第三章 药物分析方法学.

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1 第三章 药物分析方法学

2 本章内容提要 样品的采集方法 样品的预处理技术 鉴别试验 杂质检查 药物分析中常用的分析方法

3 一、样品采集方法 采集原则：代表性 科学性 真实性 采集方法： 气体样品：均匀性好 采样常用钢瓶法 液体样品：不同容器、不同深度取样后混合
采集原则：代表性 科学性 真实性 采集方法： 气体样品：均匀性好 采样常用钢瓶法 液体样品：不同容器、不同深度取样后混合 若液体样品分装于小容器内，应从各容器取样并混匀后待测；若装于大容器内，需从容器的不同部位取样并混匀待测。

4 一、样品采集方法 固体样品：不同容器、不同截面取样后粉碎、混合、缩分
用采样器在各件样品的上中下层以及周围间隔相等的部位取样若干，彻底混匀后按四分法获得待测样品。 固体样品：不同容器、不同截面取样后粉碎、混合、缩分

5 采集样品过程中的注意事项 采集的样品应具有代表性，要注意采样的时间，地点及采样位置的选择。
所有样品都要采集双份，一份分析样品，一份保存样品，备复查时使用。 样品的采集和储存过程要作记录，详列采样时间、地点、准确位置等。

6 样品保存方法 较稳定的样品——常温保存法：石蜡封口的容器，避光器皿 热稳性差的样品——低温保存法：冷藏或冷冻
易变质的样品——化学保存法：加入抗氧剂、防腐剂

7 二、药物样品预处理技术 药物样品预处理是指采用一定的方法使待测药物转化为适宜的测定形式后，再进行分析测定。 样品预处理的目的 减少干扰杂质
浓缩微量组分 提高检测的灵敏度和选择性 分离 富集

8 二、药物样品预处理技术 样品预处理的原则 采用方法必须和分析方法目的保持一致。 尽可能防止和避免待测组分发生化学变化或丢失。
在除去干扰物质的同时，避免引入新的干扰杂质。 方法尽量简便，快速，安全、少污染。 采用后应尽可能快的进行待测样品的分析，做好样品的保存。

9 二、药物样品预处理技术 样品预处理常用的方法 高速离心 过滤 蒸馏 选择性沉淀 吸附 萃取 索式提取 色谱分离 新技术：
高速离心 过滤 蒸馏 选择性沉淀 吸附 萃取 索式提取 色谱分离 新技术： 微波辅助萃取、超临界流体萃取、加速溶剂萃取；固相萃取、膜萃取等 见P19 表3-1，3-2样品预处理技术

10 含金属药物 含卤素药物 富马酸亚铁 葡萄糖酸锑钠 枸橼酸铋钾 酒石酸锑钾 泛影酸 根据所含金属或卤素在分子 三氯叔丁醇
磺溴酞钠 碘番酸 根据所含金属或卤素在分子 中结合的牢固程度，采用不 同的方法进行预处理。 有机破坏？

11 有机卤素药物 有机卤素药物，R-X （F, Cl, Br, I ）所含卤素原子均直接与碳原子相连，但不同药物中卤素所处的位置不同，则与碳原子结合的牢固程度就有差异。 如果卤素和芳环相连接，则结合牢固（如碘他拉酸需在碱性溶液中加还原剂回流使碳-碘键断裂，转化为无机碘化物后测定）；与脂肪链的碳原子相连接，则结合不牢固（如三氯叔丁醇经碱溶液回流即可解离再测定）。

12 含金属元素的药物（1） 　一是金属原子不直接与碳原子相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物，称为含金属的有机化合物，其分子结构中的金属原子结合不够牢固，在水溶液中既可离解出金属离子，如有机结构部分不干扰分析时，可在溶液中直接进行其金属的鉴别或含量测定。 如水杨酸镁，可在溶液中直接测定。

