 것으로서는 애기장대(Arabidopsis thaliana) 및 묏장대(Arabidopsis lyrata), 페르세아속에 속하는 것으로서는 아보카도(Persea americana), 아나나스속에 속하는 것으로서는 파인애플(Ananas comosus), 벼속에 속하는 것으로서는 벼(Oryza sativa), 소맥속에 속하는 것으로서는 소맥(Triticum aestivum), 대맥속에 속하는 것으로서는 대맥(Hordeum vulgare), 옥수수속에 속하는 것으로서는 옥수수(Zea mays), 수수속에 속하는 것으로서는 수수(Sorghum bicolor), 숲개밀속에 속하는 것으로서는 야생잔디(Brachypodium distachyon), 야자나무속에 속하는 것으로서는 코코넛(Cocos nucifera), 반다(Banda)속에 속하는 것으로서는 반다(Vanda hybrid cultivar), 붓꽃속에 속하는 것으로서는 네덜란드 붓꽃(Iris x hollandica), 까치밥나무속에 속하는 것으로서는 블랙커런트(카시스)(Ribes nigrum), 안개꽃속에 속하는 것으로서는 안개꽃(Gypsophila paniculata, Gypsophila elegans), 포도속에 속하는 것으로서는 포도(Vitis vinifera, Vitis labrusca), 말피기아속에 속하는 것으로서는 아세롤라(Malpighia glabra), 시계풀속에 속하는 것으로서는 패션프루츠(Passiflora edulis), 아주까리속에 속하는 것으로서는 아주까리(Ricinus communis), 사시나무속에 속하는 것으로서는 포퓰러(Populus trichocarpa), 괭이밥속에 속하는 것으로서는 스타 프루츠(Averrhoa carambola), 개자리속에 속하는 것으로서는 알팔파(Medicago truncatula), 루피너스속에 속하는 것으로서는 루피너스(흰꽃 루피너스)(Lupinus albus), 대두속에 속하는 것으로서는 대두(Glycine max), 클리토리아속에 속하는 것으로서는 클리토리아(Clitoria ternatea), 귤속에 속하는 것으로서는 레몬(Citrus limon), 영귤(Citrus sudachi), 카보스(Citrus sphaerocarpa), 자몽(Citrus x paradisi), 유자(Citrus junos), 라임(Citrus aurantifolia), 온주 밀감(Citrus unshiu) 및 오렌지(Citrus sinensis), 아에글레속에 속하는 것으로서는 아에글레 마르멜로스(Aegle marmelos), 여지속에 속하는 것으로서는 리치(Litchi chinensis), 망고속에 속하는 것으로서는 망고(Mangifera indica), 두리안속에 속하는 것으로서는 두리안(Durio zibethinus), 카카오속에 속하는 것으로서는 카카오(Theobroma cacao), 석류나무속에 속하는 것으로서는 석류나무(Punica granatum), 클라르키이아속에 속하는 것으로서는 페어리 팬(fairy fans)(Clarkia breweri) 및 레드 리본(Red ribbons)(Clarkia concinna), 프시디움속에 속하는 것으로서는 구아바(Psidium guajava), 노루삼속에 속하는 것으로서는 액태아 라세모사(Actaea racemosa), 양귀비속에 속하는 것으로서는 양귀비(Papaver somniferum), 오리엔탈 양귀비(Papaver orientale) 및 포엽 도깨비 양귀비(Papaver bracteatum), 가지속에 속하는 것으로서는 토마토(Solanum lycopersicum), 고추속에 속하는 것으로서는 피망(Capsicum annuum) 및 하바네로(Capsicum chinense), 담배속에 속하는 것으로서는 담배(Nicotiana tabacum, Nicotiana attenuata), 페튜니아속에 속하는 것으로서는 페튜니아(Petunia x hybrida), 올리브속에 속하는 것으로서는 올리브(Olea europaea), 글란듈라리아속에 속하는 것으로서는 글란듈라리아 하이브리다(Glandularia x hybrida), 배암차즈기속에 속하는 것으로서는 샐비아(Salvia splendens), 라우볼피아속에 속하는 것으로서는 인도사목(Rauvolfia serpentina), 카타란투스속에 속하는 것으로서는 카타란투스(Catharanthus roseus), 카마에멜룸 속에 속하는 것으로서는 로먼 카모마일(Chamaemelum nobile)이 특히 바람직하다. 그 중에서도, 바나나, 딸기, 사과, 매실, 서양배, 블루 베리, 키위, 멜론, 파파야 및 아보카도가 바람직하다. 바나나, 사과, 매실, 서양배, 블루 베리, 키위, 멜론, 파파야 및 아보카도가 보다 바람직하다. 바나나, 사과, 서양배, 키위, 멜론, 파파야 및 아보카도가 특히 바람직하다.
본 발명에서, 식물의 분류는 APG 식물 분류 체계 제3판(Botanical Journal of the Linnean Society, 2009, 161, 105121)을 따르는 것으로 한다.
AAT를 선택할 때에는, 상기 AAT 유전자를 단리하고, 예를 들어 일반적인 숙주 벡터계에 도입하여, 해당 벡터계에서 형질 전환한 미생물을 이용해서 평가 선택하는 것도 가능하다. 예를 들어, AAT 유전자는 몇 가지 공표되어 있는 것이 있다(예를 들어, 특허문헌 7 참조). 해당 정보에 기초하여 DNA 프로브를 제작하고, 예를 들어 PCR에 사용하는 프라이머를 제작하여, PCR을 행함으로써 해당 유전자를 단리할 수도 있다. 또한, AAT 유전자의 염기 서열을 통상의 방법으로 전체 합성하는 것도 가능하다. 이들 유전자 정보가 공지된 AAT가 메타크릴산에스테르의 합성 활성을 가지는지 여부에 대해서는, 상기한 방법으로 마찬가지로 확인할 수 있다. 한편, 유전자 정보가 불분명한 AAT에 대해서는, AAT를 정제하고, 그 단백질을 바탕으로 유전자 공학적인 방법에 의해 유전자 정보를 얻을 수 있다.
본 발명에서, 바람직한 AAT 유전자로서는, 그 번역 산물이 메타크릴산에스테르를 제조하는 능력을 갖고 있으면 특별히 한정되지 않고, 상기 AAT 효소원 중에서 적절히 선택된다. 특히 바람직하게는, 사과 유래 AAT 유전자(서열 번호 77), 딸기 유래 AAT 유전자(서열 번호 79), 딸기 유래 AAT 유전자(서열 번호 81)를 들 수 있다.
또한, 본 발명에서 AAT 유전자에는 야생형의 아미노산 서열에 있어서 1개 또는 수개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하고, 메타크릴릴-CoA와 알코올로부터 메타크릴산에스테르를 생성하는 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자도 포함된다.
여기서 용어 「수개」란, 1 내지 40개, 바람직하게는 1 내지 20개, 보다 바람직하게는 10개 이하를 말한다. 유전자에 변이를 도입하기 위해서는, 쿤켈(Kunkel)법이나 갭드 듀플렉스(Gapped duplex)법 등의 공지 방법에 의해, 부위 특이적 돌연 변이 유발법을 이용한 변이 도입용 키트, 예를 들어 퀵체인지(QuikChange)TM 부위 지정 돌연변이유발 키트(Site-Directed Mutagenesis Kit)(스트라테이진사), 진테일러(GeneTailor)TM 부위 지정 돌연변이유발 시스템(Site-Directed Mutagenesis System)(인비트로젠사), 다카라 부위 지정 돌연변이유발 시스템(TaKaRa Site-Directed Mutagenesis System)(뮤탄(Mutan)-K, 뮤탄-수퍼 익스프레스(Mutan-Super Express) Km 등: 다카라 바이오사) 등을 사용할 수 있다. 또는, 변이를 포함하는 서열을 갖는 유전자 전체를 인공 합성해도 된다.
본 발명에서, DNA의 염기 서열의 확인은, 관용의 방법에 의해 서열 결정함으로써 행할 수 있다. 예를 들어, 생거법에 기초하여, 적당한 DNA 시퀀서를 이용하여 서열을 확인하는 것도 가능하다.
또한, 본 발명에서 AAT 유전자에는, 야생형의 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 90% 이상, 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 99.5% 이상, 더욱 바람직하게는 99.9% 이상의 동일성을 나타내고, 메타크릴릴-CoA와 알코올로부터 메타크릴산에스테르를 생성하는 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자도 포함된다.
또한, 본 발명에서 AAT 유전자에는, 야생형의 염기 서열에 대한 상보적인 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드에 대하여 엄격한 조건에서 혼성화하고, 메타크릴릴-CoA와 알코올과로부터 메타크릴산에스테르를 생성하는 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자도 포함된다.
본 명세서에서, 혼성화의 방법은, 예를 들어 「Molecular Cloning, A Laboratory Manual 2nd ed.」(ColdSpring Harbor Laboratory Press(1989)), 「Current Protocols in Molecular Biology」(John Wiley & Sons(1987-1997)) 등을 참조할 수 있다.
본 명세서에서, 엄격한 조건은, 예를 들어 DNA를 고정한 나일론 막을, 6×SSC(1×SSC는 염화나트륨 8.76g, 시트르산나트륨 4.41g을 1리터의 물에 녹인 것), 1% SDS, 100μg/ml 연어 정자 DNA, 0.1% 소 혈청 알부민, 0.1% 폴리비닐피롤리돈, 0.1% 피콜을 포함하는 용액 중에서 65℃에서 20시간 프로브와 함께 보온하여 혼성화를 행하는 조건을 들 수 있지만, 이것에 한정되는 것은 아니다. 당업자라면 이러한 버퍼의 염 농도, 온도 등의 조건 외에, 기타의 프로브 농도, 프로브의 길이, 반응 시간 등의 여러 조건을 가미하여, 혼성화의 조건을 설정할 수 있다. 혼성화 후의 세정 조건으로서, 예를 들어 「2×SSC, 0.1% SDS, 42℃」, 「1×SSC, 0.1% SDS, 37℃」, 보다엄격한 조건으로서는, 예를 들어 「1×SSC, 0.1% SDS, 65℃」, 「0.5×SSC, 0.1% SDS, 50℃」 등의 조건을 들 수 있다.
또한, 본 발명에서 AAT 유전자에는, 야생형의 염기 서열과 BLAST 등(예를 들어, 디폴트, 즉 초기 설정의 파라미터)을 사용하여 계산했을 때에, 80% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 특히 바람직하게는 95% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 포함하고, 메타크릴릴-CoA와 알코올과로부터 메타크릴산에스테르를 생성하는 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자도 포함된다. 또한, 상기 AAT 유전자의 코돈은 형질 전환에 사용하는 미생물의 코돈 사용 빈도에 맞춰서 변환된 것이어도 된다.
〔AAT 유전자를 도입한 재조합 미생물의 제작〕
본원 발명인 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물을 숙주로 하여, 상기 AAT 유전자를 코딩하는 DNA를 도입해서 당해 미생물 내에서 단백질에 전사 번역시킴으로써, 메타크릴산에스테르의 제조를 가능하게 한다. 또한, 메타크릴산 생성 활성을 강화하는 효소 유전자(예를 들어, ACD, BCKAD 등의 유전자)를 동시에 도입해도 된다.
유전자 도입 방법에 대해서는 특별히 제한은 없지만, 도입되는 DNA는, 벡터에 내장된 형태에 있는 것이 바람직하다. 즉, AAT 유전자를 상기 숙주 세포에서 발현 가능한 형태로 벡터에 내장하여, 이것을 숙주 세포에 도입한다. 이들 벡터에는, 숙주 미생물 중에서 자립 복제 가능한 것, 미생물 게놈 중에 내장되는 것 등이 있는데, AAT 유전자를 유지하는 것이라면 특별히 한정되지 않고 각각의 미생물에 적합한 벡터를 사용할 수 있다. 로도코커스(Rhodococcus)속 세균이나 유연균에 있어서는, 일렉트로포레이션 등에 의해 도입된 DNA가 게놈에 내장되기 쉽다는 성질을 갖는 것을 이용하여, 발현 가능한 AAT 유전자를 포함하는 DNA 단편을 게놈에 삽입하는 것도 가능하다. AAT 유전자를 포함하는 복수의 유전자를 세포 내에 도입하고자 하는 경우에는, 각각이 발현 가능한 형태로, 1개 또는 복수의 발현 벡터에 내장할 수 있다.
본 발명에서 사용 가능한 벡터에는, 플라스미드 벡터, 파지(바이러스) 벡터, 코스미드 벡터 및 인공 염색체 벡터 등이 포함되고, 또한, 1개 또는 복수의 선택 가능한 마커 유전자 및 적당한 발현 조절 서열을 포함할 수 있다. 많은 숙주 벡터계가 알려져 있는데, 필요에 따라, 마찬가지의 방법으로 개발할 수 있다.
예를 들어, 로도코커스속(Rhodococcus)에 속하는 미생물에 도입하기 위한 벡터로서는, pK1, pK2, pK3 및 pK4, 및 pSJ034(일본 특허 공개 평10-337185호 참조), pSJ023 및 pSJ002(일본 특허 공개 평10-24867호를 참조) 등(이들에 한정되지 않음), 공지된 벡터를 사용할 수 있다. 또한, 공지된 벡터를 원하는 구성으로 개변한 것도 사용할 수 있다. pSJ023은 형질전환체 로도코커스 로도크로스(Rhodococcus rhodochrous) ATCC12674/pSJ023(FERM BP-6232)으로서 산업 종합 기술 연구소 특허 생물 기탁 센터에 기탁되어 있다.
상기 AAT 유전자와 벡터에 대한 삽입은, 당업자에게 알려진 유전자 재조합 기술을 사용하여 행할 수 있다. 예를 들어, 제한 효소 절단과 라이게이션 키트를 사용하는 방법, 토포이소머라아제를 사용하는 방법, 인 퓨전 키트(다카라 바이오) 등을 이용할 수 있다. 벡터에 삽입되는 유전자는, 숙주 생물 중에서 각 유전자에 코딩되는 단백질의 전사 번역을 조절하는 것이 가능한 프로모터의 하류에 연결하여 삽입된다. 또한, 삽입 시에 필요하다면, 적당한 링커를 부가해도 된다. 또한, 필요에 따라, 유전자를 도입하고자 하는 숙주 미생물에서 이용 가능한 터미네이터 서열, 인핸서 서열, 스플라이싱 시그널 서열, 폴리 A 부가 시그널 서열, SD 서열이나 코작(Kozak) 서열 등의 리보솜 결합 서열, 선택 마커 유전자 등을 연결할 수 있다. 선택 마커 유전자의 예로서는, 암피실린 내성 유전자, 테트라사이클린 내성 유전자, 네오마이신 내성 유전자, 카나마이신 내성 유전자, 클로람페니콜 내성 유전자 등의 약제 내성 유전자 외에, 아미노산이나 핵산 등의 영양소의 세포내 생합성에 관여하는 유전자, 또는 루시페라아제 등의 형광 단백질을 코딩하는 유전자 등을 들 수 있다. 삽입에 수반하여, DNA가 코딩하는 아미노산 서열의 일부를 치환해도 된다.
상기의 관점에서, 본 발명의 일례에 있어서, 로도코커스속용의 벡터로서 pK4에 변이 처리를 행하여 취득한 pLK005를 사용하는 것이 특히 바람직하다. pLK005의 프로모터의 3' 하류에 배치되도록 AAT 유전자를 연결 삽입하여, 프로모터에 의해 AAT 유전자를 발현하는 발현 플라스미드 벡터를 구축할 수 있다.
벡터에는, AAT 유전자군을 단독 또는 기타 메타크릴산 생성 활성을 강화하는 효소 유전자군에서 선택되는 임의의 1개의 유전자를 삽입해도 되고, 복수 개의 유전자를 삽입해도 된다. 벡터에 삽입되는 유전자에 대하여 사용되는 경우 「복수 개」란 2 내지 5개, 2 내지 4개, 바람직하게는 2 내지 3개의 유전자를 삽입하는 것이 가능하다. 또한, 하나의 벡터에 복수 개의 유전자가 삽입되는 경우, 이 유전자는 오페론을 형성하는 것이 바람직하다. 여기서 「오페론」이란, 동일한 프로모터의 제어하에 전사되는 하나 또는 그 이상의 유전자로 구성되는 핵산 서열 단위이다.
상기의 유전자, 바람직하게는 벡터의 형태에 있는 유전자는, 당업자에게 알려진 방법에 의해 숙주 미생물에 도입된다. 숙주 미생물에 대한 재조합 벡터의 도입 방법으로서는, 숙주 미생물에 적합한 방법이면 특별히 한정되는 것은 아니며, 예를 들어 일렉트로포레이션법, 스페로프라스트법, 아세트산 리튬법, 인산칼슘법, 리포펙션법, 접합 전달법 등을 들 수 있다.
(2) 메타크릴산의 제조 공정
(2-1) 배양에 의한 메타크릴산의 제조
본 발명에 따른 메타크릴산의 제조 방법에서는, 상기 미생물을 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 포함하는 수성 매체 중에서 배양함으로써 배양물 중에 메타크릴산을 얻을 수 있다.
[배지]
미생물 배양에 사용되는 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 포함하는 수성 매체(배지)는, 미생물이 증식 가능한, 적어도 1종류의 탄소원을 포함하는 충분한 영양소를 포함하는 고형 배지 또는 액체 배지가 된다. 어떤 실시 형태에 있어서, 배지는, 세포의 생존 및 증식에 최적인 pH 및 염 농도에 유리하게 처방된다.
재생 가능 원료 및 바이오매스는, 메타크릴산을 생산할 수 있으면 특별히 제한은 없다. 재생 가능 원료 및 바이오매스는, 식물성 재료, 동물성 재료 및 생분해성 폐기물 등이면 된다. 적합한 재생 가능 원료 및 바이오매스는, 폴리펩톤, 육 추출물, 효모 추출물, 옥수수 침지액 또는 대두 등의 추출물이다. 이 추출물은 그대로, 또는 일부 정제하여 사용된다. 재생 가능 원료는, 다당류, 올리고당류 및 단당류인 글루코오스, 갈락토오스, 만노오스, 프룩토오스, 크실로오스 및 아라비노오스 및 이들의 유도체이면 된다. 또한, 재생 가능 원료 및 바이오매스에는, 이러한 당류로부터 유도 또는 대사에 의해 발생하는 지질, 아미노산류, 유기산류 및 알코올류를 사용할 수도 있다. 적합한 재생 가능 원료로서는, 글루코오스, 프룩토오스, 크실로오스 등의 당류; 발린, 알라닌, 류신, 리신, 글루탐산 등의 아미노산류; 아세트산, 피루브산, 락트산, 아세토아세트산, 아세트락트산, 2-옥소이소발레르산, 부티르산, 이소부티르산, 프로피온산, 말산, 푸마르산, 시트르산, 숙신산 등의 산; 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올 등의 알코올을 들 수 있다. 이 재생 가능 원료는, 1종을 단독으로, 또는 2종 이상을 조합하여 사용할 수 있다.
배지 중의 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스의 농도는, 메타크릴산을 생산할 수 있으면 특별히 한정되지 않는다. 농도는, 예를 들어 0.05 내지 20(w/v)%, 바람직하게는 0.1 내지 15(w/v)%, 보다 바람직하게는 0.2 내지 10(w/v)%가 된다. 0.2(w/v)% 이상 사용하는 것은 미생물의 메타크릴산 생산 능력이 상승되기 때문이며, 10(w/v)% 이하로 하는 것은 그 이상 첨가해도 비약적인 효과의 상승이 나타나지 않기 때문이다.
배지에는, 무기 질소원 또는 무기 금속염류 등을 첨가해도 된다. 무기 질소원으로서는, 예를 들어 염화암모늄, 황산암모늄, 아세트산암모늄, 인산암모늄 등의 무기산 또는 유기산의 암모늄염 등이 사용된다.
질소원의 배지 중에서의 농도는, 메타크릴산을 생산할 수 있으면 특별히 한정되지 않는다. 농도는, 예를 들어 0.01 내지 10(w/v)%, 바람직하게는 0.05 내지 8(w/v)%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 4(w/v)%가 된다.
무기 금속염으로서는, 예를 들어 인산제1칼륨, 인산제2칼륨, 인산마그네슘, 황산마그네슘, 염화나트륨, 황산제1철, 황산망간, 황산구리, 탄산칼슘 등이 사용된다.
무기 염류의 배지 중에서의 농도는, 메타크릴산을 생산할 수 있으면 특별히 한정되지 않는다. 농도는, 예를 들어 0.001 내지 1.6(w/v)%, 바람직하게는 0.005 내지 1.3(w/v)%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 1(w/v)%가 된다. 0.01(w/v)% 이상 사용하는 것은 미생물의 메타크릴산 생산 능력이 상승되기 때문이며, 1(w/v)% 이하로 하는 것은 그 이상 첨가해도 비약적인 효과의 상승이 나타나지 않기 때문이다.
그 밖에, 배지에는, 미량 금속, 비타민 등이 필요에 따라서 첨가된다. 또한, 필요에 따라 미생물의 생육에 필요한 각종 유기물, 무기물, 계면 활성제 또는 통상 사용되는 소포제 등을 배지 중에 추가할 수 있다.
[배양 조건]
배지에 대한 미생물의 파종은, 종래 공지된 방법에 의해 행하면 된다. 배양 방법도, 특별히 한정되지 않고 진탕 배양, 통기 교반 배양 및 정치 배양 등의 공지 방법을 사용할 수 있다.
미생물의 배양 조건은, 미생물이 생육하고, 또한 메타크릴산을 생성하는 한에 특별히 한정되지 않는다. 배양은, 호기적 조건 하에서 행하여지거나 혐기적 조건 하에서 행하여져도 된다.
pH, 온도 및 배양 시간은, 미생물이 생육하고, 또한 메타크릴산을 생성할 수 있는 조건이라면 특별히 한정되지 않는다. pH는, 바람직하게는 3 내지 10, 보다 바람직하게는 4 내지 9, 더욱 바람직하게는 5 내지 8이 된다. 온도는, 바람직하게는 10 내지 45℃, 보다 바람직하게는 15 내지 40℃, 또한 바람직하게는 20 내지 35℃가 된다. 배양 시간은, 바람직하게는 10 내지 1000시간, 보다 바람직하게는 15 내지 480시간, 더욱 바람직하게는 20 내지 240시간이 된다.
이 배양 조건은, 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스의 이용량에 대한 메타크릴산의 생산량의 비율을 최대화하도록, 균주마다 적절히 선택 또는 최적화된다. 또한, 탄소원의 양 및 배양 조건을 적절히 조정함으로써, 메타크릴산의 생산량을 조정할 수도 있다.
메타크릴산을 0.04ppm 이상 축적시키기 위한 적합한 조건으로서는, pH5.5 내지 7.5의 조건 하, 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스의 농도를 직접 또는 간접적으로 0.1% 이상으로 유지하고, 온도를 20 내지 40℃의 범위로 조정하여, 3시간 이상 반응시킨다. 또한, 배양액 중의 미생물의 농도는, 배양액의 환경이 미생물 또는 배양 세포의 증식에 있어서 부적절하게 되어 사멸하는 비율이 높아지지 않은 범위에서, 높은 상태로 유지하는 것이 효율적인 생산성을 얻는데 바람직하고, 예를 들어 건조 중량으로서 2g/L 이상으로 유지함으로써 양호한 생산 효율이 얻어지고, 생성물의 축적 농도를 향상시킬 수 있다.
(2-2) 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조
본 발명에 따른 메타크릴산의 제조 방법에서는, 상술한 바와 같이, 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 포함하는 수성 매체 중에서, 증식을 수반하는 미생물의 배양을 행하는 방법 외에 이하의 방법도 채용할 수 있다. 미생물이 증식 능력을 갖고 있거나 없어도 되고, 미리 배양한 미생물을 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 포함하는 수성 매체에 접촉시켜, 실질적으로 증식을 수반하지 않는 휴지 균체 반응에 의해 메타크릴산을 생산시킬 수도 있다.
[반응액]
휴지 균체 반응에 사용되는 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 포함하는 수성 매체(반응액)에 포함되는 재생 가능 원료 및 그 농도는, 상기의 배양에 의한 메타크릴산의 제조 경우와 마찬가지이어도 된다.
반응액에는, 무기 금속염류 등을 첨가해도 된다. 무기 금속염으로서는, 예를 들어 인산제1칼륨, 인산제2칼륨, 인산마그네슘, 황산마그네슘, 염화나트륨, 황산제1철, 황산망간, 황산구리, 탄산칼슘 등이 사용된다.
무기 염류의 반응액 중에서의 농도는, 메타크릴산을 생산할 수 있으면 특별히 한정되지 않는다. 농도는, 예를 들어 0.0001 내지 2(w/v)%, 바람직하게는 0.0003 내지 1.3(w/v)%, 보다 바람직하게는 0.001 내지 1(w/v)%가 된다.
그 밖에, 반응액에는, 미량 금속, 비타민 등이 필요에 따라서 첨가된다. 또한, 필요에 따라 반응에 필요한 각종 유기물, 무기물, 계면 활성제 또는 통상 사용되는 소포제 등을 반응액 내에 추가할 수 있다.
[반응 조건]
휴지 균체 반응에는, 미리 배양한 미생물의 배양액을 그대로 사용하거나, 또는 여과 또는 원심 분리 등으로 회수한 균체를 사용한다. 회수한 미생물은, 적당한 완충액 등에 재현탁시켜, 임의의 균 농도로 하여 사용할 수 있다. 완충액 등에는, 생리 식염수, 인산 칼륨 완충액, 트리스-염산 완충액, 글리신-수산화나트륨 완충액 및 붕산-수산화나트륨 완충액 등이 사용된다.
또한, 휴지 균체 반응에는, 회수한 미생물의 처리물(예를 들어, 파쇄물, 조 효소 또는 정제 효소 등)을 사용할 수도 있다. 또한, 미생물 또는 그 처리물을 공지된 방법으로 적당한 담체에 고정화하여, 그 고정화물을 반응에 사용해도 된다.
반응 조건은, 메타크릴산을 생성하는 한 특별히 한정되지 않는다. 반응은, 호기적 조건 하에서 행하여지거나 혐기적 조건 하에서 행하여져도 된다. 반응 방법도, 특별히 한정되지 않고 진탕 반응, 통기 교반 반응 및 정치 반응 등의 공지 방법을 사용할 수 있다.
pH, 온도 및 반응 시간은, 메타크릴산을 생성할 수 있는 조건이라면 특별히 한정되지 않는다. pH는, 바람직하게는 3 내지 10, 보다 바람직하게는 4 내지 9, 더욱 바람직하게는 5 내지 8이 된다. 온도는, 바람직하게는 10 내지 45℃, 보다 바람직하게는 15 내지 40℃, 또한 바람직하게는 20 내지 35℃가 된다. 배양 시간은, 호기적 조건에서 바람직하게는 10 내지 180시간, 보다 바람직하게는 15 내지 150시간, 더욱 바람직하게는 20 내지 120시간이 된다.
또한, 생성한 메타크릴산을 분리할 목적으로, 미리, 유기 용매를 첨가하여, 2상계에서 반응시키는 것도 가능하다. 유기 용매로서는, 예를 들어 직쇄상, 분지상 또는 환상의, 포화 또는 불포화 지방족 탄화수소, 포화 또는 불포화 방향족 탄화수소 등을 단독으로 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다. 구체적으로는, 예를 들어 탄화수소계 용매(예를 들어 펜탄, 헥산, 시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 크실렌 등), 할로겐화 탄화수소계 용매(예를 들어 염화메틸렌, 클로로포름 등), 에테르계 용매(예를 들어 디에틸에테르, 디프로필에테르, 디이소프로필에테르, 디부틸에테르, tert-부틸메틸에테르, 디메톡시에탄 등), 에스테르계 용매(예를 들어 포름산메틸, 아세트산메틸, 아세트산에틸, 아세트산부틸, 프로피온산메틸) 등을 들 수 있다. 이 유기 용매를 첨가해 둠으로써, 생성된 메타크릴산이 유기상으로 이행하여, 효율적으로 반응이 진행되는 경우가 있다.
이 반응 조건은, 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스의 이용량에 대한 메타크릴산의 생산량의 비율을 최대화하도록, 균주마다 적절히 선택 또는 최적화된다. 또한, 탄소원의 양 및 반응 조건을 적절히 조정함으로써, 메타크릴산의 생산량을 조정할 수도 있다.
본 발명에 따른 메타크릴산의 제조 방법에서는, 상술한 배양에 의한 메타크릴산의 제조와 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조를 적절히 조합하여 행해도 된다. 2개의 방법을 조합함으로써, 보다 효율적인 메타크릴산의 생산이 가능하게 된다. 또한, 본 발명에 따른 메타크릴산의 제조 방법에서는, 배지 또는 휴지 균체 반응액으로서 제조한 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 포함하는 수성 매체에 미생물을 접촉시키는 방법 이외에, 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스에 직접 미생물을 접촉시키는 방법도 채용 가능하다.
메타크릴산을 0.04ppm 이상 축적시키기 위한 적합한 조건으로서는, pH5.5 내지 7.5의 조건 하, 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스의 농도를 직접 또는 간접적으로 0.1% 이상으로 유지하고, 온도를 20 내지 40℃의 범위로 조정하여, 3시간 이상 반응시킨다. 또한, 반응액 내의 미생물의 농도는, 높은 상태로 유지하는 것이 효율적인 생산성을 얻는데 바람직하고, 예를 들어 건조 중량으로서 2g/L 이상으로 유지함으로써 양호한 생산 효율이 얻어지고, 생성물의 축적 농도를 향상시킬 수 있다.
(2-3) 메타크릴산의 회수
배지 중 또는 반응액 내에 생성된 메타크릴산 및 그 생성량은, 고속 액체 크로마토그래피 및 LC-MS 등의 통상의 방법을 사용해서 검출하여, 측정할 수 있다.
메타크릴산은, 여과, 원심 분리, 진공 농축, 이온 교환 또는 흡착 크로마토그래피, 용매 추출, 증류 및 결정화 등의 주지의 조작을 필요에 따라서 적절히 조합하여 사용함으로써, 배지 또는 반응액 중으로부터 분리 정제할 수 있다.
얻어진 메타크릴산으로부터는, 에스테르화 반응에 의해 메타크릴산에스테르를 제조할 수 있다. 또한, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물(예를 들어 상기 (i) 내지 (xxiv)의 균주)에, 메타크릴산의 에스테르화 반응에 관여하는 효소를 유전자 도입하여, 메타크릴산에스테르를 제조할 수도 있다.
(3) 메타크릴산에스테르의 제조 공정
(3-1) 배양에 의한 메타크릴산에스테르의 제조
본 발명에서, 메타크릴산에스테르의 제조는, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물 및 그러한 유도주에 AAT 유전자가 도입된 유전자 조작 미생물을, 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 포함하는 수성 매체 중에서 배양함으로써 배양 균체 또는 배양물 중에 메타크릴산에스테르를 생성 축적시켜, 해당 배양 균체 또는 배양물 또는 배양 용기 기상부로부터 메타크릴산에스테르를 회수함으로써 행하여진다.
[배지]
미생물의 배양에 사용되는 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 포함하는 수성 매체(배지)는, 미생물이 증식 가능한, 적어도 1종류의 탄소원을 포함하는 충분한 영양소를 포함하는 고형 배지 또는 액체 배지가 된다. 어떤 실시 형태에 있어서, 배지는, 세포의 생존 및 증식에 최적인 pH 및 염 농도에 유리하게 처방된다.
재생 가능 원료 및 바이오매스는, 메타크릴산에스테르를 생산할 수 있으면 특별히 제한은 없다. 재생 가능 원료 및 바이오매스는, 식물성 재료, 동물성 재료 및 생분해성 폐기물 등이면 된다. 적합한 재생 가능 원료 및 바이오매스는, 폴리펩톤, 육 추출물, 효모 추출물, 옥수수 침지액 또는 대두 등의 추출물이다. 이 추출물은 그대로, 또는 일부 정제하여 사용된다. 재생 가능 원료는, 다당류, 올리고당류 및 단당류인 글루코오스, 갈락토오스, 만노오스, 프룩토오스, 크실로오스 및 아라비노오스 및 이들의 유도체이면 된다. 또한, 재생 가능 원료 및 바이오매스에는, 이러한 당류로부터 유도 또는 대사에 의해 발생하는 지질, 아미노산류, 유기산류 및 알코올류를 사용할 수도 있다. 적합한 재생 가능 원료로서는, 글루코오스, 프룩토오스, 크실로오스 등의 당류; 발린, 알라닌, 류신, 리신, 글루탐산 등의 아미노산류; 아세트산, 피루브산, 락트산, 아세토아세트산, 아세트락트산, 2-옥소이소발레르산, 부티르산, 이소부티르산, 프로피온산, 말산, 푸마르산, 시트르산, 숙신산 등의 산; 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올, 이소부탄올 등의 알코올을 들 수 있다. 이 재생 가능 원료는, 1종을 단독으로, 또는 2종 이상을 조합하여 사용할 수 있다.
배지 중의 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스의 농도는, 메타크릴산에스테르를 생산할 수 있으면 특별히 한정되지 않는다. 농도는, 예를 들어 0.05 내지 20(w/v)%, 바람직하게는 0.1 내지 15(w/v)%, 보다 바람직하게는 0.2 내지 10(w/v)%가 된다. 0.2(w/v)% 이상 사용하는 것은 미생물의 메타크릴산 생산 능력이 상승되기 때문이며, 10(w/v)% 이하로 하는 것은 그 이상 첨가해도 비약적인 효과의 상승이 나타나지 않기 때문이다.
배지에는, 원하는 메타크릴산에스테르에 따라, 알코올 또는 페놀류를 첨가한다. 알코올 또는 페놀류는, 상술한 것을 사용하는 것이 바람직하다. 이 알코올 또는 페놀류는, 1종을 단독으로, 또는 2종 이상을 조합하여 사용할 수 있다.
알코올 또는 페놀류의 배지 중에서의 농도는, 메타크릴산에스테르를 생산할 수 있으면 특별히 한정되지 않는다. 농도는, 예를 들어 0.01 내지 20(w/v)%, 바람직하게는 0.05 내지 10(w/v)%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 5(w/v)%가 된다. 또한, 알코올 또는 페놀류는, 미리 배지에 첨가해 둘 수도 있고, 배양을 행하면서 연속적으로 또는 2회 이상으로 나누어서 간헐적으로 첨가할 수도 있다.
배지에는, 무기 질소원 또는 무기 금속염류 등을 첨가해도 된다. 무기 질소원으로서는, 예를 들어 염화암모늄, 황산암모늄, 아세트산암모늄, 인산암모늄 등의 무기산 또는 유기산의 암모늄염 등이 사용된다.
질소원의 배지 중에서의 농도는, 메타크릴산에스테르를 생산할 수 있으면 특별히 한정되지 않는다. 농도는, 예를 들어 0.01 내지 10(w/v)%, 바람직하게는 0.05 내지 8(w/v)%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 4(w/v)%가 된다.
무기 금속염으로서는, 예를 들어 인산제1칼륨, 인산제2칼륨, 인산마그네슘, 황산마그네슘, 염화나트륨, 황산제1철, 황산망간, 황산구리, 탄산칼슘 등이 사용된다.
무기 염류의 배지 중에서의 농도는, 메타크릴산에스테르를 생산할 수 있으면 특별히 한정되지 않는다. 농도는, 예를 들어 0.001 내지 1.6(w/v)%, 바람직하게는 0.005 내지 1.3(w/v)%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 1(w/v)%가 된다. 0.01(w/v)% 이상 사용하는 것은 미생물의 메타크릴산에스테르 생산 능력이 상승되기 때문이며, 1(w/v)% 이하로 하는 것은 그 이상 첨가해도 비약적인 효과의 상승이 나타나지 않기 때문이다.
그 밖에, 배지에는, 미량 금속, 비타민 등이 필요에 따라서 첨가된다. 또한, 필요에 따라 미생물의 생육에 필요한 각종 유기물, 무기물, 계면 활성제 또는 통상 사용되는 소포제 등을 배지 중에 추가할 수 있다.
[배양 조건]
배지에 대한 미생물의 파종은, 종래 공지된 방법에 의해 행하면 된다. 배양 방법도, 특별히 한정되지 않고 진탕 배양, 통기 교반 배양 및 정치 배양 등의 공지 방법을 사용할 수 있다.
미생물의 배양 조건은, 미생물이 생육하고, 또한 메타크릴산에스테르를 생성하는 한 특별히 한정되지 않는다. 배양은, 호기적 조건 하에서 행하여지거나 혐기적 조건 하에서 행하여져도 된다.
pH, 온도 및 배양 시간은, 미생물이 생육하고, 또한 메타크릴산에스테르를 생성할 수 있는 조건이라면 특별히 한정되지 않는다. pH는, 바람직하게는 3 내지 10, 보다 바람직하게는 4 내지 9, 더욱 바람직하게는 5 내지 8이 된다. 온도는, 바람직하게는 10 내지 45℃, 보다 바람직하게는 15 내지 40℃, 또한 바람직하게는 20 내지 35℃가 된다. 배양 시간은, 바람직하게는 10 내지 1000시간, 보다 바람직하게는 15 내지 480시간, 더욱 바람직하게는 20 내지 240시간이 된다.
이 배양 조건은, 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스의 이용량에 대한 메타크릴산에스테르의 생산량의 비율을 최대화하도록, 균주마다 적절히 선택 또는 최적화된다. 또한, 탄소원의 양 및 배양 조건을 적절히 조정함으로써, 메타크릴산에스테르의 생산량을 조정할 수도 있다.
메타크릴산에스테르를 0.04ppm 이상 축적시키기 위한 적합한 조건으로서는, pH5.5 내지 7.5의 조건 하, 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스의 농도를 직접 또는 간접적으로 0.1% 이상으로, 또한 알코올 또는 페놀류의 농도를 직접 또는 간접적으로 0.1% 이상으로 유지하고, 온도를 20 내지 40℃의 범위로 조정하여, 3시간 이상 반응시킨다. 또한, 배양액 중의 미생물의 농도는, 배양액의 환경이 미생물 또는 배양 세포의 증식에 있어서 부적절하게 되어 사멸하는 비율이 높아지지 않은 범위에서, 높은 상태로 유지하는 것이 효율적인 생산성을 얻는데 바람직하고, 예를 들어 건조 중량으로서 2g/L 이상으로 유지함으로써 양호한 생산 효율이 얻어지고, 생성물의 축적 농도를 향상시킬 수 있다.
(3-2) 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산에스테르의 제조
본 발명에 따른 메타크릴산에스테르의 제조 방법에서는, 상술한 바와 같이, 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 포함하는 수성 매체 중에서, 증식을 수반하는 미생물의 배양을 행하는 방법 외에 이하의 방법도 채용할 수 있다. 미생물이 증식 능력을 갖고 있거나 없어도 되고, 미리 배양한 미생물을 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 포함하는 수성 매체에 접촉시켜, 실질적으로 증식을 수반하지 않는 휴지 균체 반응에 의해 메타크릴산에스테르를 생산시킬 수도 있다.
[반응액]
휴지 균체 반응에 사용되는 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 포함하는 수성 매체(반응액)에 포함되는 재생 가능 원료 및 그 농도는, 상기의 배양에 의한 메타크릴산에스테르의 제조 경우와 마찬가지이어도 된다.
휴지 균체 반응에 사용되는 알코올 또는 페놀류 및 그 농도는, 상기의 배양에 의한 메타크릴산에스테르의 제조 경우와 마찬가지이어도 된다.
반응액에는, 무기 금속염류 등을 첨가해도 된다. 무기 금속염으로서는, 예를 들어 인산제1칼륨, 인산제2칼륨, 인산마그네슘, 황산마그네슘, 염화나트륨, 황산제1철, 황산망간, 황산구리, 탄산칼슘 등이 사용된다.
무기 염류의 반응액 중에서의 농도는, 메타크릴산에스테르를 생산할 수 있으면 특별히 한정되지 않는다. 농도는, 예를 들어 0.0001 내지 2(w/v)%, 바람직하게는 0.0003 내지 1.3(w/v)%, 보다 바람직하게는 0.001 내지 1(w/v)%가 된다.
그 밖에, 반응액에는, 미량 금속, 비타민 등이 필요에 따라서 첨가된다. 또한, 필요에 따라 반응에 필요한 각종 유기물, 무기물, 계면 활성제 또는 통상 사용되는 소포제 등을 반응액 내에 추가할 수 있다.
[반응 조건]
휴지 균체 반응에는, 미리 배양한 미생물의 배양액을 그대로 사용하거나, 또는 여과 또는 원심 분리 등으로 회수한 균체를 사용한다. 회수한 미생물은, 적당한 완충액 등에 재현탁시켜, 임의의 균 농도로 하여 사용할 수 있다. 완충액 등에는, 생리 식염수, 인산 칼륨 완충액, 트리스-염산 완충액, 글리신-수산화나트륨 완충액 및 붕산-수산화나트륨 완충액 등이 사용된다.
또한, 휴지 균체 반응에는, 회수한 미생물의 처리물(예를 들어, 파쇄물, 조 효소 또는 정제 효소 등)을 사용할 수도 있다. 또한, 미생물 또는 그 처리물을 공지된 방법으로 적당한 담체에 고정화하여, 그 고정화물을 반응에 사용해도 된다.
반응 조건은, 메타크릴산에스테르를 생성하는 한 특별히 한정되지 않는다. 반응은, 호기적 조건 하에서 행하여지거나 혐기적 조건 하에서 행하여져도 된다. 반응 방법도, 특별히 한정되지 않고 진탕 반응, 통기 교반 반응 및 정치 반응 등의 공지 방법을 사용할 수 있다.
pH, 온도 및 반응 시간은, 메타크릴산을 생성할 수 있는 조건이라면 특별히 한정되지 않는다. pH는, 바람직하게는 3 내지 10, 보다 바람직하게는 4 내지 9, 더욱 바람직하게는 5 내지 8이 된다. 온도는, 바람직하게는 10 내지 45℃, 보다 바람직하게는 15 내지 40℃, 또한 바람직하게는 20 내지 35℃가 된다. 반응 시간은, 호기적 조건에서 바람직하게는 5 내지 180시간, 보다 바람직하게는 10 내지 150시간, 더욱 바람직하게는 15 내지 120시간이 된다.
또한, 생성된 메타크릴산에스테르를 분리할 목적으로, 미리, 유기 용매를 첨가하여, 2상계에서 반응시키는 것도 가능하다. 유기 용매로서는, 예를 들어 직쇄상, 분지상 또는 환상의, 포화 또는 불포화 지방족 탄화수소, 포화 또는 불포화 방향족 탄화수소 등을 단독으로 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다. 구체적으로는, 예를 들어 탄화수소계 용매(예를 들어 펜탄, 헥산, 시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 크실렌 등), 할로겐화 탄화수소계 용매(예를 들어 염화메틸렌, 클로로포름 등), 에테르계 용매(예를 들어 디에틸에테르, 디프로필에테르, 디이소프로필에테르, 디부틸에테르, tert-부틸메틸에테르, 디메톡시에탄 등), 에스테르계 용매(예를 들어 포름산메틸, 아세트산메틸, 아세트산에틸, 아세트산부틸, 프로피온산메틸) 등을 들 수 있다. 이 유기 용매를 첨가해 둠으로써, 생성된 메타크릴산에스테르가 유기상으로 이행하여, 효율적으로 반응이 진행되는 경우가 있다.
이러한 반응 조건은, 재생 가능 원료 및 바이오매스의 이용량에 대한 메타크릴산에스테르의 생산량의 비율을 최대화하도록, 균주마다 적절히 선택 또는 최적화된다. 또한, 탄소원의 양 및 반응 조건을 적절히 조정함으로써, 메타크릴산에스테르의 생산량을 조정할 수도 있다.
메타크릴산에스테르를 0.04ppm 이상 축적시키기 위한 적합한 조건으로서는, pH5.5 내지 7.5의 조건 하, 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스의 농도를 직접 또는 간접적으로 0.1% 이상으로, 또한 알코올 또는 페놀류의 농도를 직접 또는 간접적으로 0.1% 이상으로 유지하고, 온도를 20 내지 40℃의 범위로 조정하여, 3시간 이상 반응시킨다. 또한, 반응액 내의 미생물의 농도는 높은 상태로 유지하는 것이 효율적인 생산성을 얻는데 바람직하고, 예를 들어 건조 중량으로서 2g/L 이상으로 유지함으로써 양호한 생산 효율이 얻어지고, 생성물의 축적 농도를 향상시킬 수 있다.
본 발명에 따른 메타크릴산에스테르의 제조 방법에서는, 상술한 배양에 의한 메타크릴산에스테르의 제조와 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산에스테르의 제조를 적절히 조합하여 행해도 된다. 2개의 방법을 조합함으로써, 보다 효율적인 메타크릴산에스테르의 생산이 가능하게 된다. 또한, 본 발명에 따른 메타크릴산에스테르의 제조 방법에서는, 배지 또는 휴지 균체 반응액으로서 제조한 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스를 포함하는 수성 매체에 미생물을 접촉시키는 방법 이외에, 재생 가능 원료 및/또는 바이오매스에 직접 미생물을 접촉시키는 방법도 채용 가능하다.
(3-3) 메타크릴산에스테르의 회수
배지 중 또는 반응액 내에 생성된 메타크릴산에스테르 및 그 생성량은, 고속 액체 크로마토그래피 및 LC-MS 등의 통상의 방법을 사용해서 검출하여 측정할 수 있다. 또한, 배양 용기 또는 반응 용기의 기상부(헤드 스페이스부)에 휘발된 메타크릴산에스테르 및 그 생성량은, 가스 크로마토그래피 등의 통상의 방법을 사용해서 검출하여 측정할 수 있다.