13 含金属元素的药物（2） 　一是金属原子直接与碳原子以共价键相连接，结合状态比较牢，称为有机金属药物，在溶液中其金属一般不能解离成离子状态，应该根据共价键的牢固程度，经适当处理，将其金属转变为适于分析的状态（多转变为无机的金属盐或离子），方可进行其金属的鉴别或含量测定。

14 2.不经有机破坏的预处理方法（Ⅰ） 适用于含金属的有机药物或结合不牢固的含卤素等药物的分析。
直接测定法 金属原子在水溶液中电离出来，直接滴定。 例：富马酸亚铁——在热的稀硫酸中溶解后解离释放出亚铁离子，用硫酸铈直接滴定，邻二氮菲为指示剂。

15 不经有机破坏的预处理方法（Ⅱ） 经水解后测定法 碱水解后测定 多用于含卤素的有机药物 例
三氯叔丁醇的含量测定——取本品溶于乙醇后，加氢氧化钠溶液并加热回流，使有机结合的氯水解生成氯化钠，与硝酸银生成氯化银沉淀，过量的硝酸银用硫氰酸铵滴定。 例

16 不经有机破坏的预处理方法（Ⅲ） 还原水解后测定
含卤素的有机药物，当卤素原子直接与芳环连接时，结合较牢固，采用碱性溶液回流时难以使X-C键断裂，但可在碱性溶液中加入还原剂（如锌粉）回流，使其转化为无机卤化物后测定。

17 碘他拉酸、胆影酸、碘番酸等均采用同法测定。
泛影酸的含量测定 例 反应如下： 曙红钠为指示剂 碘他拉酸、胆影酸、碘番酸等均采用同法测定。

18 3.经有机破坏的预处理方法 适用于有机金属药物与含卤素等有机物结构中待测原子与碳原子结合牢固者。
采用有机破坏的方法将药物分子中有机结构部分完全破坏，使待测原子转变为可测定的无机离子（或氧化物、无氧酸等）。

19 湿法消化 本法适用于含氮有机合成药物分析的前处理。 在加热的条件下，用强酸等强氧化剂（硫酸、硝酸、高氯酸等）作消化剂分解有机物质。
硝酸-硫酸法 硝酸-高氯酸法 其他湿法消化： 硫酸-硫酸盐法 硫酸-过氧化氢法 硫酸-高锰酸钾法 适用于大多数有机药物的破坏，所得无机金属离子为髙价态。 适用于生物样品的破坏，所得无机金属离子为髙价态。破坏力强，反应激烈。

20 干法消化 本法适用于湿法不易破坏完全的有机物，如含氮杂环，以及不能用硫酸破坏的有机药物，不适用含挥发性金属的有机药物。
具体操作：将有机物置坩埚中，加氢氧化钙或无水碳酸钙或轻质氧化镁灼烧，先小火加热，然后高温灰化，残渣用溶剂溶解，使被测元素转化为离子状态后测定。

21 氧瓶燃烧法 本法是将有机药物在氧气中充分燃烧，有机部分分解为二氧化碳和水，而待测元素转化为氧化物被吸入吸收液中测定。
该方法被各国药典所收载。 适用于含卤素或硫、磷等元素的有机药物的鉴别、限度检查或含量测定。

22 氧瓶燃烧法   仪器装置 燃烧瓶为500ml、1000ml、或2000ml磨口、硬质玻璃锥形瓶，瓶塞应严密、底部熔封铂丝一根（直径为1mm），铂丝下端做成网状或螺旋状，长度约为瓶身长度的2∕3 ，如右图A 操作方法： 称样 将样品直接置无灰滤纸上称量 燃烧分解 通氧气1-2min 吸收 吸收液 测定 滴定法 水-氢氧化钠（含碘、氯药物） 水-氢氧化钠-过氧化氢（含溴、含硫药物） 水（含氟药物） 硝酸溶液（含硒药物）

23 其他有机破坏处理方法 光辐射消化法 利用紫外光照射使有机物发生光化学反应消化
微波消化 利用微波辐射技术辅助试样快速分解，适用于大批量样品的处理，易实现自动化。 衍生化技术 柱前衍生化

24 三、药物分析中常用的分离纯化方法 蒸馏和分馏 如中药材中挥发油成分的测定
溶剂萃取 有液-液萃取，索式提取，微波萃取，超声萃取，超临界流体萃取等等，多用于生物活性成分的分离提纯，如天然药物中黄酮类，皂苷类物质的提取 固相萃取 如生物样品中的药物分析 膜分离技术 中药活性物质的提取

25 1、蒸馏 蒸馏就是将液体化合物加热至沸腾变为蒸气，又将蒸气冷凝为液体化合物这两个过程的联合操作过程。它是分离液体有机化合物最常用的一种方法。
蒸馏的作用： 1）通过蒸馏可将易挥发的物质和不挥发的物质分开。 2）将沸点不同的液体化合物分开，但不同液体沸点必须相差30℃以上。 3）可测化合物的沸点。

26 蒸馏装置 仪器安装顺序一般为：自下而上，从左到右。撤卸仪器与安装顺序相反。 热源→蒸馏瓶→蒸馏头→温度计→冷凝管→尾接管→接受瓶
使温度计水银球的上限与蒸馏头侧管的下限同处一水平线上。

27 蒸馏操作 1）加料：将待蒸馏液通过玻璃漏斗小心倒入蒸馏瓶中。不要使液体从支管流出。加入几粒沸石，塞好带温度计的塞子。
2）加热：先给水冷凝管通水，然后加热。在整个蒸馏过程中，应使温度计水银球上常有被冷凝的液滴。此时的温度即为液体与蒸气平衡时的温度。温度计的读数就是液体（馏出液）的沸点。 3）收集馏液：进行蒸馏前，至少要准备两个接受瓶，其中一个接受前馏分（或称馏头），另一个用于接受预期所需馏分。

28 分馏 应用分馏柱将几种沸点相近的混合物进行分离的方法称为分馏。分馏是借助于分馏柱进行多次气化和冷凝，使一系列的蒸馏不需多次重复，一次得以完成的蒸馏（分馏就是多次蒸馏）。 分馏装置包括热源、蒸馏器、分馏柱、冷凝管和接受器五个部分组成 。

29 分馏装置与操作 将待分馏的混合物放人圆底烧瓶中，加入沸石。
选用合适的热浴加热，液体沸腾后要注意调节浴温，使蒸气慢慢升人分馏柱，约10一15min后，蒸气到达柱顶，进入冷凝管。 在有馏出液滴出后，调节浴温使得蒸出液体的速度控制在每2-一3s l滴，这样可以得到比较好的分馏效果，待低沸点组分蒸完后，再渐渐升高温度，蒸出第二个组分。

30 其他蒸馏技术 减压蒸馏 适用于那些在常压蒸馏时未达到沸点就已分解、氧化或聚合的物质。 真空蒸馏 如分子蒸馏技术
真空升华 提纯过程中物质由固体直接变成气体进而分离，具有很高的分离度。 水蒸气蒸馏 提取天然药物中如挥发油、麻黄碱、丹皮酚等化学成分。

31 2.溶剂萃取 萃取：利用溶质在互不相溶的两相之间分配系数的不同而使溶质得到纯化或浓缩的方法。
溶剂萃取：利用流体为溶剂提取原料中目标产物的操作。 目标物 固体：液固萃取（浸取） 萃取剂：流体（液体，超临界流体） 有机溶剂萃取 液膜萃取 液体：液液萃取 双水相萃取 反胶团萃取

32 中药成分的溶剂萃取 基本原理 根据中药中各类化学成分的溶解度不同（在溶剂中的溶解性不同），选择对有效成分溶解度大而对其他成分溶解度小的溶剂，将有效成分从药材组织中提取出来的一种方法。