메타크릴산에스테르는, 여과, 원심 분리, 진공 농축, 이온 교환 또는 흡착 크로마토그래피, 용매 추출, 증류 및 결정화 등의 주지의 조작을 필요에 따라서 적절히 조합하여 사용함으로써, 배지 또는 반응액 중으로부터 분리 정제할 수 있다.
2. 메타크릴산 합성에 관여하는 효소 및 그 유전자
본 발명의 일측면인 메타크릴산 합성에 관여하는 효소 및 그 유전자에 대하여 이하 상세하게 설명한다.
본 발명자들은 메타크릴산 유도체의 생산 능력을 갖는 미생물에 대하여 널리 탐색을 행하여, 미생물로 메타크릴산을 생성할 수 있음을 발견하였다. 그 합성 루트는 탐색의 경위 및 선행 기술로부터 발린 분해 경로라 추정되었다.
발린 분해 경로는 유전병과의 관계로부터, 인간이나 래트 등에 관한 연구가 진행되고 있다(Methods in Enzymology, 324: 241-258(2000)). 그러나, 미생물의 발린 분해 경로 중의 효소에 관한 지식은 적어, 상세에 대해서는 불분명하였다. 사상균 아스퍼질러스 니둘란스(Aspergillus nidulans)에 대해서, scdA 유전자가 결손된 변이주의 해석으로부터, scdA 유전자 산물이 이소류신, 발린 및 단쇄 지방산의 대사에 관여하고, 복수의 대사 경로에 작용하는 아실 CoA 탈수소 효소 활성을 갖는 것을 시사하는 결과가 나타나 있다(Fungal Genet. Biol. 45: 180-189(2008)). 이 결과는 간접적인 평가이며, 이 효소가 실제로 메타크릴산 생성에 유효한 것인지 여부는 불분명하였다. 그 밖에는 미생물 유래의 효소에 대해서는, 세균의 하나인 방선균 스트렙토마이세스(Streptomyces)속에 관한 정보가 있을 뿐이었다(Microbiology 145: 2323-2334(1999)). 상기 문헌에서는, 스트렙토마이세스 코엘리콜로르(Streptomyces coelicolor)로부터 ACD 유전자(acdH)가 클로닝되고, 대장균 재조합체로부터 제조된 부분 정제 효소를 사용하여, 이소부티릴-CoA로부터의 메타크릴릴-CoA의 생성이 확인되었다. 본 발명자들도, 이 추가 시험을 행하여, 대장균을 숙주로 하는 재조합체에 있어서 현저한 효소 단백질의 발현을 인정했지만, ACD 활성에 대해서는, 지극히 미약한 활성을 인정할 뿐으로, 본 효소는 메타크릴산 합성에 적합한 것이 아니라고 판단하였다.
그래서, 본 발명자들은 미생물의 메타크릴산 합성에 관여하는 효소를 유효하게 이용할 목적으로, 다른 미생물의 효소 유전자의 탐색을 행한 결과, 하기와 같이 하여 유용한 효소를 발견하였다.
본 발명인 메타크릴산 생산 능력을 갖는 미생물 중에서 슈도모나스(Pseudomonas)속 및 로도코커스(Rhodococcus)속을 선택하였다.
슈도모나스(Pseudomonas)속 미생물에 대해서는 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida)나 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa)에 대하여 발린 자화 능력이 알려져 있다(Bacteriol. Review 40: 42-54(1976)). 로도코커스(Rhodococcus)속 미생물의 발린 자화 능력에 대해서는 알려져 있지 않았지만, 본 발명의 과정에서, 메타크릴산 생산 능력을 갖는 것을 발명자들이 실험적으로 확인하였다. 이러한 속 중에서 게놈 서열이 공개되어 있는 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) PAO1과 로도코커스 에리트로폴리스(Rhodococcus erythropolis) PR4에 대해서, 메타크릴산 합성에 관여가 추정되는 ACD를 갖고 있다는 가정 하에, 상동성 검색에 의해 후보의 리스트 업을 행하였다.
인간의 ACD가 되는 ACAD8에 대하여 높은 동일성을 나타내는 세균의 호몰로그 유전자의 존재에 대해서는, 과거의 문헌에 기재가 있다(J. Mol. Evol. 69: 176-193(2009))(단, 실험적으로 활성은 확인되지 않음). 또한, 상기의 게놈 서열이 공개되어 있는 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) PAO1 및 로도코커스 에리트로폴리스(Rhodococcus erythropolis) PR4의 양쪽 세균에 대해서는, 아실 CoA 탈수소 효소와 아노테이션되어 있는 오픈 리딩 프레임(Open Reading Frame)(ORF)이 존재한다는 정보만이 알려져 있었다.
양쪽 세균의 게놈 서열 정보에 대해서, 인간 ACAD8의 아미노산 서열에 대하여 상동성을 검색하고, 상동성이 밝혀진 총 6종의 ORF의 유전자를 PCR법에 의해 증폭 취득하여, 대장균용의 발현 벡터에 내장하였다. 이들을 사용하여 재조합체를 제작하고, 재조합체에 있어서의 호몰로그 단백질의 발현과 재조합체 세포 추출액의 ACD 활성을 조사하였다.
[ACD]
그 결과, 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) PAO1로부터 PA_acd1이라고 명명한 유전자와 로도코커스 에리트로폴리스(Rhodococcus erythropolis) PR4로부터 RE_acd1이라고 명명한 유전자가 도입된 재조합체에 매우 높은 활성을 얻을 수 있었다(서열 번호 51 및 53). PA_acd1과 RE_acd1은 그 코딩하는 아미노산 서열(서열 번호 50 및 52)에 있어서 서로 57%의 동일성을 나타냈다. 한편, 활성이 나타나지 않은 PA_acd2, RE_acd2나 미약한 활성밖에 나타나지 않은 acdH(Streptomyces)에 대해서는, 높은 활성이 나타난 PA_acd1과 RE_acd1의 아미노산 레벨에서의 호몰로지는 이하에 나타내는 바와 같았다. PA_acd2는, PA_acd1 및 RE_acd1과 각각 40% 및 41%의 동일성을 나타냈다. RE_acd2는, PA_acd1 및 RE_acd1과 각각 36%의 동일성을 나타냈다. acdH는, PA_acd1 및 RE_acd1과 각각 38% 및 36%의 동일성을 나타냈다.
즉, 메타크릴산 합성에 유용한 ACD의 하나로서는, (A) PA_acd1 또는 RE_acd1이 코딩하는 아미노산 서열(서열 번호 50 또는 52)을 포함하는 것 및 (B) PA_acd1 또는 RE_acd1이 코딩하는 아미노산 서열(서열 번호 50 또는 52)과 아미노산 서열 레벨에 있어서, 45% 이상의 동일성을, 보다 바람직하게는 60%의 동일성을, 더욱 바람직하게는 80% 이상의 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하고, ACD 활성을 갖는 효소이다. 또는, (C) PA_acd1 또는 RE_acd1이 코딩하는 아미노산 서열(서열 번호 50 또는 52)에 있어서 하나 또는 수개의 아미노산이 결실, 치환, 부가 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하고, ACD 활성을 갖는 효소이다.
또한, PA_acd1과 RE_acd1은 그 코딩하는 아미노산 서열(서열 번호 50 및 52)의 C 말단으로부터 70 아미노산 잔기에 있어서, 69%의 동일성을 나타냈다. 한편, 활성이 나타나지 않은 PA_acd2, RE_acd2나 미약한 활성밖에 나타나지 않은 acdH(Streptomyces)에 대해서는, 높은 활성이 나타난 PA_acd1과 RE_acd1의 C 말단으로부터 70 아미노산 잔기에서의 아미노산 레벨에서의 호몰로지는 이하에 나타내는 바와 같다. PA_acd2는, PA_acd1 및 RE_acd1과 각각 43% 및 43%의 동일성을 나타냈다. RE_acd2는, PA_acd1 및 RE_acd1과 각각 38%의 동일성을 나타냈다. acdH는, PA_acd1 및 RE_acd1과 각각 43% 및 38%의 동일성을 나타냈다.
본 발명에서, 메타크릴산의 합성에 유용한 ACD의 다른 형태는, (D) PA_acd1 또는 RE_acd1이 코딩하는 아미노산 서열(서열 번호 50 또는 52)의 C 말단으로부터 70 아미노산 잔기에서의 아미노산 서열과, 60% 이상의 동일성을, 보다 바람직하게는 65% 이상의 동일성을, 더욱 바람직하게는 80% 이상의 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하고, ACD 활성을 갖는 효소이다.
본 발명의 메타크릴산 제조 방법에서 특히 유용한 ACD의 유전자의 하나로서는 이하로 이루어지는 군에서 선택되는 유전자이다.
(a) 서열 번호 50 또는 52로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 코딩하는 유전자,
(b) 서열 번호 51 또는 52로 나타내는 염기 서열을 포함하는 유전자,
(c) 서열 번호 50 또는 52로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 45% 이상의 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 ACD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자 및
(d) 서열 번호 50 또는 52로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 하나 또는 수개의 아미노산이 결실, 치환, 부가 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하고, ACD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
본 발명에서 ACD는 메타크릴산 합성 효소의 하나로서 유용하고, 또한, 본 발명인 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물 유래이면, 특별히 한정되지 않는다.
보다 바람직하게는, 슈도모나스(Pseudomonas) 및 로도코커스 에리트로폴리스(Rhodococcus erythropolis)에서 유래되는 것이며, 바람직한 주로서는, 로도코커스 에리트로폴리스 PR-4주, 로도코커스 에리트로폴리스 KA2-5-1주, 로도코커스 에리트로폴리스 IGTS8주, 로도코커스 에리트로폴리스 D-1주, 로도코커스 에리트로폴리스 H-2주, 로도코커스 에리트로폴리스 N1-36주, 로도코커스 에리트로폴리스 I-19주, 로도코커스 에리트로폴리스 ECRD-1주, 로도코커스 에리트로폴리스 B1주, 로도코커스 에리트로폴리스 SY-1주, 로도코커스 에리트로폴리스 UM3주, 로도코커스 에리트로폴리스 UM9주 또는 로도코커스 종 T09주 등을 들 수 있고, 특히 바람직하게는 로도코커스 에리트로폴리스 PR-4주를 들 수 있다.
이상, 메타크릴산 합성에 관여하고 있는 효소의 하나인 ACD 및 그 유전자의 취득에 대하여 기재하였다.
[BCKAD]
계속해서, 메타크릴산 합성에 관여하고 있는 BCKAD에 대하여 기재한다. BCKAD는 2-옥소이소발레르산으로부터 이소부티릴-CoA를 생성시킬 수 있는 효소이다. 본 발명인 메타크릴산 생산 능력을 갖는 미생물로부터 BCKAD 및 그 유전자를 취득할 수 있다.
슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida)나 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 유래의 BCKAD는, 4개의 폴리펩티드를 포함하는 복합체이며(서열 번호 54, 56, 58 및 60), 그것들의 유전자(서열 번호 55, 57, 59 및 61)는 오페론을 형성하고 있는 것으로 알려져 있다(Methods in Enzymology (2000)324: 129-138).
그 취득 방법으로서는, 예를 들어, 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) PAO1의 게놈 서열로부터 BCKAD 오페론 전체를 증폭하기 위한 프라이머(Primer)를 설계하고, 게놈 DNA를 주형으로 해서 PCR 반응에 의해 오페론 전체를 증폭하여 대장균용의 발현 벡터에 내장함으로써, BCKAD를 발현하기 위한 벡터를 구축할 수 있다. 이것을 사용하여 재조합체를 제작하여, BCKAD 유전자 및 BCKAD를 취득할 수 있다.
본 발명에서 BCKAD는 메타크릴산 합성에 유용한 효소의 하나로서 유용하고, 또한, 본 발명인 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물 유래의 것이라면, 그 유전자에 특별히 한정은 없지만, 예를 들어 하기 (e) 내지 (h), (i) 내지 (l) 또는 (m) 내지 (p)로 이루어지는 군에서 선택되는 유전자가 예시된다.
(e) 서열 번호 54, 56, 58 및 60으로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 4개의 폴리펩티드를 코딩하는 유전자.
(f) 서열 번호 55, 57, 59 및 61로 나타내는 염기 서열을 포함하는 유전자.
(g) 서열 번호 54, 56, 58 및 60으로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 4개의 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 상보쇄와 엄격한 조건에서 혼성화하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
(h) 서열 번호 54, 56, 58 및 60으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 하나 또는 수개의 아미노산이 결실, 치환, 부가 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
(i) 서열 번호 62, 64, 66 및 68로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 4개의 폴리펩티드를 코딩하는 유전자.
(j) 서열 번호 63, 65, 67 및 69로 나타내는 염기 서열을 포함하는 유전자.
(k) 서열 번호 62, 64, 66 및 68로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 4개의 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 상보쇄와 엄격한 조건에서 혼성화하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
(l) 서열 번호 62, 64, 66 및 68로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 하나 또는 수개의 아미노산이 결실, 치환, 부가 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
(m) 서열 번호 70, 72 및 74로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 3개의 폴리펩티드를 코딩하는 유전자.
(n) 서열 번호 71, 73 및 75로 나타내는 염기 서열을 포함하는 유전자.
(o) 서열 번호 70, 72 및 74로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 3개의 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 상보쇄와 엄격한 조건에서 혼성화하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
(p) 서열 번호 70, 72 및 74로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 하나 또는 수개의 아미노산이 결실, 치환, 부가 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자.
본 발명에서, BCKAD를 코딩하는 유전자는, 상기 서열에 한정되는 것은 아니며, 상기의 서열 번호 기재된 염기 서열과 약 50% 이상, 바람직하게는 약 60% 이상, 보다 바람직하게는 약 70% 이상, 더욱 바람직하게는 약 80% 이상, 특히 바람직하게는 약 90% 이상, 또한 특히 바람직하게는 약 95% 이상, 특히 바람직하게는 약 98% 이상의 동일성을 갖는 염기 서열을 갖는 유전자도, 그것이 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 한, BCKAD를 코딩하는 유전자에 포함된다.
본 발명에서 BCKAD는, 예를 들어 서열 번호 54, 56, 58 및 60으로 나타내는 아미노산, 서열 번호 62, 64, 66 및 68로 나타내는 아미노산 서열 또는 서열 번호 70, 72 및 74로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 것을 들 수 있다.
본 발명에서, BCKAD는, 상기 서열을 갖는 것에 한정되는 것은 아니고, 상기의 서열 번호 기재된 아미노산 서열과 약 50% 이상, 바람직하게는 약 60% 이상, 보다 바람직하게는 약 70% 이상, 더욱 바람직하게는 약 80% 이상, 특히 바람직하게는 약 90% 이상, 또한 특히 바람직하게는 약 95% 이상, 특히 바람직하게는 약 98% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질도 본 발명에서의 BCKAD에 포함된다.
상기의 동일성의 수치는, 서열 해석 소프트웨어인 제네틱스(GENETYX)(가부시끼가이샤 제네틱스)를 사용하여, 호몰로지 해석 프로그램을 실행함으로써 구할 수 있다. 그때의 파라미터는, 디폴트의 설정(초기 설정)으로 한다.
또한, 본 발명에서 BCKAD에는, 서열 번호 54, 56, 58 및 60으로 나타내는 아미노산, 서열 번호 62, 64, 66 및 68로 나타내는 아미노산 서열 또는 서열 번호 70, 72 및 74로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 1개 또는 수개의 아미노산이 결실, 치환, 부가 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질도 포함된다.
보다 구체적으로는, 이하의 아미노산 서열을 포함하고, 또한 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 들 수 있다.
(i) 서열 번호 54, 56, 58 및 60으로 나타내는 아미노산, 서열 번호 62, 64, 66 및 68로 나타내는 아미노산 서열 또는 서열 번호 70, 72 및 74로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 1 내지 20개(예를 들어 1 내지 10개, 바람직하게는 1 내지 5개, 더욱 바람직하게는 1 내지 2개)의 아미노산이 결실된 아미노산 서열,
(ii) 서열 번호 54, 56, 58 및 60으로 나타내는 아미노산, 서열 번호 62, 64, 66 및 68로 나타내는 아미노산 서열 또는 서열 번호 70, 72 및 74로 나타내는 아미노산 서열에 1 내지 20개(예를 들어 1 내지 10개, 바람직하게는 1 내지 5개, 더욱 바람직하게는 1 내지 2개)의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 아미노산 서열,
(iii) 서열 번호 54, 56, 58 및 60으로 나타내는 아미노산, 서열 번호 62, 64, 66 및 68로 나타내는 아미노산 서열 또는 서열 번호 70, 72 및 74로 나타내는 아미노산 서열에 1 내지 20개(예를 들어 1 내지 10개, 바람직하게는 1 내지 5개, 더욱 바람직하게는 1 내지 2개)의 아미노산이 부가된 아미노산 서열,
(iv) 서열 번호 54, 56, 58 및 60으로 나타내는 아미노산, 서열 번호 62, 64, 66 및 68로 나타내는 아미노산 서열 또는 서열 번호 70, 72 및 74로 나타내는 아미노산 서열에 1 내지 20개(예를 들어 1 내지 10개, 바람직하게는 1 내지 5개, 더욱 바람직하게는 1 내지 2개)의 아미노산이 삽입된 아미노산 서열,
(V) 상기 (i) 내지 (iv)를 조합한 아미노산 서열을 들 수 있다.
아미노산 서열에 1개 또는 수개의 아미노산이 치환되는 경우에는, 유사한 아미노산 잔기간의 보존적 치환이 바람직하다. 예를 들어 아미노산은, 그 측쇄의 성질에 기초하여, 소수성 아미노산(A, I, L, M, F, P, W, Y, V), 친수성 아미노산(R, D, N, C, E, Q, G, H, K, S, T), 지방족 측쇄를 갖는 아미노산(G, A, V, L, I, P), 수산기 함유 측쇄를 갖는 아미노산(S, T, Y), 황 원자 함유 측쇄를 갖는 아미노산(C, M), 카르복실산 및 아미드 함유 측쇄를 갖는 아미노산(D, N, E, Q), 염기 함유 측쇄를 갖는 아미노산(R, K, H), 방향족 함유 측쇄를 갖는 아미노산(H, F, Y, W)으로 분류된다. 각 군으로 분류된 아미노산은, 서로 치환했을 때에, 당해 폴리펩티드의 활성이 유지될 가능성이 높은 것으로 알려져 있고, 그러한 아미노산 상호의 치환이 바람직하다. 예를 들어, 글리신과 프롤린, 글리신과 알라닌 또는 발린, 류신과 이소류신, 글루탐산과 글루타민, 아스파라긴산과 아스파라긴, 시스테인과 트레오닌, 트레오닌과 세린 또는 알라닌, 리신과 아르기닌간에서의 치환을 들 수 있다.
또한, 상술한 아미노산 서열의 결실, 치환, 부가 및/또는 삽입에 대응하여, 서열 번호 55, 57, 59 및 61로 나타내는 염기 서열, 서열 번호 63, 65, 67 및 69로 나타내는 염기 서열 또는 서열 번호 71, 73 및 75로 나타내는 염기 서열에 있어서, 수개의 염기에 결실, 치환, 부가 및/또는 삽입 등의 변이가 발생한 염기 서열도, 그것이 본 발명에서 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 한, BCKAD를 코딩하는 유전자에 포함된다. 또한, 결실, 치환, 부가 및/또는 삽입되는 염기의 개수는, 30개 이하, 바람직하게는 15개 이하, 특히 바람직하게는 6개 이하이다. 또한, 서열 번호 55, 57, 59 및 61로 나타내는 염기 서열을 포함하는 유전자, 서열 번호 63, 65, 67 및 69로 나타내는 염기 서열을 포함하는 유전자 또는 서열 번호 71, 73 및 75로 나타내는 염기 서열을 포함하는 유전자와 상보적인 염기 서열을 포함하는 DNA와 엄격한 조건 하에서 혼성화하는 DNA도, 이것이 BCKAD 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 한, BCKAD를 코딩하는 유전자에 포함된다.
이상, 메타크릴산 합성에 관여하고 있는 효소의 예로서, ACD 및 BCKAD에 대하여 효소 단백 및 그러한 유전자의 취득에 대하여 기재하였다. 본 발명에서는, 또한 메타크릴산 합성에 직접 또는 간접적으로 관여하고 있는 기타의 효소 및 그 유전자에 대해서도 마찬가지로 취득하는 것이 가능하다.
예를 들어, 메타크릴산 합성에 관여하고 있는 효소는 그 활성을 지표로, 통상의 방법을 사용하여 정제하는 것이 가능하다. 또한, 그 단백질을 바탕으로 유전자 공학적인 방법에 의해 유전자 정보를 얻을 수 있다. 또는, 본 발명인 메타크릴산 합성 능력을 갖는 미생물에 대해서, 전체 게놈 서열을 결정한다. 그 게놈 서열로부터, 목적 효소를 코딩하는 유전자 서열에 관한 공지 정보를 사용해서 상동성 검색을 사용하여 상동성이 높은 유전자 서열을 찾고, 그 유전자를 공지된 방법으로 단리 또는 전체 합성하여, 일반적인 숙주 벡터계에 도입하고, 해당 벡터계에서 형질 전환한 미생물에 의해 후보 단백을 발현시켜, 목적 효소의 활성을 평가함으로써 선택 가능하다. 또한, 차세대 시퀀서의 보급에 의해, 동업자라면, 미생물의 전체 게놈 서열은 용이하게 해석 가능하다.
또한, 본 발명인 메타크릴산 합성 능력을 갖는 미생물에는, ACD의 탈수소 반응으로 탈리된 전자의 수용체 및 그 전달계에 영향을 미치는 단백질 및 그 유전자가 포함되어 있고, 그것들에 대해서도 본원 발명에 포함된다.
뿐만 아니라, 메타크릴산 합성 능력을 갖는 미생물로부터 얻어진 메타크릴산 합성에 관여하고 있는 효소는 각각 단독 또는 복수로, 메타크릴산 유도체 및 그 중간체의 제조가 가능하다. 예를 들어, BCKAD에서는 2-옥소이소발레르산으로부터 이소부티릴-CoA를 제조 가능하고, ACD에서는 이소부티릴-CoA로부터 메타크릴릴-CoA의 제조가 가능하다. BCKAD 및 ACD의 양자의 반응을 조합함으로써, 2-옥소이소발레르산으로부터 메타크릴릴-CoA의 제조가 가능하다. 또한 AAT 또는 메타크릴릴-CoA를 가수 분해하는 활성을 갖는 효소를 가함으로써, 메타크릴산에스테르 또는 메타크릴산의 제조가 각각 가능하게 된다.
메타크릴산 합성에 관여하고 있는 효소는 상술한 바와 같이 유전자를 단리하고, 일반적인 숙주 벡터를 이용하여, 재조합체(형질전환체)를 제작, 상기 재조합체를 배양함으로써 취득할 수 있다. 숙주로서는, 세균에서는 대장균, 로도코커스(Rhodococcus)속, 슈도모나스(Pseudomonas)속, 코리네박테리움(Corynebacterium)속, 바실러스(Bacillus)속, 스트렙토코커스(Streptococcus)속, 스트렙토마이세스(Streptomyces)속 등을 들 수 있고, 효모에서는 사카로마이세스(Saccharomyces)속, 칸디다(Candida)속, 시조사카로마이세스(Shizosaccharomyces)속, 피치아(Pichia)속, 사상균에서는 아스퍼질러스(Aspergillus)속 등을 들 수 있다. 효소(단백질)의 취득을 목적으로 하는 경우에는, 대장균을 사용하는 것이 간편하고, 효율도 좋아 바람직하다. 메타크릴산 합성에 관여하고 있는 효소의 복수를 동일한 숙주에 발현시키는 것도 가능하다. 형질전환체의 배양액으로부터 효소의 취득은, 예를 들어 균체를 회수한 후, 균체를 파쇄, 추출, 원심 분리 등의 방법에 의해 채취할 수 있다.
이렇게 하여 얻어진 효소는, 그 효소가 작용하는 조건 하에서, 원료가 되는 화합물과 접촉시킴으로써, 각각의 목적 산물을 얻을 수 있다.
실시예
이하, 본 발명을 실시예에 기초하여 더욱 상세하게 설명하는데, 본 발명은 이것에 한정되는 것이 아니다.
<실시예 1: 메타크릴산 생산균의 탐색>
일본 국내의 서로 다른 지점으로부터 채취한 토양 및 곤충을 미생물원으로 해서, 집적 배양에 의해 메타크릴산 생산균의 탐색을 행하였다. 발린의 대사 중간체에는 메타크릴산의 유도체인 메타크릴릴-CoA가 포함되므로, 배지에는 L-발린을 포함하는 것을 사용하여, 발린의 자화성을 지표로 해서 스크리닝을 행하였다.
[토양으로부터의 분리]
멸균수 5mL에 토양을 적당량 가하여 교반하고, 정치한 후, 적당량의 상청을 10ml 액체 배지에 첨가하였다. 배지의 조성을 이하에 나타내었다.
K2HPO4 1.0g/l
MgSO4·7H2O 0.2g/l
FeSO4·7H2O 0.01g/l
CaCl2 0.01g/l
L-발린 5.0g/l
pH7.0
30℃에서 3 내지 7일간 진탕 배양하였다. 생육해 온 균주를 동일 배지에 심어 순치 배양을 수회 행하였다. 그 후, 동일 배지에 1.5%의 한천을 가한 한천 배지에 파종하고, 30℃에서 48시간 배양하여, 콜로니를 형성시켰다. 백금이를 사용하여 콜로니를 긁어내 한천 배지(LB 배지, 한천 1.5%)에 식균하고, 30℃에서 48시간 배양하여, 분리주(B25-2주, D22-1주, D43-1주, D25주, D26주, D29주, D41-2주, R1주, B13주)를 취득하였다. LB 배지의 조성은, 1% 백트 트립톤, 0.5% 백트 효모 추출물, 0.5% NaCl이다.
[곤충으로부터의 분리]
채취한 딱정벌레(Carabus insulicola)를 기아 상태에서 2일간 사육한 후, 충체를 95% 에탄올 및 멸균한 생리 식염수로 각각 2회 세정하였다. 충체 복부를 분리해서 0.3mL의 멸균수에 현탁한 후, 상청 0.1mL를 LB 액체 배지에 첨가하여 30℃에서 48시간 배양하였다. 적당량의 배양 상청을 10ml 액체 배지에 첨가하였다. 배지의 조성을 이하에 나타내었다.
K2HPO4 1.0g/l
MgSO4·7H2O 0.2g/l
FeSO4·7H2O 0.01g/l
CaCl2 0.01g/l
L-발린 5.0g/l
pH7.0
30℃에서 3 내지 7일간 진탕 배양하였다. 생육해 온 균주를 동일 배지에 심어 순치 배양을 수회 행하였다. 그 후, 동일 배지에 1.5%의 한천을 가한 한천 배지에 파종하고, 30℃에서 48시간 배양하여, 콜로니를 형성시켰다. 백금이를 사용하여 콜로니를 긁어내 한천 배지(LB 배지, 한천 1.5%)에 식균하고, 30℃에서 48시간 배양하여, 분리주(G1주, G2주)를 취득하였다.
이 분리주의 균학적 성질을 이하의 표에 나타내었다. 표 중, 「+」는 양성, 「-」는 음성, 「+w」는 약한 반응을 의미한다.
(1) 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.) B25-2의 균학적 성질
<표 1-1>
<표 1-2>
통상법에 따라서, B25-2주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 1)을 결정하였다.
B25-2주의 16S rDNA의 부분 염기 서열은, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 16S rDNA의 염기 서열에 대하여 높은 상동성을 나타내고, 슈도모나스 오리지하비탄스(Pseudomonas orizihabitans) IAM(동경 대학 분자 세포 생물학 연구소 컬처 콜렉션) 1568주(NBRC102199) 및 슈도모나스 자포니카(Pseudomonas japonica) IAM 15071주(NBRC103040)에 대하여 99.2%의 가장 높은 동일성을 나타냈다. (NBRC주는, 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 바이오테크놀로지 센터에서 입수 가능함)
16S rDNA의 부분 염기 서열에 기초하는 간이 분자 계통 해석의 결과, B25-2주는, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 종으로 형성되는 클러스터에 포함되었다. 또한, B25-2주는, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 클러스터에 있어서, 어느 기지종과도 상이하여, 독립된 분자 계통학적 위치를 나타냈다.
B25-2주는 질산염을 환원하지 않고, 아르기닌 히드로라제 활성을 나타내고, 젤라틴을 가수 분해하지 않고, 글루코오스, D-만노오스 및 글루콘산칼륨 등을 자화하고, L-아라비노오스 및 D- 만니톨 등을 자화하지 않고, 킹스비(Kings'B) 한천 배지에서 형광 색소를 생산하고, 운동성을 나타내고, 카탈라아제 반응 및 옥시다아제 반응은 모두 양성을 나타내고, 전분을 가수 분해하지 않았다. 이 성상은, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 성상에 모순점이 없다고 생각할 수 있는데, 어느 기지 종의 성상과도 일치하지 않았다.
따라서, B25-2주는 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.)으로 동정되었다. B25-2주는, 2012년 11월 7일자로, 독립 행정법인 제품 평가 기술 기반 기구(NITE), 특허 생물 기탁 센터(우편번호 292-0818, 일본 치바껭 기사라즈시 가즈사카마타리 2-5-8)에 수탁 번호 NITE BP-1451로서 국제 기탁되어 있다.
(2) 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.) D22-1의 균학적 성질
<표 2-1>
<표 2-2>
통상법에 따라서, D22-1주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 2)을 결정하였다.
D22-1주의 16S rDNA의 부분 염기 서열은, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 16S rDNA의 염기 서열에 대하여 높은 상동성을 나타내고, 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) LMG2112주에 대하여 98.8%의 가장 높은 동일성을 나타냈다.
16S rDNA의 부분 염기 서열에 기초하는 간이 분자 계통 해석의 결과, D22-1주는, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 종으로 형성되는 클러스터에 포함되었다. 또한, D22-1주는, 슈도모나스 아비에타니필라(Pseudomonas abietaniphila)와 클러스터를 형성했지만, 양자간에는 거리가 인정되었다.
D22-1주는 질산염을 환원하지 않고, 아르기닌 히드로라제 활성을 나타내고, 우레아제 활성을 나타내지 않고, 젤라틴을 가수 분해하지 않고, 글루코오스, D-만노오스 및 N-아세틸-D-글루코사민 등을 자화하고, L-아라비노오스 및 D- 만니톨 등을 자화하지 않고, 킹스비 한천 배지에서 형광 색소를 생산하지 않고, 운동성을 나타내고, 카탈라아제 반응 및 옥시다아제 반응은 모두 양성을 나타냈다. 이 성상은, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 성상에 일치한다고 생각할 수 있는데, 어느 기지 종의 성상과도 일치하지 않았다.
따라서, D22-1주는 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.)으로 동정되었다. D22-1주는, 2012년 11월 7일자로, 수탁 번호 NITE BP-1452로서 국제 기탁되어 있다.
(3) 슈도모나스 음성엔시스(Pseudomonas umsongensis) D43-1의 균학적 성질
<표 3-1>
<표 3-2>
통상법에 따라서, D43-1주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 3)을 결정하였다.
D43-1주의 16S rDNA의 부분 염기 서열은, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 16S rDNA의 염기 서열에 대하여 높은 상동성을 나타내고, 슈도모나스 음성엔시스(Pseudomonas umsongensis) Ps33-10주에 대하여 100%의 가장 높은 동일성을 나타냈다.
16S rDNA의 부분 염기 서열에 기초하는 간이 분자 계통 해석의 결과, D43-1주는, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 종으로 형성되는 클러스터에 포함되었다. 또한, D43-1주는, 슈도모나스 음성엔시스(Pseudomonas umsongensis) 및 슈도모나스 모니이(Pseudomonas mohnii)와 클러스터를 형성하고, 이들 2종과 동일한 분자 계통학적 위치를 나타냈다.
D43-1주는 질산염을 환원하고, 아르기닌 히드로라제 활성을 나타내고, 우레아제 활성을 나타내지 않고, 젤라틴을 가수분해하지 않고, 글루코오스, L-아라비노오스 및 D-만노오스 등을 자화하고, D-만니톨 및 N-아세틸-D-글루코사민 등을 자화하지 않고, 킹스비 한천 배지에서 형광 색소를 생산하고, 운동성을 나타내고, 카탈라아제 반응 및 옥시다아제 반응은 모두 양성을 나타냈다. 이 성상은, 슈도모나스 음성엔시스(Pseudomonas umsongensis)의 성상과 거의 일치하였다.
따라서, D43-1주는 슈도모나스 음성엔시스(Pseudomonas umsongensis)로 동정되었다. D43-1주는, 2012년 11월 7일자로, 수탁 번호 NITE BP-1453으로서 국제 기탁되어 있다.
(4) 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.) D25의 균학적 성질
<표 4-1>
<표 4-2>
통상법에 따라서, D25주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 4)을 결정하였다.
D25주의 16S rDNA의 부분 염기 서열은, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 16S rDNA의 염기 서열에 대하여 높은 상동성을 나타내고, 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida) ATCC 12633주, 슈도모나스 푸스코바기나에(Pseudomonas fuscovaginae) MAFF 301177주, 슈도모나스 아스플레니이(Pseudomonas asplenii) ATCC 23835주 및 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) LMG 2112주에 대하여 99.0%의 가장 높은 동일성을 나타냈다.
16S rDNA의 부분 염기 서열에 기초하는 간이 분자 계통 해석의 결과, D25주는, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 종으로 형성되는 클러스터에 포함되었다. 또한, D25주는, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 클러스터에 있어서, 어느 기지 종과도 상이하여, 독립된 분자 계통학적 위치를 나타냈다.
D25주는 질산염을 환원하고, 아르기닌 히드로라제 활성을 나타내고, 우레아제 활성을 나타내지 않고, 젤라틴을 가수 분해하지 않고, 글루코오스, L-아라비노오스 및 D-만니톨 등을 자화하고, D-만노오스나 말토오스 등을 자화하지 않고, 킹스비 한천 배지에서 형광 색소를 생산하지 않고, 운동성을 나타내고, 카탈라아제 반응 및 옥시다아제 반응은 모두 양성을 나타냈다. 이 성상은, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 성상에 일치한다고 생각할 수 있는데, 높은 상동성이 시사된, 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida), 슈도모나스 푸스코바기나에(Pseudomonas fuscovaginae), 슈도모나스 아스플레니이(Pseudomonas asplenii) 및 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici)와는, 자화성이나 형광 색소 생산의 점에서 상이가 인정되었다.
따라서, D25주는 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.)으로 동정되었다. D25주는, 2012년 11월 7일자로, 수탁 번호 NITE BP-1454로서 국제 기탁되어 있다.
(5) 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.) D26의 균학적 성질
<표 5-1>
<표 5-2>
통상법에 따라서, D26주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 5)을 결정하였다.
D26주의 16S rDNA의 부분 염기 서열은, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 16S rDNA의 염기 서열에 대하여 높은 상동성을 나타내고, 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida) ATCC 12633주, 슈도모나스 푸스코바기나에(Pseudomonas fuscovaginae) MAFF 301177주 및 슈도모나스 아스플레니이(Pseudomonas asplenii) ATCC 23835주에 대하여 98.6%의 가장 높은 동일성을 나타냈다.
16S rDNA의 부분 염기 서열에 기초하는 간이 분자 계통 해석의 결과, D26주는, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 종으로 형성되는 클러스터에 포함되었다. 또한, D25주는, 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida), 슈도모나스 푸스코바기나에(Pseudomonas fuscovaginae), 슈도모나스 아스플레니이(Pseudomonas asplenii) 및 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici)와 클러스터를 형성하고, 이 중, 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida), 슈도모나스 푸스코바기나에(Pseudomonas fuscovaginae) 및 슈도모나스 아스플레니이(Pseudomonas asplenii)의 3종과 동일한 분자 계통학적 위치를 나타냈다.
D26주는 질산염을 환원하고, 아르기닌 히드로라제 활성 및 우레아제 활성을 나타내지 않고, 젤라틴을 가수 분해하지 않고, 글루코오스, L-아라비노오스 및 D-만노오스 등을 자화하고, 말토오스 및 아디프산을 자화하지 않고, 킹스비 한천 배지에서 형광 색소를 생산하고, 운동성을 나타내고, 카탈라아제 반응 및 옥시다아제 반응은 모두 양성을 나타내고, 전분을 가수 분해하지 않았다. 이 성상은, 근연성이 시사된, 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida), 슈도모나스 푸스코바기나에(Pseudomonas fuscovaginae) 및 슈도모나스 아스플레니이(Pseudomonas asplenii)의 성상과 유사점이 있지만, 상이도 확인되었다. 특히, 질산염을 환원하고, 아르기닌 히드로라제 활성을 나타내지 않는 점은 이 종과 상이하였다.
따라서, D26주는 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.)으로 동정되었다. D26주는, 2012년 11월 7일자로, 수탁 번호 NITE BP-1455로서 국제 기탁되어 있다.
(6) 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.) D29의 균학적 성질
<표 6-1>
<표 6-2>
통상법에 따라서, D29주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 6)을 결정하였다.
D29주의 16S rDNA의 부분 염기 서열은, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 16S rDNA의 염기 서열에 대하여 높은 상동성을 나타내고, 슈도모나스 반코우베렌시스(Pseudomonas vancouverensis) DhA-51주에 대하여 99.6%의 가장 높은 동일성을 나타냈다.
16S rDNA의 부분 염기 서열에 기초하는 간이 분자 계통 해석의 결과, D29주는, 슈도모나스 음성엔시스(Pseudomonas umsongensis), 슈도모나스 모니이(Pseudomonas mohnii), 슈도모나스 그라미니스(Pseudomonas graminis)와 클러스터를 형성하고, 이 중 슈도모나스 음성엔시스(Pseudomonas umsongensis) 및 슈도모나스 모니이(Pseudomonas mohnii)와 동일한 분자 계통학적 위치를 나타냈다.
D29주는 질산염을 환원하고, 아르기닌 히드로라제 활성을 나타내고, 우레아제 활성을 나타내지 않고, 젤라틴을 가수 분해하지 않고, 글루코오스, L-아라비노오스 및 D-만노오스 등을 자화하고, N-아세틸-D-글루코사민, 말토오스 및 아디프산을 자화하지 않고, 킹스비 한천 배지에서 형광 색소를 생산하지 않고, 운동성을 나타내고, 카탈라아제 반응 및 옥시다아제 반응은 모두 양성을 나타냈다. 이 성상은, 근연성이 시사된, 슈도모나스 음성엔시스(Pseudomonas umsongensis) 및 슈도모나스 모니이(Pseudomonas mohnii)의 성상과 유사점이 있지만, 상이도 확인되었다. 특히, 아르기닌 히드로라제 활성을 나타내지 않는 점은 이 2종의 어느 것과도 상이하고, 질산염을 환원하는 점은, 슈도모나스 모니이(Pseudomonas mohnii)의 성상과 상이하였다.
따라서, D29주는 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.)으로 동정되었다. D29주는, 2012년 11월 7일자로, 수탁 번호 NITE BP-1456으로서 국제 기탁되어 있다.
(7) 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.) D41-2의 균학적 성질
<표 7-1>
<표 7-2>
통상법에 따라서, D41-2주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 7)을 결정하였다.
D41-2주의 16S rDNA의 부분 염기 서열은, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 16S rDNA의 염기 서열에 대하여 높은 상동성을 나타내고, 슈도모나스 반코우베렌시스(Pseudomonas vancouverensis) DhA-51주에 대하여 99.8%의 가장 높은 동일성을 나타냈다.
16S rDNA의 부분 염기 서열에 기초하는 간이 분자 계통 해석의 결과, D41-2주는, 슈도모나스속(Pseudomonas)의 종으로 형성되는 클러스터에 포함되었다. 또한 D41-2주는, 슈도모나스 반코우베렌시스(Pseudomonas vancouverensis) 및 슈도모나스 무레이(Pseudomonas moorei)와 클러스터를 형성하고, 이들 2종과 동일한 분자 계통학적 위치를 나타냈다.
D41-2주는 질산염을 환원하고, 아르기닌 히드로라제 활성을 나타내고, 젤라틴을 가수 분해하지 않고, 글루코오스, L-아라비노오스 및 D-만노오스 등을 자화하고, 말토오스 및 아디프산을 자화하지 않고, 킹스비 한천 배지에서 형광 색소를 생산하고, 운동성을 나타내고, 카탈라아제 반응 및 옥시다아제 반응은 모두 양성을 나타냈다. 이 성상은, 귀속이 시사된, 슈도모나스 반코우베렌시스(Pseudomonas vancouverensis) 및 슈도모나스 무레이(Pseudomonas moorei)의 성상과 유사점이 많이 인정되었지만, 상이도 확인되었다. 특히, 형광 색소를 생산하고, 질산염을 환원하는 점은, 슈도모나스 무레이(Pseudomonas moorei)의 성상과 상이하고, 아르기닌 히드로라제 활성을 나타내는 점은, 슈도모나스 반코우베렌시스(Pseudomonas vancouverensis)의 성상과 상이하였다.
따라서, D41-2주는 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.)으로 동정되었다. D41-2주는, 2012년 11월 7일자로, 수탁 번호 NITE BP-1457로서 국제 기탁되어 있다.
(8) 바실러스 투링기엔시스(Bacillus thuringiensis) G1의 균학적 성질
<표 8-1>
<표 8-2>
통상법에 따라서, G1주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 9)을 결정하였다.
G1주의 16S rDNA의 부분 염기 서열은, 바실러스속(Bacillus)의 16S rDNA의 염기 서열에 대하여 높은 상동성을 나타내고, 바실러스 투링겐시스(Bacillus thuringiensis) ATCC 10792주에 대하여 99.8%의 가장 높은 동일성을 나타냈다.
16S rDNA의 부분 염기 서열에 기초하는 간이 분자 계통 해석의 결과, G1주는, 바실러스속(Bacillus)의 종으로 형성되는 클러스터에 포함되었다. 또한 G1주는, 바실러스 투링겐시스(Bacillus thuringiensis)와 클러스터를 형성하고, 양자는 동일한 분자 계통학적 위치를 나타냈다.
G1주는, 글리세롤, 리보오스 및 글루코오스를 발효하고, D-크실로오스, L-크실로오스 및 갈락토오스 등을 발효하지 않고, β-갈락토시다아제 활성이나 우레아제 활성을 나타내지 않고, 시트르산을 이용하고, 인돌을 생산하지 않고, 아세토인을 생산하고, 질산염을 환원하지 않고, 45℃에서 생육하지 않고, 혐기 조건 하에서 생육하고, 전분을 가수 분해하였다. 이 성상은, 귀속이 시사된, 바실러스 투링겐시스(Bacillus thuringiensis)의 성상과 거의 일치했지만, 질산염을 환원하지 않는 점은, 바실러스 투링겐시스(Bacillus thuringiensis)의 전형적인 성상과 상이하였다. 생리 생화학 성상의 상이에 대해서는, 주 레벨의 차이의 가능성도 부정할 수 없다.
따라서, G1은 바실러스 투링겐시스(Bacillus thuringiensis)로 동정되었다. G1주는, 2012년 11월 7일자로, 수탁 번호 NITE BP-1458로서 국제 기탁되어 있다.
(9) 바실러스 투링기엔시스(Bacillus thuringiensis) G2의 균학적 성질
<표 9-1>
<표 9-2>
통상법에 따라서, G2주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 10)을 결정하였다.
G2주의 16S rDNA의 부분 염기 서열은, 바실러스속(Bacillus)의 16S rDNA의 염기 서열에 대하여 높은 상동성을 나타내고, 바실러스 투링겐시스(Bacillus thuringiensis) ATCC 17092주에 대하여 99.2%의 가장 높은 동일성을 나타냈다.
16S rDNA의 부분 염기 서열에 기초하는 간이 분자 계통 해석의 결과, G2주는, 바실러스속(Bacillus)의 종으로 형성되는 클러스터에 포함되었다. 또한 G2주는, 바실러스 투링겐시스(Bacillus thuringiensis)와 클러스터를 형성하고, 양자는 동일한 분자 계통학적 위치를 나타냈다.
G2주는, 글리세롤, 리보오스 및 글루코오스를 발효하고, D-크실로오스, L-크실로오스 및 갈락토오스 등을 발효하지 않고, β-갈락토시다아제 활성이나 우레아제 활성을 나타내지 않고, 시트르산을 이용하고, 인돌을 생산하지 않고, 아세토인을 생산하고, 질산염을 환원하지 않고, 45℃에서 생육하지 않고, 혐기 조건 하에서 생육하고, 전분을 가수 분해하였다. 이 성상은, 귀속이 시사된, 바실러스 투링겐시스(Bacillus thuringiensis)의 성상과 거의 일치했지만, 질산염을 환원하지 않는 점은, 바실러스 투링겐시스(Bacillus thuringiensis)의 전형적인 성상과 상이하였다. 생리 생화학 성상의 상이에 대해서는, 주 레벨의 차이의 가능성도 부정할 수 없다.
따라서, G2주는 바실러스 투링겐시스(Bacillus thuringiensis)로 동정되었다. G2주는, 2012년 11월 7일자로, 수탁 번호 NITE BP-1459로서 국제 기탁되어 있다.