33 基本原理（渗透扩散原理） 粉碎后的药材，加入适宜的溶剂 → 溶剂渗透、进入药材，溶解可溶性成分 → 药材细胞内外，可溶性成分形成浓度差，产生渗透压 → 扩散 → 再不断地渗透、扩散 → 最终达到动态平衡 。

34 常用溶剂的极性大小顺序排列如下： 石油醚＜苯＜无水乙醚＜氯仿＜醋酸乙酯 脂溶性溶剂（亲脂性） ＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水 水溶性溶剂（亲水性）

35 溶剂的性质和特点 1）水：极性强，穿透力大，价廉、易得、使用安全的溶剂，但易霉变，难以保存。常用于提取盐类、苷类、糖类、蛋白质等 。
2）水溶性溶剂：溶解极性成分，穿透力强，某些脂性成分也能溶解，提取范围广，易于保存、滤过和回收；易燃，价格贵。 3）脂溶性溶剂：选择性强，提取液易浓缩回收，但穿透力差，毒性大。常用于提取脂溶性成分，如油脂、挥发油、游离生物碱、苷元等。

36 中药化学成分常用的提取溶剂 溶剂极性 中药成分结构类型 适于提取溶剂 亲脂性强 叶绿素、脂肪油、挥发油 石油醚 亲脂性较强
游离生物碱、苷元、甾类、萜类、某些有机酸 乙醚、氯仿 中等 极性 中偏小 某些苷类 (如强心苷等) 氯仿-乙醚 (2:1) 中 等 某些苷类 (如黄酮苷类) 乙酸乙酯 中偏大 某些苷类 (如蒽醌苷、皂苷等) 正丁醇 亲水性较强 极性大的苷、糖类、氨基酸等 丙酮、乙醇、甲醇 亲水性强 蛋白质、粘液汁、糖类、氨基酸、无机盐、苷类 水

37 2.萃取中药有效成分的方法 ① 浸渍法：包括冷浸法和温浸法
（1）适用范围：有效成分遇热易破坏及易溶于水的成分（如淀粉、果胶、粘液质等多糖类化合物） （2）提取温度： 常温或40-80℃ （3）提取时间：浸渍1-2天，共2-3次，合并浸液 （4）优点：操作方便，简单易行 （5）缺点：提取时间长，效率低，易霉变。

38 ② 煎煮法 （1）适用范围：有效成分能溶于水且不易被水、热破坏的天然药材，不宜用于含挥发性成分、遇热不稳定及含多糖类的药材
（2）提取温度：煮沸1小时左右，2-3次 （3）优点：操作简单，提取效率高 （4）提取时应避免使用铁器

39 ③ 索式提取法 （1）用少量溶剂进行连续循环回流提取，充分将有效成分浸出； （2）装置：索氏提取器 1、冷凝管 2、溶剂蒸气上升管
3、虹吸管 4、将有药粉的滤纸袋 5、溶剂 6、水浴

40 ④ 超声波萃取 原理：利用超声波的空化作用，破坏药材细胞，使溶剂易于渗入细胞内，同时超声波的强烈振动使浸提的药材和溶剂作高速运动加强细胞内物质的释放、扩散和溶解，提高提取效率。

41 能量→外部向内部→传递。 超声波使溶液形成气泡（空化效应）→爆裂→温度和压力↑→增强化学反应能力。 仪器装置：超声波提取仪

42 ⑤ 微波萃取 微波：300— MHz的电磁波，具有反射、穿透和吸收的特性。 金属 微 波 水分

43 穿透：玻璃、塑料、陶瓷等绝缘体。 当微波作用于水和酸性物质时，将被极性分子所吸收，因而物质很快被加热。

44 微波萃取工作原理 吸收微波→细胞内部温度↑→细胞内部压力超过细胞壁膨胀承受能力→细胞破裂→有效成分自由流出
微波技术主要应用于天然产物活性成分的萃取。如药材中黄酮类、皂苷类以及挥发性成分的提取。