(10) 바실러스 종(Bacillus sp.) R1의 균학적 성질
<표 10-1>
<표 10-2>
통상법에 따라서, R1주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 11)을 결정하였다.
R1주의 16S rDNA의 부분 염기 서열은, 바실러스속(Bacillus)의 16S rDNA의 염기 서열에 대하여 높은 상동성을 나타내고, 바실러스 오세아니세디미니스(Bacillus oceanisediminis) H2주에 대하여 98.9%의 가장 높은 동일성을 나타냈다.
16S rDNA의 부분 염기 서열에 기초하는 간이 분자 계통 해석의 결과, R1주는, 바실러스속(Bacillus)의 종으로 형성되는 클러스터에 포함되었다. 또한 R1주는, 바실러스 오세아니세디미니스(Bacillus oceanisediminis)와 클러스터를 형성하고, 근연인 것으로 나타났다.
R1주는, 글리세롤, 리보오스 및 D-크실로오스 등을 산화하고, D-아라비노오스 및 L-크실로오스 등을 산화하지 않고, 아르기닌 히드로라제 활성을 나타내지 않고, 젤라틴을 가수 분해하고, 질산염을 환원하고, 아포를 형성하고, 45℃에서 생육하지 않고, 전분을 가수 분해하지 않았다. 이 성상은, 근연성이 시사된, 바실러스 오세아니세디미니스(Bacillus oceanisediminis)의 성상과 유사점은 있지만, 상위점도 인정되었다. 특히, 아르기닌 히드로라제 활성을 나타내지 않고, 45℃에서 생육하지 않고, 전분을 가수 분해하지 않는 점 등은, 바실러스 오세아니세디미니스(Bacillus oceanisediminis)의 성상과 상이하였다.
따라서, R1주는 바실러스 종(Bacillus sp.)으로 동정되었다. R1주는, 2012년 11월 7일자로, 수탁 번호 NITE BP-1460으로서 국제 기탁되어 있다.
(11) 스핑고박테리움 종(Sphingobacterium sp.) B13의 균학적 성질
<표 11-1>
<표 11-2>
통상법에 따라서, B13주의 16S rDNA의 부분 염기 서열(서열 번호 16)을 결정하였다.
B13주의 16S rDNA의 부분 염기 서열은, 스핑고박테리움속(Sphingobacterium)의 16S rDNA의 염기 서열에 대하여 높은 상동성을 나타내고, 스핑고박테리움 시양겐스(Sphingobacterium siyangense) SY1주에 대하여 97.4%의 가장 높은 동일성을 나타냈다.
B13주는 질산염을 환원하지 않고, 글루코오스를 발효하지 않고, 우레아제 및 β-갈락토시다아제 활성을 나타내고, 에스쿨린 및 젤라틴을 가수 분해하고, 글루코오스, D-만노오스 및 말토오스 등을 자화하고, L-아라비노오스 및 D- 만니톨 등을 자화하지 않고, 운동성을 나타내지 않고, 카탈라아제 활성을 나타내고, 인돌을 생산하지 않았다. 이 성상은, 스핑고박테리움속(Sphingobacterium)의 성상에 일치한다고 생각할 수 있는데, B13주의 성상과 일치하는 기지 종은 발견되지 않았다.
따라서, B13주는 스핑고박테리움 종(Sphingobacterium sp.)으로 동정되었다. B13주는, 2012년 11월 7일자로, 수탁 번호 NITE BP-1461로서 국제 기탁되어 있다.
<실시예 2: 합성 배양지를 사용한 메타크릴산의 제조>
실시예 1에서 취득된 분리주를 사용하여 합성 배양지 중에서의 메타크릴산 제조를 행하였다.
D22-1주, D41-2주 또는 D43-1주를 한천 배지(LB 배지, 한천 1.5%)에 생육시켜, 10ml 액체 배치에 1 백금이 식균하였다. 배지의 조성을 이하에 나타내었다. 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 19 내지 22시간 배양을 행했다(전(前) 배양).
K2HPO4 1.0g/l
MgSO4·7H2O 0.2g/l
FeSO4·7H2O 0.01g/l
CaCl2 0.01g/l
L-발린 5.0g/l
pH7.0
2ml 전 배양액을 100mL 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하였다. 배지의 조성은 전 배양 배지와 동일하다. 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 44 내지 72시간 배양을 행했다(본 배양).
본 배양 후, 본 배양액을 원심 분리(12000rpm, 10분)하여, 상청 획분을 분획하였다. 배양액 상청 중에 포함되는 화합물을 HPLC에 의해 분석하였다. HPLC분석 조건은 이하와 같다.
장치: e2695(와터스(Waters)사 제조)
칼럼: 유기산 분석용 이온 배제형 중합체 칼럼 T-132-E(와코(WAKO)사 제조)
용리액: 0.1%(V/V) 인산 용액
유속: 0.5ml/min
칼럼 온도: 40℃
샘플 주입량: 10μl
분석 시간: 40min
검출기: UV
분석 샘플은 용리액으로 적절히 희석하여, 모두 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트(Cellulose Acetate) 0.2㎛(아드반텍(ADVANTEC)사 제조)로 필터 여과 처리하여 사용하였다. 분석의 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간(31.15분)에 피크가 나타났다. 「표 12」에 본 배양 종료 시의 각 배양액 상청 중의 메타크릴산 농도를 나타낸다.
<표 12>
상기 피크에 대하여 CG/MS 분석을 행하였다. GC/MS 분석 조건은 이하와 같다.
장치: 6890/5875A(애질런트 테크놀로지스(Agilent Technologies)사 제조)
칼럼: DB-FFAP 칼럼(J&W사 제조)
캐리어: He
오븐 온도: 50℃(1min) 후, 5℃/min으로 150℃까지 승온하고, 또한 20℃/min으로 250℃까지 승온하였다.
주입구 온도: 200℃
칼럼 유량: 1ml/min(콘스탄트 플로우 모드)
스플릿비: 1/50
샘플 주입량: 1μl
검출기: MSD(EI)
얻어진 토탈 이온 크로마토그래프를 도 2에, 관측한 피크의 매스 스펙트럼을 도 3에 도시한다. 해석의 결과, 메타크릴산과 동일한 유지 시간(17.15min)에 관측된 피크가 메타크릴산인 것을 확인할 수 있었다.
<실시예 3: 천연 배지를 사용한 메타크릴산의 제조>
실시예 1에서 취득된 분리주를 사용하여 천연 배지 중에서의 메타크릴산 제조를 행하였다.
G2주를 한천 배지(LB 배지, 한천 1.5%)에 생육시켜, 10ml 액체 배지에 1 백금이 식균하였다. 배지의 조성을 이하에 나타내었다. 37℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 배양을 행했다(전 배양).
트립톤(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 10g/l
효모 추출물(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 5g/l
NaCl 10g/l
pH7.0
1ml 전 배양액을 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하였다. 배지의 조성은 전 배양 배지와 동일하다. 37℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 배양을 행하였다.
본 배양 후, 본 배양액을 원심 분리(12000rpm, 10분)하고, 상청 획분을 분획하였다. 실시예 2에 기재된 방법에 의해, 배양액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간(31.15분)에 피크가 나타났다. 배양액 중의 메타크릴산 농도는 1.0ppm이었다.
<실시예 4: 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조>
실시예 1에서 취득된 분리주를 사용하여 휴지 균체 반응에 의해 메타크릴산의 제조를 행하였다.
B25-2주, D22-1주, D43-1주, D25주, D26주, D29주, D41-2주, G1주, G2주, R1주, B13주를 한천 배지(LB 배지, 한천 1.5%)에 생육시켜, 10ml 액체 배지에 1 백금이 식균하였다. 배지의 조성을 이하에 나타내었다. 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 19 내지 22시간 배양을 행했다(전 배양).
K2HPO4 1.0g/l
MgSO4·7H2O 0.2g/l
FeSO4·7H2O 0.01g/l
CaCl2 0.01g/l
L-발린 5.0g/l
pH7.0
2mL 전 배양액을 100mL 액체 배지(배지 100mL/500mL 용량 삼각 플라스크)에 식균하였다. 배지의 조성은 전 배양 배지와 동일하다. 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 69 내지 76시간 배양을 행했다(본 배양).
본 배양 후, 본 배양액 40mL를 50mL 용량 코니칼 튜브에 옮겨 원심 분리(12000rpm, 10분)하여 균체를 얻었다. 이 균체에 휴지 균체 반응 용액을 10mL 가하여 휴지 균체 반응을 행하였다. 휴지 균체 반응 용액의 조성은, 5.0g/l L-발린, 50mM 인산 버퍼, pH7.0이다. 반응은, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서 24시간 행하였다.
실시예 2에 기재된 방법에 의해, 휴지 균체 반응 용액 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간(31.15분)에 피크가 나타났다. 「표 13」에 휴지 균체 반응 종료 시의 각 반응액의 메타크릴산 농도를 나타낸다.
<표 13>
<실시예 5: 슈도모나스(Pseudomonas)속을 사용한 합성 배양지에서의 메타크릴산의 제조>
슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida) NBRC12996을 한천 배지(LB 배지, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 10ml 액체 배지에 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 1 내지 4일간 배양을 행했다(전 배양). 전 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
Na2HPO4(무수) 6.0g/l
KH2PO4 3.0g/l
NaCl 0.5g/l
NH4Cl 1.0g/l
1M MgSO4·7H2O 1ml
1M CaCl2 0.1ml
1% 티아민(Thiamin) 1ml
글루코오스 2.0g/l
1ml 전 배양액을 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
Na2HPO4(무수) 6.0g/l
KH2PO4 3.0g/l
NaCl 0.5g/l
NH4Cl 1.0g/l
1M MgSO4·7H2O 1ml
1M CaCl2 0.1ml
1% 티아민 1ml
L-발린 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액을 원심 분리(7500rpm, 15분)하고, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 배양액 상청 중에 포함되는 화합물은 2종류의 분석 조건에서 분석하였다. HPLC 분석 조건은 이하와 같다.
분석 조건 A
장치: e2695(와터스사 제조)
칼럼: 유기산 분석용 이온 배제형 중합체 칼럼 T-132-E(와코사 제조)
용리액: 0.1%(V/V) 인산 용액
유속: 0.5ml/min
칼럼 온도: 40℃
샘플 주입량: 10μl
분석 시간: 40min
검출기: UV
분석 조건 B
장치: JASCO UV-970, CO-960, PU-980, DG-1580-54(닛본 분꼬우사 제조)
칼럼: 이너트실(Inertsil)RODS-3V(GL 사이언스사 제조)
용리액: 20%(V/V) 메탄올, 0.2%(V/V) 인산 용액
유속: 1.0ml/min
칼럼 온도: 40℃
샘플 주입량: 5μl
분석 시간: 15min
검출기: UV
분석의 결과, 분석 조건 A나 분석 조건B에서도 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났다. 본 배양 종료 시의 배양액 상청 중의 메타크릴산 농도는 0.2ppm이었다.
<실시예 6: 브레분디모나스(Brevundimonas)속, 오크로박트럼(Ochrobactrum)속, 파라코커스(Paracoccus)속을 사용한 합성 배양지에서의 메타크릴산의 제조>
브레분디모나스 서브비브리오이데스(Brevundimonas subvibrioides) NBRC16000, 오크로박트럼 그리그노넨스(Ochrobactrum grignonense) NBRC102586, 오크로박트럼 루피니(Ochrobactrum lupini) NBRC102587, 파라코커스 아미노필러스(Paracoccus aminophilus) NBRC16710을 한천 배지에 생육시켰다(플레이트 배양). 플레이트 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
폴리펩톤(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 10g
효모 추출물(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 2g
MgSO4·7H2O 1g
증류수(Distilled water) 1l
아거(Ager) 15g
pH7.0
10ml 액체 배지에 플레이트 배양으로 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 3 내지 4일간 배양을 행했다(전 배양). 전 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
Na2HPO4(무수) 6.0g/l
KH2PO4 3.0g/l
NaCl 0.5g/l
NH4Cl 1.0g/l
1M MgSO4·7H2O 1ml
1M CaCl2 0.1ml
1% 티아민 1ml
글루코오스 2.0g/l
1ml 전 배양액을 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
Na2HPO4(무수) 6.0g/l
KH2PO4 3.0g/l
NaCl 0.5g/l
NH4Cl 1.0g/l
1M MgSO4·7H2O 1ml
1M CaCl2 0.1ml
1% 티아민 1ml
L-발린 2.0g/l
글루코오스 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액을 원심 분리(7500rpm, 15분)하고, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 A에서 배양액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났다. 「표 14」에 본 배양 종료 시의 각 배양액 상청 중의 메타크릴산 농도를 나타낸다.
<표 14>
<실시예 7: 스핑고모나스(Sphingomonas)속, 오크로박트럼(Ochrobactrum)속, 패니바실러스(Paenibacillus)속, 메소리조비움(Mesorhizobium)속을 사용한 합성 배양지에서의 메타크릴산의 제조>
스핑고모나스 파우시모빌리스(Sphingomonas paucimobilis) NBRC13935, 오크로박트럼 인터메디움(Ochrobactrum intermedium) NBRC15820, 패니바실러스 종(Paenibacillus sp.) NBRC13157, 메소리조비움 로티(Mesorhizobium loti) ATCC700743을 뉴트리엔트 한천 배지(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 10ml 액체 배지에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 1 내지 4일간 배양을 행했다(전 배양). 전 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
Na2HPO4(무수) 6.0g/l
KH2PO4 3.0g/l
NaCl 0.5g/l
NH4Cl 1.0g/l
1M MgSO4·7H2O 1ml
1M CaCl2 0.1ml
1% 티아민 1ml
글루코오스 2.0g/l
1ml 전 배양액을 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 3 내지 6일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
Na2HPO4(무수) 6.0g/l
KH2PO4 3.0g/l
NaCl 0.5g/l
NH4Cl 1.0g/l
1M MgSO4·7H2O 1ml
1M CaCl2 0.1ml
1% 티아민 1ml
L-발린 2.0g/l
글루코오스 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액을 원심 분리(7500rpm, 15분)하고, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 B에서 배양액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났다. 「표 15」에 본 배양 종료 시의 각 배양액 상청 중의 메타크릴산 농도를 나타낸다.
<표 15>
<실시예 8: 바실러스(Bacillus)속을 사용한 합성 배양지에서의 메타크릴산의 제조>
바실러스 바디우스(Bacillus badius) ATCC14574를 뉴트리엔트 한천 배지(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 10ml 뉴트리엔트 배지에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 1일간 배양을 행했다(전 배양).
1ml 전 배양액을 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 8일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
Na2HPO4(무수) 6.0g/l
KH2PO4 3.0g/l
NaCl 0.5g/l
NH4Cl 1.0g/l
1M MgSO4·7H2O 1ml
1M CaCl2 0.1ml
1% 티아민 1ml
L-발린 2.0g/l
글루코오스 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액을 원심 분리(7500rpm, 15분)하고, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 2종류의 분석 조건에서 배양액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 분석 조건 A나 분석 조건 B에서도 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났다. 본 배양 종료 시의 배양액 상청 중의 메타크릴산 농도는 분석 조건 A에서 2.0ppm, 분석 조건 B에서 2.4ppm이었다.
<실시예 9: 오크로박트럼(Ochrobactrum)속을 사용한 천연 배지에서의 메타크릴산의 제조>
오크로박트럼 종(Ochrobactrum sp.) NBRC12951을 뉴트리엔트 한천 배지(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 8일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
뉴트리엔트 배지 8g/l
L-발린 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액을 원심 분리(7500rpm, 15분)하고, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 B에서 배양액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났고, 본 배양 종료 시의 배양액 상청 중의 메타크릴산 농도는 3.1ppm이었다.
<실시예 10: 브레분디모나스(Brevundimonas)속을 사용한 천연 배지에서의 메타크릴산의 제조>
브레분디모나스 디미누타(Brevundimonas diminuta) ATCC11568을 뉴트리엔트 한천 배지(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 10ml 뉴트리엔트 배지에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 1일간 배양을 행했다(전 배양). 전 배양액과 40% 글리세롤 수용액을 1:1로 혼합하여, -80℃에서 동결 보존하였다.
동결 보존한 전 배양액을 실온에서 융해하고, 0.5ml를 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하였다. 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
뉴트리엔트 배지 8g/l
L-발린 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액을 원심 분리(7500rpm, 15분)하고, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 B에서 배양액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났고, 본 배양 종료 시의 배양액 상청 중의 메타크릴산 농도는 37.0ppm이었다.
<실시예 11: 효모를 사용한 메타크릴산의 제조>
칸디다 유틸리스(Candida utilis) NBRC1086을 뉴트리엔트 한천 배지(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 10ml 액체 배지에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 24℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 1일간 배양을 행했다(전 배양). 전 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
효모 추출물(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 20g/l
폴리펩톤(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 20g/l
글루코오스 20g/l
1ml 전 배양액을 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하고, 24℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
글루코오스 2.0g/l
L-발린 2.0g/l
(NH4)2SO4 6.0g/l
KCl 2.4g/l
NaCl 0.12g/l
H3PO4 3.0g/l
MgSO4·7H2O 2.4g/l
FeSO4·7H2O 0.01g/l
ZnSO4·7H2O 0.12g/l
MnSO4·4-6H2O 0.024g/l
CuSO4·5H2O 0.006g/l
CaCl2 0.12g/l
비타민 믹스(Vitamin Mix) 30ml
비타민 믹스의 조성을 이하에 나타내었다.
비오틴 0.2g/l
판토텐산칼슘 2g/l
엽산 0.002g/l
염산티아민 0.4g/l
리보플라빈 0.2g/l
니코틴산 0.4g/l
염산피리독신 0.4/lg
이노시톨 1g/l
p-아미노벤조산 0.2g/l
본 배양 후, 본 배양액을 원심 분리(7500rpm, 15분)하고, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 A에서 배양액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났고, 본 배양 종료 시의 배양액 상청 중의 메타크릴산 농도는 0.1ppm이었다.
<실시예 12: 곰팡이를 사용한 메타크릴산의 제조>
아스퍼질러스 플라버스(Aspergillus flavus) NBRC8558, 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae) NBRC4255를 포테이토 덱스트로오스 한천 배지(닛스이제약사 제조)에 생육시켰다. 생육한 균사와 포자를 멸균수 5ml에 현탁하고, 그 1ml를 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하였다. 24℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
L-발린 2.0g/l
NaNO3 2.5g/l
K2HPO4 1.25g/l
MgSO4·7H2O 0.63g/l
KCl 0.63g/l
FeSO4·7H2O 0.013g/l
밀기울 5g/l
pH7.0
본 배양 후, 본 배양액을 원심 분리(7500rpm, 15분)하고, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 A와 분석 조건 B에서 배양액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 분석 조건 A나 분석 조건 B에서도 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났다. 「표 16」에 본 배양 종료 시의 각 배양액 상청 중의 메타크릴산 농도를 나타낸다.
<표 16>
<실시예 13: 스핑고모나스(Sphingomonas)속, 페도박터(Pedobacter)속, 바실러스(Bacillus)속, 리스토넬라(Listonella)속을 사용한 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조>
스핑고모나스 파우시모빌리스(Sphingomonas paucimobilis) NBRC13935, 페도박터 헤파리너스(Pedobacter heparinus) NBRC12017, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) NBRC12210, 리스토넬라 앙귈라럼(Listonella anguillarum) ATCC19264를 뉴트리엔트 한천 배지(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 10ml 액체 배지에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 1 내지 3일간 배양을 행했다(전 배양). 전 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
Na2HPO4(무수) 6.0g/l
KH2PO4 3.0g/l
NaCl 0.5g/l
NH4Cl 1.0g/l
1M MgSO4·7H2O 1ml
1M CaCl2 0.1ml
1% 티아민 1ml
글루코오스 2.0g/l
1ml 전 배양액을 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 3 내지 6일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
Na2HPO4(무수) 6.0g/l
KH2PO4 3.0g/l
NaCl 0.5g/l
NH4Cl 1.0g/l
1M MgSO4·7H2O 1ml
1M CaCl2 0.1ml
1% 티아민 1ml
L-발린 2.0g/l
글루코오스 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액 전량을 225ml 용량 원심 튜브에 옮겨 원심 분리(5000rpm, 15분)하고, 상청을 제거하여 균체를 얻었다. 이 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 40ml 첨가하여 균체를 현탁, 다시 동일한 조건에서 원심하고, 상청을 제거하여 세정 균체를 얻었다. 세정 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 3ml 첨가하여 균체 현탁액을 제조하였다. 50mL 용량 코니칼 튜브에 균체 현탁액 3ml와 휴지 균체 반응 용액을 3ml 첨가하여 휴지 균체 반응을 행하였다. 반응은, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 행하였다. 휴지 균체 반응 용액의 조성은, 5.0g/l L-발린, 50mM 인산 버퍼 pH7.0이다.
휴지 균체 반응 개시 5시간 후와 24시간 후에 반응액 1.6ml를 채취하였다. 반응액은 원심 분리(15000rpm, 5분)하고, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 A에서 반응액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났다. 「표 17」에 휴지 균체 반응에서의 반응액 상청 중의 메타크릴산 농도를 나타낸다.
<표 17>
(ND: 검출되지 않음)
<실시예 14: 오크로박트럼(Ochrobactrum)속, 파라코커스(Paracoccus)속을 사용한 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조>
오크로박트럼 그리그노넨스(Ochrobactrum grignonense) NBRC102586, 오크로박트럼 루피니(Ochrobactrum lupini) NBRC102587, 파라코커스 아미노필러스(Paracoccus aminophilus) NBRC16710을 한천 배지에 생육시켰다(플레이트 배양). 플레이트 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
폴리펩톤(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 10g
효모 추출물(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 2g
MgSO4·7H2O 1g
증류수 1l
아거 15g
pH7.0
10ml 액체 배지에 플레이트 배양에서 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 3 내지 4일간 배양을 행했다(전 배양). 전 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
Na2HPO4(무수) 6.0/l
KH2PO4 3.0g/l
NaCl 0.5g/l
NH4Cl 1.0g/l
1M MgSO4·7H2O 1ml
1M CaCl2 0.1ml
1% 티아민 1ml
글루코오스 2.0g/l
1ml 전 배양액을 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
Na2HPO4(무수) 6.0g/l
KH2PO4 3.0g/l
NaCl 0.5g/l
NH4Cl 1.0g/l
1M MgSO4·7H2O 1ml
1M CaCl2 0.1ml
1% 티아민 1ml
L-발린 2.0g/l
글루코오스 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액 전량을 225ml 용량 원심 튜브에 옮겨 원심 분리(5000rpm, 15분)하고, 상청을 제거하여 균체를 얻었다. 이 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 40ml 첨가하여 균체를 현탁, 다시 동일한 조건에서 원심하고, 상청을 제거하여 세정 균체를 얻었다. 세정 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 3ml 첨가하여 균체 현탁액을 제조하였다. 50mL 용량 코니칼 튜브에 균체 현탁액 3ml와 휴지 균체 반응 용액을 3ml 첨가하여 휴지 균체 반응을 행하였다. 반응은, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 행하였다. 휴지 균체 반응 용액의 조성은, 5.0g/l L-발린, 50mM 인산 버퍼 pH7.0이다.
휴지 균체 반응 개시 5시간 후와 24시간 후에 반응액 1.6ml을 채취하였다. 반응액은 원심 분리(15000rpm, 5분)하고, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 A에서 반응액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났다. 「표 18」에 휴지 균체 반응에서의 반응액 상청 중의 메타크릴산 농도를 나타낸다.
<표 18>
<실시예 15: 바실러스(Bacillus)속, 스트렙토마이세스(Streptomyces)속을 사용한 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조>
바실러스 메가테리움(Bacillus megaterium) NBRC15308, 바실러스 심플렉스(Bacillus simplex) ATCC49097, 스트렙토마이세스 그리세우스(Streptomyces griseus) NBRC13350을 뉴트리엔트 한천 배지(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 10ml 뉴트리엔트 배지에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 1일간 배양을 행했다(전 배양).
1ml 전 배양액을 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
Na2HPO4(무수) 6.0g/l
KH2PO4 3.0g/l
NaCl 0.5g/l
NH4Cl 1.0g/l
1M MgSO4·7H2O 1ml
1M CaCl2 0.1ml
1% 티아민 1ml
L-발린 2.0g/l
글루코오스 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액 전량을 225ml 용량 원심 튜브에 옮겨 원심 분리(5000rpm, 15분)하고, 상청을 제거하여 균체를 얻었다. 이 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 40ml 첨가하여 균체를 현탁, 다시 동일한 조건에서 원심하고, 상청을 제거하여 세정 균체를 얻었다. 세정 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 3ml 첨가하여 균체 현탁액을 제조하였다. 50mL 용량 코니칼 튜브에 균체 현탁액 3ml와 휴지 균체 반응 용액을 3ml 첨가하여 휴지 균체 반응을 행하였다. 반응은, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 행하였다. 휴지 균체 반응 용액의 조성은, 5.0g/l L-발린, 50mM 인산 버퍼 pH7.0이다.
스트렙토마이세스 그리세우스(Streptomyces griseus) NBRC13350은 휴지 균체 반응 개시 5시간 후, 바실러스 메가테리움(Bacillus megaterium) NBRC15308과 바실러스 심플렉스(Bacillus simplex) ATCC49097은 24시간 후에 반응액 1.6ml를 채취하였다. 반응액은 원심 분리(15000rpm, 5분)하여, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 A에서 반응액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났다. 「표 19」에 휴지 균체 반응에서의 반응액 상청 중의 메타크릴산 농도를 나타낸다.
<표 19>
<실시예 16: 코마모나스(Comamonas)속, 아시네토박터(Acinetobacter)속, 크산토박터(Xanthobacter)속을 사용한 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조>
코마모나스 테리게나(Comamonas terrigena) NBRC13299, 아시네토박터 주니이(Acinetobacter junii) ATCC17908, 크산토박터 아우토트로피커스(Xanthobacter autotrophicus) ATCC35674를 뉴트리엔트 한천 배지(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 10ml 뉴트리엔트 배지에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 1일간 배양을 행했다(전 배양).
1ml 전 배양액을 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
뉴트리엔트 배지 8g/l
L-발린 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액 전량을 225ml 용량 원심 튜브에 옮겨 원심 분리(5000rpm, 15분)하고, 상청을 제거하여 균체를 얻었다. 이 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 40ml 첨가하여 균체를 현탁, 다시 동일한 조건에서 원심하고, 상청을 제거하여 세정 균체를 얻었다. 세정 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 3ml 첨가하여 균체 현탁액을 제조하였다. 50mL 용량 코니칼 튜브에 균체 현탁액 3ml와 휴지 균체 반응 용액을 3ml 첨가하여 휴지 균체 반응을 행하였다. 반응은, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 행하였다. 휴지 균체 반응 용액의 조성은, 5.0g/l L-발린 또는 이소부티르산, 50mM 인산 버퍼 pH7.0이다.
휴지 균체 반응 개시 5시간 후와 24시간 후에 반응액 1.6ml를 채취하였다. 반응액은 원심 분리(15000rpm, 5분)하여, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트(Cellulose Acetate) 0.2㎛(아드반텍(ADVANTEC)사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 A에서 반응액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났다. 「표 20」에 휴지 균체 반응에서의 반응액 상청 중의 메타크릴산 농도를 나타낸다.
<표 20>
(ND: 검출되지 않음)
<실시예 17: 오크로박트럼(Ochrobactrum)속, 아크로모박터(Achromobacter)속, 아시네토박터(Acinetobacter)속을 사용한 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조>
오크로박트럼 종(Ochrobactrum sp.) NBRC12951, 오크로박트럼 인터메디움(Ochrobactrum intermedium) NBRC13694, 오크로박트럼 안트로피(Ochrobactrum anthropi) ATCC49237, 아크로박터 데니트리피칸스(Achromobacter denitrificans) NBRC12669, 아시네토박터 해몰리티커스(Acinetobacter haemolyticus) ATCC17906을 뉴트리엔트 한천 배지(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 3 내지 4일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
뉴트리엔트 배지 8g/l
L-발린 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액 전량을 225ml 용량 원심 튜브에 옮겨 원심 분리(5000rpm, 15분)하고, 상청을 제거하여 균체를 얻었다. 이 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 40ml 첨가하여 균체를 현탁, 다시 동일한 조건에서 원심하고, 상청을 제거하여 세정 균체를 얻었다. 세정 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 3ml 첨가하여 균체 현탁액을 제조하였다. 50mL 용량 코니칼 튜브에 균체 현탁액 3ml와 휴지 균체 반응 용액을 3ml 첨가하여 휴지 균체 반응을 행하였다. 반응은, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 행하였다. 휴지 균체 반응 용액의 조성은, 5.0g/l L-발린, 50mM 인산 버퍼 pH7.0이다.
오크로박트럼(Ochrobactrum)속은 휴지 균체 반응 개시 5시간 후와 24시간 후, 아크로모박터 데니트리피칸스(Achromobacter denitrificans) NBRC12669와 아시네토박터 해몰리티커스(Acinetobacter haemolyticus) ATCC17906은 휴지 균체 반응 개시 5시간 후에 반응액 1.6ml를 채취하였다. 반응액은 원심 분리(15000rpm, 5분)하여, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 A에서 반응액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났다. 「표 21」과 「표 22」에 휴지 균체 반응에서의 반응액 상청 중의 메타크릴산 농도를 나타낸다.
<표 21>
<표 22>
<실시예 18: 쉐와넬라(Shewanella)속을 사용한 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조>
쉐와넬라 포디나에(Shewanella fodinae) NBRC 105216을 뉴트리엔트 한천 배지(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 3일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
폴리펩톤(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 10g
효모 추출물(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 2g
MgSO4·7H2O 1g
해수(Sea water)(해산 미세 해초류용 다이고 인공 해수 SP, 일본제약 가부시끼가이샤 제조) 750ml
증류수 250ml
L-발린 2.0g/l
pH7.2-7.4
본 배양 후, 본 배양액 전량을 225ml 용량 원심 튜브에 옮겨 원심 분리(5000rpm, 15분)하고, 상청을 제거하여 균체를 얻었다. 이 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 40ml 첨가하여 균체를 현탁, 다시 동일한 조건에서 원심하고, 상청을 제거하여 세정 균체를 얻었다. 세정 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 3ml 첨가하여 균체 현탁액을 제조하였다. 50mL 용량 코니칼 튜브에 균체 현탁액 3ml와 휴지 균체 반응 용액을 3ml 첨가하여 휴지 균체 반응을 행하였다. 반응은, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 행하였다. 휴지 균체 반응 용액의 조성은, 5.0g/l L-발린, 50mM 인산 버퍼 pH7.0이다.
휴지 균체 반응 개시 24시간 후에 반응액 1.6ml를 채취하였다. 반응액은 원심 분리(15000rpm, 5분)하여, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 A에서 반응액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났고, 메타크릴산 농도는 0.1ppm이었다.
<실시예 19: 아그로박테리움(Agrobacterium)속을 사용한 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조>
아그로박테리움 루테움(Agrobacterium luteum) NBRC15768을 25℃에서 한천 배지에 생육시켰다(플레이트 배양). 플레이트 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
폴리펩톤(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 10g
효모 추출물(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 2g
MgSO4·7H2O 1g
해수(해산 미세 해초류용 다이고 인공 해수 SP, 일본제약 가부시끼가이샤 제조) 750ml
증류수 250ml
아거 15g
pH7.2-7.4
생육한 균을 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하고, 25℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 3일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
폴리펩톤(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 10g
효모 추출물(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 2g
MgSO4·7H2O 1g
해수(해산 미세 해초류용 다이고 인공 해수 SP, 일본제약 가부시끼가이샤 제조) 750ml
증류수 250ml
L-발린 2.0g/l
pH7.2-7.4
본 배양 후, 본 배양액 전량을 225ml 용량 원심 튜브에 옮겨 원심 분리(5000rpm, 15분)하고, 상청을 제거하여 균체를 얻었다. 이 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 40ml 첨가하여 균체를 현탁, 다시 동일한 조건에서 원심하고, 상청을 제거하여 세정 균체를 얻었다. 세정 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 3ml 첨가하여 균체 현탁액을 제조하였다. 50mL 용량 코니칼 튜브에 균체 현탁액 3ml와 휴지 균체 반응 용액을 3ml 첨가하여 휴지 균체 반응을 행하였다. 반응은, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 행하였다. 휴지 균체 반응 용액의 조성은, 5.0g/l L-발린, 50mM 인산 버퍼 pH7.0이다.
휴지 균체 반응 개시 5시간 후와 24시간 후에 반응액 1.6ml를 채취하였다. 반응액은 원심 분리(15000rpm, 5분)하여, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 A와 B에서 반응액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났고, 메타크릴산 농도는 5시간 후에 0.1ppm, 24시간 후에 0.1ppm이었다.
<실시예 20: 브레분디모나스(Brevundimonas)속, 리조비움(Rhizobium)속을 사용한 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조>
브레분디모나스 베시쿨라리스(Brevundimonas vesicularis) ATCC11426, 리조비움 레구미노사럼(Rhizobium leguminosarum) ATCC10004를 뉴트리엔트 한천 배지(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 10ml 액체 배지에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 4일간 배양을 행했다(전 배양). 전 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다. 전 배양액과 40% 글리세롤 수용액을 1:1로 혼합하여, -80℃에서 동결 보존하였다.
Na2HPO4(무수) 6.0g/l
KH2PO4 3.0g/l
NaCl 0.5g/l
NH4Cl 1.0g/l
1M MgSO4·7H2O 1ml
1M CaCl2 0.1ml
1% 티아민 1ml
글루코오스 2.0g/l
동결 보존한 전 배양액을 실온에서 융해하고, 0.5ml를 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하였다. 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
뉴트리엔트 배지 8g/l
L-발린 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액 전량을 225ml 용량 원심 튜브에 옮겨 원심 분리(5000rpm, 15분)하고, 상청을 제거하여 균체를 얻었다. 이 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 40ml 첨가하여 균체를 현탁, 다시 동일한 조건에서 원심하고, 상청을 제거하여 세정 균체를 얻었다. 세정 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 3ml 첨가하여 균체 현탁액을 제조하였다. 50mL 용량 코니칼 튜브에 균체 현탁액 3ml와 휴지 균체 반응 용액을 3ml 첨가하여 휴지 균체 반응을 행하였다. 반응은, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 행하였다. 휴지 균체 반응 용액의 조성은, 5.0g/l L-발린, 50mM 인산 버퍼 pH7.0이다.
브레분디모나스 베시쿨라리스(Brevundimonas vesicularis) ATCC11426은 휴지 균체 반응 개시 5시간 후, 리조비움 레구미노사럼(Rhizobium leguminosarum) ATCC10004는 24시간 후에 반응액 1.6ml을 채취하였다. 반응액은 원심 분리(15000rpm, 5분)하여, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 B에서 반응액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났고, 브레분디모나스 베시쿨라리스(Brevundimonas vesicularis) ATCC11426은 0.7ppm, 리조비움 레구미노사럼(Rhizobium leguminosarum) ATCC10004는 1.6ppm이었다.
<실시예 21: 브레분디모나스(Brevundimonas)속을 사용한 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조>
브레분디모나스 디미누타(Brevundimonas diminuta) ATCC11568을 뉴트리엔트 한천 배지(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 10ml 뉴트리엔트 배지에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 1일간 배양을 행했다(전 배양). 전 배양액과 40% 글리세롤 수용액을 1:1로 혼합하여, -80℃에서 동결 보존하였다.
동결 보존한 전 배양액을 실온에서 융해하고, 0.5ml를 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하였다. 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
뉴트리엔트 배지 8g/l
L-발린 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액 전량을 225ml 용량 원심 튜브에 옮겨 원심 분리(5000rpm, 15분)하고, 상청을 제거하여 균체를 얻었다. 이 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 40ml 첨가하여 균체를 현탁, 다시 동일한 조건에서 원심하고, 상청을 제거하여 세정 균체를 얻었다. 세정 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 3ml 첨가하여 균체 현탁액을 제조하였다. 50mL 용량 코니칼 튜브에 균체 현탁액 3ml와 휴지 균체 반응 용액을 3ml 첨가하여 휴지 균체 반응을 행하였다. 반응은, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 행하였다. 휴지 균체 반응 용액의 조성은, 5.0g/l L-발린, 50mM 인산 버퍼 pH7.0이다.
휴지 균체 반응 개시 5시간 후와 24시간 후에 반응액 1.6ml를 채취하였다. 반응액은 원심 분리(15000rpm, 5분)하여, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 B에서 반응액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났고, 메타크릴산 농도는 5시간 후에 33.0ppm, 24시간 후에 37.0ppm이었다.
<실시예 22: 호열균을 사용한 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조>
지오바실러스 스테아로써모필러스(Geobacillus stearothermophilus) NBRC 12983을 뉴트리엔트 한천 배지(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조, 한천 1.5%)에 생육시켰다. 10ml 액체 배지에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 37℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(전 배양). 전 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
뉴트리엔트 배지 8g/l
글루코오스 2.0g/l
생육한 균을 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하고, 25℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 5일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
뉴트리엔트 배지 8g/l
L-발린 2.0g/l
본 배양 후, 본 배양액 전량을 225ml 용량 원심 튜브에 옮겨 원심 분리(5000rpm, 15분)하고, 상청을 제거하여 균체를 얻었다. 이 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 40ml 첨가하여 균체를 현탁, 다시 동일한 조건에서 원심하고, 상청을 제거하여 세정 균체를 얻었다. 세정 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 3ml 첨가하여 균체 현탁액을 제조하였다. 50mL 용량 코니칼 튜브에 균체 현탁액 3ml와 휴지 균체 반응 용액을 3ml 첨가하여 휴지 균체 반응을 행하였다. 반응은, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 행하였다. 휴지 균체 반응 용액의 조성은, 5.0g/l L-발린, 50mM 인산 버퍼 pH7.0이다.
휴지 균체 반응 개시 5시간 후와 24시간 후에 반응액 1.6ml를 채취하였다. 반응액은 원심 분리(15000rpm, 5분)하여, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 A에서 반응액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났고, 메타크릴산 농도는 5시간 후에 0.4ppm, 24시간 후에 0.3ppm이었다.
<실시예 23: 효모를 사용한 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조>
사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae) NBRC1136, 사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae) NBRC2347, 사카로마이세스 파라독서스(Saccharomyces paradoxus) NBRC10609, 칸디다 파라프실로시스(Candida parapsilosis) ATCC22019를 한천 배지에 생육시켰다 (플레이트 배양). 플레이트 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다. 사카로마이세스(Saccharomyces)속은 30℃, 칸디다(Candida)속은 24℃에서 배양을 행하였다.
효모 추출물(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 20g/l
폴리펩톤(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 20g/l
글루코오스 20g/l
아거 15g/l
10ml 액체 배지에 생육한 균을 1 백금이 식균하고, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2 내지 7일간 배양을 행했다(전 배양). 사카로마이세스(Saccharomyces)속은 30℃, 칸디다(Candida)속은 24℃에서 배양을 행하고, 전 배양의 배지는 배지 1 또는 2를 사용하였다. 배지 조성을 이하에 나타내었다.
배지 1
효모 추출물(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 20g/l
폴리펩톤(벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니사 제조) 20g/l
글루코오스 20g/l
배지 2
글루코오스 2.0g/l
L-발린 2.0g/l
(NH4)2SO4 6.0g/l
KCl 2.4g/l
NaCl 0.12g/l
H3PO4 3.0g/l
MgSO4·7H2O 2.4g/l
FeSO4·7H2O 0.01g/l
ZnSO4·7H2O 0.12g/l
MnSO4·4-6H2O 0.024g/l
CuSO4·5H2O 0.006g/l
CaCl2 0.12g/l
비타민 믹스 30ml
비타민 믹스의 조성을 이하에 나타내었다.
비오틴 0.2g/l
판토텐산 칼슘 2g/l
엽산 0.002g/l
염산티아민 0.4g/l
리보플라빈 0.2g/l
니코틴산 0.4g/l
염산 피리독신 0.4/lg
이노시톨 1g/l
p-아미노벤조산 0.2g/l
1ml 전 배양액을 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하고, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2 내지 3일간 배양을 행했다(본 배양). 또한, 사카로마이세스(Saccharomyces)속은 30℃, 칸디다(Candida)속은 24℃에서 배양을 행하였다. 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
글루코오스 2.0g/l
L-발린 또는 이소부티르산 2.0g/l
(NH4)2SO4 6.0g/l
KCl 2.4g/l
NaCl 0.12g/l
H3PO4 3.0g/l
MgSO4·7H2O 2.4g/l
FeSO4·7H2O 0.01g/l
ZnSO4·7H2O 0.12g/l
MnSO4·4-6H2O 0.024g/l
CuSO4·5H2O 0.006g/l
CaCl2 0.12g/l
비타민 믹스 30ml
비타민 믹스의 조성을 이하에 나타내었다.
비오틴 0.2g/l
판토텐산 칼슘 2g/l
엽산 0.002g/l
염산 티아민 0.4g/l
리보플라빈 0.2g/l
니코틴산 0.4g/l
염산 피리독신 0.4/lg
이노시톨 1g/l
p-아미노벤조산 0.2g/l
본 배양 후, 본 배양액 전량을 225ml 용량 원심 튜브에 옮겨 원심 분리(5000rpm, 15분)하고, 상청을 제거하여 균체를 얻었다. 이 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 40ml 첨가하여 균체를 현탁, 다시 동일한 조건에서 원심하고, 상청을 제거하여 세정 균체를 얻었다. 세정 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 3ml 첨가하여 균체 현탁액을 제조하였다. 50mL 용량 코니칼 튜브에 균체 현탁액 3ml와 휴지 균체 반응 용액을 3ml 첨가하여 휴지 균체 반응을 행하였다. 반응은, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 행하였다. 휴지 균체 반응 용액의 조성은, 5.0g/l L-발린 또는 이소부티르산, 50mM 인산 버퍼 pH7.0이다. 「표 23」에 배양 및 휴지 균체 반응 조건을 나타낸다.
<표 23>
사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae) NBRC2347과 칸디다 파라프실로시스(Candida parapsilosis) ATCC22019는 휴지 균체 반응 개시 5시간 후, 사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae) NBRC1136과 사카로마이세스 파라독서스(Saccharomyces paradoxus) NBRC10609는 24시간 후에 반응액 1.6ml를 채취하였다. 반응액은 원심 분리(15000rpm, 5분)하여, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 A에서 반응액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났다. 「표 24」에 휴지 균체 반응에서의 반응액 상청 중의 메타크릴산 농도를 나타낸다.
<표 24>
<실시예 24: 곰팡이를 사용한 휴지 균체 반응에 의한 메타크릴산의 제조>
아스퍼질러스 니게르(Aspergillus niger) ATCC6275, 아스퍼질러스 팔라버스(Aspergillus flavus) NBRC8558, 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae) NBRC4255를 포테이토 덱스트로오스 한천 배지(닛스이제약사 제조)에 생육시켰다. 생육한 균사 또는 포자를 멸균수 5ml에 현탁하고, 그 1ml를 100ml 액체 배지(배지 100ml/500ml 용량 삼각 플라스크)에 식균하였다. 24℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(본 배양). 본 배양용의 배지 조성을 이하에 나타내었다.
L-발린 2.0g/l
NaNO3 2.5g/l
K2HPO4 1.25g/l
MgSO4·7H2O 0.63g/l
KCl 0.63g/l
FeSO4·7H2O 0.013g/l
밀기울 5g/l
pH7.0
본 배양 후, 본 배양액 전량을 225ml 용량 원심 튜브에 옮겨 원심 분리(5000rpm, 15분)하고, 상청을 제거하여 균체를 얻었다. 이 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 40ml 첨가하여 균체를 현탁, 다시 동일한 조건에서 원심하고, 상청을 제거하여 세정 균체를 얻었다. 세정 균체에 50mM 인산 버퍼 pH7.0을 10ml 첨가하여 균체 현탁액을 제조하였다. 균체 현탁액을 50mL 용량 코니칼 튜브에 옮겨 휴지 균체 반응 용액을 10ml 첨가하여 휴지 균체 반응을 행하였다. 반응은, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 24시간 행하였다. 휴지 균체 반응 용액의 조성은, 5.0g/l L-발린, 50mM 인산 버퍼 pH7.0이다.
휴지 균체 반응 개시 5시간 후와 24시간 후에 반응액 약 2ml를 채취하였다. 반응액은 원심 분리(15000rpm, 5분)하여, 상청 획분을 DISMIC-13CP 셀룰로오스 아세테이트 0.2㎛(아드반텍사 제조)로 필터 여과 처리하였다. 실시예 5에 기재한 분석 조건 A와 B에서 반응액 상청 중에 포함되는 화합물을 분석하였다. 그 결과, 메타크릴산과 동일한 용리 시간에 피크가 나타났다. 「표 25」에 휴지 균체 반응에서의 반응액 상청 중의 메타크릴산 농도를 나타낸다.
<표 25>
(ND: 검출되지 않음)
<실시예 25: 슈도모나스(Pseudomonas)속, 바실러스(Bacillus)속, 브레분디모나스(Brevundimonas)속, 오크로박트럼(Ochrobactrum)속, 아시네토박터(Acinetobacter)속을 사용한 동일성 비교>
제네틱스 코포레이션(GENETYX CORPORATION)의 유전 정보 처리 소프트웨어 제네틱스 버전(GENETYX ver.) 10의 호몰로지 해석 프로그램을 사용하여, 서열 번호 1 내지 8, 9 내지 15, 18 내지 20, 22 내지 26, 30 내지 31, 42 내지 44, 45 내지 46, 47 내지 49에 나타내는 각 미생물의 16S rDNA 또는 LSU rDNA의 염기 서열의 동일성을 각각 비교하였다. 「표 26 내지 33」에 결과를 나타낸다.