45 ⑥ 超临界流体萃取 （1）超临界流体状态：控制物质在某一温度、压力下，形成一种既非液体又非气体的特殊相态，此状态下流体具有气液两相的双重特点，既具有与气体相近的粘度，又具有与液体相近的密度，大大增强了扩散力和渗透能。 （2）常用的超临界流体物质：二氧化碳、氧化亚氮、乙烷和甲苯等。 可以迅速渗透到物体的内部溶解目标物质，快速达到萃取平衡。

46 超临界流体的临界状态 流体名称 分子式 临界压力 (bar) 临界温度 (℃) 临界密度 (g/cm3) 二氧化碳 CO2 72.9
31.2 0.433 水 H2O 217.6 374.2 0.332 氨 NH3 112.5 132.4 0.235 乙烷 C2H6 48.1 32.2 0.203 氧化二氮 N2O 71.7 36.5 0.450

47 （3）超临界流体萃取技术的发展 （4）应用：香料化妆品 天然中草药 保健食品 100年前人们就知道超临界流体可以溶解很多物质的事实。
20世纪50年代，美国将SFE用于工业分离。 1963年，德国首次申请SFE分离技术的专利。 20世纪80－90年代成为热门学科。 （4）应用：香料化妆品 天然中草药 保健食品

48 3. 固相萃取与固相微萃取 固相萃取（SPE）就是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的。 

49  固相萃取的装置 最简单的固相萃取装置就是一根直径为数毫米的填充小柱．
固相萃取的一般操作程序如下 1．活化吸附剂： 2. 上样： 3. 洗涤和洗脱。

50 固相微萃取 为进一步完善和发展SPE技术，Belardi等人于1989年提出了固相微萃取技术（SPME).该技术具有操作简便、不需溶剂、萃取速度快、便于实现自动化以及易于与色谱、电泳等高效分离检测手段联用等突出的优点。 与SPE法相比，SPME法具有萃取相用量更少、对待测物的选择性更高、溶质更易洗脱等特点，因此在短短的十多年间，SPME法无论在理论还是在实践上均获得了较大的发展。

51 固相萃取主要用于复杂样品中微量或痕量目标化合物的分离和富集。在生化、天然产物的提取、药代动力学等研究中应用广泛。
生物样本中的药物分析。

52 ⑦ 膜分离技术 膜的特性： ◆ 不管膜多薄, 它必须有两个界面。这两个界面分别与两侧的流体相接触
所谓的膜，是指在一种流体相内或是在两种流体相之间有一层薄的凝聚相，它把流体相分隔为互不相通的两部分，并能使这两部分之间产生传质作用。 膜的特性： ◆ 不管膜多薄, 它必须有两个界面。这两个界面分别与两侧的流体相接触 ◆ 膜传质有选择性，它可以使流体相中的一种或几种物质透过，而不允许其它物质透过。

53 选择性透膜 膜上游 透膜 膜下游 膜分离过程原理：以选择性透膜为分离介质，通过在膜两边施加一个推动力（如浓度差、压力差或电位差等）时，使原料侧组分选择性地透过膜，以达到分离提纯的目的。通常膜原料侧称为膜上游，透过侧称为膜下游。

54 分离膜种类 阳离子膜 阴离子膜 带电膜 非带电膜 高分子膜 液体膜 生物膜 过滤膜 精密过滤膜 超滤膜 反渗透膜 纳米滤膜 分离膜

55 分离膜的基本功能是从物质群中有选择地透过或输送特定的物质，如颗粒、分子、离子等。或者说，物质的分离是通过膜的选择性透过实现的。

56 几种主要分离膜的分离过程 膜过程 推动力 传递机理 透过物 截留物 膜类型 微滤 压力差 颗粒大小形状 水、溶剂溶解物 悬浮物颗粒
纤维多孔膜 超滤 分子特性大小形状 水、溶剂小分子 胶体和超过截留分子量的分子 非对称性膜 纳滤 离子大小及电荷 水、一价离子、多价离子 有机物 复合膜 反渗透 溶剂的扩散传递 水、溶剂 溶质、盐 非对称性膜复合膜