서열 번호 1 내지 8
<표 26>
서열 번호 9 내지 15
<표 27>
서열 번호 18 내지 20
<표 28>
서열 번호 22 내지 26
<표 29>
서열 번호 30 내지 31
<표 30>
서열 번호 42 내지 44
<표 31>
서열 번호 45 내지 46
<표 32>
서열 번호 47 내지 49
<표 33>
<참고예 1: 접합 전달용 레시피언트 PR4KS의 제작>
로도코커스 에리트로폴리스(Rhodococcus erythropolis) PR4(제품 평가 기술 기반 기구 생물 유전 자원 부문; 수탁 번호: NBRC 100887)를 일본 특허 공개 제2011-200133호 공보에 기재된 방법에 의해 개변하여, 120mg/L의 클로람페니콜에 내성을 나타내고, 또한 카나마이신 내성 유전자를 결실한 유도주를 제작하고, PR4KS주라고 명명하였다.
구체적으로는, 클로람페니콜 내성을 강화하기 위해서, MYK 배지(0.5% 폴리펩톤(polypeptone), 0.3% 백트 효모 추출물(bact yeast extract), 0.3% 말트 추출물(malt extract), 0.2% KH2PO4, 0.2% K2HPO4) 중의 클로람페니콜의 농도를 10mg/mL에서 시작하여 120mg/mL까지 단계적으로 서서히 높이면서, PR4주를 계대 배양함으로써 자연 변이를 유발하여, 120mg/mL의 클로람페니콜에 내성을 갖는 유도주 RhCmSR-09주를 얻었다.
계속해서, 상기 RhCmSR-09주를, 일본 특허 공개 제2011-200133호 공보에 기재된 카나마이신 내성 유전자 결실 변이 도입용 플라스미드 pKM043을 보유하는 대장균주와 1:1의 비율로 혼합해서 배양하고, 접합 전달에 의해 RhCmSR-09주 내에 pKM043을 도입한 후, 카나마이신 황산염 200mg/L 및 클로람페니콜 50mg/L 함유 MYK 한천 배지(0.5% 폴리펩톤, 0.3% 백트 효모 추출물, 0.3% 말트 추출물, 0.2% KH2PO4, 0.2% K2HPO4, 1.5% 한천)에서 배양함으로써, pKM043이 RhCmSR-09주 게놈 내에 삽입된 상동 재조합주를 얻었다. 상기 상동 재조합주를, 10% 수크로오스 함유 MYK 한천 배지에서 배양하고, 얻어진 콜로니 중으로부터 카나마이신 감수성주가 된 유도주, 즉 카나마이신 내성 유전자 결실 변이 유도주 PR4KS주를 얻었다.
<참고예 2: LigD 호몰로그 유전자의 클로닝과 유전자 결실용 플라스미드의 제작>
PR4KS주의 LigD 호몰로그 유전자(등록 번호(accession no): YP_002767969)를 표적 유전자로 하였다. LigD 유전자 주변 서열을 포함하는 약 5.4kb의 DNA를 PCR에 의해 증폭한 후, 일본 특허 공개 제2011-200133호 공보에 기재된, sacB 유전자가 카나마이신 내성 유전자의 하류이면서 또한 동일 방향으로 도입된 플라스미드 벡터 pK19mobsacB1에 클로닝하여, 플라스미드 pTJ001을 얻었다. PCR 조건은 이하와 같다.
프라이머
GB-138: 5'-GGCCTGCAGGTACCGATCATCACCATCGGTGTC-3' (서열 번호 94)
GB-139: 5'-GGTCTAGACTGAGCAGTGTTCCAATGCG-3' (서열 번호 95)
반응액 조성:
멸균수 22μl
2×프라임스타(PrimeSTAR)(다카라 바이오사 제조) 25μl
GB-138 1μl
GB-139 1μl
PR4KS 게놈(50ng/μl) 1μl
총량 50μl
온도 사이클
98℃ 10초, 55℃ 10초 및 72℃ 120초의 반응을 35 사이클
pTJ001 내부의 LigD 호몰로그 유전자 전체 길이(약 2.3kb)를 결실시켜 LigD 호몰로그 유전자의 상류 및 하류 서열만을 잔존시킨, LigD 호몰로그 유전자 결실용 플라스미드 pTJ002를 제작했다(도 4 참조). pTJ002는, 표적인 LigD 호몰로그 유전자의 개시 코돈 부근의 서열과 시종 코돈 부근의 서열의 양쪽을 포함하고, 각각 개시 코돈으로부터 상류 방향 또는 시종 코돈으로부터 하류 방향으로 신장하도록 설계된 프라이머 GB-140과 GB-141에 의해 pTJ001 내부의 서열을 증폭함으로써 얻어진 LigD 호몰로그 유전자를 포함하지 않는 PCR 산물에 의해 대장균 JM109주를 형질 전환하여, 환상 DNA로 함으로써 취득하였다. PCR의 조건은 이하와 같다.
프라이머
GB-140: GAGGAAATGGTCACAGGGCGAGAATAGGTTG (서열 번호 96)
GB-141: GCCCTGTGACCATTTCCTCATTGTGCTGG (서열 번호 97)
반응액 조성
멸균수 22μl
2×프라임스타(다카라 바이오사 제조) 25μl
GB-140 1μl
GB-141 1μl
pTJ001 1μl
총량 50μl
온도 사이클
98℃ 10초, 50℃ 10℃ 및 72℃ 180초의 반응을 30 사이클
PCR 종료 후, 샘플 1μl를 사용하여, 0.7% 아가로오스 겔 전기 영동에 의해 단편의 확인을 행한 결과, 단편의 증폭이 나타났다. 상기 플라스미드 pTJ002 제조 수순에 있어서, PR4주로부터의 게놈 추출에는 위자드 게노믹(Wizard Genomic) DNA 정제 키트(Purification Kit)(프로메가(Promega)사 제조)를, 제한 효소에 의해 절단한 DNA 단편 및 PCR 산물의 정제에는 Gel/PCR 정제 키트(파보르겐(FAVORGEN)사 제조)를, DNA끼리의 접속에는 DNA 라이게이션 키트(Ligation Kit) <마이티 믹스(Mighty Mix)>(다카라 바이오사 제조)를, 플라스미드의 추출에는 퀴아프렙 미니프렙 키트(QIAprep miniprep kit)(퀴아젠(QIAGEN)사 제조)를 사용하였다.
<참고예 3: PR4KS의 LigD 호몰로그 유전자 결실 유도주의 제작>
대장균(Escherichia coli) S17-1λpir를 pTJ002에 의해 형질 전환한 것을 도너로 하고, 참고예 1의 방법에 의해 얻어진 PR4KS를 레시피언트로 해서, 일본 특허 공개 제2011-200133호 공보에 기재된 방법과 마찬가지로 접합 전달을 행하여, 상동 재조합에 의해 발생한 13주의 LigD 호몰로그 유전자 결실 유도주를 얻었다. 상기 결실 유도주로부터 1주를 선택하여, PR4KSΔligD 유도주라고 명명하였다.
<실시예 26: 로도코커스속 세균용 플라스미드 pLK005 및 그것을 사용한 니트릴 히드라타제 발현용 플라스미드 pSJ201의 제작>
(1) pLK005의 취득과 해석
pK4(일본 특허 공개 평5-64589호 공보 참조)를 사용하여, 상기 일렉트로포레이션법에 의해 로도코커스 종 N775(독립 행정법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터 기탁 번호 FERM BP-961)를 형질 전환하였다. 얻어진 형질전환체를 10ml의 MYK 배지에 식균하여, 30℃에서 1일 배양하였다. 이것을 클린 벤치 내에서 자외선을 조사함으로써 변이 처리를 행하였다. 변이 처리를 행한 배양액을 50 내지 400μg/ml의 카나마이신을 포함하는 MYK 한천 배지에 도포하고, 30℃에서 3일간 배양하였다.
한천 배지 위에 나타난 복수의 콜로니를 각각 MYK 배지에서 배양하여, 형질전환체로부터 플라스미드를 회수하였다. 회수한 플라스미드를 사용하여 로도코커스 sp. N775를 다시 형질 전환하여, 형질전환체의 카나마이신 내성도가 향상되었는지 여부를 조사하였다. 그 결과, 명백하게 카나마이신 내성도가 향상된 형질전환체가 몇 주 인정되었다.
카나마이신 내성도가 향상되는 것이 인정된 플라스미드의 염기 서열을 조사한 결과, pK4의 카나마이신 내성 유전자의 상류 영역 서열에 변화가 일어난 것(8염기 서열 GTTGTAGG의 중복)이 인정되었다. 이 카나마이신 내성도가 향상되는 것이 인정된 플라스미드를 pLK005라고 명명하였다.
(2) pSJ040의 제작
플라스미드 pSJ034는, 일본 특허 공개 평10-337185호 공보 기재된 방법에 의해 플라스미드 pSJ023으로부터 제작한 것이다. pSJ034에는 3군데의 EcoRI 제한 효소 부위가 존재하는데, 이 중의 1군데를 SpeI 부위로 변환한 플라스미드 pSJ040을 제작하였다. 제작 방법은, pSJ034를 제한 효소 EcoRI에 의해 부분 분해하고, 다카라 블런팅(Blunting) 키트를 사용하여 절단 부위의 평활화를 행하였다. SpeI 링커의 존재 하에서 라이게이션 반응을 행하고, 반응액을 사용하여 대장균 JM109주를 형질 전환하였다. 형질전환체를 배양한 후, 플라스미드를 추출하고, SpeI 링커가 삽입된 플라스미드를 선별하였다. pSJ034의 3개의 EcoRI 부위 중, 카나마이신 내성 유전자의 하류에 존재하는 EcoRI 부위에 SpeI 링커가 삽입된 것을 pSJ040이라고 명명하였다.
(3) pSJ201의 구축
pLK005를 HindIII으로 절단하여, 약 2.1kb의 단편을 제조하였다. 한편, pSJ040을 HindIII으로 절단하여, 약 9.8kb의 단편을 제조하였다. 이 2 단편을 사용하여 라이게이션 반응을 행하고, 반응액을 사용하여 대장균 JM109주를 형질 전환하였다. 형질전환체를 배양한 후, 플라스미드를 추출하고, 그 염기 서열을 확인한 결과, pLK005 유래의 변이 서열(GTTGTAGG의 중복)을 갖고, 그 이외는 pSJ040과 마찬가지의 서열을 갖는 플라스미드를 pSJ201이라고 명명하였다.
<실시예 27: PR4KSΔligD 유도주의 RE_acd1/RE_echA/RE_hchA/RE_mmsB 유전자 결실 유도주의 제작>
(1) 인 퓨전법을 사용한 유전자 결실용 플라스미드의 제작
PR4KS주의 RE_acd1/RE_echA/RE_hchA/RE_mmsB 유전자를 표적 유전자로 한 인 퓨전 HD 클로닝 키트(Cloning kit)(다카라 바이오사 제조)에 의한 유전자 결실용 플라스미드의 제작을 행했다(도 5 참조).
표적 유전자의 상류 및 하류 서열의 DNA를 PCR에 의해 증폭하였다. PCR 조건은 이하와 같다.
단편 1용 프라이머
MMA-061: CGACTCTAGAGGATCGCTCAGTACATCTACGAGAC (서열 번호 98)
MMA-062: AGTGTGAGGAAAGTGTTCCGATCAGTTCAT (서열 번호 99)
단편 2용 프라이머
MMA-063: CACTTTCCTCACACTCGTCGAGAGTATGAG (서열 번호 100)
MMA-064: CGGTACCCGGGGATCAGCGCGACGAACAACGAGAC (서열 번호 101)
반응액 조성
주형(PR4 야생형(wild type) 게놈 DNA) 1μl
2×프라임스타 맥스 프리믹스(PrimeSTAR Max Premix)(다카라사 제조) 25μl
Fw 프라이머(20μM) 1μl
Rv 프라이머(20μM) 1μl
D.W. 22μl
총량 50μl
온도 사이클
98℃ 10초, 60℃ 10초 및 72℃ 120초의 반응을 30 사이클
PCR 종료 후, 샘플 1μl를 사용하여, 0.7% 아가로오스 겔 전기 영동에 의해 단편의 확인을 행한 결과, 단편의 증폭이 나타났다. PCR 산물(단편 1 및 단편 2)을 Gel/PCR 정제 키트(파보르겐사 제조)를 사용하여, 버퍼 치환을 행하고, 이하에 나타내는 인 퓨전 HD 클로닝 키트에 의한 반응에 사용하였다.
(2) 인 퓨전 HD 클로닝 키트에 의한 벡터와 목적 단편의 연결 및 형질 전환
인 퓨전 HD 클로닝 키트를 사용하여, 상기 단편과 벡터의 연결을 행하였다. 반응 조건은 이하와 같다.
반응액 조성
5x 인 퓨전 HD 효소 프리믹스(Enzyme Premix) 2μl
벡터 단편 1.5μl
DNA 단편 11μl
DNA 단편 22μl
D.W. 3.5μl
총량 10μl
상기 반응액을 50℃에서 15분간 인큐베이션한 후, 빙상에서 냉각하고, 대장균 JM109주의 형질 전환에 사용하였다. 대장균 형질전환체의 선택은 카나마이신 황산염 50mg/L를 포함하는 LB 한천 배지(이하, LB Km50 한천 배지)에서 행하였다. 얻어진 형질전환체로부터 미니 프렙 키트(Mini prep Kit)(퀴아젠사)를 사용하여 플라스미드를 제조하여, 원하는 플라스미드를 얻었다. 플라스미드의 확인은 XbaI 제한 효소 처리 후의 단편 사이즈 및 삽입 단편과 벡터의 접속 영역의 서열을 조사함으로써 행하였다. 원하는 플라스미드를 pMMA302라고 명명하였다.
(3) PR4KSΔligD 유도주의 상동 재조합 유도주 및 유전자 결실 유도주의 제작
PR4KSΔligD주 콤페턴트 셀 20μl에 pMMA302를 1μl 첨가하고, 빙상에서 10분간 인큐베이션하였다. 인큐베이션한 상기 용액을 빙냉한 일렉트로포레이션 큐벳트(0.1cm)에 전량 옮겨, 1.5kV(200Ω)의 고전압을 걸고, 즉시 600μl의 LB 액체 배지를 가하여, 30℃에서 6시간 정치하였다. 200μl를 LB Km10 한천 배지에 뿌려 30℃에서 4일간 배양하였다. 생육한 콜로니를 LB Km10 한천 배지에 스트리크하고, 4일간 배양한 후, 이하에 나타낸 조건에 의해 콜로니 PCR을 행하여 상동 재조합 유도주의 확인을 행하였다.
프라이머
MMA-069: GCGCATCTACAAGGAAGAGATC (서열 번호 102)
MMA-070: GCGACGCTCATCGAGATCTC (서열 번호 103)
반응액 조성
주형 4.0μl
2×마이티 앰프 버퍼(MightyAmp Buffer)(다카라사 제조) 5.0μl
Fw 프라이머(20μM) 0.25μl
Rv 프라이머(20μM) 0.25μl
D.W. 0.3μl
마이티 앰프 DNA 폴리머라제(MightyAmp DNA Polymerase)(다카라사 제조) 0.2μl
총량 10.0μl
온도 사이클
98℃도 10초, 68℃ 180초의 반응을 30 사이클
상동 재조합 유도주인 것이 인정된 콜로니를 LB 배지 200μl에 현탁하고, 100μl를 LB+10% 수크로오스(Sucrose) 한천 배지에 뿌려 3일간 배양하였다. 생육한 콜로니에서 카나마이신 감수성으로 되어 있는 것을 선택하고, 이들에 대하여 콜로니 PCR에 의해 원하는 유전자 결실을 확인하였다. 그 결과, PR4KSΔligD 유도주로부터 RE_acd1, RE_echA, RE_hchA, RE_mmsB의 4 유전자를 결실한 것이 얻어져, DMA008주라고 명명하였다.
<실시예 28: 로도코커스속 세균에서의 ACD 또는 AAT 발현용 플라스미드의 제작>
로도코커스속에 속하는 미생물에 있어서 ACD 또는 AAT를 발현시키기 위한 플라스미드를 제작하였다.
ACD 또는 AAT 각각의 발현용 플라스미드를 제작하기 위해서, PCR에 의해 각각의 유전자 DNA를 증폭하였다. PCR 조건은 이하와 같다.
RE_acd1용 프라이머
MMA-114 GGTCTAGAATGTTTACTCTGACCGATGACGAGCG (서열 번호 126)
MMA-022 GGCCTGCAGGCCGTCACGCTTTTCGATCAATAC (서열 번호 115)
MpAAT1용 프라이머
MMA-109 GGTCTAGAATGAAATCATTCTCAGTACTTCAG (서열 번호 127)
MMA-045 CGGTACGCGCGGATCTTCCAGAG (서열 번호 83)
RE_acd1용 주형
로도코커스 에리트로폴리스(Rhodococcus erythropolis) PR4 야생주 게놈 DNA
MpAAT1용 주형
플라스미드 pAAT001(실시예 45 참조)
반응액 조성
주형 1μl
2×프라임스타 맥스 프리믹스(다카라사 제조) 25μl
Fw 프라이머(20μM) 1μl
Rv 프라이머(20μM) 1μl
D.W. 22μl
총량 50μl
온도 사이클:
98℃ 10초, 60℃ 10초, 72℃ 60초의 반응을 30 사이클
PCR 종료 후, PCR 산물을 Gel/PCR 정제 키트(파보르겐사 제조)를 사용해서, 버퍼 치환을 행하고, 얻어진 단편을 제한 효소 XbaI 및 Sse8387I로 처리하였다. 또한, 실시예 26에서 제작한 pSJ201도 XbaI 및 Sse8387I로 처리하고, 에탄올 침전을 행한 후, 다시 멸균수로 용해하여, 쉬림프 알칼라인 포스페타제(Shrimp Alkaline Phosphetase)(SAP) 처리를 행하였다. 상기 PCR 단편 및 pSJ201 유래 대 단편을, 0.7% 아가로오스 겔 전기 영동 후에 Gel/PCR 정제 키트(파보르겐사 제조)를 사용하여 정제하였다. 제한 효소 처리 반응 조건, SAP 처리 조건 및 라이게이션 반응 조건은 이하와 같다.
제한 효소 처리 반응 조성
PCR 증폭 단편 20μl
10×M 5μl
0.1% BSA 5μl
XbaI(다카라사 제조) 2μl
Sse8387I(다카라사 제조) 2μl
D.W. 16μl
총량 50μl
SAP 처리 반응 조성
벡터 단편(pSJ201) 44μl
10×SAP 버퍼 5μl
SAP(프로메가사 제조) 1μl
총량 50μl
라이게이션 반응 조성
벡터 단편 4μl
목적 단편 1μl
라이게이션 믹스(Ligation Mix)(다카라사 제조) 3μl
총량 8μl
상기 조성에서 혼합한 라이게이션 반응액을 사용하여 대장균 JM109주의 형질 전환을 행하였다. 얻어진 형질전환체로부터 플라스미드를 추출하고, 제한 효소 XbaI 및 Sse8387I 처리 후에 아가로오스 전기 영동을 행하여, 목적 사이즈의 단편이 삽입되어 있는 것을 확인하였다. 또한, 삽입 단편과 벡터의 접속 영역의 염기 서열 해석에 의해 원하는 플라스미드인 것을 확인하였다. RE_acd1 유전자 및 MpAAT1 유전자가 도입된 플라스미드를, 각각 pMMA401 및 pAAT301이라고 명명하였다.
<실시예 29: 로도코커스속 형질 전환용 ACD 및 AAT 양쪽 발현 플라스미드의 제작>
이하에 실시예 27에서 얻어진 로도코커스(Rhodococcus)속 미생물로 메타크릴산에스테르를 제조하기 위한 플라스미드 제작을 행하였다.
RE_acd1 유전자 발현용 플라스미드 pMMA401의 RE_acd1 유전자의 하류에, MpAAT1 유전자 발현용 플라스미드 pAAT301을 주형으로 하여 PCR 반응에 의해 얻어진 「니트릴라제 프로모터+MpAAT1 유전자」 단편을 삽입하였다.
「니트릴라제 프로모터+MpAAT1 유전자」 단편의 증폭은 하기와 같이 행하였다.
프라이머
MMA-133(Sse-ProFw): TGACCTGCAGGTGCACTCCGCTGCGACATGTATCGA (서열 번호 104)
MMA-131(Sse-001Rv): ACTCTAGCCTGCAGGTCATTGACTAGTTGATCTAAGGTTGTTACA (서열 번호 105)
PCR 반응 조성
주형(pAAT301) 1μl
2×프라임스타 맥스 프리믹스(다카라사 제조) 10μl
Fw 프라이머(10μM) 0.6μl
Rv 프라이머(10μM) 0.6μl
D.W. 7.8μl
총량 20μl
온도 사이클
98℃ 5초, 60℃ 5초, 72℃ 45초의 반응을 30 사이클
이렇게 하여 얻어진 「니트릴라제 프로모터+MpAAT1 유전자」 단편을 제한 효소 Sse8387I로 처리하였다. 한편, pMMA401도 Sse8387I로 처리한 후, SAP 처리를 행하였다. 이 DNA 단편을 0.7% 아가로오스 겔 전기 영동을 행한 후, Gel/PCR 정제 키트(파보르겐사 제조)를 사용하여 정제하였다. 제한 효소 처리 반응 조건 및 라이게이션 반응 조건은 이하와 같다.
제한 효소 처리 반응 조성(AAT 단편)
PCR 증폭 단편 40μl
10×M 버퍼 5μl
0.1% BSA 4μl
Sse8387I(다카라사 제조) 1μl
총량 50μl
제한 효소 처리 반응 조성(벡터 단편)
pMMA401(벡터) 3μl
10×M 버퍼 4μl
0.1% BSA 4μl
AP 1μl
Sse8387I(프로메가사 제조) 1μl
D.W. 27μl
총량 40μl
라이게이션 반응 조성
pMMA401 1μl
삽입 단편 2μl
라이게이션 믹스(다카라사 제조) 3μl
총량 6μl
상기 조성으로 혼합한 라이게이션 반응액을 사용하여 대장균 JM109주의 형질 전환을 행하였다. 얻어진 형질전환체로부터 플라스미드를 추출하였다. 제한 효소 Sse8387I 처리 후에 아가로오스 전기 영동을 행하고, 목적 사이즈의 단편이 삽입되어 있는 것을 확인하였다. 얻어진 플라스미드의 삽입 단편의 접속 영역의 염기 서열 해석에 의해 원하는 플라스미드인 것을 확인하고, 본 플라스미드를 pACDAAT1이라고 명명하였다. 상기 방법과 마찬가지의 방법을 사용해서 서열이 상이한 ACD 및 AAT 양쪽 발현용 플라스미드를 총 6종(pACDAAT2, pACDAAT3, pACDAAT4, pACDAAT6 및 pACDAAT8) 제작했다(도 6 참조).
<실시예 30: 로도코커스(Rhodococcus)속을 사용한 메타크릴산의 제조>
실시예 27의 (3)에서 얻어진 DMA008주를, 플라스미드 pMMA401에 의해 형질 전환하였다. 얻어진 재조합체(DMA008/pMMA401)를 사용하여 휴지 균체 반응에 의해 메타크릴산의 제조를 행하였다. 이하에 나타내는 M9/Frc/Km10 액체 배지(와서만 시험관) 2mL에 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(180rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(전 배양).
M9/Frc/Km10 액체 배지
6.0g/L Na2HPO4
3.0g/L KH2PO4
0.5g/L NaCl
1.0g/L NH4Cl
1mM MgSO4·7H2O
1mM CaCl2
0.01g/L 티아민
2.0g/L 프룩토오스
10μg/L 카나마이신
전 배양액을 100mLM9/Frc/Km10 액체 배지(배지 100mL/500mL 용량 삼각 플라스크)에 1mL 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 3일간 배양을 행했다(본 배양).
본 배양 후, 본 배양액 40mL를 50mL 용량 코니칼 튜브에 옮겨 원심 분리(12000rpm, 10분)하여 균체를 얻었다. 이 균체를 사용해서 이하의 반응을 행하였다. 50mL 용량의 코니칼 튜브에, 1ml의 반응액을 첨가하고, 30℃, 로터리 셰이커(180rpm), 호기 조건에서, 24시간 행하였다.
반응액 조성
OD630=10균체 (최종 농도)
5.0g/l 2-옥소이소발레르산(최종 농도)
50mM 인산 버퍼/pH7.0(최종 농도)
반응 후, 반응액 상청을 적당량 채취하여 이하의 HPLC 조건에서 분석을 한 결과, 12ppm의 메타크릴산을 검출하였다.
HPLC분석 조건
장치: 와터스 2695
칼럼: ICsep USP L-17, φ 4.0mm×250mm
이동상: 0.01N H2SO4
유량: 0.35ml/min
런타임: 20min
칼럼 온도: 40℃
샘플 온도: 20℃
검출: UV 210nm
<실시예 31: 로도코커스(Rhodococcus)속을 사용한 메타크릴산 부틸의 제조>
실시예 27의 (3)에서 얻어진 DMA008주에 플라스미드 pACDAAT1, pACDAAT2, pACDAAT3, pACDAAT4, pACDAAT6 및 pACDAAT8을 각각 형질 전환하였다. 얻어진 재조합체(DMA008/pACDAAT1, DMA008/pACDAAT2, DMA008/pACDAAT3, DMA008/pACDAAT4, DMA008/pACDAAT6 및 DMA008/pACDAAT8)를 사용하여 휴지 균체 반응에 의해 메타크릴산에스테르의 제조를 행하였다. 2mlLB Km10 액체 배지(와서만 시험관)에 1 백금이 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(180rpm), 호기 조건에서, 2일간 배양을 행했다(전 배양). 전 배양액을 100mLLB Km10(배지 100mL/500mL 용량 삼각 플라스크)에 1ml 식균하고, 30℃, 로터리 셰이커(230rpm), 호기 조건에서, 3일간 배양을 행했다(본 배양). 또한, 컨트롤에는, 플라스미드 DMA008/pLK005를 사용하였다.
본 배양 후, 배양액 40mL를 50mL 용량 코니칼 튜브에 옮겨 원심 분리(12000rpm, 10분)하여, 균체를 얻었다. 이 균체를 사용해서 이하의 반응을 행하였다. 10ml 용량의 유리 샘플 병에 1ml의 반응액을 첨가하고, 30℃, 로터리 셰이커(180rpm), 호기 조건에서, 18시간 행하였다.
반응액 조성
OD630=10균체(최종 농도)
5.0g/l 2-옥소이소발레르산(최종 농도)
40mM 알코올(최종 농도)
50mM 인산 버퍼/pH7.5(최종 농도)
알코올로서, n-부탄올을 사용하였다.
반응 후, 반응액에 1mL의 아세토니트릴을 첨가하여 잘 혼화한 후, 시린지 필터 DISMIC/구멍 직경 0.45㎛(아드반텍사 제조)을 사용하여 여과한 후, 실시예 49에 기재된 HPLC 분석으로 분석하였다. 표 34에 18시간 후의 생성물의 분석 결과를 나타냈다.
ACD 및 AAT 양쪽 발현 로도코커스(Rhodococcus) 재조합체에 의한 메타크릴산부틸의 생성
<표 34>
<실시예 32: 로도코커스(Rhodococcus)속을 사용한 메타크릴산에스테르의 제조>
실시예 27의 (3)에서 얻어진 DMA008주를, 플라스미드 pACDAAT1에 의해 각각 형질 전환하였다. 얻어진 재조합체(DMA008/pACDAAT1)를 사용하여 휴지 균체 반응에 의해 메타크릴산에스테르의 제조를 행하였다. 또한, 컨트롤로서, DMA008/pLK005를 사용하였다. 실시예 31에 기재된 방법을 사용하여, 재조합체의 배양을 행하여 균체를 얻었다.
반응액 조성
OD630=10균체(최종 농도)
5.0g/l 2-옥소이소발레르산(최종 농도)
40mM 알코올(최종 농도)
50mM 인산 버퍼/pH7.5(최종 농도)
알코올로서, n-부탄올, 이소부탄올, 2-에틸헥실알코올을 사용하였다.
반응 후, 반응액에 1mL의 아세토니트릴을 첨가하여 잘 혼화한 후, 시린지 필터 DISMIC/구멍 직경 0.45㎛(아드반텍사 제조)를 사용하여 여과한 후, 실시예 9B에 기재된 HPLC 분석으로 분석하였다. 표 35에 18시간 후의 생성물의 분석 결과를 나타냈다.
ACD 및 AAT 양쪽 발현 로도코커스(Rhodococcus) 재조합체에 의한 메타크릴산에스테르의 생성
<표 35>
<실시예 33: 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) PAO1로부터의 ACD 호몰로그(ACD) 유전자의 클로닝과 고발현 재조합체의 제작>
메타크릴산 생산 능력을 갖는 슈도모나스(Pseudomonas)속 미생물의 메타크릴산 합성에 관여하는 유전자의 단리를 행하였다.
<게놈 DNA의 제조>
LB 한천 배지(1% 백트 트립톤, 0.5% 백트 효모 추출물, 0.5% NaCl, 1.5% 한천) 위에서 생육시킨 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) PAO1주(NBRC106052)를 10mL의 LB 액체 배지에 식균하고, 37℃에서 15시간 진탕 배양을 행하였다. 배양 종료 후, 2mL의 배양액으로부터 균체를 원심에 의해 회수하고, 위자드 게노믹 DNA 정제 키트(프로메가 가부시끼가이샤)를 사용하여 게놈 DNA 50μL를 취득하였다.
<발현 벡터에 대한 클로닝>
얻어진 게놈 DNA를 주형으로 해서, ACD를 코딩하는 것으로 추정된 유전자를 포함하는 DNA 단편을, 발현 벡터에 용이하게 도입 가능한 제한 효소 인식 부위가 부가된 형태가 되도록 올리고뉴클레오티드를 설계하여, PCR법에 의해 제조하였다.
<표 36>
올리고뉴클레오티드 프라이머
MMA-003: 5'-GACCCATGGATTTCGACCTCACCGAAGAAC-3' (서열 번호 106)
MMA-004: 5'-GCCCTGCAGGATGCGATGGTTCGCGGCGTTC-3' (서열 번호 107)
MMA-020: 5'-GGACATGTTTCGTGATCCGGAAACCCTGAAC-3' (서열 번호 108)
MMA-006: 5'-GGCCTGCAGGCGAAGGATCGACGCTAGCCCTG-3' (서열 번호 109)
MMA-018: 5'-GGACATGTTTCCCTGCGAAGAAGAGATCCAG-3' (서열 번호 110)
MMA-008: 5'-GGCCTGCAGGCGCCGTTGCGGAAACGACGG-3' (서열 번호 111)
MMA-019: 5'-GGCCATGGTACCGAGAACCCTGTTCAGCTC-3' (서열 번호 112)
MMA-010: 5'-GGCCTGCAGGCTGGACGAGGAGGTGCTCGC-3' (서열 번호 113)
반응액 조성
멸균수 22μL
2×프라임스타(다카라 바이오사 제조) 25μL
전방향 프라이머 1μL
역방향 프라이머 1μL
게놈 DNA 1μL
총량 50μL
온도 사이클
98℃ 10초, 55℃ 15초 및 72℃ 150초의 반응을 30 사이클
얻어진 증폭 산물의 밴드를 퀴아퀵 겔 익스트랙션 키트(QIAquick Gel Extraction Kit)(퀴아젠)로 정제하였다. PA_acd1에 대해서는, 정제한 DNA를 제한 효소 NcoI(전방향 프라이머 중에 절단 인식 부위가 포함됨) 및 Sse8387I(역방향 프라이머 중에 절단 인식 부위가 포함됨)로 절단하였다. PA_acd2 내지 PA_acd4에 대해서는, 제한 효소 BspHI(전방향 프라이머 중에 절단 인식 부위가 포함됨) 및 Sse8387I(역방향 프라이머 중에 절단 인식 부위가 포함됨)으로 절단하였다. 아가로오스 겔 전기 영동에 의해 분리를 행하고, 겔로부터 원하는 밴드를 잘라내어 정제를 행하였다. 정제에는 Gel/PCR 정제 키트(파보르겐사 제조)를 사용하고, 30μL의 멸균수에 용출하였다.
정제한 DNA(5μL), NcoI 및 Sse8387I로 미리 소화해 둔 벡터 pTrc99A(1μL), 증류수(4μL) 및 솔루션(solution) I(DNA 라이게이션 키트 버전 2(다카라 바이오(주)))(10μL)를 혼합하여 12시간, 16℃에서 인큐베이션함으로써 PCR 증폭 산물과 벡터를 라이게이션하였다.
대장균 JM109주를 LB 배지 1mL에 접종하여 37℃, 5시간 호기적으로 전 배양하고, 이 배양물 0.4mL를 SOB 배지 40mL(2% 백트 트립톤, 0.5% 백트 효모 추출물, 10mM NaCl, 2.5mM KCl, 1mM MgSO4, 1mM MgCl2)에 가하여, 18℃에서 20시간 배양하였다. 이 배양물을 원심 분리에 의해 집균한 후, 냉각한 TF 용액(20mM PIPES-KOH(pH6.0), 200mM KCl, 10mM CaCl2, 40mM MnCl2)을 13mL 첨가하고, 0℃에서 10분간 방치하였다. 그 후, 다시 원심하여 상층액을 제거한 후, 침전된 대장균을 냉각한 TF 용액 3.2mL에 현탁하고, 0.22mL의 디메틸술폭시드를 첨가해서 0℃에서 10분간 방치하였다.
이렇게 하여 제작한 콤페턴트 셀 200μL에 상기의 라이게이션 용액을 10μL 첨가하고, 0℃에서 30분 방치한 후, 42℃에서 30초간 히트 쇼크를 부여하고, 0℃에서 2분간 냉각한 후, SOC 배지(20mM 글루코스, 2% 백트 트립톤, 0.5% 백트 효모 추출물, 10mM NaCl, 2.5mM KCl, 1mM MgSO4, 1mM MgCl2) 1mL를 첨가하여 37℃에서 1시간 진탕 배양하였다.
배양 후, 100μL씩 LBAmp 한천 배지(암피실린 100mg/L, 1.5% 한천을 함유하는 LB 배지)에 도포하고, 또한 37℃에서 배양하였다. 한천 배지 위에 생육한 형질전환체 콜로니 복수 개를 1.5mL의 LBAmp 배지(암피실린 100mg/L를 함유하는 LB 배지)에서 37℃에서 밤새 배양하여, 집균 후 퀴아프렙 스핀 미니프렙 키트(QIAprep Spin Miniprep kit)(퀴아젠사)를 사용해서 플라스미드 DNA를 제조하였다.
얻어진 재조합 플라스미드 DNA에 대해서, 그 염기 서열을 CEQ DTCS 퀵 스타트 키트(Quick Start Kit) 및 형광 시퀀서 CEQ 2000XL DNA 아날리시스(Analysis)(모두 베크만 코울터(BECKMAN COULTER), 미국)를 사용하여 확인하고, 플라스미드 pMMA002 내지 pMMA005라고 명명했다(표 36).
pET16b 벡터에 대해서도 마찬가지의 조작에 의해 ACD 호몰로그 유전자를 삽입하고, 얻어진 플라스미드를 pMMA102 내지 pMMA105라고 명명했다(표 36). 단, pET16b에는 Sse8387I 부위가 없기 때문에, pET16b의 BamHI 부위에 Sse8387I 절단 서열을 포함하는 링커를 삽입한 것을 미리 제작하여, 이것을 벡터로서 사용하였다.
<실시예 34: 로도코커스 에리트로폴리스(Rhodococcus erythropolis) PR4주로부터의 ACD 호몰로그 유전자의 클로닝과 고발현 재조합체의 제작>
메타크릴산 생산 능력을 갖는 로도코커스(Rhodococcus)속 미생물의 메타크릴산 합성에 관여하는 유전자의 단리를 행하였다.
<게놈 DNA의 제조>
LB 한천 배지 배지(LB 배지, 1.5% 한천) 위에서 생육시킨 로도코커스 에리트로폴리스(Rhodococcus erythropolis) PR4주(NBRC100887)를 10mL의 LB 액체 배지에 식균하고, 30℃에서 36시간 진탕 배양을 행하였다. 배양 종료 후, 2mL의 배양액으로부터 균체를 원심에 의해 회수하고, 위자드 게노믹 DNA 정제 키트(프로메가 가부시끼가이샤)를 사용하여 게놈 DNA 100μL를 취득하였다.
<고 발현 벡터에 대한 클로닝>
얻어진 게놈 DNA를 주형으로 해서, ACD를 코딩하는 것으로 추정된 유전자를 포함하는 DNA 단편을, 발현 벡터에 용이하게 도입 가능한 제한 효소 인식 부위가 부가된 형태가 되도록 올리고뉴클레오티드를 설계하여, PCR법에 의해 제조하였다.
<표 37>
올리고뉴클레오티드 프라이머
MMA-021: 5'-GGACATGTTTACTCTGACCGATGACGAGCG-3' (서열 번호 114)
MMA-022: 5'-GGCCTGCAGGCCGTCACGCTTTTCGATCAATAC-3' (서열 번호 115)
MMA-023: 5'-CCACATGTCCGATTACCTTGCCACCGGAGC-3' (서열 번호 116)
MMA-024: 5'-GGCCTGCAGGATCTTCTTGGGGTTCGTCACAAC-3' (서열 번호 117)
PCR 반응에 의한 증폭은, 실시예 33과 마찬가지로 해서 행하였다.
얻어진 증폭 산물의 밴드를 퀴아퀵 겔 익스트랙션 키트(퀴아젠)로 정제하고, 제한 효소 PciI(전방향 프라이머 중에 절단 인식 부위가 포함됨) 및 Sse8387I(역방향 프라이머 중에 절단 인식 부위가 포함됨)으로 절단하였다. 이하의 조작은 실시예 33과 마찬가지로 행하여, pTrc99A를 벡터로 하는 플라스미드 pMMA009 및 010, pET16b를 벡터로 하는 플라스미드 pMMA109 및 110을 얻었다(표 37).
<실시예 35: ACD 호몰로그 유전자를 발현시킨 재조합체로부터의 세포 추출액의 제조와 단백질의 발현 해석>
실시예 33 및 34에서 제작한 ACD 호몰로그 유전자를 포함하는 발현 플라스미드를 사용하여, 대장균 JM109(pMMA002 내지 pMMA005, pMMA009 및 010의 경우) 또는 대장균 BL21(DE3)(pMMA102 내지 pMMA105, pMMA109 및 110의 경우)을 형질 전환하였다. 대장균 JM109의 형질전환주는 이하와 같이 하여 배양을 행하였다.
대장균 재조합체를 1mL의 100μg/mL 암피실린을 포함하는 LB 배지에 식균하고, 37℃에서 7시간 전 배양을 행하였다. 배양액을 0.1mL 취하여, 100mL의 동일 배지(100μg/mL 암피실린, 1mM 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노시드(이하, IPTG) 함유)에 가하고, 37℃에서 15시간 진탕 배양하였다. 얻어진 배양액으로부터 원심 분리(3,700×g, 10분간, 4℃)에 의해 균체를 회수하고, 10mM 인산-나트륨 완충액(pH7.0)으로 세정한 후, 동일 완충액에 현탁하였다. 대조주로서 JM109/pTrc99A를 사용하였다.
대장균 BL21(DE3)의 형질전환주는 이하와 같이 하여 배양을 행하였다. 대장균 재조합체를 1mL의 100μg/mL 암피실린을 포함하는 LB 배지에 식균하고, 37℃에서 14시간 전 배양을 행하였다. 배양액을 0.1mL 취하여, 100mL의 동일 배지(100μg/mL 암피실린)에 가하고, 37℃에서 OD가 0.3이 될 때까지 진탕 배양한 후, 최종 농도가 1mM이 되도록 IPTG를 첨가하여 또한 수시간 진탕 배양하였다. 얻어진 배양액으로부터 원심 분리(3,700×g, 10분간, 4℃)에 의해 균체를 회수하고, 10mM 인산-나트륨 완충액(pH7.0)으로 세정한 후, 동일 완충액에 현탁하였다. 대조주로서 BL21(DE3)/pET16b를 사용하였다.
얻어진 균체 현탁액으로부터 1mL를 취하여, 이하와 같이 해서 세포 추출액을 제조하였다. 초음파 파쇄기 VP-300(다이테크, 일본)을 사용하여, 빙냉하면서 1초 간격으로 펄스 출력하여 3분간 파쇄하였다. 다음으로 원심 분리를 행하여(10,000×g, 5분간, 4℃), 얻어진 상청을 세포 추출액으로서 채취하였다.
SDS 겔 전기 영동에 의한 단백질의 분석은 이하와 같이 하여 행하였다. 세포 추출액을 적절히 희석한 후, 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동용 샘플 용액(0.1M 트리스(Tris)-HCl(pH6.8), 4%w/v SDS, 0.2M 디티오트레이톨, 20%v/v 글리세롤, 미량 브로모페놀 블루)과 혼합하여, 98℃ 5분간 가열해서 변성 처리를 행한다. 10% 폴리아크릴아미드 겔을 제작하고, 변성 처리 완료 샘플을 1렌당 5μL씩 사용하여, 전기 영동 분석을 했다(도 7).
<실시예 36: 세포 추출액의 ACD 활성의 측정>
ACD 활성은, 이하와 같이 이소부티릴-CoA를 기질로 한 메타크릴릴-CoA의 생성에 의해 측정하였다. 100mM 인산나트륨 완충액(pH8.0) 중에 최종 농도가 각각 6mM의 1-메톡시-5-메틸페나지니움메틸황산염, 0.4mM의 플라빈아데닌디뉴클레오티드 및 1mM의 이소부티릴-CoA를 포함하는 용액 1.84mL에, 실시예 35와 같이 해서 얻어진 세포 추출액 0.16mL를 첨가하여 2mL로 하였다. 37℃에서 30분간 반응시킨 후, 센트리 커트 초미니 W-10(구라보호세끼 가부시끼가이샤)을 사용한 한외 여과에 의해 단백질 제거를 행해 반응을 정지시키고, 이하의 조건에서 HPLC에 의한 분석을 하였다. 결과를 표 38에 나타냈다. PA_acd1 및 RE_acd1에는 높은 ACD 활성이 나타났고, 이들 효소에 의해, 이소부티릴-CoA로부터 메타크릴릴-CoA를 생산할 수 있음을 확인할 수 있었다.
HPLC 분석 조건
칼럼: 이너트실 ODS-3V, 4.6mm×250mm
이동상: 30% MeOH, 50mM H3PO4, pH5.7
유량: 1.0ml/min 칼럼 온도: 35℃ 검출: UV254nm(210nm)
주입량 10μl 반응 용액을 이동상으로 10배 희석하여 측정.
<표 38>
<실시예 37: BCKAD 유전자의 클로닝과 고발현 재조합체의 제작, 세포 추출액의 제조 및 단백질의 발현 해석>
유전자의 클로닝과 발현 플라스미드의 제작 및 재조합체의 제작은, 실시예 33과 마찬가지로 하여 행하였다. 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) PAO1주의 게놈 DNA를 주형으로 해서, BCKAD 복합체 유전자를 코딩하는 유전자 오페론 전체를 포함하는 DNA 단편을, 표 39에 나타내는 프라이머를 사용하여 PCR법에 의해 제조하였다. 얻어진 단편을 제한 효소 BspHI와 Sse8387I에 의해 소화하고, 실시예 33과 마찬가지로 해서 벡터 pTrc99A 및 pET16b에 삽입하여 재조합 플라스미드(pWA108 및 pWA008)를 얻었다.
<표 39>
올리고뉴클레오티드 프라이머
MAA-15: 5'-GGCCTGTCATGAGTGATTACGAGCCG-3' (서열 번호 118)
MAA-16: 5'- CGGCCCTGCAGGTTCGCGGGAATCAGATGTGC-3' (서열 번호 119)
상기와 같이 하여 얻어진 대장균 재조합체 JM109/pWA108을 실시예 35와 마찬가지로 해서 배양을 행하였다. (본 재조합체의 경우에는, 이유는 불분명하지만, IPTG의 첨가는 행하지 않아도 높은 단백질의 발현이 나타났기 때문에, IPTG의 첨가를 행하지 않고 실시하였다.) 대장균 재조합체 BL21(DE3)/pWA008의 경우에는, 실시예 35와 마찬가지로 해서 배양을 행하였다. 세포 추출액의 제조 및 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동에 의한 단백질의 발현 해석은, 실시예 35와 마찬가지로 실시하였다.
<실시예 38: 로도코커스(Rhodococcus)속 세균으로부터의 BCKAD 유전자(클러스터 1)의 클로닝과 고발현 재조합체의 제작>
로도코커스(Rhodococcus)속 세균에 있어서는 BCKAD 유전자에 관한 지식이 없었기 때문에, 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) PAO1주의 BCKAD 복합체 유전자의 아미노산 서열을 바탕으로 로도코커스 에리트로폴리스(Rhodococcus erythropolis) PR4주의 게놈 서열을 호몰로지 검색한 결과 2개의 후보 유전자 클러스터를 발견하였다. 이들을 클러스터 1과 클러스터 2로 하였다.
클러스터 1은 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) PAO1주와 마찬가지로 4개의 유전자는, 서열 번호 63, 65, 67, 69로 나타나는 염기 서열을 포함하고, 그 코딩하는 아미노산 서열은, 서열 번호 62, 64, 66, 68이다. 클러스터 2는 3개의 유전자는, 각각 서열 번호 71, 73, 75로 나타나는 염기 서열을 포함하고, 그 코딩하는 아미노산 서열은, 각각 서열 번호 70, 72, 74이었다.
클러스터 1의 BCKAD 복합체 유전자의 클로닝과 발현 플라스미드의 제작 및 재조합체의 제작은, 실시예 33과 마찬가지로 하여 행하였다. 로도코커스 에리트로폴리스(Rhodococcus erythropolis) PR4주의 게놈 DNA를 주형으로 해서, BCKAD 복합체 유전자를 코딩하는 유전자 오페론 전체를 포함하는 DNA 단편을, 하기에 나타내는 프라이머를 사용하여 PCR법에 의해 제조하였다. 얻어진 단편을 제한 효소 BspHI와 Sse8387I에 의해 소화하고, 실시예 33과 마찬가지로 하여 벡터 pTrc99A에 삽입해서 재조합 플라스미드(pMMA019)를 얻었다.
올리고뉴클레오티드 프라이머
MMA-187: 5'-GGTCATGACTCTTGTCGAGCCCTTG-3' (서열 번호 120)
MMA-140: 5'-GACCTGCAGGTCCTCTTCTGGTCATGGTTC-3' (서열 번호 121)
<실시예 39: 로도코커스(Rhodococcus)속 세균으로부터의 BCKAD 유전자(클러스터 2)의 클로닝과 고발현 재조합체의 제작>
클러스터 2의 BCKAD 복합체 유전자의 클로닝과 발현 플라스미드의 제작 및 재조합체의 제작은, 이하와 같이 해서 행하였다. 로도코커스 에리트로폴리스(Rhodococcus erythropolis) PR4주의 게놈 DNA를 주형으로 해서, 하기에 나타내는 프라이머를 사용하여 PCR법에 의해 제조하였다.
올리고뉴클레오티드 프라이머
MMA-188: 5'- AGGAAACAGACCATGATCGACAACCTCGATTA-3' (서열 번호 122)
MMA-189: 5'- CTTGCATGCCTGCAGGCTCACTCGTTCCTTTTTACAG-3' (서열 번호 123)
상기 PCR 산물 및 NcoI 및 Sse8387I로 미리 소화해 둔 벡터 pTrc99A를 인 퓨전 HD 클로닝 키트(다카라 바이오 가부시끼가이샤)를 사용하여, 제품 설명서에 따라 말단 서열의 재조합을 행하여 연결시켰다. 상기 인퓨전 반응액 2μL를 사용하여, 실시예 33과 마찬가지로 해서 대장균 JM109주의 형질 전환을 행하고, 얻어진 형질전환체로부터 재조합 플라스미드(pMMA020)를 얻었다.
<실시예 40: BCKAD 유전자량 발현 재조합체의 세포 추출액의 활성 측정>
BCKAD 활성은, 이하와 같이 2-옥소이소발레르산을 기질로 한 이소부티릴-CoA의 생성에 의해 측정하였다.
100mM 인산 칼륨 완충액(pH7.0) 중에 최종 농도가 각각 1mM의 MgCl2, 0.2mM의 티아민 피로인산, 1mM의 CoA-SH 및 2mM DTT를 포함하는 용액 0.7mL에, 실시예 37과 같이 해서 얻어진 세포 추출액 0.2mL를 첨가하여 0.9mL로 하였다. 이것에 2-옥소이소발레르산칼슘염 0.1mL(최종 농도 4mM)를 첨가해서 37℃에서 30분간 반응시킨 후, 센트리 커트 초미니 W-10(구라보호세끼 가부시끼가이샤)을 사용한 한외 여과에 의해 단백질 제거를 행하여 반응을 정지시키고, 이하의 조건에서 HPLC에 의한 분석을 하였다. 그 결과, JM109/pWA108에서는 0.83mM, BL21(DE3)/pWA008에서는 0.88mM의 이소부티릴-CoA의 생성이 나타났다.
HPLC분석 조건
칼럼: 이너트실 ODS-3V, 4.6mm×250mm
이동상: 35% MeOH, 50mM H3PO4, pH5.7
유량: 1.0ml/min 칼럼 온도: 35℃ 검출: UV 254nm(210nm)
주입량 10μl 반응 용액을 이동상으로 10배 희석하여 측정.
<실시예 41: BCKAD 유전자량 발현 재조합체 및 ACD 호몰로그 유전자를 발현시킨 재조합체로부터의 세포 추출액 혼합물에 의한 2-옥소이소발레르산으로부터의 메타크릴릴-CoA의 합성>
100mM 인산 칼륨 완충액(pH7.0) 중에 최종 농도가 각각 1mM MgCl2, 0.2mM의 티아민 피로인산, 1mM CoA-SH, 2mM DTT, 2mM 니코틴아미도아데닌디뉴클레오티드(NAD), 0.04mM 플라빈아데닌디뉴클레오티드(FAD), 2mM 발린을 포함하는 용액 0.6mL에, 실시예 35 및 40과 같이 해서 얻어진 세포 추출액(JM109/pMMA002 및 JM109/pWA108) 각 0.1mL를 첨가하여 0.8mL로 하였다. 이것에 2-옥소이소발레르산칼슘염 0.1mL(최종 농도 4mM)를 첨가해서 37℃에서 30분간 반응시킨 후, HPLC에 의해 이소부티릴-CoA의 생성을 확인함과 함께, 0.1mL의 1-메톡시-5-메틸페나지니움메틸황산염(최종 농도 6mM)을 첨가해서 또한 3시간 반응시켰다. 반응 후, 센트리 커트 초미니 W-10(구라보호세끼 가부시끼가이샤)을 사용한 한외 여과를 행하였다. 단백질 제거를 행함으로써 반응을 정지시키고, HPLC에 의한 분석을 하였다. 그 결과, 0.2mM의 메타크릴릴-CoA의 생성이 나타났다.
<실시예 42: 메타크릴산부틸의 합성>
100mM 인산나트륨 완충액(pH8.0) 중에 최종 농도가 각각 6mM 1-메톡시-5-메틸페나지니움메틸황산염, 0.4mM FAD 및 1mM 이소부티릴-CoA를 포함하는 용액 1.84mL에 실시예 35와 같이 하여 얻어진 ACD 활성을 갖는 세포 추출액 0.16mL를 첨가하여, 반응액 2mL로 조정하였다. 37℃에서 30분간 반응시키고, 실시예 41에 나타내는 HPLC 조건에서 분석을 하였다. 그 결과, 이소부티릴-CoA의 피크는 소실되고, 메타크릴릴-CoA의 생성이 나타났다.
이렇게 하여 얻어진 메타크릴릴-CoA가 생성된 반응액을 사용하여, AAT 활성을 갖는 바나나의 과육 및 n-부틸알코올과 반응시킴으로써, 메타크릴산부틸의 생성을 인정하였다. 즉, 바나나의 가죽을 제거하고, 과육을 커터로 약 1밀리 두께로 얇게 썰어 또한 그것을 4 분할하였다. 얇게 썬 바나나 1g, 상기 메타크릴릴-CoA 합성 반응액 0.9mL, 3.5M KCl 용액 0.1mL 및 n-부틸알코올 5μL를 50mL 플라스크에 가하여 밀폐하고, 30℃에서 2시간 반응시켰다. 반응 후, 100mL 플라스크의 헤드 스페이스 150μL를 채취하여 이하의 GC 조건에서 분석을 한 결과, 0.015mM의 메타크릴산부틸이 생성되어 있었다.
GC 분석 조건
칼럼: DB-WAX, 30m×0.32mm
칼럼 온도: 50℃ 5min→5℃/min→100℃(총 15min)
캐리어 가스: He
주입(Inject): 200℃ 스플릿레스(샘플링 타임 1min)
검출(Detect): 250℃ FID 주입량: 150μL
또한, 메타크릴산부틸의 농도는, 농도가 기지인 수용액을 조정하여, 100mL 플라스크에 동일 수용액을 2mL 넣고, 30℃에서 30min 인큐베이션한 후에 헤드 스페이스를 마찬가지의 방법으로 채취하여 GC 분석하고, 검량선을 작성하여 산출하였다.
<실시예 43: 대장균용 BCKAD와 ACD의 공 발현용 플라스미드의 제작>
ACD 유전자(PA_acd1 유전자)를 포함하는 DNA 단편을, 실시예 37에서 제작한 pWA108의 BCKAD의 하류에 인 퓨전 HD 클로닝 키트(다카라 바이오사 제조 TAKARA)를 사용해서 삽입하여, BCKAD와 ACD의 공 발현용 플라스미드 pMMA201 및 pMMA202를 제작하였다. 또한, 마찬가지로 하여, BCKAD 유전자를 포함하는 DNA 단편이, 실시예 33에서 제작된 pMMA002의 PA_acd1 유전자의 하류에 삽입된 공 발현용 플라스미드 pMMA203 및 pMMA204를 제작하였다. 상세를 이하에 나타내었다.
(1) 플라스미드 pMMA201의 제작
실시예 33에서 제작한 pMMA102를 주형으로 하여 PA_acd1 유전자를 PCR법에 의해 증폭하였다. PCR 조건은 이하와 같다.
Fw 프라이머
MMA-039 TAGAGTCGACCTGCACGAGATCTCGATCCCGCGAAAT (서열 번호 128)
Rv 프라이머
MMA-040 GCTTGCATGCCTGCACAGCAGCCAACTCAGCTTCCTTT (서열 번호 129)
반응액 조성
주형(pMMA102) 1μ1
2×프라임 스타 맥스 프리믹스(다카라사 제조) 25μ1
FW 프라이머(20μM) 1μ1
Rv 프라이머(20μM) 1μ1
D.W. 22μ1
총량 50μ1
온도 사이클
98℃ 10초, 60℃ 10초 및 72℃ 120초의 반응을 30 사이클
PCR 종료 후, 샘플 1μl를 사용하여, 0.7% 아가로오스 겔 전기 영동에 의해 단편의 확인을 행한 결과, 약 1.1kb의 단편의 증폭이 나타났다. PCR 산물을 Gel/PCR 정제 키트(파보르겐사 제조)를 사용해서 간이 정제를 행하여, PCR 단편을 얻었다.
한편, 플라스미드 pWA108을 제한 효소 Sse8387I에 의해 절단하여, 벡터측 단편으로 하였다. 상기 양 단편을 이하에 나타내는 인 퓨전 HD 클로닝 키트에 의한 반응에 사용하였다.
반응액 조성
5x 인 퓨전 HD 효소 프리믹스 2μl
벡터측 단편 1.5μl
PCR 단편 1μl
D.W. 3.5μl
총량 10μl
상기 반응액을 50℃에서 15분간 인큐베이션한 후, 빙상에서 냉각하여, 대장균 JM109주의 형질 전환에 사용하였다. 대장균 형질전환체의 선택은 LBAmp 한천 배지에서 행하였다. 얻어진 형질전환체로부터 실시예 33에 기재된 방법에 의해 플라스미드를 제조하여, 원하는 플라스미드를 얻었다. 플라스미드의 확인은 제한 효소 XbaI 및 Sse8387I에 의한 처리 후의 단편 사이즈 및 삽입 단편과 벡터의 접속 영역의 서열을 조사함으로써 행하였다. 원하는 플라스미드를 pMMA201이라고 명명하였다.
(2) 플라스미드 pMMA202의 제작
실시예 33에서 제작한 pMMA102를 주형으로 하여 PA_acd1 유전자를 PCR법에 의해 증폭하였다. PCR 프라이머는 이하와 같다.
Fw 프라이머
MMA-042 TAGAGTCGACCTGCACCTCTAGAAATAATTTTGTTTA (서열 번호 130)
Rv 프라이머
MMA-040 GCTTGCATGCCTGCACAGCAGCCAACTCAGCTTCCTTT (서열 번호 129)
상기와 마찬가지로 하여, 본 PCR 단편과, 제한 효소 Sse8387I에 의해 절단된 플라스미드 pWA108을 인 퓨전 HD 클로닝 키트를 사용해서 접속하여, 원하는 플라스미드를 pMMA202라고 명명하였다.
(3) 플라스미드 pMMA203의 제작
실시예 37에서 제작한 pWA008을 주형으로 하여 BCKAD 유전자를 PCR법에 의해 증폭하였다. PCR 프라이머는 이하와 같다.
Fw 프라이머
MMA-041 CCATCGCATCCTGCACGAGATCTCGATCCCGCGAAAT (서열 번호 131)
Rv 프라이머
MMA-040 GCTTGCATGCCTGCACAGCAGCCAACTCAGCTTCCTTT (서열 번호 129)
반응 방법과 PCR 단편의 취득은 (1)에서 기재된 바와 같이 행하였다.
한편, PA_acd1 유전자를 포함하는 플라스미드 pMMA002를 제한 효소 Sse8387I에 의해 절단하여, 벡터측 단편으로 하였다. (1)과 마찬가지로 해서, 양 단편을 인 퓨전 HD 클로닝 키트에 의한 반응을 행하고, 반응액을 사용하여 대장균 JM109주를 형질 전환하였다. 얻어진 형질전환체로 플라스미드를 얻고, (1)과 마찬가지로 해서 플라스미드의 확인을 행하였다. 원하는 플라스미드를 pMMA203이라고 명명하였다.
(4) 플라스미드 pMMA204의 제작
실시예 37에서 제작한 pWA008을 주형으로 하여 BCKAD 유전자를 PCR법에 의해 증폭하였다. PCR 프라이머는 이하와 같다.
Fw 프라이머
MMA-043 CCATCGCATCCTGCACCTCTAGAAATAATTTTGTTTA (서열 번호 132)
Rv 프라이머
MMA-040 GCTTGCATGCCTGCACAGCAGCCAACTCAGCTTCCTTT (서열 번호 129)
반응 방법과 PCR 단편의 취득은 (1)에서 기재된 바와 같이 행하였다. 상기와 마찬가지로 해서, 본 PCR 단편과, 제한 효소 Sse8387I에 의해 절단된 플라스미드 pMMA002를 인 퓨전 HD 클로닝 키트를 사용해서 접속하여, 원하는 플라스미드를 pMMA204라고 명명하였다.
<실시예 44: BCKAD 및 ACD를 발현시킨 대장균 재조합체 세포 추출액에 의한 2-옥소이소발레르산으로부터의 메타크릴릴-CoA의 합성(시험관내)>
실시예 35에기재된 방법과 마찬가지로 하여, JM109/pMMA204주의 세포 추출액을 얻었다. 대조주로서 JM109/pTrc99A를 사용하였다. 실시예 40에 기재된 방법과 마찬가지로 하여, JM109/pMMA204 세포 추출액에 2-옥소이소발레르산칼슘염 0.1mL(최종 농도 4mM)를 첨가해서 37℃에서 30분간 반응시킨 후, HPLC에 의해 이소부티릴-CoA의 생성을 확인함과 함께, 0.1mL의 1-메톡시-5-메틸페나지니움메틸황산염(최종 농도 6mM)을 첨가해서 또한 3시간 반응시켰다. 반응 후, 센트리 커트 초미니 W-10(구라보호세끼 가부시끼가이샤)을 사용한 한외 여과에 의한 단백 제거(반응 정지)를 행하고, 이하의 조건에서 HPLC에 의한 분석을 하였다.
HPLC 분석 조건
칼럼: 캅셀 팩(Capcell Pak) ODS-UG120(시세이도), 입자 직경 ㎛, 2.0mm I.D.×250mm
이동상: 25% MeOH, 50mM H3PO4, pH5.7
유량: 1.0ml/min
칼럼 온도: 35℃
검출: UV254nm(210nm)
주입량 10μl 반응 용액을 이동상으로 10배 희석하여 측정.
그 결과, 0.1mM의 메타크릴릴-CoA의 생성이 나타났다. 대장균 재조합체에 의해 발현시킨 BCKAD 및 ACD는 1-메톡시-5-메틸페나지니움메틸 존재하에서, 2-옥소이소발레르산으로부터 메타크릴릴-CoA를 제조할 수 있음을 확인할 수 있었다.
<참고예 4: BCKAD 및 ACD를 발현시킨 대장균 재조합체를 사용한 2-옥소이소발레르산으로부터의 메타크릴산의 합성(생체내)>
BCKAD 및 ACD를 발현시킨 대장균 재조합체를 사용하여 2-옥소이소발레르산으로부터의 메타크릴산 또는 메타크릴릴-CoA의 합성을 실시하였다.
JM109/pMMA201주, JM109/pMMA202주, JM109/pMMA203주 및 JM109/pMMA204주를 1mL의 100μg/mL 암피실린을 포함하는 LBAmp 배지(암피실린 100mg/L)에 식균하고, 37℃에서 6시간 전 배양을 행하였다. 배양액을 0.1mL 취하여, 100mL의 동일 배지(1mM IPTG 함유)에 가하고, 37℃에서 18시간 진탕 배양하였다. 얻어진 배양액 10mL를 취하고, 0.5% 2-옥소이소발레르산 칼슘을 포함한 90mL의 LBAmp 배지에 가하여, 37℃에서 25시간 진탕 배양하였다. 배양 종료 후, 배양액을 필터 여과하고, 이하의 조건에서 HPLC에 의한 분석을 하였다.
HPLC 분석 조건
칼럼: 와코팩 와코비즈(Wakopak Wakobeads)-T-132-E, φ7.8mm×300mm
이동상: 0.1% 인산
유량: 0.5ml/min
칼럼 온도: 40℃
검출: UV 210nm
주입량: 5ul
그 결과, 메타크릴산 및 메타크릴릴-CoA의 생성은 나타나지 않았고, 14.2mM의 이소부티르산의 생성이 나타났다. 즉, 대장균에서의 생체내 반응에서는, 메타크릴산 또는 메타크릴릴-CoA의 합성은 가능하지 않음이 나타났다.
생성 이소부티르산 농도
<표 40>
<참고예 5: BCKAD 및 ACD를 발현시킨 대장균 재조합체 휴지 균체를 사용한 2-옥소이소발레르산으로부터의 메타크릴산의 합성>
실시예 35에 기재된 방법과 마찬가지로 하여, JM109/pMMA201주를 배양하였다. 얻어진 배양액으로부터 원심 분리(3,700×g, 10분간, 4℃)에 의해 균체를 회수하고, 10mM 인산-나트륨 완충액(pH7.0)으로 세정한 후, 동일 완충액에 현탁해서 균체 현탁액을 얻었다. 본 균체 현탁액을 사용하여, 이하와 같이 휴지 균체 반응액 3mL를 제조하고, 30℃, 180rpm에서 24시간 반응을 행하였다.
휴지 균체 반응액 조성
50mM 인산나트륨 완충액(pH7.0)
0.5% 2-옥소이소발레르산칼슘
OD10 균체 현탁액
반응 종료 후, 반응액을 필터 여과하고, 참고예 4에 기재된 조건에서 HPLC에 의한 분석을 하였다. 그 결과, 메타크릴산의 생성은 나타나지 않았고, 15.2mM의 이소부티르산의 생성이 나타났다. 참고예 4와 마찬가지로, 휴지 균체 반응에서 대장균에서는 메타크릴산 또는 메타크릴릴-CoA의 합성은 가능하지 않음이 나타났다.
<참고예 6: 스트렙토마이세스 코엘리콜로르(Streptomyces coelicolor) A3(2)로부터의 ACD 유전자(acdH)의 클로닝과 발현 재조합체의 제작, 세포 추출액의 제조, 단백질의 발현 해석 및 ACD 활성의 측정>
실시예 33 내지 32에 기재된 방법에 의해, 스트렙토마이세스 코엘리콜로르(Streptomyces coelicolor) A3(2) 유래의 acdH 유전자를 조합한 발현 재조합체를 제작하고, 세포 추출액의 제조, 단백질의 발현 해석 및 ACD 활성의 측정을 행하였다. 단백질의 발현 해석 결과는 도 7의 (C)에, 효소 활성 측정 결과는 표 38에 나타냈다. 또한, 플라스미드 제작시, PCR에 사용한 올리고뉴클레오티드는 이하와 같다.
올리고뉴클레오티드 프라이머
MMA-001: 5'-CACCATGGACCACAAGCTCTCCCCCGAAC-3' (서열 번호 124)
MMA-002: 5'-GCCCTGCAGGCTCAGCCCACCAGCCCCAAC-3' (서열 번호 125)
<참고예 7: AAT에 의한 메타크릴산 이소부틸의 합성>
바나나의 가죽을 제거하고, 과육을 커터로 약 1밀리 두께로 얇게 썰어, 또한 그것을 4 분할하였다. 얇게 썬 바나나 2g, 2.3mM 메타크릴릴-CoA 및 0.35M KCl을 포함하는 용액 2ml 및 5μl 이소부틸알코올을 100ml 플라스크에 순서대로 첨가하였다. 밀폐하여 30℃에서 반응시켰다. 1, 2 또는 3시간 후의 생성된 메타크릴산이소부틸을 포함하는 반응 혼합물을, 100ml 플라스크의 헤드 스페이스 150μl를 채취하여 이하의 GC 조건에서 분석을 하였다. 그 결과를 표 41에 나타내었다.
<표 41>
GLC 분석 조건
칼럼: DB-WAX, 30m×0.32mm
칼럼 온도: 50℃ 5min→5℃/min→100℃(총 15min)
캐리어 가스: He
주입: 200℃ 스플릿레스(샘플링 타임 1min)
검출: 250℃ FID 주입량: 150μl
또한, 메타크릴산에스테르의 농도는, 먼저 농도가 기지인 수용액을 조정하여, 100ml 플라스크에 동일 수용액을 2ml 넣고, 30℃에서 30min 인큐베이션한 후에 헤드 스페이스를 마찬가지의 방법으로 채취하여 GC 분석하고, 검량선을 작성하여 산출하였다.
<참고예 8: AAT에 의한 메타크릴산 부틸의 합성>
이소부틸알코올 대신에 n-부틸알코올을 사용한 것 이외는 참고예 7과 마찬가지로 실시하였다. 그 결과를 표 42에 나타내었다.
<표 42>
<참고예 9: AAT에 의한 메타크릴산 부틸의 합성 2>
표 43에 나타내는 식물편을 2g, 2.3mM 메타크릴릴-CoA 및 0.35M KCl을 포함하는 용액 2ml 및 10μl의 n-부틸알코올을 100ml 플라스크에 순서대로 첨가하였다. 밀폐하여 30℃에서 반응시켰다. 메타크릴산에스테르의 분석은 참고예 7과 마찬가지로 실시하였다. 그 결과를 표 43에 나타내었다.
<표 43>
<참고예 10: AAT에 의한 메타크릴산에틸의 합성>
표 44에 나타내는 식물편을 2g, 2.3mM 메타크릴릴-CoA 및 0.35M KCl을 포함하는 용액 2ml 및 6.4μl 에틸알코올을 100ml 플라스크에 순서대로 첨가하였다. 밀폐하여 30℃에서 반응시켰다. 메타크릴산에스테르의 분석은 참고예 7과 마찬가지로 실시하였다. 그 결과를 표 44에 나타내었다.
<표 44>
<참고예 11: AAT에 의한 메타크릴산메틸의 합성>
표 45에 나타내는 식물편을 2g, 2.3mM 메타크릴릴-CoA 및 0.35M KCl을 포함하는 용액 2ml 및 4.4μl 메틸알코올을 100ml 플라스크에 순서대로 첨가하였다. 밀폐하여 30℃에서 반응시켰다. 메타크릴산에스테르의 분석은 참고예 7과 마찬가지로 실시하였다. 그 결과를 표 45에 나타내었다.
<표 45>
<실시예 45: 식물 유래 AAT 유전자가 도입된 대장균 재조합체의 제작>
서열 번호 77, 79 및 81에 나타나는 식물 유래 AAT 유전자를 다카라 바이오 가부시끼가이샤에서 위탁 합성하였다.
사과 AAT(MpAAT1): 아미노산 서열(서열 번호 76), 염기 서열(서열 번호 77)
딸기 AAT(SAAT): 아미노산 서열(서열 번호 78), 염기 서열(서열 번호 79)
딸기 AAT(VAAT): 아미노산 서열(서열 번호 80), 염기 서열(서열 번호 81)
이 합성한 유전자 단편은 벡터 pMD19에 삽입되어, 각각 pAAT001 내지 003이라고 명명하였다.(표 46) 이들의 pAAT001 내지 003을 주형으로 해서, AAT 유전자를 포함하는 DNA 단편을, 발현 벡터에 용이하게 도입 가능한 제한 효소 인식 부위가 부가된 형태가 되도록 올리고뉴클레오티드를 설계하고, PCR법에 의해 제조하였다.
올리고뉴클레오티드 프라이머
MMA-044: 5'-GTTTGCACGCCTGCCGTTCGACG-3' (서열 번호 82)
MMA-045: 5'-CGGTACGCGCGGATCTTCCAGAG-3' (서열 번호 83)
반응액 조성
멸균수 22μL
2×프라임스타(다카라 바이오사 제조) 25μL
전방향 프라이머 1μL
역방향 프라이머 1μL
게놈 DNA 1μL
총량 50μL
온도 사이클
98℃ 10초, 55℃ 15초 및 72℃ 150초의 반응을 30 사이클
얻어진 증폭 산물의 밴드를 퀴아퀵 겔 익스트랙션 키트(퀴아젠)로 정제하였다. 정제한 각 DNA를 제한 효소 PagI(전방향 프라이머 중에 절단 인식 부위가 포함됨) 및 Sse8387I(역방향 프라이머 중에 절단 인식 부위가 포함됨)로 절단하였다. 아가로오스 겔 전기 영동에 의해 분리를 행하고, 겔로부터 원하는 밴드를 잘라내어 정제를 행하였다. 정제에는 Gel/PCR 정제 키트(파보르겐사 제조)를 사용하여, 30μL의 멸균수에 용출하였다.
정제한 DNA(5μL), NcoI 및 Sse8387I로 미리 소화해 둔 벡터 pTrc99A(1μL), 증류수(4μL) 및 솔루션 I(DNA 라이게이션 키트 버전 2(다카라 바이오(주)))(10μL)를 혼합해서 12시간, 16℃에서 인큐베이션함으로써 PCR 증폭 산물과 벡터를 라이게이션하였다.
실시예 33의 방법과 마찬가지로 제작한 콤페턴트 셀 200μL에 상기의 라이게이션 용액을 10μL 첨가하고, 0℃에서 30분 방치한 후, 42℃에서 30초간 히트 쇼크를 부여하여, 0℃에서 2분간 냉각한 후, SOC 배지 1mL를 첨가하여 37℃에서 1시간 진탕 배양하였다.
배양 후, 100μL씩 LBAmp 한천 배지(암피실린 100mg/L, 1.5% 한천을 함유하는 LB 배지)에 도포하고, 또한 37℃에서 배양하였다. 한천 배지 위에 생육한 형질전환체 콜로니 복수 개를 1.5mL의 LBAmp 배지(암피실린 100mg/L을 함유하는 LB 배지)에서 37℃에서 밤새 배양하고, 집균 후 퀴아프렙 스핀 미니프렙 키트(퀴아젠사)를 사용하여 플라스미드 DNA를 제조하였다.
얻어진 재조합 각 플라스미드 DNA에 대해서, 그 염기 서열을 CEQ DTCS 퀵 스타트 키트 및 형광 시퀀서 CEQ 2000XL DNA 아날리시스(모두 베크만 코울터, 미국)를 사용해서 확인하고, 플라스미드 pAAT101 내지 pAAT103이라고 명명했다(표 46).
pET16b 벡터에 대해서도 마찬가지의 조작에 의해 AAT 유전자를 삽입하고, 얻어진 플라스미드를 pAAT201 내지 pAAT203이라고 명명했다(표 46). 단, pET16b에는 Sse8387I 부위가 없기 때문에, pET16b의 BamHI 부위에 Sse8387I 절단 서열을 포함하는 링커를 삽입한 것을 미리 제작하여, 이것을 벡터로서 사용하였다.
플라스미드 pAAT101 내지 pAAT103은 JM109주에 도입하여, 재조합체 JM109/pAAT101 내지 pAAT103을 얻었다. 플라스미드 pAAT201 내지 pAAT203은 BL21(DE3)주에 도입하여, 재조합체 BL21(DE3)/pAAT201 내지 pAAT203을 얻었다.
<표 46>
<실시예 46: AAT 유전자를 발현시킨 대장균 재조합체로부터의 세포 추출액의 제조>
(1) pTrc99A를 벡터로서 사용한 대장균 재조합체의 배양
실시예 45에서 얻어진 대장균 재조합체 JM109/pAAT101 내지 pAAT103을 1ml의 100μg/ml 암피실린을 포함하는 LB 배지에 식균하고, 37℃에서 7시간 전 배양을 행하였다. 배양액을 0.1ml 취하여, 100ml의 동일 배지(100μg/ml 암피실린, 1mMIPTG 함유)에 가하고, 37℃에서 15시간 진탕 배양하였다. 얻어진 배양액으로부터 원심 분리(3,700×g, 10분간, 4℃)에 의해 균체를 회수하고, 10mM 인산-나트륨 완충액(pH7.0)으로 세정한 후, 동일 완충액에 현탁하였다. 대조주로서 JM109/pTrc99A를 사용하였다.
(2) pET16b를 벡터로서 사용한 대장균 재조합체의 배양
실시예 45에서 얻어진 대장균 재조합체 BL21(DE3)/pAAT201 내지 pAAT203을 1mL의 100μg/mL 암피실린을 포함하는 LB 배지에 식균하고, 37℃에서 14시간 전 배양을 행하였다. 배양액을 0.1mL 취하여, 100mL의 동일 배지(100μg/mL 암피실린)에 가하고, 37℃에서 OD가 0.3이 될 때까지 진탕 배양한 후, 최종 농도가 1mM이 되도록 IPTG를 첨가해서 또한 수시간 진탕 배양하였다. 얻어진 배양액으로부터 원심 분리(3,700×g, 10분간, 4℃)에 의해 균체를 회수하고, 10mM 인산-나트륨 완충액(pH7.0)으로 세정한 후, 동일 완충액에 OD6(630nm)이 되도록 현탁하였다. 대조주로서 BL21(DE3)/pET16b를 사용하였다.
(3) 세포 추출액의 제조
얻어진 균체 현탁액으로부터 세포 추출액을 제조하였다. 초음파 파쇄기 VP-15S(다이테크, 일본)를 사용하여, 출력 컨트롤 4, DUTY CYCLE 40%, PULS, TIMER=B 모드 10s의 조건에서 균체 현탁액을 빙냉하면서 1분간 파쇄하였다. 다음으로 원심 분리를 행하여(10,000×g, 5분간, 4℃), 얻어진 상청(세포 추출액) 1ml를 채취하였다.
<실시예 47: AAT 유전자 재조합체 세포 추출액을 사용한 메타크릴산부틸의 합성>
실시예 46에 기재된 방법으로 제조된 세포 추출액을 사용하여 이하의 반응을 행하였다. 반응액의 최종 농도가 7mM 메타크릴릴-CoA와 40.5mM n-부탄올이 되도록 메타크릴릴-CoA와 알코올의 용액이 0.8ml 들어간 10ml 용량의 셉텀 구비 샘플 병(GC용)에, 0.2ml의 세포 추출액을 첨가함으로써 반응을 개시하였다. 셉텀 구비 샘플 병을 30℃에서 1 내지 5시간 인큐베이션하여 반응시켰다.
셉텀 구비 샘플 병의 헤드 스페이스의 기체를 참고예 7과 마찬가지로 분석하였다. 결과를 표 47에 나타냈다.
<표 47>
<실시예 48: AAT 유전자 재조합체 세포 추출액을 사용한 메타크릴산에스테르의 합성>
알코올로서, 메탄올, 에탄올 또는 n-부탄올을 사용하고, 세포 추출액에, BL21(DE3)/pAAT201(사과) 유래의 것을 사용하여, 실시예 47과 마찬가지로 하여 반응을 행하였다. 표 48에 5시간 후의 생성물의 분석 결과를 나타냈다.
<표 48>
<실시예 49: AAT 유전자 재조합체 세포 추출액을 사용한 메타크릴산에스테르의 합성 2>
알코올로서, 이소부탄올, 페놀, 벤질알코올 또는 2-에틸헥실알코올을 사용하여, 실시예 46에서 얻어진 BL21(DE3)/pAAT201(사과)의 세포 추출액으로 이하의 반응을 행하였다.
반응액의 최종 농도가 1mM 메타크릴릴-CoA와 40mM 알코올이 되도록 메타크릴릴-CoA와 알코올을 포함하는 0.8ml의 용액이 들어간 10ml 용량의 셉텀 구비 샘플 병(GC용)에, 0.2ml의 세포 추출액을 첨가함으로써 반응을 개시하였다. 셉텀 구비 샘플 병을 30℃에서 1 내지 5시간 인큐베이션하여 반응시켰다. 반응 종료 후, 셉텀 구비 샘플 병 중의 반응액에 1mL의 아세토니트릴을 첨가하여 잘 혼화하였다. 그 후, 시린지 필터 DISMIC/구멍 직경 0.45㎛(아드반텍사 제조)를 사용하여 여과한 후, HPLC 분석에 제공하였다. 표 49에 5시간 후의 생성물의 분석 결과를 나타냈다.
AAT 유전자 재조합체를 사용한 메타크릴산에스테르(메타크릴산이소부틸, 메타크릴산페닐, 메타크릴산벤질, 메타크릴산2-에틸헥실)의 합성
<표 49>
HPLC 분석 조건
장치: 와터스 2695
칼럼: 시세이도(Shiseido) 캅셀 팩 C18 UG120 5㎛
이동상: 65% MeOH, 0.2% 인산
유량: 0.25ml/min
칼럼 온도: 35℃
검출: UV 210nm
주입량: 10μL
<비교예 1: 효모 유래 AAT 유전자 재조합체 세포 추출액에 의한 메타크릴산에스테르의 합성 반응>
실시예 45와 마찬가지로 하여 효모 유래 AAT 유전자 발현 플라스미드를 제작하고(표 50), 이들을 사용하여 대장균을 형질 전환하여 AAT 발현 재조합체를 얻었다.
효모 유래 AAT 유전자 발현용 플라스미드
<표 50>
실시예 46과 마찬가지로 하여 세포 추출액을 제조하고, 실시예 47과 마찬가지로 메타크릴릴-CoA와 n-부탄올을 기질로 해서 메타크릴산부틸의 합성 반응을 행하였다. 그 결과, 메타크릴산부틸의 생성은 나타나지 않았다. 한편, 아세틸-CoA와 n-부탄올을 기질로 했을 경우에는, 아세트산부틸의 생성이 나타났다. 즉, 효모 유래의 AAT에는 메타크릴산에스테르를 제조하는 능력은 인정되지 않았다.
효모 AAT 유전자 재조합체를 사용한 에스테르의 생성
<표 51>
<산업상 이용가능성>
본 발명에 따른 메타크릴산의 제조 방법에 의하면, 화학적인 방법에 따르지 않고, 미생물을 이용하여 리사이클 가능한 생물 유래 자원(재생 가능 원료)으로부터 메타크릴산을 제조할 수 있다. 종래의 ACH법에서는, 산에 의한 아세톤시안히드린의 산화 처리를 필요로 하여, 대량의 폐산이 발생한다. 또한, 각 스텝에서 분리나 정제가 필요하여 에너지 소비가 커진다. 한편, 본 발명에 따른 메타크릴산의 제조 방법에 의하면, 바이오매스로부터 직접 단일 공정에서 효율적이면서 또한 간편하게 메타크릴산을 생산할 수 있다. 이에 수반하여 안전면, 환경면, 설비면, 작업면 및 비용면 등에서의 부하가 저감된다. 또한, 메타크릴산의 원료를 바이오매스 유래의 것으로 전환함으로써 환경 중으로의 이산화탄소의 배출량을 삭감하는 것도 가능하게 된다.
[서열표 프리 텍스트]
서열 번호 82: MMA-044
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SEQUENCE LISTING
<110> MITSUBISHI RAYON CO., LTD.