57 膜过程 推动力 传递机理 透过物 截留物 膜类型 渗析 浓度差 溶质的扩散传递 低分子量物、离子 溶剂 非对称性膜 电渗析 电位差 电解质离子的选择传递 电解质离子 非电解质， 大分子物质 离子交换膜 气体分离 压力差 气体和蒸汽的扩散渗透 气体或蒸汽 难渗透性气 体或蒸汽 均相膜、复合膜，非对称膜 液膜分离 反应促进和 扩散传递 杂质 乳状液膜、支撑液膜

58 膜分离技术的应用 中药活性物质的提取 药液的澄清与浓缩 药液的精制 除热原及病毒
例：中草药有效成分的分离和精制：通过电渗析一般可以把中草药提取液分离分成无机阳离子和生物碱、无机阴离子和有机酸、中性化合物和高分子化合物三部分。

59 四、药物的鉴别试验 1. 概述 判断药物的真伪——药品质量检验的首项任务。
药物的鉴别是根据药物的分子结构、理化性质，采用物理、化学、物理化学或生物学方法，对已知药品进行确证，而不是对未知物的定性分析。

60 药物鉴别的含义 中国药典（2005）凡例对药物鉴别解释为： “鉴别项下规定的实验方法，仅反映该药品 某些物理、化学或生物学等性质的特征，
不完全代表对该药品化学结构的确证”。

61 2.药物鉴别的内容 药物鉴别 性状检查——检测药物特有的物理性质。 包括：外观性状，如物态、色、臭、味
物理常数，如相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数等药典上均有收载。 鉴别试验——通过化学反应或仪器来鉴别药物的真伪 鉴别试验 有机药物： 官能团 无机药物： 阴、阳离子反应

62 3.药物鉴别方法 物理常数测定法 按照药典附录中规定的方法 化学鉴别法 一般鉴别试验 某一类物质 专属鉴别试验 某一种物质 呈色反应鉴别法
化学鉴别法 一般鉴别试验 某一类物质 专属鉴别试验 某一种物质 呈色反应鉴别法 沉淀生成反应鉴别法 荧光反应鉴别法 气体生成反应鉴别法 测定生成物的熔点 证实 证实

63 3.药物鉴别方法 光谱鉴别法 紫外光谱法 红外光谱法 色谱鉴别法 晶形分析 薄层色谱法 液相色谱法 气相色谱法
光谱鉴别法 紫外光谱法 红外光谱法 色谱鉴别法 薄层色谱法 液相色谱法 气相色谱法 晶形分析 X射线粉末衍射法 通过比较供试品与对照品的衍射图或标准衍射数据进行鉴别 最大波长、最小波长、吸收系数等 《中国药典》红外光谱集

64 4.药物鉴别方法新动向 仪器方法用于药物的鉴别数量大大增加，尤其是红外光谱法和高效液相色谱法。 制剂广泛采用IR法鉴别。
鉴别条目简练，选择专属的方法进行鉴别，平均每个品种收载2条左右。

65 5.鉴别试验的分析方法学验证 专属性 检测限 鉴别试验的灵敏度指标。 提高灵敏度的方法：有机溶剂萃取浓缩；改进观测方法。
明确的区分被测物与共存物，确保被分析的物质符合其特性。 红外法和质谱法具有较强的专属性，可单独用作鉴别。 检测限 鉴别试验的灵敏度指标。 提高灵敏度的方法：有机溶剂萃取浓缩；改进观测方法。

66 四、杂质检查 药物杂质 ——药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性、疗效甚至对人体的健康有害的物质。 药物的纯度 ——药物的纯净程度
《中国药典》（2005）中将杂质定义为： 任何影响药物纯度的物质

67 1.药物的纯度 通常可以从药物的结构，外观性状， 理化常数，杂质检查，含量测定等方面作为一个有联系的整体来表明和评定药物的纯度
药物中含有的杂质是影响药物纯度的主要因素，如果杂质过量： １）药物的理化常数变化 ２）外观性状变化 ３）稳定性下降 ４）含量下降、活性下降 5）毒副作用上升 药物纯度下降 药物的纯度检查也可称为杂质检查

68 2.杂质的来源 两个来源： 生产过程引入的杂质 由原料不纯，未完全反应，反应中间体和副产物未除去等原因造成的。 贮藏过程引入的杂质
在外界条件影响下，药物的物化特性发生变化而产生的。 原料、中间体、副产物； 试剂、溶剂、催化剂； 制成制剂过程中的杂质； 同分异构及同质异晶现象。 保管不当；贮藏时间过长；湿度、温度、光、空气的影响；微生物作用。

69 3.杂质的种类 按来源分类 一般杂质 特殊杂质 按毒性分类 毒性杂质 如重金属，砷盐等 信号杂质 如氯化物，硫酸盐等 按结构分类 有机杂质
指在自然界分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属等。 3.杂质的种类 按来源分类 一般杂质 特殊杂质 按毒性分类 毒性杂质 如重金属，砷盐等 信号杂质 如氯化物，硫酸盐等 按结构分类 有机杂质 无机杂质 残留溶剂 指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。

70 4.杂质的限量检查 在不影响疗效、不产生毒性和保证药物质量的原则下，药物的杂质是允许限定量存在的。
药物中杂质的检查多数采用限量检查（limit test ），该检查不要求测定杂质的含量，而只检查其是否超过限量。 中国药典中规定的杂质检查均为限量检查。

71 5.限量检查的方法(Ⅰ) 杂质限量是指药物中所含杂质的最大允许量。 对照法（比色或比浊） 对 比

72 杂质限量的计算 杂质限量的计算公式： 即： 通常用百分之几 (%) 或百万分之几 ( 10-6 ,ppm) 来表示。
1 μg = 10-6g = 10-3mg 杂质限量的计算公式： 即：

73 例 对乙酰氨基酚中氯化物检查 取对乙酰氨基酚2.0g ，加水100ml加热溶解后，滤过，取滤液25ml ，依法检查，所发生的浑浊与标准氯化钠溶液5.0ml（每1ml相当于10µg的Cl-）制成的对照液比较，不得更浓。问氯化物的限量是多少? L = C·V S × 100% = 0.01 × 5 2 ×103 × 25 100 ×100% = 0.01%

74 5.限量检查的方法(Ⅱ) 灵敏度法 不用标准液对比，在一定反应条件下，不得有正反应出现。
灵敏度法 不用标准液对比，在一定反应条件下，不得有正反应出现。 乳酸中草酸或酒石酸的检查：取本品0.5g加水适量使成5mL，混匀，用氨试液调至微碱性，加氯化钙试液1mL，至水浴中加热5min，不得产生沉淀。 比较法 取供试品依法检查，测得的待测杂质的参数（如吸光度等）与规定的限量比较，不得更大。 例

75 6.杂质的定性和定量检查方法（Ⅰ） 物理法 利用药物和杂质在物理性质上的差异 化学法 利用药物和杂质在化学性质上的差异
（1）臭味及挥发性的差异 （2） 颜色的差异 （3）溶解行为的差异 （4）旋光性质的差异 化学法 利用药物和杂质在化学性质上的差异 （1）杂质与试剂反应产生沉淀 氯化物、硫酸盐、重金属 （2）杂质与试剂反应产生颜色 铁盐、氟、硒 （3）杂质与试剂反应产生气体 砷、硫、碳酸盐、氨