<120> METHOD FOR PRODUCING METHACRYLIC ACID AND/OR ESTER THEREOF
<130> PMR-9010WO
<150> JP2013-016947
<151> 2013-01-31
<150> JP2012-198840
<151> 2012-09-10
<150> JP2012-198841
<151> 2012-09-10
<150> JP2013-160300
<151> 2013-08-01
<150> JP2013-160301
<151> 2013-08-01
<150> JP2013-157306
<151> 2013-07-30
<150> JP2013-170404
<151> 2013-08-20
<160> 136
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 485
<212> DNA
<213> Pseudomonas sp. B25-2
<400> 1
attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc ggatgagaag agcttgctct 60
tcgattcagc ggcggacggg tgagtaatgc ctaggaatct gcctggtagt gggggacaac 120
gtttcgaaag gaacgctaat accgcatacg tcctacggga gaaagcaggg gaccttcggg 180
ccttgcgcta tcagatgagc ctaggtcgga ttagctagtt ggtgaggtaa tggctcacca 240
aggcgacgat ccgtaactgg tctgagagga tgatcagtca cactggaact gagacacggt 300
ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattggaca atgggcgaaa gcctgatcca 360
gccatgccgc gtgtgtgaag aaggtcttcg gattgtaaag cactttaagt tgggaggaag 420
ggcagtaagt taataccttg ctgttttgac gttaccgaca gaataagcac cggctaactc 480
tgtgc 485
<210> 2
<211> 485
<212> DNA
<213> Pseudomonas sp. D22-1
<400> 2
attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc ggatgacggg agcttgctcc 60
ygaattcagc ggcggacggg tgagtaatgc ctaggaatct gcctggtagt gggggacaac 120
gtctcgaaag ggacgctaat accgcatacg tcctacggga gaaagcaggg gaccttcggg 180
ccttgcgcta tcagatgagc ctaggtcgga ttagctagtt ggtgaggtaa tggctcacca 240
aggcgacgat ccgtaactgg tctgagagga tgatcagtca cactggaact gagacacggt 300
ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattggaca atgggcgaaa gcctgatcca 360
gccatgccgc gtgtgtgaag aaggtcttcg gattgtaaag cactttaagt tgggaggaag 420
ggcattaacc taatacgtta gtgttttgac gttaccgaca gaataagcac cggctaactc 480
tgtgc 485
<210> 3
<211> 485
<212> DNA
<213> Pseudomonas sp. D43-1
<400> 3
attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc ggatgaagag agcttgctct 60
ctgattcagc ggcggacggg tgagtaatgc ctaggaatct gcctggtagt gggggacaac 120
gtctcgaaag ggacgctaat accgcatacg tcctacggga gaaagcaggg gaccttcggg 180
ccttgcgcta tcagatgagc ctaggtcgga ttagctagtt ggtgaggtaa tggctcacca 240
aggcgacgat ccgtaactgg tctgagagga tgatcagtca cactggaact gagacacggt 300
ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattggaca atgggcgaaa gcctgatcca 360
gccatgccgc gtgtgtgaag aaggtcttcg gattgtaaag cactttaagt tgggaggaag 420
ggcagtaaat taatactttg ctgttttgac gttaccgaca gaataagcac cggctaactc 480
tgtgc 485
<210> 4
<211> 485
<212> DNA
<213> Pseudomonas sp. D25
<400> 4
attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc ggatgacagg agcttgctcc 60
tgaattcagc ggcggacggg tgagtaatgc ctaggaatct gcctggtagt gggggacaac 120
gtttcgaaag gaacgctaat accgcatacg tcctacggga gaaagcaggg gaccttcggg 180
ccttgcgcta tcagatgagc ctaggtcgga ttagctagtt ggtgaggtaa tggctcacca 240
aggcgacgat ccgtaactgg tctgagagga tgatcagtca cactggaact gagacacggt 300
ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattggaca atgggcgaaa gcctgatcca 360
gccatgccgc gtgtgtgaag aaggtcttcg gattgtaaag cactttaagt tgggaggaag 420
ggcattaacc taatacgtta gtgttttgac gttaccgaca gaataagcac cggctaactc 480
tgtgc 485
<210> 5
<211> 485
<212> DNA
<213> Pseudomonas sp. D26
<400> 5
attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc ggatgamrrg agcttgctcy 60
ykrattcagc ggcggacggg tgagtaatgc ctaggaatct gcctggtagt gggggacaac 120
gtttcgaaag gaacgctaat accgcatacg tcctacggga gaaagcaggg gaccttcggg 180
ccttgcgcta tcagatgagc ctaggtcgga ttagctagtt ggtgaggtaa tggctcacca 240
aggcgacgat ccgtaactgg tctgagagga tgatcagtca cactggaact gagacacggt 300
ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattggaca atgggcgaaa gcctgatcca 360
gccatgccgc gtgtgtgaag aaggtcttcg gattgtaaag cactttaagt tgggaggaag 420
ggcattaacc taatacgtta gtgttttgac gttaccgaca gaataagcac cggctaactc 480
tgtgc 485
<210> 6
<211> 485
<212> DNA
<213> Pseudomonas sp. D29
<400> 6
attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc ggatgaagag agcttgctct 60
ctgattcagc ggcggacggg tgagtaatgc ctaggaatct gcctggtagt gggggacaac 120
gtctcgaaag ggacgctaat accgcatacg tcctacggga gaaagcaggg gaccttcggg 180
ccttgcgcta tcagatgagc ctaggtcgga ttagctagtt ggtgaggtaa tggctcacca 240
aggcgacgat ccgtaactgg tctgagagga tgatcagtca cactggaact gagacacggt 300
ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattggaca atgggcgaaa gcctgatcca 360
gccatgccgc gtgtgtgaag aaggtcttcg gattgtaaag cactttaagt tgggaggaag 420
ggttgtagat taatactctg caattttgac gttaccgaca gaataagcac cggctaactc 480
tgtgc 485
<210> 7
<211> 485
<212> DNA
<213> Pseudomonas sp. D41-2
<400> 7
attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc ggatgargag agcttgctct 60
ctgattcagc ggcggacggg tgagtaatgc ctaggaatct gcctggtagt gggggacaac 120
gtttcgaaag gaacgctaat accgcatacg tcctacggga gaaagcaggg gaccttcggg 180
ccttgcgcta tcagatgagc ctaggtcgga ttagctagtt ggtgaggtaa tggctcacca 240
aggcgacgat ccgtaactgg tctgagagga tgatcagtca cactggaact gagacacggt 300
ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattggaca atgggcgaaa gcctgatcca 360
gccatgccgc gtgtgtgaag aaggtcttcg gattgtaaag cactttaagt tgggaggaag 420
ggttgtagat taatactctg caattttgac gttaccgaca gaataagcac cggctaactc 480
tgtgc 485
<210> 8
<211> 500
<212> DNA
<213> Pseudomonas putida NBRC12996
<400> 8
attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc ggatgacggg agcttgctcc 60
ttgattcagc ggcggacggg tgagtaatgc ctaggaatct gcctggtagt gggggacaac 120
gtttcgaaag gaacgctaat accgcatacg tcctacggga gaaagcaggg gaccttcggg 180
ccttgcgcta tcagatgagc ctaggtcgga ttagctagtt ggtgaggtaa tggctcacca 240
aggcgacgat ccgtaactgg tctgagagga tgatcagtca cactggaact gagacacggt 300
ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattggaca atgggcgaaa gcctgatcca 360
gccatgccgc gtgtgtgaag aaggtcttcg gattgtaaag cactttaagt tgggaggaag 420
ggcagtaagt taataccttg ctgttttgac gttaccgaca gaataagcac cggctaactc 480
tgtgccagca gccgcggtaa 500
<210> 9
<211> 500
<212> DNA
<213> Bacillus sp. G1
<400> 9
gatgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc gaatggattg agagcttgct 60
ctcaagaagt tagcggcgga cgggtgagta acacgtgggt aacctgccca taagactggg 120
ataactccgg gaaaccgggg ctaataccgg ataacatttt gaacygcatg gttcgaaatt 180
gaaaggcggc ttcggctgtc acttatggat ggacccgcgt cgcattagct agttggtgag 240
gtaacggctc accaaggcaa cgatgcgtag ccgacctgag agggtgatcg gccacactgg 300
gactgagaca cggcccagac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cgcaatggac 360
gaaagtctga cggagcaacg ccgcgtgagt gatgaaggct ttcgggtcgt aaaactctgt 420
tgttagggaa gaacaagtgc tagttgaata agctggcacc ttgacggtac ctaaccagaa 480
agccacggct aactacgtgc 500
<210> 10
<211> 500
<212> DNA
<213> Bacillus sp. G2
<400> 10
gatgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc gaatggattr agagcttgct 60
ctyawgaagt tagcggcgga cgggtgagta acacgtgggt aacctgccca taagactggg 120
ataactccgg gaaaccgggg ctaataccgg ataayatttt gaactgcatg gttcgaaatt 180
gaaaggcggc ttcggctgtc acttatggat ggacccgcgt cgcattagct agttggtgag 240
gtaacggctc accaaggcaa cgatgcgtag ccgacctgag agggtgatcg gccacactgg 300
gactgagaca cggcccagac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cgcaatggac 360
gaaagtctga cggagcaacg ccgcgtgagt gatgaaggct ttcgggtcgt aaaactctgt 420
tgttagggaa gaacaagtgc tagttgaata agctggcacc ttgacggtac ctaaccagaa 480
agccacggct aactacgtgc 500
<210> 11
<211> 497
<212> DNA
<213> Bacillus sp. R1
<400> 11
gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc ggacagatgg gagcttgctc 60
cctgaagtca gcggcggacg ggtgagtaac acgtgggcaa cctgcctgta agactgggat 120
aactccggga aaccggggct aataccggat aattctttcc ctcacatgag ggaaagctga 180
aagatggttt cggctatcac ttacagatgg gcccgcggcg cattagctag ttggtgaggt 240
aacggctcac caaggcaacg atgcgtagcc gacctgagag ggtgatcggc cacactggga 300
ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtagg gaatcttccg caatggacga 360
aagtctgacg gagcaacgcc gcgtgagtga tgaaggtttt cggatcgtaa aactctgttg 420
ttagggaaga acaagtrccg gagtaactgc cggtrccttg acggtaccta accagaaagc 480
cacggctaac tacgtgc 497
<210> 12
<211> 500
<212> DNA
<213> Bacillus subtilis NBRC12210
<400> 12
gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc ggacagatgg gagcttgctc 60
cctgatgtta gcggcggacg ggtgagtaac acgtgggtaa cctgcctgta agactgggat 120
aactccggga aaccggggct aataccggat ggttgtttga accgcatggt tcaaacataa 180
aaggtggctt cggctaccac ttacagatgg acccgcggcg cattagctag ttggtgaggt 240
aacggctcac caaggcaacg atgcgtagcc gacctgagag ggtgatcggc cacactggga 300
ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtagg gaatcttccg caatggacga 360
aagtctgacg gagcaacgcc gcgtgagtga tgaaggtttt cggatcgtaa agctctgttg 420
ttagggaaga acaagtaccg ttcgaatagg gcggtacctt gacggtacct aaccagaaag 480
ccacggctaa ctacgtgcca 500
<210> 13
<211> 500
<212> DNA
<213> Bacillus badius ATCC14574
<220>
<221> misc_feature
<222> (203)..(203)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 13
gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc ggacttgacg gaagcttgct 60
tccgttcaag ttagcggcgg acgggtgagt aacacgtggg taacctgcct gtaagactgg 120
gataactccg ggaaaccggg gctaataccg gatattcttt ttcttcgcat gaagaagaat 180
ggaaaggcgg cttttagctg tcncttacag atggacccgc ggcgcattag ctagttggtg 240
aggtaacggc tcaccaaggc aacgatgcgt agccgacctg agagggtgat cggccacact 300
gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccgcaatgg 360
acgaaagtct gacggagcaa cgccgcgtga gtgaagaagg ttttcggatc gtaaagctct 420
gttgtcaggg aagaacaagt acggaagtaa ctgtccgtac cttgacggta cctgaccaga 480
aagccacggc taactacgtg 500
<210> 14
<211> 500
<212> DNA
<213> Bacillus megaterium NBRC15308
<400> 14
gatgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc gaactgatta gaagcttgct 60
tctatgacgt tagcggcgga cgggtgagta acacgtgggc aacctgcctg taagactggg 120
ataacttcgg gaaaccgaag ctaataccgg ataggatctt ctccttcatg ggagatgatt 180
gaaagatggt ttcggctatc acttacagat gggcccgcgg tgcattagct agttggtgag 240
gtaacggctc accaaggcaa cgatgcatag ccgacctgag agggtgatcg gccacactgg 300
gactgagaca cggcccagac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cgcaatggac 360
gaaagtctga cggagcaacg ccgcgtgagt gatgaaggct ttcgggtcgt aaaactctgt 420
tgttagggaa gaacaagtac aagagtaact gcttgtacct tgacggtacc taaccagaaa 480
gccacggcta actacgtgcc 500
<210> 15
<211> 500
<212> DNA
<213> Bacillus simplex ATCC49097
<400> 15
gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc gaatcgatgg gagcttgctc 60
cctgagatta gcggcggacg ggtgagtaac acgtgggcaa cctgcctata agactgggat 120
aacttcggga aaccggagct aataccggat acgttctttt ctcgcatgag agaagatgga 180
aagacggttt acgctgtcac ttatagatgg gcccgcggcg cattagctag ttggtgaggt 240
aatggctcac caaggcgacg atgcgtagcc gacctgagag ggtgatcggc cacactggga 300
ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtagg gaatcttccg caatggacga 360
aagtctgacg gagcaacgcc gcgtgaacga agaaggcctt cgggtcgtaa agttctgttg 420
ttagggaaga acaagtacca gagtaactgc tggtaccttg acggtaccta accagaaagc 480
cacggctaac tacgtgccag 500
<210> 16
<211> 491
<212> DNA
<213> Sphingobacterium sp. B13
<400> 16
gatgaacgct agcggcaggc ctaatacatg caagtcggac gggatccatc ggagagcttg 60
ctcgaagatg gtgagagtgg cgcacgggtg cgtaacgcgt gagcaaccta cctctatcag 120
ggggatagcc tctcgaaaga gagattaaca ccgcataata taatctaccg gcatcgttgg 180
attattaaat atttatagga tagagatggg ctcgcgtgac attagctagt tggtagggta 240
acggcytacc aaggcgacga tgtctagggg ctctgagagg agaatccccc acactggtac 300
tgagacacgg accagactcc tacgggaggc agcagtaagg aatattggtc aatgggcgga 360
agcctgaacc agccatgccg cgtgcaggat gactgcccta tgggttgtaa actgcttttg 420
tccaggaata aacctagata cgagtatcta gctgaatgta ctggaagaat aaggatcggc 480
taactccgtg c 491
<210> 17
<211> 500
<212> DNA
<213> Comamonas terrigena NBRC13299
<400> 17
attgaacgct ggcggcatgc tttacacatg caagtcgaac ggcagcacgg acttcggtct 60
ggtggcgagt ggcgaacggg tgagtaatac atcggaacgt gcccagttgt gggggataac 120
tactcgaaag agtagctaat accgcatgag aactgaggtt gaaagcaggg gatcgcaaga 180
ccttgcgcaa ctggagcggc cgatggcaga ttaggtagtt ggtgggataa aagcttacca 240
agccgacgat ctgtagctgg tctgagagga cgaccagcca cactgggact gagacacggc 300
ccagactcct acgggaggca gcagtgggga attttggaca atgggcgaaa gcctgatcca 360
gcaatgccgc gtgcaggatg aaggccttcg ggttgtaaac tgcttttgta cggaacgaaa 420
agcttcgggt taataccctg gagtcatgac ggtaccgtaa gaataagcac cggctaacta 480
cgtgccagca gccgcggtaa 500
<210> 18
<211> 500
<212> DNA
<213> Brevundimonas diminuta ATCC11568
<220>
<221> misc_feature
<222> (387)..(387)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 18
agcgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgaac ggacccttcg gggttagtgg 60
cggacgggtg agtaacacgt gggaacgtgc ctttaggttc ggaatagctc ctggaaacgg 120
gtggtaatgc cgaatgtgcc cttcggggga aagatttatc gcctttagag cggcccgcgt 180
ctgattagct agttggtgag gtaacggctc accaaggcga cgatcagtag ctggtctgag 240
aggatgacca gccacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga ggcagcagtg 300
gggaatcttg cgcaatgggc gaaagcctga cgcagccatg ccgcgtgaat gatgaaggtc 360
ttaggattgt aaaattcttt caccggngac gataatgacg gtacccggag aagaagcccc 420
ggctaacttc gtgccagcag ccgcggtaat acgaaggggg ctagcgttgc tcggaattac 480
tgggcgtaaa gggcgcgtag 500
<210> 19
<211> 500
<212> DNA
<213> Brevundimonas vesicularis ATCC11426
<400> 19
agcgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgaac gaactcttcg gagttagtgg 60
cggacgggtg agtaacacgt gggaacgtgc ctttaggttc ggaataactc agggaaactt 120
gtgctaatac cgaatgtgcc cttcggggga aagatttatc gcctttagag cggcccgcgt 180
ctgattagct agttggtgag gtaaaggctc accaaggcga cgatcagtag ctggtctgag 240
aggatgatca gccacattgg gactgagaca cggcccaaac tcctacggga ggcagcagtg 300
gggaatcttg cgcaatgggc gaaagcctga cgcagccatg ccgcgtgaat gatgaaggtc 360
ttaggattgt aaaattcttt caccggggac gataatgacg gtacccggag aagaagcccc 420
ggctaacttc gtgccagcag ccgcggtaat acgaaggggg ctagcgttgc tcggaattac 480
tgggcgtaaa gggagcgtag 500
<210> 20
<211> 500
<212> DNA
<213> Brevundimonas subvibrioides NBRC16000
<400> 20
agcgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgaac ggacctctcg gggttagtgg 60
cggacgggtg agtaacacgt gggaacgtgc cttttggttc ggaatagctc ctggaaacgg 120
gtggtaatgc cgaatgtgcc ctttggggga aagatttatc gccattagag cggcccgcgt 180
ctgattagct agttggtgag gtaaaggctc accaaggcta cgatcagtag ctggtctgag 240
aggatgacca gccacattgg gactgagaca cggcccaaac tcctacggga ggcagcagtg 300
gggaatcttg cgcaatgggc gaaagcctga cgcagccatg ccgcgtgtat gatgaaggtc 360
ttaggattgt aaaatacttt caccggtgaa gataatgact gtagccggag aagaagcccc 420
ggctaacttc gtgccagcag ccgcggtaat acgaaggggg ctagcgttgc tcggaattac 480
tgggcgtaaa gggagcgtag 500
<210> 21
<211> 500
<212> DNA
<213> Sphingomonas paucimobilis NBRC13935
<220>
<221> misc_feature
<222> (268)..(268)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 21
aacgaacgct ggcggcatgc ctaacacatg caagtcgaac gaaggcttcg gccttagtgg 60
cgcacgggtg cgtaacgcgt gggaatctgc ccttaggttc ggaataacag ctggaaacgg 120
ctgctaatac cggatgatat cgcgagatca aagatttatc gcctgaggat gagcccgcgt 180
tggattaggt agttggtggg gtaaaggcct accaagccga cgatccatag ctggtctgag 240
aggatgatca gccacactgg gactgagnca cggcccagac tcctacggga ggcagcagtg 300
gggaatattg gacaatgggc gaaagcctga tccagcaatg ccgcgtgagt gatgaaggcc 360
ctagggttgt aaagctcttt tacccgggaa gataatgact gtaccgggag aataagcccc 420
ggctaactcc gtgccagcag ccgcggtaat acggaggggg ctagcgttgt tcggaattac 480
tgggcgtaaa gcgcacgtag 500
<210> 22
<211> 500
<212> DNA
<213> Ochrobactrum sp. NBRC12951
<400> 22
aacgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgagc gccccgcaag gggagcggca 60
gacgggtgag taacgcgtgg gaacgtacct tttgctacgg aataactcag ggaaacttgt 120
gctaataccg tatgtgccct tcgggggaaa gatttatcgg caaaggatcg gcccgcgttg 180
gattagctag ttggtgaggt aaaggctcac caaggcgacg atccatagct ggtctgagag 240
gatgatcagc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg 300
gaatattgga caatgggcgc aagcctgatc cagccatgcc gcgtgagtga tgaaggccct 360
agggttgtaa agctctttca ccggtgaaga taatgacggt aaccggagaa gaagccccgg 420
ctaacttcgt gccagcagcc gcggtaatac gaagggggct agcgttgttc ggatttactg 480
ggcgtaaagc gcacgtaggc 500
<210> 23
<211> 500
<212> DNA
<213> Ochrobactrum intermedium NBRC15820
<400> 23
aacgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgagc gccccgcaag gggagcggca 60
gacgggtgag taacgcgtgg gaacgtacca tttgctacgg aataactcag ggaaacttgt 120
gctaataccg tatgtgcccg aaaggggaaa gatttatcgg caaatgatcg gcccgcgttg 180
gattagctag ttggtggggt aaaggcctac caaggcgacg atccatagct ggtctgagag 240
gatgatcagc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg 300
gaatattgga caatgggcgc aagcctgatc cagccatgcc gcgtgagtga tgaaggccct 360
agggttgtaa agctctttca ccggtgaaga taatgacggt aaccggagaa gaagccccgg 420
ctaacttcgt gccagcagcc gcggtaatac gaagggggct agcgttgttc ggatttactg 480
ggcgtaaagc gcacgtaggc 500
<210> 24
<211> 500
<212> DNA
<213> Ochrobactrum intermedium NBRC13694
<400> 24
aacgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgagc gccccgcaag gggagcggca 60
gacgggtgag taacgcgtgg gaacgtacct tttgctacgg aataactcag ggaaacttgt 120
gctaataccg tatgtgccct tcgggggaaa gatttatcgg caaaggatcg gcccgcgttg 180
gattagctag ttggtgaggt aaaggctcac caaggcgacg atccatagct ggtctgagag 240
gatgatcagc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg 300
gaatattgga caatgggcgc aagcctgatc cagccatgcc gcgtgagtga tgaaggccct 360
agggttgtaa agctctttca ccggtgaaga taatgacggt aaccggagaa gaagccccgg 420
ctaacttcgt gccagcagcc gcggtaatac gaagggggct agcgttgttc ggatttactg 480
ggcgtaaagc gcacgtaggc 500
<210> 25
<211> 500
<212> DNA
<213> Ochrobactrum grignonense NBRC102586
<400> 25
aacgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgagc gcctcgcaag aggagcggca 60
gacgggtgag taacgcgtgg gaatctacct tttgctacgg aataactcag ggaaacttgt 120
gctaataccg tatgtgccct tttggggaaa gatttatcgg caaaggatga gcccgcgttg 180
gattagctag ttggtagggt aatggcctac caaggcgacg atccatagct ggtctgagag 240
gatgatcagc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg 300
gaatattgga caatgggcgc aagcctgatc cagccatgcc gcgtgagtga tgaaggccct 360
agggttgtaa agctctttca ccggtgaaga taatgacggt aaccggagaa gaagccccgg 420
ctaacttcgt gccagcagcc gcggtaatac gaagggggct agcgttgttc ggatttactg 480
ggcgtaaagc gcacgtaggc 500
<210> 26
<211> 500
<212> DNA
<213> Ochrobactrum lupini NBRC102587
<400> 26
aacgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgagc gccccgcaag gggagcggca 60
gacgggtgag taacgcgtgg gaacgtacct tttgctacgg aataactcag ggaaacttgt 120
gctaataccg tatgtgccct tcgggggaaa gatttatcgg caaaggatcg gcccgcgttg 180
gattagctag ttggtgaggt aaaggctcac caaggcgacg atccatagct ggtctgagag 240
gatgatcagc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg 300
gaatattgga caatgggcgc aagcctgatc cagccatgcc gcgtgagtga tgaaggccct 360
agggttgtaa agctctttca ccggtgaaga taatgacggt aaccggagaa gaagccccgg 420
ctaacttcgt gccagcagcc gcggtaatac gaagggggct agcgttgttc ggatttactg 480
ggcgtaaagc gcacgtaggc 500
<210> 27
<211> 500
<212> DNA
<213> Pedobacter heparinus NBRC12017
<400> 27
gatgaacgct agcggcaggc ctaatacatg caagtcgaac gagattaagg ggcttgctcc 60
ttatgaaagt ggcgcacggg tgcgtaacgc gtatgcaacc taccttaatc agggggatag 120
cccgaagaaa ttcggattaa caccgcataa aaacacagga tagcattatc caatgttcaa 180
atatttatag gattaagatg ggcatgcgtg tcattagcta gttggcgggg taacggccca 240
ccaaggcgac gatgactagg ggatctgaga ggatgacccc ccacactggt actgagacac 300
ggaccagact cctacgggag gcagcagtaa ggaatattgg tcaatggagg gaactctgaa 360
ccagccatgc cgcgtgcagg aagacagccc tctgggtcgt aaactgcttt tattcgggaa 420
taaacctact tacgtgtaag tagctgaatg taccgaagga ataaggatcg gctaactccg 480
tgccagcagc cgcggtaata 500
<210> 28
<211> 500
<212> DNA
<213> Paenibacillus sp. NBRC13157
<220>
<221> misc_feature
<222> (66)..(66)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (70)..(70)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (157)..(157)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (162)..(162)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (174)..(174)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 28
gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc ggacttgaag agaagcttgc 60
ttctcngatn gttagcggcg gacgggtgag taacacgtag gcaacctgcc tgtaagatcg 120
ggataactac cggaaacggt agctaagacc ggataancgg tntctccgca tggngagatc 180
gtgaaacacg gagcaatctg tggcttacgg atgggcctgc ggcgcattag ctagttggtg 240
aggtaacggc tcaccaaggc gacgatgcgt agccgacctg agagggtgaa cggccacact 300
gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccgcaatgg 360
acgcaagtct gacggagcaa cgccgcgtga gtgatgaagg ttttcggatc gtaaagctct 420
gttgccaggg aagaacgcca aggagagtaa ctgctctttg ggtgacggta cctgagaaga 480
aagccccggc taactacgtg 500
<210> 29
<211> 500
<212> DNA
<213> Achromobacter denitrificans NBRC12669
<400> 29
attgaacgct agcgggatgc cttacacatg caagtcgaac ggcagcacgg acttcggtct 60
ggtggcgagt ggcgaacggg tgagtaatgt atcggaacgt gcccagtagc gggggataac 120
tacgcgaaag cgtagctaat accgcatacg ccctacgggg gaaagcaggg gatcgcaaga 180
ccttgcacta ttggagcggc cgatatcgga ttagctagtt ggtggggtaa cggctcacca 240
aggcgacgat ccgtagctgg tttgagagga cgaccagcca cactgggact gagacacggc 300
ccagactcct acgggaggca gcagtgggga attttggaca atgggggaaa ccctgatcca 360
gccatcccgc gtgtgcgatg aaggccttcg ggttgtaaag cacttttggc aggaaagaaa 420
cgtcgcgggt taataccccg cggaactgac ggtacctgca gaataagcac cggctaacta 480
cgtgccagca gccgcggtaa 500
<210> 30
<211> 500
<212> DNA
<213> Acinetobacter haemolyticus ATCC17906
<400> 30
cctggctcag attgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgagc ggggaagggt 60
accttgctac ctaacctagc ggcggacggg tgagtaatgc ttaggaatct gcctattagt 120
gggggacaac attccgaaag gaatgctaat accgcatacg tcctacggga gaaagcaggg 180
gatcttcgga ccttgcgcta atagatgagc ctaagtcgga ttagctagtt ggtggggtaa 240
aggcctacca aggcgacgat ctgtagcggg tctgagagga tgatccgcca cactgggact 300
gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattggaca atgggcggaa 360
gcctgatcca gccatgccgc gtgtgtgaag aaggcctttt ggttgtaaag cactttaagc 420
gaggaggagg ctactctagt taatacctag agatagtgga cgttactcgc agaataagca 480
ccggctaact ctgtgccagc 500
<210> 31
<211> 500
<212> DNA
<213> Acinetobacter junii ATCC17908
<220>
<221> misc_feature
<222> (371)..(371)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 31
cctggctcag attgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgagc ggagatgagg 60
tgcttgcacc ttatcttagc ggcggacggg tgagtaatgc ttaggaatct gcctattagt 120
gggggacaac attccgaaag gaatgctaat accgcatacg tcctacggga gaaagcaggg 180
gatcttcgga ccttgcgcta atagatgagc ctaagtcgga ttagctagtt ggtggggtaa 240
aggcctacca aggcgacgat ctgtagcggg tctgagagga tgatccgcca cactgggact 300
gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattggaca atggggggaa 360
ccctgatcca nccatgccgc gtgtgtgaag aaggccttat ggttgtaaag cactttaagc 420
gaggaggagg ctactgagac taatactctt ggatagtgga cgttactcgc agaataagca 480
ccggctaact ctgtgccagc 500
<210> 32
<211> 500
<212> DNA
<213> Shewanella fodinae NBRC105216
<220>
<221> misc_feature
<222> (237)..(237)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 32
attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc ggcagcgggg agtagcttgc 60
tactctgccg gcgagcggcg gacgggtgag taatgcctgg gaatttgccc attcgagggg 120
gataacagtt ggaaacgact gctaataccg catacgccct aagggggaaa gcaggggaac 180
ttaggtcctt gcgcgaatgg ataagcccag gtgggattag ctagttggtg aggtaanggc 240
tcaccaaggc gacgatctct agctggtctg agaggatgat cagccacact ggaactgaga 300
cacggtccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tgcacaatgg gggaaaccct 360
gatgcagcca tgccgcgtgt gtgaagaagg ccttcgggtt gtaaagcact ttcagtcagg 420
aggaaggtgg tgtagctaat atctgcacca attgacgtta ctgacagaag aagcaccggc 480
taactccgtg ccagcagccg 500
<210> 33
<211> 500
<212> DNA
<213> Listonella anguillarum ATCC19264
<400> 33
attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc ggcagcacag aggaacttgt 60
tccttgggtg gcgagcggcg gacgggtgag taatgcctag gaaattgccc tgatgtgggg 120
gataaccatt ggaaacgatg gctaataccg catgatgcct acgggccaaa gagggggacc 180
ttcgggcctc tcgcgtcagg atatgcctag gtgggattag ctagttggtg aggtaatggc 240
tcaccaaggc gacgatccct agctggtctg agaggatgat cagccacact ggaactgaga 300
cacggtccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tgcacaatgg gcgcaagcct 360
gatgcagcca tgccgcgtgt atgaagaagg ccttcgggtt gtaaagtact ttcagtcgtg 420
aggaaggtgg tgttgttaat agcagcatca tttgacgtta gcgacagaag aagcaccggc 480
taactccgtg ccagcagccg 500
<210> 34
<211> 500
<212> DNA
<213> Agrobacterium luteum NBRC15768T
<400> 34
aacgaacgct ggcggcatgc ttaacacatg caagtcgaac gagatcttcg gatctagtgg 60
cgcacgggtg cgtaacgcgt ggggatctac catagggtgc ggaataactc agagaaattt 120
gagctaatac cgcataatgt cttcggacca aagatttatc gccctttgat gaacccgcgt 180
aggattagct tgttggtgag gtaagagctc accaaggcga cgatctttag ctggtctgag 240
aggatgatca gccacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga ggcagcagtg 300
gggaatattg gacaatgggc gaaagcctga tccagcaatg ccgcgtgagt gatgaaggcc 360
ttagggttgt aaagctcttt taccagggat gataatgaca gtacctggag aataagctcc 420
ggctaactcc gtgccagcag ccgcggtaat acggagggag ctagcgttgt tcggaattac 480
tgggcgtaaa gcgcgcgtag 500
<210> 35
<211> 500
<212> DNA
<213> Mesorhizobium loti ATCC700743
<400> 35
aacgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgagc gcctcgcaag aggagcggca 60
gacgggtgag taacgcgtgg gaatctaccc atctctacgg aacaactccg ggaaactgga 120
gctaataccg tatacgtcct tcgggagaaa gatttatcgg agatggatga gcccgcgttg 180
gattagctag ttggtggggt aatggcctac caaggcgacg atccatagct ggtctgagag 240
gatgatcagc cacattggga ctgagacacg gcccaaactc ctacgggagg cagcagtggg 300
gaatattgga caatgggcga aagcctgatc cagccatgcc gcgtgagtga tgaaggccct 360
agggttgtaa agctctttca acggtgaaga taatgacggt aaccgtagaa gaagccccgg 420
ctaacttcgt gccagcagcc gcggtaatac gaagggggct agcgttgttc ggaattactg 480
ggcgtaaagc gcacgtaggc 500
<210> 36
<211> 500
<212> DNA
<213> Rhizobium leguminosarum ATCC10004
<400> 36
aacgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgagc gccccgcaag gggagcggca 60
gacgggtgag taacgcgtgg gaacgtaccc tttactacgg aataacgcag ggaaacttgt 120
gctaataccg tatgtgccct ttgggggaaa gatttatcgg taaaggatcg gcccgcgttg 180
gattagctag ttggtggggt aaaggcctac caaggcgacg atccatagct ggtctgagag 240
gatgatcagc cacattggga ctgagacacg gcccaaactc ctacgggagg cagcagtggg 300
gaatattgga caatgggcgc aagcctgatc cagccatgcc gcgtgagtga tgaaggccct 360
agggttgtaa agctctttca ccggagaaga taatgacggt atccggagaa gaagccccgg 420
ctaacttcgt gccagcagcc gcggtaatac gaagggggct agcgttgttc ggaattactg 480
ggcgtaaagc gcacgtaggc 500
<210> 37
<211> 500
<212> DNA
<213> Paracoccus aminophilus NBRC16710
<400> 37
aacgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc gcgcccttcg gggtgagcgg 60
cggacgggtg agtaacacgt gggaacatac ccttttctac ggaatagcct cgggaaactg 120
agagtaatac cgtatacgcc cttcggggga aagatttatc ggagaaggat tggcccgcgt 180
tggattaggt agttggtggg gtaatggcct accaagccga cgatccatag ctggtttgag 240
aggatgatca gccacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga ggcagcagtg 300
gggaatctta gacaatgggg gcaaccctga tctagccatg ccgcgtgagt gatgaaggcc 360
ttagggttgt aaagctcttt cagctgggaa gataatgacg gtaccagcag aagaagcccc 420
ggctaactcc gtgccagcag ccgcggtaat acggaggggg ctagcgttgt tcggaattac 480
tgggcgtaaa gcgcacgtag 500
<210> 38
<211> 500
<212> DNA
<213> Xanthobacter autotrophicus ATCC35674
<400> 38
agcgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc gcccagcaat gggagcggca 60
gacgggtgag taacacgtgg ggatctaccc aatggtacgg aataacccag ggaaacttgg 120
actaataccg tatgtgccct tcgggggaaa gatttatcgc cattggatga acccgcgtcg 180
gattagctag ttggtgaggt aaaggctcac caaggcgacg atccgtagct ggtctgagag 240
gatgatcagc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg 300
gaatattgga caatgggcgc aagcctgatc cagccatgcc gcgtgtgtga tgaaggcctt 360
agggttgtaa agcactttcg ccggtgaaga taatgacggt aaccggagaa gaagccccgg 420
ctaacttcgt gccagcagcc gcggtaatac gaagggggca agcgttgctc ggaatcactg 480
ggcgtaaagc gcacgtaggc 500
<210> 39
<211> 500
<212> DNA
<213> Streptomyces griseus NBRC13350
<400> 39
acgaacgctg gcggcgtgct taacacatgc aagtcgaacg atgaagcctt tcggggtgga 60
ttagtggcga acgggtgagt aacacgtggg caatctgccc ttcactctgg gacaagccct 120
ggaaacgggg tctaataccg gataacactc tgtcccgcat gggacggggt taaaagctcc 180
ggcggtgaag gatgagcccg cggcctatca gcttgttggt ggggtaatgg cctaccaagg 240
cgacgacggg tagccggcct gagagggcga ccggccacac tgggactgag acacggccca 300
gactcctacg ggaggcagca gtggggaata ttgcacaatg ggcgaaagcc tgatgcagcg 360
acgccgcgtg agggatgacg gccttcgggt tgtaaacctc tttcagcagg gaagaagcga 420
gagtgacggt acctgcagaa gaagcgccgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac 480
gtagggcgca agcgttgtcc 500
<210> 40
<211> 500
<212> DNA
<213> Geobacillus stearothermophilus NBRC12983
<220>
<221> misc_feature
<222> (462)..(462)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 40
gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc ggaccggatt ggggcttgcc 60
ttgattcggt cagcggcgga cgggtgagta acacgtgggc aacctgcccg caagaccggg 120
ataactccgg gaaaccggag ctaataccgg ataacaccga agaccgcatg gtcttcggtt 180
gaaaggcggc ctttgggctg tcacttgcgg atgggcccgc ggcgcattag ctagttggtg 240
aggtaacggc tcaccaaggc gacgatgcgt agccggcctg agagggtgac cggccacact 300
gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccgcaatgg 360
gcgaaagcct gacggagcga cgccgcgtga gcgaagaagg ccttcgggtc gtaaagctct 420
gttgtgaggg acgaaggagc gccgttcgaa gagggcggcg cngtgacggt acctcacgag 480
aaagccccgg ctaactacgt 500
<210> 41
<211> 1520
<212> DNA
<213> Rhodococcus erythropolis PR4
<400> 41
tcaacggaga gtttgatcct ggctcaggac gaacgctggc ggcgtgctta acacatgcaa 60
gtcgagcggt aaggcctttc ggggtacacg agcggcgaac gggtgagtaa cacgtgggtg 120
atctgccctg cacttcggga taagcctggg aaactgggtc taataccgga tatgacctca 180
ggttgcatga cttggggtgg aaagatttat cggtgcagga tgggcccgcg gcctatcagc 240
ttgttggtgg ggtaatggcc taccaaggcg acgacgggta gccgacctga gagggtgacc 300
ggccacactg ggactgagac acggcccaga ctcctacggg aggcagcagt ggggaatatt 360
gcacaatggg cgaaagcctg atgcagcgac gccgcgtgag ggatgacggc cttcgggttg 420
taaacctctt tcagcaggga cgaagcgcaa gtgacggtac ctgcagaaga agcaccggct 480
aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt agggtgcaag cgttgtccgg aattactggg 540
cgtaaagagt tcgtaggcgg tttgtcgcgt cgtttgtgaa aaccagcagc tcaactgctg 600
gcttgcaggc gatacgggca gacttgagta ctgcagggga gactggaatt cctggtgtag 660
cggtgaaatg cgcagatatc aggaggaaca ccggtggcga aggcgggtct ctgggcagta 720
actgacgctg aggaacgaaa gcgtgggtag cgaacaggat tagataccct ggtagtccac 780
gccgtaaacg gtgggcgcta ggtgtgggtt ccttccacgg aatccgtgcc gtagctaacg 840
cattaagcgc cccgcctggg gagtacggcc gcaaggctaa aactcaaagg aattgacggg 900
ggcccgcaca agcggcggag catgtggatt aattcgatgc aacgcgaaga accttacctg 960
ggtttgacat ataccggaaa gctgcagaga tgtggccccc cttgtggtcg gtatacaggt 1020
ggtgcatggc tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc 1080
aacccctatc ttatgttgcc agcacgttat ggtggggact cgtaagagac tgccggggtc 1140
aactcggagg aaggtgggga cgacgtcaag tcatcatgcc ccttatgtcc agggcttcac 1200
acatgctaca atggccagta cagagggctg cgagaccgtg aggtggagcg aatcccttaa 1260
agctggtctc agttcggatc ggggtctgca actcgacccc gtgaagtcgg agtcgctagt 1320
aatcgcagat cagcaacgct gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc 1380
acgtcatgaa agtcggtaac acccgaagcc ggtggcttaa ccccttgtgg gagggagccg 1440
tcgaaggtgg gatcggcgat tgggacgaag tcgtaacaag gtagccgtac cggaaggtgc 1500
ggctggatca cctcctttct 1520
<210> 42
<211> 572
<212> DNA
<213> Saccharomyces cerevisiae NBRC1136
<400> 42
aaaccaaccg ggattgcctt agtaacggcg agtgaagcgg caaaagctca aatttgaaat 60
ctggtacctt cggtgcccga gttgtaattt ggagagggca actttggggc cgttccttgt 120
ctatgttcct tggaacagga cgtcatagag ggtgagaatc ccgtgtggcg aggagtgcgg 180
ttctttgtaa agtgccttcg aagagtcgag ttgtttggga atgcagctct aagtgggtgg 240
taaattccat ctaaagctaa atattggcga gagaccgata gcgaacaagt acagtgatgg 300
aaagatgaaa agaactttga aaagagagtg aaaaagtacg tgaaattgtt gaaagggaag 360
ggcatttgat cagacatggt gttttgtgcc ctctgctcct tgtgggtagg ggaatctcgc 420
atttcactgg gccagcatca gttttggtgg caggataaat ccataggaat gtagcttgcc 480
tcggtaagta ttatagcctg tgggaatact gccagctggg actgaggact gcgacgtaag 540
tcaaggatgc tggcataatg gttatatgcc gc 572
<210> 43
<211> 572
<212> DNA
<213> Saccaromyces cerevisiae NBRC2347
<400> 43
aaaccaaccg ggattgcctt agtaacggcg agtgaagcgg caaaagctca aatttgaaat 60
ctggtacctt cggtgcccga gttgtaattt ggagagggca actttggggc cgttccttgt 120
ctatgttcct tggaacagga cgtcatagag ggtgagaatc ccgtgtggcg aggagtgcgg 180
ttctttgtaa agtgccttcg aagagtcgag ttgtttggga atgcagctct aagtgggtgg 240
taaattccat ctaaagctaa atattggcga gagaccgata gcgaacaagt acagtgatgg 300
aaagatgaaa agaactttga aaagagagtg aaaaagtacg tgaaattgtt gaaagggaag 360
ggcatttgat cagacatggt gttttgtgcc ctctgctcct tgtgggtagg ggaatctcgc 420
atttcactgg gccagcatca gttttggtgg caggataaat ccataggaat gtagcttgcc 480
tcggtaagta ttatagcctg tgggaatact gccagctggg actgaggact gcgacgtaag 540
tcaaggatgc tggcataatg gttatatgcc gc 572
<210> 44
<211> 568
<212> DNA
<213> Saccharomyces paradoxus NBRC10609
<400> 44
aaaccaaccg ggattgcctt agtaacggcg agtgaagcgg caaaagctca aatttgaaat 60
ctggtacctt cggtgcccga gttgtaattt ggagagggca actttggggc cgttccttgt 120
ctatgttcct tggaacagga cgtcatagag ggtgagaatc ccgtgtggcg aggagtgcgg 180
ttctatgtaa agtgccttcg aagagtcgag ttgtttggga atgcagctct aagtgggtgg 240
taaattccat ctaaagctaa atattggcga gagaccgata gcgaacaagt acagtgatgg 300
aaagatgaaa agaactttga aaagagagtg aaaaagtacg tgaaattgtt gaaagggaag 360
ggcatttgat cagacatggt gttttgtgcc ctctgctcct tgtgggtagg ggaatctcgc 420
atttcactgg gccagcatca gttttggtgg caggataaat ccgtaggaat gtaacttgct 480
tcgggaagta ttatagcctg cgggaatact gccagctggg actgaggact gcgacgtaag 540
tcaaggatgc tggcataatg gttatatg 568
<210> 45
<211> 577
<212> DNA
<213> Candida utilis NBRC1086
<400> 45
aaaccaacag ggattgcctc agtaacggcg agtgaagcgg caaaagctca aatttgaaat 60
ctgaggctct cagcccccga gttgtaattt gaagatggtg ttctggcgcc ggccccctgt 120
ctacgttcct tggaacagga catcacagag ggtgagaatc ccgtctggcg gggcggcctg 180
gctccgtgta gagcgccatc gacgagtcga gttgtttggg aatgcagctc taagtgggtg 240
gtaaattcca tctaaagcta aatattggcg agagaccgat agcgaacaag tacagtgatg 300
gaaagatgaa aagaactttg aaaagagagt gaaaaagtac gtgaaattgt tgaaagggaa 360
gggtattgga tcagacttgg tgctgtgcga atagcggctc ttcttgggcc gcccactcgc 420
actccaccgg gccagcatcg gtttgggcgg caagacaatg gcgggggaac gtggcactgc 480
tctcgggcag tgtgtttata gcccccgctg atgttgcctg cctagaccga ggactgcggc 540
ttctgcctag gatgctggcg taatgatcca acaccgc 577
<210> 46
<211> 569
<212> DNA
<213> Candida parapsilosis ATCC22019
<400> 46
aaaccaacag ggattgcctt agtagcggcg agtgaagcgg caaaagctca aatttgaaat 60
ctggcacttt cagtgtccga gttgtaattt gaagaaggta tctttgggtc tggctcttgt 120
ctatgtttct tggaacagaa cgtcacagag ggtgagaatc ccgtgcgatg agatgtccca 180
gacctatgta aagttccttc gaagagtcga gttgtttggg aatgcagctc taagtgggtg 240
gtaaattcca tctaaagcta aatattggcg agagaccgat agcgaacaag tacagtgatg 300