76 杂质的定性和定量检查方法（Ⅱ） 光谱法 利用药物和杂质对光吸收性质的差异 色谱法 利用药物与杂质的吸附或分配性质的差异 热分析法
光谱法 利用药物和杂质对光吸收性质的差异 1．紫外分光光度法 ．原子吸收分光光度法 3．红外分光光度法 ．荧光分析法 色谱法 利用药物与杂质的吸附或分配性质的差异 1．薄层色谱法 ． 纸色谱法 3．高效液相色谱法 ．气相色谱法 热分析法 热重分析法 差热分析 差示扫描量热法

77 五、药物分析中常用的化学分析方法 1.滴定分析法 常用的滴定分析法： 酸碱滴定、 银量法、 碘量法、 亚硝酸钠滴定法、 配位滴定法、 双相滴定法

78 五、药物分析中常用的化学分析方法 2.重量分析法 挥发重量法 萃取重量法 沉淀重量法
大多用于无机物的分析。操作繁琐，不能适应样品快速分析的要求。

79 六、药物分析中常用的仪器分析方法 色谱法 气相色谱法 高效液相色谱法 毛细管电泳法 纸色谱法 薄层色谱法

80 六、药物分析中的仪器分析方法 光谱法 紫外可见光谱法 红外吸收光谱法 分子发光分析法 分子荧光光谱法 化学发光法 原子吸收法

81 六、药物分析中常用的仪器分析方法 电化学分析法 电位分析法 库仑分析法 应用： 药物的含量测定 体内药物分析和药理分析

82 六、药物分析中常用的仪器分析方法 核磁共振分析技术 氢谱、碳谱、磷谱等用于体内药物分析。 天然药物的鉴别、检查和含量测定等。 质谱分析
色谱和质谱联用技术

83 复习题 多项选择题 1.有机卤素药物常用的测定方法有（ ） A直接回流后测定 B碱性还原后测定 C氧瓶燃烧分解后测定 D直接络合滴定
1.有机卤素药物常用的测定方法有（ ） A直接回流后测定 B碱性还原后测定 C氧瓶燃烧分解后测定 D直接络合滴定 2.氧瓶燃烧法适用于以下哪些药物的分析（ ） A含氟的有机药物 B含氯的有机药物 C含硫的有机药物 D含硒的有机药物 E含汞的有机药物 3.湿法破坏测定金属有机药物时，加入的试剂有（ ） A硝酸-高氯酸 B硝酸-硫酸 C硫酸-硫酸盐 D高锰酸钾 E尿素 4.药物中的杂质是指（ ） A药物中的合成中间体 B药物中的异构体 C药物中的吸附水分 D注射剂中的注射用水 E片剂中的淀粉 ABC ABCD ABC ABC

84 复习题 填空题 简答题 1.在分析含金属与卤素的有机药物之前，需要进行适当的处理，这些药物的分析方法分为（ ）和（ ）两大类
1.在分析含金属与卤素的有机药物之前，需要进行适当的处理，这些药物的分析方法分为（ ）和（ ）两大类 2.有机破坏方法常用的是（ ）、 （ ） 、 （ ）三种方法。 3.紫外-可见分光光度法用于药物成分的含量测定的方法有（ ）和（ ） 简答题 1.试述氧瓶燃烧法的原理、特点、应用范围、吸收液的作用及选择原则。 2.杂质包括哪些种类？来源途径有哪些？ 3.TLC、HPLC及GC用于鉴别时，一般采用的方法是什么？ 不经有机破坏的分析方法 经有机破坏的分析方法 湿法破坏 干法破坏 氧瓶燃烧法 吸光度法 吸收系数法 P21 P33

85 TLC一般采用对照品（或标准品）比较法，要求供试品斑点的Rf值应与对照品斑点一致。
HPLC和GC用于鉴别时，一般规定按供试品含量测定项下的HPLC/GC色谱条件进行试验，要求供试品和对照品色谱峰的保留时间一致。

86 END Thanks!