gaaagatgaa aagaactttg aaaagagagt gaaaaagtac gtgaaattgt tgaaagggaa 360
gggcttgaga tcagacttgg tattttgtat gttactctct cgggggtggc ctctacagtt 420
taccgggcca gcatcagttt gagcggtagg ataagtgcaa agaaatgtgg cactgcttcg 480
gtagtgtgtt atagtctttg tcgatactgc cagcttagac tgaggactgc ggcttcggcc 540
taggatgttg gcataatgat cttaagtcg 569
<210> 47
<211> 571
<212> DNA
<213> Aspergillus niger ATCC6275
<400> 47
aaaccaaccg ggattgcctc agtaacggcg agtgaagcgg caagagctca aatttgaaag 60
ctggctcctt cggagtccgc attgtaattt gcagaggatg ctttgggtgc ggcccccgtc 120
taagtgccct ggaacgggcc gtcagagagg gtgagaatcc cgtcttgggc ggggtgtccg 180
tgcccgtgta aagctccttc gacgagtcga gttgtttggg aatgcagctc taaatgggtg 240
gtaaatttca tctaaagcta aatactggcc ggagaccgat agcgcacaag tagagtgatc 300
gaaagatgaa aagcactttg aaaagagagt taaacagcac gtgaaattgt tgaaagggaa 360
gcgcttgcga ccagactcgc ccgcggggtt cagccggcat tcgtgccggt gtacttcccc 420
gtgggcgggc cagcgtcggt ttgggcggcc ggtcaaaggc ccctggaatg tagtgccctc 480
cggggcacct tatagccagg ggtgcaatgc ggccagcctg gaccgaggaa cgcgcttcgg 540
cacggacgct ggcataatgg tcgtaaacga c 571
<210> 48
<211> 556
<212> DNA
<213> Aspergillus flavus NBRC8558
<400> 48
gcggaaggat cattaccgag tgtagggttc ctagcgagcc caacctccca cccgtgttta 60
ctgtacctta gttgcttcgg cgggcccgcc attcatggcc gccgggggct ctcagccccg 120
ggcccgcgcc cgccggagac accacgaact ctgtctgatc tagtgaagtc tgagttgatt 180
gtatcgcaat cagttaaaac tttcaacaat ggatctcttg gttccggcat cgatgaagaa 240
cgcagcgaaa tgcgataact agtgtgaatt gcagaattcc gtgaatcatc gagtctttga 300
acgcacattg cgccccctgg tattccgggg ggcatgcctg tccgagcgtc attgctgccc 360
atcaagcacg gcttgtgtgt tgggtcgtcg tcccctctcc gggggggacg ggccccaaag 420
gcagcggcgg caccgcgtcc gatcctcgag cgtatggggc tttgtcaccc gctctgtagg 480
cccggccggc gcttgccgaa cgcaaatcaa tctttttcca ggttgacctc ggatcaggta 540
gggatacccg ctgaac 556
<210> 49
<211> 554
<212> DNA
<213> Aspergillus oryzae NBRC4255
<400> 49
tgaacctgcg gaaggatcat taccgagtgt agggttccta gcgagcccaa cctcccaccc 60
gtgtttactg taccttagtt gcttcggcgg gcccgccatt catggccgcc gggggctctc 120
agccccgggc ccgcgcccgc cggagacacc acgaactctg tctgatctag tgaagtctga 180
gttgattgta tcgcaatcag ttaaaacttt caacaatgga tctcttggtt ccggcatcga 240
tgaagaacgc agcgaaatgc gataactagt gtgaattgca gaattccgtg aatcatcgag 300
tctttgaacg cacattgcgc cccctggtat tccggggggc atgcctgtcc gagcgtcatt 360
gctgcccatc aagcacggct tgtgtgttgg gtcgtcgtcc cctctccggg ggggacgggc 420
cccaaaggca gcggcggcac cgcgtccgat cctcgagcgt atggggcttt gtcacccgct 480
ctgtaggccc ggccggcgct tgccgaacgc aaatcaatct tttccaggtt gacctcggat 540
caggtaggga tacc 554
<210> 50
<211> 387
<212> PRT
<213> Pseudomonas aeruginosa PAO1 Acd1
<400> 50
Met Asp Phe Asp Leu Thr Glu Glu Gln Arg Leu Leu Val Glu Ser Ala
1 5 10 15
Arg Ala Phe Ala Arg His Glu Leu Ala Pro Lys Ala Ala Asp Trp Asp
20 25 30
Arg Asp His His Phe Pro Val Glu Val Ile Arg Ala Ala Ala Glu Gln
35 40 45
Gly Tyr Leu Gly Leu Tyr Ile Ala Glu Glu Asp Gly Gly Leu Gly Leu
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Thr Ser Leu Ile Phe Glu Gln Leu Ala Ala Gly Cys
65 70 75 80
Val Ala Thr Thr Ala Tyr Ile Ser Ile His Asn Met Ala Ala Trp Met
85 90 95
Leu Ala Ser Phe Gly Asp Ala Ala Leu Lys Glu Ala Trp Leu Pro Gly
100 105 110
Leu Ile Gly Gly Glu Ser Leu Ala Ser Tyr Cys Leu Thr Glu Pro Asp
115 120 125
Ala Gly Ser Asp Ala Ala Arg Leu Arg Thr Arg Ala Arg Arg Glu Gly
130 135 140
Asp Glu Tyr Val Leu Asp Gly Ser Lys Cys Phe Ile Ser Gly Ala Gly
145 150 155 160
Ser Thr Gln Val Leu Ile Val Met Ala Arg Thr Gly Glu Asp Gly Ala
165 170 175
Arg Gly Ile Ser Cys Phe Leu Val Pro Ala Asp Ala Pro Gly Ile Arg
180 185 190
Tyr Gly Arg Asn Glu Asp Lys Met Gly Trp Arg Ala Gln Pro Thr Arg
195 200 205
Thr Ile Thr Phe Glu Gly Val Arg Ile Pro Ala Gly Asn Arg Ile Gly
210 215 220
Pro Glu Gly Gln Gly Phe Val Tyr Ala Met Lys Gly Leu Asp Gly Gly
225 230 235 240
Arg Leu Asn Ile Ala Ser Cys Ser Leu Gly Ala Ala Gln Ala Ala Leu
245 250 255
Glu Gln Ser Met Arg Tyr Val Glu Glu Arg Glu Gln Phe Gly Lys Pro
260 265 270
Leu Ala Thr Phe Gln Ala Leu Gln Phe Lys Leu Ala Asp Met Leu Thr
275 280 285
Glu Leu Thr Ala Ser Arg Gln Met Val Arg Leu Gly Ala His Arg Leu
290 295 300
Asp Arg Gly Asp Ala Glu Ala Thr Leu Tyr Cys Ala Met Ala Lys Arg
305 310 315 320
Phe Ala Thr Asp Arg Cys Phe Asp Val Cys Asn Glu Ala Leu Gln Leu
325 330 335
His Gly Gly Tyr Gly Tyr Leu Asn Asp Tyr Pro Leu Glu Arg Trp Val
340 345 350
Arg Asp Thr Arg Val His Gln Ile Leu Glu Gly Thr Asn Glu Ile Met
355 360 365
Arg Val Ile Val Ala Arg Arg Leu Leu Glu Gln Gly Gly Met Leu Asp
370 375 380
Arg Leu Leu
385
<210> 51
<211> 1164
<212> DNA
<213> Pseudomonas aeruginosa PAO1 Acd1
<400> 51
atggatttcg acctcaccga agaacaacgc ctgctggtgg agagcgcccg cgccttcgcc 60
cgccacgaac tggcgccgaa ggcggccgac tgggaccgcg accatcactt cccggtggaa 120
gtcatccgcg ccgccgccga acagggctac ctcggcctgt acatcgccga ggaagacggc 180
ggcctgggcc tgtcgcggct gtccacttcg ctgatcttcg agcaactggc cgccggctgc 240
gtggccacta ccgcctacat cagcatccac aacatggccg cctggatgct cgcctcgttc 300
ggcgacgcgg cgctgaagga ggcctggctg cccggcctga tcggcggcga gtcgctcgcc 360
tcctattgcc tgaccgagcc cgatgccggc tccgacgccg cgcgcctgcg cacccgcgcc 420
cgccgcgagg gcgacgaata cgtgctggac ggcagcaagt gcttcatttc cggcgccggc 480
agcacccagg tgctgatcgt catggcgcgc accggcgagg acggcgccag gggcatctcc 540
tgcttcctgg taccggccga cgcgcccggc atccgctacg gccgcaacga ggacaagatg 600
ggctggcgcg cgcagccgac ccgcaccatc accttcgaag gcgtgcgcat ccccgccggc 660
aaccgcatcg gcccggaggg ccaaggcttc gtctatgcca tgaaaggcct cgacggcggc 720
cgcctgaaca tcgccagttg ttccctgggc gccgcccagg cggcgctgga gcagtcgatg 780
cgctacgtcg aggagcgcga gcagttcggc aagccgctgg cgaccttcca ggccttgcag 840
ttcaagctcg ccgacatgct caccgaactc accgccagcc gccagatggt ccgcctcggc 900
gcccatcggc tggaccgcgg cgacgccgag gcgaccctgt actgcgcaat ggccaagcgc 960
ttcgccaccg accgctgctt cgatgtctgc aacgaggcct tgcaactgca cggcggctac 1020
ggctatctca acgattatcc gctggagcgc tgggtacgcg acacccgcgt gcaccagatc 1080
ctcgaaggca ccaacgaaat catgcgggtg atcgtcgccc gccgcctgct ggagcagggc 1140
ggcatgctcg atcgcctgct gtga 1164
<210> 52
<211> 386
<212> PRT
<213> Rhodococcus erythropolis PR4 RE_Acd1
<400> 52
Met Phe Thr Leu Thr Asp Asp Glu Arg Ala Ile Arg Asp Thr Ala Arg
1 5 10 15
Asp Phe Ala Ala Glu His Leu Ala Pro Asn Ala Val Glu Trp Asp Gln
20 25 30
Thr Lys His Phe Pro Val Asp Val Leu Arg Lys Ala Ala Ser Leu Gly
35 40 45
Met Gly Gly Ile Tyr Ile Arg Glu Asp Val Gly Gly Ser Glu Leu Ser
50 55 60
Arg Val Asp Ala Ala Arg Ile Phe Glu Glu Leu Ala Lys Gly Asp Pro
65 70 75 80
Ser Ile Ala Ala Tyr Ile Ser Ile His Asn Met Val Thr Trp Met Ile
85 90 95
Asp Gln Phe Gly Asn Asp Glu Gln Arg His Lys Trp Val Pro Gly Leu
100 105 110
Cys Ser Met Asp Gln Leu Gly Ser Tyr Cys Leu Thr Glu Pro Gly Ala
115 120 125
Gly Ser Asp Ala Ala Gly Leu Ser Thr Lys Ala Val Arg Asp Gly Asp
130 135 140
Asp Tyr Ile Leu Asn Gly Val Lys Gln Phe Ile Ser Gly Ala Gly Thr
145 150 155 160
Ser Asp Val Tyr Val Val Met Ala Arg Thr Gly Ser Ala Gly Ala Lys
165 170 175
Gly Ile Ser Ala Phe Ile Val Pro Lys Asp Ser Pro Gly Leu Ser Phe
180 185 190
Gly Ala Asn Glu Val Lys Met Gly Trp Asn Ala Gln Pro Thr Arg Gln
195 200 205
Val Ile Phe Glu Asp Val Arg Val Pro Ala Ala Asn Met Leu Gly Glu
210 215 220
Glu Gly Ser Gly Phe Arg Ile Ala Met Lys Gly Leu Asn Gly Gly Arg
225 230 235 240
Leu Asn Ile Ala Ala Cys Ser Val Gly Gly Ala Gln Ala Ala Leu Glu
245 250 255
Lys Ala Val Ala Tyr Leu Val Asp Arg Lys Ala Phe Gly Ser Ala Leu
260 265 270
Ile Glu Ser Gln Ala Leu Gln Phe Gln Leu Ala Asp Met Arg Thr Glu
275 280 285
Leu Glu Ala Ala Arg Thr Leu Leu Trp Arg Ala Ala Ala Ala Leu Glu
290 295 300
Asp Gly Ala Ser Asp Val Val Glu Leu Cys Ala Met Ala Lys Arg Phe
305 310 315 320
Ala Thr Asp Thr Gly Phe Asp Val Ala Asn Lys Ala Leu Gln Leu His
325 330 335
Gly Gly Tyr Gly Tyr Leu Ala Glu Tyr Gly Ile Glu Lys Ile Val Arg
340 345 350
Asp Leu Arg Val His Gln Ile Leu Glu Gly Ser Asn Glu Ile Met Arg
355 360 365
Val Val Ile Ala Arg Ser Val Val Ala Ser Gly Gln Gly Lys Gln Gly
370 375 380
Ala Ala
385
<210> 53
<211> 1161
<212> DNA
<213> Rhodococcus erythropolis PR4 RE_Acd1
<400> 53
atgtttactc tgaccgatga cgagcgggcg attcgcgaca ctgcccgcga cttcgcggcc 60
gagcatctgg cgcccaacgc agtggagtgg gatcagacca agcatttccc ggtggacgtc 120
ctccgtaagg cggcgtccct ggggatgggc ggtatctaca ttcgtgagga cgtgggcggc 180
agtgagctga gccgcgtcga cgctgcccgg atcttcgaag agctggccaa gggcgatccg 240
tcgatcgccg cgtacatctc catccacaac atggtcacgt ggatgatcga ccagttcggc 300
aacgacgaac agcgccacaa gtgggtcccc ggactctgct cgatggatca actgggcagc 360
tactgcctca ccgaacccgg cgctggctcc gatgctgcgg gcttgagcac caaggccgtt 420
cgtgacggcg acgactacat cctcaacggc gtcaaacagt tcatttccgg cgcaggcact 480
tccgacgtgt acgtcgtgat ggcacgcacc ggatctgccg gtgccaaggg gatctcggcg 540
ttcatcgtgc ccaaggattc gcccggactg tcgttcggtg ccaacgaggt caagatgggc 600
tggaacgcgc agcccacccg tcaggtgatc ttcgaagacg tgcgagttcc tgccgccaac 660
atgctcggtg aagagggcag cggcttccgc atcgctatga agggtctcaa cggcggccgg 720
ctgaacatcg ccgcctgctc ggtcggtggg gcccaggcag cgctggagaa ggcagtcgca 780
tatctggtgg accgcaaagc tttcggttcg gcactgatcg agtcgcaggc cctgcagttc 840
cagctcgccg acatgcgtac cgaactcgaa gcggccagga cgttgctgtg gcgcgccgct 900
gccgcactcg aagacggagc gtccgacgtc gtggagttgt gtgcgatggc caagcgcttt 960
gccaccgaca ccgggttcga cgtagccaac aaggctctcc agcttcacgg cgggtacggc 1020
tatcttgctg agtacgggat cgagaagatc gtccgcgatc ttcgggttca tcagatcctc 1080
gaaggcagca acgagatcat gagggtggtc atcgcgcgaa gcgtggtcgc atcaggtcag 1140
ggaaagcaag gagcagcatg a 1161
<210> 54
<211> 410
<212> PRT
<213> Pseudomonas aeruginosa PAO1 bkdA1
<400> 54
Met Ser Asp Tyr Glu Pro Leu Arg Leu His Val Pro Glu Pro Thr Gly
1 5 10 15
Arg Pro Gly Cys Lys Thr Asp Phe Ser Tyr Leu His Leu Ser Pro Ala
20 25 30
Gly Glu Val Arg Lys Pro Pro Val Asp Val Glu Pro Ala Glu Thr Ser
35 40 45
Asp Leu Ala Tyr Ser Leu Val Arg Val Leu Asp Asp Asp Gly His Ala
50 55 60
Val Gly Pro Trp Asn Pro Gln Leu Ser Asn Glu Gln Leu Leu Arg Gly
65 70 75 80
Met Arg Ala Met Leu Lys Thr Arg Leu Phe Asp Ala Arg Met Leu Thr
85 90 95
Ala Gln Arg Gln Lys Lys Leu Ser Phe Tyr Met Gln Cys Leu Gly Glu
100 105 110
Glu Ala Ile Ala Thr Ala His Thr Leu Ala Leu Arg Asp Gly Asp Met
115 120 125
Cys Phe Pro Thr Tyr Arg Gln Gln Gly Ile Leu Ile Thr Arg Glu Tyr
130 135 140
Pro Leu Val Asp Met Ile Cys Gln Leu Leu Ser Asn Glu Ala Asp Pro
145 150 155 160
Leu Lys Gly Arg Gln Leu Pro Ile Met Tyr Ser Ser Lys Glu Ala Gly
165 170 175
Phe Phe Ser Ile Ser Gly Asn Leu Ala Thr Gln Phe Ile Gln Ala Val
180 185 190
Gly Trp Gly Met Ala Ser Ala Ile Lys Gly Asp Thr Arg Ile Ala Ser
195 200 205
Ala Trp Ile Gly Asp Gly Ala Thr Ala Glu Ser Asp Phe His Thr Ala
210 215 220
Leu Thr Phe Ala His Val Tyr Arg Ala Pro Val Ile Leu Asn Val Val
225 230 235 240
Asn Asn Gln Trp Ala Ile Ser Thr Phe Gln Ala Ile Ala Gly Gly Glu
245 250 255
Gly Thr Thr Phe Ala Asn Arg Gly Val Gly Cys Gly Ile Ala Ser Leu
260 265 270
Arg Val Asp Gly Asn Asp Phe Leu Ala Val Tyr Ala Ala Ser Glu Trp
275 280 285
Ala Ala Glu Arg Ala Arg Arg Asn Leu Gly Pro Ser Leu Ile Glu Trp
290 295 300
Val Thr Tyr Arg Ala Gly Pro His Ser Thr Ser Asp Asp Pro Ser Lys
305 310 315 320
Tyr Arg Pro Ala Asp Asp Trp Thr Asn Phe Pro Leu Gly Asp Pro Ile
325 330 335
Ala Arg Leu Lys Arg His Met Ile Gly Leu Gly Ile Trp Ser Glu Glu
340 345 350
Gln His Glu Ala Thr His Lys Ala Leu Glu Ala Glu Val Leu Ala Ala
355 360 365
Gln Lys Gln Ala Glu Ser His Gly Thr Leu Ile Asp Gly Arg Val Pro
370 375 380
Ser Ala Ala Ser Met Phe Glu Asp Val Tyr Ala Glu Leu Pro Glu His
385 390 395 400
Leu Arg Arg Gln Arg Gln Glu Leu Gly Val
405 410
<210> 55
<211> 1233
<212> DNA
<213> Pseudomonas aeruginosa PAO1 bkdA1
<400> 55
atgagtgatt acgagccgtt gcgtctgcat gtcccggagc ccaccgggcg tcctggctgc 60
aagaccgact tttcctatct gcacctgtcc cccgccggcg aggtacgcaa gccgccggtg 120
gatgtcgagc ccgccgagac cagcgacctg gcctacagcc tggtacgtgt gctcgacgac 180
gacggccacg ccgtcggtcc ctggaatccg cagctcagca acgaacaact gctgcgcggc 240
atgcgggcga tgctcaagac ccgcctgttc gacgcgcgca tgctcaccgc gcaacggcag 300
aaaaagcttt ccttctatat gcaatgcctc ggcgaggaag ccatcgccac cgcccacacc 360
ctggccctgc gcgacggcga catgtgcttt ccgacctatc gccagcaagg catcctgatc 420
acccgcgaat acccgctggt ggacatgatc tgccagcttc tctccaacga ggccgacccg 480
ctcaagggcc gccagctgcc gatcatgtac tcgagcaagg aggcaggttt cttctccatc 540
tccggcaacc tcgccaccca gttcatccag gcggtcggct ggggcatggc ctcggcgatc 600
aagggcgaca cgcgcatcgc ctcggcctgg atcggcgacg gcgccaccgc cgagtcggac 660
ttccacaccg ccctcacctt cgcccatgtc taccgcgcgc cggtaatcct caacgtggtc 720
aacaaccagt gggcgatctc caccttccag gccatcgccg gcggcgaagg caccaccttc 780
gccaaccgtg gcgtgggctg cgggatcgcc tcgctgcggg tcgacggcaa tgacttcctg 840
gcggtctacg ccgcctccga gtgggccgcc gagcgcgccc ggcgcaacct cgggccgagc 900
ctgatcgaat gggtcaccta ccgcgccggc ccgcactcga cttcggacga cccgtccaag 960
taccgccccg ccgacgactg gaccaacttc ccgctgggcg acccgatcgc ccgcctgaag 1020
cggcacatga tcggcctcgg catctggtcg gaggaacagc acgaagccac ccacaaggcc 1080
ctcgaagccg aagtactggc cgcgcagaaa caggcggaga gccatggcac cctgatcgac 1140
ggccgggtgc cgagcgccgc cagcatgttc gaggacgtct atgcagaact gccggagcac 1200
ctgcgccggc aacgccagga gctcggggta tga 1233
<210> 56
<211> 350
<212> PRT
<213> Pseudomonas aeruginosa PAO1 bkdA2
<400> 56
Met Asn Ala Met Asn Pro Gln His Glu Asn Ala Gln Thr Val Thr Ser
1 5 10 15
Met Thr Met Ile Gln Ala Leu Arg Ser Ala Met Asp Ile Met Leu Glu
20 25 30
Arg Asp Asp Asp Val Val Val Phe Gly Gln Asp Val Gly Tyr Phe Gly
35 40 45
Gly Val Phe Arg Cys Thr Glu Gly Leu Gln Lys Lys Tyr Gly Thr Ser
50 55 60
Arg Val Phe Asp Ala Pro Ile Ser Glu Ser Gly Ile Ile Gly Ala Ala
65 70 75 80
Val Gly Met Gly Ala Tyr Gly Leu Arg Pro Val Val Glu Ile Gln Phe
85 90 95
Ala Asp Tyr Val Tyr Pro Ala Ser Asp Gln Leu Ile Ser Glu Ala Ala
100 105 110
Arg Leu Arg Tyr Arg Ser Ala Gly Asp Phe Ile Val Pro Met Thr Val
115 120 125
Arg Met Pro Cys Gly Gly Gly Ile Tyr Gly Gly Gln Thr His Ser Gln
130 135 140
Ser Pro Glu Ala Met Phe Thr Gln Val Cys Gly Leu Arg Thr Val Met
145 150 155 160
Pro Ser Asn Pro Tyr Asp Ala Lys Gly Leu Leu Ile Ala Cys Ile Glu
165 170 175
Asn Asp Asp Pro Val Ile Phe Leu Glu Pro Lys Arg Leu Tyr Asn Gly
180 185 190
Pro Phe Asp Gly His His Asp Arg Pro Val Thr Pro Trp Ser Lys His
195 200 205
Pro Ala Ser Gln Val Pro Asp Gly Tyr Tyr Lys Val Pro Leu Asp Lys
210 215 220
Ala Ala Ile Val Arg Pro Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu Thr Tyr Gly
225 230 235 240
Thr Met Val Tyr Val Ala Gln Ala Ala Ala Asp Glu Thr Gly Leu Asp
245 250 255
Ala Glu Ile Ile Asp Leu Arg Ser Leu Trp Pro Leu Asp Leu Glu Thr
260 265 270
Ile Val Ala Ser Val Lys Lys Thr Gly Arg Cys Val Ile Ala His Glu
275 280 285
Ala Thr Arg Thr Cys Gly Phe Gly Ala Glu Leu Met Ser Leu Val Gln
290 295 300
Glu His Cys Phe His His Leu Glu Ala Pro Ile Glu Arg Val Thr Gly
305 310 315 320
Trp Asp Thr Pro Tyr Pro His Ala Gln Glu Trp Ala Tyr Phe Pro Gly
325 330 335
Pro Ala Arg Val Gly Ala Ala Phe Lys Arg Val Met Glu Val
340 345 350
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<211> 1053
<212> DNA
<213> Pseudomonas aeruginosa PAO1 bkdA2
<400> 57
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<212> PRT
<213> Pseudomonas aeruginosa PAO1 bkdB
<400> 58
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1 5 10 15
Glu Val Glu Leu Val Glu Trp His Val Gln Val Gly Asp Ser Val Asn
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Glu Asp Gln Val Leu Ala Glu Val Met Thr Asp Lys Ala Thr Val Glu
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50 55 60
Gly Gln Val Met Ala Val Gly Gly Glu Leu Ile Arg Leu Glu Val Glu
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Gly Ala Gly Asn Leu Ala Glu Ser Pro Ala Ala Ala Thr Pro Ala Ala
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Gly Ser Gly Pro Ala Gly Arg Val Leu His Glu Asp Leu Asp Ala Tyr
165 170 175
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180 185 190
Tyr Ala Glu Arg His Asp Glu Gln Ala Val Pro Val Ile Gly Leu Arg
195 200 205
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Phe Ser Tyr Val Glu Glu Ile Asp Val Thr Asp Leu Glu Ala Leu Arg
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Ala His Leu Asn Gln Lys Trp Gly Gly Gln Arg Gly Lys Leu Thr Leu
245 250 255
Leu Pro Phe Leu Val Arg Ala Met Val Val Ala Leu Arg Asp Phe Pro
260 265 270
Gln Leu Asn Ala Arg Tyr Asp Asp Glu Ala Glu Val Val Thr Arg Tyr
275 280 285
Gly Ala Val His Val Gly Ile Ala Thr Gln Ser Asp Asn Gly Leu Met
290 295 300
Val Pro Val Leu Arg His Ala Glu Ser Arg Asp Leu Trp Gly Asn Ala
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Ser Glu Val Ala Arg Leu Ala Glu Ala Ala Arg Ser Gly Lys Ala Gln
325 330 335
Arg Gln Glu Leu Ser Gly Ser Thr Ile Thr Leu Ser Ser Leu Gly Val
340 345 350
Leu Gly Gly Ile Val Ser Thr Pro Val Ile Asn His Pro Glu Val Ala
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Ile Val Gly Val Asn Arg Ile Val Glu Arg Pro Met Val Val Gly Gly
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Asn Ile Val Val Arg Lys Met Met Asn Leu Ser Ser Ser Phe Asp His
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Arg Val Val Asp Gly Met Asp Ala Ala Ala Phe Ile Gln Ala Val Arg
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<212> DNA
<213> Pseudomonas aeruginosa PAO1 bkdB
<400> 59
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<212> PRT
<213> Pseudomonas aeruginosa PAO1 lpdV
<400> 60
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Pro Lys Arg Leu Val Val Val Gly Gly Gly Tyr Ile Gly Leu Glu Leu
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Gly Thr Ala Tyr Arg Lys Leu Gly Val Glu Val Ala Val Val Glu Ala
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Gln Pro Arg Ile Leu Pro Gly Tyr Asp Glu Glu Leu Thr Lys Pro Val
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Ala Gln Ala Leu Arg Arg Leu Gly Val Glu Leu Tyr Leu Gly His Ser
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Leu Leu Gly Pro Ser Glu Asn Gly Val Arg Val Arg Asp Gly Ala Gly
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Glu Glu Arg Glu Ile Ala Ala Asp Gln Val Leu Val Ala Val Gly Arg
260 265 270
Lys Pro Arg Ser Glu Gly Trp Asn Leu Glu Ser Leu Gly Leu Asp Met
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Asn Gly Arg Ala Val Lys Val Asp Asp Gln Cys Arg Thr Ser Met Arg
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Asn Val Trp Ala Ile Gly Asp Leu Ala Gly Glu Pro Met Leu Ala His
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325 330 335
Arg Arg Gln Phe Ala Pro Val Ala Ile Pro Ala Val Cys Phe Thr Asp
340 345 350
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Gly Leu Asp Cys Leu Val Ala Ser Phe Pro Phe Ala Ala Asn Gly Arg
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Ala Met Thr Leu Glu Ala Asn Glu Gly Phe Val Arg Val Val Ala Arg
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<212> DNA
<213> Pseudomonas aeruginosa PAO1 lpdV
<400> 61
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<212> PRT
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<400> 62
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Arg Ser Glu Ala Arg Tyr Ala Lys Pro Ser Asp Asp Arg Leu Ile Glu
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Met Tyr Arg Lys Met Phe Leu Gly Arg Arg Phe Asp Gln Gln Ala Thr
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Val Asp Pro Val Gln Ile Leu Ser Met Leu Ala Gly Asp Trp His Cys
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Gly Tyr Asp Pro Val Ala Leu Arg Ser Ala Pro Gln Cys Thr Pro Leu
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Ala Thr Gln Leu Leu His Ala Ala Gly Val Ala Tyr Gly Glu Ser Arg
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Arg Gly Leu Asn Thr Val Ala Leu Ala Leu Cys Gly Asp Gly Ala Thr
165 170 175
Ser Glu Gly Asp Phe His Glu Ala Leu Asn Phe Ala Ala Val Phe Lys
180 185 190
Ala Pro Val Val Phe Leu Val Gln Asn Asn Gly Phe Ala Ile Ser Val
195 200 205
Pro Leu Ser Arg Gln Ser Ala Ala Pro Thr Leu Ala His Lys Gly Val
210 215 220
Gly Tyr Gly Ile Gly Ser Glu Gln Val Asp Gly Asn Asp Pro Val Ala
225 230 235 240
Met Met Ala Val Met Asp Glu Ala Ala Arg Phe Val Arg Ser Gly Asn
245 250 255
Gly Pro Val Ile Val Glu Ala His Thr Tyr Arg Ile Asp Ala His Thr
260 265 270
Asn Ala Asp Asp Ala Thr Arg Tyr Arg Asp Ser Ala Glu Val Glu Ser
275 280 285
Trp Arg Gly Arg Asp Pro Leu Pro Arg Leu Glu Lys Tyr Leu Arg Ala
290 295 300
His Asp Leu Ile Asp Asp Ala Phe Val Glu Ser Leu Thr Ala Glu Ala
305 310 315 320
Glu Thr Glu Ala Ala Thr Leu Arg Ala Gly Met Asn Val Asp Arg Pro
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His Asp Pro Leu Asp Leu Phe Arg Tyr Val Phe Ala Glu Gln Thr Pro
340 345 350
Gln Leu Arg Glu Gln Gln Ala Gln Leu Glu Thr Glu Leu Ala Ala Glu
355 360 365
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<212> DNA
<213> Rhodococcus erythropolis PR4
<400> 63
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caccatctcc acgctccggt gctcagggtc agcggattcg acatccccta ccccgcgccg 900
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<213> Rhodococcus erythropolis PR4
<400> 66
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275 280 285
Ala Asp Ala Leu Ser Thr Val Glu Leu Ala Gln Ala Leu Arg Val Thr
290 295 300
Thr Asp Leu Ala Arg Asp Gly Lys Leu Glu Pro Ala Arg Leu Thr Gly
305 310 315 320
Gly Thr Phe Thr Leu Asn Asn Tyr Gly Val Phe Gly Val Asp Gly Ser
325 330 335
Thr Pro Ile Ile Asn His Pro Glu Ala Ala Ile Leu Gly Ile Gly Arg
340 345 350
Ile Ile Asp Lys Pro Trp Val Val Asn Gly Glu Leu Thr Val Arg Lys
355 360 365
Val Thr Gln Ile Ser Leu Ser Phe Asp His Arg Val Cys Asp Gly Gly
370 375 380
Glu Ala Gly Gly Phe Leu Arg Leu Phe Gly Asp Tyr Ile Glu Asn Pro
385 390 395 400
Ile Arg Val Leu Gly Arg Leu
405
<210> 67
<211> 1224
<212> DNA
<213> Rhodococcus erythropolis PR4
<400> 67
atgagcaatc aggtattcat gctccccgat ctgggtgaag gtctggccga ggccgatatc 60
gcggagtggc acgtcaaggt cggcgacgtg gtcaccatcg atcagatcgt cgtcgaggtc 120
gagaccgcga aagctgctgt ggacgtgcct atcccgttcg ccgggaccgt cgtcgaatta 180
catggcaagg acggcgacac cttgaaggtg ggcacgccgt tgatcactgt gagtggtggc 240
ggcagtgtcg acgcggtcgt ttcggccaac cacgagcgtt accgtgaaga ggaacgcgcg 300
ggttcgggca acgtcctgat cggctacggc accagcgagg atgcaccgag acgccgtcgc 360
agagctgctc cgtcggtacg cgtgatctca ccaatcgttc gtaagctggc tgtcgacaac 420
gatatcgacc tctccttgct ctccggatcc ggtgccggcg gggtgataac gcgcgctgac 480
gtcgaggccg ggtcgaacgc cggcacggaa acggaaccgt cgcacgtgag cgaccaacgg 540
atcccgatca aggggcttcg caaggtggtg gccgacaagc tgtccgccag ccgccgcgag 600
attcccgacg caacaacctg ggtcgacgtc gacgccaccg aactgttggc ggcgcgagcc 660
gagatcaaca agtcactgcc cgattccgac aagatcagcc tgatggcgct cctggctcgg 720
ctgaccatcg cggcgttggg gcagtacccc gaactgaact cgtcggtcga tactgctcga 780
ggcgagatcg ttcgacacgc ccgcatccac ctgggaatcg ccgcacagac accgaaggga 840
ttgatggtgc cggtcattcg aaatgcggat gccctgagca ccgtcgaact cgcacaagca 900
cttcgggtga ccaccgacct tgcgcgcgac ggcaaactcg aacccgcccg cctgaccggc 960
ggcacgttca cgctcaacaa ctacggggta ttcggggttg acggatcgac tccgatcatc 1020
aatcaccccg aggcggcaat tctggggatc gggcgcatca tcgacaagcc gtgggtggtg 1080
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tgtgacggag gcgaagccgg cggattcctg aggctgttcg gtgactacat cgagaacccg 1200
atccgcgtcc tgggaaggct ctga 1224
<210> 68
<211> 459
<212> PRT
<213> Rhodococcus erythropolis PR4
<400> 68
Met Thr Thr Ala Glu Pro His Ser Asp Val Val Ile Leu Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Gly Gly Tyr Ala Cys Ala Ile Arg Ala Ala Gln Leu Gly Leu Ser
20 25 30
Val Thr Leu Ile Glu Ala Asp Lys Val Gly Gly Thr Cys Leu His Arg
35 40 45
Gly Cys Ile Pro Thr Lys Ala Leu Leu His Ser Ala Glu Val Ala Asp
50 55 60
Ser Ala Arg Thr Ser Glu Gln Phe Gly Val Arg Ala Ser Phe Asp Gly
65 70 75 80
Ile Asp Ile Ala Gln Val His Asp Tyr Lys Asn Gly Thr Val Glu Arg
85 90 95
Leu Tyr Ser Gly Leu Gln Gly Leu Leu Ala Gln His Lys Ile Thr Ile
100 105 110
Val Asn Gly Tyr Gly Thr Tyr Val Gly Gly Arg Ser Ile Asp Val Asp
115 120 125
Gly Thr Arg Tyr Thr Gly Thr Ser Leu Val Leu Ala Thr Gly Ser Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Leu Pro Gly Ile Glu Leu Gly Arg Arg Ile Leu Thr Ser
145 150 155 160
Asp Gln Ala Leu Glu Leu Asp Arg Val Pro Thr Ser Ala Thr Val Leu
165 170 175
Gly Gly Gly Val Ile Gly Val Glu Phe Ala Ser Ile Trp Arg Ser Phe
180 185 190
Gly Ala Glu Val Thr Ile Val Glu Ala Leu Pro Arg Leu Ile Ala Ala
195 200 205
Glu Asp Pro Trp Ser Ser Lys Gln Leu Glu Arg Ala Tyr Arg Lys Arg
210 215 220
Gly Ile Val Cys Lys Thr Asp Thr Lys Ile Val Ser Ala Lys Glu Ala
225 230 235 240
Ala Asp Ser Val Arg Val Glu Leu Gly Asp Gly Thr Ile Phe Asp Thr
245 250 255
Glu Leu Leu Leu Val Ala Val Gly Arg Gly Pro Arg Thr Asp Gly Asn
260 265 270
Gly Phe Glu Glu Asn Gly Ile Ser Leu Asp Lys Gly Phe Val Val Thr
275 280 285
Asp Glu Arg Leu Arg Thr Ser Val Asp Gly Val Tyr Ala Val Gly Asp
290 295 300
Ile Val Pro Gly Leu Ala Leu Ala His Arg Gly Phe Gln Gln Gly Ile
305 310 315 320
Phe Val Ala Glu Gln Ile Ala Gly Lys Asp Pro Ile Pro Val Ala Glu
325 330 335
His Leu Ile Pro Arg Val Thr Tyr Ser His Pro Glu Val Ala Ser Val
340 345 350
Gly Leu Gly Glu Glu Ala Ala Arg Thr Gln Tyr Gly Asp Ile Ser Thr
355 360 365
Val Val Tyr Asp Leu Ser Gly Asn Gly Lys Ser Gln Ile Leu Arg Thr
370 375 380
Thr Gly Gly Ile Lys Val Ile Arg Ser Gly Thr Arg Gly Pro Val Ile
385 390 395 400
Gly Val His Leu Val Gly Asp Arg Val Gly Glu Leu Ile Gly Glu Ala
405 410 415
Gln Leu Ala Val Ala Trp Glu Ala Leu Pro Asp Glu Val Gly Arg Phe
420 425 430
Ile His Ala His Pro Ser Gln Asn Glu Ala Leu Gly Glu Ala Met Leu
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Ala Leu Ala Gly Thr Pro Leu His Ala His Ser
450 455
<210> 69
<211> 1380
<212> DNA
<213> Rhodococcus erythropolis PR4
<400> 69
atgacaactg cagaacccca cagcgacgtc gtgatcctcg gtggaggatc gggcggctat 60
gcctgcgcca tccgcgccgc ccaactcgga ttgtcggtca cgctgatcga ggcggacaag 120
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ctgcaaggtt tgttggcgca acacaagatc actattgtca acggttacgg aacgtacgtc 360
ggtgggcgaa gcatcgacgt cgacggaacc cgctataccg gaacatcact cgttctggcc 420
accggttcgt atccgcggga actgcccggc atagaactcg gccgccggat cctcaccagt 480
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atcggcgtcg agttcgcgag catctggcgc tcgttcggcg ccgaagtcac gatcgtcgag 600
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tttgtggctg aacagatcgc cgggaaggat ccgataccgg tcgccgaaca cttgattcct 1020
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<210> 70
<211> 362
<212> PRT
<213> Rhodococcus erythropolis PR4
<400> 70
Met Ile Asp Asn Leu Asp Tyr Pro Val Gln Leu Ile Gln Pro Asn Gly
1 5 10 15
Ala Arg Val Cys Arg Pro Glu Phe Asp Arg Leu Ile Thr Asp Ile Gly
20 25 30
Pro Asp Glu Leu Leu Ser Leu Tyr Arg Asp Leu Val Val Ser Arg Arg
35 40 45
Ile Asp Thr Glu Ala Val Ala Leu Gln Arg Gln Gly Glu Ile Gly Leu
50 55 60
Trp Ala Pro Met Leu Gly Gln Glu Ala Ala Gln Val Gly Ser Ala Arg
65 70 75 80
Ala Leu Ala Pro Asp Asp Phe Ala Phe Thr Ser Tyr Arg Glu His Ala
85 90 95
Val Ala Tyr Cys Arg Gly Val Pro Pro Glu Leu Leu Thr Thr Met Trp
100 105 110
Arg Gly Ile Ser His Ser Gly Trp Asp Pro Glu Gln Val Asn Val Thr
115 120 125
Asn Pro Ala Ile Val Val Gly Ser Gln Gly Leu His Ala Thr Gly Tyr
130 135 140
Ala Leu Gly Ala His Leu Asp Gly Ala Glu Ile Ala Thr Ile Ala Tyr
145 150 155 160
Phe Gly Asp Gly Ala Thr Ser Gln Gly Asp Ile Ala Glu Ala Met Gly
165 170 175
Phe Ala Ala Ser Phe Arg Val Gly Val Val Phe Phe Cys Gln Asn Asn
180 185 190
Gln Trp Ala Ile Ser Glu Pro Val Ser Leu Gln Ser Arg Thr Pro Ile
195 200 205
Ser His Arg Ala Ile Gly Tyr Gly Ile Pro Ala Ile Arg Val Asp Gly
210 215 220
Asn Asp Val Leu Ala Val Leu Ala Val Thr Arg Ser Ala Leu Asn Arg
225 230 235 240
Ala Arg Glu Gly Ser Gly Pro Thr Phe Ile Glu Ala Ile Thr Cys Arg
245 250 255
Met Gly Pro His Thr Thr Ser Asp Asp Pro Ser Arg Tyr Arg Ala Asp
260 265 270
Thr Asp Met Ser Glu Trp Arg Ser Arg Asp Pro Leu Glu Arg Met Arg
275 280 285
Leu Phe Leu Gly Arg Arg Asp Leu Leu Gly Glu Asn Glu Leu Ser Thr
290 295 300
Ile Ala Ala Ala Ala Asp Asp Val Ala Ala Gly Leu Arg Arg Ala Thr
305 310 315 320
Ile Ala Leu Ala Asp Pro Pro Pro Ser Ala Leu Phe Asp His Val Tyr
325 330 335
Ala Glu Ala His Pro Leu Ile Asp Val Glu Arg Glu Glu His Arg Ala
340 345 350
Tyr Leu Arg Ser Met Glu Gly Ala Ser Ser
355 360
<210> 71
<211> 1089
<212> DNA
<213> Rhodococcus erythropolis PR4
<400> 71
atgatcgaca acctcgatta tccggtccaa ctcatccaac cgaacggcgc acgagtgtgc 60
cgtcccgaat tcgaccgtct gataacagac atcgggcctg acgaactgct gtcgttgtat 120
cgcgatctcg tcgtgagtcg ccgaatcgac accgaagctg ttgccctgca gcgtcaaggc 180
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gcgctcgccc cagacgactt cgcgttcacc agctaccgcg aacacgccgt cgcgtactgc 300
cggggagttc cccccgaatt gctgaccacc atgtggcgag gaatctccca ttccggttgg 360
gatccagaac aagtcaacgt caccaatccg gcgatcgtcg tcggctccca agggctgcac 420
gccaccggat acgcactcgg cgcacacctg gacggcgccg agatcgcaac gatcgcgtac 480
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ttccgtgtcg gcgttgtctt cttctgccag aacaaccagt gggccatcag tgaaccggta 600
tccctccagt cacgcacgcc catctcacat cgggcgatcg gttacggcat ccccgcgatc 660
cgcgtcgacg gcaacgacgt cctcgccgtt ctcgcagtca cgcgctcggc gctcaatcgc 720
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tcgtcatga 1089
<210> 72
<211> 326
<212> PRT
<213> Rhodococcus erythropolis PR4
<400> 72
Met Thr Val Met Asn Leu Val Thr Ala Leu Asn Thr Gly Leu Arg Arg
1 5 10 15
Ala Leu Glu Asp Asp Arg Arg Val Val Ile Met Gly Glu Asp Val Gly
20 25 30
Arg Leu Gly Gly Val Phe Arg Val Thr Asp Ala Leu Gln Lys Asp Phe
35 40 45
Gly Asp Thr Arg Val Ile Asp Met Pro Leu Ala Glu Ser Gly Ile Val
50 55 60
Gly Thr Ala Phe Gly Leu Ala Leu Arg Gly Tyr Arg Pro Val Cys Glu
65 70 75 80
Ile Gln Phe Asp Gly Phe Val Tyr Pro Ala Phe Asp Gln Ile Val Ser
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Gln Val Ala Lys Ile His Tyr Arg Thr Arg Gly Thr Ala Ser Ala Pro
100 105 110
Leu Thr Ile Arg Ile Pro Ser Gly Gly Gly Ile Gly Ala Val Glu His
115 120 125
His Ser Glu Ser Pro Glu Ala Tyr Phe Ala His Thr Ala Gly Leu Arg
130 135 140
Val Val Tyr Pro Ser Asn Pro Ile Asp Gly Phe His Met Ile Arg Gln
145 150 155 160
Ser Ile Ala Ala Asp Asp Pro Val Ile Phe Leu Glu Pro Lys Arg Arg
165 170 175
Tyr Trp Asp Thr Ala Asp Val Asn Thr Asp Ala Ala Pro Glu Leu Pro
180 185 190
Leu His Arg Ala Arg Val Ala Arg Pro Gly Asp Asp Ala Thr Val Val
195 200 205
Ala Tyr Gly Ser Met Val Ala Thr Ala Leu Asp Ala Ala Arg Ile Ala
210 215 220
Glu Glu Glu Glu Gly His Asp Leu Glu Val Val Asp Leu Arg Ser Leu
225 230 235 240
Ser Pro Ile Asp Phe Asp Thr Ile Glu Ala Ser Val Asn Lys Thr Gly
245 250 255
Arg Leu Val Val Val His Glu Ala Pro Ser Phe Leu Gly Val Gly Ala
260 265 270
Glu Ile Ala Ala His Val Ala Glu His Cys Phe Tyr Gln Leu Glu Ser
275 280 285
Pro Val Leu Arg Val Thr Gly Phe Asp Ile Pro Tyr Pro Pro Ala Lys
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Leu Glu Arg Phe His Leu Pro Asp Ala Asp Arg Ile Leu Ala Ala Leu
305 310 315 320
Asp Arg Thr Leu Ala Ala
325
<210> 73
<211> 981
<212> DNA
<213> Rhodococcus erythropolis PR4
<400> 73
atgaccgtca tgaatctggt gaccgcgctc aacaccggcc ttcgacgcgc actcgaagac 60
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tcccccatcg acttcgacac gatcgaggcg tcggtgaaca agacaggacg gctggtcgtc 780
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gaccggacgc tggcagcatg a 981
<210> 74
<211> 411
<212> PRT
<213> Rhodococcus erythropolis PR4
<400> 74
Met Ser Thr Gly His Glu Phe Arg Leu Pro Asp Leu Gly Glu Gly Leu
1 5 10 15
Thr Ser Ala Asp Leu Val Glu Trp Thr Val Gly Val Gly Asp Thr Val
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Glu Leu Asn Gln Val Leu Ala Gln Val Glu Thr Ala Lys Ala Leu Val
35 40 45
Glu Leu Pro Ser Pro Tyr Val Gly Val Val Arg Glu Leu Leu Val Glu
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Pro Gly Ser Thr Val Pro Val Gly Thr Pro Ile Ile Arg Ile Glu Glu
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Pro Ala Asp Ser Pro Ser Pro Ser Asp Ser Gln Ser Pro Ser Val Leu
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100 105 110
Val Thr Pro His Ser Gln Thr Ala Ala Ser Thr Glu Arg Arg Pro Ala
115 120 125
Thr Pro Ser Ala Arg Arg Ala Ala Arg Glu Ala Gly Ile Asp Leu Ser
130 135 140
Glu Ile Thr Gly Ser Gly Phe Asp Gly Ala Val Thr Ala Ala Asp Val
145 150 155 160
Ala Asp Ala Leu Arg Val Lys Ala Ala Ser Asn Glu Ala Pro Arg Pro
165 170 175
Ala Gly Ser Gly Met Gln Lys Gln Pro Val Ser Ser Gly Met Arg Lys
180 185 190
Gln Met Ala Ser Ala Met Val Ala Ser Thr Arg Ala Pro Gln Ala Ser
195 200 205
Val Phe Leu Thr Ala Asp Val Thr Pro Ser Met Glu Leu Leu Gly Arg
210 215 220
Leu Arg Pro Ser Asp Ala Phe Thr Gly Leu Ser Leu Thr Pro Leu Thr
225 230 235 240
Leu Ala Ala Lys Ala Leu Val Thr Ala Ile Ser Ser His Pro Met Val
245 250 255
Asn Ala His Trp Asp Glu Ala Arg Gly Asp Ala Val Ile Asp Asp His
260 265 270
Val Asn Leu Gly Ile Ala Val Ala Ser Glu Arg Gly Leu Ser Val Pro
275 280 285
Asn Ile Lys Ser Ala Glu Thr Leu Ser Leu Val Gln Leu Ala Arg Ala
290 295 300
Val Thr Glu Leu Thr Val Ala Ala Arg Ala Gly Val Thr Asp Val His
305 310 315 320
His Leu Thr Gly Gly Thr Val Thr Ile Thr Asn Val Gly Val Phe Gly
325 330 335
Val Asp Gly Gly Ile Pro Leu Leu Asn Pro Gly Glu Ala Val Ile Leu
340 345 350
Cys Leu Gly Thr Val Ser Glu Arg Pro Trp Val Ile Glu Arg Lys Ile
355 360 365
Glu Ala Arg Ser Val Ala Thr Leu Thr Leu Thr Phe Asp His Arg Ile
370 375 380
Leu Asp Gly Glu Gln Ala Ala Arg Phe Leu Ser Phe Val Ala Gln Met
385 390 395 400
Leu Ala Asp Pro Asp Leu Leu Leu Ser His Leu
405 410
<210> 75
<211> 1236
<212> DNA
<213> Rhodococcus erythropolis PR4
<400> 75
atgagtacag ggcacgaatt ccggttgccg gatctcggcg agggcctgac gtccgccgat 60
ctggtcgagt ggacggtcgg cgtcggcgac acggtggaac tcaatcaagt tctcgcccag 120
gtagagacag ccaaggctct cgtcgaactg ccgtcgccct acgtcggcgt tgtcagagaa 180
ctcctcgtcg aacctggctc taccgtcccg gtcggcactc cgatcatccg tatcgaggag 240
cctgcagatt caccgtctcc aagtgattca cagtctccga gcgtgcttgt cggatacgga 300
cccgcggccg agagaccgag ccgacgacgg aaccgggtta cgccacactc gcaaaccgcg 360
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agtacccgtg cccctcaggc cagcgtcttc ctcaccgccg atgtcacgcc ttcgatggaa 660
ctactcggca ggctccgtcc ctcggacgca ttcaccggac tttctctcac tccgctgact 720
ctcgcggcca aggccttggt tacggcgatc tcgtcgcacc cgatggtgaa cgcgcattgg 780
gacgaggccc gcggcgacgc cgtcatcgac gatcacgtga atctcggcat cgccgtcgcc 840
tccgaacgtg gactgtccgt gcccaacatc aaaagcgccg agacgctgag cctggtccaa 900
cttgcacgcg cggtgaccga actgaccgtc gctgcccgcg cgggagtgac cgatgtccat 960
cacctgaccg gtggcaccgt cacgatcacc aatgtcggag tcttcggcgt cgacgggggc 1020
attccgctcc tcaatccggg agaagccgtc atcctttgcc tgggcacagt gagcgagcgt 1080
ccctgggtaa ttgagcgcaa gatcgaagcg cggagcgtcg cgacactgac gttgacgttc 1140
gaccaccgga tactcgatgg tgagcaggcc gcgagattcc tctcatttgt cgcacagatg 1200
ctcgcggacc cggacctgtt gctgtctcac ctgtaa 1236
<210> 76
<211> 455
<212> PRT
<213> Malus x domestica(MpAAT1)
<400> 76
Met Lys Ser Phe Ser Val Leu Gln Val Lys Arg Leu Gln Pro Glu Leu
1 5 10 15
Ile Thr Pro Ala Lys Ser Thr Pro Gln Glu Thr Lys Phe Leu Ser Asp
20 25 30
Ile Asp Asp Gln Glu Ser Leu Arg Val Gln Ile Pro Ile Ile Met Cys
35 40 45
Tyr Lys Asp Asn Pro Ser Leu Asn Lys Asn Arg Asn Pro Val Lys Ala
50 55 60
Ile Arg Glu Ala Leu Ser Arg Ala Leu Val Tyr Tyr Tyr Pro Leu Ala
65 70 75 80
Gly Arg Leu Arg Glu Gly Pro Asn Arg Lys Leu Val Val Asp Cys Asn
85 90 95
Gly Glu Gly Ile Leu Phe Val Glu Ala Ser Ala Asp Val Thr Leu Glu
100 105 110
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115 120 125
Leu Tyr Asn Phe Pro Gly Ser Asp Gly Ile Ile Asp Cys Pro Leu Leu
130 135 140
Leu Ile Gln Val Thr Cys Leu Thr Cys Gly Gly Phe Ile Leu Ala Leu
145 150 155 160
Arg Leu Asn His Thr Met Cys Asp Ala Ala Gly Leu Leu Leu Phe Leu
165 170 175
Thr Ala Ile Ala Glu Met Ala Arg Gly Ala His Ala Pro Ser Ile Leu
180 185 190
Pro Val Trp Glu Arg Glu Leu Leu Phe Ala Arg Asp Pro Pro Arg Ile
195 200 205
Thr Cys Ala His His Glu Tyr Glu Asp Val Ile Gly His Ser Asp Gly
210 215 220
Ser Tyr Ala Ser Ser Asn Gln Ser Asn Met Val Gln Arg Ser Phe Tyr
225 230 235 240
Phe Gly Ala Lys Glu Met Arg Val Leu Arg Lys Gln Ile Pro Pro His
245 250 255
Leu Ile Ser Thr Cys Ser Thr Phe Asp Leu Ile Thr Ala Cys Leu Trp
260 265 270
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Val Lys Lys Ala Lys Ala Thr Met Asn Glu Glu Tyr Leu Arg Ser Val
340 345 350
Ala Asp Leu Leu Val Leu Arg Gly Arg Pro Gln Tyr Ser Ser Thr Gly
355 360 365
Ser Tyr Leu Ile Val Ser Asp Asn Thr Arg Val Gly Phe Gly Asp Val
370 375 380
Asn Phe Gly Trp Gly Gln Pro Val Phe Ala Gly Pro Val Lys Ala Leu
385 390 395 400
Asp Leu Ile Ser Phe Tyr Val Gln His Lys Asn Asn Thr Glu Asp Gly
405 410 415
Ile Leu Val Pro Met Cys Leu Pro Ser Ser Ala Met Glu Arg Phe Gln
420 425 430
Gln Glu Leu Glu Arg Ile Thr Gln Glu Pro Lys Glu Asp Ile Cys Asn
435 440 445
Asn Leu Arg Ser Thr Ser Gln
450 455
<210> 77
<211> 1368
<212> DNA
<213> Malus x domestica(MpAAT1)
<400> 77
atgaaatcat tctcagtact tcaggtgaaa cgattgcaac cggaacttat aactccggca 60
aagtcaacgc ctcaagaaac aaagtttctc tcagatattg acgaccaaga aagcttgaga 120
gttcagattc caatcataat gtgttacaaa gacaaccctt cacttaataa aaatcgtaat 180
cccgttaagg caattaggga agccttaagt agagcattag tgtattacta ccccttagct 240
ggaaggctta gggaagggcc taatagaaag ctcgtggtcg attgcaatgg tgaaggtatc 300
ttgttcgttg aggcttctgc tgatgtcaca cttgagcaac taggagacaa aattctaccc 360
ccttgtccac ttttagagga gttcttatat aattttccag gctctgatgg aattattgat 420
tgtcctttgc tgctgattca ggtgacctgt cttacatgtg gaggtttcat acttgcattg 480
cgcctaaacc acacaatgtg tgatgcagct ggattgctct tgttcctgac cgccatcgcg 540
gagatggcaa gaggcgcaca tgcaccatct attctaccag tgtgggagag agagctcttg 600
ttcgctcgag atccaccaag aattacatgt gctcatcacg aatatgaaga cgtgattggt 660
cattctgatg gctcatacgc atccagtaac cagtcaaaca tggttcaacg atctttctac 720
tttggtgcca aggagatgag agtccttcga aaacagattc caccccacct aatttccact 780
tgctccacat ttgacttgat cacagcttgt ttgtggaaat gtcgcactct tgcacttaac 840
attaatccaa aagaggctgt tcgagtttca tgcattgtca atgcacgagg aaagcacaac 900
aatgtacgtc ttcccttggg atactatggc aatgcatttg catttccagc tgcaatttcg 960
aaggctgaac ctctatgcaa aaatccactg ggatatgctt tggagttggt gaagaaggct 1020
aaagctacca tgaatgaaga atacttaaga tcagtggcag atcttttggt actaagaggg 1080
cgacctcaat attcatcgac aggaagttat ttaatagttt ctgataatac gcgtgtaggt 1140
tttggagatg tcaattttgg atggggacag ccggtatttg ctggacccgt caaggccttg 1200
gatttgatta gcttctacgt tcaacacaaa aacaacacag aggatggaat attggtacca 1260
atgtgtttgc catcctcggc catggagaga tttcagcagg aactagagag gattactcag 1320
gaacctaagg aggatatatg taacaacctt agatcaacta gtcaatga 1368
<210> 78
<211> 452
<212> PRT
<213> Fragaria x ananassa(SAAT)
<400> 78
Met Asn Lys Ile Glu Val Ser Ile Asn Ser Lys His Thr Ile Lys Pro
1 5 10 15
Ser Thr Ser Ser Thr Pro Leu Gln Pro Tyr Lys Leu Thr Leu Leu Asp
20 25 30
Gln Leu Thr Pro Pro Ala Tyr Val Pro Ile Val Phe Phe Tyr Pro Ile
35 40 45
Thr Asp His Asp Phe Asn Leu Pro Gln Thr Leu Ala Asp Leu Arg Gln
50 55 60
Ala Leu Ser Glu Thr Leu Thr Leu Tyr Tyr Pro Leu Ser Gly Arg Val
65 70 75 80
Lys Asn Asn Leu Tyr Ile Asp Asp Phe Glu Glu Gly Val Pro Tyr Leu
85 90 95
Glu Ala Arg Val Asn Cys Asp Met Thr Asp Phe Leu Arg Leu Arg Lys
100 105 110
Ile Glu Cys Leu Asn Glu Phe Val Pro Ile Lys Pro Phe Ser Met Glu
115 120 125
Ala Ile Ser Asp Glu Arg Tyr Pro Leu Leu Gly Val Gln Val Asn Val
130 135 140
Phe Asp Ser Gly Ile Ala Ile Gly Val Ser Val Ser His Lys Leu Ile
145 150 155 160
Asp Gly Gly Thr Ala Asp Cys Phe Leu Lys Ser Trp Gly Ala Val Phe
165 170 175
Arg Gly Cys Arg Glu Asn Ile Ile His Pro Ser Leu Ser Glu Ala Ala
180 185 190
Leu Leu Phe Pro Pro Arg Asp Asp Leu Pro Glu Lys Tyr Val Asp Gln
195 200 205
Met Glu Ala Leu Trp Phe Ala Gly Lys Lys Val Ala Thr Arg Arg Phe
210 215 220
Val Phe Gly Val Lys Ala Ile Ser Ser Ile Gln Asp Glu Ala Lys Ser
225 230 235 240
Glu Ser Val Pro Lys Pro Ser Arg Val His Ala Val Thr Gly Phe Leu
245 250 255
Trp Lys His Leu Ile Ala Ala Ser Arg Ala Leu Thr Ser Gly Thr Thr
260 265 270
Ser Thr Arg Leu Ser Ile Ala Ala Gln Ala Val Asn Leu Arg Thr Arg
275 280 285
Met Asn Met Glu Thr Val Leu Asp Asn Ala Thr Gly Asn Leu Phe Trp
290 295 300
Trp Ala Gln Ala Ile Leu Glu Leu Ser His Thr Thr Pro Glu Ile Ser
305 310 315 320
Asp Leu Lys Leu Cys Asp Leu Val Asn Leu Leu Asn Gly Ser Val Lys
325 330 335
Gln Cys Asn Gly Asp Tyr Phe Glu Thr Phe Lys Gly Lys Glu Gly Tyr
340 345 350
Gly Arg Met Cys Glu Tyr Leu Asp Phe Gln Arg Thr Met Ser Ser Met
355 360 365
Glu Pro Ala Pro Asp Ile Tyr Leu Phe Ser Ser Trp Thr Asn Phe Phe
370 375 380
Asn Pro Leu Asp Phe Gly Trp Gly Arg Thr Ser Trp Ile Gly Val Ala
385 390 395 400
Gly Lys Ile Glu Ser Ala Ser Cys Lys Phe Ile Ile Leu Val Pro Thr
405 410 415
Gln Cys Gly Ser Gly Ile Glu Ala Trp Val Asn Leu Glu Glu Glu Lys
420 425 430
Met Ala Met Leu Glu Gln Asp Pro His Phe Leu Ala Leu Ala Ser Pro
435 440 445
Lys Thr Leu Ile
450
<210> 79
<211> 1359
<212> DNA
<213> Fragaria x ananassa(SAAT)
<400> 79
atgaacaaaa ttgaggtcag tataaattcc aaacacacca tcaaaccatc aacttcctct 60
acaccacttc agccttacaa gcttaccctc ctggaccagc tcactcctcc ggcgtatgtc 120
cccatcgtgt tcttctaccc cattactgac catgacttca atcttcctca aaccctagct 180
gacttaagac aagccctttc ggagactctc actttgtact atccactctc tggaagggtc 240
aaaaacaacc tatacatcga tgattttgaa gaaggtgtcc cataccttga ggctcgagtg 300
aattgtgaca tgactgattt tctaaggctt cggaaaatcg agtgccttaa tgagtttgtt 360
ccaataaaac catttagtat ggaagcaata tctgatgagc gttacccctt gcttggagtt 420
caagtcaacg ttttcgattc tggaatagca atcggtgtct ccgtctctca caagctcatc 480
gatggaggaa cggcagactg ttttctcaag tcctggggtg ctgtttttcg agggtgtcgt 540
gaaaatatca tacatcctag tctctctgaa gcagcattgc ttttcccacc gagagatgac 600
ttgcctgaaa agtatgtcga tcagatggaa gcgttatggt ttgccggaaa aaaagttgct 660
acaaggagat ttgtatttgg tgtgaaagcc atatcttcaa ttcaagatga agcgaagagc 720
gagtccgtgc ccaagccatc acgagttcat gccgtcactg gttttctctg gaaacatcta 780
atcgctgctt ctcgggcact aacatcaggt actacttcaa caagactttc tatagcggcc 840
caggcagtga acttaagaac acggatgaac atggagacag tgttggataa tgccactgga 900
aacttgttct ggtgggcaca ggccatacta gagctaagtc atacaacacc agagatcagt 960
gatcttaagc tgtgtgactt ggttaacttg ctcaatggat ctgtcaaaca atgtaacggt 1020
gattactttg agactttcaa gggtaaagag ggatatggaa gaatgtgcga gtatctagat 1080
tttcagagga ctatgagttc tatggaacca gcaccggata tttatttatt ctcgagctgg 1140
actaattttt tcaacccact tgattttgga tgggggagga catcatggat tggagttgca 1200
ggaaaaattg aatctgcaag ttgcaagttc ataatattag ttccaacaca atgcggttct 1260
ggaattgaag cgtgggtgaa tctagaagaa gagaaaatgg ctatgctaga acaagatccc 1320
cattttctag cgttagcatc tccaaagacc ttaatttaa 1359
<210> 80
<211> 455
<212> PRT
<213> Fragaria vesca(VAAT)
<400> 80
Met Asn Lys Ile Glu Val Ser Ile Ile Ser Lys His Thr Ile Lys Pro
1 5 10 15
Ser Thr Ser Ser Ser Pro Leu Gln Pro Tyr Lys Leu Thr Leu Leu Asp
20 25 30
Gln Leu Thr Pro Pro Ser Tyr Val Pro Met Val Phe Phe Tyr Pro Ile
35 40 45
Thr Gly Pro Ala Val Phe Asn Leu Gln Thr Leu Ala Asp Leu Arg His
50 55 60
Ala Leu Ser Glu Thr Leu Thr Leu Tyr Tyr Pro Leu Ser Gly Arg Val
65 70 75 80
Lys Asn Asn Leu Tyr Ile Asp Asp Phe Glu Glu Gly Val Pro Tyr Leu
85 90 95
Glu Ala Arg Val Asn Cys Asp Met Asn Asp Phe Leu Arg Leu Pro Lys
100 105 110
Ile Glu Cys Leu Asn Glu Phe Val Pro Ile Lys Pro Phe Ser Met Glu
115 120 125
Ala Ile Ser Asp Glu Arg Tyr Pro Leu Leu Gly Val Gln Val Asn Ile
130 135 140
Phe Asn Ser Gly Ile Ala Ile Gly Val Ser Val Ser His Lys Leu Ile
145 150 155 160
Asp Gly Arg Thr Ser Asp Cys Phe Leu Lys Ser Trp Cys Ala Val Phe
165 170 175
Arg Gly Ser Arg Asp Lys Ile Ile His Pro Asn Leu Ser Gln Ala Ala
180 185 190
Leu Leu Phe Pro Pro Arg Asp Asp Leu Pro Glu Lys Tyr Ala Arg Gln
195 200 205
Met Glu Gly Leu Trp Phe Val Gly Lys Lys Val Ala Thr Arg Arg Phe
210 215 220
Val Phe Gly Ala Lys Ala Ile Ser Val Ile Gln Asp Glu Ala Lys Ser
225 230 235 240
Glu Ser Val Pro Lys Pro Ser Arg Val Gln Ala Val Thr Ser Phe Leu
245 250 255
Trp Lys His Leu Ile Ala Thr Ser Arg Ala Leu Thr Ser Gly Thr Thr
260 265 270
Ser Thr Arg Leu Ser Ile Ala Thr Gln Val Val Asn Ile Arg Ser Arg
275 280 285
Arg Asn Met Glu Thr Val Trp Asp Asn Ala Ile Gly Asn Leu Ile Trp
290 295 300
Phe Ala Pro Ala Ile Leu Glu Leu Ser His Thr Thr Leu Glu Ile Ser
305 310 315 320
Asp Leu Lys Leu Cys Asp Leu Val Asn Leu Leu Asn Gly Ser Val Lys
325 330 335
Gln Cys Asn Gly Asp Tyr Phe Glu Thr Phe Met Gly Lys Glu Gly Tyr
340 345 350
Gly Ser Met Cys Glu Tyr Leu Asp Phe Gln Arg Thr Met Ser Ser Met
355 360 365
Glu Pro Ala Pro Glu Ile Tyr Leu Phe Thr Ser Trp Thr Asn Phe Phe
370 375 380
Asn Gln Leu Asp Phe Gly Trp Gly Arg Thr Ser Trp Ile Gly Val Ala
385 390 395 400
Gly Lys Ile Glu Ser Ala Phe Cys Asn Leu Thr Thr Leu Val Pro Thr
405 410 415
Pro Cys Asp Thr Gly Ile Glu Ala Trp Val Asn Leu Glu Glu Glu Lys
420 425 430
Met Ala Met Leu Glu Gln Asp Pro Gln Phe Leu Ala Leu Ala Ser Pro
435 440 445
Lys Thr Leu Ile Ser Arg Tyr
450 455
<210> 81
<211> 1368
<212> DNA
<213> Fragaria vesca(VAAT)
<400> 81
atgaacaaaa ttgaggtcag tataatttcc aaacacacca tcaaaccatc aacttcctct 60
tcaccacttc agccttacaa gcttaccctg ctcgaccagc tcactcctcc atcgtatgtc 120
cccatggtat tcttctaccc cattactggc cctgcagtct tcaatcttca aaccctagct 180
gacttaagac atgccctttc cgagactctc actttgtact atccactctc tggaagggtc 240
aaaaacaacc tatacatcga tgattttgaa gagggtgtcc cataccttga ggctcgagtg 300
aactgtgaca tgaatgattt tctaaggctt ccgaaaatcg agtgcctaaa tgagtttgtt 360
ccaataaaac catttagtat ggaagcaata tctgatgagc gttacccttt gctcggagtt 420
caagttaaca ttttcaactc cggaatagca atcggggtct ccgtctctca caagctcatc 480
gatggaagaa cttcagactg ttttctcaag tcgtggtgtg ctgtttttcg tggttctcgt 540
gacaaaatca tacatcctaa tctctctcaa gcagcattgc ttttcccacc aagagatgac 600
ttgcctgaaa agtatgcccg tcagatggaa gggttatggt ttgtcggaaa aaaagttgct 660
acaaggagat ttgtatttgg tgcgaaagcc atatctgtaa ttcaagatga agcaaagagc 720
gagtccgtgc ccaagccatc acgagttcag gctgtcacta gttttctctg gaaacatcta 780
atcgctactt ctcgggcact aacatcaggt actacttcaa caagactttc tatagcaacc 840
caggtagtga acataagatc acggaggaac atggagacag tgtgggataa tgccattgga 900
aacttgatat ggttcgctcc ggccatacta gagctaagtc atacaacact agagatcagt 960
gatcttaagc tgtgtgactt ggttaacttg ctcaatggat ctgtcaaaca atgtaacggt 1020
gattactttg agactttcat gggtaaagag ggatatggaa gcatgtgcga gtatctagat 1080
tttcagagga ctatgagttc tatggaacca gcaccagaga tttatttatt cacgagctgg 1140
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cagtttctag cactagcatc tccaaagacg ctaatttcaa gatattga 1368
<210> 82
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-044
<400> 82
gtttgcacgc ctgccgttcg acg 23
<210> 83
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-045
<400> 83
cggtacgcgc ggatcttcca gag 23
<210> 84
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-003
<400> 84
gacccatgga tttcgacctc accgaagaac 30
<210> 85
<211> 31
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-004
<400> 85
gccctgcagg atgcgatggt tcgcggcgtt c 31
<210> 86
<211> 387
<212> PRT
<213> Pseudomonas aeruginosa PAO1(acd1)
<400> 86
Met Asp Phe Asp Leu Thr Glu Glu Gln Arg Leu Leu Val Glu Ser Ala
1 5 10 15
Arg Ala Phe Ala Arg His Glu Leu Ala Pro Lys Ala Ala Asp Trp Asp
20 25 30
Arg Asp His His Phe Pro Val Glu Val Ile Arg Ala Ala Ala Glu Gln
35 40 45
Gly Tyr Leu Gly Leu Tyr Ile Ala Glu Glu Asp Gly Gly Leu Gly Leu
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Thr Ser Leu Ile Phe Glu Gln Leu Ala Ala Gly Cys
65 70 75 80
Val Ala Thr Thr Ala Tyr Ile Ser Ile His Asn Met Ala Ala Trp Met
85 90 95
Leu Ala Ser Phe Gly Asp Ala Ala Leu Lys Glu Ala Trp Leu Pro Gly
100 105 110
Leu Ile Gly Gly Glu Ser Leu Ala Ser Tyr Cys Leu Thr Glu Pro Asp
115 120 125
Ala Gly Ser Asp Ala Ala Arg Leu Arg Thr Arg Ala Arg Arg Glu Gly
130 135 140
Asp Glu Tyr Val Leu Asp Gly Ser Lys Cys Phe Ile Ser Gly Ala Gly
145 150 155 160
Ser Thr Gln Val Leu Ile Val Met Ala Arg Thr Gly Glu Asp Gly Ala
165 170 175
Arg Gly Ile Ser Cys Phe Leu Val Pro Ala Asp Ala Pro Gly Ile Arg
180 185 190
Tyr Gly Arg Asn Glu Asp Lys Met Gly Trp Arg Ala Gln Pro Thr Arg
195 200 205
Thr Ile Thr Phe Glu Gly Val Arg Ile Pro Ala Gly Asn Arg Ile Gly
210 215 220
Pro Glu Gly Gln Gly Phe Val Tyr Ala Met Lys Gly Leu Asp Gly Gly
225 230 235 240
Arg Leu Asn Ile Ala Ser Cys Ser Leu Gly Ala Ala Gln Ala Ala Leu
245 250 255
Glu Gln Ser Met Arg Tyr Val Glu Glu Arg Glu Gln Phe Gly Lys Pro
260 265 270
Leu Ala Thr Phe Gln Ala Leu Gln Phe Lys Leu Ala Asp Met Leu Thr
275 280 285
Glu Leu Thr Ala Ser Arg Gln Met Val Arg Leu Gly Ala His Arg Leu
290 295 300
Asp Arg Gly Asp Ala Glu Ala Thr Leu Tyr Cys Ala Met Ala Lys Arg
305 310 315 320
Phe Ala Thr Asp Arg Cys Phe Asp Val Cys Asn Glu Ala Leu Gln Leu
325 330 335
His Gly Gly Tyr Gly Tyr Leu Asn Asp Tyr Pro Leu Glu Arg Trp Val
340 345 350
Arg Asp Thr Arg Val His Gln Ile Leu Glu Gly Thr Asn Glu Ile Met
355 360 365
Arg Val Ile Val Ala Arg Arg Leu Leu Glu Gln Gly Gly Met Leu Asp
370 375 380
Arg Leu Leu
385
<210> 87
<211> 1164
<212> DNA
<213> Pseudomonas aeruginosa PAO1(acd1)
<400> 87
atggatttcg acctcaccga agaacaacgc ctgctggtgg agagcgcccg cgccttcgcc 60
cgccacgaac tggcgccgaa ggcggccgac tgggaccgcg accatcactt cccggtggaa 120
gtcatccgcg ccgccgccga acagggctac ctcggcctgt acatcgccga ggaagacggc 180
ggcctgggcc tgtcgcggct gtccacttcg ctgatcttcg agcaactggc cgccggctgc 240
gtggccacta ccgcctacat cagcatccac aacatggccg cctggatgct cgcctcgttc 300
ggcgacgcgg cgctgaagga ggcctggctg cccggcctga tcggcggcga gtcgctcgcc 360
tcctattgcc tgaccgagcc cgatgccggc tccgacgccg cgcgcctgcg cacccgcgcc 420
cgccgcgagg gcgacgaata cgtgctggac ggcagcaagt gcttcatttc cggcgccggc 480
agcacccagg tgctgatcgt catggcgcgc accggcgagg acggcgccag gggcatctcc 540
tgcttcctgg taccggccga cgcgcccggc atccgctacg gccgcaacga ggacaagatg 600
ggctggcgcg cgcagccgac ccgcaccatc accttcgaag gcgtgcgcat ccccgccggc 660
aaccgcatcg gcccggaggg ccaaggcttc gtctatgcca tgaaaggcct cgacggcggc 720
cgcctgaaca tcgccagttg ttccctgggc gccgcccagg cggcgctgga gcagtcgatg 780
cgctacgtcg aggagcgcga gcagttcggc aagccgctgg cgaccttcca ggccttgcag 840
ttcaagctcg ccgacatgct caccgaactc accgccagcc gccagatggt ccgcctcggc 900
gcccatcggc tggaccgcgg cgacgccgag gcgaccctgt actgcgcaat ggccaagcgc 960
ttcgccaccg accgctgctt cgatgtctgc aacgaggcct tgcaactgca cggcggctac 1020
ggctatctca acgattatcc gctggagcgc tgggtacgcg acacccgcgt gcaccagatc 1080
ctcgaaggca ccaacgaaat catgcgggtg atcgtcgccc gccgcctgct ggagcagggc 1140
ggcatgctcg atcgcctgct gtga 1164
<210> 88
<211> 31
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-031
<400> 88
ggtcatgacc gacttcaaca ccatcatcct c 31
<210> 89
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-032
<400> 89
ggcctgcagg ttcagctgtt cgaaagttca gcgc 34
<210> 90
<211> 258
<212> PRT
<213> Rhodococcus erythropolis PR4(RE_echA)
<400> 90
Met Thr Asp Phe Asn Thr Ile Ile Leu Glu Arg Lys Gly Arg Val Gly
1 5 10 15
Val Ile Thr Leu Asn Arg Pro Lys Ala Leu Asn Ala Leu Asn Ser Glu
20 25 30
Leu Met Asn Glu Val Val Ala Ala Val Ala Asp Leu Glu Ala Asp Asn
35 40 45
Gly Ile Gly Ala Ile Leu Ile Thr Gly Ser Glu Arg Ala Phe Ala Ala
50 55 60
Gly Ala Asp Ile Lys Glu Met Gln Ser Lys Thr Tyr Met Asp Ala Tyr
65 70 75 80
Val Glu Asp Phe Phe Thr Pro Trp Asp Arg Val Ala Ala Ala Arg Lys
85 90 95
Pro Leu Ile Ala Ala Val Ser Gly Tyr Ala Leu Gly Gly Gly Cys Glu
100 105 110
Leu Ala Met Leu Cys Asp Phe Ile Ile Ala Ser Asp Thr Ala Lys Phe
115 120 125
Gly Gln Pro Glu Ile Lys Leu Gly Val Ile Pro Gly Ile Gly Gly Ser
130 135 140
Gln Arg Leu Thr Arg Ala Val Gly Lys Ala Lys Ala Met Glu Leu Cys
145 150 155 160
Leu Thr Gly Arg Asn Met Asp Ala Glu Glu Ala Glu Arg Ala Gly Leu
165 170 175
Val Ala Arg Ile Val Pro Ala Ala Asp Leu Leu Asp Asp Ala Leu Lys
180 185 190
Thr Ala Thr Thr Ile Ala Glu Met Ser Leu Pro Ile Ala Met Met Ala
195 200 205
Lys Glu Ala Val Asn Arg Ser Phe Glu Thr Thr Leu Ala Glu Gly Val
210 215 220
Arg Phe Glu Arg Arg Val Phe His Ser Thr Phe Ala Thr Glu Asp Gln
225 230 235 240
Lys Glu Gly Met Thr Ala Phe Val Glu Lys Arg Ser Ala Glu Phe Lys
245 250 255
His Arg
<210> 91
<211> 777
<212> DNA
<213> Rhodococcus erythropolis PR4(RE_echA)
<400> 91
gtgaccgact tcaacaccat catcctcgag cgtaagggtc gcgtcggcgt catcacgctc 60
aaccgcccga aggctctcaa cgccctgaac tccgagctga tgaacgaggt cgtcgccgcg 120
gttgccgacc tcgaagcgga caacggcatc ggagccatcc tgatcaccgg ttccgagcgc 180
gccttcgccg ccggcgccga catcaaggaa atgcagtcca agacgtacat ggacgcatac 240
gtcgaagatt tcttcacccc gtgggaccgc gtcgcagccg ctcgtaagcc gctgatcgcc 300
gccgtctccg ggtacgcgct cggtggtggc tgcgaactgg cgatgctctg cgatttcatc 360
atcgcttcgg ataccgcgaa gttcggccag cccgagatca agctcggtgt cattccgggt 420
atcggtggct cacagcgcct tacgcgcgcc gtgggtaagg ccaaggccat ggagctgtgc 480
ctgaccggcc gcaacatgga cgcagaagag gccgagcgcg caggcctggt tgcccggatc 540
gttccggccg ccgatctgct cgacgacgca ttgaagaccg caaccaccat cgccgagatg 600
tcgctgccca tcgcgatgat ggccaaggaa gcggtcaacc gttccttcga gaccacactc 660
gccgagggcg tccgcttcga gcgtcgggtg ttccactcga ccttcgcgac ggaggatcag 720
aaggaaggca tgaccgcgtt cgtggagaag cggtccgccg agttcaagca ccgctga 777
<210> 92
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MAA-15
<400> 92
ggcctgtcat gagtgattac gagccg 26
<210> 93
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MAA-16
<400> 93
cggccctgca ggttcgcggg aatcagatgt gc 32
<210> 94
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GB-138
<400> 94
ggcctgcagg taccgatcat caccatcggt gtc 33
<210> 95
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GB-139
<400> 95
ggtctagact gagcagtgtt ccaatgcg 28
<210> 96
<211> 31
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GB-140
<400> 96
gaggaaatgg tcacagggcg agaataggtt g 31
<210> 97
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GB-141
<400> 97
gccctgtgac catttcctca ttgtgctgg 29
<210> 98
<211> 35
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-061
<400> 98
cgactctaga ggatcgctca gtacatctac gagac 35
<210> 99
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-062
<400> 99
agtgtgagga aagtgttccg atcagttcat 30
<210> 100
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-063
<400> 100
cactttcctc acactcgtcg agagtatgag 30
<210> 101
<211> 35
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-064
<400> 101
cggtacccgg ggatcagcgc gacgaacaac gagac 35
<210> 102
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-069
<400> 102
gcgcatctac aaggaagaga tc 22
<210> 103
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-070
<400> 103
gcgacgctca tcgagatctc 20
<210> 104
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-133
<400> 104
tgacctgcag gtgcactccg ctgcgacatg tatcga 36
<210> 105
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-131
<400> 105
actctagcct gcaggtcatt gactagttga tctaaggttg ttaca 45
<210> 106
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-003
<400> 106
gacccatgga tttcgacctc accgaagaac 30
<210> 107
<211> 31
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-004
<400> 107
gccctgcagg atgcgatggt tcgcggcgtt c 31
<210> 108
<211> 31
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-020
<400> 108
ggacatgttt cgtgatccgg aaaccctgaa c 31
<210> 109
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-006
<400> 109
ggcctgcagg cgaaggatcg acgctagccc tg 32
<210> 110
<211> 31
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-018
<400> 110
ggacatgttt ccctgcgaag aagagatcca g 31
<210> 111
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-008
<400> 111
ggcctgcagg cgccgttgcg gaaacgacgg 30
<210> 112
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-019
<400> 112
ggccatggta ccgagaaccc tgttcagctc 30
<210> 113
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-010
<400> 113
ggcctgcagg ctggacgagg aggtgctcgc 30
<210> 114
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-021
<400> 114
ggacatgttt actctgaccg atgacgagcg 30
<210> 115
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-022
<400> 115
ggcctgcagg ccgtcacgct tttcgatcaa tac 33
<210> 116
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-023
<400> 116
ccacatgtcc gattaccttg ccaccggagc 30
<210> 117
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-024
<400> 117
ggcctgcagg atcttcttgg ggttcgtcac aac 33
<210> 118
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MAA-15
<400> 118
ggcctgtcat gagtgattac gagccg 26
<210> 119
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MAA-16
<400> 119
cggccctgca ggttcgcggg aatcagatgt gc 32
<210> 120
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-187
<400> 120
ggtcatgact cttgtcgagc ccttg 25
<210> 121
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-140
<400> 121
gacctgcagg tcctcttctg gtcatggttc 30
<210> 122
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-188
<400> 122
aggaaacaga ccatgatcga caacctcgat ta 32
<210> 123
<211> 37
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-189
<400> 123
cttgcatgcc tgcaggctca ctcgttcctt tttacag 37
<210> 124
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-001
<400> 124
caccatggac cacaagctct cccccgaac 29
<210> 125
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-002
<400> 125
gccctgcagg ctcagcccac cagccccaac 30
<210> 126
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-114
<400> 126
ggtctagaat gtttactctg accgatgacg agcg 34
<210> 127
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-109
<400> 127
ggtctagaat gaaatcattc tcagtacttc ag 32
<210> 128
<211> 37
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-039
<400> 128
tagagtcgac ctgcacgaga tctcgatccc gcgaaat 37
<210> 129
<211> 38
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-040
<400> 129
gcttgcatgc ctgcacagca gccaactcag cttccttt 38
<210> 130
<211> 37
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-042
<400> 130
tagagtcgac ctgcacctct agaaataatt ttgttta 37
<210> 131
<211> 37
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-041
<400> 131
ccatcgcatc ctgcacgaga tctcgatccc gcgaaat 37
<210> 132
<211> 37
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MMA-043
<400> 132
ccatcgcatc ctgcacctct agaaataatt ttgttta 37
<210> 133
<211> 1578
<212> DNA
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 133
atgaatgaaa tcgatgagaa aaatcaggcc cccgtgcaac aagaatgcct gaaagagatg 60
attcagaatg ggcatgctcg gcgtatggga tctgttgaag atctgtatgt tgctctcaac 120
agacaaaact tatatcgaaa cttctgcaca tatggagaat tgagtgatta ctgtactagg 180
gatcagctca cattagcttt gagggaaatc tgcctgaaaa atccaactct tttacatatt 240
gttctaccaa caagatggcc aaatcatgaa aattattatc gcagttccga atactattca 300
cggccacatc cagtgcatga ttatatttca gtattacaag aattgaaact gagtggtgtg 360
gttctcaatg aacaacctga gtacagtgca gtaatgaagc aaatattaga agaattcaaa 420
aatagtaagg gttcctatac tgcaaaaatt tttaaactta ctaccacttt gactattcct 480
tactttggac caacaggacc gagttggcgg ctaatttgtc ttccagaaga gcacacagaa 540
aagtggaaaa aatttatctt tgtatctaat cattgcatgt ctgatggtcg gtcttcgatc 600
cacttttttc atgatttaag agacgaatta aataatatta aaactccacc aaaaaaatta 660
gattacattt tcaagtacga ggaggattac caattattga ggaaacttcc agaaccgatc 720
gaaaaggtga tagactttag accaccgtac ttgtttattc cgaagtcact tctttcgggt 780
ttcatctaca atcatttgag attttcttca aaaggtgtct gtatgagaat ggatgatgtg 840
gaaaaaaccg atgatgttgt caccgagatc atcaatattt caccaacaga atttcaagcg 900
attaaagcaa atattaaatc aaatatccaa ggtaagtgta ctatcactcc gtttttacat 960
gtttgttggt ttgtatctct tcataaatgg ggtaaatttt tcaaaccatt gaacttcgaa 1020
tggcttacgg atatttttat ccccgcagat tgccgctcac aactaccaga tgatgatgaa 1080
atgagacaga tgtacagata tggcgctaac gttggattta ttgacttcac cccctggata 1140
agcgaatttg acatgaatga taacaaagaa aatttttggc cacttattga gcactaccat 1200
gaagtaattt cggaagcttt aagaaataaa aagcatctcc atggcttagg gttcaatata 1260
caaggcttcg ttcaaaaata tgtgaacatt gacaaggtaa tgtgcgatcg tgccatcggg 1320
aaaagacgcg gaggtacatt gttaagcaat gtaggtctgt ttaatcagtt agaggagccc 1380
gatgccaaat attctatatg cgatttggca tttggccaat ttcaaggatc ctggcaccaa 1440
gcattttcct tgggtgtttg ttcgactaat gtaaagggga tgaatattgt tgttgcttca 1500
acaaagaatg ttgttggtag tcaagaatct ctcgaagagc tttgctccat ttacaaagct 1560
ctccttttag gcccttag 1578
<210> 134
<211> 525
<212> PRT
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 134
Met Asn Glu Ile Asp Glu Lys Asn Gln Ala Pro Val Gln Gln Glu Cys
1 5 10 15
Leu Lys Glu Met Ile Gln Asn Gly His Ala Arg Arg Met Gly Ser Val
20 25 30
Glu Asp Leu Tyr Val Ala Leu Asn Arg Gln Asn Leu Tyr Arg Asn Phe
35 40 45
Cys Thr Tyr Gly Glu Leu Ser Asp Tyr Cys Thr Arg Asp Gln Leu Thr
50 55 60
Leu Ala Leu Arg Glu Ile Cys Leu Lys Asn Pro Thr Leu Leu His Ile
65 70 75 80
Val Leu Pro Thr Arg Trp Pro Asn His Glu Asn Tyr Tyr Arg Ser Ser
85 90 95
Glu Tyr Tyr Ser Arg Pro His Pro Val His Asp Tyr Ile Ser Val Leu
100 105 110
Gln Glu Leu Lys Leu Ser Gly Val Val Leu Asn Glu Gln Pro Glu Tyr
115 120 125
Ser Ala Val Met Lys Gln Ile Leu Glu Glu Phe Lys Asn Ser Lys Gly
130 135 140
Ser Tyr Thr Ala Lys Ile Phe Lys Leu Thr Thr Thr Leu Thr Ile Pro
145 150 155 160
Tyr Phe Gly Pro Thr Gly Pro Ser Trp Arg Leu Ile Cys Leu Pro Glu
165 170 175
Glu His Thr Glu Lys Trp Lys Lys Phe Ile Phe Val Ser Asn His Cys
180 185 190
Met Ser Asp Gly Arg Ser Ser Ile His Phe Phe His Asp Leu Arg Asp
195 200 205
Glu Leu Asn Asn Ile Lys Thr Pro Pro Lys Lys Leu Asp Tyr Ile Phe
210 215 220
Lys Tyr Glu Glu Asp Tyr Gln Leu Leu Arg Lys Leu Pro Glu Pro Ile
225 230 235 240
Glu Lys Val Ile Asp Phe Arg Pro Pro Tyr Leu Phe Ile Pro Lys Ser
245 250 255
Leu Leu Ser Gly Phe Ile Tyr Asn His Leu Arg Phe Ser Ser Lys Gly
260 265 270
Val Cys Met Arg Met Asp Asp Val Glu Lys Thr Asp Asp Val Val Thr
275 280 285
Glu Ile Ile Asn Ile Ser Pro Thr Glu Phe Gln Ala Ile Lys Ala Asn
290 295 300
Ile Lys Ser Asn Ile Gln Gly Lys Cys Thr Ile Thr Pro Phe Leu His
305 310 315 320
Val Cys Trp Phe Val Ser Leu His Lys Trp Gly Lys Phe Phe Lys Pro
325 330 335
Leu Asn Phe Glu Trp Leu Thr Asp Ile Phe Ile Pro Ala Asp Cys Arg
340 345 350
Ser Gln Leu Pro Asp Asp Asp Glu Met Arg Gln Met Tyr Arg Tyr Gly
355 360 365
Ala Asn Val Gly Phe Ile Asp Phe Thr Pro Trp Ile Ser Glu Phe Asp
370 375 380
Met Asn Asp Asn Lys Glu Asn Phe Trp Pro Leu Ile Glu His Tyr His
385 390 395 400
Glu Val Ile Ser Glu Ala Leu Arg Asn Lys Lys His Leu His Gly Leu
405 410 415
Gly Phe Asn Ile Gln Gly Phe Val Gln Lys Tyr Val Asn Ile Asp Lys
420 425 430
Val Met Cys Asp Arg Ala Ile Gly Lys Arg Arg Gly Gly Thr Leu Leu
435 440 445
Ser Asn Val Gly Leu Phe Asn Gln Leu Glu Glu Pro Asp Ala Lys Tyr
450 455 460
Ser Ile Cys Asp Leu Ala Phe Gly Gln Phe Gln Gly Ser Trp His Gln
465 470 475 480
Ala Phe Ser Leu Gly Val Cys Ser Thr Asn Val Lys Gly Met Asn Ile
485 490 495
Val Val Ala Ser Thr Lys Asn Val Val Gly Ser Gln Glu Ser Leu Glu
500 505 510
Glu Leu Cys Ser Ile Tyr Lys Ala Leu Leu Leu Gly Pro
515 520 525
<210> 135
<211> 1608
<212> DNA
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 135
atggaagata tagaaggata cgaaccacat atcactcaag agttgataga ccgtggccat 60
gcaagacgta tgggccactt ggaaaactac tttgctgttt tgagtaggca gaaaatgtac 120
tcgaatttta ctgtttacgc ggaattgaat aaaggtgtta ataagagaca actaatgctt 180
gtcttgaaag tattacttca aaaatactca actcttgcgc atacaatcat tcctaagcat 240
tatcctcatc atgaagcgta ctactctagc gaagagtacc ttagtaaacc ttttccacag 300
catgatttca taaaggtgat ttctcatctt gaattcgatg acttgattat gaataatcaa 360
ccagaataca gagaagtcat ggagaaaatc tcagaacagt tcaaaaagga tgatttcaaa 420
gtcaccaata ggttaatcga attgattagc cctgtaatca tacctctggg taatccgaag 480
aggcctaatt ggagattgat ttgtttacca ggtaaggata ctgatgggtt tgaaacgtgg 540
aaaaacttcg tttatgtcac taaccactgc ggctccgacg gtgtcagtgg atcgaatttt 600
ttcaaagatt tagctctact cttttgtaaa atcgaagaaa aagggtttga ttatgatgaa 660
gagttcatcg aagatcaagt catcattgac tatgatcgag actacactga aatttctaaa 720
ttgccaaaac cgattacgga tcgtattgac tacaagccag cattgacttc attacccaaa 780
ttctttttaa caaccttcat ttatgaacat tgtaatttta aaacctccag cgaatctaca 840
cttacagcta gatatagccc ctctagtaat gctaatgcta gttacaatta cttgttgcat 900
ttcagtacta agcaagtaga acaaatcaga gctcagatca agaaaaatgt tcacgatggg 960
tgcaccctaa cacccttcat tcaagcgtgc tttcttgtag ccctgtatag actggataag 1020
ctgttcacaa aatctcttct cgagtatggg ttcgatgtgg ctattccaag caacgcaaga 1080
aggtttttac caaacgatga agagttaaga gattcttata aatacggctc caacgttgga 1140
ggttcgcatt acgcctatct aatctcctca ttcgacattc ccgaaggtga caatgacaag 1200
ttttggagtc ttgtcgaata ctactatgac cgctttttag aatcgtacga caacggtgac 1260
cacttgattg gtctgggggt cctacaactt gattttatcg ttgaaaacaa gaatatagac 1320
agccttcttg ccaactctta tttgcaccag caaagaggcg gtgcaatcat cagtaataca 1380
ggacttgtct cgcaagatac gaccaagccg tactacgttc gggatttaat cttctcgcag 1440
tctgcaggcg ccttgagatt tgcgttcggc ctaaacgttt gctccacaaa cgtgaatggt 1500
atgaacatgg acatgagcgt ggttcagggc actctacggg atcgtggcga atgggaatcg 1560
ttctgcaagc tcttctacca aaccatcggc gaatttgcgt cgctttaa 1608
<210> 136
<211> 535
<212> PRT
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 136
Met Glu Asp Ile Glu Gly Tyr Glu Pro His Ile Thr Gln Glu Leu Ile
1 5 10 15
Asp Arg Gly His Ala Arg Arg Met Gly His Leu Glu Asn Tyr Phe Ala
20 25 30
Val Leu Ser Arg Gln Lys Met Tyr Ser Asn Phe Thr Val Tyr Ala Glu
35 40 45
Leu Asn Lys Gly Val Asn Lys Arg Gln Leu Met Leu Val Leu Lys Val
50 55 60
Leu Leu Gln Lys Tyr Ser Thr Leu Ala His Thr Ile Ile Pro Lys His
65 70 75 80
Tyr Pro His His Glu Ala Tyr Tyr Ser Ser Glu Glu Tyr Leu Ser Lys
85 90 95
Pro Phe Pro Gln His Asp Phe Ile Lys Val Ile Ser His Leu Glu Phe
100 105 110
Asp Asp Leu Ile Met Asn Asn Gln Pro Glu Tyr Arg Glu Val Met Glu
115 120 125
Lys Ile Ser Glu Gln Phe Lys Lys Asp Asp Phe Lys Val Thr Asn Arg
130 135 140
Leu Ile Glu Leu Ile Ser Pro Val Ile Ile Pro Leu Gly Asn Pro Lys
145 150 155 160
Arg Pro Asn Trp Arg Leu Ile Cys Leu Pro Gly Lys Asp Thr Asp Gly
165 170 175
Phe Glu Thr Trp Lys Asn Phe Val Tyr Val Thr Asn His Cys Gly Ser
180 185 190
Asp Gly Val Ser Gly Ser Asn Phe Phe Lys Asp Leu Ala Leu Leu Phe
195 200 205
Cys Lys Ile Glu Glu Lys Gly Phe Asp Tyr Asp Glu Glu Phe Ile Glu
210 215 220
Asp Gln Val Ile Ile Asp Tyr Asp Arg Asp Tyr Thr Glu Ile Ser Lys
225 230 235 240
Leu Pro Lys Pro Ile Thr Asp Arg Ile Asp Tyr Lys Pro Ala Leu Thr
245 250 255
Ser Leu Pro Lys Phe Phe Leu Thr Thr Phe Ile Tyr Glu His Cys Asn
260 265 270
Phe Lys Thr Ser Ser Glu Ser Thr Leu Thr Ala Arg Tyr Ser Pro Ser
275 280 285
Ser Asn Ala Asn Ala Ser Tyr Asn Tyr Leu Leu His Phe Ser Thr Lys
290 295 300
Gln Val Glu Gln Ile Arg Ala Gln Ile Lys Lys Asn Val His Asp Gly
305 310 315 320
Cys Thr Leu Thr Pro Phe Ile Gln Ala Cys Phe Leu Val Ala Leu Tyr
325 330 335
Arg Leu Asp Lys Leu Phe Thr Lys Ser Leu Leu Glu Tyr Gly Phe Asp
340 345 350
Val Ala Ile Pro Ser Asn Ala Arg Arg Phe Leu Pro Asn Asp Glu Glu
355 360 365
Leu Arg Asp Ser Tyr Lys Tyr Gly Ser Asn Val Gly Gly Ser His Tyr
370 375 380
Ala Tyr Leu Ile Ser Ser Phe Asp Ile Pro Glu Gly Asp Asn Asp Lys
385 390 395 400
Phe Trp Ser Leu Val Glu Tyr Tyr Tyr Asp Arg Phe Leu Glu Ser Tyr
405 410 415
Asp Asn Gly Asp His Leu Ile Gly Leu Gly Val Leu Gln Leu Asp Phe
420 425 430
Ile Val Glu Asn Lys Asn Ile Asp Ser Leu Leu Ala Asn Ser Tyr Leu
435 440 445
His Gln Gln Arg Gly Gly Ala Ile Ile Ser Asn Thr Gly Leu Val Ser
450 455 460
Gln Asp Thr Thr Lys Pro Tyr Tyr Val Arg Asp Leu Ile Phe Ser Gln
465 470 475 480
Ser Ala Gly Ala Leu Arg Phe Ala Phe Gly Leu Asn Val Cys Ser Thr
485 490 495
Asn Val Asn Gly Met Asn Met Asp Met Ser Val Val Gln Gly Thr Leu
500 505 510
Arg Asp Arg Gly Glu Trp Glu Ser Phe Cys Lys Leu Phe Tyr Gln Thr
515 520 525
Ile Gly Glu Phe Ala Ser Leu
530 535
Claims (16)
- 탄소원 또는 에너지원으로서의, 재생 가능 원료 및 상기 재생 가능 원료의 이용으로부터 발생하는 다당류, 올리고당류, 단당류, 지질, 아미노산류, 유기산류 및 알코올류 중 하나 이상으로부터, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물을 사용하여, 메타크릴산 또는 그의 에스테르를 제조하는 방법이며,
상기 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물이, 이소부티르산 또는 발린을 포함하는 유기물로부터 메타크릴산을 생성 가능한 미생물로서,
서열 번호 1 내지 41에 기재된 염기 서열 중 어느 하나에 대하여 81% 이상의 동일성을 나타내는 염기 서열을 포함하는 16S rRNA 유전자를 가지거나, 또는
서열 번호 42 내지 49에 기재된 염기 서열 중 어느 하나에 대하여 81% 이상의 동일성을 나타내는 염기 서열을 포함하는 LSUrRNA 유전자를 갖는 미생물인,
메타크릴산 또는 그의 에스테르의 제조 방법. - 삭제
- 제1항에 있어서,
메타크릴산 또는 그의 에스테르를 0.04ppm 이상 축적시키는, 제조 방법. - 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서,
메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물이, 슈도모나스(Pseudomonas)속, 바실러스(Bacillus)속, 스핑고박테리움(Sphingobacterium)속, 코마모나스(Comamonas)속, 브레분디모나스(Brevundimonas)속, 스핑고모나스(Sphingomonas)속, 오크로박트럼(Ochrobactrum)속, 페도박터(Pedobacter)속, 패니바실러스(Paenibacillus)속, 아크로모박터(Achromobacter)속, 아시네토박터(Acinetobacter)속, 쉐와넬라(Shewanella)속, 리스토넬라(Listonella)속, 아그로박테리움(Agrobacterium)속, 메소리조비움(Mesorhizobium)속, 리조비움(Rhizobium)속, 파라코커스(Paracoccus)속, 크산토박터(Xanthobacter)속, 스트렙토마이세스(Streptomyces)속, 지오바실러스(Geobacillus)속, 로도코커스(Rhodococcus)속, 사카로마이세스(Saccharomyces)속, 칸디다(Candida)속 또는 아스퍼질러스(Aspergillus)속에 속하는 미생물인, 제조 방법. - 제1항에 있어서, 메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물에 알코올 아실트랜스페라아제(AAT) 유전자가 도입된 재조합 미생물을 사용하여 메타크릴산에스테르를 제조하는 것으로서,
메타크릴산 생성 능력을 갖는 미생물을 숙주로 하고, 촉매로서 AAT의 존재 하에, 메타크릴릴-CoA에 알코올 또는 페놀류를 작용시켜 메타크릴산에스테르를 제조하는, 제조 방법. - 제7항에 있어서,
알코올 아실트랜스페라아제가 식물 유래인, 제조 방법. - 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
Applications Claiming Priority (15)
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